CN110331124A - 一种导电聚吡咯/细胞外基质复合薄膜及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种导电聚吡咯/细胞外基质复合薄膜及其制备方法,该方法如下:通过细胞培养法、反复冻融法和冷冻干燥获得细胞外基质薄膜,然后通过化学法聚合聚吡咯的方式得到一种导电聚吡咯/细胞外基质复合薄膜。本发明方法最终制得的聚吡咯/细胞外基质复合薄膜具有导电性和生物相容性,可应用于生物医用领域。此外本发明的制备方法工艺简单,易于实现,有利于进行推广应用。
Description
技术领域
本发明涉及生物医用领域,具体涉及一种导电聚吡咯/细胞外基质复合薄膜及其制备方法。
背景技术
在生物医用领域中,聚吡咯由于其拥有良好的导电性、高比表面积、容易制备等特点,常常被用于作为植入材料或涂层,用于构建电信号的生物微环境,从而达到电控细胞活动或药物释放等作用。比如有研究表明聚吡咯涂层电刺激可以促进前成骨细胞的成骨分化,主要表现为电刺激组的碱性磷酸酶、聚氰基丙烯酸正丁酯、牛血清白蛋白等成骨分化指标的上调[Yuan He,Shihui Wang,Jing Mu,et al.Synthesis of Polypyrrole Nanowireswith Positive Effect on MC3T3-E1Cell Functions through ElectricalStimulation.Materials Science and Engineering C,2017,71:43-50]。然而,较高浓度的聚吡咯会产生细胞毒性,引发细胞凋亡或免疫反应。因此,如何提高聚吡咯的生物相容性是一个被广泛关注的问题。细胞外基质是由蛋白质和多糖等组成的一个具有网络结构的生物框架,对细胞生命活动有调控作用,拥有良好的生物相容性,可以起到减缓免疫反应的作用。有研究表明,细胞培养法获得的细胞外基质拥有很好的生物相容性和网络结构,可以用于组织工程中[Hongxu Lu,Takashi Hoshiba,Naoki Kawazoe,et al.Cultured Cell-derived Extracellular Matrix Scaffolds for Tissue Engineering.Biomaterials,2011,32:9658-9666]。所以,将细胞外基质和聚吡咯复合形成一个兼具良好电学性能和良好生物相容性的薄膜,对生物医学领域有很强的实际应用意义和研究价值。
冷冻干燥技术可以在低温低压下完成对物质的干燥,且能较完整的保存物质的原有结构,很适合作为细胞外基质等热敏材料的干燥手段。
化学临场氧化制备聚吡咯由于不需要电极材料作为基板,相比电化学沉积更适合与细胞外基质等有机物进行复合。
发明内容
本发明的目的在于提供一种导电聚吡咯/细胞外基质复合薄膜及其制备方法。所述的导电聚吡咯/细胞外基质复合薄膜可通过控制聚吡咯聚合的浓度、聚合时间、细胞外基质培养的时间来控制最终复合薄膜的聚吡咯和细胞外基质质量比,继而控制电学性能、生物相容性和机械性能。
一种导电聚吡咯/细胞外基质复合薄膜由细胞外基质骨架和聚吡咯组成,其中细胞外基质提供良好的生物相容性,聚吡咯提供导电性。
其制备方法,包括如下步骤:
(1).将事先培养在培养瓶中的细胞进行脱壁处理,离心后,培养获得细胞片层;优选的,用高糖DMEM培养基混悬,并用计数板计数,以5×104个/cm2~1×106个/cm2的细胞密度将细胞接种于多孔板中,并放入37℃恒温、5%CO2的细胞培养箱内培养,2~3天换液一次,培养周期为5~10天,最终获得细胞片层;优选的,所述的细胞为成纤维细胞、成骨细胞或上皮细胞。
(2).用反复冻融法处理细胞片层,并冷冻干燥,获得细胞外基质薄膜;
(3).配制吡咯单体溶液,搅拌均匀;优选的,所述吡咯单体溶液的浓度为0.01~0.5mol·L-1;
(4).以FeCl3·6H2O:吡咯单体摩尔比为20:9~20:19配制FeCl3溶液,加入与吡咯单体摩尔比为1:3~1:10的盐酸溶液,搅拌均匀;
(5).将上述两种溶液混合,搅拌1~10min,形成聚吡咯聚合溶液;
(6).加入制备好的细胞外基质薄膜进行聚合反应,浸泡10min~8h后取出,去离子水清洗并干燥,即可获得导电聚吡咯/细胞外基质复合薄膜。
本发明的导电聚吡咯/细胞外基质复合薄膜具有如下特点:
1)冷冻干燥后获得的细胞外基质拥有良好的三维网络结构,比表面积大,方便聚吡咯的复合。
2)聚吡咯与细胞外基质聚合后构成交织的网络结构。
3)所获取的聚吡咯/细胞外基质复合薄膜不仅保存了细胞外基质的重要组成成分和三维结构,而且还具有良好的导电性能,其电导率为0.001S/cm~1S/cm。
本发明的一种导电聚吡咯/细胞外基质复合薄膜,将拥有良好导电性的聚吡咯用化学法的方式复合到了富含大量生物成分和三维网络结构的细胞外基质上,使薄膜同时具有了导电性和生物相容性。本薄膜可以作为构建组织或细胞电信号微环境的一种材料,可应用于生物医疗领域。此外本发明的制备方法,工艺简单,易于实现,有利于进行推广应用。
附图说明
图1是聚吡咯/细胞外基质复合薄膜的形貌图;
图2是聚吡咯/细胞外基质复合薄膜的扫描电镜照片;
图3是聚吡咯/细胞外基质复合薄膜作为涂层改性ITO电极基板的电化学阻抗测试。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
(1).将事先培养在培养瓶中的成纤维细胞进行脱壁处理,离心后,用高糖DMEM培养基混悬,并用计数板计数,以5×104个/cm2的细胞密度将细胞接种于多孔板中,并放入37℃恒温、5%CO2的细胞培养箱内培养,2天换液一次,培养周期为7天,最终形成完整的细胞片层;
(2).用反复冻融法处理细胞片层,并冷冻干燥,获得细胞外基质薄膜;(3).配制0.02mol·L-1的吡咯单体溶液,搅拌均匀;
(4).以FeCl3·6H2O:吡咯单体摩尔比为20:9配制FeCl3溶液,加入与吡咯单体摩尔比为1:3的盐酸溶液,搅拌均匀;
(5).将上述两种溶液混合,搅拌1min,形成聚吡咯聚合溶液;
(6).加入制备好的细胞外基质薄膜进行聚合反应,浸泡30min后取出,去离子水清洗并干燥,即可获得导电聚吡咯/细胞外基质复合薄膜,获得的复合薄膜聚吡咯与细胞外基质质量比为1:1,电导率为0.005S/cm。
本例制得的聚吡咯/细胞外基质复合薄膜的实物图如图1所示。图2的扫描电镜照片,证明了聚吡咯与细胞外基质成功复合。图3显示以复合薄膜作为涂层的ITO基板的电化学阻抗显著下降。
实施例2
(1).将事先培养在培养瓶中的成骨细胞进行脱壁处理,离心后,用高糖DMEM培养基混悬,并用计数板计数,以1×105个/cm2的细胞密度将细胞接种于多孔板中,并放入37℃恒温、5%CO2的细胞培养箱内培养,2天换液一次,培养周期为5天,最终形成完整的细胞片层;
(2).用反复冻融法处理细胞片层,并冷冻干燥,获得细胞外基质薄膜;
(3).配制0.01mol·L-1的吡咯单体溶液,搅拌均匀;
(4).以FeCl3·6H2O:吡咯单体摩尔比为20:13配制FeCl3溶液,加入与吡咯单体摩尔比为1:5的盐酸溶液,搅拌均匀;
(5).将上述两种溶液混合,搅拌10min,形成聚吡咯聚合溶液;
(6).加入制备好的细胞外基质薄膜进行聚合反应,浸泡10min后取出,去离子水清洗并干燥,即可获得导电聚吡咯/细胞外基质复合薄膜,获得的复合薄膜聚吡咯与细胞外基质质量比为0.5:1,电导率为0.001S/cm。
实施例3
(1).将事先培养在培养瓶中的成纤维细胞进行脱壁处理,离心后,用高糖DMEM培养基混悬,并用计数板计数,以1×106个/cm2的细胞密度将细胞接种于多孔板中,并放入37℃恒温、5%CO2的细胞培养箱内培养,3天换液一次,培养周期为10天,最终形成完整的细胞片层;
(2).用反复冻融法处理细胞片层,并冷冻干燥,获得细胞外基质薄膜;
(3).配制0.2mol·L-1的吡咯单体溶液,搅拌均匀;
(4).以FeCl3·6H2O:吡咯单体摩尔比为20:19配制FeCl3溶液,加入与吡咯单体摩尔比为1:10的盐酸溶液,搅拌均匀;
(5).将上述两种溶液混合,搅拌5min,形成聚吡咯聚合溶液;
(6).加入制备好的细胞外基质薄膜进行聚合反应,浸泡3h后取出,去离子水清洗并干燥,即可获得导电聚吡咯/细胞外基质复合薄膜,获得的复合薄膜聚吡咯与细胞外基质质量比为5:1,电导率为0.1S/cm。
实施例4
(1).将事先培养在培养瓶中的成纤维细胞进行脱壁处理,离心后,用高糖DMEM培养基混悬,并用计数板计数,以5×105个/cm2的细胞密度将细胞接种于多孔板中,并放入37℃恒温、5%CO2的细胞培养箱内培养,3天换液一次,培养周期为6天,最终形成完整的细胞片层;
(2).用反复冻融法处理细胞片层,并冷冻干燥,获得细胞外基质薄膜;
(3).配制0.5mol·L-1的吡咯单体溶液,搅拌均匀;
(4).以FeCl3·6H2O:吡咯单体摩尔比为20:11配制FeCl3溶液,加入与吡咯单体摩尔比为1:7的盐酸溶液,搅拌均匀;
(5).将上述两种溶液混合,搅拌3min,形成聚吡咯聚合溶液;
(6).加入制备好的细胞外基质薄膜进行聚合反应,浸泡1h后取出,去离子水清洗并干燥,即可获得导电聚吡咯/细胞外基质复合薄膜,获得的复合薄膜聚吡咯与细胞外基质质量比为4:1,电导率为0.05S/cm。
实施例5
(1).将事先培养在培养瓶中的上皮细胞进行脱壁处理,离心后,用高糖DMEM培养基混悬,并用计数板计数,以3×105个/cm2的细胞密度将细胞接种于多孔板中,并放入37℃恒温、5%CO2的细胞培养箱内培养,2天换液一次,培养周期为8天,最终形成完整的细胞片层;
(2).用反复冻融法处理细胞片层,并冷冻干燥,获得细胞外基质薄膜;
(3).配制0.3mol·L-1的吡咯单体溶液,搅拌均匀;
(4).以FeCl3·6H2O:吡咯单体摩尔比为20:17配制FeCl3溶液,加入与吡咯单体摩尔比为1:6的盐酸溶液,搅拌均匀;
(5).将上述两种溶液混合,搅拌7min,形成聚吡咯聚合溶液;
(6).加入制备好的细胞外基质薄膜进行聚合反应,浸泡8h后取出,去离子水清洗并干燥,即可获得导电聚吡咯/细胞外基质复合薄膜,获得的复合薄膜聚吡咯与细胞外基质质量比为15:1,电导率为1S/cm。
实施例6
(1).将事先培养在培养瓶中的成纤维细胞进行脱壁处理,离心后,用高糖DMEM培养基混悬,并用计数板计数,以9×105个/cm2的细胞密度将细胞接种于多孔板中,并放入37℃恒温、5%CO2的细胞培养箱内培养,3天换液一次,培养周期为9天,最终形成完整的细胞片层;
(2).用反复冻融法处理细胞片层,并冷冻干燥,获得细胞外基质薄膜;
(3).配制0.4mol·L-1的吡咯单体溶液,搅拌均匀;
(4).以FeCl3·6H2O:吡咯单体摩尔比为20:16配制FeCl3溶液,加入与吡咯单体摩尔比为1:4的盐酸溶液,搅拌均匀;
(5).将上述两种溶液混合,搅拌6min,形成聚吡咯聚合溶液;
(6).加入制备好的细胞外基质薄膜进行聚合反应,浸泡5h后取出,去离子水清洗并干燥,即可获得导电聚吡咯/细胞外基质复合薄膜,获得的复合薄膜聚吡咯与细胞外基质质量比为9:1,电导率为0.7S/cm。
实施例7
(1).将事先培养在培养瓶中的成纤维细胞进行脱壁处理,离心后,用高糖DMEM培养基混悬,并用计数板计数,以1×105个/cm2的细胞密度将细胞接种于多孔板中,并放入37℃恒温、5%CO2的细胞培养箱内培养,3天换液一次,培养周期为7天,最终形成完整的细胞片层;
(2).用反复冻融法处理细胞片层,并冷冻干燥,获得细胞外基质薄膜;
(3).配制0.1mol·L-1的吡咯单体溶液,搅拌均匀;
(4).以FeCl3·6H2O:吡咯单体摩尔比为20:10配制FeCl3溶液,加入与吡咯单体摩尔比为1:8的盐酸溶液,搅拌均匀;
(5).将上述两种溶液混合,搅拌5min,形成聚吡咯聚合溶液;
(6).加入制备好的细胞外基质薄膜进行聚合反应,浸泡2h后取出,去离子水清洗并干燥,即可获得导电聚吡咯/细胞外基质复合薄膜,获得的复合薄膜聚吡咯与细胞外基质质量比为2:1,电导率为0.008S/cm。
实施例8
(1).将事先培养在培养瓶中的成纤维细胞进行脱壁处理,离心后,用高糖DMEM培养基混悬,并用计数板计数,以7×104个/cm2的细胞密度将细胞接种于多孔板中,并放入37℃恒温、5%CO2的细胞培养箱内培养,2天换液一次,培养周期为9天,最终形成完整的细胞片层;
(2).用反复冻融法处理细胞片层,并冷冻干燥,获得细胞外基质薄膜;
(3).配制0.05mol·L-1的吡咯单体溶液,搅拌均匀;
(4).以FeCl3·6H2O:吡咯单体摩尔比为20:9配制FeCl3溶液,加入与吡咯单体摩尔比为1:9的盐酸溶液,搅拌均匀;
(5).将上述两种溶液混合,搅拌2min,形成聚吡咯聚合溶液;
(6).加入制备好的细胞外基质薄膜进行聚合反应,浸泡4h后取出,去离子水清洗并干燥,即可获得导电聚吡咯/细胞外基质复合薄膜,获得的复合薄膜聚吡咯与细胞外基质质量比为3:1,电导率为0.01S/cm。
实施例9
(1).将事先培养在培养瓶中的成骨细胞进行脱壁处理,离心后,用高糖DMEM培养基混悬,并用计数板计数,以9×104个/cm2的细胞密度将细胞接种于多孔板中,并放入37℃恒温、5%CO2的细胞培养箱内培养,3天换液一次,培养周期为5天,最终形成完整的细胞片层;
(2).用反复冻融法处理细胞片层,并冷冻干燥,获得细胞外基质薄膜;
(3).配制0.08mol·L-1的吡咯单体溶液,搅拌均匀;
(4).以FeCl3·6H2O:吡咯单体摩尔比为20:13配制FeCl3溶液,加入与吡咯单体摩尔比为1:7的盐酸溶液,搅拌均匀;
(5).将上述两种溶液混合,搅拌7min,形成聚吡咯聚合溶液;
(6).加入制备好的细胞外基质薄膜进行聚合反应,浸泡6h后取出,去离子水清洗并干燥,即可获得导电聚吡咯/细胞外基质复合薄膜,获得的复合薄膜聚吡咯与细胞外基质质量比为7:1,电导率为0.05S/cm。
实施例10
(1).将事先培养在培养瓶中的上皮细胞进行脱壁处理,离心后,用高糖DMEM培养基混悬,并用计数板计数,以5×104个/cm2的细胞密度将细胞接种于多孔板中,并放入37℃恒温、5%CO2的细胞培养箱内培养,2天换液一次,培养周期为7天,最终形成完整的细胞片层;
(2).用反复冻融法处理细胞片层,并冷冻干燥,获得细胞外基质薄膜;
(3).配制0.3mol·L-1的吡咯单体溶液,搅拌均匀;
(4).以FeCl3·6H2O:吡咯单体摩尔比为20:10配制FeCl3溶液,加入与吡咯单体摩尔比为1:8的盐酸溶液,搅拌均匀;
(5).将上述两种溶液混合,搅拌3min,形成聚吡咯聚合溶液;
(6).加入制备好的细胞外基质薄膜进行聚合反应,浸泡7h后取出,去离子水清洗并干燥,即可获得导电聚吡咯/细胞外基质复合薄膜,获得的复合薄膜聚吡咯与细胞外基质质量比为10:1,电导率为0.7S/cm。
实施例11
(1).将事先培养在培养瓶中的成纤维细胞进行脱壁处理,离心后,用高糖DMEM培养基混悬,并用计数板计数,以5×105个/cm2的细胞密度将细胞接种于多孔板中,并放入37℃恒温、5%CO2的细胞培养箱内培养,3天换液一次,培养周期为6天,最终形成完整的细胞片层;
(2).用反复冻融法处理细胞片层,并冷冻干燥,获得细胞外基质薄膜;
(3).配制0.4mol·L-1的吡咯单体溶液,搅拌均匀;
(4).以FeCl3·6H2O:吡咯单体摩尔比为20:16配制FeCl3溶液,加入与吡咯单体摩尔比为1:5的盐酸溶液,搅拌均匀;
(5).将上述两种溶液混合,搅拌5min,形成聚吡咯聚合溶液;
(6).加入制备好的细胞外基质薄膜进行聚合反应,浸泡15min后取出,去离子水清洗并干燥,即可获得导电聚吡咯/细胞外基质复合薄膜,获得的复合薄膜聚吡咯与细胞外基质质量比为8:1,电导率为0.5S/cm。
实施例12
(1).将事先培养在培养瓶中的成骨细胞进行脱壁处理,离心后,用高糖DMEM培养基混悬,并用计数板计数,以1×106个/cm2的细胞密度将细胞接种于多孔板中,并放入37℃恒温、5%CO2的细胞培养箱内培养,3天换液一次,培养周期为9天,最终形成完整的细胞片层;
(2).用反复冻融法处理细胞片层,并冷冻干燥,获得细胞外基质薄膜;
(3).配制0.09mol·L-1的吡咯单体溶液,搅拌均匀;
(4).以FeCl3·6H2O:吡咯单体摩尔比为20:15配制FeCl3溶液,加入与吡咯单体摩尔比为1:3的盐酸溶液,搅拌均匀;
(5).将上述两种溶液混合,搅拌8min,形成聚吡咯聚合溶液;
(6).加入制备好的细胞外基质薄膜进行聚合反应,浸泡20min后取出,去离子水清洗并干燥,即可获得导电聚吡咯/细胞外基质复合薄膜,获得的复合薄膜聚吡咯与细胞外基质质量比为2.5:1,电导率为0.004S/cm。
Claims (6)
1.一种导电聚吡咯/细胞外基质复合薄膜,其特征在于,薄膜主要成分为聚吡咯和细胞外基质,两者构成交织的网络结构,聚吡咯与细胞外基质质量比为0.5:1~15:1。
2.制备如权利要求1所述的一种导电聚吡咯/细胞外基质复合薄膜的方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1).将事先培养在培养瓶中的细胞进行脱壁处理,离心后,培养最终获得细胞片层;
(2).用反复冻融法处理细胞片层,并冷冻干燥,获得细胞外基质薄膜;
(3).配制吡咯单体溶液,搅拌均匀;
(4).以FeCl3·6H2O:吡咯单体摩尔比为20:9~20:19配制FeCl3溶液,加入与吡咯单体摩尔比为1:3~1:10的盐酸溶液,搅拌均匀;
(5).将上述两种溶液混合,搅拌1~10min,形成聚吡咯聚合溶液;
(6).加入制备好的细胞外基质薄膜进行聚合反应,浸泡10min~8h后取出,去离子水清洗并干燥,即可获得导电聚吡咯/细胞外基质复合薄膜。
3.根据权利要求2所述的一种导电聚吡咯/细胞外基质复合薄膜的制备方法,其特征在于,步骤(1)中所述的细胞为成纤维细胞、成骨细胞或上皮细胞。
4.根据权利要求2所述的一种导电聚吡咯/细胞外基质复合薄膜的制备方法,其特征在于,所获得的复合薄膜同时拥有导电性和生物相容性,其电导率为0.001S/cm~1S/cm。
5.根据权利要求2所述的一种导电聚吡咯/细胞外基质复合薄膜的制备方法,其特征在于,步骤(1)中所述的培养是指,将细胞脱壁处理离心后,用高糖DMEM培养基混悬,并用计数板计数,以5×104个/cm2~1×106个/cm2的细胞密度将细胞接种于多孔板中,并放入37℃恒温、5%CO2的细胞培养箱内培养,2~3天换液一次,培养周期为5~10天,最终获得细胞片层。
6.根据权利要求2所述的一种导电聚吡咯/细胞外基质复合薄膜的制备方法,其特征在于,步骤(3)中所述的吡咯单体溶液的浓度为0.01~0.5mol·L-1。
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Citations (49)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2000062315A1 (en) * | 1999-04-09 | 2000-10-19 | Sustainable Technologies International Pty Ltd | Methods to implement sealing and electrical connections to single cell and multi-cell regenerative photoelectrochemical devices |
US20040146918A1 (en) * | 2000-02-18 | 2004-07-29 | Weiner Michael L. | Hybrid nucleic acid assembly |
US6873236B2 (en) * | 2001-10-24 | 2005-03-29 | General Electric Company | Fault current limiter |
WO2005046747A2 (en) * | 2003-11-10 | 2005-05-26 | Angiotech International Ag | Intravascular devices and fibrosis-inducing agents |
AU2004291062A1 (en) * | 2003-11-10 | 2005-06-02 | Angiotech International Ag | Medical implants and anti-scarring agents |
WO2005051168A2 (en) * | 2003-11-19 | 2005-06-09 | Davies Richard J | System for detecting electrophysiological changes in breast tissue |
EP1588173A2 (en) * | 2003-01-16 | 2005-10-26 | Carlsberg A/S | Affinity fishing for ligands and proteins receptors |
CN1744823A (zh) * | 2002-12-10 | 2006-03-08 | 麻省理工学院 | 使用分化胚胎干细胞构建三维组织结构 |
US20060201996A1 (en) * | 2005-03-09 | 2006-09-14 | Cook Biotech Incorporated | Medical graft materials with adherent extracellular matrix fibrous mass |
CN101161295A (zh) * | 2007-11-08 | 2008-04-16 | 浙江大学 | 电化学法对医用金属移植体表面胶原改性的方法 |
CN101773683A (zh) * | 2010-03-03 | 2010-07-14 | 天津大学 | 壳聚糖修饰的海藻酸盐水凝胶三维多孔支架及其制备方法 |
CN101791435A (zh) * | 2010-03-26 | 2010-08-04 | 浙江大学 | 一种医用金属移植体表面胶原改性的方法 |
US20110188728A1 (en) * | 2009-12-17 | 2011-08-04 | The Charles Stark Draper Laboratory, Inc. | Methods of generating trophectoderm and neurectoderm from human embryonic stem cells |
CN102433258A (zh) * | 2011-12-01 | 2012-05-02 | 北京航空航天大学 | 一种牵张-电联合刺激三维细胞培养装置 |
CN102499994A (zh) * | 2011-11-04 | 2012-06-20 | 无锡中科光远生物材料有限公司 | 一种神经组织工程纤维膜及制备方法 |
CN103131625A (zh) * | 2011-11-23 | 2013-06-05 | 清华大学 | 用于构建三维微环境的方法及装置 |
EP2533686A4 (en) * | 2010-02-12 | 2013-10-09 | Univ Georgetown | POLYMERIC FILM BIOELECTRODES AND METHOD FOR THEIR PREPARATION AND USE |
CN103572606A (zh) * | 2012-08-07 | 2014-02-12 | 嘉兴学院 | 具有核-壳结构的复合多孔纤维及双重孔结构膜制备方法 |
CN103572408A (zh) * | 2012-08-07 | 2014-02-12 | 嘉兴学院 | 核-壳结构的电活性复合纤维及组织工程支架制备方法 |
CN104056306A (zh) * | 2014-06-09 | 2014-09-24 | 南京师范大学 | 具有拓扑结构的cnt/导电聚合物复合涂层修饰的神经导管材料及其制备方法 |
CN105566567A (zh) * | 2016-01-27 | 2016-05-11 | 清华大学 | 硬度可调节的温敏聚合物材料及其制备方法和应用 |
WO2016100857A1 (en) * | 2014-12-19 | 2016-06-23 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Stem cells for modeling type 2 diabetes |
CN105920672A (zh) * | 2016-04-26 | 2016-09-07 | 四川大学 | 一种可促进外周神经组织快速修复的导电平行纤维膜及其制备方法 |
CN106047692A (zh) * | 2016-06-16 | 2016-10-26 | 浙江大学 | 一种用于可见光致细胞收割的钙钛矿薄膜器件及其制备方法和应用 |
CN106178118A (zh) * | 2008-09-30 | 2016-12-07 | 加利福尼亚大学董事会 | 用于组织修复的使用细胞外基质的组合物和方法 |
CN106496639A (zh) * | 2016-09-18 | 2017-03-15 | 南京林业大学 | 一种纳米纤维素‑聚吡咯‑聚乙烯醇复合导电水凝胶及其制备方法和应用 |
CN106847547A (zh) * | 2017-02-09 | 2017-06-13 | 同济大学 | 三维管状二硫化钼/聚吡咯超级电容器复合电极材料及其制备 |
CN106860914A (zh) * | 2017-01-19 | 2017-06-20 | 浙江大学 | 一种经由细胞片层获得磷酸钙/细胞外基质薄膜的方法 |
CN106963987A (zh) * | 2017-03-29 | 2017-07-21 | 浙江大学 | 一种经由细胞片层获得的导电细胞外基质复合薄膜及其制备方法 |
CN106999635A (zh) * | 2014-12-11 | 2017-08-01 | 苏黎世联邦理工学院 | 软骨修复用移植物支架及其制造方法 |
CN107106606A (zh) * | 2014-09-12 | 2017-08-29 | 杜雷安教育基金会行政处 | 神经微生理系统和使用其的方法 |
CN107142206A (zh) * | 2017-03-29 | 2017-09-08 | 浙江大学 | 一种用于可见光致体外培养的细胞/细胞薄层收割的硅/石墨烯基复合表面及其制备方法 |
CN107137765A (zh) * | 2017-04-24 | 2017-09-08 | 武汉理工大学 | 聚吡咯生物导电水凝胶及其制备方法和应用 |
CN107308498A (zh) * | 2017-06-23 | 2017-11-03 | 武汉康华世纪药业有限公司 | 一种复合纳米纤维神经支架的制备方法 |
CN107326001A (zh) * | 2017-07-26 | 2017-11-07 | 浙江大学 | 一种光响应细胞外基质复合薄膜及其制备方法 |
WO2018022913A1 (en) * | 2016-07-28 | 2018-02-01 | eXion labs Inc. | Antimicrobial photoreactive composition comprising organic and inorganic multijunction composite |
CN107737370A (zh) * | 2017-11-20 | 2018-02-27 | 西南交通大学 | 一种用于软骨修复的高强、超弹、导电水凝胶的制备方法 |
WO2018083047A1 (en) * | 2016-11-03 | 2018-05-11 | ETH Zürich | Aligned porous fibrillar scaffold for tissue engineering and surgical application |
EP3349778A2 (en) * | 2015-09-17 | 2018-07-25 | Histide AG | Pharmaceutical association of growth factor receptor agonist and adhesion protein inhibitor for converting a neoplastic cell into a non-neoplastic cell and uses thereof |
CN108411344A (zh) * | 2018-01-24 | 2018-08-17 | 浙江大学 | 一种可电场调控选择性释放生物分子的复合双层薄膜及其制备方法 |
WO2018197688A1 (en) * | 2017-04-28 | 2018-11-01 | Technische Universität Dresden | Non-covalently assembled conductive hydrogel |
CN108969801A (zh) * | 2018-07-06 | 2018-12-11 | 浙江大学 | 一种具有光热效应的细胞外基质复合薄膜及其制备方法 |
CN109575318A (zh) * | 2018-11-16 | 2019-04-05 | 华南理工大学 | 一种多巴胺介导的聚吡咯导电水凝胶及其制备方法 |
CN109627461A (zh) * | 2018-11-21 | 2019-04-16 | 华南理工大学 | 一种聚吡咯纳米复合导电水凝胶及其制备方法 |
CN110075348A (zh) * | 2019-04-11 | 2019-08-02 | 温州医科大学 | 用于制备pH敏感双网络水凝胶的溶胶体系、水凝胶及应用 |
CN112138212A (zh) * | 2020-09-07 | 2020-12-29 | 上海市东方医院(同济大学附属东方医院) | 活性细胞外基质、含有活性细胞外基质的组合物、3d组织修复支架及制备方法和应用 |
CN112165954A (zh) * | 2018-03-23 | 2021-01-01 | 阿奇生物外科有限公司 | 用于治疗眼病的sap和拟肽 |
CN112261970A (zh) * | 2018-07-10 | 2021-01-22 | 诺华股份有限公司 | 3-(5-羟基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮衍生物及其在治疗ikaros家族锌指2(ikzf2)依赖性疾病中的用途 |
CN112812689A (zh) * | 2021-01-28 | 2021-05-18 | 浙江大学 | 一种基于胶原/纳米碳复合载药导电涂层的离子导入电极及其制备方法 |
-
2019
- 2019-06-14 CN CN201910515940.7A patent/CN110331124B/zh active Active
Patent Citations (50)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2000062315A1 (en) * | 1999-04-09 | 2000-10-19 | Sustainable Technologies International Pty Ltd | Methods to implement sealing and electrical connections to single cell and multi-cell regenerative photoelectrochemical devices |
US20040146918A1 (en) * | 2000-02-18 | 2004-07-29 | Weiner Michael L. | Hybrid nucleic acid assembly |
US6873236B2 (en) * | 2001-10-24 | 2005-03-29 | General Electric Company | Fault current limiter |
CN1744823A (zh) * | 2002-12-10 | 2006-03-08 | 麻省理工学院 | 使用分化胚胎干细胞构建三维组织结构 |
EP1588173A2 (en) * | 2003-01-16 | 2005-10-26 | Carlsberg A/S | Affinity fishing for ligands and proteins receptors |
WO2005046747A2 (en) * | 2003-11-10 | 2005-05-26 | Angiotech International Ag | Intravascular devices and fibrosis-inducing agents |
AU2004291062A1 (en) * | 2003-11-10 | 2005-06-02 | Angiotech International Ag | Medical implants and anti-scarring agents |
WO2005051168A2 (en) * | 2003-11-19 | 2005-06-09 | Davies Richard J | System for detecting electrophysiological changes in breast tissue |
US20060201996A1 (en) * | 2005-03-09 | 2006-09-14 | Cook Biotech Incorporated | Medical graft materials with adherent extracellular matrix fibrous mass |
CN101161295A (zh) * | 2007-11-08 | 2008-04-16 | 浙江大学 | 电化学法对医用金属移植体表面胶原改性的方法 |
CN106178118A (zh) * | 2008-09-30 | 2016-12-07 | 加利福尼亚大学董事会 | 用于组织修复的使用细胞外基质的组合物和方法 |
US20110188728A1 (en) * | 2009-12-17 | 2011-08-04 | The Charles Stark Draper Laboratory, Inc. | Methods of generating trophectoderm and neurectoderm from human embryonic stem cells |
EP2533686A4 (en) * | 2010-02-12 | 2013-10-09 | Univ Georgetown | POLYMERIC FILM BIOELECTRODES AND METHOD FOR THEIR PREPARATION AND USE |
CN101773683A (zh) * | 2010-03-03 | 2010-07-14 | 天津大学 | 壳聚糖修饰的海藻酸盐水凝胶三维多孔支架及其制备方法 |
CN101791435A (zh) * | 2010-03-26 | 2010-08-04 | 浙江大学 | 一种医用金属移植体表面胶原改性的方法 |
CN102499994A (zh) * | 2011-11-04 | 2012-06-20 | 无锡中科光远生物材料有限公司 | 一种神经组织工程纤维膜及制备方法 |
CN104053459A (zh) * | 2011-11-23 | 2014-09-17 | 清华大学 | 基于透明海绵支架构建三维细胞微环境的方法及装置 |
CN103131625A (zh) * | 2011-11-23 | 2013-06-05 | 清华大学 | 用于构建三维微环境的方法及装置 |
CN102433258A (zh) * | 2011-12-01 | 2012-05-02 | 北京航空航天大学 | 一种牵张-电联合刺激三维细胞培养装置 |
CN103572408A (zh) * | 2012-08-07 | 2014-02-12 | 嘉兴学院 | 核-壳结构的电活性复合纤维及组织工程支架制备方法 |
CN103572606A (zh) * | 2012-08-07 | 2014-02-12 | 嘉兴学院 | 具有核-壳结构的复合多孔纤维及双重孔结构膜制备方法 |
CN104056306A (zh) * | 2014-06-09 | 2014-09-24 | 南京师范大学 | 具有拓扑结构的cnt/导电聚合物复合涂层修饰的神经导管材料及其制备方法 |
CN107106606A (zh) * | 2014-09-12 | 2017-08-29 | 杜雷安教育基金会行政处 | 神经微生理系统和使用其的方法 |
CN106999635A (zh) * | 2014-12-11 | 2017-08-01 | 苏黎世联邦理工学院 | 软骨修复用移植物支架及其制造方法 |
WO2016100857A1 (en) * | 2014-12-19 | 2016-06-23 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Stem cells for modeling type 2 diabetes |
EP3349778A2 (en) * | 2015-09-17 | 2018-07-25 | Histide AG | Pharmaceutical association of growth factor receptor agonist and adhesion protein inhibitor for converting a neoplastic cell into a non-neoplastic cell and uses thereof |
CN105566567A (zh) * | 2016-01-27 | 2016-05-11 | 清华大学 | 硬度可调节的温敏聚合物材料及其制备方法和应用 |
CN105920672A (zh) * | 2016-04-26 | 2016-09-07 | 四川大学 | 一种可促进外周神经组织快速修复的导电平行纤维膜及其制备方法 |
CN106047692A (zh) * | 2016-06-16 | 2016-10-26 | 浙江大学 | 一种用于可见光致细胞收割的钙钛矿薄膜器件及其制备方法和应用 |
WO2018022913A1 (en) * | 2016-07-28 | 2018-02-01 | eXion labs Inc. | Antimicrobial photoreactive composition comprising organic and inorganic multijunction composite |
CN106496639A (zh) * | 2016-09-18 | 2017-03-15 | 南京林业大学 | 一种纳米纤维素‑聚吡咯‑聚乙烯醇复合导电水凝胶及其制备方法和应用 |
WO2018083047A1 (en) * | 2016-11-03 | 2018-05-11 | ETH Zürich | Aligned porous fibrillar scaffold for tissue engineering and surgical application |
CN106860914A (zh) * | 2017-01-19 | 2017-06-20 | 浙江大学 | 一种经由细胞片层获得磷酸钙/细胞外基质薄膜的方法 |
CN106847547A (zh) * | 2017-02-09 | 2017-06-13 | 同济大学 | 三维管状二硫化钼/聚吡咯超级电容器复合电极材料及其制备 |
CN106963987A (zh) * | 2017-03-29 | 2017-07-21 | 浙江大学 | 一种经由细胞片层获得的导电细胞外基质复合薄膜及其制备方法 |
CN107142206A (zh) * | 2017-03-29 | 2017-09-08 | 浙江大学 | 一种用于可见光致体外培养的细胞/细胞薄层收割的硅/石墨烯基复合表面及其制备方法 |
CN107137765A (zh) * | 2017-04-24 | 2017-09-08 | 武汉理工大学 | 聚吡咯生物导电水凝胶及其制备方法和应用 |
WO2018197688A1 (en) * | 2017-04-28 | 2018-11-01 | Technische Universität Dresden | Non-covalently assembled conductive hydrogel |
CN107308498A (zh) * | 2017-06-23 | 2017-11-03 | 武汉康华世纪药业有限公司 | 一种复合纳米纤维神经支架的制备方法 |
CN107326001A (zh) * | 2017-07-26 | 2017-11-07 | 浙江大学 | 一种光响应细胞外基质复合薄膜及其制备方法 |
CN107737370A (zh) * | 2017-11-20 | 2018-02-27 | 西南交通大学 | 一种用于软骨修复的高强、超弹、导电水凝胶的制备方法 |
CN108411344A (zh) * | 2018-01-24 | 2018-08-17 | 浙江大学 | 一种可电场调控选择性释放生物分子的复合双层薄膜及其制备方法 |
CN112165954A (zh) * | 2018-03-23 | 2021-01-01 | 阿奇生物外科有限公司 | 用于治疗眼病的sap和拟肽 |
CN108969801A (zh) * | 2018-07-06 | 2018-12-11 | 浙江大学 | 一种具有光热效应的细胞外基质复合薄膜及其制备方法 |
CN112261970A (zh) * | 2018-07-10 | 2021-01-22 | 诺华股份有限公司 | 3-(5-羟基-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮衍生物及其在治疗ikaros家族锌指2(ikzf2)依赖性疾病中的用途 |
CN109575318A (zh) * | 2018-11-16 | 2019-04-05 | 华南理工大学 | 一种多巴胺介导的聚吡咯导电水凝胶及其制备方法 |
CN109627461A (zh) * | 2018-11-21 | 2019-04-16 | 华南理工大学 | 一种聚吡咯纳米复合导电水凝胶及其制备方法 |
CN110075348A (zh) * | 2019-04-11 | 2019-08-02 | 温州医科大学 | 用于制备pH敏感双网络水凝胶的溶胶体系、水凝胶及应用 |
CN112138212A (zh) * | 2020-09-07 | 2020-12-29 | 上海市东方医院(同济大学附属东方医院) | 活性细胞外基质、含有活性细胞外基质的组合物、3d组织修复支架及制备方法和应用 |
CN112812689A (zh) * | 2021-01-28 | 2021-05-18 | 浙江大学 | 一种基于胶原/纳米碳复合载药导电涂层的离子导入电极及其制备方法 |
Non-Patent Citations (11)
Title |
---|
JAE Y.LEE 等: "Nerve Growth Factor-Immobilized Electrically Conducting Fibrous Scaffolds for Potential Use in Neural Engineering Applications", 《IEEE TRANS NANOBIOSCIENCE.》 * |
ZHUO XIONG 等: "Fabrication of porous scaffolds for bone tissue engineering via low-temperature deposition", 《SCRIPTA MATERIALIA》 * |
吴钊: "聚吡咯及其复合材料制备与干细胞培养研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库(电子期刊)工程科技I辑》 * |
周岩: "导电聚合物-聚吡咯/透明质酸生物复合材料的制备表征和生物相容性研究", 《中国优秀博士学位论文全文数据库(电子期刊)》 * |
朱翼飞: "基于光场、电场响应的薄膜构建及生物分子调控和释放研究", 《中国优秀博士学位论文全文数据库(电子期刊)》 * |
李莹莹等: "丝素蛋白及其复合材料的研究进展", 《材料工程》 * |
梅滨等: "纳米材料的应用与进展", 《煤炭技术》 * |
穆静: "基于导电高分子聚吡咯纳米线构建金属骨移植材料表面性活性涂层", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库(电子期刊)》 * |
谷英姝等: "基于静电纺丝的聚乳酸纳米纤维应用研究进展", 《北京服装学院学报(自然科学版)》 * |
赵义秀: "电化学法调控层状组装多层膜硬度的研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库(电子期刊)》 * |
陈春涛: "细菌纤维素基电活性组织工程材料的制备与性能研究", 《中国优秀博士学位论文全文数据库(电子期刊)》 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN110331124B (zh) | 2022-03-22 |
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