CN110320291A

CN110320291A - 一种hplc法定量检测拉考沙胺注射液含量的方法

Info

Publication number: CN110320291A
Application number: CN201910541459.5A
Authority: CN
Inventors: 刘爱明; 戚敏; 陈凯; 王迎春; 李晓亮
Original assignee: Shandong Academy of Pharmaceutical Sciences
Current assignee: Shandong Academy of Pharmaceutical Sciences
Priority date: 2019-06-21
Filing date: 2019-06-21
Publication date: 2019-10-11

Abstract

本发明公开了一种HPLC定量检测拉考沙胺注射液含量的方法。所述HPLC中，流动相由乙腈‑甲醇‑水组成，采用等度洗脱。该方法中拉考沙胺在20～200μg/ml范围内线性关系良好。方法中实验材料易得，流动相简单，检测方法专属性强、灵敏度高、稳定、可靠，可用于拉考沙胺注射液的含量测定及质量控制，给生产过程和用药安全提供有益的参考。

Description

一种HPLC法定量检测拉考沙胺注射液含量的方法

技术领域

本发明属于药物分析领域，具体涉及一种HPLC法定量检测拉考沙胺注射液含量的方法。

背景技术

本品为无色的澄明液体，是一个新的抗癫痫药物，可单独用于治疗成人癫痫部分发作患者，欧盟和FDA分别于2008年8月与2008年10月批准用于年龄≥16岁(欧盟)/17岁(FDA)部分发作癫痫患者的辅助治疗。拉考沙胺属新一类功能性氨基酸，可通过降低钠离子通道的过度活性来控制神经细胞活性，从而达到控制癫痫发作的目的。目前，全球范围内有关拉考沙胺生物样本和原料药的检测已经被报道和应用，但拉考沙胺作为注射剂的含量检测均未见报道。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明提供了一种简便、快速、准确的检测拉考沙胺注射液含量的方法，此法可用于拉考沙胺注射液的含量测定及质量控制，给生产过程和用药安全提供有益的参考。

一种HPLC定量检测拉考沙胺注射液含量的方法，包括步骤(1)样品制备，(2)标准曲线制备，(3)采用HPLC检测拉考沙胺注射液含量。

所述(1)样品制备的步骤包括：精密量取本品1mL(约相当于拉考沙胺10mg)，置50mL量瓶中，用流动相定容至刻度，摇匀，精密量取5mL，置10mL量瓶中，用流动相定容至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

所述(2)标准曲线制备的步骤包括：分别精密量取拉考沙胺对照品贮备液50，150，250，375，500μl，流动相适量，到终体积为1000μl，制成标准曲线溶液，采用(3)HPLC的方法检测，记录每个浓度的拉考沙胺对应的峰面积；以拉考沙胺峰面积为纵坐标，以拉考沙胺的浓度为横坐标X，制备拉考沙胺的线性回归方程。

所述步骤(3)采用HPLC检测的步骤包括：

(a)液相色谱条件色谱柱：C18柱；流动相：乙腈-甲醇-水。

所述(a)液相色谱条件中，色谱柱：C18柱；样品检测时间：14min；流速：1.0ml/min；进样量：20μl；柱温：30℃。

所述拉考沙胺对照品贮备液：精密称取拉考沙胺标准品20mg，置50mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，得拉考沙胺含量约为400μg/ml对照品储备液。

本发明建立了HPLC法用于拉考沙胺注射液含量的测定，并对其进行方法学验证，结果表明，所建立的方法符合中国药典2015版《药品质量标准分析方法验证指导原则》的要求，方法中实验材料易得，流动相简单，检测方法专属性强、灵敏度高、稳定、可靠，可用于拉考沙胺注射液的含量测定及质量控制，给生产过程和用药安全提供有益的参考。

附图说明

图1流动相(稀释剂)色谱图。

图2溶液4色谱图。

图3供试品溶液色谱图。

具体实施方式

下面结合具体实施例和附图对本发明的技术方案作进一步的详细说明。下述内容仅用于说明本发明，但本发明不局限于此。

1仪器与试剂

Agilent1260型高效液相色谱仪，Agilent公司，包括G1311C型四元输液泵，G1329B型自动进样器，G1316A型控温模块，G1314F型柱温箱，G1314F型紫外检测器。AUW-120D型电子分析天平，岛津公司。GM-0.33A隔膜真空泵，天津市津腾实验设备有限公司。Milli-Q超纯水机，默克化工技术(上海)有限公司。KQ3200B型超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司。

拉考沙胺注射液(规格：20mL:200mg，由山东省药学科学院提供)。拉考沙胺对照品(由山东省药学科学院提供)。甲醇(色谱纯，Merck)。乙腈(色谱纯，Merck)。水为AdvantageA10Milli-Q超纯水机制备的超纯水。

2溶液制备

2.1对照品溶液配制

溶液1(对照品储备液)：精密称取拉考沙胺标准品20mg，置50mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，得拉考沙胺含量约为400μg/ml对照品储备液。

标准曲线溶液：精密量取溶液1适量，至EP管中，加流动相定量稀释制成一系列标准曲线溶液(表2)。

表2 标准曲线溶液

2.2供试品溶液配制

精密量取本品1mL(约相当于拉考沙胺10mg)，置50mL量瓶中，用流动相定容至刻度，摇匀，精密量取5mL，置10mL量瓶中，用流动相定容至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

3方法学验证

3.1液相色谱条件液相采用Agilent1260高效液相,色谱柱：ThermoSyncronis C18(4.6×250mm，5μm)；流动相：乙腈-甲醇-水(16:16:68)；样品检测时间：14min；流速：1.0ml/min；进样量：20μl；柱温：30℃。

3.2专属性

取标准曲线溶液内的溶液4、流动相、供试品溶液按3.1方法检测，得色谱图(见图1)。结果表明，供试品与对照品出峰位置一致，出峰位置无干扰，且在出峰位置，空白溶剂不出峰。

3.3线性和范围

取2.1项下制备的对照品系列溶液，按3.1方法检测。以拉考沙胺的浓度为横坐标X，拉考沙胺的峰面积为纵坐标Y，进行回归运算，求得的直线方程即为标准曲线。回归方程为Y＝55.988X+43.041；r＝1.0000。拉考沙胺在20～200μg/ml范围内线性关系良好。

取对照品溶液逐级稀释，通过测定峰高(S)和基线噪音(N)，按信噪比(S/N)3:1确定检出限为20.3ng/ml，按信噪比(S/N)10:1确定最低定量限为101.5ng/ml。

3.4精密度

重复性：取同一份供试品溶液，按照3.1方法，连续进样6次，计算色谱图中拉考沙胺峰面积的RSD为1.5％，<5％。

中间精密度：按照2.2操作，于第2天制备另一份供试品溶液，按3.1方法，连续进样6次，计算色谱图中拉考沙胺峰面积的RSD为0.5％，<5％。

表明方法精密度符合要求。

3.5回收率

按处方量的80％、100％、120％进行回收率试验。分别精密称取拉考沙胺对照品80.00mg、100.00mg、120.00mg，各3份，按处方比例加入不含拉考沙胺的阴性对照注射液，按照2.2项下制备供试品溶液，按3.1方法检测。结果见表2，表明样品处理方法回收率稳定。

表2 回收率实验结果

3.6稳定性考察

取精密度项下用于重复性实验的供试品溶液，在室温避光下放置6h，分别在0、1、2、4、6h时取样，按2.2项下方法处理为相对应供试品溶液，按3.1方法检测，记录峰面积，计算色谱图中拉考沙胺峰面积的RSD为0.7％，表明供试品溶液在6h内稳定性良好。

Claims

1.一种HPLC定量检测拉考沙胺注射液含量的方法，包括步骤(1)样品制备，(2)标准曲线制备，(3)采用HPLC检测拉考沙胺注射液含量；

所述(1)样品制备的步骤包括：精密量取本品1mL(约相当于拉考沙胺10mg)，置50mL量瓶中，用流动相定容至刻度，摇匀，精密量取5mL，置10mL量瓶中，用流动相定容至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液；

所述(2)标准曲线制备的步骤包括：分别精密量取拉考沙胺对照品贮备液50，150，250，375，500μl，流动相适量，到终体积为1000μl，制成标准曲线溶液，采用(3)HPLC的方法检测，记录每个浓度的拉考沙胺对应的峰面积；以拉考沙胺峰面积为纵坐标，以拉考沙胺的浓度为横坐标X，制备拉考沙胺的线性回归方程；

所述(3)采用HPLC检测的步骤包括：

(a)液相色谱条件色谱柱：C18柱；流动相：乙腈-甲醇-水；

2.如权利要求1所述的一种HPLC定量检测拉考沙胺注射液含量的方法，其特征在于，所述拉考沙胺对照品贮备液：精密称取拉考沙胺标准品20mg，置50mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，得拉考沙胺含量约为400μg/ml对照品储备液。

3.如权利要求1所述的一种HPLC定量检测拉考沙胺注射液含量的方法，其特征在于，流动相：乙腈-甲醇-水，体积比为16:16:68。