CN106047780A - 一株解淀粉芽孢杆菌及其在联产细菌纤维素和γ‑聚谷氨酸中的运用 - Google Patents
一株解淀粉芽孢杆菌及其在联产细菌纤维素和γ‑聚谷氨酸中的运用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一株解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)，菌株号NX‑2S，已保藏于中国典型培养物保藏中心，登记入册的编号为CCTCC M 2016346，保藏日期为2016年6月23日。本发明还公开了解淀粉芽孢杆菌在发酵联产细菌纤维素和γ‑聚谷氨酸中的应用。利用该菌株能够直接利用经济作物菊芋菊粉，在不添加谷氨酸前体的培养基中积累γ‑聚谷氨酸10‑18g/L，细菌纤维素产量5‑9g/L。该方法以菊粉为廉价原料，不仅操作简单，生产成本低，对于菊芋特种能源植物的开发、拓展运用以及γ‑聚谷氨酸的生产都具有十分重要的意义和经济价值。
Description
技术领域
本发明属于发酵工程技术领域，涉及一种联产细菌纤维素和γ-聚谷氨酸(γ-PGA)的微生物菌株解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)及其应用。
背景技术
γ-聚谷氨酸(γ-polyglutamic acid,简称γ-PGA)是由微生物发酵合成的一种特殊阴离子胞外均聚物，是由谷氨酸单体通过酰胺键连接而成的一类均聚氨基酸(I)。其侧链上有大量羧基，具有吸水保湿、螯合元素等特点，在日化、食品、环保、农业等领域具有广泛的应用前景。至今发现的γ-PGA生产菌株主要集中B.subtilis和B.lichemiformis。根据培养基中是否需要提供谷氨酸前体，可将γ-PGA产生菌分为两类：谷氨酸依赖型(I类)和谷氨酸非依赖型(II类)，I类包括B.licheniformis ATCC 9945A，B.subtilis IFO 3335，B.subtilis NX-2等菌株，这类菌株通常生成较多量的γ-PGA，培养基中需提供谷氨酸前体作为γ-PGA合成的前体物质或诱导剂。II类包括B.methylotrophicus SK19.001，B.subtilis C10等，这类菌株不需提供外源谷氨酸前体，从头合成途径合成γ-PGA。由于II类菌株无需添加谷氨酸、可大幅降低生产成本，是目前聚谷氨酸研究的热点，也是未来的发展趋势。
细菌纤维素(Bacterial Cellulose,简称BC)是由D-葡萄糖通过β-1,4-葡萄糖普键结合成的天然纳米高分子材料，又称为β-1,4-葡聚糖。具有良好的生物相容性、生物可降解性和较高力学性等优良特性。主要用于食品，纺织造纸，医药等领域，具有良好的经济和社会效益。目前报道的细菌纤维素产生菌主要有木醋杆菌(Acetobacter xylinum)、汉逊氏葡糖酸醋杆菌(Gluconacetobacter hansenii)和木葡萄糖酸醋杆菌(Gluconacetobacterxylinum)等。
目前现有报道技术只针对单独生产γ-聚谷氨酸或细菌纤维素一种产品，存在原料利用率低生产成本高等问题。而菊芋作为一种较为廉价的非粮原料，是工业生产中替代粮食类淀粉质原料的理想选择。本发明首次发现一种以菊芋中菊粉为原料，利用芽孢杆菌非谷氨酸依赖性的生产γ-聚谷氨酸和联产细菌纤维素的新方法，且所使用的解淀粉芽孢杆菌为食品级安全微生物，具有巨大的应用价值和工业化潜力。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一株能够利用菊粉联产细菌纤维素和γ-聚谷氨酸的解淀粉芽孢杆菌。
本发明还要解决的技术问题，是提供上述解淀粉芽孢杆菌的应用。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
发明人于2015年从江苏省盐城市菊芋土样中筛选得到的一株微生物菌株解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)，菌株号NX-2S，已保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，保藏地址：湖北省武汉市，洪山区八一路，武汉大学中国典型培养物保藏中心，邮编：430072，登记入册的编号为CCTCC No：M 2016346，保藏日期为2016年6月23日。以下内容均以此菌作为生产菌株。
所述菌株具有下述性质：
1、菌落形态学特征与生理生化特性见表1。
表1
2、16S rDNA序列分析：
测得菌株的16S rDNA基因的核苷酸序列长度为1417bp，其基因序列如SEQ ID No：1所示。将所测序列从GeneBank数据库中使用BLAST程序进行同源性比较，构建16S rDNA全序列为基础的系统发育树。结果表明：菌株与解淀粉芽孢杆菌ZH1达到100％同源性。根据菌株形态学观察和生理生化实验分析结果认定本发明所使用的是解淀粉芽孢杆菌，具体为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)NX-2S。
上述解淀粉芽孢杆菌在发酵联产细菌纤维素和γ-聚谷氨酸中的应用也在本发明的保护范围之内。
具体的应用方法之一为，将解淀粉芽孢杆菌NX-2S接种于不含有谷氨酸的发酵培养基中进行好氧培养，发酵液中富含细菌纤维素和γ-聚谷氨酸两种产品。其中，所述的发酵培养基包含如下组分：碳源10～90g/L，氮源1～40g/L，无机盐0.01～25g/L，柠檬酸1～40g/L，乙醇1％～10％(v/v)，溶剂为水，pH 6.5～8.0。
具体的应用方法之二为，将解淀粉芽孢杆菌NX-2S接种于含有谷氨酸的发酵培养基中进行好氧培养，发酵液中富含细菌纤维素和γ-聚谷氨酸两种产品。其中，所述的发酵培养基包含如下组分：碳源10～90g/L，氮源1～40g/L，谷氨酸1～40g/L，无机盐0.01～25g/L，柠檬酸1～40g/L，乙醇1％～10％(v/v)，溶剂为水，pH 6.5～8.0。
其中，所述的碳源为菊粉粗提液、菊糖、葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、木糖、阿拉伯糖、糖蜜、甘油的任意一种或几种的组合，优选菊粉粗提液和/或菊糖；氮源为牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、玉米浆、豆饼粉、棉籽饼粉、尿素、(NH4)2SO4、NH4Cl和NH4NO3中的任意一种或几种的组合；无机盐为硫酸盐、磷酸盐、磷酸二氢盐和盐酸盐中的一种或多种。
最优选的发酵培养基包含如下组分：菊粉粗提液60g/L，柠檬酸1g/L，牛肉膏10g/L，酵母膏5g/L，Na2HPO4·12H2O 5g/L，乙醇1.4％，利用Ca(OH)2溶液调pH 6.8。其中，所述的菊粉粗提液由新鲜洋姜洗净、切片、干燥、粉碎，1 0目过筛,制得的洋姜粉加水热处理过滤的滤液即为菊粉粗提液。
其中，所述的好氧培养条件是：初始pH为6.5～8.0、通气比控制在1.0～1.5VVM、培养温度为28～37℃(优选32℃)、培养时间为5天。
利用解淀粉芽孢杆菌NX-2S在制备联产细菌纤维素和γ-聚谷氨酸中的方法具体包括如下步骤：
(1)种子液的制备：将菌株接种到含有碳源、氮源、无机盐和水的无菌发酵培养基中，摇床转速140～220rpm，28～36℃下培养10～18h至OD660大于5.0；
(2)发酵培养：将步骤(1)的种子液以2％～10％的接种量接种于发酵培养基中，7.5L发酵罐发酵培养基装液量为3.5L，通气比控制在1.0～1.5VVM，初始pH为6.5～8.0，在28～37℃下静置培养2～5天。
其中，所述的种子培养基包含如下组分：碳源10～90g/L，氮源1～40g/L，无机盐0.01～25g/L，其余为水，pH 6.0～8.0。所述的发酵培养基包含如下组分：碳源10～90g/L，氮源1～40g/L，无机盐0.01～25g/L，柠檬酸1～40g/L，乙醇1％～10％(v/v)，溶剂为水，pH6.5～8.0。
其中，所述的碳源为菊粉粗提液、菊糖、葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、木糖、阿拉伯糖、糖蜜、甘油的任意一种或几种的组合；氮源为牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、玉米浆、豆饼粉、棉籽饼粉、尿素、(NH4)2SO4、NH4Cl和NH4NO3中的任意一种或几种的组合；无机盐为硫酸盐、磷酸盐、磷酸二氢盐和盐酸盐中的一种或多种。
有益效果：本发明具有如下优势：
(1)本发明筛选到一株非谷氨酸依赖的γ-PGA产生菌，该菌株发酵过程中无需外源添加谷氨酸，大大节约成本，操作方便简单。
(2)该菌株能够以菊粉粗提液为廉价碳源，同步糖化发酵合成γ-聚谷氨酸同时可以联产细菌纤维素，在不添加谷氨酸前体的培养基中积累γ-聚谷氨酸10-18g/L，细菌纤维素产量5-9g/L，不仅操作简单，生产成本低，对于菊芋特种能源植物的开发、拓展运用以及γ-聚谷氨酸的生产都具有十分重要的意义和经济价值。
附图说明
图1为菌株NX-2S的16S rDNA PCR纯化琼脂糖凝胶电泳图。
图2为水解液薄层层析，其中，1,NX-2S未水解发酵产物；2,谷氨酸标准品；3,γ-PGA标准品；4,NX-2S发酵液的水解产物。
图3为L-/D-型谷氨酸混合单体标准品液相色谱图。
图4为NX-2S发酵产物的红外光谱图。
图5为NX-2S发酵产物的核磁共振图(NMR)图谱，其中(A)1H谱；(B)13C谱。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
实施例1：菌株NX-2S的菌属鉴定及发酵产物γ-PGA和细菌纤维素的鉴定。
利用细菌基因组DNA提取试剂盒提取菌株NX-2S的基因组DNA，以上游引物27F和下游引物1492R PCR扩增16S rDNA序列如图1所示，PCR经纯化送至南京金斯瑞公司进行测序。将测序结果与GenBank数据库中已知的16S rDNA序列进行BLAST比对。结果显示菌株NX-2S与解淀粉芽孢杆菌ZH1达到100％同源性。根据菌株形态学观察和生理生化实验分析结果认定本发明所使用的是解淀粉芽孢杆菌，具体为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)NX-2S。
取解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)NX-2S发酵液用浓盐酸调pH2.8-3.5，9000rpm离心30min去除菌体，取上清加入2-5倍体积的乙醇，将沉淀用水复溶，透析去除小分子物质，滤液冷冻干燥得到γ-PGA粗品。用该粗品配制1g/L溶液，1.5mL溶液加入1.5mL浓盐酸，装入安瓿瓶中密封，121℃水解9h，取出后用6M NaOH调pH7.0，得到谷氨酸水解液。将水解液进行薄层层析分析，展开剂：正丁醇:丙酮:水＝12:3:5(V/V)；显色剂：0.2％的茚三酮溶于丙酮溶液。结果如图1所示，水解液在硅胶板上只有一个斑点，且与谷氨酸标准液一致，表明γ-PGA被完全水解成谷氨酸单体，无残留高聚物。利用手性柱测定B.amyloliquefaciens NX-2S发酵产物中D、L-谷氨酸的含量，结果如图2所示。
利用红外光谱仪测定B.amyloliquefaciens NX-2S发酵γ-PGA和BC提纯产物的红外图谱，取样品0.2mg与少量KBr研磨压片制样，然后用红外光谱仪测定样品的红外图谱，扫描范围4000～400cm-1。结果如图3所示，与标准红外图谱基本一致。
以D2O为溶剂，对B.amyloliquefaciens NX-2S发酵产物进行NMR1H13C检测。结果如图4所示，与γ-PGA标准核磁图基本一致。
挑取发酵液表面产生的凝胶膜于装水的培养皿中，使其自然平展于载玻片上，取出载玻片，晾干。于干燥的膜上滴加66.5％(体积分数)H2SO4，再滴加KI溶液显色，用肉眼和光学显微镜观察。该菌膜呈现特异性蓝黑色的反应可将该菌膜的主要成分判定为纤维素。
实施例2：7.5L罐静置发酵Bacillus amyloliquefaciens NX-2S生产γ-PGA和细菌纤维素。
种子培养基：葡萄糖10g/L，酵母膏3g/L，蛋白胨10g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，利用NaOH溶液调pH 6.8。
发酵培养基：葡萄糖60g/L，柠檬酸1g/L，牛肉膏10g/L，酵母膏5g/L，Na2HPO4·12H2O 5g/L，乙醇6％(v/v)，利用Ca(OH)2溶液调pH 6.8。
将解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens NX-2S(CCTCC M 2016346)在种子培养基、30℃、200r/min的摇床条件下培养14h，将种子液按5％(v/v)的种子量接种于预装有3.5L灭菌后的发酵培养基的发酵罐中进行培养，培养条件：30℃静置培养，空气比控制在1.2VVM，发酵过程中开启pH自动控制装置，利用HCl或Ca(OH)2控制发酵液pH值在6.5-8.0之间。发酵5天，γ-PGA浓度达到10g/L，γ-PGA分子量范围为130～560kDa，细菌纤维素湿质量485.1g，细菌纤维素干质量5.6g。
γ-PGA含量测定：发酵结束后，除去菌体的发酵液可提取γ-聚谷氨酸，经处理后，通过高效液相色谱对发酵液γ-聚谷氨酸的分子量和产量进行检测；
细菌纤维素粗品含量测定：发酵液上层细菌纤维素膜取出后，用水多次冲洗除去膜表面的培养基及杂质，将膜浸泡于1％(质量体积比)的NaOH溶液中，80℃恒温30min，至膜呈乳白色半透明，然后用0.5％(体积分数)乙酸溶液浸泡，再用蒸馏水冲洗至pH中性，沥干表面水分，称湿质量，然后将纤维素膜于60℃烘箱烘至恒质量，称膜干质量。纤维素的产量以1L培养基中纤维素的质量表示。
实施例3：7.5L罐静置发酵Bacillus amyloliquefaciens NX-2S生产γ-PGA和细菌纤维素。
种子培养基：葡萄糖10g/L，酵母膏3g/L，蛋白胨10g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，利用NaOH溶液调pH 6.8。
发酵培养基：菊粉粗体液40g/L，蔗糖10g/L，葡萄糖10g/L，柠檬酸2g/L，蛋白胨10g/L，(NH4)2SO4 5g/L，Na2HPO4·12H2O 6g/L，乙醇3％(v/v)，利用Ca(OH)2溶液调pH 6.8。
将解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens NX-2S(CCTCC M 2016346)在种子培养基、32℃、200r/min的摇床条件下培养14h，将种子液按6％(v/v)的种子量接种于预装有3.5L灭菌后的发酵培养基的发酵罐中进行培养，培养条件：32℃静置培养，空气比控制在1.2VVM，发酵过程中开启pH自动控制装置，利用HCl或Ca(OH)2控制发酵液pH值在6.5-8.0之间。发酵5天，γ-PGA浓度达到9.4g/L，γ-PGA分子量范围为130～560kDa，细菌纤维素湿质量475.1g，细菌纤维素干质量5.1g。
γ-PGA、细菌纤维素粗品含量测定同实施例2中所述。
实施例4：7.5L罐静置发酵Bacillus amyloliquefaciens NX-2S生产γ-PGA和细菌纤维素。
种子培养基：葡萄糖10g/L，酵母膏3g/L，蛋白胨10g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，利用NaOH溶液调pH 6.8。
发酵培养基：菊粉粗体液60g/L，柠檬酸2g/L，豆粕粉15g/L，Na2HPO4·12H2O 6g/L，乙醇2％(v/v)，利用Ca(OH)2溶液调pH 6.8。
将解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens NX-2S(CCTCC M 2016346)在种子培养基、37℃、200r/min的摇床条件下培养14h，将种子液按5％(v/v)的种子量接种于预装有3.5L灭菌后的发酵培养基的发酵罐中进行培养，培养条件：37℃静置培养，空气比控制在1.4VVM，发酵过程中开启pH自动控制装置，利用HCl或Ca(OH)2控制发酵液pH值在6.5-8.0之间。发酵5天，γ-PGA浓度达到12.6g/L，γ-PGA分子量范围为130～560kDa，细菌纤维素湿质量504.1g，细菌纤维素干质量6.3g。
γ-PGA、细菌纤维素粗品含量测定同实施例2中所述。
实施例5：7.5L罐静置发酵Bacillus amyloliquefaciens NX-2S生产γ-PGA和细菌纤维素。
种子培养基：葡萄糖10g/L，酵母膏3g/L，蛋白胨10g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，利用NaOH溶液调pH 6.8。
发酵培养基：菊粉粗提液90g/L，柠檬酸0.5g/L，牛肉膏10g/L，酵母膏5g/L，Na2HPO4·12H2O 4g/L，乙醇1.4％(v/v)，利用Ca(OH)2溶液调pH 6.8。
将解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens NX-2S(CCTCC M 2016346)在种子培养基、32℃、200r/min的摇床条件下培养14h，将种子液按5％(v/v)的种子量接种于预装有3.5L灭菌后的发酵培养基的发酵罐中进行培养，培养条件：32℃静置培养，空气比控制在1.2VVM，发酵过程中开启pH自动控制装置，利用HCl或Ca(OH)2控制发酵液pH值在6.5-8.0之间。发酵5天，γ-PGA浓度达到14g/L，γ-PGA分子量范围为130～560kDa，细菌纤维素湿质量600.1g，细菌纤维素干质量7.2g。
γ-PGA、细菌纤维素粗品含量测定同实施例2中所述。
实施例6：7.5L罐控制转速Bacillus amyloliquefaciens NX-2S生产γ-PGA和细菌纤维素。
种子培养基：葡萄糖10g/L，酵母膏3g/L，蛋白胨10g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，利用NaOH溶液调pH 6.8。
发酵培养基：菊粉粗提液90g/L，柠檬酸1g/L，牛肉膏10g/L，酵母膏5g/L，Na2HPO4·12H2O 5g/L，乙醇1.4％，利用Ca(OH)2溶液调pH 6.8。
将解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens NX-2S(CCTCC M 2016346)在种子培养基、32℃、200r/min的摇床条件下培养14h，将种子液按5％(v/v)的种子量接种于预装有3.5L灭菌后的发酵培养基的发酵罐中进行培养，培养条件：整个发酵过程中保持温度32℃，空气比控制在1.2VVM，转速为140r/min，发酵过程中开启pH自动控制装置，利用HCl或Ca(OH)2控制发酵液pH值在6.8-8.0之间。在此条件下发酵5天，γ-PGA浓度达到16g/L，细菌纤维素湿质量400g，细菌纤维素干质量4.9g。
γ-PGA、细菌纤维素粗品含量测定同实施例2中所述。
实施例7：7.5L罐两阶段补料发酵Bacillus amyloliquefaciens NX-2S生产γ-PGA和细菌纤维素。
种子培养基：菊糖10g/L，酵母膏3g/L，蛋白胨10g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，利用NaOH溶液调pH 6.8。
发酵培养基：菊粉粗提液90g/L，柠檬酸1g/L，牛肉膏10g/L，酵母膏5g/L，Na2HPO4·12H2O 5g/L，乙醇1.4％，利用Ca(OH)2溶液调pH 6.8。
将解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens NX-2S(CCTCC M 2016346)在种子培养基、32℃、200r/min的摇床条件下培养14h，将种子液按5％(v/v)的种子量接种于预装有3.5L灭菌后的发酵培养基的发酵罐中进行培养，培养条件：整个发酵过程中保持温度32℃，空气比控制在1.4VVM，转速为140r/min，培养24h后培养条件改为静置培养，发酵过程中开启pH自动控制装置，利用HCl或Ca(OH)2控制发酵液pH值在6.8-8.0之间。当发酵液中残留还原糖在10g/L时，打开补料装置，将含糖浓度为500g/L的菊粉粗提液补入发酵液中，控制发酵液中糖浓度保持在10～15g/L左右，进行补料发酵。发酵72h，γ-PGA浓度达到18g/L，细菌纤维素湿质量703.5g，细菌纤维素干质量8.1g。
γ-PGA、细菌纤维素粗品含量测定同实施例2中所述。
实施例8：7.5L罐补料发酵Bacillus amyloliquefaciens NX-2S生产γ-PGA和细菌纤维素。
种子培养基：菊糖10g/L，酵母膏3g/L，蛋白胨10g/L，MgSO4·7H2O 0.5g/L，利用NaOH溶液调pH 6.8。
发酵培养基：菊粉粗提液80g/L，谷氨酸40g/L，柠檬酸1g/L，牛肉膏10g/L，酵母膏5g/L，Na2HPO4·12H2O 5g/L，乙醇1.4％，利用Ca(OH)2溶液调pH 6.8。
将解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens NX-2S(CCTCC M 2016346)在种子培养基、32℃、200r/min的摇床条件下培养14h，将种子液按5％(v/v)的种子量接种于预装有3.5L灭菌后的发酵培养基的发酵罐中进行培养，培养条件：整个发酵过程中保持温度32℃，空气比控制在1.4VVM，转速为140r/min，培养24h后培养条件改为静置培养，发酵过程中开启pH自动控制装置，利用HCl或Ca(OH)2控制发酵液pH值在6.8-8.0之间。当发酵液中残留还原糖在10g/L时，打开补料装置，将含糖浓度为500g/L的菊粉粗提液补入发酵液中，控制发酵液中糖浓度保持在20g/L左右，进行补料发酵。发酵72h，γ-PGA浓度达到42g/L，细菌纤维素湿质量790.5g，细菌纤维素干质量8.9g。
γ-PGA、细菌纤维素粗品含量测定同实施例2中所述。
Claims (9)
1.一株解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)，菌株号NX-2S，已保藏于中国典型培养物保藏中心，登记入册的编号为CCTCC No：M 2016346，保藏日期为2016年6月23日。
2.权利要求1所述的解淀粉芽孢杆菌在发酵联产细菌纤维素和γ-聚谷氨酸中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，将解淀粉芽孢杆菌NX-2S接种于不含有谷氨酸的发酵培养基中进行好氧培养，发酵液中富含细菌纤维素和γ-聚谷氨酸两种产品。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的发酵培养基包含如下组分：碳源10～90g/L，氮源1～40g/L，无机盐0.01～25g/L，柠檬酸1～40g/L，乙醇1％～10％v/v，溶剂为水，pH 6.5～8.0。
5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，将解淀粉芽孢杆菌NX-2S接种于含有谷氨酸的发酵培养基中进行好氧培养，发酵液中富含细菌纤维素和γ-聚谷氨酸两种产品。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的发酵培养基包含如下组分：碳源10～90g/L，氮源1～40g/L，谷氨酸1～40g/L，无机盐0.01～25g/L，柠檬酸1～40g/L，乙醇1％～10％v/v，溶剂为水，pH 6.5～8.0。
7.根据权利要求4或6所述的应用，其特征在于，所述的碳源为菊粉粗提液、菊糖、葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、木糖、阿拉伯糖、糖蜜、甘油的任意一种或几种的组合；氮源为牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、玉米浆、豆饼粉、棉籽饼粉、尿素、(NH4)2SO4、NH4Cl和NH4NO3中的任意一种或几种的组合；无机盐为硫酸盐、磷酸盐、磷酸二氢盐和盐酸盐中的一种或多种。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的碳源为菊粉粗提液和/或菊糖。
9.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的好氧培养条件是：初始pH为6.5～8.0、通气比控制在1.0～1.5VVM、培养温度为28～37℃、培养时间为2～5天。
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