CN110358714A - 一种高产叶酸的乳酸菌组合物 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种高产叶酸的乳酸菌组合物，由德氏乳杆菌保加利亚亚种、嗜热链球菌和清酒乳杆菌组成，该组合物可制备成发酵剂应用于发酵食品中，具有优良的产品质地、后酸化性能以及产香性能，同时使用该组合物所得发酵产品具备较高的代谢产叶酸能力。

Description

一种高产叶酸的乳酸菌组合物

技术领域

本发明涉及一种高产叶酸的乳酸菌组合物。

背景技术

酸奶是一种传统发酵乳制品，具有丰富的营养和良好的益生保健价 值，加上淳厚丝滑的口感，且易于消化吸收，深受人们的喜爱，近年来， 随着我们人民消费水平的提高和健康理念的流行，功能型酸奶产品每年以 45％的速度在增长。

叶酸是一种碳转移辅酶，在嘌呤、嘧啶、氨基酸的合成，DNA和RNA 修复中发挥重要作用，多种细菌、真菌、动物包括人自身无法合成，需要 从外界摄入。目前，我国叶酸缺乏主要人群是老年人和孕期妇女，孕期叶 酸缺乏易导致胎儿的神经管缺陷。

清酒乳杆菌LZ217具有叶酸代谢能力，我们优选出对清酒乳杆菌 LZ217代谢叶酸有特异性促进作用的酸奶发酵剂组合菌株：德氏乳杆菌保 加利亚亚种inm25-LB和嗜热链球菌inm25-ST，按照一定比例制备而成的 乳酸菌组合物。组合物可制备成发酵剂应用于发酵食品中，具有优良的产 酸性能、后酸化性能以及产香性能，同时使用该组合物所得发酵产品具备 较高的代谢产叶酸能力。

发明内容

本发明针对以上问题，提供一种高产叶酸的乳酸菌组合物。

发明目的通过以下方案实现：一种高产叶酸的乳酸菌组合物，由德氏 乳杆菌保加利亚亚种、嗜热链球菌和清酒乳杆菌组成，该配比组合物提高 清酒乳杆菌在发酵时的叶酸代谢能力。

进一步的，德氏乳杆菌保加利亚亚种，菌株名为inm25-LB，菌株的保 藏编号为CGMCC No.15445，保藏日期为：2018年03月12日，保藏单位 为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京 市朝阳区北辰西路1号院3号。

进一步的，嗜热链球菌，菌株名为inm25-ST，菌株的保藏编号为CGMCC No.15446，保藏日期为：2018年03月12日，保藏单位为：中国微生物 菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西 路1号院3号。

进一步的，德氏乳杆菌保加利亚亚种inm25-LB和嗜热链球菌 inm25-ST的菌数比为100:1～1:1。

进一步的，德氏乳杆菌保加利亚亚种inm25-LB和嗜热链球菌 inm25-ST的混合物与清酒乳杆菌LZ217的菌数比为100：1～1:1。

本发明所提供的嗜热链球菌inm25-ST(Streptococcus thermophilus inm25-ST)的16S rDNA全序列为SEQ ID No.1所示。

本发明所提供的德氏乳杆菌保加利亚亚种inm25-LB(的16S rDNA全序 列为SEQID No.2所示。

本发明的组合物能解决发酵时产品质地稀薄，粘度低，保水能力差的 问题，改善在运输和储存过程中极易产生乳清大量析出等现象，该乳酸菌 组合物具有良好的产香、产粘、后酸化能力，同时使用该组合物所得发酵 产品具备最高的代谢产叶酸能力。

说明书附图

图1为嗜热链球菌inm25-ST的菌落形态图。

图2为嗜热链球菌inm25-ST革兰氏染色的菌体形态图。

图3为嗜热链球菌inm25-ST的16S rDNA的电泳鉴定图。

图4为德氏乳杆菌保加利亚亚种inm25-LB菌落涂片图。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明作进一步说明：

下述实施实例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法；所 使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1一种高产叶酸的乳酸菌组合物，由德氏乳杆菌保加利亚亚种、 嗜热链球菌和清酒乳杆菌组成，该配比组合物提高清酒乳杆菌在发酵时的 叶酸代谢能力。

一种高产叶酸的乳酸菌组合物，德氏乳杆菌保加利亚亚种，菌株名为 inm25-LB，菌株的分类名称：德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbrueckiisubsp.bulgaricus)，菌株的保藏编号为CGMCC No.15445，保 藏日期为：2018年03月12日，保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委 员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

本发明所提供的德氏乳杆菌保加利亚亚种inm25-LB序列所示。

一种高产叶酸的乳酸菌组合物，嗜热链球菌，菌株名为inm25-ST， 菌株的分类名称：嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)，菌株的保藏编 号为CGMCC No.15446，保藏日期为：2018年03月12日，保藏单位为： 中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝 阳区北辰西路1号院3号。

本发明所提供的嗜热链球菌inm25-ST序列所示。

一种高产叶酸的乳酸菌组合物，清酒乳杆菌，菌株名为LZ217，菌株 的分类名称：清酒乳杆菌(Lactobacillus sakei)，菌株的保藏编号为: CGMCCNO.10259，保藏日期为：2014年12月29日，保藏单位为：中国微 生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北 辰西路1号院3号。专利号为：201510258884.5。

一种高产叶酸的乳酸菌组合物，德氏乳杆菌保加利亚亚种inm25-LB 和嗜热链球菌inm25-ST的菌数比为100:1～1:1。

一种高产叶酸的乳酸菌组合物，德氏乳杆菌保加利亚亚种inm25-LB 和嗜热链球菌inm25-ST的混合物与清酒乳杆菌LZ217的菌数比为100：1～ 1:1。

一种高产叶酸的乳酸菌组合物，德氏乳杆菌保加利亚亚种inm25-LB、 嗜热链球菌inm25-ST和清酒乳杆菌LZ217的分别进行纯培养后，离心获 得菌泥，嗜热链球菌inm25-ST和德氏乳杆菌保加利亚亚种inm25-LB的菌 数含量比为1000:1～1:1混合。德氏乳杆菌保加利亚亚种inm25-LB和嗜 热链球菌inm25-ST的混合物与清酒乳杆菌LZ217的菌数比为100：1～1:1。

实施例2德氏乳杆菌保加利亚亚种inm25-LB的筛选

1.1样品来源

样品采自于四川阿坝藏族自治区红原县、诺尔盖县等地藏族牧民的传 统牦牛奶发酵酸乳，样品未添加商业发酵剂，牧民沿袭传统发酵方式转接 牦牛奶发酵而成。

1.2菌株的分离纯化

以无菌操作称取25g样品，放入装有225ml无菌生理盐水的锥形瓶中 (瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)，充分震荡摇匀，用无菌生理盐水进 行十倍梯度稀释，选取适宜稀释度的样品稀释液，涂布于MRS固体培养基 上，置于37℃培养48h。培养结束后，从琼脂培养基中选择生长有50-150 个单菌落的平板，挑取具有粘性的菌落，在MRS琼脂平板上多次划线纯化， 直至整个平板上的菌落形态一致，挑取单菌落到MRS液体培养基增菌培养。 得到的菌株均在含40％甘油的MRS液体培养基中于-80℃冷冻保存。

2.德氏乳杆菌保加利亚亚种inm25-LB的鉴定

2.1菌落特征

德氏乳杆菌保加利亚亚种inm25-LB在MRS琼脂培养基培养48h后， 呈现圆形，直径在0.1-0.2mm之间，白色，边缘整齐的湿润菌落。

2.2显微镜下形态

德氏乳杆菌保加利亚亚种inm25-LB菌落涂片：革兰氏染色呈阳性， 不生芽，杆状，见图4。

2.3 16S rDNA鉴定

用Ezup柱式细菌基因组DNA抽提试剂盒提取目标菌株基因组DNA，将 提取的乳酸菌基因组DNA作为PCR扩增的模板，采用细菌通用引物27F和 1492R进行16S rDNA的PCR实验，PCR反应扩增结束后，取PCR产物进行 琼脂糖凝胶检测拍照，扩增片段长度为1.5kb左右。将PCR产物送至生工 生物工程(上海)有限公司进行测序，结果如SEQ ID NO.1所示，在NCBI 网站上进行BLAST序列比对，结果显示该序列与德氏乳杆菌保加利亚亚种 的16SrDNA序列同源性超过99％。

将菌株inm25-LB的序列比对结果和生理生化结果相结合，确定筛选 的乳酸菌inm25-LB为德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus)。

实施例3一种高产叶酸的乳酸菌组合物，M17固体培养基：大豆胨 5.0g/L，蛋白胨2.5g/L，酪蛋白胨2.5g/L，酵母浸粉2.5g/L，牛肉浸粉5.0g/L， 乳糖5.0g/L，抗坏血酸钠0.5g/L，β-甘油磷酸钠19.0g/L，硫酸镁0.25g/L， 琼脂12.75g/L，调节pH至7.2±0.2.

一种高产叶酸的乳酸菌组合物，灭菌脱脂牛乳；脱脂乳粉以12％(w/v) 比例溶于蒸馏水中，55℃加热平衡，115℃保持10min灭菌。

样品1为嗜热链球菌AB0603。

样品3为嗜热链球菌AB2302。

一种高产叶酸的乳酸菌组合物，名称为inm25-ST，菌株的分类名称： 嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus inm25-ST)，保藏编号为CGMCC NO.15446，保藏日期为：2018年03月12日，保藏单位为：中国微生物 菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西 路1号院3号。

一种高产叶酸的乳酸菌组合物，乳酸菌高产胞外多糖，其胞外多糖产 量为：476.3-644.0mg/L。

一种高产叶酸的乳酸菌组合物，胞外多糖从所述嗜热链球菌 (Streptococcusthermophilus inm25-ST)发酵的高含胞外多糖的脱脂酸乳中 提取得到。

一种高产叶酸的乳酸菌组合物，脱脂酸乳按照如下步骤的方法制备得 到：将嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus inm25-ST)按2-5％(v/v)比 例接种到11-13％(w/v)的灭菌脱脂乳中发酵4.5-5.5h，培养温度为37-43℃。

一种高产叶酸的乳酸菌组合物，乳酸菌筛选自四川阿坝藏族自治州地 区的传统牦牛发酵乳。

一种胞外多糖，将inm25-ST发酵的脱脂酸乳通过等电点法除酪蛋白， 酶解后，用三氯乙酸沉淀离心，取上清液用乙醇沉淀，将所述沉淀溶解于 超纯水后再用超纯水透析，即得。

一种高产叶酸的乳酸菌组合物，实验测得本菌株inm25-ST发酵所得 的酸乳酸度为72-78°T，酸乳黏度为7500-8500mPa﹒s，凝乳时间为 4.5-5.5h，酸乳持水力为50-65％，冷藏期7天后酸度增加了3.5-5°T。

一种高产叶酸的乳酸菌组合物的制备方法，将权利要求1所述嗜热链 球菌(Streptococcus thermophilus inm25-ST)在M17液体培养基中提前活化 培养。

一种高产叶酸的乳酸菌组合物的筛选方法，从M17培养基中挑取具 有拉丝倾向的乳酸菌菌落，纯化培养，然后接种于灭菌脱脂牛奶进行发酵， 选取发酵乳质地粘稠，拉丝明显的乳酸菌。

一种高产叶酸的乳酸菌组合物，嗜热链球菌inm25-ST或嗜热链球菌 inm25-ST发酵剂，按2-5％(v/v)比例接种到11-13％(w/v)的灭菌脱脂 乳中发酵4.5-5.5h，发酵温度为37-43℃，所述发酵乳具有高含胞外多糖， 质地粘稠，低脂，风味丰富的特点，适用于糖尿病患者、肥胖患者。

实施例4嗜热链球菌inm25-ST的筛选及鉴定：

1.嗜热链球菌inm25-ST的筛选

1.1样品来源

样品采自于四川阿坝藏族自治区红原县、诺尔盖县等地藏族牧民的传 统牦牛奶发酵酸乳，共采集26份样品，采样点远离公路和城镇，取样点 距离在10公里以上，样品未添加商业发酵剂，牧民沿袭传统发酵方式转 接牦牛奶发酵而成。

1.2菌株的分离纯化

以无菌操作称取25g样品，放入装有225ml无菌生理盐水的锥形瓶中 (瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)，充分震荡摇匀，用无菌生理盐水进 行十倍梯度稀释，选取适宜稀释度的样品稀释液，涂布于M17固体培养基 上，置于43℃培养48h。培养结束后，从琼脂培养基中选择生长有50-150 个单菌落的平板，挑取具有粘性的菌落，在M17琼脂平板上多次划线纯化， 直至整个平板上的菌落形态一致，挑取单菌落到M17液体培养基增菌培养。 得到的菌株均在含40％甘油的M17液体培养基中于-80℃冷冻保存。

2.嗜热链球菌inm25-ST的鉴定

2.1菌落特征

嗜热链球菌inm25-ST在M17琼脂培养基培养48h后，呈现圆形，直 径在0.1-0.2mm之间，白色，边缘整齐的湿润菌落，见图1。

2.2显微镜下形态

嗜热链球菌inm25-ST菌落涂片：革兰氏染色呈阳性，不生芽，球形， 成对或成链状，见图2。

2.3 16S rDNA鉴定

用Ezup柱式细菌基因组DNA抽提试剂盒提取目标菌株基因组DNA， 将提取的乳酸菌基因组DNA作为PCR扩增的模板，采用细菌通用引物 27F和1492R进行16S rDNA的PCR实验，PCR反应扩增结束后，取PCR 产物进行琼脂糖凝胶检测拍照，扩增片段长度为1.5kb左右，见图3。将 PCR产物送至生工生物工程(上海)有限公司进行测序，结果如SEQ ID NO.1所示，在NCBI网站上进行BLAST序列比对，结果显示该序列与嗜 热链球菌的16S rDNA序列同源性超过99％。

将菌株inm25-ST的序列比对结果和生理生化结果相结合，确定筛选 的乳酸菌inm25-ST为嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)。

实施例5嗜热链球菌inm25-ST制备脱脂酸乳

1.脱脂酸乳的制备

将保藏于-80℃的40％(v/v)冷冻甘油管中的乳酸菌，按2％(v/v) 比例接种到M17液体培养基中，37℃条件下培养18h进行活化，制备种子 液。将活化后的种子液继续按2％(v/v)比例接种于12％(w/v)的灭菌脱 脂乳中，43℃静置培养，以滴定酸度>70°T为发酵终点，置于4℃冷藏 24h，得到不需要添加增稠剂的酸乳。

2.酸乳理化指标测定

2.1酸乳发酵时间的测定

将活化后的菌株种子液按2％(v/v)比例接种于12％(w/v)的灭菌脱 脂乳中，43℃静置培养，以滴定酸度>70°T为发酵终点，记录发酵时间， 三次平行实验，取平均值。

实验测得嗜热链球菌inm25-ST凝乳时间为280-320min。

2.2酸乳滴定酸度的测定

根据GB 5009.239-2016，称取10g(精确到0.001g)已混匀的试样， 置于150ml锥形瓶中，加20ml新煮沸冷却至室温的水，混匀，加入2.0ml 酚酞试剂指示液，混匀后用氢氧化钠标准溶液滴定，边滴边转动烧瓶，直 到颜色与参比溶液颜色相似，且5s内不消退，整个滴定过程应在45s内 完成，滴定过程中，向锥形瓶中吹氮气，防止溶液吸收空气中的二氧化碳， 记录消耗的氢氧化钠标准溶液毫升数(V1)，代入下式(1)进行计算。

式中：

X₁——样品的酸度，单位为度(°T)[以100g样品所消耗的0.1mol/L 氢氧化钠的毫升数计，单位为毫升每100克(ml/100g)]；

c₁——氢氧化钠标准溶液的摩尔浓度，单位为摩尔每升(mol/L)；

V₁——滴定时所消耗氢氧化钠标准溶液的体积，单位为毫升(ml)；

V₀——空白实验所消耗氢氧化钠标准溶液的体积，单位为毫升(ml)；

100——100g样品；

m₁——样品的质量，单位克(g)；

0.1——酸度理论定义氢氧化钠的摩尔浓度，单位为摩尔每升 (mol/L)。

以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算数平均值表示，结果保 留三位有效数字。

实验测得嗜热链球菌inm25-ST发酵酸乳的终点酸度为75～80°T。

2.3酸乳粘度的测定

采用流变仪(博勒飞公司DV2T型)，在4℃下测试粘度，转子型号为 64，分别在50r/min的速度下测定三次，选取第20s的数据为测量值，每 个样品做三个平行试样，结果取算数平均值。

实验测得嗜热链球菌inm25-ST发酵酸乳的粘度为7754mPa﹒s。

2.4酸乳脱水收缩敏感性的测定

取20g样品置于一个装有定量滤纸的漏斗中，室温条件下静置过滤 2h，收集滤液，并按式(3)计算持水率。

式中

W₁——收集的滤液的质量，单位克(g)；

W₂——样品的质量，单位克(g)。

以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算数平均值表示，结果保 留三位有效数字。

实验测得嗜热链球菌inm25-ST发酵酸乳的持水力为55-60％。

2.5感官评定

由8位食品专业师生进行感官评价：(1)色泽评定：将适量酸乳放 入烧杯中，在日光灯下观察其色泽。(2)滋味和气味评定：打开封盖后 马上闻气味，然后用温水漱口，再品尝滋味。(3)组织状态评定：将酸 乳倾斜倒在光滑的黑瓷板上，略微倾斜转动，仔细观察组织状态。感官评 价总分100分，其中色泽10分，滋味和气味40分，组织状态50分。评 分标准见表1。

表1感官评价评分标准

实验测得嗜热链球菌inm25-ST发酵酸乳的理化指标测定结果见表2。

表2菌株发酵理化指标测定结果

2.6酸乳后酸化的测定

将活化后的菌株按2％(v/v)比例接种于12％(w/v)的灭菌脱脂乳中， 43℃静置培养，发酵完成后放入4℃冷藏，测定冷藏1d、3d、5d、7d时的 滴定酸度。实验测得嗜热链球菌inm25-ST发酵酸乳的后酸化结果见表3。

表3保质期内酸度测定结果

实施例6嗜热链球菌inm25-ST的胞外多糖的制备

脱脂酸乳的制备

见实施例3“1.脱脂酸乳的制备”部分的记载。

胞外多糖的提取

等电点法除酪蛋白：取发酵乳样品50g,用饱和氢氧化钠调样液pH至 8.0,4000g/min，离心20min，上清液用HCl溶液调pH至4.6,4000g/min， 离心20min，取上清液；

酶解：调节pH至7.5，加入1/10体积的胰酶液(浓度为3g/L，现配 现用)，40℃水浴，酶解2.5h后，4000g/min，离心30min，取上清液；

三氯乙酸法除蛋白：加入80％(w/v)的三氯乙酸溶液至终浓度为10％， 使蛋白质变性，4℃沉淀1h后，12000g/min，离心40min，收集上清液；

乙醇沉淀：加入4倍体积预冷的无水乙醇，4℃沉淀过夜，12000g/min， 离心40min，收集沉淀，重溶于超纯水中；

透析：装入透析袋(截留分子量14000Da)，4℃超纯水透析48h，每 8h换水；

冷冻干燥48h。

3.粗多糖纯度鉴定

采用紫外-可见光谱法分析粗多糖纯度。

称取提取出的粗多糖0.5mg，溶于5ml超纯水中，制成0.1mg/mL的多 糖溶液，用紫外可见光谱仪于190-350nm波段进行紫外扫描。如果在 260nm、280nm处有紫外特征吸收峰，则表明样品纯度不高；反之，则可以 认为样品基本不含核酸和蛋白质，保证了一定的纯度。

实验测得嗜热链球菌inm25-ST在260nm、280nm波长处没有紫外特征 吸收峰。

4.多糖含量测定

采用苯酚-浓硫酸法测定胞外多糖含量，用葡萄糖做标准曲线。取适 量分析纯葡萄糖置于鼓风干燥箱中80℃干燥2h，冷却后精确称取4mg葡 萄糖于100mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度，配制成葡萄糖标准溶液 (40ug/ml)。准确吸取葡萄糖标准溶液0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、 1.00、1.20、1.40、1.60、1.80ml，及样品备用液0.2ml，置于具塞刻度 试管中，再加入6％(v/v)苯酚溶液1ml,混匀后静置2min，迅速加入5mL 浓硫酸，混匀静置10min后30℃水浴加热15min，取出，置于冷水中冷却， 以空白溶液为对照，测定490nm波长处的吸光度，每组做3个平行。以葡 萄糖含量(mg/L)为横坐标，吸光度值(A490)为纵坐标绘制标准曲线。

将发酵乳样品中提取的多糖溶解于5ml水中，按上述方法测得胞外多 糖含量测定结果见下表4，实验测得嗜热链球菌inm25-ST胞外多糖产量为 476.3-644.0mg/L。

表4苯酚-硫酸法测定胞外多糖含量结果

样品编号	胞外多糖mg/L
		1	68.8-101.8
inm25-ST	476.3-644.0
		3	12-36.3

表5为现有专利中嗜热链球菌产胞外多糖的含量，相比可知，本专利 嗜热链球菌inm25-ST是产胞外多糖的优势菌株。

表5现有专利嗜热链球菌产胞外多糖的比较

虽然本发明已通过参考优选的实施例进行了描述，但是，本领域普通 技术人员应当了解，可以不限于上述实施例的描述，在权利要求书的范围 内，可作出形式和细节上的各种变化。

序列表

<110> 浙江一鸣食品股份有限公司 浙江大学

<120> 一种高产叶酸的乳酸菌组合物

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1502

<212> DNA

<213> 嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)

<400> 1

cctggctcag gacgaacgct ggcggcgtgc ctaatacatg caagtagaac gctgaagaga 60

ggagcttgct cttcttggat gagttgcgaa cgggtgagta acgcgtaggt aacctgcctt 120

gtagcggggg ataactattg gaaacgatag ctaataccgc ataacaatgg atgacacatg 180

tcatttattt gaaaggggca attgttccac tacaagatgg acctgcgttg tattagctag 240

taggtgaggt aatggctcac ctaggcgacg atacatagcc gacctgagag ggtgatcggc 300

cacactggga ctgagacacg gcccagactc ctacgggagg cagcagtagg gaatcttcgg 360

caatgggggc aaccctgacc gagcaacgcc gcgtgagtga agaaggtttt cggatcgtaa 420

agctctgttg taagtcaaga acgggtgtga gagtggaaag ttcacactgt gacggtagct 480

taccagaaag ggacggctaa ctacgtgcca gcagccgcgg taatacgtag gtcccgagcg 540

ttgtccggat ttattgggcg taaagcgagc gcaggcggtt tgataagtct gaagttaaag 600

gctgtggctc aaccatagtt cgctttggaa actgtcaaac ttgagtgcag aaggggagag 660

tggaattcca tgtgtagcgg tgaaatgcgt agatatatgg aggaacaccg gtggcgaaag 720

cggctctctg gtctgtaact gacgctgagg ctcgaaagcg tggggagcga acaggattag 780

ataccctggt agtccacgcc gtaaacgatg agtgctaggt gttggatcct ttccgggatt 840

cagtgccgca gctaacgcat taagcactcc gcctggggag tacgaccgca aggttgaaac 900

tcaaaggaat tgacgggggc ccgcacaagc ggtggagcat gtggtttaat tcgaagcaac 960

gcgaagaacc ttaccaggtc ttgacatccc gatgctattt ctagagatag aaagttactt 1020

cggtacatcg gtgacaggtg gtgcatggtt gtcgtcagct cgtgtcgtga gatgttgggt 1080

taagtcccgc aacgagcgca acccctattg ttagttgcca tcattcagtt gggcactcta 1140

gcgagactgc cggtaataaa ccggaggaag gtggggatga cgtcaaatca tcatgcccct 1200

tatgacctgg gctacacacg tgctacaatg gttggtacaa cgagttgcga gtcggtgacg 1260

gcgagctaat ctcttaaagc caatctcagt tcggattgta ggctgcaact cgcctacatg 1320

aagtcggaat cgctagtaat cgcggatcag cacgccgcgg tgaatacgtt cccgggcctt 1380

gtacacaccg cccgtcacac cacgagagtt tgtaacaccc gaagtcggtg aggtaacctt 1440

ttggagccag ccgcctaagg tgggacagat gattggggtg aagtcgtaac aaggtaagcc 1500

gt 1502

<210> 2

<211> 1526

<212> DNA

<213> 德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus)

<400> 2

gagtttgatc ctggctcatg acgatcgctg gcggcgtgcc taatacatgc aagtcgagcg 60

agctgaattc aaagattcct tcggggtgat ttgttggatg ctagcggcgg atgggtgagt 120

aacacgtggg caatctgccc taaagactgg gataccactt ggaaacaggt gctaataccg 180

gataacaaca tgaatcgcat gattcaagtt tgaaaggcgg cgtaagctgt cactttagga 240

tgagcccgcg gcgcattagc tagttggtgg ggtaaaggcc taccaaggca atgatgcgta 300

gccgagttga gagactgatc ggccacattg ggactgagac acggcccaaa ctcctacggg 360

aggcagcagt agggaatctt ccacaatgga cgcaagtctg atggagcaac gccgcgtgag 420

tgaagaaggt tttcggatcg taaagctctg ttgttggtga agaaggatag aggcagtaac 480

tggtctttat ttgacggtaa tcaaccagaa agtcacggct aactacgtgc cagcagccgc 540

ggtaatacgt aggtggcaag cgttgtccgg atttattggg cgtaaagcga gcgcaggcgg 600

aatgataagt ctgatgtgaa agcccacggc tcaaccgtgg aactgcatcg gaaactgtca 660

ttcttgagtg cagaagagga gagtggaatt ccatgtgtag cggtggaatg cgtagatata 720

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gagtacgacc gcaaggttga aactcaaagg aattgacggg ggcccgcaca agcggtggag 960

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acctagagat aggtggttcc cttcggggac gcagagacag gtggtgcatg gctgtcgtca 1080

gctcgtgtcg tgagatgttg ggttaagtcc cgcaacgagc gcaacccttg tctttagttg 1140

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tgacgtcaag tcatcatgcc ccttatgacc tgggctacac acgtgctaca atgggcagta 1260

caacgagaag cgaacccgcg agggtaagcg gatctcttaa agctgttctc agttcggact 1320

gcaggctgca actcgcctgc acgaagctgg aatcgctagt aatcgcggat cagcacgccg 1380

cggtgaatac gttcccgggc cttgtacaca ccgcccgtca caccatggaa gtctgcaatg 1440

cccaaagtcg gtgggataac ctttatagga gtcagccgcc taaggcaggg cagatgactg 1500

gggtgaagtc gtaacaaggt agccgt 1526

Claims (5)

1.一种高产叶酸的乳酸菌组合物，其特征在于：由德氏乳杆菌保加利亚亚种、嗜热链球菌和清酒乳杆菌组成，该配比组合物提高清酒乳杆菌在发酵时的叶酸代谢能力。

2.根据权利要求1所述的一种高产叶酸的乳酸菌组合物，其特征在于：德氏乳杆菌保加利亚亚种，菌株名为inm25-LB，菌株的保藏编号为CGMCC No.15445，保藏日期为：2018年03月12日，保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

3.根据权利要求1所述的一种高产叶酸的乳酸菌组合物，其特征在于：嗜热链球菌，菌株名为inm25-ST，菌株的保藏编号为CGMCC No.15446，保藏日期为：2018年03月12日，保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

4.根据权利要求1所述的一种高产叶酸的乳酸菌组合物，其特征在于，德氏乳杆菌保加利亚亚种inm25-LB和嗜热链球菌inm25-ST的菌数比为100:1～1:1。

5.根据权利要求1所述的一种高产叶酸的乳酸菌组合物，其特征在于，德氏乳杆菌保加利亚亚种inm25-LB和嗜热链球菌inm25-ST的混合物与清酒乳杆菌LZ217的菌数比为100：1～1:1。