CN111575207B - 一株分离自酸牦牛奶的副干酪乳杆菌及其应用 - Google Patents

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Abstract

本申请公开一株分离自酸牦牛奶的副干酪乳杆菌PC‑01(Lactobacillus paracasei PC‑01),其微生物保藏编号为CGMCCNo.17537,所述副干酪乳杆菌PC‑01具有优异的胃肠液耐受性和良好的胆盐耐受,模拟胃肠道消化存活率高,具备作为益生菌的基本条件;所述副干酪乳杆菌PC‑01发酵特性良好,具有有益的产酸能力、货架期内弱后酸、其发酵乳具有典型香气,可以作为益生菌添加到各类普通食品、保健品等中。

Description

一株分离自酸牦牛奶的副干酪乳杆菌及其应用
技术领域
本申请涉及微生物技术领域,特别涉及一株分离自酸牦牛奶的副干酪乳杆菌PC-01及其应用。
背景技术
由于人们居住环境、饮食习惯和生活节奏等的改变,许多新型疾病开始出现并威胁着人类健康。研究表明,一些疾病的发生常伴随肠道微生物菌群失调,如肠易激综合征、炎症性肠病、结肠癌以及肥胖和其他代谢失调等。人体肠道是一个具有生物多样性的微生态体系,其中生长着几百种细菌、古生菌以及真菌,通过不同微生物菌群之间的交互作用形成肠道微生物稳态。肠道微生物菌群在肠道的新陈代谢、肠道上皮细胞功能、免疫系统以及炎症反应信号通路等方面发挥着重要的作用。一般正常动物体内肠道微生物菌群组成相对恒定,而当机体受到外环境变化等的影响时,肠道微生态平衡被打破,微生物菌群组成也会随之发生改变。
发明内容
本申请的目的在于提供一株分离自酸牦牛奶的副干酪乳杆菌PC-01及其应用,用以调节肠道菌群。
第一方面,提供一株分离自西藏拉萨地区酸牦牛奶的副干酪乳杆菌PC-01,所述副干酪乳杆菌PC-01(Lactobacillus paracasei PC-01)源自西藏拉萨地区当雄县龙仁乡酸牦牛奶,是从358株副干酪乳杆菌中优选出的1株益生乳酸菌。所述副干酪乳杆菌PC-01已于2019年4月9日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,其保藏编号为CGMCCNo.17537,分类命名为副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei),保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所;该菌株的检测结果为存活。
本申请提供的副干酪乳杆菌PC-01能够对胃肠道消化液和胆盐有良好的耐受性,因此,本申请提供的副干酪乳杆菌PC-01属于益生菌。
第二方面,提供所述的副干酪乳杆菌PC-01在调节肠道菌群中的应用。
第三方面,提供所述的副干酪乳杆菌PC-01在制备乳制品和/或谷物制品发酵剂中的应用。
进一步地,所述副干酪乳杆菌PC-01可以作为乳制品发酵剂,例如可以作为酸奶、饮用型酸奶、发酵乳饮料或者发酵豆乳的发酵剂。
第四方面,提供一种益生菌菌剂,包括所述副干酪乳杆菌PC-01和/或所述副干酪乳杆菌PC-01的发酵代谢产物。该菌剂也可以用作缓解腹泻的药物。
第五方面,提供所述益生菌菌剂在调节肠道菌群中的应用。
第六方面,提供所述副干酪乳杆菌PC-01在调节肠道菌群产品中的应用。
进一步地,所述产品中副干酪乳杆菌PC-01的活菌数不低于1.00×106CFU/g或1.00×106CFU/mL。
第七方面,提供一种复合益生菌,所述复合益生菌包括所述副干酪乳杆菌PC-01,其中,所述副干酪乳杆菌PC-01可以为主要成分,也可以为辅助成分。
进一步地,所述复合益生菌可以为粉剂、片剂、溶液剂或者乳剂等所有医学可接受剂型。
进一步地,所述复合益生菌可以用作调节肠道菌群平衡的调节剂。所述复合益生菌用作调节肠道菌群平衡的调节剂时,可以单独使用,也可以与其它调节肠道菌群的物质配合使用。可选地,在所述复合益生菌中,还可以包括所述副干酪乳杆菌PC-01的代谢产物。
第八方面,提供一种包括所述副干酪乳杆菌菌剂的复合菌剂,在该复合菌剂中,所述副干酪乳杆菌菌剂可以为主要成分,也可以为辅助成分。该复合菌剂也可以用作缓解腹泻的药物。
由以上技术方案可知,本申请提供一株分离自西藏拉萨地区酸牦牛奶的副干酪乳杆菌PC-01(Lactobacillus paracasei PC-01),其微生物保藏编号为CGMCCNo.17537,所述副干酪乳杆菌PC-01具有优异的胃肠液耐受性和良好的胆盐耐受,模拟胃肠道消化存活率高,具备作为益生菌的基本条件;所述副干酪乳杆菌PC-01发酵特性良好,具有有益的产酸能力、货架期内弱后酸、其发酵乳具有典型香气,可以作为益生菌添加到各类普通食品、保健品等中。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为副干酪乳杆菌PC-01的电镜下形态图;
图2为副干酪乳杆菌PC-01在模拟胃肠液中存活率变化图;
图3为副干酪乳杆菌PC-01全基因组测序结果图;
图4为副干酪乳杆菌PC-01发酵乳在贮藏过程中pH值稳定性结果图;
图5为副干酪乳杆菌PC-01发酵乳在贮藏过程中滴定酸度稳定性结果图;
图6为副干酪乳杆菌PC-01发酵乳在贮藏过程中活菌数稳定性结果图;
图7为副干酪乳杆菌PC-01发酵乳饮料在发酵过程中pH值稳定性结果图;
图8为副干酪乳杆菌PC-01发酵乳饮料在贮藏过程中pH值稳定性结果图;
图9为副干酪乳杆菌PC-01发酵乳饮料在贮藏过程中滴定酸度稳定性结果图;
图10为副干酪乳杆菌PC-01发酵乳饮料在贮藏过程中活菌数稳定性结果图。
具体实施方式
本申请实施例提供一株分离自酸牦牛奶的副干酪乳杆菌PC-01,所述副干酪乳杆菌PC-01(Lactobacillus paracasei PC-01)源自西藏拉萨地区当雄县龙仁乡酸牦牛奶,是从358株副干酪乳杆菌中优选出的1株益生乳酸菌。所述副干酪乳杆菌PC-01已于2019年4月9日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,其保藏编号为CGMCCNo.17537,分类命名为副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei),保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所;该菌株的检测结果为存活。
本申请提供的副干酪乳杆菌PC-01能够对胃肠道消化液和胆盐有良好的耐受性,因此,本申请提供的副干酪乳杆菌PC-01属于益生菌。
在本申请中,采用PacBio SMRT第三代测序平台对副干酪乳杆菌PC-01全基因组进行测定,其基因组长度2840785bp,GC含量46.6%(其中,GC含量是指在DNA4种碱基中,鸟嘌呤和胞嘧啶所占的比率),染色体基因组含有2988个编码基因,74个RNA基因。
在本申请中,所述副干酪乳杆菌PC-01可以根据包括以下方法分离得到:将采集到的样品进行倍比稀释,得到10-1~10-2稀释梯度,吸取各梯度样品200μL均匀涂布于MRS固体培养基平皿内,37℃厌氧培养48-72h。挑取形态、大小、颜色不同的单克隆接种于液体培养基中,于37℃恒温培养箱培养24h。待菌株生长良好后,进行革兰氏染色、镜检。保存分离株,并提取菌株基因组DNA用于后续测定分析。
其中MRS培养基的组成是:大豆蛋白胨10g、牛肉膏5g、酵母粉4g、葡萄糖20g、Tween801ml、磷酸二氢钠2g、无水乙酸钠5g、柠檬酸三胺2g、硫酸锰0.02g、硫酸镁0.1g,蒸馏水1L,调节pH至6.2左右,琼脂15g,121℃、15min灭菌。
本申请对所述副干酪乳杆菌PC-01分子生物学鉴定方法包括:
将冷冻保存的供试菌株接种于TPY增菌液体培养基中,于30℃恒温培养24h,经TPY传代培养2~3代后,取2mL对数生长末期的菌体培养物置于无菌EP管内离心,经8000×g离心3min(4℃)后收集菌体,弃上清,采用乳酸菌专用CTAB冻融法提取菌株的基因组DNA。其中,TPY增菌培养液的组成是:乳糖10g、牛肉膏5g、酵母粉5g、酪蛋白胨10g、大豆蛋白胨5g、磷酸氢二钾2.5g、磷酸二氢钾2.5g、硫酸镁0.1g、吐温800.25g、L-半胱氨酸盐酸盐0.5g、15g琼脂、蒸馏水1L,121℃、15min灭菌。
采用PacBio SMRT第三代测序平台对副干酪乳杆菌PC-01全基因组进行测定,其基因组长度2840785bp,GC含量46.6%,74个RNA基因。
本申请提供的副干酪乳杆菌PC-01具有如下形态学特征:菌体在显微镜(5000倍电镜)下呈杆状,细胞成单、成对或成链状,如图1所示,不具鞭毛或纤毛,不会移动。
本申请实施例提供所述的副干酪乳杆菌PC-01在调节肠道菌群中的应用。
本申请实施例提供所述的副干酪乳杆菌PC-01在制备乳制品和/或谷物制品发酵剂中的应用。
进一步地,所述副干酪乳杆菌PC-01可以作为乳制品发酵剂,例如可以作为酸奶、饮用型酸奶、发酵乳饮料或者发酵豆乳的发酵剂。
本申请实施例提供一种益生菌菌剂,包括所述副干酪乳杆菌PC-01和/或所述副干酪乳杆菌PC-01的发酵代谢产物。该菌剂也可以用作缓解腹泻的药物。
本申请实施例提供所述益生菌菌剂在调节肠道菌群中的应用。
本申请实施例提供所述副干酪乳杆菌PC-01在调节肠道菌群产品中的应用。
进一步地,所述产品中副干酪乳杆菌PC-01的活菌数不低于1.00×106CFU/g或1.00×106CFU/mL。
本申请实施例提供一种复合益生菌,所述复合益生菌包括所述副干酪乳杆菌PC-01,其中,所述副干酪乳杆菌PC-01可以为主要成分,也可以为辅助成分。
进一步地,所述复合益生菌可以为粉剂、片剂、溶液剂或者乳剂等所有医学可接受剂型。
进一步地,所述复合益生菌可以用作调节肠道菌群平衡的调节剂。所述复合益生菌用作调节肠道菌群平衡的调节剂时,可以单独使用,也可以与其它调节肠道菌群的物质配合使用。可选地,在所述复合益生菌中,还可以包括所述副干酪乳杆菌PC-01的代谢产物。
本申请实施例提供一种包括所述副干酪乳杆菌菌剂的复合菌剂,在该复合菌剂中,所述副干酪乳杆菌菌剂可以为主要成分,也可以为辅助成分。该复合菌剂也可以用作缓解腹泻的药物。
为了证明本申请提供的副干酪乳杆菌PC-01具有对胃肠道消化液和胆盐有良好的耐受性做了以下实验。
实验例1副干酪乳杆菌PC-01消化液耐受性试验
耐酸、耐胆盐和粘附性是用来筛选益生菌的首要标准,因为益生菌被摄入人体后,在肠道内存活能力高低直接关系到益生菌能否发挥健康的促进作用,因此益生菌耐酸、耐胆盐和粘附性特性是益生菌作为功能性食补因子的重要指标。
1.菌种供试菌液的制备
将连续传代培养的培养周期末期的菌体离心(2500×g、7min)收集,用PBS(pH=7.2,0.8%NaCl、0.02%KH2PO4、0.115%Na2HPO4,W/V,PBS下同)洗涤2次后,菌体悬浮于10mLPBS中,然后用灭菌PBS梯度稀释至合适倍数后,采用MRS琼脂培养基平板倾注法计菌落总数,同时测定相应稀释度菌悬液在600nm处OD值。
依据上述各稀释度OD值与所对应的近似菌落数(CFU/ml)的线性关系,即可通过调整各菌体在600nm处OD值,使供试菌液菌体最终浓度为1~2×109CFU/ml。
2.人工胃液和肠液的制备
模拟胃肠液的制备方法:将PBS灭菌后,用1mol/LHCl调节pH值至2.5,加入3.0mg/ml胃蛋白酶,用0.22μm微孔滤膜过滤除菌,制成模拟人工胃液;将PBS灭菌后,用0.1mol/LNaOH调节pH值至8.0,加入0.1%胰蛋白酶和1.8%牛胆盐,用0.22μm微孔滤膜过滤除菌,制成人工模拟肠液。
3.供试菌株对人工胃液和肠液耐受能力测定
胃液耐受性:取1.0ml各供试菌液加入到9.0ml(2)中制得的人工胃液中,37℃消化3h,同时分别于0h、3h取样平板倾注法计数测定活菌数,每个样品做3个平行,将分离纯化得到的菌株活化培养两代,离心洗菌两次,收集菌体。
肠液耐受性:取1.0ml已经胃液消化3h的人工含菌胃液加入到9.0ml(2)中制得的人工肠液中,继续于37℃水浴培养,分别于进入肠液的4h和8h,即,与胃液消化的3h累加,如图2所示,所述菌液分别于7h和11h再次采样,用MRS琼脂培养基倾注法计数测定活菌数,每个样品做3个平行。
副干酪乳杆菌PC-01菌株经消化液耐受性试验,结果表明,副干酪乳杆菌PC-01能够以活的状态进入人体肠道,模拟胃肠道(人工胃液pH2.5/3h,肠液pH8.0/4-8h)消化存活率为88.6%,其具有较强的耐性和耐酸生长特性、能够耐受人工胃肠消化液,抵御消化道环境的不利影响并在肠道内很好的黏附和定植,结果如图2所示。
4.胆盐耐受能力
在菌株传代过程中,每培养200代测定菌株的胆盐耐受能力。
实验方法:将处于培养周期末期的试验菌株按1%接种量接入含牛胆盐MRS培养基(0.3%Oxgall+0.05%半胱氨酸+0.2%巯基乙酸钠)中,以不加牛胆盐的MRS为对照。将试验菌株置于37℃水浴培养,每小时取样于620nm测定其吸光值,至吸光值增加0.3个单位为止。试验菌株耐受胆盐的能力以延滞期的长短为评价标准,其中试验组与空白组菌株吸光值增加0.3个单位所需时间的差值即为延迟时间(LT,lagtime),每个菌株均做三个平行试验。
分离纯化得到的菌株活化培养三代后,以1%的接种量分别接种到含0.3%牛胆盐(培养基中添加0.2g/100mL巯基乙酸钠,0.3g/100mL牛胆盐)和不含牛胆盐的MRS培养基中,后者作为空白对照,置于37℃厌氧培养。培养期间,每隔一小时取样于620nm测定OD值,每组测定三个平行,直到OD值增加0.3个单位及以上时停止培养。并计算菌株在含有胆盐和不含胆盐的MRS培养基中生长,OD值增加0.3个单位所需的时间,二者之差被称为延迟时间(LT)。
本申请的副干酪乳杆菌PC-01在不含胆盐的培养基中培养,OD620nm值增加0.3个单位所需的时间为2.66h,在含有胆盐的培养基中所需的时间为3.26h,延迟时间为0.6h。
在本领域中,一般认为,抗性菌株(延迟时间≤0.25h),耐受性菌株(0.25h<延迟时间≤0.67h),弱耐受性菌株(0.67h<延迟时间<1.00h),敏感菌株(延迟菌株≥1.00h)。因此,副干酪乳杆菌PC-01的延迟时间为0.6h,为耐受性菌株。
对于活细胞来说,胆盐能破坏活细胞的细胞膜,并且在小肠中对益生菌存活性影响最大的因素就是胆盐,所以,对胆盐的耐受性是评价益生菌的重要指标之一。由本实施例可知,分离自酸牦牛奶的副干酪乳杆菌PC-01具有良好的益生特性。
5.菌株糖发酵实验
糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应,在肠道细菌的鉴定上尤为重要。绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源,但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异。根据API50CH标准化鉴定系统的规范流程进行操作。
本申请提供的鼠李糖乳杆菌副干酪乳杆菌PC-01可利用乳糖及发酵多种单糖,如葡萄糖、阿拉伯糖以及麦芽糖等,具体实验结果如表1所示。
表1副干酪乳杆菌PC-01糖发酵实验结果
Figure BDA0002506985810000061
其中,“+”表示能够被利用的底物,“-”表示不能被利用的底物
由表1可知,副干酪乳杆菌PC-01可利用D/L-阿拉伯糖、D-葡萄糖、D-半乳糖、木糖醇等,不可利用甘露醇、L-木糖、淀粉和糖原等。
综上所述,本发明的副干酪乳杆菌PC-01可以很好的利用乳糖并具有良好的胃肠液和胆盐耐受性,能够以活的状态进入人体肠道,发挥健康功效,是一株可以广泛应用于普通食品和保健品等的益生菌。
实验例2副干酪乳杆菌PC-01基因组分析
利用PacBio SMRT三代测序技术完成性能差异显著乳酸菌的基因组重测序,构建副干酪乳杆菌PC-01核心基因组和泛基因组,有效结合变异位点信息定位关键功能基因,阐释其不同功能特性差异发生的分子机制,建立高效筛选技术体系。
结果表明,副干酪乳杆菌PC-01基因组长度2,840,785bp,GC含量46.6%,携带pPC01(72,978bp)和pPC02(36,212bp)2个质粒;含有2988个编码基因,15个rRNA和59个tRNA基因;质粒pPC01和pPC02分别含有122个和79个编码基因;功能基因分析表明:编码enterolysinA细菌素合成基因,与耐酸性相关蛋白H(+)-transportingATPase、Ornithinedecarboxylase、ChaperoneproteinDnaK、HeatshockproteinGrpE/GroEL/GroES合成基因,完整的胞外多糖合成相关基因簇epsABCDEFH,结果如图3所示。
实施例1副干酪乳杆菌PC-01在发酵乳中的应用
随着人们健康意识的不断发展,消费功能性食品成为了现在市场的主流趋势,而益生菌发酵食品是功能性食品中尤为重要的一部分。在众多发酵食品中,发酵乳能够作为载体,将益生菌通过胃液肠液传递到人体肠道内,从而促进菌种的益生功效与发酵乳自身的保健作用完美结合。
具体实验方法:将白砂糖和脱脂奶粉混匀后加入60℃蒸馏水中,充分搅拌15min,然后在60℃,20Mpa均质后,95℃、5min立即灭菌,冷却至37℃,接菌副干酪乳杆菌PC-01(2×106CFU/mL),37℃恒温发酵8h制得一种富含副干酪乳杆菌PC-01的益生菌发酵乳。
益生菌发酵乳产品在货架期pH值、滴定酸度和益生菌活菌数的变化稳定性是衡量其质量的重要指标。本申请所述贮藏评估,是将益生菌发酵乳分别在4℃和15℃贮藏,测定其pH值、滴定酸度和活菌数(每7d进行一次)变化情况,并进行数据统计。
具体地,操作如下:准确称取5g发酵乳样品,加40ml煮沸后冷却的蒸馏水,3滴0.5%酚酞指示剂,摇匀后用标准0.1mol/L NaOH滴定至样品呈微红,30s内不褪色,记录NaOH消耗的体积数,计算可得滴定酸度(T°)。
副干酪乳杆菌PC-01活菌数测定采用固体MRS+万古霉素(1mg/1000mL)培养基对副干酪乳杆菌进行选择培养,倾注法厌氧37℃培养(72±2)h。
实验结果表明,发酵乳在贮藏期间(0~21d)具有较高的活菌数,仍保持2×108CFU/mL以上,成品酸度适宜,味道可口,结果如图4-图6所示。
实施例2副干酪乳杆菌PC-01在发酵豆乳中的应用
豆乳中富含蛋白质、膳食纤维、矿物质、维生素,以及大量人体必需的亚油酸和亚麻酸。发酵豆乳是豆制品的重要组成部分,是在豆浆基础上接种乳酸菌发酵而成的植物性发酵食品。经乳酸菌发酵作用,发酵豆乳可提高脂质代谢,不会引起肥胖;发酵后的大豆蛋白质更容易消化吸收,且能提高机体免疫力并有效降低血清中总胆固醇含量;被分解的大豆低聚糖能促进益生菌增殖,保持肠道健康。但是,发酵豆乳目前存在菌种适应性不强、组织状态差、发酵风味不佳以及具有豆腥味等问题。将副干酪乳杆菌PC-01添加到发酵豆乳中可以很好的改善豆乳发酵状态和风味,有效去除豆腥味。
实验方法:水预热至65℃后加入大豆粉,混料均匀后55℃水合30min,加入8%的白砂糖和稳定剂,均质后杀菌(90℃10min),冷却41~43℃接菌发酵,其中,接菌所用菌种为嗜热链球菌S10(5×106CFU/g)和益生菌副干酪乳杆菌PC-01(2×106CFU/g),发酵终点至pH4.50及以下,约发酵6小时,后熟后,4℃留样每间隔7天测定货架期内酸度和益生菌活菌数变化,结果如表所示:
表2发酵豆乳在4℃贮藏期间酸度和副干酪乳杆菌PC-01活菌数的变化
Figure BDA0002506985810000081
由表2的测定结果可知,发酵豆乳中添加益生菌副干酪乳杆菌PC-01没有加重豆乳的后酸化现象,几乎没有影响;发酵结束后副干酪乳杆菌PC-01的活菌数达到109CFU/g且在贮藏期间均保持较高的活菌数,证明分离自母乳的副干酪乳杆菌PC-01具有良好的益生特性。
实施例3副干酪乳杆菌PC-01在发酵乳饮料中的应用
目前,用于活性乳饮料发酵的益生菌以保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌和双歧乳杆菌等乳酸菌为主。本实施例用副干酪乳杆菌PC-01发酵制得一种益生菌乳饮料,并以商业菌种副干酪乳杆菌LC-01为对照。
具体实验方法:将25%的脱脂奶粉、10%的白砂糖与65%的蒸馏水充分搅拌混合均匀,在95℃条件下褐变180min后,冷却至37℃,实验组接菌副干酪乳杆菌PC-01(5×106CFU/mL),对照组接入商业菌种副干酪乳杆菌LC-01(5×106CFU/mL),37℃恒温发酵直至pH低于3.80或滴定酸度高于180°T时终止,发酵约72h,后熟12h。将发酵基料(25%)与无菌的糖浆(糖10%,水65%)混合,经调酸、均质等工艺制得一款富含副干酪乳杆菌PC-01的益生菌发酵乳饮料。本申请所述贮藏评估,是将益生菌发酵乳饮料分别在4℃、10℃、25℃贮藏,测定其pH值、滴定酸度和活菌数(每7d进行一次)进行稳定剂比较。
结果表明,发酵过程中,副干酪乳杆菌LC-01和副干酪乳杆菌PC-01的pH值变化趋势一致,发酵72h后,无显著差异(P<0.05)。分别于4℃、10℃和25℃贮藏,副干酪乳杆菌LC-01和副干酪乳杆菌PC-01的pH值、滴定酸度和活菌数变化趋势一致,10℃28d活菌数>500亿/100mL,结果如图7-10所示。
由以上技术方案可知,本申请提供一株分离自西藏拉萨地区酸牦牛奶的副干酪乳杆菌PC-01(Lactobacillus paracasei PC-01),其微生物保藏编号为CGMCCNo.17537,所述副干酪乳杆菌PC-01具有优异的胃肠液耐受性和良好的胆盐耐受,模拟胃肠道消化存活率高,具备作为益生菌的基本条件;所述副干酪乳杆菌PC-01发酵特性良好,具有有益的产酸能力、货架期内弱后酸、其发酵乳具有典型香气,可以作为益生菌添加到各类普通食品、保健品等中。
本领域技术人员在考虑说明书及实践这里公开的申请后,将容易想到本申请的其它实施方案。本申请旨在涵盖本申请的任何变型、用途或者适应性变化,这些变型、用途或者适应性变化遵循本申请的一般性原理并包括本申请未公开的本技术领域中的公知常识或惯用技术手段。说明书和实施例仅被视为示例性的,本申请的真正范围和精神由下面的权利要求指出。
应当理解的是,本申请并不局限于上面已经描述并在附图中示出的精确结构,并且可以在不脱离其范围进行各种修改和改变。本申请的范围仅由所附的权利要求来限制。

Claims (6)

1.一株分离自酸牦牛奶的副干酪乳杆菌PC-01,其特征在于,所述副干酪乳杆菌PC-01(Lactobacillus paracasei PC-01)已于2019年4月9日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,其保藏编号为CGMCC No.17537,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
2.权利要求1所述的副干酪乳杆菌PC-01在制备乳制品和/或谷物制品发酵剂中的应用。
3.一种益生菌菌剂,其特征在于,包括权利要求1所述的副干酪乳杆菌PC-01。
4.权利要求3所述的益生菌菌剂在制备调节肠道菌群的产品中的应用。
5.权利要求1所述的副干酪乳杆菌PC-01在制备调节肠道菌群产品中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用,所述产品中副干酪乳杆菌PC-01的活菌数不低于1.00×106CFU/g或1.00×106CFU/mL。
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Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113699063B (zh) * 2021-08-10 2023-02-14 华南理工大学 一株降胆固醇副干酪乳杆菌及其应用
CN113913346B (zh) * 2021-11-22 2022-07-15 江南大学 一种副干酪乳杆菌jn-1及其应用
CN114134089B (zh) * 2021-12-31 2023-11-17 内蒙古蒙牛乳业(集团)股份有限公司 一种具有高活性的复合菌剂及其在食品生产中的应用
CN114805474B (zh) * 2022-04-02 2024-03-22 中国海洋大学 一株干酪乳杆菌fn345及其在制备预防辅食期婴儿腹泻菌剂中的应用
CN115261264A (zh) * 2022-07-07 2022-11-01 内蒙古农业大学 一株副干酪乳酪杆菌pc804及其应用
CN115340965A (zh) * 2022-07-07 2022-11-15 内蒙古农业大学 一株副干酪乳酪杆菌pc724及其应用
CN116814481B (zh) * 2023-06-09 2024-04-09 内蒙古农业大学 一株源自酸马奶的益生副干酪乳酪杆菌pc646及其人工智能筛选方法
CN118638696A (zh) * 2024-08-14 2024-09-13 内蒙古蒙牛乳业(集团)股份有限公司 副干酪乳酪杆菌及其发酵产品在提高消化酶活性中的应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108373984A (zh) * 2018-04-09 2018-08-07 北京博锦元生物科技有限公司 一种副干酪乳杆菌及其应用
CN110591952A (zh) * 2019-09-24 2019-12-20 扬州大学 具有分解油脂能力的副干酪乳杆菌及其应用
CN110819548A (zh) * 2018-08-08 2020-02-21 深圳市肽素生物技术有限公司 副干酪乳杆菌株lbp-ye01、其培养物、其菌液、传代菌株挑选和保藏方法及其应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108373984A (zh) * 2018-04-09 2018-08-07 北京博锦元生物科技有限公司 一种副干酪乳杆菌及其应用
CN110819548A (zh) * 2018-08-08 2020-02-21 深圳市肽素生物技术有限公司 副干酪乳杆菌株lbp-ye01、其培养物、其菌液、传代菌株挑选和保藏方法及其应用
CN110591952A (zh) * 2019-09-24 2019-12-20 扬州大学 具有分解油脂能力的副干酪乳杆菌及其应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Effects of Lactobacillus paracasei 01 fermented milk beverage on protection of intestinal epithelial cell in vitro;CHEN Y P等;《J Sci Food Agric》;20150728;2154-2160 *
副干酪乳杆菌LC01对人体肠道菌群的调节作用;田丰伟等;《中国食品学报》;20181031;25-30 *
副干酪乳杆菌PC-01益生特性和安全性研究;刘凯龙等;《中国食品学报》;20211130;47-52 *

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