CN107037152B - 一种明胶胶囊中胭脂红酸含量的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及检测技术领域，特别涉及一种明胶胶囊中胭脂红酸含量的检测方法。该检测方法包括：将明胶胶囊壳样品加入含硫酸钠、柠檬酸三钠和乙酸锌的盐酸溶液中，在60～80℃条件下保温，使样品溶解，得到样品溶液；将样品溶液与无水乙醇混合，离心，将所得上清液调节pH值至5～7，稀释，过滤，所得滤液为供试品液；采用高效液相色谱技术对供试品液、胭脂红酸标准溶液进行检测，利用外标法测定明胶胶囊壳样品中胭脂红酸的含量。本发明检测方法可实现胭脂红酸含量的准确检测，且线性关系、精密度、稳定性良好，无干扰，检出限、定量限低，回收率高。

Description

一种明胶胶囊中胭脂红酸含量的检测方法

技术领域

本发明涉及检测技术领域，特别涉及一种明胶胶囊中胭脂红酸含量的检测方法。

背景技术

明胶空心胶囊是一种极为重要的药用辅料，由药用明胶加辅料精制而成的帽、体两节胶囊壳组成，可容纳各种药粉、液体、半固体和药片。软胶囊属于胶囊剂的一种包装方式，常见于药品或保健食品。它是将液体药物或液果体药物经处理密封于软质囊材中而制成的一种胶囊剂。软质囊材是由胶囊用明胶、甘油或其他适宜的药用辅料单独或混合制成。空心胶囊可掩饰药物的异味，易于吞服，具良好的崩解能力，较长的保质期等优点。目前胶囊剂型大约占所有药品剂型的1/10左右，它与药品共同进入人体的消化系统，最终被人体所吸收，与药品的生物利用度等有着密切的关系，所以空心胶囊的安全性对于人们的用药安全有着重要的影响。

部分药品出于避光保存的要求，其所用胶囊需要添加遮光的人工合成色素。合成色素即人工合成的色素，其优点很多，如色泽鲜艳，着色力强，色调多样，可改善商品外观并吸引消费者购买，因此被广泛应用于食品领域。中国允许在食品中添加的合成色素共计28种，合成色素的分类包括有机合成色素、无机合成色素、天然等同合成色素等。其中，有机合成色素通常包括：苋菜红、胭脂红、柠檬黄、新红、赤藓红、诱惑红、日落黄、亮蓝和靛蓝及其铝色淀，喹啉黄。

虽然合成色素具有诸多优点，但它具有毒性。这些毒性源于合成色素中的砷、铅、铜、苯酚、苯胺、乙醚、氯化物和硫酸盐，它们对人体均可造成不同程度的危害。合成色素进入人体后会大量消耗体内解毒物质，干扰人体正常代谢功能并直接作用于靶器官，主要毒性表现在不耐受、致癌和儿童多动症。国家标准GB 2760-2014《食品添加剂使用标准》对于合成色素及其铝色淀的使用都有严格的规定：胭脂红及其铝色淀的最大使用量为0.5g/kg。然而在利欲驱使下，不法分子突破允许使用品种、范围和数量，滥用、重剂量使用合成色素，使食品安全面临挑战。为了避免食品中合成色素的过量使用，对合成色素的检测显得非常重要。

胭脂红酸，是胭脂虫雌性成虫体内含有一种蒽醌类物质，其为优质天然染色剂胭脂虫红色素的有效组分，具有较高的经济价值。目前胭脂红酸的加测方法都只是检测胭脂虫红中的胭脂红酸，胶囊中的胭脂红酸未发现有相关方法。本研究发现由于胶囊中含有明胶蛋白，无法过滤样品，即使加乙醇过滤，也非常容易堵色谱柱，对胭脂红酸含量检测产生了影响。目前现有技术没有发现较好的明胶沉淀方法。而普通的蛋白沉淀方法会使胭脂红酸一起沉淀，影响了胭脂红酸含量的准确检测。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种明胶胶囊中胭脂红酸含量的检测方法。该检测方法可将明胶与胭脂红酸的有效分离，从而实现胭脂红酸含量的准确检测。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种明胶胶囊中胭脂红酸含量的检测方法，包括如下步骤：

将明胶胶囊壳样品加入含硫酸钠、柠檬酸三钠和乙酸锌的盐酸溶液中，在60～80℃条件下保温，使样品溶解，得到样品溶液；将样品溶液与无水乙醇混合，离心，将所得上清液调节pH值至5～7，稀释，过滤，所得滤液为供试品液；

采用高效液相色谱技术对供试品液、胭脂红酸标准溶液进行检测，利用外标法测定明胶胶囊壳样品中胭脂红酸的含量。

优选地，样品溶液的保温温度为70℃。

作为优选，含硫酸钠、柠檬酸三钠和乙酸锌的盐酸溶液中，硫酸钠的浓度为0.095～0.12g/mL，柠檬酸三钠的浓度为0.045～0.06g/mL，乙酸锌的浓度为0.01～0.012g/mL，盐酸溶液的浓度为1.5～2.5mol/L。

优选地，含硫酸钠、柠檬酸三钠和乙酸锌的盐酸溶液中，硫酸钠的浓度为0.1g/mL，柠檬酸三钠的浓度为0.05g/mL，乙酸锌的浓度为0.01g/mL，盐酸溶液的浓度为2mol/L。

作为优选，以g/mL计，明胶胶囊壳样品与含硫酸钠、柠檬酸三钠和乙酸锌的盐酸溶液的比例为0.47：(10～15)，明胶胶囊壳样品与无水乙醇的比例为047：(20～40)。

优选地，以g/mL计，明胶胶囊壳样品与含硫酸钠、柠檬酸三钠和乙酸锌的盐酸溶液的比例为0.47：10，明胶胶囊壳样品与无水乙醇的比例为0.47：30。

作为优选，离心为在6000～8000r/min转速下离心3～5min。

在本发明提供的一具体实施例中，离心为在8000r/min转速下离心5min。

作为优选，调节pH值所用碱为氨试液，所用酸为甲酸。

作为优选，将所得上清液调节pH值至5～7为：将所得上清液采用碱调节pH值至7～9，然后采用酸调节pH值至5～7。

作为优选，所述碱为氨试液。

作为优选，所述酸为甲酸。

在本发明提供的一具体实施例中，将所得上清液调节pH值至5～7为：用氨试液调样品溶液颜色变为紫色，再用甲酸调样品溶液颜色至黄色。

在本发明提供的一具体实施例中，氨试液中浓氨溶液的体积百分含量为40％。

在本发明提供的一具体实施例中，胭脂红酸标准溶液的配制方法为：取胭脂红酸对照品，加入1％甲酸-40％乙醇水溶液溶解，过滤，得到胭脂红酸标准溶液。

在本发明提供的一具体实施例中，胭脂红酸标准溶液的配制方法中，以mg/ml计，胭脂红酸对照品与1％甲酸-40％乙醇水溶液的比例为1:100。现有技术中胭脂红酸对照溶液的配制是以水或者甲酸溶液配制的，这种胭脂红酸对照溶液中胭脂红酸很容易被过滤头吸附，从而影响标准曲线的绘制和检测的准确度。本发明通过在甲酸溶液中加入40％乙醇可解决胭脂红酸被过滤头吸附的问题。

在本发明提供的实施例中，样品为包含内容物的明胶胶囊，明胶胶囊壳样品的制备方法包括：去除内容物，将胶囊壳用石油醚I洗涤。

在本发明提供的一具体实施例中，石油醚I洗涤的次数为3～4次，每次洗涤所用石油醚I的体积为15～25mL。

作为优选，稀释为采用水稀释，稀释的倍数为2～3倍。

在本发明提供的实施例中，稀释为采用水稀释，稀释的倍数为2.5倍。

作为优选，高效液相色谱的条件为：C18色谱柱；流动相为乙腈和磷酸二氢钾溶液的混合溶液；等度洗脱。

作为优选，C18色谱柱为Phenomenex NX C18色谱柱。

作为优选，C18色谱柱的规格为250×4.6mm，5μm。

在本发明提供的实施例中，磷酸二氢钾溶液的浓度为0.05mol/L，pH值为3.0。

作为优选，流动相中乙腈与磷酸二氢钾溶液的体积比为(10～15)：(85～90)。

优选地，流动相中乙腈与磷酸二氢钾溶液的体积比为15：85。

作为优选，高效液相色谱的柱温为35～40℃。

优选地，高效液相色谱的柱温为35℃。

作为优选，流速为0.8～1.0mL/min。

优选地，流速为1.0mL/min。

作为优选，检测波长为260～320nm。

优选地，检测波长为280nm。

本发明提供了一种明胶胶囊中胭脂红酸含量的检测方法。该检测方法包括：将明胶胶囊壳样品加入含硫酸钠、柠檬酸三钠和乙酸锌的盐酸溶液中，在60～80℃条件下保温，使样品溶解，得到样品溶液；将样品溶液与无水乙醇混合，离心，将所得上清液调节pH值至5～7，稀释，过滤，所得滤液为供试品液；采用高效液相色谱技术对供试品液、胭脂红酸标准溶液进行检测，利用外标法测定明胶胶囊壳样品中胭脂红酸的含量。本发明至少具有如下优势之一：

1、本发明检测方法采用含硫酸钠、柠檬酸三钠和乙酸锌的盐酸溶液提取胭脂红酸，可将明胶与胭脂红酸的有效分离，从而实现胭脂红酸含量的准确检测。

2、本发明检测方法线性关系、精密度、稳定性良好，无干扰，检出限、定量限低，回收率高，均符合GB/T27404-2008《实验室质量控制规范》的要求，证明该含量测定方法科学有效，能对明胶胶囊中的胭脂红酸含量起到质量控制的目的。

附图说明

图1示空白试验图谱，其中1-1示空白溶液的色谱图，1-2为胭脂红酸对照的色谱图；

图2示胭脂红酸标准溶液的色谱图，2-1～2-5分别为不同浓度的胭脂红酸标准溶液的色谱图；

图3示胭脂红酸的标准曲线图；

图4示实施例1胭脂红酸含量检测方法的稳定性，4-1～4-7分别示胭脂红酸标准工作溶液在室温下放置0h、1h、2h、3h、4h、5h、6h后的色谱图；

图5示实施例1胭脂红酸含量检测方法的回收率，5-1～5-3、5-4～5-6、5-7～5-9分别示不同加标体积的胭脂红酸含量色谱图。

具体实施方式

本发明公开了一种明胶胶囊中胭脂红酸含量的检测方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

本发明提供的明胶胶囊中胭脂红酸含量的检测方法中所用原料、试剂、仪器均可由市场购得。

下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例1

1原理

试样胶囊壳经溶解、除去明胶杂质后，其中所含的胭脂红酸被提取至提取液中，提取液经过调节酸碱度，用高效液相色谱C₁₈柱将胭脂红酸分离，经紫外检测器检测后，用外标法定量测定。

2仪器

安捷伦1260高效液相色谱仪(配紫外检测器)；电子天平(十万分之一)；超声波清洗器；pH仪。

3试剂

3.1乙醇(分析纯)；乙腈(色谱纯)；磷酸二氢钾(分析纯)；甲酸(色谱纯)；磷酸(分析纯)；一级用水。

3.2氨试液：取浓氨溶液400mL，加水使成1000mL。

3.3 2mol/L盐酸溶液：取盐酸18mL，加水适量使成100mL。

3.4提取液：取10g无水硫酸钠，5g柠檬酸三钠和1g乙酸锌，用2mol/L盐酸溶液使溶解并稀释至100mL，混匀。

3.5胭脂红酸(对照品来源：Dr.Ehrenstorfer，批号:110494，纯度:91.7％)

4分析方法

4.1仪器条件与参数：

色谱柱：Phenomenex，NX-C18，250×4.6mm，5μm；

柱温：35℃；

检测波长：280nm；

流速：1.0mL/min；

流动相：乙腈:磷酸二氢钾溶液(0.05mol/L，pH＝3.0)＝15:85；

4.2对照储备液的配制

精密称取胭脂红酸对照品12.86mg，置于25mL棕色容量瓶中，加入1％甲酸-40％乙醇水溶液溶解并定容至刻度，摇匀，即得储备液(同时也作为加标母液)。储备液放在4℃的冰箱中储存备用。

4.3标准工作曲线绘制

精密吸取胭脂红酸储备液1.00mL，置于50mL棕色容量瓶中，使用1％甲酸-40％乙醇水溶液定容至刻度，摇匀，经0.45μm的有机相滤膜过滤，即得标准溶液，分别精密吸取工作溶液2μL、5μL、10μL、15μL、20μL，在4.1条件下，进行分析测定，绘制标准工作曲线。

4.4供试品溶液制备

称取样品三颗约1.37g(称取样品中胭脂红酸含量约0.4mg)，小心剪开胶囊壳，弃去内容物，置于50mL离心管中，用石油醚Ⅰ洗涤3次，每次20mL。弃石油醚，挥干，精密加入3.4提取液10.0mL，盖紧盖子，在70℃水浴中保温，振摇，使胶皮完全溶解。在胶皮凝固前，再精密加无水乙醇30mL，剧烈振摇后，8000r/min离心5min。离心后精密吸取上清液10mL至25mL容量瓶中，用3.2氨试液缓慢调样品溶液颜色恰好变为紫色(参考值：约1.7mL)，再用甲酸缓慢调样品溶液颜色至黄色(参考值：7-8滴)，后用水定容至刻度。然后经0.45μm的有机相滤膜过滤，即得供试品液。精密吸取供试液10μL，在4.1条件下，进行分析测定。

4.5结果计算：

X＝C×V/M

式中：X—样品中胭脂红酸的含量，g/kg；

M—样品的质量，g；

V—样品的稀释体积，mL；

C—样品溶液中胭脂红酸的浓度，mg/mL。

5方法学验证

5.1方法空白实验

5.1.1试验方法

不称取样品，同4.4试样制备方法处理空白溶液，然后按4.1色谱条件测定空白溶液，与胭脂红酸标准工作溶液的出峰时间对比。

5.1.2试验结果见图1，其中1-1为空白色谱图，1-2为对照色谱图。

5.1.3试验结论：

空白溶液在胭脂红酸的出峰时间处无吸收峰，表明空白对测定结果基本无干扰。

5.2线性范围确认

5.2.1试验数据：(色谱图见附图2)

表1线性关系试验结果

5.2.2标准工作曲线图

以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线如图3所示。

5.2.3线性试验结论

线性评价：相关系数R为1.0000，表明该方法测定胭脂红酸在浓度为0.001886819mg/mL至0.018868192mg/mL之间呈现良好的线性，符合GB/T27404-2008《实验室质量控制规范》的要求【GB/T27404-2008要求相关系数R≥0.99】。

5.3检出限和定量限

分析方法的检出限DL和定量限QL由信噪比(S/N)计算。

5.3.1检出限

当信噪比(S/N)为3为胭脂红酸检出限，对应浓度为0.058963μg/mL；得到方法的胭脂红酸检出限为4.304mg/kg。

5.3.2定量限

当信噪比(S/N)为10时为胭脂红酸定量限，对应浓度为0.235852μg/mL；得到方法的胭脂红酸定量限为17.216mg/kg。

5.4精密度试验

5.4.1试验方法

称取6份样品，按4.4试样制备方法处理样品，检测样品含量，计算其RSD(％)。

5.4.2试验数据(见下表)

表2精密度试验结果

5.4.3试验结论

6份样品胭脂红酸含量的RSD为0.6％，表明该方法有较好的精密度，符合GB/T27404-2008《实验室质量控制规范》的要求【GB/T27404-2008要求RSD(％)≤3.8％】。

5.5稳定性试验

5.5.1试验方法：

将胭脂红酸标准工作溶液分别在室温下放置0h、1h、2h、3h、4h、5h、6h后，按4.1条件测定峰面积，计算其RSD(％)。

5.5.2试验数据：(色谱图见附图4)

表3稳定性试验结果

5.5.3试验结论

胭脂红酸标准工作溶液分别在室温下放置0h、1h、2h、3h、4h、5h、6h后，RSD(％)为0.3％，表明胭脂红酸标准工作溶液在室温下6h内的稳定性良好。

5.6回收率试验

5.6.1试验方法

加标：精密称取样品三颗约1.37g 9份(已知样品的胭脂红酸含量：0.310g/kg)，分成3组，每组3份。每组样品小心剪开胶囊壳，弃去内容物，置于50mL离心管中，用石油醚Ⅰ洗涤3次，每次20mL，弃石油醚，挥干。分别精密加入胭脂红酸的储备液(浓度：0.4717048mg/mL)0.5mL、1mL、1.5mL后加入3.4提取液10.0mL，后同4.4试样制备方法处理样品。

5.6.2试验数据如下【试验样品为：维生素K2软胶囊】

表4回收率试验结果表(色谱图见附图5)

测得加入量＝加标样品测得量-样品测得量

回收率(％)＝测得加入量/理论加入量×100％

5.6.3试验结论

平均回收率为：100.128％，相对标准偏差(RSD)为2.3％，符合GB/T27404-2008《实验室质量控制规范》的要求【GB/T27404-2008要求回收率为95—105％】。

6结论

通过对胭脂红酸的含量测定方法进行线性、精密度、重复性、稳定性、空白、检出限、定量限、回收率试验，均符合GB/T27404-2008《实验室质量控制规范》的要求，证明实验室开发的胭脂红酸含量测定方法科学有效，能对维生素K2软胶囊的胭脂红酸含量起到质量控制的目的。

实施例2

1仪器

同实施例1。

2试剂

提取液：取9.5g无水硫酸钠，6g柠檬酸三钠和1.2g乙酸锌，用2.5mol/L盐酸溶液使溶解并稀释至100mL，混匀。

其它试剂同实施例1。

3分析方法

3.1仪器条件与参数：

色谱柱：Phenomenex，NX-C18，250×4.6mm，5μm；

柱温：38℃；

检测波长：320nm；

流速：0.8mL/min；

流动相：乙腈:磷酸二氢钾溶液(0.05mol/L，pH＝3.0)＝10:90；

3.2对照储备液的配制

同实施例1。

3.3标准工作曲线绘制

同实施例1。

3.4供试品溶液制备

称取样品三颗约1.37g(称取样品中胭脂红酸含量约0.4mg)，小心剪开胶囊壳，弃去内容物，置于50mL离心管中，用石油醚Ⅰ洗涤3次，每次20mL。弃石油醚，挥干，精密加入提取液10.0mL，盖紧盖子，在60℃水浴中保温，振摇，使胶皮完全溶解。在胶皮凝固前，再精密加无水乙醇40mL，剧烈振摇后，8000r/min离心5min。离心后精密吸取上清液10mL至25mL容量瓶中，用氨试液缓慢调样品溶液颜色恰好变为紫色(参考值：约1.7mL)，再用甲酸缓慢调样品溶液颜色至黄色(参考值：7-8滴)，后用水定容至刻度。然后经0.45μm的有机相滤膜过滤，即得供试品液。精密吸取供试液10μL，在3.1条件下，进行分析测定。

3.5结果计算：

同实施例1。

4方法学验证

试验结果与实施例1结果相近，表明实施例2胭脂红酸的含量测定方法的线性、精密度、重复性、稳定性、空白、检出限、定量限、回收率均符合GB/T27404-2008《实验室质量控制规范》的要求，证明实验室开发的胭脂红酸含量测定方法科学有效，能对维生素K2软胶囊的胭脂红酸含量起到质量控制的目的。

实施例3

1仪器

同实施例1。

2试剂

提取液：取12g无水硫酸钠，4.5g柠檬酸三钠和1.1g乙酸锌，用1.5mol/L盐酸溶液使溶解并稀释至100mL，混匀。

其它试剂同实施例1。

3分析方法

3.1仪器条件与参数：

色谱柱：Phenomenex，NX-C18，250×4.6mm，5μm；

柱温：40℃；

检测波长：260nm；

流速：0.9mL/min；

流动相：乙腈:磷酸二氢钾溶液(0.05mol/L，pH＝3.0)＝12:90；

3.2对照储备液的配制

同实施例1。

3.3标准工作曲线绘制

同实施例1。

3.4供试品溶液制备

称取样品三颗约1.37g(称取样品中胭脂红酸含量约0.4mg)，小心剪开胶囊壳，弃去内容物，置于50mL离心管中，用石油醚Ⅰ洗涤3次，每次20mL。弃石油醚，挥干，精密加入提取液10.0mL，盖紧盖子，在80℃水浴中保温，振摇，使胶皮完全溶解。在胶皮凝固前，再精密加无水乙醇20mL，剧烈振摇后，8000r/min离心5min。离心后精密吸取上清液10mL至25mL容量瓶中，用氨试液缓慢调样品溶液颜色恰好变为紫色(参考值：约1.7mL)，再用甲酸缓慢调样品溶液颜色至黄色(参考值：7-8滴)，后用水定容至刻度。然后经0.45μm的有机相滤膜过滤，即得供试品液。精密吸取供试液10μL，在3.1条件下，进行分析测定。

3.5结果计算：

同实施例1。

试验结果与实施例1结果相近，表明实施例2胭脂红酸的含量测定方法的线性、精密度、重复性、稳定性、空白、检出限、定量限、回收率均符合GB/T27404-2008《实验室质量控制规范》的要求，证明实验室开发的胭脂红酸含量测定方法科学有效，能对维生素K2软胶囊的胭脂红酸含量起到质量控制的目的。

试验例1准确性检测

制备胭脂红酸添加量已知的同一份软胶囊壳样品，采用实施例1-3的试验方法对其进行含量的检测。试验结果如下：

表5胭脂红酸含量准确性检测结果

由表5试验结果可知，采用本发明实施例1-3的试验方法检测到的胭脂红酸含量更为接近于理论值，显示本发明检测方法可准确检测胭脂红酸的含量。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种明胶胶囊中胭脂红酸含量的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

将明胶胶囊壳样品加入含硫酸钠、柠檬酸三钠和乙酸锌的盐酸溶液中，在60～80℃条件下保温，使样品溶解，得到样品溶液；将所述样品溶液与无水乙醇混合，离心，将所得上清液调节pH值至5～7，稀释，过滤，所得滤液为供试品液；

采用高效液相色谱技术对所述供试品液、胭脂红酸标准溶液进行检测，利用外标法测定所述明胶胶囊壳样品中胭脂红酸的含量；

所述含硫酸钠、柠檬酸三钠和乙酸锌的盐酸溶液中，所述硫酸钠的浓度为0.095～0.12g/mL，所述柠檬酸三钠的浓度为0.045～0.06g/mL，所述乙酸锌的浓度为0.01～0.012g/mL，所述盐酸溶液的浓度为1.5～2.5mol/L；

以g/mL计，所述明胶胶囊壳样品与所述含硫酸钠、柠檬酸三钠和乙酸锌的盐酸溶液的比例为0.47：(10～15)，所述明胶胶囊壳样品与所述无水乙醇的比例为0.47：(20～40)。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述离心为在6000～8000r/min转速下离心3～5min。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述将所得上清液调节pH值至5～7为：将所得上清液采用碱调节pH值至7～9，然后采用酸调节pH值至5～7，所述碱为氨试液，所述酸为甲酸。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱的条件为：C18色谱柱；流动相为乙腈和磷酸二氢钾溶液的混合溶液；等度洗脱。

5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述C18色谱柱为Phenomenex NX C18色谱柱。

6.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述磷酸二氢钾溶液的浓度为0.05mol/L，pH值为3.0。

7.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述流动相中乙腈与磷酸二氢钾溶液的体积比为(10～15)：(85～90)。

8.根据权利要求1或4所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱的柱温为35～40℃，流速为0.8～1.0mL/min，检测波长为260～320nm。