CN110317208B - 一种淫羊藿素衍生物的制备方法和医药用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种淫羊藿素衍生物的制备方法和医药用途。本发明使用三羟基苯乙酮，氯甲基甲醚等初始原料将异戊烯基通过邻位重排连接到8位碳，随后再进行黄酮骨架的形成系列反应，最后脱水引入丙烯基团，从头合成一种淫羊藿素衍生物。本合成路线成本低廉、操作简单、回收率良好，宜于工业化生产。经过药理药效实验表明，本衍生物具有激活机体内源性干细胞药理学效用，达到修复血管、神经、内皮细胞和基质损伤性病理变化康复功能的效果，可制备组织损伤病理变化修复的药物，例如康复治疗勃起功能障碍病理变化的药物方面有良好前景。

Description

一种淫羊藿素衍生物的制备方法和医药用途
技术领域
本发明属于药物化学领域，具体的涉及一种淫羊藿素衍生物及其制备方法和医药用途。
背景技术
危害人类健康的慢性病包括糖尿病、高血压病、肥胖、创伤等常见疾病引起的合并症主要是发生在重要实质性器官如心脑肾及生殖器组织血管、神经及基质病理生理变化，导致功能细胞凋亡、变性、坏死,发生退行性病理变化引起相关器官功能障碍。因此，探索组织损伤修复的病理生理学机制，探索能够防治这些病理生理变化的药物和方法对维护器官功能是目前重大挑战，本专利发明正是基于此。
黄酮醇类化合物普遍存在于植物中,因其具有广泛而有效的生物活性而倍受人们关注。作为其中重要的一员,淫羊藿素衍生物具有抗肿瘤、抗癌细胞增殖、抗骨质疏松、调节雌激素等广泛的生物活性。虽然可以通过水解淫羊藿苷来获取淫羊藿素衍生物,但淫羊藿苷在自然界含量较低,且分离纯化较为复杂。所以以合成的方式得到淫羊藿素衍生物是药物研究和工业生产的首选策略，其中黄酮醇骨架的构建和异戊烯基的引入至为关键。
而异戊烯基的引入则主要通过碱催化的苯酚与异戊烯基溴的反应、芳香有机锂试剂与异戊烯基溴的反应、路易斯酸催化下的苯酚与异戊烯醇的反应、芳香硼酸化合物(或芳香三氟化硼钾盐)与异戊烯基溴的Suzuki偶联反应、铱催化下的连续二烯与芳香底物的反应、苯酚的Mitsunobu反应-Claisen重排-烯烃复分解三步反应等方法来完成。
虽然CN200610165354公开了一种全合成的合成淫羊藿素衍生物的方法，但是其关键的异戊烯基的重排反应需要用到微波，产量低，副产物多，难以应用大批量生产。牟关敏等(有机化学杂志，2013 年,33卷,1298～1303页)报道了一种先合成黄酮骨架，再引入异戊烯基的路线，但是其重排反应需要用到昂贵的铕催化剂，不利于大规模工业化生产。
发明内容
针对以上缺点，本发明的第一个方面在于公开一种具有优异效果的修复阴茎海绵体平滑肌/胶原纤维比例失调，内皮细胞损伤神经病变而恢复勃起功能的人工合成的淫羊藿素衍生物，以下用代号YS10 表示。
本发明的另一方面为所述淫羊藿素衍生物YS10的从头合成方法。
本发明的再一方面为所述淫羊藿素衍生物YS10的医药用途。
下面论述本发明的第一个方面：本发明人发现一类淫羊藿素衍生物YS10具优异的激活机体内源性干细胞药理学效用,以及修复血管、神经、内皮细胞和基质损伤性病理变化康复功能的效果，譬如修复阴茎海绵体平滑肌/胶原纤维比例失调，内皮细胞损伤神经病变而康复勃起功能。而其修复阴茎海绵体病理变化而康复勃起功能的效果比已公开的脱水淫羊藿素显著优越。
本发明提供的一种淫羊藿素衍生物YS10或其药学上可接受的盐具有如下结构：
Figure GDA0003516422910000031
下面论述本发明的第二个目的：淫羊藿素衍生物YS10从头合成。在现有技术中，合成淫羊藿素衍生物在引入异戊烯基的工艺过程中存在异戊烯基的产率低，工艺复杂，催化剂昂贵，副化合物多的的缺点；本发明通过在形成黄酮骨架之前，将异戊烯基通过邻位重排连接到8 位，然后才进行黄酮骨架的形成系列反应，产率得到提高，避免了微波的使用，提供一种方法简便，工艺稳定，并宜于工业化生产的淫羊藿素衍生物的方法。包括如图1所示以下步骤：
(1)羟基保护：将2,4,6-三羟基苯乙酮溶于丙酮中，在碳酸盐催化剂作用下与氯甲基甲醚反应，得到产物I；
(2)引入B环：以产物I为原料，与对甲氧基苯甲酰氯进行酯化反应，引入B环，得到产物II；
(3)甲基溴化：将产物II进行溴代反应，得溴化物产物III；
(4)引入OBz基团：将产物III与苯甲酸 钾反应得到产物IV；
(5)OBz基团重排：将产物IV与氢化钠反应，OBz基团重排得到产物V；
(6)引入异戊烯基：将产物V在催化剂的作用下与1-溴-3-甲基-2-丁烯反应得产物VI；
(7)异戊烯基邻位重排：产物VI与三氟甲烷磺酸铋反应得产物 VII；
(8)C环环合：以产物VII为原料，在混酸的催化下进行C环环合反应，得到目标产物VIII；
(9)3位羟基脱保护：以产物VIII为原料，在碱的催化下脱OBz 保护基得产物IX；
(10)脱水：将产物IX与混酸反应得产物X；
(11)引入丙烯基团：将产物X与3-溴-2-甲基丙烯反应得产物 XI，即所述淫羊藿素衍生物YS10。
本合成路线法合理，反应温和，易于实现，起始原料易于获得，克服了原来引入异戊烯基产率低，需要微波辅助或者需要昂贵的铕化物做催化剂，副化合物多等不利条件。
进一步的，在步骤(1)的反应中，所述碳酸盐催化剂是原料2,4,6- 三羟基苯乙酮5-10倍摩尔量的无水碳酸钾。
进一步的，在步骤(5)的反应中，所述NaH的用量是所述产物 IV的1-2倍摩尔量。
进一步的，在步骤(6)的反应中，所述催化剂是产物V1-5倍摩尔量的无水碳酸钾。
进一步的，在步骤(7)的反应中，所述三氟甲烷磺酸铋的加入量是产物VI 0.01-0.1倍摩尔量。
下面论述本发明的第三个目的：本发明所述淫羊藿素衍生物YS10 用于预防或者治疗勃起功能障碍药物中的用途。
我们首先进行本发明所述淫羊藿素衍生物YS10对内源性干细胞激活的体外研究，内源性干细胞(Endogenous Stem Cells,ESC)，是机体内部所有干细胞/前体细胞的统称，包括脂肪干细胞的各类间充质干细胞、造血干细胞等。内源性干细胞具有低分裂或保持静息状态，在特定的病理环境下具有自我更新和多向分化功能而组织损伤修复作用。脂肪干细胞资源丰富，常用于药物疗效和作用机制研究。本发明采用脂肪干细胞作为研究对象，对本发明所述淫羊藿素衍生物YS10 的激活作用进行了研究。结果发现，本发明所述淫羊藿素衍生物YS10 对脂肪干细胞的激活作用明显优于脱水淫羊藿素，此结果表明本发明所述淫羊藿素衍生物YS10在特定的病理环境下能够激活内源性干细胞的自我更新和多向分化功能，从而发挥组织损伤修复作用。
随后我们进行本发明所述淫羊藿素衍生物YS10对阴茎海绵体神经损伤性ED模型大鼠的动物实验，结果证明相比脱水淫羊藿素，本发明所述淫羊藿素衍生物YS10对大鼠平滑肌的修复作用更加明显，对大鼠阴茎海绵体纤维化的缓解作用也更加明显。本发明所述淫羊藿素衍生物YS10能够明显改善神经损伤性勃起功能障碍。
因此，本发明所述的淫羊藿素衍生物YS10或其药学上可接受的盐在制备用于治疗勃起功能障碍的药物中具有良好的前景。
进一步的，本发明所述淫羊藿素衍生物YS10或其药学上可接受的盐在制备用于治疗勃起功能障碍的药物中，所述的药物的制剂可以为片剂、胶囊、喷雾剂或注射剂。
进一步的，由于本发明所述淫羊藿素衍生物YS10在特定的病理环境下能够激活内源性干细胞的自我更新和多向分化功能，从而发挥组织损伤修复作用，因此本发明所述淫羊藿素衍生物YS10或其药学上可接受的盐在制备激活机体内源性干细胞的药物中亦有应用前景。
进一步的，危害人类健康的慢性病包括糖尿病、高血压病、肥胖、创伤等常见疾病引起的合并症主要是发生在重要实质性器官如心脑肾及生殖器组织血管、神经及基质病理生理变化，导致功能细胞凋亡、变性、坏死并发生退行性病理变化引起相关器官功能障碍。然而，ED 是以上疾病综合引起的阴茎海绵体组织病理生理学变化，对ED治疗具有良好效果的药物，可在其它慢性疾病中也有良好的应用前景。
此外，由于慢性肾病、生殖功能障碍或视网膜病变等疾病有相当多的报道可以通过激活内源性干细胞来治疗，本发明所述淫羊藿素衍生物YS10或其药学上可接受的盐在制备激活机体内源性干细胞的药物中的应用，所述药物优选为治疗慢性肾病、生殖功能障碍或视网膜病变的药物。
附图说明：
附图1为YS10合成路线图1；
附图2为YS10的合成路线图2；
附图3为YS10的HPLC图谱；
附图4(A)为不同浓度脱水淫羊藿素激活脂肪干细胞表达磷酸化组蛋白3(H3P)的免疫组化图像；(B)为不同浓度下脱水淫羊藿素激活脂肪干细胞百分比的比较；
附图5为脱水淫羊藿素对Wnt/β-catenin信号通路的激活，其中(A)为蛋白质免疫印迹图像；(B)为0-1000nm脱水淫羊藿素对β-catenin表达影响的量化图。(C)为0-1000nm脱水淫羊藿素对 Cyclin D1表达影响的量化图；
附图6为淫羊藿素衍生物YS10和脱水淫羊藿素对脂肪干细胞激活作用的比较，其中(A)为脱水淫羊藿素和YS10分别激活脂肪干细胞表达磷酸化组蛋白3(H3P)的免疫组化图像；(B)为脱水淫羊藿素和YS10对激活脂肪干细胞表达磷酸化组蛋白3(H3P)的定量分析；
附图7(A)为各实验组阴茎海绵体压和平均动脉压测定；(B) 为各实验组ICP/MAP的最大值；(C)为各实验组ICP/MAP的总值；
附图8(A)为各实验组阴茎组织横切面平滑肌α-SMA免疫组化染色；(B)为各实验组Western blot检测阴茎海绵体平滑肌α-SMA 的表达情况；(C)为各实验组Western Blot结果分析；
附图9(A)为各实验组中段阴茎组织横切面Masson染色图像； (B)为半定量分析比较sham组，双侧海绵体神经夹伤组(BCNI)， DE组和YS10组之间平滑肌与胶原纤维的比值；
附图10为淫羊藿素衍生物YS10促进双侧海绵体神经夹伤组 (BCNI)ED大鼠中a-SMA和nNOS的表达；(A)为各实验组实验一周后阴茎组织的a-SMA和RECA-1染色；(B)为各实验组实验一周后阴茎组织的nNOS染色和phalloidin染色；(C)为图(A)的定量分析；(D)为图(B)的定量分析。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法，所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中的室温为15-25℃。
实施例1
本发明提供的一种淫羊藿素衍生物YS10或其药学上可接受的盐，具有如下结构
Figure GDA0003516422910000081
实施例2
一种淫羊藿素衍生物YS10的制备方法。
以下多个淫羊藿素衍生物YS10的制备例，都包括如图1所示的通用步骤：
(1)羟基保护：将2,4,6-三羟基苯乙酮溶于丙酮中，在碳酸盐催化剂作用下与氯甲基甲醚反应，得到产物I；所述碳酸盐催化剂是原料2,4,6-三羟基苯乙酮5-10倍摩尔量的无水碳酸钾；
(2)引入B环：以产物I为原料，与对甲氧基苯甲酰氯进行酯化反应，引入B环，得到产物II；
(3)甲基溴化：将产物II进行溴代反应，得溴化物产物III；
(4)引入OBz基团：将产物III与苯甲酸 钾反应得到产物IV；
(5)OBz基团重排：将产物IV与氢化钠反应，OBz基团重排得到产物V；所述NaH的用量是所述产物IV的1-2倍摩尔量；
(6)引入异戊烯基：将产物V在催化剂的作用下与1-溴-3-甲基-2-丁烯反应得产物VI；所述催化剂是产物V1-5倍摩尔量的无水碳酸钾；
(7)异戊烯基邻位重排：产物VI与三氟甲烷磺酸铋反应得产物 VII；所述三氟甲烷磺酸铋的加入量是产物VI 0.01-0.1倍摩尔量；
(8)C环环合：以产物VII为原料，在混酸的催化下进行C环环合反应，得到目标产物VIII；
(9)3位羟基脱保护：以产物VIII为原料，在碱的催化下脱OBz 保护基得产物IX；
(10)脱水：将产物IX与混酸反应得产物X；
(11)引入丙烯基团：将产物X与3-溴-2-甲基丙烯反应得产物 XI，即所述淫羊藿素衍生物YS10。
制备例1：
YS10的从头合成，如图2所示合成路线，包括以下步骤：
(1)羟基保护：将2,4,6-三羟基苯乙酮0.1mol溶于500ml丙酮中，加入0.5mol碳酸钾，搅拌30min后降温至0度，向其中缓慢滴加0.2mol氯甲基甲醚，置于室温下反应3h,反应结束后向反应液中加入500ml冰水，乙酸乙酯萃取*3，合并乙酸乙酯层，将其用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸干，过硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝30/1)以得到目标产物I(20g,产率78％)。
(2)引入B环：将0.1mol产物I溶于500ml无水四氢呋喃中，降至0度后加入0.15molNaH，搅拌5min后加入0.12mol倍量对甲氧基苯甲酰氯，将反应液缓慢升温至室温，反应结束后将反应液倒入冰水中，乙酸乙酯萃取*3，合并乙酸乙酯层，将其用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸干，过硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝30/1)以得到目标产物II(33g,产率85％)。
(3)甲基溴化：将0.1mol产物II溶于500ml乙酸乙酯中，加入0.2mol溴化铜，室温下反应。反应结束后，将反应液过硅藻土，二氯甲烷洗脱，洗脱液减压蒸干即得目标产物III(39g,产率83％)。
(4)引入OBz基团：将0.1mol产物III溶于1000ml乙腈中，加入0.2mol苯甲酸 钾，回流反应。反应结束后将反应液冷却至室温，用水稀释，乙酸乙酯萃取*3，合并乙酸乙酯层，将其水洗三次后再用饱和食盐水洗，减压蒸干，过硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝20/1)以得到目标产物IV(43g,产率86％)。
(5)OBz基团重排：将0.1molNaH分散于500ml无水四氢呋喃中，加入0.1mol产物IV，回流反应。反应结束后，将反应液冷却至室温后倒入冰水中，减压浓缩后乙酸乙酯萃取*3，合并乙酸乙酯层，将其用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸干，过硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝30/1)以得到目标产物V(43g,产率84％)。
(6)引入异戊烯基：将0.1mol产物V溶于丙酮中，加入0.1mol 无水碳酸钾，搅拌30min，此为溶液①；将0.28mol 3,3-二甲基烯丙溴溶于丙酮中，此为溶液②；将溶液①移至冰浴，待其降至0度后向其中缓缓滴加溶液②。缓慢移除冰盐浴后于室温下继续反应。反应结束后将反应液抽滤，滤液蒸干，二氯溶解后用水反萃。弃去水层，将二氯层用无水硫酸钠干燥后减压蒸干，得黄色油状物。将其用少量二氯甲烷溶解后过硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝15/1)即得产物VI(50g, 产率87％)。
(7)异戊烯基邻位重排：将0.1mol产物VI溶于500ml乙腈，加热回流后向其中加入0.01mol的三氟甲烷磺酸铋(III)。反应结束后，将反应液减压浓缩，过硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝35/1)得到目标产物VII(48g,产率83％)。
(8)C环环合：将0.1mol产物VII溶于2L冰醋酸中，向其中加入200ml浓硫酸，升温至60度反应。反应结束后，将反应液倒入冰水中，减压浓缩后乙酸乙酯萃取*3，合并乙酸乙酯层，将其用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸干，过硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝30/1)得到目标产物VIII(45g,产率95％)。
(9)3位羟基脱保护：将0.1mol产物VIII溶于1000ml乙醇中，向其中缓慢滴加500ml5％NaOH水溶液，将其升温至60度反应。反应结束后，将反应液用2L 1M HCl溶液酸化，乙酸乙酯萃取*3，合并乙酸乙酯层，将其用饱和碳酸钠溶液洗涤、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸干，过硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝35/1)以得到目标产物IX(32g,产率87％)。
(10)脱水：将3L 80％冰醋酸与900ml 5mol/L硫酸置于茄形瓶中，搅拌均匀后，向其中加入0.1mol产物IX，升温至90℃回流反应。TLC(石油醚：二氯甲烷：甲醇＝40：40：1)跟踪反应，约6小时后反应完全。反应结束，待反应液冷却至室温后用饱和碳酸氢钠溶液将其pH调至7-8。静置一小时，有大量黄色固体析出，抽滤，滤饼用水洗涤三次后低温干燥，得产物X(34g,产率92％)。
(11)引入丙烯基团：将0.1mol产物X与500ml二甲基甲酰胺混合后向其中加入0.15mol的无水碳酸钾，搅拌10分钟后向其中缓慢滴加0.12mol倍量的3-溴-2-甲基丙烯，加毕，置于室温下反应。 TLC(石油醚：二氯甲烷：甲醇＝40：40：1)跟踪反应，约8小时后反应完全。反应结束，将反应液倒入500mL冰水中，搅拌后静置一小时，有大量浅黄色固体析出，抽滤，滤饼用水洗涤三次后干燥，得 YS-10粗产物。将粗产物过硅胶柱(石油醚：二氯甲烷：甲醇＝40：40：1)，得产物XI即YS-10(37g,产率88％)，HPLC图谱见图3。1H NMR (400MHz,CDCl3)δ12.43(s,1H),8.11(d,2H),7.02(d,2H), 6.25(s,1H),5.09(m,1H),4.95(m,1H)4.49(s,2H),3.91(s, 3H),2.87(t,J＝6.8Hz,2H),1.89(t,J＝6.8Hz,2H),1.77 (s,3H),1.39(s,6H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ178.78,161.52, 160.01,159.51,155.45,153.81,141.07,137.67,130.18(2C), 123.31,113.95(2C),113.74,105.71,99.94,99.46,75.93,75.90, 55.41,31.77,26.63,19.72,16.29.Exact mass:422.17。
制备例2：
YS10的从头合成，如图2所示合成路线，包括以下步骤：
(1)羟基保护：将2,4,6-三羟基苯乙酮0.1mol溶于500ml丙酮中，加入0.7mol碳酸钾，搅拌30min后降温至0度，向其中缓慢滴加0.2mol氯甲基甲醚，置于室温下反应。反应结束后向反应液中加入500ml冰水，乙酸乙酯萃取*3，合并乙酸乙酯层，将其用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸干，过硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝30/1)以得到目标产物I(22g,产率86％)。
(2)引入B环：将0.1mol产物I溶于500ml无水四氢呋喃中，降至0度后加入0.15molNaH，搅拌5min后加入0.12mol倍量对甲氧基苯甲酰氯，将反应液缓慢升温至室温，反应结束后将反应液倒入冰水中，乙酸乙酯萃取*3，合并乙酸乙酯层，将其用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸干，过硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝30/1)得到目标产物II(33g,产率85％)。
(3)甲基溴化：将0.1mol产物II溶于500ml乙酸乙酯中，加入0.2mol溴化铜，室温下反应。反应结束后，将反应液过硅藻土，二氯甲烷洗脱，洗脱液减压蒸干即得目标产物III(39g,产率83％)。
(4)引入OBz基团：将0.1mol产物III溶于1000ml乙腈中，加入0.2mol苯甲酸 钾，回流反应。反应结束后将反应液冷却至室温，用水稀释，乙酸乙酯萃取*3，合并乙酸乙酯层，将其水洗三次后再用饱和食盐水洗，减压蒸干，过硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝20/1)以得到目标产物IV(43g,产率86％)。
(5)OBz基团重排：将0.15molNaH分散于500ml无水四氢呋喃中，加入0.1mol产物IV，回流反应。反应结束后，将反应液冷却至室温后倒入冰水中，减压浓缩后乙酸乙酯萃取*3，合并乙酸乙酯层，将其用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸干，过硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝30/1)以得到目标产物V(44g,产率86％)。
(6)引入异戊烯基：将0.1mol产物V溶于丙酮中，加入0.25mol 无水碳酸钾，搅拌30min，此为溶液①；将0.28mol 3,3-二甲基烯丙溴溶于丙酮中，此为溶液②；将溶液①移至冰浴，待其降至0度后向其中缓缓滴加溶液②。缓慢移除冰盐浴后于室温下继续反应。反应结束后将反应液抽滤，滤液蒸干，二氯溶解后用水反萃。弃去水层，将二氯层用无水硫酸钠干燥后减压蒸干，得黄色油状物。将其用少量二氯甲烷溶解后过硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝15/1)即得产物VI(52g, 产率90％)。
(7)异戊烯基邻位重排：将0.1mol产物VI溶于500ml乙腈，加热回流后向其中加入0.05倍量的三氟甲烷磺酸铋(III)。反应结束后，将反应液减压浓缩，过硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝35/1)以得到目标产物VII(50g,产率87％)。
(8)C环环合：将0.1mol产物VII溶于2L冰醋酸中，向其中加入200ml浓硫酸，升温至60度反应。反应结束后，将反应液倒入冰水中，减压浓缩后乙酸乙酯萃取*3，合并乙酸乙酯层，将其用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸干，过硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝30/1)以得到目标产物VIII(45g,产率95％)。
(9)3位羟基脱保护：将0.1mol产物VIII溶于1000ml乙醇中，向其中缓慢滴加500ml5％NaOH水溶液，将其升温至60度反应。反应结束后，将反应液用2L 1M HCl溶液酸化，乙酸乙酯萃取*3，合并乙酸乙酯层，将其用饱和碳酸钠溶液洗涤、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸干，过硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝35/1)以得到目标产物IX(32g,产率87％)。
(10)脱水：将3L 80％冰醋酸与900ml 5mol/L硫酸置于茄形瓶中，搅拌均匀后，向其中加入0.1mol产物IX，升温至90℃回流反应。TLC(石油醚：二氯甲烷：甲醇＝40：40：1)跟踪反应，约6小时后反应完全。反应结束，待反应液冷却至室温后用饱和碳酸氢钠溶液将其pH调至7-8。静置一小时，有大量黄色固体析出，抽滤，滤饼用水洗涤三次后低温干燥，得产物X(34g,产率92％)。
(11)引入丙烯基团：将0.1mol产物X与500ml二甲基甲酰胺混合后向其中加入0.15mol的无水碳酸钾，搅拌10分钟后向其中缓慢滴加0.12mol倍量的3-溴-2-甲基丙烯，加毕，置于室温下反应。 TLC(石油醚：二氯甲烷：甲醇＝40：40：1)跟踪反应，约8小时后反应完全。反应结束，将反应液倒入500mL冰水中，搅拌后静置一小时，有大量浅黄色固体析出，抽滤，滤饼用水洗涤三次后干燥，得 YS-10粗产物。将粗产物过硅胶柱(石油醚：二氯甲烷：甲醇＝40： 40：1)，得产物XI即YS-10(37g,产率88％)，核磁数据同制备例1。
制备例3
YS10的从头合成，如图2所示合成路线，包括以下步骤：
(1)羟基保护：将2,4,6-三羟基苯乙酮0.1mol溶于500ml丙酮中，加入1mol碳酸钾，搅拌30min后降温至0度，向其中缓慢滴加0.2mol氯甲基甲醚，置于室温下反应。反应结束后向反应液中加入500ml冰水，乙酸乙酯萃取*3，合并乙酸乙酯层，将其用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸干，过硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝ 30/1)以得到目标产物I(21g,产率82％)。
(2)引入B环：将0.1mol产物I溶于500ml无水四氢呋喃中，降至0度后加入0.15molNaH，搅拌5min后加入0.12mol倍量对甲氧基苯甲酰氯，将反应液缓慢升温至室温，反应结束后将反应液倒入冰水中，乙酸乙酯萃取*3，合并乙酸乙酯层，将其用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸干，过硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝30/1)以得到目标产物II(33g,产率85％)。
(3)甲基溴化：将0.1mol产物II溶于500ml乙酸乙酯中，加入0.2mol溴化铜，室温下反应。反应结束后，将反应液过硅藻土，二氯甲烷洗脱，洗脱液减压蒸干即得目标产物III(39g,产率83％)。
(4)引入OBz基团：将0.1mol产物III溶于1000ml乙腈中，加入0.2mol苯甲酸 钾，回流反应。反应结束后将反应液冷却至室温，用水稀释，乙酸乙酯萃取*3，合并乙酸乙酯层，将其水洗三次后再用饱和食盐水洗，减压蒸干，过硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝20/1)以得到目标产物IV(43g,产率86％)。
(5)OBz基团重排：将0.2molNaH分散于500ml无水四氢呋喃中，加入0.1mol产物IV，回流反应。反应结束后，将反应液冷却至室温后倒入冰水中，减压浓缩后乙酸乙酯萃取*3，合并乙酸乙酯层，将其用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸干，过硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝30/1)以得到目标产物V(39g,产率76％)。
(6)引入异戊烯基：将0.1mol产物V溶于丙酮中，加入0.5mol 无水碳酸钾，搅拌30min，此为溶液①；将0.28mol 3,3-二甲基烯丙溴溶于丙酮中，此为溶液②；将溶液①移至冰浴，待其降至0度后向其中缓缓滴加溶液②。缓慢移除冰盐浴后于室温下继续反应。反应结束后将反应液抽滤，滤液蒸干，二氯溶解后用水反萃。弃去水层，将二氯层用无水硫酸钠干燥后减压蒸干，得黄色油状物。将其用少量二氯甲烷溶解后过硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝15/1)即得产物VI(46g, 产率79％)。
(7)异戊烯基邻位重排：将0.1mol产物VI溶于500ml乙腈，加热回流后向其中加入0.1mol的三氟甲烷磺酸铋(III)。反应结束后，将反应液减压浓缩，过硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝35/1)以得到目标产物VII(47g,产率82％)。
(8)C环环合：将0.1mol产物VII溶于2L冰醋酸中，向其中加入200ml浓硫酸，升温至60度反应。反应结束后，将反应液倒入冰水中，减压浓缩后乙酸乙酯萃取*3，合并乙酸乙酯层，将其用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸干，过硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝30/1)以得到目标产物VIII(45g,产率95％)。
(9)3位羟基脱保护：将0.1mol产物VIII溶于1000ml乙醇中，向其中缓慢滴加500ml5％NaOH水溶液，将其升温至60度反应。反应结束后，将反应液用2L 1M HCl溶液酸化，乙酸乙酯萃取*3，合并乙酸乙酯层，将其用饱和碳酸钠溶液洗涤、饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压蒸干，过硅胶柱(石油醚/乙酸乙酯＝35/1)以得到目标产物IX(32g,产率87％)。
(10)脱水：将3L 80％冰醋酸与900ml 5mol/L硫酸置于茄形瓶中，搅拌均匀后，向其中加入0.1mol产物IX，升温至90℃回流反应。TLC(石油醚：二氯甲烷：甲醇＝40：40：1)跟踪反应，约6小时后反应完全。反应结束，待反应液冷却至室温后用饱和碳酸氢钠溶液将其pH调至7-8。静置一小时，有大量黄色固体析出，抽滤，滤饼用水洗涤三次后低温干燥，得产物X(34g,产率92％)。
(11)引入丙烯基团：将0.1mol产物X与500ml二甲基甲酰胺混合后向其中加入0.15mol的无水碳酸钾，搅拌10分钟后向其中缓慢滴加0.12mol倍量的3-溴-2-甲基丙烯，加毕，置于室温下反应。 TLC(石油醚：二氯甲烷：甲醇＝40：40：1)跟踪反应，约8小时后反应完全。反应结束，将反应液倒入500mL冰水中，搅拌后静置一小时，有大量浅黄色固体析出，抽滤，滤饼用水洗涤三次后干燥，得 YS-10粗产物。将粗产物过硅胶柱(石油醚：二氯甲烷：甲醇＝40： 40：1)，得产物XI即YS-10(37g,产率88％)，核磁数据同制备例1。
实施例3
YS10在用于预防或者治疗勃起功能障碍的药物中的用途。
第一部分，体外实验：YS10与脱水淫羊藿素对脂肪干细胞激活作用的比较。
研究背景：
危害人类健康的慢性病包括糖尿病、高血压病、肥胖、创伤等常见疾病引起的合并症主要是发生在重要实质性器官如心脑肾及生殖器组织血管、神经及基质病理生理变化，导致功能细胞凋亡、变性、坏死,发生退行性病理变化引起相关器官功能障碍。因此，探索组织损伤修复的病理生理学机制，探索能够防治这些病理生理变化的药物和方法对维护器官功能是目前重大挑战，本专利发明正是基于此。
本研究以阴茎勃起功能障碍为例进行阐述。阴茎勃起器官是由一对阴茎海绵体组成的独特器官，阴茎海绵体由血管、神经和内皮细胞和细胞基质组成特殊的海绵体窦为功能单位，有性刺激时在神经- 内分泌调节下，激活多种生物信号通路，促使阴茎海绵体动脉扩张、阴茎海绵体窦膨胀、压迫白膜下静脉血液流出，阴茎海绵体内压力快速增高而诱导阴茎勃起和维持阴茎勃起保证完成满意的性生活。如果阴茎海绵体组织发生损伤性病理变化，将引起勃起功能障碍。近期研究表明，成体阴茎组织中存在静息状态内源性干细胞，而且，某种药物能够激活内源性干细胞可分化成血管、神经和内皮细胞，修复阴茎海绵体窦病理变化康复勃起功能的潜能。
实验准备：脂肪干细胞的分离和培养。
用含有1％青霉素和链霉素的PBS冲洗脂肪组织，切碎成小块，然后在含有0.075％IA型胶原酶(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO) 的溶液中于37℃温育1小时。剧烈摇晃。除去顶部脂质层，将剩余的液体部分在室温下以220g离心10分钟。将沉淀物用160mM NH 4Cl处理10分钟以裂解红细胞。将剩余的细胞悬浮在10％胎牛血清 (FBS)的DMEM中，通过40μm细胞滤网(BD Biosciences，Bedford， MA)过滤，并以10cm细胞培养皿有1×10 6个细胞的密度铺板。在达到80％汇合后，收获细胞并以5×10 5个细胞/ml冷冻培养基(DMEM， 20％FBS和10％DMSO)的密度储存在液氮中。根据需要将冷冻的细胞解冻用于实验。
正式实验：包括以下步骤：
(1)验证脱水淫羊藿素对脂肪干细胞的激活作用和剂量依赖，确定YS10的实验用量。
首先将P3-P4代的脂肪干细胞种植于10cm的细胞培养皿中，加入10uM的EdU标记过夜，然后加入不同浓度的脱水淫羊藿素，分别是0.1,1,10,100nM的脱水淫羊藿素。48小时后，冰甲醇固定，然后进行进行免疫荧光染色，检测磷酸化组蛋白3检测(该基因的表达，表明细胞处在有丝分裂期)。同时检测EdU的阳性表达率。实验结果如图4所示，脱水淫羊藿素可以在体外激活脂肪干细胞进行有丝分裂，表达H3P，这个作用有剂量依赖曲线，在10nM时达到大约8.5％的激活率。
(2)验证脱水淫羊藿素对Wnt/β-catenin信号通路的激活。
首先将P3-P4代的脂肪干细胞种植于10CM的细胞培养皿中，然后加入10nM的脱水淫羊藿素,48小时后，通过在含有1％IGEPAL CA-630,0.5％脱氧胆酸钠，0.1％十二烷基硫酸钠，抑肽酶(10mg/ mL)，亮抑酶肽(10mg/mL)和PBS的裂解缓冲液中均质化细胞来制备细胞蛋白样品。含有20μg蛋白质的细胞裂解物在十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳中电泳，然后转移到聚偏二氟乙烯膜(Millipore Corp，Bedford，MA)。用Ponceau S对膜进行染色以验证转移的蛋白质的完整性并监测所有蛋白质样品的无偏移转移。使用电化学发光试剂盒(Amersham Life Sciences Inc，Arlington Heights，IL)，使用针对β-连环蛋白(1：500)，细胞周期蛋白D1(1：500)和β- 肌动蛋白(1：1000)(Santa Cruz Biotechnology，Santa Cruz，CA)。在二抗杂交后，用ChemiImager 4000(Alpha Innotec，Kasendorf，Germany)分析所得图像，以确定每个蛋白质条带的积分密度值。实验结果如图5所示，发现脱水淫羊藿素可以显著激活β-catenin和 Cyclin D1表达，从机理上揭示了该信号通路可以被淫羊藿素衍生物激活。
(2)淫羊藿素衍生物YS10与脱水淫羊藿素对脂肪干细胞激活作用的比较。
基于脱水淫羊藿素对脂肪干细胞的激活作用和剂量依赖的结果，本实验采用10nM的YS10对脂肪干细胞进行治疗。首先将P3-P4代的脂肪干细胞种植于10CM的细胞培养皿中，加入10uM的EdU标记过夜，然后加入10nM的YS10。48小时后，冰甲醇固定，然后进行免疫荧光染色，检测磷酸化组蛋白3检测(该基因的表达，表明细胞处在有丝分裂期)。同时检测EdU的阳性表达率，实验结果如图6 所示，在10nm的剂量条件下，YS10对脂肪干细胞的激活率是脱水淫羊藿素的两倍，是空白对照的10倍以上。
实验结论：YS10具有激活脂肪干细胞的作用，比较脱水淫羊藿素显著优越。揭示了YS10在特定的病理环境下具有激活干细胞自我更新，多向分化伤修组织损伤的作用。
第二部分：体内实验：淫羊藿素衍生物YS10对阴茎海绵体神经损伤性ED大鼠模型的治疗效果。
研究背景：
阴茎勃起器官是由一对阴茎海绵体组成的独特器官，阴茎海绵体由血管、神经和内皮细胞和细胞基质组成特殊的海绵体窦为功能单位，有性刺激时在神经-内分泌调节下，激活多种生物信号通路，促使阴茎海绵体动脉扩张、阴茎海绵体窦膨胀、压迫白膜下静脉血液流出，阴茎海绵体内压力快速增高而诱导阴茎勃起和维持阴茎勃起保证完成满意的性生活。如果阴茎海绵体组织发生损伤性病理变化，将引起勃起功能障碍。近期研究表明，成体阴茎组织中存在静息状态内源性干细胞，而且，某种药物能够激活内源性干细胞可分化成血管、神经和内皮细胞，修复阴茎海绵体窦病理变化康复勃起功能的潜能。
本实验利用神经损伤引起勃起功能障碍的大鼠模型，评估前期细胞实验筛选的淫羊藿素衍生物YS10对阴茎海绵体神经损伤性ED大鼠模型的治疗效果。
实验1阴茎海绵体神经损伤性勃起功能障碍大鼠模型建立。
将48只SD雄性大鼠随机平均分成4组，即正常组(Sham)，双侧海绵体神经夹伤组(BCNI)，海绵体神经夹伤-脱水淫羊藿素治疗组 (DE)，海绵体神经夹伤-YS10治疗组(YS10)，每组12只，用苦味酸给大鼠编号，称其体重并做好记录。用事先配置好并滤过除菌的5％戊巴比妥钠麻醉，麻醉剂用量为0.1mL/100g。麻醉时注意腹腔内麻醉，如果误将麻醉剂注入皮下，肌肉，腹腔脏器或膀胱内，则不能在3min钟内将动物麻醉到手术状态。若手术过程中，大鼠苏醒并挣扎，可补充原麻醉剂量的1/3。大鼠麻醉后，下腹部备皮，将大鼠置于恒温手术台，可处于自然仰卧位，无需固定。做下腹部正中切口，切口位于尿道外口上0.5cm，长度约为2.5cm。皮肤切开后，止血钳夹起肌肉，再用剪刀切开，以免伤到小肠而致大鼠死亡。用消毒棉棒检查腹腔，确定无脏器损伤后，用眼科剪开脐正中韧带，随后放置撑开器，撑开腹腔。暴露膀胱，前列腺。用一只棉棒放置在前列腺外侧，另一只棉棒将精索轻柔的拨向外上方，则可暴露前列腺后外侧叶上的盆底神经节，显微镜下可见盆底神经节向内下发出一条粗的神经，即海绵体神经，在海绵体神经周围有细的海绵体神经分支。用显微尖头镊将海绵体神经及其分支从前列腺膜上仔细分离，分离近端靠近盆底神经节，分离长度约0.5cm，接着用止血钳夹住海绵体神经，移除尖头镊，持续夹闭神经2min，然后用同样的方法夹伤另一侧海绵体神经。对于海绵体神经切除组，则将分离的约0.5cm的海绵体神经切除。用青链霉素擦下切口，用5-0可吸收线将大鼠肌肉间断缝合，酒精消毒后用4-0丝线缝合皮肤，用碘伏消毒切口后将大鼠放回笼内，保持大鼠处于侧卧位。检查饲料和饮水，做好建模记录。建模后第二天开始灌药，均为1mg/kg，每天灌药1次，灌药3周，洗脱期1周。
实验2阴茎海绵体内压(ICP)和颈动脉压测定(MAP)评估勃起功能。
建模后4周，对大鼠进行勃起功能测定，即海绵体内压和颈动脉压及其比值测定。将大鼠称重，使用5％戊巴比妥钠0.1mL/100g腹腔麻醉，麻醉剂用量非常严格，麻醉过深将严重影响海绵体压和血压。在大鼠麻醉时可以打开多通道生理仪MP150，连接计算机，打开调试好的双通道测压软件，用含有肝素的生理盐水将测压管道中的空气排出并将各通道的压力调零。设置电刺激的参数为5V，20HZ,刺激波宽为1ms。将麻醉好的大鼠放置于恒温手术台，自然仰卧位即可。先将大鼠头端朝向自己，消毒颈部皮肤，用剪刀沿大鼠颈部中线剪开皮肤和皮肤下筋膜，可暴露颈部肌肉，钝性分离颈部肌肉，眼科剪小心剪开深部筋膜，暴露颈动脉。用弯止血钳和眼科弯镊分离颈动脉和迷走神经，分离长度约2cm。用动脉夹夹闭近心端，用4-0丝线结扎远心端，并在近心端打一个松结，将眼科镊柄端置于分离的颈动脉下，用眼科剪在远心端剪一斜口，将Y型24G留置针的针芯(引导针芯的尖端剪掉磨平)和导管插入颈动脉，拔出针芯，然后将松结打紧，再打一结固定置留针。将大鼠的尾侧朝向自己，分离阴茎，经阴茎包皮切掉，并且将阴茎的韧带切除后，暴露完整的阴茎。然后做下腹部正中切口，切口位于阴茎根部上0.5cm，长度约为2.5cm。皮肤切开后，止血钳夹起肌肉，再用剪刀切开，以免损伤其他脏器。眼科剪剪开脐正中韧带，随后放置撑开器，撑开腹腔，暴露膀胱，前列腺。用一只棉棒顶在前列腺外侧，另一只棉棒将精索轻柔的拨向外上方，则可暴露前列腺后外侧叶上的盆底神经节，建模后大鼠神经节周围有不同程度的黏连，有的神经节被脂肪覆盖，应缓慢分离。盆底神经节向内下发出一条粗的神经，即海绵体神经，将双极电极置于海绵体神经下方。接着进行阴茎海绵体穿刺，在冠状沟下0.5cm处穿刺，深度为0.3mm 左右。穿刺后向阴茎中注入少量的生理盐水，观察阴茎海绵体是否勃起，如果勃起则证明穿刺成功。去掉动脉夹，开始进行海绵体压和颈动脉压测定，在电刺激海绵体神经前，先测20s的海绵体基础压，然后电刺激60s，测海绵体的勃起压。阴茎海绵体压和颈动脉压比值的最大值(max ICP/MAP)，曲线下面积(area of ICP/MAP)由MP150 自带的软件AcqKnowledge测得.实验结果如图7所示，与正常组 (Sham)相比，双侧海绵体神经夹伤组(BCNI)的海绵体压显著降低；海绵体神经夹伤-脱水淫羊藿素治疗组(DE)和海绵体神经夹伤-YS10 治疗组(YS10)相比双侧海绵体神经夹伤组(BCNI)的海绵体压明显增高，其中YS10对大鼠的勃起功能的提高作用更加明显。
实验3各实验组海绵体组织染色实验。
实验方法和准备：准备实验阴茎、海绵体神经和盆底神经节的取材，固定，包埋，切片。
剪取海绵体神经和盆底神经节，为了维持其结构形态，可带一部分前列腺组织，将所取组织放入4％的甲醛固定过夜，然后放入30％的蔗糖溶液脱水过夜。完整剪取大鼠阴茎后，注意用棉球按压阴茎，挤出海绵体内血液，将含有阴茎骨的阴茎头端剪掉，将大鼠阴茎在 PBS缓冲液中洗2遍，从中间剪断，远侧端因有穿刺针孔，用于冻存和提取蛋白，近侧端放入4％的甲醛中固定过夜。取出固定的阴茎，然后从中间切断，远侧端放入30％的蔗糖溶液中过夜，用于冰冻包埋。近侧端用于石蜡包埋，先将组织块取出，用滤纸吸干固定液，用眼科剪进一步修剪组织，然后放入包埋盒并做好标记，将包埋盒放入大烧杯，流水缓慢冲洗过夜。第二天，将包埋盒取出，依次放入浓度为 75％，85％，95％的乙醇中，梯度脱水各1.5h，然后放入100％I，100％II 无水乙醇中各0.5h，再将组织放入香柏油中过夜。第三天，将组织块从香柏油中取出，放入二甲苯中15min媒浸，从二甲苯中取出，吸干二甲苯，将组织浸入蜡中，分别浸软蜡I,软蜡II，硬蜡各1.5h，最后进行包埋。包埋后进行石蜡切片，切片厚度为5um，在34℃的水浴锅中展片，捞片，在37摄氏度的烤箱中将玻片烤干并收集到玻片盒待用。阴茎远侧端和盆底神经节经蔗糖脱水过夜后，取出组织，滤纸吸去蔗糖溶液，进一步修剪组织，在-27℃的冰冻切片机中进行冰冻包埋，并进行切片，厚度为5um,将组织贴于玻片上，放入玻片盒并置于-80℃冰箱中保存。免疫组化染色的平均光密度和免疫荧光染色的平均荧光强度由Imagepro Plus测得，采用SPSS19.0统计软件进行t检验，P<0.05具有统计学意义。
(1)阴茎海绵体平滑肌组织α-SMA染色实验。
实验结果如图8所示，通过免疫组化和Western blot检测阴茎海绵体平滑肌α-SMA的表达情况可知，脱水淫羊藿素和YS10对大鼠海绵体平滑肌具有显著的修复作用，其中YS10对大鼠平滑肌的修复作用更加明显。
(2)阴茎海绵体平滑肌组织Masson染色实验。
实验结果如图9所示，通过Masson染色查看平滑肌中肌纤维和胶原纤维的分布，半定量得出脱水淫羊藿素和YS10可有效缓解大鼠阴茎海绵体胶原纤维增多和沉积，其中YS10对大鼠阴茎海绵体纤维化的缓解作用更加明显。
(3)阴茎海绵体内皮细胞和nNOS(神经型一氧化氮合酶)的表达测定实验。
实验结果如图10所示，通过α-SMA/RECA-1双染色，以及nNOS/ 鬼笔环肽双染色可以得出建模后，阴茎海绵体内皮细胞和nNOS均显著减少，脱水淫羊藿素和YS10可有效修复该病理变化，而YS10对大鼠阴茎阴茎海绵体内皮细胞和nNOS的恢复具有更显著的效果。
综上实验表明淫羊藿素衍生物YS10具有修复阴茎海绵体平滑肌 /胶原纤维比例失调，修复内皮细胞损伤，修复神经病变，恢复勃起功能的效果。YS10修复阴茎海绵体病理变化而恢复勃起功能的效果与脱水淫羊藿素比更好，其作用机制与激活内源性干细胞有关。YS10 作为治疗ED的药物的组成物具有良好的应用前景。

Claims (5)

1.结构如下式的淫羊藿素衍生物或其药学上可接受的盐
Figure FDA0003792152890000011
的制备方法，包括以下步骤：
(1)羟基保护：将2,4,6-三羟基苯乙酮溶于丙酮中，在碳酸盐催化剂作用下与氯甲基甲醚反应，得到产物I；
(2)引入B环：以产物I为原料，与对甲氧基苯甲酰氯进行酯化反应，引入B环，得到产物II；
(3)甲基溴化：将产物II进行溴代反应，得溴化物产物III；
(4)引入OBz基团：将产物III与苯甲酸 钾反应得到产物IV；
(5)OBz基团重排：将产物IV与氢化钠反应，OBz基团重排得到产物V；
(6)引入异戊烯基：将产物V在催化剂的作用下与1-溴-3-甲基-2-丁烯反应得产物VI；
(7)异戊烯基邻位重排：产物VI与三氟甲烷磺酸铋反应得产物VII；
(8)C环环合：以产物VII为原料，在混酸的催化下进行C环环合反应，得到目标产物VIII；
(9)3位羟基脱保护：以产物VIII为原料，在碱的催化下脱保护基得产物IX；
(10)脱水：将产物IX与混酸反应得产物X；
(11)引入丙烯基团：将产物X与3-溴-2-甲基丙烯反应得产物XI，即所述淫羊藿素衍生物；
合成反应如下式：
Figure FDA0003792152890000021
2.根据权利要求1所述的淫羊藿素衍生物或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于：步骤(1)的反应中，所述碳酸盐催化剂是原料2,4,6-三羟基苯乙酮5-10倍摩尔量的无水碳酸钾。
3.根据权利要求1所述的淫羊藿素衍生物或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于：步骤(5)的反应中，所述NaH的用量是所述产物IV的1-2倍摩尔量。
4.根据权利要求1所述的淫羊藿素衍生物或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，步骤(6)的反应中，所述催化剂是产物V 1-5倍摩尔量的无水碳酸钾。
5.根据权利要求1所述的淫羊藿素衍生物或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，步骤(7)的反应中，所述三氟甲烷磺酸铋的加入量是产物VI 0.01-0.1倍摩尔量。
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