CN110333215A - 一种水产品中孔雀石绿和结晶紫的检测方法 - Google Patents

一种水产品中孔雀石绿和结晶紫的检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN110333215A
CN110333215A CN201811636512.1A CN201811636512A CN110333215A CN 110333215 A CN110333215 A CN 110333215A CN 201811636512 A CN201811636512 A CN 201811636512A CN 110333215 A CN110333215 A CN 110333215A
Authority
CN
China
Prior art keywords
aquatic products
added
malachite green
crystal violet
detection method
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201811636512.1A
Other languages
English (en)
Inventor
曾勇明
陈启振
陈宏炬
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Xiamen Pushi Nano Technology Co Ltd
Original Assignee
Xiamen Pushi Nano Technology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Xiamen Pushi Nano Technology Co Ltd filed Critical Xiamen Pushi Nano Technology Co Ltd
Priority to CN201811636512.1A priority Critical patent/CN110333215A/zh
Publication of CN110333215A publication Critical patent/CN110333215A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/65—Raman scattering
    • G01N21/658—Raman scattering enhancement Raman, e.g. surface plasmons

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)

Abstract

本发明公开了一种水产品中孔雀石绿和结晶紫的检测方法，包括以下步骤：1)样品处理：取0.1‑10g粉碎后的水产品于烧杯中，加入1‑20mL的极性溶液超声提取；所述的水产品和极性溶剂的质量体积比为1:0.5至1:20，将提取液转移至分液漏斗中，加入2‑5mL有机溶剂萃取，振荡，静置分层，将有机相转移至挥发瓶中氮气吹干；2)样品洗脱：取0.1‑2mL的极性溶液加入上述挥发瓶中，振荡5‑20s作为待测液备用；3)拉曼检测：取20‑500μL步骤2)中待测液于拉曼样品池中，加入50‑200μL金属溶胶及50‑200μL的浓度为0.01M至饱和的无机盐絮凝剂混匀，然后放在拉曼光谱仪检测室内进行检测。本检测方法简便快捷、费用低廉、可实现现场使用的水产品中孔雀石绿和结晶紫的拉曼检测方法。

Description

一种水产品中孔雀石绿和结晶紫的检测方法
技术领域
本发明涉及一种水产品中孔雀石绿和结晶紫的检测方法，属于食品检测领域。
背景技术
孔雀石绿和结晶紫是人工合成的三苯甲烷类碱性染料，自20世纪30年代起就被广泛用于渔业生产，防治水霉病。实验研究表明,孔雀石绿或结晶紫进入人或动物机体后,可以通过生物转化,还原代谢成脂溶性的无色孔雀石绿(LMG,也叫隐性孔雀石绿)或无色结晶紫(LCV，也叫隐性结晶紫)。LMG、LCV具有高毒性.高残留和致癌、致突变等副作用，严重威胁着消费者的身体健康，是一种极为有害的消毒剂。因此，自20世纪90年代开始，世界上多数国家相继禁止在可食用的鱼类养殖中使用孔雀石绿和结晶紫，仅允许在观赏性鱼类养殖中合理使用。我国2002年将孔雀石绿和结晶紫列入《食品动物禁用的兽药及其化合物清单》禁用于所有食用动物的养殖。由于孔雀石绿和结晶紫是重要的工业原料，难以禁止生产，特别是其价格低廉，对水产动物水霉病有特效，使得控制其使用有一定难度。目前检测孔雀石绿和结晶紫的方法很多，国家标准检测方法为高效液相色谱法、液相色谱-串联质谱法，检测定量限分别为2.0μg/kg、0.5μg/kg。2017年食药总局关于发布《水产品中孔雀石绿的快速检测胶体金免疫层析法》(KJ201701)快速检测方法的公告(2017年第58号)，公布了一种采用胶体金免疫层析法检测水产品中孔雀石绿的快速检测方法，检出限为2μg/kg。中国专利CN103105386A《一种水体及水产品中孔雀石绿的检测方法》公开了一种磁性材料表面制备孔雀石绿的分子印迹材料，并应用于养殖水体及水产品中痕量孔雀石绿的分离富集，结合拉曼增强技术进行快速检测。Yuanyuan Zhang的在文献《A novel approach to determineleucomalachite green and malachite green in fish fillets with surface-enhanced Raman spectroscopy (SERS)and mμLtivariate analyses》中介绍了一种通过表面增强拉曼光谱检测水产品中的孔雀石绿，文章中介绍将隐性孔雀石绿氧化成孔雀石绿后，在采用表面增强拉曼光谱进行检测。
但上述技术存在仪器贵重、成本高、方法复杂、检测周期长等缺陷，难以满足对水产品养殖、批发及零售领域的孔雀石绿和结晶紫现场快速测定的需求。
发明内容
本发明的目的是提供一种操作简便快捷、费用低廉、可实现现场使用的水产品中孔雀石绿和结晶紫的拉曼检测方法。
本发明解决技术问题的技术方案之一为：
一种水产品中孔雀石绿和结晶紫的检测方法，包括以下步骤：
1)样品处理：取0.1-10g粉碎后的水产品于烧杯中，加入1-20mL的极性溶液超声提取；或者取0.1-10g水产品和1-20mL的极性溶液一起匀浆处理后加入烧杯，再超声提取；所述的水产品和极性溶剂的质量体积比为1:0.5至1:20，将提取液转移至分液漏斗中，加入2-5mL有机溶剂萃取，振荡，静置分层，将有机相转移至挥发瓶中氮气吹干；
2)样品洗脱：取0.1-2mL的极性溶液加入上述挥发瓶中，振荡5-20s作为待测液备用；
3)拉曼检测：取20-500μL步骤2)中待测液于拉曼样品池中，加入50-200μL金属溶胶及50-200μL的浓度为0.01M至饱和的无机盐絮凝剂混匀，然后放在拉曼光谱仪检测室内进行检测。
本发明解决技术问题的技术方案之二为：
一种水产品中孔雀石绿和结晶紫的检测方法，包括以下步骤：
1)样品处理：取0.1-10g粉碎后的水产品于烧杯中，加入1-20mL的极性溶液超声提取；或者取0.1-10g水产品和1-20mL的极性溶液一起匀浆处理后加入烧杯，再超声提取；所述的水产品和极性溶剂的质量体积比为1:0.5至1:20，将提取液转移至分液漏斗中，加入2-5mL有机溶剂萃取，静置分层，将有机相转移至另一分液漏斗中，加入0.2-2mL二次水，振荡，静置分层，下层溶液作为待测样品；
2)拉曼检测：取20-500μL待测液于拉曼样品池中，加入50-200μL金属溶胶及50-200μL的浓度为0.01M至饱和的无机盐絮凝剂混匀，然后放在拉曼光谱仪检测室内进行检测。
优选地，所述的极性溶剂为甲醇，乙醇，乙腈，二甲亚砜，N,N-二甲基甲酰胺，二次水或其混合溶液。
优选地，所述的二次水含0.1mM-1M酸或碱。
优选地，所述的提取液加入有机溶剂萃取前，先加入N-丙基乙二胺、磷酸烯醇式丙酮酸、石墨化碳、氧化铝、无水硫酸镁、无水硫酸钠或其混合物振荡吸附。
优选地，所述的有机溶剂为二氯甲烷、石油醚、正己烷、乙酸乙酯、正庚烷或其混合液。
优选地，所述的水产品和极性溶剂的质量体积比为为1:1至1:5。
优选地，所述的无机盐絮凝剂为硫酸盐、硝酸盐、碳酸盐、硅酸盐、醋酸盐、磷酸盐、卤化盐的溶液。
优选地，所述的无机盐絮凝剂浓度为0.1-1M。
所述的孔雀石绿和结晶紫都包括其代谢产物隐性孔雀石绿和隐性结晶紫。
本发明与背景技术相比，优点在于：
1、本发明使用极性溶剂将孔雀石绿和结晶紫从水产品中提取出来，并通过非极性溶剂进行富集和净化，加入金属溶胶和无机盐絮凝剂，采用拉曼检测实现对水产品中孔雀石绿和结晶紫的检测，不需使用贵重仪器，成本低廉，操作简单，前处理及检测用时短，只需5-10min，适于对水产品养殖、批发及零售领域的孔雀石绿和结晶紫现场快速测定.
2、本发明可以直接检测水产品体内的代谢产物隐性孔雀石绿和隐性结晶紫，不需要将隐性孔雀石绿和隐性结晶紫氧化为孔雀石绿和结晶紫再检测，且可有效区分孔雀石绿、结晶紫或其代谢产物，操作步骤少，简单快捷。
3、本发明的检测方法的灵敏度可达1μg/kg，满足使用要求。
附图说明
图1为孔雀石绿和结晶紫及隐性孔雀石绿和隐性结晶紫的SERS谱图。
图2为本发明实施例1中的鱼肉中5μg/kg孔雀石绿SERS谱图。
图3为本发明实施例2中的鱼肉中5μg/kg结晶紫SERS谱图。
图4为本发明实施例3中的鱼肉中5μg/kg隐性孔雀石绿SERS谱图。
具体实施方式
以下实施例将结合附图对本发明作进一步的说明
纳米金合成：先将100mL含0.01％的HAuCl4溶液加热至沸腾，迅速加入1mL1％柠檬酸三钠水溶液，加热回流1h，冷却至室温。
纳米银合成：先将100mL含1mM的硝酸银溶液加热至沸腾，迅速加入1mL1％柠檬酸三钠水溶液，加热回流1h，冷却至室温。
实施例1
取粉碎的鱼肉2g，加入孔雀石绿标准品使其浓度为5μg/kg，加入5ml含含1mM盐酸的50％乙腈水溶液超声2min提取，取3ml提取液于分液漏斗中，加入3ml石油醚，振荡，静置分层，将上层溶液转移至挥发瓶中，氮气吹干。往挥发瓶中加入500μL二次水。所述的二次水含0.1mM-1M酸或碱。振荡洗脱作为待测液备用。取200μL样品于拉曼样品瓶中，加入100μL纳米银，再加入100μL 1M氯化钠混匀，将拉曼样品瓶转移至拉曼检测室，进行拉曼检测。得如图2的表面增强拉曼光谱。图2中显示此方法能检测到鱼肉中孔雀石绿的信号。
实施例2
取粉碎的鱼肉5g，加入结晶紫标准品使其浓度为5μg/kg，加入20ml二甲亚砜超声2min提取，取3ml提取液于分液漏斗中，加入3ml正己烷，振荡，静置分层，将上层溶液转移至挥发瓶中，氮气吹干。往挥发瓶中加入500μL甲醇，振荡洗脱作为待测液备用。取50μL样品于拉曼样品瓶中，加入100μL纳米金，再加入100μL 0.1M硫酸钠混匀，将拉曼样品瓶转移至拉曼检测室，进行拉曼检测。得如图3的表面增强拉曼光谱。图3中显示此方法能检测到鱼肉中结晶紫的信号。
实施例3
取粉碎的鱼肉0.5g，加入隐性孔雀石绿标准品使其浓度为5μg/kg，加入10ml甲醇超声2min提取，取5ml上清液于样品瓶中，加入2g无水硫酸钠，振荡20s左右，静置取上清液，取3ml上清液于分液漏斗中，加入3ml正戊烷，振荡，静置分层，将上层溶液转移至另一分液漏斗中，加入1ml的二次水，振荡，静置分层，下层溶液作为待测液备用。取200μL样品于拉曼样品瓶中，加入100μL纳米金，再加入100μL 0.1M氯化钡混匀，将拉曼样品瓶转移至拉曼检测室，进行拉曼检测。得如图4的表面增强拉曼光谱。图4中显示此方法能检测到鱼肉中隐性孔雀石绿的信号。
以上所述，仅为本发明较佳实施例而已，故不能依此限定本发明实施的范围，即依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖的范围内。

Claims (9)

1.一种水产品中孔雀石绿和结晶紫的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)样品处理：取0.1-10g粉碎后的水产品于烧杯中，加入1-20mL的极性溶液超声提取；或者取0.1-10g水产品和1-20mL的极性溶液一起匀浆处理后加入烧杯，再超声提取；所述的水产品和极性溶剂的质量体积比为1:0.5至1:20，将提取液转移至分液漏斗中，加入2-5mL有机溶剂萃取，振荡，静置分层，将有机相转移至挥发瓶中氮气吹干；
2)样品洗脱：取0.1-2mL的极性溶液加入上述挥发瓶中，振荡5-20s作为待测液备用；
3)拉曼检测：取20-500μL步骤2)中待测液于拉曼样品池中，加入50-200μL金属溶胶及50-200μL的浓度为0.01M至饱和的无机盐絮凝剂混匀，然后放在拉曼光谱仪检测室内进行检测。
2.一种水产品中孔雀石绿和结晶紫的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)样品处理：取0.1-10g粉碎后的水产品于烧杯中，加入1-20mL的极性溶液超声提取；或者取0.1-10g水产品和1-20mL的极性溶液一起匀浆处理后加入烧杯，再超声提取；所述的水产品和极性溶剂的质量体积比为1:0.5至1:20，将提取液转移至分液漏斗中，加入2-5mL有机溶剂萃取，静置分层，将有机相转移至另一分液漏斗中，加入0.2-2mL二次水，振荡，静置分层，下层溶液作为待测样品；
2)拉曼检测：取20-500μL待测液于拉曼样品池中，加入50-200μL金属溶胶及50-200μL的浓度为0.01M至饱和的无机盐絮凝剂混匀，然后放在拉曼光谱仪检测室内进行检测。
3.如权利要求1或2中所述的一种水产品中孔雀石绿和结晶紫的检测方法，其特征在于：所述的极性溶剂为甲醇，乙醇，乙腈，二甲亚砜，N,N-二甲基甲酰胺，二次水或其混合溶液。
4.如权利要求3所述的一种水产品中孔雀石绿和结晶紫的检测方法，其特征在于：所述的二次水含0.1mM-1M酸或碱。
5.如权利要求1或2中所述的一种水产品中孔雀石绿和结晶紫的检测方法，其特征在于：所述的提取液加入有机溶剂萃取前，先加入N-丙基乙二胺、磷酸烯醇式丙酮酸、石墨化碳、氧化铝、无水硫酸镁、无水硫酸钠或其混合物振荡吸附。
6.如权利要求1或2中所述的一种水产品中孔雀石绿和结晶紫的检测方法，其特征在于：所述的有机溶剂为二氯甲烷、石油醚、正己烷、乙酸乙酯、正庚烷或其混合液。
7.如权利要求1或2中所述的一种水产品中孔雀石绿和结晶紫的检测方法，其特征在于：所述的水产品和极性溶剂的质量体积比为为1:1至1:5。
8.如权利要求1或2中所述的一种水产品中孔雀石绿和结晶紫的检测方法，其特征在于：所述的无机盐絮凝剂为硫酸盐、硝酸盐、碳酸盐、硅酸盐、醋酸盐、磷酸盐、卤化盐的溶液。
9.如权利要求7中所述的一种水产品中孔雀石绿和结晶紫的检测方法，其特征在于：所述的无机盐絮凝剂浓度为0.1-1M。
CN201811636512.1A 2018-12-29 2018-12-29 一种水产品中孔雀石绿和结晶紫的检测方法 Pending CN110333215A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811636512.1A CN110333215A (zh) 2018-12-29 2018-12-29 一种水产品中孔雀石绿和结晶紫的检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811636512.1A CN110333215A (zh) 2018-12-29 2018-12-29 一种水产品中孔雀石绿和结晶紫的检测方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110333215A true CN110333215A (zh) 2019-10-15

Family

ID=68138852

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811636512.1A Pending CN110333215A (zh) 2018-12-29 2018-12-29 一种水产品中孔雀石绿和结晶紫的检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110333215A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113281322A (zh) * 2021-04-15 2021-08-20 中山大学 一种分子印迹-表面增强拉曼传感芯片及其制备方法和应用

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080002198A1 (en) * 2006-06-30 2008-01-03 Lei Sun Multiplexed Raman detection with filter set
CN102661945A (zh) * 2012-06-01 2012-09-12 上海海洋大学 一种孔雀石绿的检测方法及应用
CN102980961A (zh) * 2012-12-19 2013-03-20 福州大学 鳗鱼中孔雀石绿、结晶紫及其残留物检测的前处理方法
CN103149194A (zh) * 2013-02-28 2013-06-12 西安交通大学 一种表面增强拉曼散射基体的制备方法
CN106198811A (zh) * 2016-08-16 2016-12-07 甘肃省商业科技研究所有限公司 快速测定水和水产品中孔雀石绿和结晶紫的试剂盒及方法
CN108387412A (zh) * 2018-01-22 2018-08-10 福州大学 检测水产品中孔雀石绿、结晶紫及其代谢产物的前处理方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080002198A1 (en) * 2006-06-30 2008-01-03 Lei Sun Multiplexed Raman detection with filter set
CN102661945A (zh) * 2012-06-01 2012-09-12 上海海洋大学 一种孔雀石绿的检测方法及应用
CN102980961A (zh) * 2012-12-19 2013-03-20 福州大学 鳗鱼中孔雀石绿、结晶紫及其残留物检测的前处理方法
CN103149194A (zh) * 2013-02-28 2013-06-12 西安交通大学 一种表面增强拉曼散射基体的制备方法
CN106198811A (zh) * 2016-08-16 2016-12-07 甘肃省商业科技研究所有限公司 快速测定水和水产品中孔雀石绿和结晶紫的试剂盒及方法
CN108387412A (zh) * 2018-01-22 2018-08-10 福州大学 检测水产品中孔雀石绿、结晶紫及其代谢产物的前处理方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
刘辉 等: "水产中孔雀石绿和结晶紫残留量测定前处理方法的优化研究", 《检验检疫学刊》 *
郭淑霞 等: "养殖水体中孔雀石绿的SERS光谱识别", 《光谱学与光谱分析》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113281322A (zh) * 2021-04-15 2021-08-20 中山大学 一种分子印迹-表面增强拉曼传感芯片及其制备方法和应用
CN113281322B (zh) * 2021-04-15 2022-09-09 中山大学 一种分子印迹-表面增强拉曼传感芯片及其制备方法和应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108760947A (zh) 三重四级杆气质联用检测水产品中多种麻醉剂的方法
CN106053426A (zh) 基于表面增强拉曼光谱技术检测人体体液中毒品的方法
Yang et al. A selective coumarin-based “turn-on” fluorescent sensor for the detection of cysteine and its applications for bioimaging
CN105319292A (zh) 一种分析动物性食品中四类29种限用兽药残留的uplc-ms/ms方法
Yang et al. BODIPY-based fluorescent probe for cysteine detection and its applications in food analysis, test strips and biological imaging
CN107037029A (zh) 一种基于金纳米棒sers基底对人体体液中毒品的检测方法
CN110333215A (zh) 一种水产品中孔雀石绿和结晶紫的检测方法
CN111380855A (zh) 一种现场筛查保健品中非法添加药物的方法
Hadjmohammadi et al. Use of hollow fiber liquid phase microextraction and HPLC for extraction and determination of apigenin in human urine after consumption of Satureja sahendica Bornm.
Fu-Li et al. Surface-enhanced Raman spectroscopy for rapid determination of β-agonists in swine urine
Liying et al. Application of a UPLC-MS/MS method for quantitative analysis of 29 synthetic cannabinoids and their metabolites, such as ADB-BUTINACA and MDMB-4en-PINACA in human hair in real cases
Li et al. Preparation and antioxidant activity of ethyl-linked anthocyanin-flavanol pigments from model wine solutions
Huang et al. A methylene blue-based near-infrared fluorescent probe for rapid detection of hypochlorite in tap water and living cells
Lesar et al. Report on the analysis of common beverages spiked with gamma-hydroxybutyric acid (GHB) and gamma-butyrolactone (GBL) using NMR and the PURGE solvent-suppression technique
CN106692389A (zh) 一种提高诺丽果中功能成分获取的方法及提取物和应用
CN106770755B (zh) 一种鉴定天麻产品的原料为新鲜天麻或干燥天麻的方法
CN103926340A (zh) 一种化妆品中硝基呋喃类抗生素的测定方法
CN104749276A (zh) 一种适用定量检测动物源性食品中全氟辛酸的hplc/ms/ms方法
Cong et al. Dhasingreoside: New flavonoid from the stems and leaves of Gaultheria fragrantissima
CN107037152B (zh) 一种明胶胶囊中胭脂红酸含量的检测方法
CN109613277A (zh) 一种同时检测维生素d和维生素k的方法
Amato et al. NMR assignment of N-(1-adamantyl)-1-pentyl-1H-indazole-3-carboxamide seized as herbal incense for the first time in Italy
CN105510312A (zh) 一种奥利司他的快速检测方法
CN107144648B (zh) 检测人血浆中匹伐他汀的液相色谱-串联质谱方法
CN109632781A (zh) 抗球虫饲料添加剂产品中绿原酸与咖啡酸含量的测定方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination