CN110353275A - 一种超声辅助制备大豆分离蛋白-香菇多糖接枝物的方法 - Google Patents

一种超声辅助制备大豆分离蛋白-香菇多糖接枝物的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种超声辅助制备大豆分离蛋白‑香菇多糖接枝物的方法，属于食品/农产品及其副产物的加工、蛋白改性技术领域。该方法以大豆分离蛋白、香菇多糖为原料，在超声条件下使两者发生糖基化反应，再经离心、透析、冷冻干燥，得到大豆分离蛋白‑香菇多糖接枝物。该方法条件温和、安全性高、接枝效率高，操作简单，易于工业化生产。该法所制备的接枝物与原大豆蛋白相比，其溶解性、乳化性、起泡性以及体外清除自由基活性均得到改善。

Description

一种超声辅助制备大豆分离蛋白-香菇多糖接枝物的方法
技术领域
本发明属于食品/农产品及其副产物的加工、蛋白改性技术领域，涉及一种超声辅助湿热法制备大豆分离蛋白-香菇多糖接枝物的方法。
背景技术
大豆分离蛋白是一种重要的植物蛋白，主要是由球蛋白(95％)和清蛋白(5％)组成，其氨基酸组成均衡，富含赖氨酸和色氨酸。大豆分离蛋白具有较好的乳化能力、高营养性、成膜性，被广泛应用于食品工业的各个领域。然而，大豆分离蛋白在加工生产过程中，会发生不同程度的变性，导致溶解性及其他功能性质变差，限制了其进一步的应用。因此将大豆分离蛋白进行改性，以满足不同领域的应用具有重要意义。
目前国内外研究学者通过大量改性方式改善蛋白的功能性质，以获得高附加值的新型大豆蛋白产品。大量文献报道了改性大豆分离蛋白的方法，包括物理法、化学法、酶法等。其中，美拉德反应是一种非常有潜力的改性大豆分离蛋白方法，大量研究表明，大豆分离蛋白能够与麦芽糊精、葡聚糖、阿拉伯树胶等多糖发生美拉德反应。结果表明，接枝物的乳化活性及其他功能性质均有显著提高。此外，超声辅助糖基化反应引起了广大研究者的注意，由于超声波能够打开蛋白的结构，暴露蛋白分子内部的疏水基团，这有利于加快蛋白质美拉德反应进程、提高反应产物的功能特性。然而，关于超声辅助制备大豆分离蛋白-香菇多糖接枝物的研究还未见报道。本发明采用超声辅助湿热法制备的接枝物具有更好的溶解性、起泡性、乳化性和抗氧化活性相较于传统湿热法制备的接枝物。
超声辅助湿热法不仅条件温和、安全性高、接枝效率高，而且操作简单，易于实现大规模的工业化生产，该法所制备的接枝物与原蛋白相比，其溶解性、乳化性、起泡性等均显著提高，为该接枝物应用于食品、药品工业提供了理论基础。
发明内容
本发明公开了一种超声辅助制备大豆分离蛋白-香菇多糖接枝物的方法，属于食品/农产品及其副产物的加工、蛋白改性技术领域。具体步骤如下：以大豆分离蛋白、香菇多糖为原料，混合均匀后，在超声条件下反应，使大豆分离蛋白与香菇多糖发生糖基化反应，然后，混合物经过离心、透析、冷冻干燥，得到大豆分离蛋白-香菇多糖接枝物。该方法条件温和、安全性高、接枝效率高，操作简单，易于实现大规模工业化生产。该法所制备的接枝物与原蛋白相比，其溶解性、乳化性、起泡性等得到显著地改善，为该接枝物在食品、医药品等领域的应用提供理论基础和参考，同时也拓宽了大豆分离蛋白和香菇多糖的应用范围。
本发明的技术方案为：
一种超声辅助制备大豆分离蛋白-香菇多糖接枝物的方法，按照以下步骤进行：
(1)称取大豆分离蛋白，加入蒸馏水配置成2％-8％(w/v)悬浊液，按照4:1-1:4(w/w)的比例加入香菇多糖，混合均匀后，调节混合溶液的pH值为7-12。
(2)将步骤(1)得到的混合液置于超声水浴中，控制超声功率100-300W和水浴温度50-90℃的条件下，糖基化反应10-60min后，将混合液置于冰浴中冷却至室温，在4500r/min转速下离心10min，获得上清液，再经过透析脱盐、浓缩、冷冻干燥，得到大豆分离蛋白-香菇多糖接枝物。
其中步骤(1)中所述的超声装置为狭缝发散式超声，狭缝发散式超声是指超声处理腔体呈狭缝状的超声装置，具有超声作用强，能量集中，且超声作用均匀的特点。所述大豆分离蛋白的纯度≥98％。
其中步骤(2)中所述的透析时间为48h。
本发明的有益效果：
(1)本发明首次利用了狭缝发散式超声辅助湿热法制备大豆分离蛋白-香菇多糖接枝物，显著地改善了蛋白与糖的接枝效率，缩短了反应时间。
(2)本发明获得的大豆分离蛋白-香菇多糖接枝物，具有较好的功能特性和抗氧化活性，而且具有天然高效、低毒等特点。
(3)本发明以大豆分离蛋白作为原料，提高了大豆分离蛋白的利用率。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面对本发明的具体实施方式做详细的说明。
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其它不同于在此描述的方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
其次，此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本发明至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其它实施例互相排斥的实施例。
本发明中溶解性、乳化性、起泡性被用于评估接枝物的功能特性。ABTS自由基的清除能力被用于评估接枝物的抗氧化能力。
实施例1
取大豆分离蛋白5g，加入蒸馏水配置成2％(w/v)悬浊液，按照4:1(w/w)的比例加入香菇多糖，混合均匀后，调节溶液的pH值为7。然后，将得到的混合液置于超声水浴中，在50℃、100W的条件下，糖基化反应10min后，将混合液置于冰浴中冷却至室温，在4500r/min转速下离心10min，获得上清液，再经过透析脱盐、浓缩、冷冻干燥，得到大豆分离蛋白-香菇多糖接枝物，其接枝度、溶解性、乳化能力、起泡能力分别为14.61％、22.15％、21.09％、27.34％。此外，2mg/mL大豆分离蛋白-香菇多糖接枝物对ABTS自由基的清除率为75.21％。
实施例2
取大豆分离蛋白5g，加入蒸馏水配置成8％(w/v)悬浊液，按照1:4(w/w)的比例加入香菇多糖，混合均匀后，调节溶液的pH值为12。然后，将得到的混合液置于超声水浴中，在90℃、300W的条件下，糖基化反应60min，其后续处理同实施例1，得到大豆分离蛋白-香菇多糖接枝物，其接枝度、溶解性、乳化能力、起泡能力分别为16.41％、27.03％、22.19％、29.02％。此外，2mg/mL大豆分离蛋白-香菇多糖接枝物对ABTS自由基的清除率为78.14％。
实施例3
取大豆分离蛋白5g，加入蒸馏水配置成5％(w/v)悬浊液，按照1:1(w/w)的比例加入香菇多糖，混合均匀后，调节溶液的pH值为10。然后，将得到的混合液置于超声水浴中，在80℃、250W的条件下，糖基化反应40min，其后续处理同实施例1，得到大豆分离蛋白-香菇多糖接枝物。接枝物的接枝度、溶解性、乳化能力、起泡能力分别为19.23％、35.05％、23.19％、32.51％。此外，2mg/mL大豆分离蛋白-香菇多糖接枝物对ABTS自由基的清除率为85.76％。
对比例1
取大豆分离蛋白5g，加入蒸馏水配置成2％(w/v)悬浊液，按照4:1(w/w)的比例加入香菇多糖，混合均匀后，调节溶液的pH值为7。然后，将得到的混合液置于水浴中，在50℃下糖基化反应2h，其后续处理同实施例1，得到大豆分离蛋白-香菇多糖接枝物，其接枝度、溶解性、乳化能力、起泡能力分别为10.35％、18.95％、17.29％、21.54％。此外，2mg/mL大豆分离蛋白-香菇多糖接枝物对ABTS自由基的清除率为61.01％。
对比例2
取大豆分离蛋白5g，加入蒸馏水配置成8％(w/v)悬浊液，按照1:4(w/w)的比例加入香菇多糖，混合均匀后，调节溶液的pH值为12。然后，将得到的混合液置于水浴中，在90℃下糖基化反应2h，其后续处理同实施例1，得到大豆分离蛋白-香菇多糖接枝物，其接枝度、溶解性、乳化能力、起泡能力分别为14.15％、20.34％、19.09％、23.14％。此外，2mg/mL大豆分离蛋白-香菇多糖接枝物对ABTS自由基的清除率为67.31％。
对比例3
取大豆分离蛋白5g，加入蒸馏水配置成5％(w/v)悬浊液，按照1:1(w/w)的比例加入香菇多糖，混合均匀后，调节溶液的pH值为10。然后，将得到的混合液置于水浴中，在80℃下糖基化反应2h，其后续处理同实施例1，得到大豆分离蛋白-香菇多糖接枝物，其接枝度、溶解性、乳化能力、起泡能力分别为16.27％、25.24％、20.15％、25.21％。此外，2mg/mL大豆分离蛋白-香菇多糖接枝物对ABTS自由基的清除率为69.85％。
检测实施例1中得到的大豆分离蛋白-香菇多糖接枝物的接枝度、溶解性、乳化能力、起泡能力和ABTS自由基的清除率，与湿热法制备的接枝物进行比较，结果如下表1所示：
表1.不同处理对大豆分离蛋白-香菇多糖接枝物的接枝度和功能特性的影响
湿热处理 超声辅助湿热
接枝度(％) 10.35％ 14.61％
溶解性(％) 18.95％ 22.15％
乳化能力(％) 17.29％ 21.09％
起泡能力(％) 21.54％ 27.34％
ABTS自由基清除率(％) 61.01％ 75.21％
检测实施例2中得到的大豆分离蛋白-香菇多糖接枝物的接枝度、溶解性、乳化能力、起泡能力和ABTS自由基的清除率，与湿热法制备的接枝物进行比较，结果如下表2所示：
表2.不同处理对大豆分离蛋白-香菇多糖接枝物的接枝度和功能特性的影响
湿热处理 超声辅助湿热
接枝度(％) 14.15％ 16.41％
溶解性(％) 20.34％ 27.03％
乳化能力(％) 19.09％ 22.19％
起泡能力(％) 23.14％ 29.02％
ABTS自由基清除率(％) 67.31％ 78.14％
检测实施例3中得到的大豆分离蛋白-香菇多糖接枝物的接枝度、溶解性、乳化能力、起泡能力和ABTS自由基的清除率，与湿热法制备的接枝物进行比较，结果如下表3所示：
表3.不同处理对大豆分离蛋白-香菇多糖接枝物的接枝度和功能特性的影响
湿热处理 超声辅助湿热
接枝度(％) 16.27％ 19.23％
溶解性(％) 25.24％ 35.05％
乳化能力(％) 20.15％ 23.19％
起泡能力(％) 25.21％ 32.51％
ABTS自由基清除率(％) 69.85％ 85.76％
通过上表可以看出，超声辅助湿热处理可以显著的提高大豆分离蛋白-香菇多糖接枝物的接枝度、溶解性、乳化能力、起泡能力和ABTS自由基的清除能力。
本发明通过目前被认为是最优选和最实际的实施例描述，应当能被理解的是，本发明不限于公开的实施例。相反，其目的是涵盖随附权利要求精神和范围内的各种修改和等效安排，其范围是给予最广泛的解释，以包含在法律下允许的所有这样的修改和同等结构。

Claims (3)

1.一种超声辅助制备大豆分离蛋白-香菇多糖接枝物的方法，其特征在于按照以下步骤进行：
(1)称取大豆分离蛋白，加入蒸馏水配置成2％-8％(w/v)悬浊液，按照4:1-1:4(w/w)的比例加入香菇多糖，混合均匀后，调节混合溶液的pH值为7-12；
(2)将步骤(1)得到的混合液置于超声水浴中，控制水浴温度50-90℃、超声功率100-300W下，糖基化反应10-60min后，将混合液置于冰浴中冷却至室温，在4500r/min转速下离心10min，获得上清液，再经过透析脱盐、浓缩、冷冻干燥，得到大豆分离蛋白-香菇多糖接枝物。
2.根据权利要求1所述的一种超声辅助制备大豆分离蛋白-香菇多糖接枝物的方法，其特征在于其中步骤(1)中所述的超声装置为狭缝发散式超声，狭缝发散式超声是指超声处理腔体呈狭缝状的超声装置，所述大豆分离蛋白的纯度≥98％。
3.根据权利要求1所述的一种超声辅助制备大豆分离蛋白-香菇多糖接枝物的方法，其特征在于其中步骤(2)中所述的透析时间为48h。
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