CN110358740A - 一种qx型鸡传染性支气管炎病毒毒株及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及病毒学技术领域，公开了一种QX型鸡传染性支气管炎病毒毒株及其应用，所述毒株保藏编号为CGMCC No.17487。本发明提供一株QX型IBV分离毒株CK/CH/LAH/1806，其全基因组长度为27642bp，序列如SEQ IDNO:1所示，具有典型的IBV基因组编码结构特征。该毒株可引起1‑7日龄SPF雏鸡发生较典型的IB临床症状。交叉免疫保护效力研究表明，该毒株不仅能够提供QX型毒株的免疫攻毒保护，还可为Mass型、TW1型毒株的攻毒提供良好的交叉保护，可作为理想的IBV疫苗候选毒株。

Description

一种QX型鸡传染性支气管炎病毒毒株及其应用

技术领域

本发明涉及病毒学技术领域，更具体的说是涉及一种QX型鸡传染性支气管炎病毒毒株及其应用。

背景技术

鸡传染性支气管炎(Infection bronchitis，IB)是由传染性支气管炎病毒(Infection bronchitis virus，IBV)引起的一种鸡的高度传染性疾病，其主要侵害鸡的呼吸系统、泌尿生殖系统和消化系统等。属于世界动物卫生组织(OIE)规定的B类传染性禽类疾病，在我国农业部颁发的动物疫病病种目录中属于二类动物疫病。20世纪30年代，Schalk和Hawn等从美国的北达科他州初次发现该病，1936年Beach和Hudson等确定本病的病原为病毒。随后的几十年内，IBV在世界范围内广泛传播、流行，给世界养禽业造成了严重的经济损失。

IBV是有囊膜(envelope)的单股正链RNA病毒。其基因组具有特殊的RNA复制不连续机制，以及RNA聚合酶的不完全校对机制，在复制和转录的过程中易发生基因突变、重组，进而引起IBV基因突变株的出现和流行。研究表明，不同型IBV毒株之间生物学特性、致病性和组织嗜性复杂多变，根据其免疫原性的差异可将IBV划分为多种血清型，不同血清型之间交叉保护性及血清中和效力相对较差。

目前，国内IBV基因型众多，在免疫鸡群和非免疫鸡群中，均可检测到新的基因型毒株。其中QX型毒株流行范围最广、危害最大，国内分离株中QX型毒株占比在60％以上，且呈现逐年上升的趋势。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种QX型鸡传染性支气管炎病毒毒株，所述毒株不仅能够提供QX型毒株的免疫攻毒保护，还可为TW1型、Mass型毒株提供良好的交叉攻毒保护；

本发明的另外一个目的在于提供上述毒株在制备疫苗中的应用。

为实现上述发明目的，本发明提供如下技术方案：

一种鸡传染性支气管炎病毒毒株，保藏编号为CGMCC No.17487，已于2019年4月2日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，分类命名为：鸡传染性支气管炎病毒。

本发明从安徽某规模化鸡场的发病鸡群中分离出一株支气管炎病毒毒株，命名为ck/CH/LAH/1806株；具体分离过程为，采集发病鸡的气管、肾脏组织，经研磨、离心、取上清液接种10日龄SPF鸡胚。病毒经SPF鸡胚连传5代，可致鸡胚发生IBV特征性病变(呈矮小胚、侏儒胚、蜷缩胚)。分离毒株病毒含量为10^6.17～10^6.83EID₅₀/0.1mL。

本发明CK/CH/LAH/1806株按《中华人民共和国兽药典》2015版三部相关要求进行纯净性检测，结果显示病毒尿囊液无菌、支原体及外源病毒污染，表明本发明CK/CH/LAH/1806株纯净。

本发明所述鸡传染性支气管炎病毒CK/CH/LAH/1806株，其全基因组长度为27642bp，其全基因组序列如SEQ ID NO：1所示，具有典型的IBV基因组编码结构特征，具体为5'-UTR－1a－1b－S－3a－3b－E－M－ORFX－5a－5b－N－UTR-3'。

本发明CK/CH/LAH/1806株与GenBank中登录的FJ888351(H120)、KF377577(4/91vaccine)、AY319651(BJ)、JF893452(YN)、EU526388(A2)全基因组相比较，其核苷酸同源性分别为86.2％、86.1％、90.0％、89.8％、90.1％。同时，该分离毒株与GenBank中已发表的多株参考毒株一起进行系统进化分析，与QX型IBV毒株S1基因同源性均在90％以上，在遗传进化树中处于同一进化分支，该毒株属于QX型IBV。

在具体的致病性研究中，CK/CH/LAH/1806株可引起1日龄SPF雏鸡100％发病(20/20)，40％(8/20)死亡；7日龄SPF雏鸡100％发病(20/20)，10％(2/20)死亡；21日龄SPF鸡，仅在攻毒后5～7d部分雏鸡出现轻微临床症状(眼鼻部少量分泌性黏液)。IBV毒种一般对小日龄的雏鸡致病性强，但对大日龄的鸡致病性弱，本发明分离的毒种符合IBV对不同日龄SPF鸡致病性规律，可作为标准检验毒种使用。

在具体的QX型毒种交叉免疫保护效力比较试验中，IBV CK/CH/LAH/1806株对QX型、Mass型、TW1型毒种的交叉免疫保护效力，明显优于CK/CH/LHN/1902株、CK/CH/LHB/1903株两株QX型的IBV毒株。

CK/CH/LAH/1806株针对QX型毒株的分毒保护率为100％(10/10)保护，针对Mass型毒株的分毒保护率为70％(7/10)保护，针对TW1型毒株的分毒保护率为80％(8/10)保护。而CK/CH/LHN/1902株针对QX型毒株的分毒保护率为90％(9/10)保护，针对Mass型毒株的分毒保护率为20％(2/10)保护，针对TW1型毒株的分毒保护率为40％(4/10)保护。CK/CH/LHB/1903株针对QX型毒株的分毒保护率为90％(9/10)保护，针对Mass型毒株的分毒保护率为30％(3/10)保护，针对TW1型毒株的分毒保护率为40％(4/10)保护。结果表明，QX型的CK/CH/LAH/1806毒株交叉免疫效力明显优于其它两株QX型的IBV毒株。

基于上述技术效果，本发明毒株可引起1-7日龄SPF雏鸡发生较典型的IB临床症状，其可以作为疫苗评价的检验用毒种，故本发明提出了所述毒株在疫苗评价和/或制备疫苗评价的检验产品中的应用；所述毒株对QX型、Mass型、TW1型的毒株具有良好的免疫保护效果，该分离毒株可以作为疫苗研究的候选毒株或IBV研究的基础材料，故本发明还提出所述毒株在制备鸡传染性支气管炎疫苗中的应用。

由以上技术方案可知，本发明提供一株新型的QX型IBV分离毒株CK/CH/LAH/1806，其可引起1-7日龄SPF雏鸡发生较较典型的IB临床症状。交叉免疫保护效力研究表明，该毒株不仅能够提供QX型毒株的免疫攻毒保护，还可为Mass型、TW1型毒株的攻毒提供良好的交叉保护，可作为理想的IBV疫苗候选毒株。

生物保藏说明

ck/CH/LAH/1806，分类命名为：鸡传染性支气管炎病毒，于2019年4月2日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.17487。

附图说明

图1所示为毒株致鸡胚特征性病变；其中，A为健康对照组鸡胚；B为接种组鸡胚，表现出蜷缩、发育小等病痕；

图2所示为S1基因遗传进化分析；

图3所示为全基因组序列比对分析；

图4所示为毒株对1日龄SPF雏鸡致病性；其中，A表示发病鸡气管内有大量黏液性分泌物；B表示发病鸡肾脏肿大，有大量尿酸盐沉积。

具体实施方式

本发明公开了一种QX型鸡传染性支气管炎病毒毒株及其应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明所述毒株和应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的毒株和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

下面结合实施例，进一步阐述本发明。

实施例1：CK/CH/LAH/1806毒株分离

2018年3月自安徽某规模化鸡场的发病鸡群中分离到一株CK/CH/LAH/1806病毒。具体方法：无菌采集发病鸡气管及肾脏组织，将组织剪碎、加入含2000U青、链霉素的PBS充分研磨，匀浆制成30％悬液，反复冻融3次，3000r/min离心15min，取上清过滤除菌后经尿囊腔途径接种10日龄SPF鸡胚5枚，0.2mL/胚，37℃孵育144h，收集鸡胚尿囊液，观察并记录鸡胚死亡及病变情况。取第1代胚液经尿囊腔途径接种10日龄SPF鸡胚5枚，0.1mL/胚，置37℃孵育36～144h(期间随时取出特异性死亡的胚，收获胚液继续传代)无鸡胚死亡时，至96h收获胚液传代，如此连传5代。

盲传第2代，有2枚鸡胚发生死亡，死亡鸡胚呈矮小胚、侏儒胚、蜷缩胚，羊膜水肿增厚，胚体充血、出血，胚体重只有12.1g～18g，而同日龄对照鸡胚体重为20.8g～22.6g。第3、4、5代接种鸡胚培养144h内死亡3～4枚，死亡及存活鸡胚均可观察到特征性的鸡胚病变(矮小胚、侏儒胚、蜷缩胚，羊膜水肿增厚，胚体重降低等)(如图1)。

实施例2：CK/CH/LAH/1806毒株病毒含量测定

将CK/CH/LAH/1806毒株鸡胚尿囊液用无菌生理盐水作10倍系列稀释，取10^-5、10^-6、10^-7、10^-8 4个稀释度，经尿囊腔途径接种10日龄SPF鸡胚5枚，每胚0.1mL，置36℃～37℃继续孵育。24h以前死亡的鸡胚弃去不计，在24h～144h内死亡的鸡胚随时取出，至144h，取出所有活胚。在接种后24h～144h死亡鸡胚及存活鸡胚胎儿出现失水、蜷缩、发育小(接种胎儿比对照最轻胎儿重量低2g以上)等特异性病痕者判为感染，计算EID₅₀。CK/CH/LAH/1806毒株不同代次病毒含量为10^6.17～10^6.83EID₅₀/0.1mL。

实施例3：CK/CH/LAH/1806毒株纯净性检验

按《中华人民共和国兽药典》2015版三部，对CK/CH/LAH/1806毒株鸡胚尿囊液进行无菌、支原体、外源病毒检验。①无菌检验：接种鸡胚尿囊液的TG/TSB试管均未见细菌生长；②支原体检验：接种尿囊液的支原体培养基颜色未发生变化，接种的平板上也未出现支原体菌落生长；③细胞法检验：未出现细胞病变，未出现由外源病毒所致的红细胞吸附现象；④鸡胚法检验：经尿囊腔(AS)和绒毛尿囊膜(CAM)途径接种，观察至168h，胎儿发育正常，CAM无病变，鸡胚尿囊液HA检验为阴性；⑤禽网状内皮组织增生症病毒检验：禽网状内皮组织增生症病毒检验(ELISA试验)为阴性；⑥禽白血病毒检验：禽白血病病毒检验(ELISA试验)为阴性。检验结果表明，CK/CH/LAH/1806毒株鸡胚尿囊液无细菌、支原体、外源病毒污染，毒种纯净。

实施例4：CK/CH/LAH/1806株全基因组序列测定

1、病毒RNA的提取及cDNA合成

将CK/CH/LAH/1806毒株鸡胚尿囊液反复冻融3次，按照RNA提取试剂盒(康为世纪生物科技有限公司)说明书提取基因组总RNA，保存于-70℃超低温冰箱，备用。

以基因组总RNA为模板，利用反转录试剂盒(全式金生物技术有限公司)说明书进行cDNA合成，合成的cDNA用于PCR检测，保存于-20℃冰箱，备用。

2、引物设计与PCR扩增

从GenBank获取多条IBV基因组的核苷酸序列，比对后针对保守区设计引物，由上海生工生物工程股份有限公司合成。以上述合成的cDNA为模板，对CK/CH/LAH/1806株的基因组片段进行扩增，然后将胶回收的PCR扩增产物送测序公司测序，基因组5’端序列用Clontech的SMARTer RACE cDNA Amplification Kit试剂盒进行扩增。

3、序列比较分析

测序结果用Lasergen 7.1软件包中的EditSeq、MegAlign、SeqMan软件进行全基因组序列拼接及分析；用ClustalX 1.83软件进行多序列比对，利用MEGA 6.0软件绘制S1基因系统进化树谱(bootstrap值为1000)，完成毒株基因分型。

结果获得CK/CH/LAH/1806毒株全基因组长度为27642bp，其全基因组序列如SEQID NO：1所示，具有典型的IBV基因组编码结构特征，具体为5'-UTR－1a－1b－S－3a－3b－E－M－ORFX－5a－5b－N－UTR-3'。各片段编码的氨基酸大小分别为：5'-UTR 525(bp)；1a基因3953(aa)；1b基因2652(aa)；S基因1165(aa)；3a基因57(aa)；3b基因62(aa)；E基因108(aa)；M基因225(aa)；ORFX 107(aa)；5a基因65(aa)；5b基因82(aa)；N基因409(aa)；3'-UTR519(bp)。

全基因组比对分析表明，该分离株全基因组与GenBank中登录的FJ888351(H120)、KF377577(4/91vaccine)、AY319651(BJ)、JF893452(YN)、EU526388(A2)全基因组相比较，其核苷酸同源性分别为86.2％、86.1％、90.0％、89.8％、90.1％(如图2)。S1基因遗传进化分析表明，CK/CH/LAH/1806毒株S1基因与QX型IBV毒株S1基因同源性均在90％以上，在遗传进化树中处于同一进化分支，该毒株属于QX型IBV(如图3)。

实施例5：CK/CH/LAH/1806毒株致病性研究

取第5代病毒液经滴鼻、点眼途径接种1、7、21日龄SPF鸡，每组各20只，0.1mL/只，约10^4.0EID₅₀/只，将试验鸡置负压隔离器内饲养，试验鸡自由采食、饮水，温湿度环境适宜。每日观察、记录试验鸡发病死亡情况，及时剖检死亡鸡，观察肾脏、气管等组织脏器的病变情况，于攻毒后第14d剖检所有试验鸡，观察肾脏、气管等组织脏器的病变情况。结果表明，1日龄雏鸡攻毒组100％发病(20/20)，40％(8/20)死亡；7日龄SPF雏鸡100％发病(20/20)，10％(2/20)死亡。于攻毒后3d～11d表现出精神沉郁、甩头、张口呼吸、流鼻涕、拉稀等临床症状。所有死亡鸡均可见典型的剖检病变，表现为肾脏肿大，有大量尿酸盐沉积，气管有大量黏液性分泌物(如图4)。21日龄鸡攻毒组仅在攻毒后5～7d部分雏鸡出现轻微临床症状(眼鼻部少量分泌性黏液)，其他时间均未观察到试验鸡的典型临床症状，试验期间没有雏鸡发生死亡。于攻毒后第14d剖检，仅部分试验鸡(5/20)气管内可见少量黏液性分泌物，肾脏未见明显肿胀和尿酸盐沉积。

实施例6：QX型毒株交叉免疫保护效力比较试验

分别使用CK/CH/LAH/1806株、CK/CH/LHN/1902株、CK/CH/LHB/1903株三株毒种，经滴鼻、点眼途径免疫接种35日龄SPF鸡，各30只，0.1mL每只，约10^3.5EID₅₀/只，同时设30只不免疫作为攻毒对照。免疫后21天，分别使用QX型检验用毒株QX-LSD/1704毒株、Mass型检验用毒株M41毒株和TW1型检验用毒株TW1-LGX/1901毒株经滴鼻、点眼途径攻毒，每组10只，每只0.5mL，约10^4.0EID₅₀/只。于攻毒后第7天，采集免疫攻毒组及攻毒对照组鸡喉头、气管部位棉拭子，将采集的棉拭子保存在含有2000U青、链霉素的PBS缓冲液中，反复冻融3次，3000r/min离心15min，取上清经尿囊腔途径接种10日龄SPF鸡胚，每个棉拭样品接种2枚SPF鸡胚，0.2mL/胚，同时设5枚胚作对照，于37℃孵育144h，收集鸡胚尿囊液，观察并记录鸡胚死亡及病变情况。死胚及存活的鸡胚中出现失水、蜷缩、发育小(接种胎儿比对照最轻胎儿重量低2g以上))，取第1代胚尿囊液接种10日龄SPF胚5枚，0.2mL/胚，置37℃孵育36～144h(期间有特异性死亡的胚随时取出，收获胚液继续传代)无鸡胚死亡时，至144h收获胚液传代，如此连传3代，判定气管排毒情况。

研究结果表明，CK/CH/LAH/1806株针对QX型毒株的分毒保护率为100％(10/10)保护，针对Mass型毒株的分毒保护率为70％(7/10)保护，针对TW1型毒株的分毒保护率为80％(8/10)保护。而CK/CH/LHN/1902株针对QX型毒株的分毒保护率为90％(9/10)保护，针对Mass型毒株的分毒保护率为20％(2/10)保护，针对TW1型毒株的分毒保护率为40％(4/10)保护。CK/CH/LHB/1903株针对QX型毒株的分毒保护率为90％(9/10)保护，针对Mass型毒株的分毒保护率为30％(3/10)保护，针对TW1型毒株的分毒保护率为40％(4/10)保护。结果表明，QX型的CK/CH/LAH/1806毒株交叉免疫效力优于其它两株QX型的IBV毒株。(见表1)。

表1 QX型毒株交叉免疫保护效力试验结果

注：“–”表示未进行此项。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

序列表

<110> 江苏农牧科技职业学院

<120> 一种QX型鸡传染性支气管炎病毒毒株及其应用

<130> MP1915553

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 27642

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

actgaaaata gatattaata tatatctatt acactagcct tgcgctagat ttccaactta 60

acaaaacgga cttaaatacc tacagctggt ccttctaggt gttccattgc agtgcacttt 120

agtgccctgg atggcacctg gccacctgtc aggttttagt tattaaataa tattgttgct 180

agtatcactg cttgttttgt tgtgtctcac tttattacat ccgttgcttg ggctacctag 240

tgccagcgtc ctgcaggcgc cgtggtcggt tcgagtgcga agaacctctg gttcatctag 300

cggtacgcgg gtgtgtggaa gtagcacttc agaggtacgt tctgttgtgt gaaacacggg 360

gtcacctccc cccacattcc tctaagggct tttgagccta gcgttgggct acgttctcgc 420

acaaggtcgg ctatacgacg gttgtagggg gtagtgccga acaacccctg aggtgacagg 480

ttctggtggt gtttagtgag cagacataca atagacagtg acaacatggc ttcaagccta 540

aaacagggag catcttccca aaaccagagg agtgtcattc ttgttgccaa agacattccc 600

gaccaccttt gtgacgcttt gttcttctat acgtcacaca acccaaaaga ctacgctgat 660

gctttcgcct ttaggcagaa gttcgaccgt aatctcggtg ctgggaagca gtttaaattt 720

gaaactgtgt gtggcccatt tttcttaaaa ggagtggaca aaataacacc aggtgtccca 780

gccaaagctt taaaggccac ttctaagttg gctgatttag aagacatctt cggtgtctct 840

ccttttgcac ggaaataccg tgaattgttg aagacagcat gccattggtc tatgactgta 900

gaaacactgg atgcttgtgc acaaactctt gaagaaatct ttgatccaac tgagatactt 960

tggctccagg ttgctgcaaa gattcaagtt tcagccatgg caatgcgcag atttgttggt 1020

gaggttactg caaaagtcat ggattcactt ggctcaagtt tgagcgctct attccaagtt 1080

gttaaggaaa caatggccag aatctttcaa aatgctctgg ccatttttga gagtgtgagt 1140

gaattgccac agcgtattgc tgcacttaag atggcttttg ccaagtgtgc aagatcaatt 1200

acaattgtgg ttgttggaca tgccctcact attagagagt ttgctggaac ttgtcttgca 1260

agcattaatg gtgcagttgc aaaattcttt gaagaacttc caactggctt tatgggcgct 1320

aaagtctttt caactcttgc cttctttaaa gaagcagcag taaagattgt agaaaatata 1380

ccaaacgcgc caagaggtac taaaggtttt gaagtcgttg gcaatgccaa aggtacacaa 1440

gttgttgtcc gtggcatgcg aaatgactta actttgcttg accaaaaagc tgaagttcct 1500

gtggaaccag aaggttggtc tgcaatcttg gagggacatc tttgctatgt ctttaagagt 1560

ggtgatcgct tctatgcggc acctctttca ggaaattttg cattgcatga tgtgcattgc 1620

tgcgagcgtg tagtctgtct gtctgatggt gtaacaccgg agataaatga tgggcttgtt 1680

cttgctgcaa tttactcatc ttttagtgtt tcggaacttg tggcagcact taaaaaaggt 1740

gaaccattca agtttttggg gcacaaattt gtctatgcga aggaagcggc agtttctttc 1800

accttggcaa aagcagcaac cattggagat gtcctgaagt tgtttcaatc agcaagagta 1860

aagacgaaag atgtgtggtc tgcacttact gaacagtctt tcgaattctg gaaagttgcg 1920

tacaatagag tgcgcaatct tgaagaagtt ctgaagactc atttttgtaa agctcaaatg 1980

tcaattgtga tcctagcagc agtgcttggt gagggcattt ggcatctctg ttcgcaagtc 2040

atttataaat tgagtggcct gttttctaaa gtcgttgact tttgtgaaaa acactggaaa 2100

ggtttctgta cgcagttgcg aaaagttagg cttgttgtta cagaaaactt ttgtgtgttg 2160

aaaggaattg ctcagcattg ttttcaactt ttgctggaag cactacactt tatgtacaag 2220

agttttaaga aatgtgcact tggtagactt tctggggatt tatttttctg gaaaggcggt 2280

gtgcataaaa ttgtgcagga tggcgatgaa atttggtttg acgccatcga tacgattgaa 2340

attgaagatc tgggtattgt ccaagaaaaa cctatagatt ttgaggtttg tgaagatgtg 2400

atacttccag aaaatcaacc tggccacatg gttcaaatcc aggatgacgg aaagaactat 2460

atgttcttcc gttttaagaa ggatgagaac atttattata caccaatgtc acaacttggt 2520

gctattaatg ttatttgcaa agcgggtggc aagactgtca cgtttggtga aacaactgta 2580

aaggaaatac catcacctga tgttgtgcct attaaggtaa gcattgagtg ctgtggtgaa 2640

ccatggaata caatcttcaa gaaggcttac aaagagccca ttgaagttga gacagacctc 2700

acagtagaac aactgctcac tgtgatctat gataaaatgt gtgaagatct caaactgttt 2760

ccagaggcac cagaacctcc accatttgag aatgtcgcac ttgttgataa aaacggtaaa 2820

gatttggatt gcataaaatc atgccatcta atctaccgtg attacgagag cgatgatgac 2880

atcgaggaag acgatgctga ggagtgtgat acagatccag ctgatgctga ggaatgtgat 2940

actgcttcag agtgtgaaca agaagatgag gatacaaagg tgctgtctct tttgcaagac 3000

ccagccagta ataagtatcc tctacctctt gatgatgatt atagtgtcta taatggatgt 3060

attgttcata aggacgctat agatgttgtt aatttaccat ctggtgaaga aacttttgtt 3120

gtcaataact gttttgaagg ggctgtgaaa ccgcttccgc agaaggttgt tgatgttcta 3180

ggagattggg gggaggccgt tgatgcacaa gaacaattgt gtgaacaaga gtctgaatct 3240

gttaaagaac cagttgagaa acctactggt attggtggtt cagcaattga agaagctgtt 3300

gtcgtggagc aggaagtggt tcttgttgtt gaagagtctc aagaagtagt tgtttttaca 3360

cctgctgatt tagaagttgc taaagaaaca tcagaggatg ttgacgagtt tgttcttgtt 3420

gctgatgttc ctacagaaga agttgtgcct caagaaaaag aagagccaca agtagaacag 3480

gagcctattc aagttgtcaa accacaacgt gagaaaaagg ctaaaaagtt taaagtcagg 3540

cagaccacat gtgaaaaacc caaattcttg gagtacacaa catgtgtagg tgatttgact 3600

gttgtaattg ccaaagcatt ggatgagttt aaagagttct gcgttgttaa cgccgcaaat 3660

gagtatatgt ctcatggtgg tggcgttgcg aaggcaattg ctgacctttg tggacctgat 3720

tttgtggaat attgtgagga ctatgttaag aaacatgggc cacaacaaag acttgtcaca 3780

ccttcgtatg tcaaaggcat tcaatgtgtg aataatgttg taggaccccg ccatggtgac 3840

aaaggtttgg aagaaaaact tgtcgctgcc tacaagaatg ttcttgtaga tggtgtggtc 3900

aattatgttg tgccagttct ctcatcggga atttttggtg tagattttaa aacttcaata 3960

gacgcgatgc gtaaggcctt tgaagggctt aacatacgcg tgcttctttt ttctctgagc 4020

caagaacaca ttgagtattt cgatgcaact tgtaagcaga agaaaattta tcttacagaa 4080

gatggtgtta aataccgctc tgttgtagtg aaacctggcg actctttggg tcaatttggt 4140

caggtttttg caaagaacaa gacagttttt acagcagatg atgtagagga tgaagaagtt 4200

ctcttcactc caacaactga caaagctgtt cttgaatact atggattgga tgcgcaaaag 4260

tatgtaatat atttgcaaac acttgcgcag aaatgggaag tccaatatag ggacaatttt 4320

atcttactta aatggcgtga tggaaactgc tggattagtt cagctatggt gctccttcag 4380

gccgctaaga ttaggtttag aggttttctt gcagaggcat gggctaaatt attgggtgga 4440

gaccctacgg attttgttgc ttggtgctat gcaagttgca atgctaaagt tggtgatttt 4500

tcagactgca attggctttt ggctaacttg gcagaacact ttgatgcaga ttacacaaat 4560

gcactgctta agaagcgtgt gtcgtgtaac tgtggtgtta agagttatga acttagaggc 4620

cttgaagctt gtattcaacc agtaagggct cctaaccttc tacattttaa gacgcaatac 4680

tcaaattgtc caacttgtgg tgcaaatagt atggatgaag ttgttgaagc atcactcccg 4740

tacttgttgc ttgttgctac tgatggtcct gctgcagttg attgtgatga aaatgctgca 4800

ggaaatgttg tttttattgg gtccaccaac agtggacact gttatacaca agttgttgga 4860

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gcaatgtata tgcgcttctc tcttaagagt aaaaattctc tgtctgttgc taaaaagagt 4980

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agttttgatg atcttactga ctttgaacag tggtatgata gtaacatcta tgaaagtctt 5100

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aaggatggct ttacttataa gttaacacct gacactgatg aaaattcaaa agcaccagtt 5280

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tgttttgggt ttactaggga gcattttgaa agaagagtgt ctccgcagtt cttaaaaact 5700

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gattttactt gtcgtgtttg tttacatggt aaggattcgc ttcatttgta taaacatgcc 6000

tatagcgtag aacagtttta taaagatgca gttaatggta ttagttttac atggaattgg 6060

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aattggtact gtagaaattg tgataagtat ggccaccaaa atacatttat gtctcctgaa 6480

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atagtttgta atacacacag tgcgcatgca ttagaggaag caaaaaatgc tgccatttat 6780

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ggtggtgtcg ttagtagcac tattagtagt tttaagagtt gttgtaaatg gctcttagtg 7380

ttttatttaa tctttacagt gtgttgtttg ggttattatc aatgggaaat gagtagagaa 7440

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acttggttta atagagaaat tgttggttac actcacgatt ctattattac agaaggtgag 7800

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atacttcctc atagagtata ctttcaacct aatggagtca ggcttattgt gcctcagcaa 7980

attatgcaca caccatacgt agttaagtta gtttcagaca gctattgtag aggtagtgtt 8040

tgtgaggtta ctaaaccagg ttattgtgtc tctatgaact ctcaatgggt tttgtttaat 8100

gatgaataca caattaaacc tggtgtattt tgtggttcta ctgttagaga acttttgttt 8160

agtatggtta gcacattctt tacgggtgtt aatccaaata tctatatgca attggcaact 8220

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tttatattat gtgtgcatag ttataatggt gttttagcta ttatactact tgtactctat 8400

tgttatgcat cacttgtgac gagtcgtaat actgccataa taatgcactg ttggctcgtt 8460

tttacatttg gtttaatagt acctaattgg atagcttgtg tctacttagg ttttgtgcta 8520

tatatgtata caccgctgct tttgtggtgc tatggtacaa ctaaaaattg ccgcaagctc 8580

tatgaaggca atgaatttgt tggtaattat gatcttgctg cgaagagtac gtttgtaatt 8640

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gtttatactc caccacgata ttcaattggt gttagcagat tacaagctgg ttttaagaaa 8880

ctagtatctc ctagtagtgc tgttgagaag tgcattgtta gtgtatccta taggggtaat 8940

aatcttaatg gattgtggtt gggtgactcc atctactgtc cacgtcatgt gttaggtaag 9000

tttagtggtg accaatgggg tgatgtactt aatcttgcta ataattatga gtttgaagta 9060

gtaactggaa atggtgttac tttgagtgtt gtcagtaggc gtttgaaagg tgcagtttta 9120

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gttactatgc gttctaatgg aactattaga gcatcttttc ttgctggagc atgtggttca 9300

gtaggtttta atatagaaaa gggtgtagta aatttttact acatgcacca tctagagtta 9360

cctaatgcat tacacacagg aactgactta atgggtgagt tttatggtgg ttatatagat 9420

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ctttatgcag caattattag tgttagagag agtagttttt caacaccaaa atggcttgaa 9540

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ttacagtctt ctgttgtaaa gaaagctgca tcttggtttt ggagtaggtg tgtgctagct 9840

tgctttttat ttgtcttgtg ttctattgtg ctgttcacag ctttaccata tagatattat 9900

ttacatggcg ctgctgtttt atttgcagct gtgctcttta tttcatttac tgtgaaacat 9960

gttatggcat ttatggacac tttcctcttg ccaacattga ttacagttat tattggagtt 10020

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caatggtatg acccagtagt ttttgacact gtagtaccgt ggatgtttct accattagtc 10140

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ttggctaatg ttagtagtaa ttctttaatt ggtttaattg tgtttaaatt tgctaagtgg 10380

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aagttggata gcatggctga acgtgctatg acaactatgt ataaggaagc gcgtgttact 11160

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tacggggtag cagtgaggct cggctgatac cccttgctaa tggttgtgaa cctgatgttg 12420

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tagataacca ggacctcaat ggcaaatttt atgattttgg tgactttcag aaaacagcac 13020

ctggtgctgg tgttcctgtt tttgatacat attattccta catgatgccc atcatagcca 13080

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gtaatttatg tagaaaagtg tttgttgatg gtgtaccatt tatagctact tgtggctatc 13380

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atgatggaaa gtttgttgca aacaacccag aatcacgcga gtgcttcaag gttgtagtta 16560

ataatggtaa ttctgatgta ggtcatgaga gtggttcagc ctacaacaca acacaattgg 16620

aatttgtgaa agattttgtt tgtcgcaata aacaatggcg agaagcaaca ttcatttcac 16680

cttataatgc aatgaaccag agagcctatc gcatgcttgg acttaatgtc cagacggtag 16740

actcttcaca aggttcagag tatgattatg ttatattctg tgtcacagct gattctcagc 16800

atgcattgaa cattaacaga tttaatgttg cgcttacaag agctaagcgt ggtatacttg 16860

tagtcatgcg ccagcgtgac gaattgtatt cggctcttaa atttacagag ctagattctg 16920

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ttgtagtcac acctgagggt cttattgata catcaatagg caataatttt gagcctgtga 17340

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agccttggca tgttataaga ccaaggatag ttcagatgtt agcagacaat ctatgcaatg 17460

tttcagattg tgtagtgttt gtcacatggt gtcatggcct agaactaact actttgcgct 17520

attttgttaa aataggcaag gaacaagttt gttcttgtgg ttctagagct acgaccttta 17580

attctcatac tcaggcttat gcttgttgga agcactgctt gggttttgac tttgtttata 17640

atccactttt agtggacatt caacagtggg gttactctgg taacctgcaa tttaatcatg 17700

atttgcattg taatgtgcat ggccatgctc atgtagcttc agctgatgct attatgactc 17760

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taaaatgcgt tagacgtggg gatgtcaatt ttaggtttta tgataagaac ccaatcgtac 18000

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atttttcagc actccagtct attgacaata ttgcttataa tatgtataag ggtgggcatt 18540

acgatgctat tgcaggcgaa atgcccacag tcataactgg agataaagtt tttgttattg 18600

atcaaggtat tgaaaaggca gtttttgtta atcaaacaac tctgcctaca tcagttgcat 18660

ttgagttgta tgcgaagaga aacattcgca cactgccaaa taacagaata ttgagtggtt 18720

taggtgtaga cgtcacccat ggttttgtaa tatgggacta cgctaatcaa acgccactgt 18780

atcgtaatac tgttaaagta tgtgcatata cagacattga acctaatggt ttagtagttc 18840

tgtatgatga tagatgcggt gattatcaat cttttcttgc tgctgataat gctgttttag 18900

tgtctacaca gtgttataag cggtatcctt atgtagaaat accatcaaat ctgcttgttc 18960

agaatggtat gccactaaaa gatggagcga acctgtatgt ttataagagg agtaatggag 19020

cgtttgtaac gctaccaacc acattaaaca cacagggtgg taattatgaa acttttgaac 19080

ctcgtagtga tgttgagaga gattttcttg acatgtcaga ggacgatttt attgaaaagt 19140

atggtaagga cgtaggtcta caacacgtac tttatggtga agtagaaaaa ccacaattgg 19200

gtggtttaca cactgttata ggaatgtaca gactcttgcg tgctgataaa ttagacgcga 19260

agtctgtaac taattcagat tctgatgtca tgcaaaatta ttttgttttg gcagacaatg 19320

gttcttataa acaggtttgc acagttgtag accttttgct tgatgacttc ttagaactcc 19380

ttaggaacat acttaaagag tatggtacta ataagtctaa agttgtaaca gtgtcaattg 19440

attaccatag cataaatttt atgacatggt ttgataatgg cagtattaaa acatgttacc 19500

cacagctaca gtcagcgtgg acgtgtggtt ataatatgcc tgaactttat aaagttcaga 19560

attgtgttat ggaaccttgc aacattccaa actatggtgt tggaataacg ttgcctagtg 19620

gtattatgat gaatgtggca aaatatacac aactttgtca atatctttct aaaactacaa 19680

tgtgtgtgcc gcataacatg cgtgtaatgc actttggagc tggtagtgat aagggagttg 19740

cacctggtag cactgttctt aaacattggt tacccgaagg aactctccta gttgataacg 19800

atattgttga ttacgtatct gatgcacacg tttctgtctt ttcagattgt aataaatata 19860

agacagagca caagtttgat cttgtgatat ctgatatgta tacagataat gattcaaaga 19920

agaaacatga gggcatagta gccaataatg gcaatgacga tgtcttcatt tatctagcta 19980

attttttaaa gaataactta gctcttggtg gtagttttgc cattaaagtt acagagacaa 20040

gttggcatga aagtttgtat gacattgcac aggattgtgc gtggtggaca atgttttgta 20100

cagcagtaaa tgcttcttct tctgaagcat ttttactggg gattaattat ttgggtgcaa 20160

gtgctaatgt gaaagttagt ggaaaaacac tgcacgcaaa ttatatattt tggcggaatt 20220

gtaattattt acaaacctct gcttatagta catttgacgt tgctaagttt ggattaaaac 20280

taaaagcaac gccagttgta aatttgaaaa ctgaacaaaa gactgactta gttgttaatc 20340

tactaaggaa cggcaagtta ttgattagag atgttgggga agtcactgtt tttagtgacc 20400

attttgtgtg cactatgtag tgcaaatttg tttgattttg ccaataatta tgtgtactac 20460

taccaaagtg cctttaggcc tccaaatgga tggcatttgc aagggggtgc ttatgcagta 20520

gtgaattcta ctaattatac tagtaatgcc ggttctgcaa gtgggtgcac tgttggtatt 20580

attaaggacg tctataatca aagtgcggct tccatagcta tgacagcacc ttctcagggt 20640

atggcttggt ctaagtcaca attttgtagt gcacactgta acttttctga aattacagtt 20700

ttcgtcacac attgttatag tagtggtaca gggtcttgcc ctataacagg catgattgca 20760

cgtgatcata ttcgtatttc tgcaatgaaa aatggttctt tattttataa cttaacagtt 20820

agcgtatcta aatactctat gtttaagtct tttcaatgtg ttaacaacct cacatctgtt 20880

tatctaaatg gtgatcttgt ttttacttcc aacaaaacta ctgatgttac gtcagcaggt 20940

gtgtatttta aagcaggtgg acctgtatat tatagtgtta tgaaagaatt taaggttctt 21000

gcttattttg ttaatggtac agcacaagat gtaattttgt gtgacaagtc ccccaagggt 21060

ttgctagctt gtcaatataa cactggcaat ttttcagatg gcttttatcc ttttactaat 21120

actactttag ttagggaaaa gttcatcgta tatcgtgaaa gtagtgttaa tactactctg 21180

gcgttaacta atttcacttt tactaatgta agtaatgcac agcctaatag tggtggtgtt 21240

aatacttttc atttatatca aacacaaaca gctcagagtg gttattataa ttttaatttg 21300

tcatttctga gtcagtttgt gtataaggca agtgatttta tgtatgggtc ttatcatcct 21360

aggtgttctt ttagaccaga aaccattaat aatggtttgt ggtttaattc cttgtcagtt 21420

tctcttactt atggacccct acagggaggg tgtaagcaat ctgtttttag tggtaaggca 21480

acgtgttgtt atgcctactc ttataatggc cctagagtat gtaaaggtgt ttattcaggt 21540

gaattaagca agacttttga atgtggattg ctggtttatg ttactaagag tgatggctct 21600

cgtatacaaa ctagaacgga gcccttagta ttaatgcaac acaattataa taatattact 21660

ttagataagt gtgttaacta taatatatat ggcagagtgg gccaaggttt tattactaat 21720

gtgactgatt ctgctgctaa ttttagttat ttagcagatg gtgggttagc tattttagac 21780

acttcgggtg ccatagatgt ttttgttgta cagggcagct atggtcctaa ttattacaag 21840

gtcaatcctt gtgaagatgt taacaaacag tttgtagtgt ctggtggcaa tatagttggc 21900

attcttactt ctagaaatga aacaggttct gaacaggttg agaaccagtt ttatgttaag 21960

ttaaccaata gctcacatcg tcgcaggcgt tctattggcc aaaatgtaac aagttgctct 22020

tatgttagtt atggcagatt ttgtattgaa ccagatggtt cgttaaagct gatagtgcca 22080

gaagaattga agcagtttgt ggcaccttta cttaatatta ctgaaagtgt actcatacct 22140

aacagtttta atttgactgt tacagatgag tacatacaaa cacgtatgga taaggtccaa 22200

atcaattgcc ttcaatatgt ttgcggcaat tctttggagt gtagaaaatt gtttcaacaa 22260

tatggtccgg tttgtgataa catattgtct gttgtaaata gtgttggtca aaaagaagat 22320

atggaacttt taagtttcta ttcttctact aaaccagctg gttataatgc acctgtcttt 22380

agtaatatta gtactggtga ttttaatatc tctcttttat taacaccacc tagcagtcct 22440

agtggtcgtt cttttataga agatttgtta tttacaagtg ttgaaacagt tggtttgcca 22500

actgatgctg aatataaaaa atgcacagca ggacctttag gtactcttaa ggatcttatc 22560

tgtgctaggg aatataatgg tttattagtg ttgcctccaa ttattacggc ggatatgcaa 22620

acaatgtata ctgcttcttt agttggtgcc atggcttttg gtggtattac agcagcaggt 22680

gccataccat ttgcaactca gatacaagct agaattaatc atttgggtat tacacagtct 22740

ctgttattga aaaatcaaga gaaaattgca gcttccttta ataaggccat tggtcatatg 22800

caggaaggtt ttagaagcac ttcgctagca ttacaacagg ttcaagacgt tgttaataag 22860

cagagtgcta ttcttactga aactatgaat tctcttaata agaattttgg tgctatttca 22920

tcagtaattc aagacattta tgcgcaactt gatgcaattc aagcagatgc acaagtagac 22980

cgtcttatta ctggcagact ctcttctctc tctgtgctag cctctgctaa gcaatctgag 23040

tacatcagag tttcccaaca acgtgaatta gccactcaaa aaattaatga gtgtgttaaa 23100

tcacaatcta ataggtatgg tttttgtggt agtggaagac atgttctttc gataccacaa 23160

aatgcaccta atggtatagt gtttatacac tttagttaca ctccagagag ttttgttaat 23220

gttactgcaa tagtaggttt ttgtgtacag cctgctaatg ctagtcagta tgcaatagtg 23280

cctgttaatg gtagaggtat ttttatacaa gttaatggta gttactatgt cactgcacgt 23340

gatatgtata tgcctagaga tattactgca ggagatgtag ttattcttac ttcttgtcaa 23400

gcaaattatg ttaatgtaaa taaaaccgtc attactacat ttgtggaaga tgacgatttt 23460

gattttgatg atgagttgtc gaaatggtgg aatgatacta agcatgagct accagacttt 23520

gacgacttca attatacagt acccatactt aatattagtg gtgaaattga tcatattcaa 23580

ggtgttatac agggtcttaa tgattccctt ataaaccttg aagaactttc aatacttaaa 23640

acttatatta agtggccttg gtatgtttgg ctagccatag gctttgctat tattattttt 23700

atccttattt taggatgggt gtttttcatg acaggttgtt gtggttgttg ttgtggatgc 23760

tttggtatca ttcctctaat gagtaagtgt ggtaagaaat catcttatta cacgactttt 23820

gataatgatg tggtgactga acaatacaga cctaaaaagt ctgtttaatg gttcaaactc 23880

ccgcgtcttt tgtaatatta ttaatttttc tttggtttaa acttgcatta agttgtttta 23940

gtgagtgcat tgtagcactt caacatctaa tacaagttct actcctaatt attaataata 24000

atttacaatc taggctgctc ctttggcaca gcctagacta atgttagatt ttgagaaaac 24060

aattgaaaca ggtgaacagt tagtacaaca aatcagtttc aatttacaac atatttcaag 24120

tgttctagaa gcacaaatat ttgacccatt tgagtgttgc tattattcaa gtggtagttt 24180

ttatgaaata gagtcagctg acgattgttc aggtgatgaa ttttattaat aaatcgctag 24240

aagagaacgg cagttttcta acagcccttt atatatttgt agcatttgta gcactttatc 24300

tcttaggtag agcactacaa gcttttgtac aagcagctga tgcttgttgt ttattttggt 24360

atacatgggt agtagtcccg ggagctaagg gcactgcatt tgtgtataaa catacatatg 24420

gtagaaaact taacaatccg gagttagaac acgttattgt taacgagttc ccgaagaacg 24480

gttggaataa taaaagtata ccaaattttc aagatgtcca acgagacaaa ttgcaccctt 24540

gattctgagc aggctattct gctcttcaag gaatataatc tatttataac cgcattccta 24600

ctgtttataa ctatactact tcagtatgga tacgcaacta ggagtcggct tatttacata 24660

ctgaaaatga tagtgttatg gtgtttctgg ccccttaaca ttgcagtagg tgtaatttca 24720

tgtatatacc caccaaatac aggaggcctt gtagccgcga taatactcac tgtgtttgcg 24780

tgtttttctt ttataggtta ttggattcag agcattagac tctttaagcg gtgtagatct 24840

tggtggtctt ttaaccccga gagcaatgcc gtaggttcaa tactcctaac aaatggtcaa 24900

caatgtaatt ttgctataga gagtgtgcca atggtacttt ctcctattat aaagaatggt 24960

gctctttatt gtgagggtca gtggctcgct aaatgtgaac cagaccactt gcctaaagac 25020

atttttgtgt gtacaccaga tagacgcaac atttaccgta tggtgcagaa atatactggt 25080

gaccaaagcg gaaataagaa aaggtttgct acatttgtct atgcaaagca gtcagtagac 25140

actggcgagc tagaaagtgt agcaacagga ggaagtagtc tttacacata aatgtgtgtg 25200

tgtagagagt atttaaaatt actttttgat agtgcctcta ttttaagagc acataagagt 25260

attcattttg aggatttcaa cataaatcca ctttgtttca tactctcttt tcaagagtta 25320

ttatttaaaa aacagttttt ccactctttt gtgccaaaaa ctgttgttgt taatggtgta 25380

gccttccaag tagataatgg aaaagtctac tatgaaggaa acctcatttt tcagaaaggt 25440

tgttgcaggt tatggtccag tattaaaggc gtttggattt acaagcgctt aagagaaaca 25500

aatacggaat gaaatggttg tctagtttag gacgagcgtt cacttcctgt tataaagccc 25560

tactattaac tcaattaaga gttttagata ggttaattct agatcacgga ccgaggcgta 25620

ctttaagttg tgccaggcgc gtgcttttat tccaattaga tttagtttat aggttggtat 25680

atacgcccga ccaatcgctg gtatgaataa tagtaaagat aatccttttc gcggagcaat 25740

agcaagaaaa gcgcgaattt atctgagagg aggattagat tgtgtttact ttcttaacaa 25800

agcaggacaa gcagagcctt gtcccgcgtg cacatcacta gtattccaag ggaaaacttg 25860

tgaggagcac atagataata acgacttgct atcatggcaa gcggtaaggc atctggaaag 25920

tcagactcac ccgcgccaat catcaaacta ggagggccta aaccaccaaa ggtagggtca 25980

tctggaaatg catcttggtt tcaagcctta aaggccaaga aactaaatgc acctgcacct 26040

aagtttgaag gtagtggtgt tcctgataat gaaaatttaa aaaatagcca gcagcatgga 26100

tactggagac gccaagccag gtataagcca ggtaaaggtg gaagaaaacc agtcccagat 26160

gcgtggtatt tctattacac tggaacagga ccagccgctg acctgaattg gggtgattct 26220

caggatggta tagtgtgggt tgctgctaag ggtgctgatg taaaatccag atctaatcag 26280

ggtacaagag atcctgataa gtttgaccaa tatccactac gattttcgga tgggggacct 26340

gacggtaatt tccgttggga tttcattcct ctgaatcgtg gtaggagtgg gaggtcgact 26400

gcagcgtcat cagcagcatc tagtagagta ccatctcgtg aaggttcacg tggtcgtagg 26460

agtggagctg aagatgatct cattgctcgc gcggcaaaga ttattcagga ccagcaaagg 26520

aagggtacgc gtattacaaa gcaaaaggca gatgaaatgg ctcatcgcag attttgtaag 26580

cgcactattc caccaggtta tagagtagat caagtctttg gccctcgtac taaaggtaag 26640

gagggaaatt ttggtgatga caagatgaat gaggaaggta ttaaggatgg gcgtgttacg 26700

gcaatgctca accttacacc tagcccgcat gcttgtcttt ttggtagcca agtgacacct 26760

aagcttcaac ctgatggtct tcacttgact tttagattta ctactgtggt gccacgtgat 26820

gacccgcagt ttgataatta tgtaaagatt tgtgatgagt gtgttgatgg tgtaggaaca 26880

cgtccaaaag atgaagttgt aagaccaaaa tcacgctcaa gttcaagacc tgctacaaga 26940

ggaaattctc cggcgccaag acaacagcgt cctaaaaagg agaaaaagcc gaagaagcag 27000

gatgatgaag tggataaagc attgacctca gatgaggaga ggaacaatgc acagctggaa 27060

tttgatgatg aacccaaagt gattaattgg ggtgattcag cacttggtga aaatgaactt 27120

tgagtaacat aatggacttg ctacatttta tgtggcattg ctgttgtcat tattttgttg 27180

cttttctctc aatcattatg ggttttgatt gtgattatgt gcaatatctt agttggtttc 27240

ccttgttgat tgcagtctgc tttctttctg tgcttattgt ttttattctg ctttattctc 27300

ttttatatcg tagaagttta ttaaaggtta aggaagatag gcatgtagct tgattaccta 27360

catgtctatc gccagggaaa tgtctaatct gtctacttag tagcctggaa acgaacggta 27420

gacccttaga ttttaattta gtttaatttt tagtttagtt taagttagtt tagagtaggt 27480

ataaagaagc cagtgccggg gccacgcgga gtacgatcga gggtacagca ctaggacgcc 27540

cactagggga agagctaaat tttagtttaa gttaagttta attggctaag tatagttaaa 27600

atttataggc tagtatagag ttagagcaaa aaaaaaaaaa aa 27642

Claims (6)

1.一种QX型鸡传染性支气管炎病毒毒株，其特征在于，保藏编号为CGMCC No.17487。

2.根据权利要求1所述毒株，其特征在于，全基因组序列如SEQ ID NO:1所示。

3.根据权利要求2所述毒株，其特征在于，所述全基因组序列具有典型的IBV基因组编码结构特征，具体为5’-UTR－1a－1b－S－3a－3b－E－M－ORFX－5a－5b－N－UTR-3’。

4.根据权利要求1所述毒株，其特征在于，所述毒株为QX型IBV。

5.权利要求1-4任意一项所述毒株在制备鸡传染性支气管炎疫苗中的应用。

6.权利要求1-4任意一项所述毒株在疫苗评价和/或制备疫苗评价的检验产品中的应用。