CN109504653A - 一种qx型ibv的细胞适应株mj及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种QX型IBV的细胞适应株MJ及其应用，属于鸡传染性支气管炎病毒技术领域。所述细胞适应株MJ的保藏编号为CGMCC No.14681。试验表明，所述Vero细胞适应株MJ接种单层Vero细胞后收获细胞毒液的TCID₅₀达到10^6.5/mL以上；MJ株对SPF雏鸡不具有致病性，病毒在鸡体内连续传代5个代次以上，病毒的毒力没有返强；采用MJ株接种Vero细胞后收获的细胞毒免疫SPF雏鸡后，机体特异性抗体水平升高，对同型强毒的攻击提供良好的保护。利用本发明所述Vero细胞适应株MJ可大量制备QX型鸡传染性支气管炎病毒，适宜大规模工业化生产；还可应用于QX型鸡传染性支气管炎疫苗的制备。

Description

一种QX型IBV的细胞适应株MJ及其应用

技术领域

本发明涉及鸡传染性支气管炎病毒技术领域，具体涉及一种QX型IBV的细胞适应株MJ及其应用。

背景技术

鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis,IB)，为国际兽医局规定的家禽二类传染病之一，是由传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)引起的一种急性、高度接触性传染病，对养鸡业造成严重的经济损失，严重制约着中国养禽业乃至国民经济的发展。根据IBV分离株的主要免疫保护基因(S1基因)序列，通过遗传进化分析确定毒株的基因型。研究表明，目前在中国鸡群中流行的IBV以QX基因型为代表的毒株为主，而经典的H120疫苗株等商品化疫苗已不能完全控制其流行，往往造成免疫失败，研制安全、高效的新型疫苗成为国内外发展的必然趋势。

IBV的宿主范围窄，较难适应细胞培养，病毒主要使用鸡胚培养制备。国内鸡传染性支气管炎疫苗的生产主要依靠传统的“鸡胚法”工艺，它的缺点是鸡胚用量大，劳动强度大，去除杂蛋白的工艺复杂。随着动物细胞无血清培养技术的不断进步，为包括Vero细胞在内的动物细胞大规模无血清培养技术的应用提供了必要的技术支撑，新的疫苗生产工艺不仅可以批量生产疫苗，提高产能，而且可以控制到只包含几种无害物质，从而显著提高抗原的纯净度，成为包括疫苗在内的生物技术药物生产的总趋势。因此建立鸡传染性支气管炎病毒的传代细胞培养技术就显得尤为关键。

申请号为CN201310196897.5的中国发明专利公开了一种适于细胞培养的嵌合IBVH120S1基因膜外区的重组病毒及其构建方法和应用，申请号为CN201310573277.9的中国发明专利公开了一种嵌合IBV4/91株纤突蛋白膜外区基因片段的重组传染性支气管炎病毒及其构建方法和应用，以及申请号为201610502330.X的发明公开了一种基于反向遗传技术构建禽传染性支气管炎病毒(IBV)H120反向遗传株R-H120。它们的共同之处均是以IBV的Vero细胞适应株Beaudette毒株为基础，借助反向遗传技术构建适应细胞培养的重组病毒株。Beaudette毒株分离自20世纪的英国，是目前国内外公开报道的唯一一株能在Vero细胞上培养的毒株，其主要作为研究用的标准毒株而被国内外科研人员广泛使用。该毒株与国内目前流行的QX型IBV毒株差异较大，属于不同的基因型。由于Beaudette毒株Vero细胞适应株的传代次数较多，其本身的免疫原性基本丧失，不能作为疫苗株使用，但可以借助反向遗传操作技术，通过替换其中的主要免疫原性基因S1来构建具有免疫原性的重组疫苗株。通过这种途径获得的细胞适应株非天然毒株，在生物安全上存在隐患。

因此，国内外缺少能在Vero细胞上培养的IBV，特别是缺少针对国内主要流行的QX型毒株的Vero细胞适应株。

发明内容

有鉴于此，本发明为了解决缺少一种能够适宜Vero细胞培养、安全的QX型IBV毒株，提供了一种Vero细胞适应株MJ，可在Vero细胞中快速增殖的QX型鸡传染性支气管炎病毒Vero细胞适应株，能替代鸡胚快速生产鸡传染性支气管炎病毒，其对SPF雏鸡无致病性，安全可靠。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种QX型IBV的Vero细胞适应株MJ，保藏编号为CGMCC No.14681。

优选的，所述Vero细胞适应株MJ的全基因序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明还提供了上述技术方案所述QX型IBV的Vero细胞适应株MJ在制备QX型IBV病毒中的应用。

优选的，所述Vero细胞适应株MJ接种在Vero细胞上培养，培养液分离得到QX型IBV病毒。

本发明还提供了前述技术方案所述QX型IBV的Vero细胞适应株MJ在制备鸡传染性支气管炎疫苗中的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果：

一种QX型IBV的Vero细胞适应株MJ，保藏编号为CGMCC No.14681。本发明通过TCID₅₀、病毒生长曲线、对1日龄SPF雏鸡的致病力试验和毒力返强试验等测定MJ株的细胞培养特性及其致病性；通过接种SPF雏鸡和攻毒保护试验来测定MJ株的免疫原性。试验结果表明，所述Vero细胞适应株MJ，接种单层Vero细胞后收获的细胞毒液，其TCID₅₀达到10^6.5/mL以上；MJ株对SPF雏鸡不具有致病性，病毒在鸡体内连续传代5个代次以上，病毒的毒力没有返强；采用MJ株接种Vero细胞后收获的细胞毒免疫SPF雏鸡后，机体的特异性抗体水平升高，对同型强毒的攻击提供良好的保护。利用本发明所述Vero细胞适应株MJ可大量制备得到QX型鸡传染性支气管炎病毒，适宜大规模工业化生产；同时，本发明所述Vero细胞适应株MJ对SPF雏鸡无致病性，生物安全性高，可应用于QX型鸡传染性支气管炎疫苗的制备。

生物材料保藏信息

QX型鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的细胞适应株MJ，于2017年8月31日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC，中国，北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所)，其保藏编号为CGMCC No.14681，分类命名为传染性支气管炎病毒，拉丁文名称为InfectiousBronchitis Virus。

IBYZ分离株于2017年8月31日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC，中国，北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所)，其保藏编号为CGMCC No.14682，分类命名为传染性支气管炎病毒，拉丁文名称为InfectiousBronchitis Virus。

附图说明

图1为本发明实施例1中MJ株亲本毒株IBYZ分离株的动物回归试验结果，其中A为正常肾脏，B为IBYZ分离株感染鸡后引起肾脏的典型病变；

图2为本发明实施例2中MJ株接种单层Vero细胞后24h、48h以及72h观察到的细胞病变情况；

图3为本发明实施例2中MJ株接种单层Vero细胞后间接免疫荧光检测结果，同时以其亲本毒株IBYZ作为对照；

图4为本发明实施例2中MJ株接种单层Vero细胞后的生长曲线；

图5为本发明实施例2中MJ株全基因组分段RT-PCR扩增产物的电泳检测结果；其中泳道M为标准分子量Marker DL5000，1～18依次表示基因组分段扩增产物M1～M18；

图6为本发明实施例3中MJ株对SPF雏鸡气管和肾脏组织的安全性检测时病理切片结果，同时设立PBS和IBYZ分离株最为对照；

图7为本发明实施例4中MJ株的免疫原性检测结果，同时设立PBS、H120和IBYZ作为对照；图中每个时间段内的柱状图依次表示H120、IBY2、MJ以及PBS组；

图8为本发明实施例4中MJ株的攻毒保护试验结果，同时设立PBS和H120作为对照。

具体实施方式

本发明提供了一种QX型IBV的Vero细胞适应株MJ，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14681。优选的，本发明所述Vero细胞适应株MJ的全基因组序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明所述Vero细胞适应株MJ是以IBYZ分离株为母本毒株培养并分离得到的，所述IBYZ分离株的保藏编号为CGMCC No.14682。具体来说，IBYZ分离株是本发明的发明人在2011年从某鸡场发病鸡的肾脏中分离得到的，通过对IBYZ分离株的主要免疫保护基因(S1基因)进行序列测定及分析，表明IBYZ分离株为QX基因型。本发明以IBYZ分离株为母本毒株，将其接种在9～11日龄的SPF鸡胚尿囊腔进行传代培养，收获36～48小时的尿囊液毒再次接种鸡胚，这样连续传代60～100代后，将收获的尿囊液毒接种单层Vero细胞，37℃培养72小时后，反复冻融2～3次后，收获病毒液再次接种单层Vero细胞。在本发明中，所述传代次数优选为100代；在本发明中，所述冻融中，冷冻温度为-20℃，融解温度为37℃。将病毒液在Vero细胞中连续传代，直至出现典型的合胞体细胞病变，最终获得能够在Vero细胞上高效增殖的适应株，将其命名为QX型鸡传染性支气管炎病毒Vero细胞适应株MJ。

本发明测定了QX型鸡传染性支气管炎病毒Vero细胞适应株MJ的全基因组序列，通过生物信息学比对分析，发现该毒株与母本毒株IBYZ分离株相比，在基因组水平上均有不同程度的变异，其中S2基因的变异较大，存在8个位点的突变，分别为22111位(C-T)、22219位(G-A)、22439位(C-G)、22444位(G-C)、22453位(T-C)、22807位(G-A)、22859位(A-G)和23393位(C-T)；S1基因上存在4个位点的突变，分别为20729位(G-A)、20783位(C-T)、21095位(C-T)和21243(T-C)；除此之外，MJ株的其它位置也发生了突变，分别为3332位(A-T)、4595位(G-T)、5022位(C-T)、7759位(A-G)、19063位(A-G)、24139位(A-G)、24276位(T-C)、24423位(A-G)、24607位(A-G)、24828位(G-A)、24858位(C-T)、25044位(A-C)和26166位(A-T)。上述括号中的内容表示由IBYZ分离株突变为MJ株该位点的碱基。

在本发明中，如图2所示，MJ株接种单层Vero细胞后24h，可见部分细胞融合成较小的合胞体，胞浆内可见多个细胞核聚集的现象；病毒接种后48h，可见大量的细胞聚集成连续的合胞体，可见大量的细胞核聚集现象；病毒接种后72h，大部分病变细胞脱落。

本发明的具体实施例表明，母本毒株IBYZ分离株、IBYZ分离株的120代鸡胚传代毒YZ120株以及本发明所述MJ株分别侵染Vero细胞后，IBYZ分离株及120代鸡胚传代毒YZ120株均不能在Vero细胞中增殖，而本发明所述MJ株则可以在Vero细胞中大量增殖。可见，本发明提供的MJ株适宜在Vero中大量增殖，可批量获得鸡传染性支气管炎病毒，实现大规模工业化生产。

本发明还提供了上述技术方案所述QX型IBV的Vero细胞适应株MJ在制备QX型IBV病毒中的应用。本发明的具体实施例显示，MJ株的病毒半数组织细胞感染量(TCID₅₀)达到10^6.5/mL，产率高，并且工艺简单，有利于大规模工业化制备QX型IBV病毒。

具体的，本发明将所述Vero细胞适应株MJ接种在Vero细胞上培养，培养液分离得到QX型IBV病毒。本发明优选的，所述培养优选的采用无血清细胞培养基，更优选为无血清的DMEM培养基。

本发明优选的按照0.5×10⁷～2×10⁷病毒拷贝数/瓶接种Vero细胞，以无血清DMEM培养基进行培养，收集培养的上清液，上清液中即含有本发明所述Vero细胞适应株MJ。在本发明中，所述培养温度优选为35～38℃，更优选为37℃；所述培养时间优选为32～40h，更优选为36h。在本发明中，所述收集上清液的方法优选为离心分离，所述离心速率优选为2600～3000g、更优选为2850g，所述离心时间优选为8～15min、更优选为10min。

本发明还提供了前述技术方案所述QX型IBV的Vero细胞适应株MJ在制备鸡传染性支气管炎疫苗中的应用。本发明的具体实施例表明，本发明提供的Vero细胞适应株MJ对SPF雏鸡安全可靠，MJ株在SPF鸡体模拟自然感染传播5代后，依然保持低毒力的特性，毒力未返强。MJ株对SPF雏鸡不具有致病性，具有安全性高的特点。利用本发明所述Vero细胞适应株MJ制备的疫苗可有效抵抗IBYZ强毒株的感染，抗感染保护率要显著高于现有疫苗株。

具体的，本发明将Vero细胞适应株MJ灭活得到鸡传染性支气管炎疫苗，本发明对具体灭活方式无特殊限定，采用本领域已知方式即可。

下面结合实施例对本发明的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定

1病毒分离

病料来自江苏省某规模化养殖场，无菌采集病死鸡的肾脏组织剪碎并研磨，按照1:5(v/v)加入双抗含量为1000IU/mL的灭菌生理盐水，5000r/min离心5min，取上清经尿囊腔接种4枚11日龄的SPF鸡胚，0.2mL/枚，置37℃孵育48h；弃去24h内死亡鸡胚，收取24h～48h鸡胚尿囊液作为传代毒种，命名为IBYZ分离株，置于-20℃保存。

2病毒的鉴定

1)致鸡胚矮小化试验

将分离的IBYZ分离株尿囊毒用PBS进行1∶100倍稀释后，接种于5枚11日龄SPF鸡胚尿囊腔内，0.2mL/枚，置37℃孵化至144h，观察鸡胚的变化。结果接种鸡胚出现特征性的变化：羊膜增厚，紧贴胚体，胚体比同日龄正常鸡胚矮小，蜷曲，又称“侏儒胚”。

2)病毒EID₅₀的测定

将分离的IBYZ分离株尿囊毒用PBS进行连续10倍稀释至10^-8。每个稀释度的病毒液经尿囊腔接种10日龄SPF鸡胚5枚，0.1mL/胚。鸡胚接种后置37℃孵化，弃24h内死亡胚，以后每隔12h观察1次，及时观察胚体发育和死亡情况。观察记录至接毒后第6天，按Reed～Muench二氏法计算病毒的EID₅₀。结果表明IBYZ分离株的EID₅₀为10^6.83/0.1mL。

3)动物回归试验

将分离的IBYZ分离株尿囊毒，采用PBS稀释至EID₅₀为10^5.0/0.1mL，接种1日龄的SPF雏鸡10只，0.1mL/只，接种后观察并记录雏鸡的发病和死亡情况，同时设立阴性对照组SPF雏鸡5只。结果接种后第3天雏鸡出现明显的呼吸道症状，在第4天出现死亡，至第12天死亡率达到50％。病死鸡经剖检，主要病变为肾脏肿大、苍白，输卵管和肾小管扩张，沉积大量的尿酸盐，整个肾脏外形呈斑驳的白色网线状，俗称“花斑肾”(图1)。

实施例2 QX型鸡传染性支气管炎病毒Vero细胞适应株MJ株的培育

1 IBYZ分离株的鸡胚连续传代培养

将IBYZ分离株尿囊毒接种于9～11日龄的4枚SPF鸡胚尿囊腔进行传代培养，0.2mL/枚，置37℃孵育48h；弃去24h内死亡鸡胚，收取24h～48h鸡胚尿囊液作为传代毒种。将收获的尿囊液毒再次接种鸡胚，重复上述过程，连续传代60～100代。

2 Vero细胞传代适应

将收获的IBYZ分离株60代尿囊毒液，接种单层Vero细胞后，置于37℃的CO₂培养箱中培养72h后，放入冰箱冻融3次，收获病毒液再次接种单层Vero细胞。将病毒液在Vero细胞中连续传代，直至出现典型的合胞体细胞病变，最终获得能够在Vero细胞上高效增殖的适应株，将其命名为QX型鸡传染性支气管炎病毒Vero细胞适应株MJ。

3 MJ株感染Vero细胞的病变检测

将MJ株细胞毒接种单层Vero细胞，50μL/孔，吸附1h后，PBS清洗，加入0.5％FBS的DMEM细胞维持液，分别于24、48以及72h观察细胞病变情况。MJ株接种单层Vero细胞后24h，可见部分细胞融合成较小的合胞体，胞浆内可见多个细胞核聚集的现象；病毒接种后48h，可见大量的细胞聚集成连续的合胞体，可见大量的细胞核聚集现象；病毒接种后72h，大部分病变细胞脱落(图2)。

4 MJ株感染细胞的间接免疫荧光检测

将MJ株细胞毒接种单层Vero细胞，同时以其亲本毒株IBYZ分离株作为对照。病毒吸附1h后，PBS清洗，加入0.5％FBS的DMEM细胞维持液。接毒36h后，采用PBS清洗细胞，进行冷甲醇固定，采用实验室制备的IBV阳性血清作为一抗，兔抗鸡IgY(IgG)FITC标记抗体(Sigma公司)作为二抗进行间接免疫荧光试验，使用DAPI染色后，通过荧光显微镜观察病毒在Vero细胞中侵入和复制情况。MJ株接种的Vero细胞可见成片分布的绿色荧光，而接种IBYZ分离株的Vero细胞未能检测到荧光(图3)。

5 MJ株生长曲线的测定

将MJ株接种单层Vero细胞，同时以其亲本毒株IBYZ分离株及其120代鸡胚传代毒YZ120株作为对照，分别在感染后12h、18h、24h、30h、36h、42h、60h及84h观察细胞病变情况，并收集200μL上清，通过荧光定量RT-PCR法对样品中的病毒含量进行测定，并绘制病毒增殖曲线。结果表明MJ株接种单层Vero后，病毒滴度在接种后60h达到最高峰，然后开始下降，其亲本毒株IBYZ分离株及其120代鸡胚传代毒YZ120株均不能再Vero细胞中增殖(图4)。

6 MJ株TCID₅₀的测定

取-20℃冰箱保存的MJ株病毒液，用无血清DMEM细胞培养液在离心管中作连续10倍稀释，从10^-1至10^-8。将稀释好的病毒接种到96孔培养板中，每一个稀释度接种1排12孔，每孔加入100μL病毒液。每孔加入50μL细胞悬液(一般每毫升100万～150万个细胞)，置于37℃5％二氧化碳培养箱培养，72h判定结果。按Reed～Muench二氏法计算病毒的TCID₅₀。结果表明MJ株的TCID₅₀达到10^6.5/mL。

7 MJ株全基因组序列的测定

根据国际基因库(GenBank)上公布的IBV全基因组序列Beaudette(NC001451)、H120(FJ807652)等经多重比较后，设计合成MJ株全基因组测序引物(表1)，RT-PCR获得18个覆盖全基因组的cDNA片段M1～M18(图5)，将18个片段分别克隆到pMD19-T载体中构建重组质粒pMDM1～pMDM18，每个片段分别筛选3个阳性克隆进行测序；分别采用5′RACE和3′RACE的方法测定基因组的末端序列。采用DNASTAR中的SeqMan软件，将测序获得的各个片段进行拼接，获取MJ株的全基因组序列(如SEQ ID NO.1所示)。通过生物信息学比对分析，发现该毒株与母本毒株IBYZ分离株相比，在基因组水平上均有不同程度的变异，其中S2基因的变异较大，存在8个位点的突变，分别为22111位(C-T)、22219位(G-A)、22439位(C-G)、22444位(G-C)、22453位(T-C)、22807位(G-A)、22859位(A-G)和23393位(C-T)。S1基因上存在4个位点的突变，分别为20729位(G-A)、20783位(C-T)、21095位(C-T)和21243(T-C)。除此之外，MJ株的其它位置也发生了突变，分别为3332位(A-T)、4595位(G-T)、5022位(C-T)、7759位(A-G)、19063位(A-G)、24139位(A-G)、24276位(T-C)、24423位(A-G)、24607位(A-G)、24828位(G-A)、24858位(C-T)、25044位(A-C)和26166位(A-T)。

表1 MJ株全基因组测序引物序列

实施例3 MJ株的安全性评价试验

1.对3日龄SPF雏鸡的致病性试验

采用剂量为10^6.5TCID50的MJ株细胞毒，通过滴鼻、点眼的途径接种10只3日龄的SPF雏鸡，同时设立PBS组和剂量为10^6.83EID₅₀的IBYZ强毒组作为阴性和阳性对照。结果表明接种IBYZ组雏鸡在第4d开始出现死亡，试验期间死亡率达到60％，而PBS组和MJ组在整个试验期间均未观察到明显的临床症状，表明MJ株对SPF雏鸡安全可靠(表2)。

表2对SPF雏鸡的致病性试验

2.毒力返强试验

采用剂量为10^6.5TCID₅₀的MJ株细胞毒，通过滴鼻、点眼的途径接种第一批7日龄的SPF雏鸡共5只，7d后将第二批7日龄SPF雏鸡5只放入同一隔离器内与免疫鸡同居7d，期间采用RT-PCR方法检测第二批鸡的感染情况；将第二批感染鸡移入新的隔离器中，放入第三批7日龄SPF雏鸡5只于同一隔离器内同居7d；如此重复至第6批鸡。将第6批共15只7日龄SPF雏鸡与第5批感染鸡同居，分别在第5d、7d和10d扑杀5只雏鸡，采集其气管和肾脏等组织用于制备病理切片。

结果所有剖检的第6批鸡均未观察到明显的组织病变。组织病理切片的检测结果也与早期对MJ株的检测结果相似，表明MJ株在SPF鸡体模拟自然感染传播5代后，依然保持低毒力的特性，毒力未返强。

3.对SPF雏鸡气管和肾脏等组织的安全性检测

采用剂量为10^6.5TCID50的MJ株细胞毒，通过滴鼻点眼的途径接种3日龄的SPF雏鸡，同时设立PBS组和IBYZ强毒组作为对照，分别在接毒后的5d、7d和10d每组扑杀5只雏鸡，采集其气管和肾脏组织用于制备病理切片。结果表明IBYZ组在接毒后第5天肾脏组织就表现明显的炎性细胞侵润现象，气管纤毛完全脱落，而MJ组与PBS对照组在病理表现上基本一致(图6)。以上结果表明MJ株对SPF雏鸡不具有致病性，具有安全性高的特点。

实施例4 MJ株的免疫效力试验

1病毒液的制备

将MJ株细胞毒接种单层Vero细胞，病毒吸附1h后，PBS清洗3次，加入无血清的DMEM细胞维持液，置于37℃的CO₂培养箱中培养48h后，收集细胞培养病毒液，测定其TCID₅₀。

2 MJ株的免疫原性测定

采用剂量为10^4.0TCID₅₀的MJ株细胞毒，以及10^4.0EID₅₀的H120疫苗株和IBYZ分离株，通过滴鼻、点眼的方式分别免疫15只1日龄的SPF雏鸡，并设立10只雏鸡作为阴性对照组。分别在接种后的7d、14d、21d和28d采集血清，通过ELISA试剂盒(IDEXX公司)测定免疫后的特异性血清抗体水平。结果IBYZ感染后的雏鸡血清中抗体上升速度最快，抗体含量最高；H120感染后，体内的抗体水平呈现稳定的上升趋势；MJ感染后，体内的抗体水平在前14d均未发生显著变化，在感染后21d抗体水平显著上升，感染后28d，抗体水平高于H120组(图7)。

3攻毒保护试验

采用剂量为10^4.0TCID₅₀的MJ株细胞毒，以及10^4.0EID₅₀的H120疫苗株，通过滴鼻、点眼的方式分别免疫10只1日龄的SPF雏鸡，并设立10只雏鸡作为阴性对照组。免疫后2周采用EID₅₀为10^5.83的IBYZ强毒株进行攻毒，通过观察雏鸡的发病情况，气管纤毛的摆动及泄殖腔棉拭子病毒的分离情况，评价MJ株的保护效果，并与H120疫苗株进行比较。结果表明MJ株能有效抵抗IBYZ强毒株的感染，抗感染保护率要显著高于H120疫苗株(图8)。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

序列表

<110> 江苏省家禽科学研究所

<120> 一种QX型IBV的细胞适应株MJ及其应用

<160> 37

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 27680

<212> DNA

<213> Infectious bronchitis virus

<400> 1

actgaaaata gatattatta tatatctatt acactagcct tgcgctagat ttccaactta 60

acaaaacgga cttaaatacc tacagctggt ccttttaggt gttccattgc agtgcacttt 120

agtgccctgg atggcacctg gccacctgtc aggttttagt tattaaataa tattgttgct 180

agtatcactg cttgttttgt tgtgtctcac tttattacat ccgttgcttg ggctacctag 240

tgccagcgtc ctgcaggcgc cgtggtcggt tcgagtgcga agaacccctg gttcatctag 300

cggtacgcgg gtgtgtggaa gtagcacttc agaggtacgt tctgttgtgt gaaatacggg 360

gtcacctccc cccacattcc tctaagggct tttgagccta gcgttgggct acgttctcgc 420

acaaggtcgg ctatacgacg gttgtagggg gtagtgccga gcaacccctg aggtgacagg 480

ttctggtggt gtttagtgag cagacataca atagacagtg acaacatggc ttcaagccta 540

aaacagggag catcttccca aaaccagagg agtgtcgttc ttgttgccaa agacattccc 600

gaccaactct gtgacgcttt gtttttctat acgtcacaca acccaaaaga ttacgctgat 660

gctttcgcct ttaggcagaa gttcgaccgt agtctcggtg ctgggaaaca gtttaaattt 720

gaaactgtgt gtggtccatt ctttttgaag ggagtggaca aaataacacc aggagtccca 780

gccaaagtta taaaagccac ttcaaagttg gctgacttag aagacatctt tggtgtctca 840

cctcttgcac ggaaataccg tgaactcttg aaaacagcat gtcagtggtc tcttactgta 900

gaagcgctgg atgctcgtgc acaaactctt gaagaaatct ttgaaccaac tgaaatattt 960

tggcttcaag tggctgcaaa ggttcaggtt tcagccatgg caatgcgcag acttgttggt 1020

gaggttactg caaaagtcat ggactcactt ggctcaaatt tgagcgctct attccaagtt 1080

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gttgttgtcc gtggcatgcg aaatgactta actctgcttg accaaaaagc tgaagttcct 1500

gtggaatcag aaggttggtc tgcaattttg gagggacatc tttgctatgt ctttaagagt 1560

ggtgatcgct tttatgcggc acctctttca ggaaattttg cattgcatga tgtgcattgc 1620

tgcgagcgtg tagtctgtct gtctgatggt gtaacaccgg agataaatga tgggcttgtc 1680

cttgctgcaa tttactcatc ttttagtgtt tcggaacttg tggcagcact taaaaaaggt 1740

gaaccattca agttcttggg gcacaaattt gtttatgcga aggaagcggc agtttctttc 1800

accttggcaa aagcagcaac cattggagat gtcctgaagc tgtttcaatc agcaagagta 1860

aagacgaaag atgtgtggtc tgcacttact gaacagtctt tcgaattctg gaaacttgcg 1920

tacaatagag tgcgcaatct tgaagaagtt ctgaagactc atttttgtaa agctcaaatg 1980

tcaattgtga tcctagcagc agtgcttggt gagggcattt ggcatctctg ttcgcaagtc 2040

atttataaat tgagtggcct gttttccaaa gtcgttgact tttgtgaaaa acactggaaa 2100

ggtttctgca cgcagttgcg acaagttagg cttgttgtta cagaaaacct ttgtgtgttg 2160

aaaggaattg ctcagcattg ttttcaactt ttgctggaag cactacactt tatgtacaag 2220

agttttaaga aatgtgcact tggtagactt tctggggatc tatttttctg gaaaggcggt 2280

gtgcataaaa ttgtgcagga tggcgatgaa atttggtttg acgccattga tacgattgaa 2340

gttgaagatc tgggtattgt ccaagaaaaa cctatagatt ttgaggtttg tgaagatgtg 2400

atacttccag aaaatcaacc tggccacatg gttcaaatcc aggatgacgg aaagaactat 2460

atgttcttcc gtttcaagaa ggatgagaac atttattata caccaatgtc acaacttggt 2520

gctattaatg ttatttgcaa agcgggtggc aagactgtca cgtttggtga aacaactgta 2580

aaggaaatac catcacctga tgttgtgcct attaaggtaa gcattgagtg ctgtggtgaa 2640

ccatggaata caatcttcaa gaaggcttat aaagagccca ttgaagttga gacagacctc 2700

acagtagaac aattgctcac tgtgatctat gataaaatgt gtgaagatct caaactgttt 2760

ccagaggcac cagaacctcc actatttgag aatgtcgcac ttgttgataa aaacggtaaa 2820

gatctggatt gtataaaatc atgccatctc atctaccgtg attatgagag cgatgatgac 2880

atcgaggaag acgatgctga ggagtgtgat acagatccag ctgatgctga ggaatgtgat 2940

actgcttcag agtgtgaaca agaagatgag gatacaaagg tgctgtctct tttgcaagac 3000

ccagccagta acaagtatcc tctacctctt gatgatgatt atagtgtcta taatggatgt 3060

attgttcata aggacgctct agatgttgtt aatttaccat ctggtgaaga aacttttgtt 3120

gtcaataact gttttgaagg ggctgtgaaa ccgcttccgc agaaggttgt tgatgttcta 3180

ggagattggg gagaggccgt tgatgcacaa gaacaattgt gtgaacaaga gtctgaatct 3240

attaaagaac cagttgagaa acctactggt attggtggtt cagcaattga agaagctgtc 3300

gtcgtggagc aggaagtggt tcctgttgtt gtagagtctc aagaagtagt tgtttttaca 3360

cctgctgatt tagaagttgc taaagaaaca tcagaggatg ttgacgagtt tgttcttgtt 3420

gcttatgttc ctacagaaga agttgtgcct caagaaaaag aagagccaca agtagaacag 3480

gagcctattc aagttgtcaa accacaacgt gagaaaaagg ctaaaaagtt caaagtcagg 3540

caaaccacat gtgaaaaacc caaattcttg gagtacacaa catgtgtagg tgatttgacc 3600

gttgtaattg ccaaagcatt ggatgaattt aaagagttct gcgttgttaa cgccgcaaat 3660

gagtatatgt ctcatggtgg tggcgttgcg aaggcaattg ctgacttttg tggacctgat 3720

tttgtggaat attgtgagga ctatgttaag aaacatgggc cacaacaaag acttgtcaca 3780

ccttcgtatg tcaaaggcat tcaatgtgtg aataatgttg taggaccccg ccatggtgac 3840

aaagatttgg aagaaaaact tgtcgctgcc tacaagaatg ttcttgtaga tggtgtggtc 3900

aattatgttg tgccaattct ctcatcggga atttttggtg tagattttaa aatttcaata 3960

gacgcgatgc gtaaggcctt tgaagggctt aacatacgcg tgcttctttt ttctctgagt 4020

caagaacaca ttgagtattt cgatgcaact tgtaagcaga agaaaattta tcttacagaa 4080

gatggtgtta aataccgctc tgttgtagtg aaacctggcg actctttggg tcaattcggt 4140

caggtttttg caaagaacaa gacagttttt acagcagatg atgttgagga cgaagaagtt 4200

ctcttcactc caataactga caaagctgtt cttgaatact atggattgga tgcgcaaaag 4260

tatgtaatat atttgcaaac actcgcgcag aaatgggaag tccaatatag ggacaatttt 4320

accttactta aatggcgtga cggaaactgc tggattagtt cagctatagt gctccttcag 4380

gccgctaaga ttaggtttag aggttttctt gcagaggcat gggctaaatt cttgggtgga 4440

gaccctacgg attttgttgc ttggtgttat gcaagttgca atgctaaagt tggtgatttt 4500

tcagactgca attggctttt ggctaacttg gcagaacact ttgatgcaga ttatacaaat 4560

gcactgctta agaagcgtgt gtcgtgtaac tgtggtgtta agagttatga acttagaggc 4620

cttgaagctt gtattcaacc agtaagggct cctaaccttc tacattttaa gacgcaatac 4680

tcaaattgtc caacttgtgg tgcaaatagt atggatgaag ttgttgaagc atcactcccg 4740

tacttgttgc ttgttgctac tgatggtcct gctgcagttg attgtgatga aaatgctgta 4800

ggaaatgttg tttttattgg gtccaccaac agtggacact gttatacaca agttgttgga 4860

aaagcttttg ataatttggc tcaagatagg aaatttggaa agagatcgcc ttacattact 4920

gcaatgtata tgcgcttctc tcttaagagt caaaattctc tgtctgttgc taaaaagagt 4980

aagagtaaga gtgaggtagt aaaagaagat gtttccaatc ttgctacaag ttcaaagttc 5040

agttttgatg atcttactga ctttgaacag tggtatgata gtaacatcta tgaaagtctt 5100

aaagtgcagg aaacacctga taatatggat gagtatgtgt cattcacaac aaaggaagat 5160

tccaagttgc cactgacact taaagttaga ggtatcaaat cagttgttga ctttaagtca 5220

aaggatggct ttacttacaa gttaatacct gacactgatg aaaatttaaa agcacctgtc 5280

tactatccta ctttggactc tgtaagtctt aaggcaatat gggtggacgg tactgctaat 5340

tttgttgttg gacaccccaa ctataatagt agagctctac gtatccccac attctgggaa 5400

tgcgcagaga gctttgtgaa aataggcgaa aaagttgatg gtgtaactat gggcctttgg 5460

cgtgcagaac accttaatag acctaatttg gaaaggattt tcaacgtcgt taagaagacg 5520

atggttggaa ctagtgttgt tactacacaa tgtggtaaat taattagtaa agcagctaca 5580

ttcgttgccg ataaagtagg agatggtgta gttcgcaatg ttactgatag aattaaaggg 5640

tgttttgggt ctactaggga gcattttgaa aaaagaatgt ctccacagtt cttaaagact 5700

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aagagggtgc tatgtaaagt ggtatttact gctttattta tactatggtt tgtctacaca 5820

agcaatccag ttatatttac tggactacgt gtgttagatt tcctatttga aggttcagtc 5880

tgtagtcctt atgcagatta cggtaaagag tcttttgata ttttacgcta ttgtggaagt 5940

gatttcactt gtcgtgtttg tttacatggt aaggattcgc tccatttgta taaacatgcc 6000

tatagcgtag aacagtttta taaagatgca gttaatggca ttagttttac atggaattgg 6060

ctttatatgc tgttcctaat attgtttgtt aagccagtag caggttttgt cattatttgc 6120

tactgtataa ggtacatggt tttgagcaca actgttttac aaactggtgt aggattttta 6180

gactggttta ttcaaacagt ttttgctaac tttaacttta tgggggcagg gttttatttc 6240

tggttctttt ataagatata tatacaggtg catcatataa tgtactgtaa ggatataaca 6300

tgtgaagtgt gtaagagagt tgcgcgcagt aatagacatg aggttagtgt agttgttaat 6360

gggcgtaaac agcttgttca cgtctatact aactcaggct acaatttttg taagagacat 6420

aattggtatt gtagggattg tgataagtat ggccaccaaa atacatttat gtcccctgaa 6480

gttgctggcg agctttctga aaagcttaag cgccatgtta aacctacagc attcgcatac 6540

cacgtagtgg atgatgcatg cttagttgat ggctttgtta atttgaagta taatgctgcc 6600

accccaggta aagatggtgt gcattctgct gttaaatgtt ttagtgtatc agatttctta 6660

aagaaagctg tctttcttaa ggatgcacaa aaatgtgaac aaatatctaa tgatagtttt 6720

atagtttgta atacacacag cgcgcatgcg ttagaggaag caaaaaatgc agccatctat 6780

tatgcgcaat gtctttgtaa accaattctt atacttgatc aggcccttta tgaacaattg 6840

attgtagaac ctgtgtcaaa aagtgtagta gataaggtgt gtaacatcct gtctaatata 6900

atatctgtag attctgcagc tttgaattat aaggctggca cacttcgtga tgccctcctc 6960

tctgttacta aggatgaaga agctgttgat atggctattt tctgccataa taatgatgtt 7020

gaatatacta atgatggttt tactaatgtg gtgccatcat atggtataga tactgataag 7080

ttaactcctc gtgatagagg ctttttgata aatgcagatg cagccattgc taacttgaaa 7140

gtgaaaaatt caccgccagt agtgtggaag tattctgatc ttattaaatt gtctgacagt 7200

tgtcttaagt atttaatatc agcaactgtc aaatcaggag gtcgtttctt cataactagg 7260

tctggtgcta aacaagttat tgcttgttat actcagaagt tgttagtgga aaagaaggct 7320

ggtggtgttg ttagtagcac tgttagttgg tttaagagtt gttgtaaatg gctcctagtg 7380

ttttatttac tttttatagt gtgttgtttg ggttattatc aatgggaaat gagtagagaa 7440

tttgctcctc ccatgtatga ttttaatgcc acaatgcatg tagaagggtt taaggttata 7500

gataagggtg tactcaggga tattgttcca gaagacactt gtttctctaa taagtatgtt 7560

aattttgact cattttgggg aaaaccttat gtaaatagta gagactgtcc tattgtaacc 7620

gctattatag atggtgctgg tacagtggct gctggtgtcc caggttttgt acagtgggtc 7680

atggatggtg taatgtttat ccatatgaca caaactgagc gaagaccttg gtatattccg 7740

acctggttta atagagaggt tgttggttat actcacgatt ctattattgc agaaggtgag 7800

ttttatacat ccatagcatt gtttgctgct agatgtttgt atttaacatc tagtaataca 7860

ccacaacttt attgttttaa tggtgataat gatgctcctg gtgctttgtc atttgcaagt 7920

atacttccac atagagcata ctttcaacct aatggagtta ggcttattgt gcctcaacaa 7980

attatgcaca caccatacat agttaagcta gtttcagaca gctattgtag aggtagtgtt 8040

tgtgaggtta ctaaaccagg ttattgtgta tcaatgaact ctcaatgggt tttgtttaat 8100

gatgaataca caattaaacc aggcgtgttt tgtggttcta ctgttagaga acttttgttt 8160

aatatggtta gtacattttt tacgggtgtt aatccaaaca tttatatgca attggcaatt 8220

atgttcttaa tacttgttgc tgttgtgtta gtctttgcaa tggttataaa gtttcaaggt 8280

gttttcaaag cttatgcaac cactgtattt actataatgc ttgtctggct tattaatgca 8340

ttcgtattat gtgtacatag ttataatagt gttttagcta ttatattact tgtgatttat 8400

tgttatgcat cacttgtgac gattcgtaat actgctataa taatgcattg ttggcttgtt 8460

ttcacatttg gtttaatagt acctagttgg atagtttgtg tctatttagg ttttgtgcta 8520

tatatgtata caccgctgtt tttgtggtgc tatggtacaa ctaaaaattg tcgcaagctt 8580

tatgaaggca atgagtttgt tggtaattat gatcttgctg cgaagagtac ttttgtaatt 8640

cgcggtcctg aatttgttaa acttactaat gagataggcg ataaatttga cgcttatctc 8700

tcagcgtatg ctaggcttaa atattattca ggcactggca gtgagcaaga ttacttgcaa 8760

gcctgtcgcg catggttggc ctatgcacta gaccacttta gaagcagtgg tgtagaagta 8820

gtttatactc caccacgata ttcaattggt gttagtagat tacaagctgg ttttaagaaa 8880

ctagtatccc ctagtagtgc tgttgagaag tgcattgtta gtgtatccta taggggtaat 8940

aatcttaatg gattgtggtt gggtgactcc atctactgtc cacggcatgt gttaggtaag 9000

tttagtggtg accaatgggg tgatgtactt aatcttgcta ataatcatga gtttgaggtt 9060

gtaactggaa atggtgttac tttgagtgtt gttagtaggc gtttgaaagg tgcagtttta 9120

attttacaaa ctgcaattgt caatgctgaa actccaaagt acaaatttat aaaagcaaat 9180

tgtggtgata gtttcactat tgcttgctct tatggaggta cagttatagg actttaccct 9240

gttactatgc gttctaatgg aactattaga gcatcttttc ttgctggagc atgtggttca 9300

gtaggtttta atatagaaaa gggtgtagta aatttttact acatgcacca tctagagtta 9360

cctaatgcat tacatacagg gactgaccta atgggtgagt tctatggtgg ctatatagat 9420

gaagaggttg ctcagaaagt tcaacccgat aaattagtta ctaataatat tttagcatgg 9480

ctttatgcag caattattag tgttaaagag agtagttttt caacacctaa gtggcttgaa 9540

agtactactg tcagtattga agactataat aagtgggcag tggataatgg ttttacatca 9600

tttgtaagct gcactgctat tactaaatta agtgctataa caggagttga tgtttgtaaa 9660

ctccttcgca ctattatggt aaaaagtaca caatggggta gtgaccctat tttgggacaa 9720

tataattttg aagatgaaat gacaccagaa tctgtcttta atcaggtggg tggtgttagg 9780

ttacagtctt ctgtcgtaaa gaaagctgcg tcctggtttt ggagtagatg tgtgctagct 9840

tgttttttat ttgtcttgtg ttctattgtg ctgttcacag ctttaccata tagatattat 9900

ttacatggcg ctgctgtttt atttacagct gtgttcttta tttcatttac tgtgaaacat 9960

gttatggcat ttatggatac tttcctcttg ccaacattga ttacagttat tattggagtt 10020

tgtgctgaag tacctttcat ctacaatact ctaattagtc aaattgttat tttctttagc 10080

caatggtatg atccagtagt ctttgacact gtagtaccgt ggatgtttct accattagtc 10140

ttgtatacag cttttaaatg tatacaaggt tgttatagtg taaattcctt taatacttct 10200

ctgttagtgt tgtatcagtt tatgaagttg ggttttgtta tatatacctc ttctaatacc 10260

cttacagcct actcagaagg taattgggag ttattctttg agttagtgca cacaactgtg 10320

ttggctaatg ttagtagtaa ttctttaatt ggtttaattg tgtttaaatt tgctaagtgg 10380

atgctgtatt attgtaatgc ctcatacctt aataattatg tcctaatggc tgttattgtt 10440

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tgtcttcata agattaaccc acctaaaact gtgtgggaag tcttttctac aaatatactt 10620

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gatgtaaagt gtacaactgt tgtcttaatg cagcttttga ctaagcttaa tgttgaagca 10740

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gttaatgagt gcatggataa tttattgggt atgcttgtaa cattattttg tgtagatagt 10860

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tatgaaaagg ttttagttga gtctaaaaat ggtagtgtta cacagcaaga gcttgctgca 11040

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aagttggata gcatggctga acgtgctatg acaactatgt ataaggaagc gcgtgttact 11160

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aatgtcattg atgcagatgg cactgaattg caaccaattt ctacaggtaa tggtttaatt 11460

tactgtataa gtggtgataa tatagcatgg cctcttaagg tcaatttgac taggaatgtg 11520

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gttgcttcat ttttaaatga agcaggcaat caaatttatg ttgacttaga tccaccatgt 11760

aaatttggta tgaaggtggg tgataaagta gaagttgtat acttgtattt tataaagaat 11820

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tacggggtag cagtgaggct cggctgatac cccttgctaa tggttgtgaa cctgatgttg 12420

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tgaatgctgt tgagtttggg aacctaatgg ttgagaaggg ttacgtaggt gtagttacac 12960

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atttagttga tcttagaact tcttgcttta gtgtctgtgc tttatcttct ggtataacac 13560

accagacagt taaaccaggt cactttaata aggatttcta tgattttgct gaaaaagcag 13620

gtatgtttaa ggaaggatca tcaattccac ttaaacattt cttctaccca cagactggta 13680

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tatccgcgaa aaatagagcg cgtactgtgg caggtgtgtc aattctttct actatgacta 14040

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ttattggaac aactaaattc tatggcggtt gggacaatat gctaagaaac ctagttcaag 14160

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tagctacagg tggtatatat gtgaaacctg gtggtactag cagtggtgat gccaccactg 14400

cttatgccaa cagtgttttt aatataatac aagccacatc tgctaatgtt gcgcgtttac 14460

ttagtgttat aacgcgtgat atagtatatg atgacattaa aagcctgcag tatgagttat 14520

accagcaggt ctataggcga gtcaattttg atcctgcctt tgttgaaaag ttttattctt 14580

acatgtgtaa gaatttttca ttaatgatct tgtctgatga tggtgttgtt tgttataaca 14640

acacacttgc caaacaaggt cttgtagcag acatttctgg ttttagagaa attctctact 14700

accaaaacaa tgtttatatg gccgactcta agtgttgggt tgaactcgac ttagaaaaag 14760

gcccacatga attttgttca cagcacacaa tgctagtaga ggttgatggc gagccaagat 14820

acttgccata tccagaccca tcacgcattt tgggtgcatg tgtatttgta gatgaagtgg 14880

ataagacaga acctgtggct gttatggagc gttatatcgc tctcgccata gatgcttacc 14940

cgcttgtaca tcatgaaaac gaggagtata agaaagtttt ctttgtactt ctttcttata 15000

ttagaaagct ctatcaggag ctctcccaaa gtatgcttat tgactattcc tttgttatgg 15060

atatagataa gggtagtaaa ttttgggagc aggagttcta tgaaaatatg tatagggctc 15120

ctacaacttt acaatcttgt ggtgtttgtg tagtttgtaa tagtcaaact atactacgct 15180

gtggtaattg tattagaaaa ccattcttgt gctgtaagtg ttgctatgac catgtcatgc 15240

acactgacca caaaaatgtt ttgtctataa atccatacat ttgctctcaa cctggttgtg 15300

gtgaagctga tgttactaaa ctttacctcg gaggtatgtc ttatttctgt ggtaatcata 15360

aacctaaatt atcaataccg ttagtatcta atggtactgt ttttggaatt tacagagcca 15420

attgtgtggg tagcgaaaac gttgatgatt ttaatcaact agctactact aattggtcta 15480

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tgccacagta cgcgctctat 20

<210> 20

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 20

ctagaggaac aggaccaact ct 22

<210> 21

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 21

tccaaaaact gtaccattag atac 24

<210> 22

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 22

gctgtacctc ggaggtatgt c 21

<210> 23

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 23

tgcctcatca cgtgttataa ac 22

<210> 24

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 24

ctgttagggt ttaagatgag tgtt 24

<210> 25

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 25

taccgcttat aacactgtgt ag 22

<210> 26

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 26

tcaaacaact ctgcctacat c 21

<210> 27

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 27

cagtgacttt accaacatct ct 22

<210> 28

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 28

ctgcacgcaa attatatatt ttgg 24

<210> 29

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 29

tcgcctgaat aaacaccttt ac 22

<210> 30

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 30

ctcagagtgg ttattataat tttaattt 28

<210> 31

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 31

gactgtgact taacacactc att 23

<210> 32

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 32

gtcatatgca ggaaggtttt ag 22

<210> 33

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 33

ccggattgtt aagttttcta cc 22

<210> 34

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 34

gatgcttgtt gtttattttg gt 22

<210> 35

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 35

ctgcttgtcc tgctttgtta ag 22

<210> 36

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 36

cggagcaata gcaagaaaag c 21

<210> 37

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 37

ttttgctcta actctatact agcct 25

Claims (5)

1.一种QX型IBV的Vero细胞适应株MJ，保藏编号为CGMCC No.14681。

2.根据权利要求1所述的Vero细胞适应株MJ，其特征在于，所述Vero细胞适应株MJ的全基因序列如SEQ ID NO.1所示。

3.权利要求1或2所述QX型IBV的Vero细胞适应株MJ在制备QX型IBV病毒中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述Vero细胞适应株MJ接种在Vero细胞上培养，培养液分离得到QX型IBV病毒。

5.权利要求1或2所述QX型IBV的Vero细胞适应株MJ在制备鸡传染性支气管炎疫苗中的应用。