CN107056877A

CN107056877A - 一种甾体类化合物及其用途

Info

Publication number: CN107056877A
Application number: CN201710470497.7A
Authority: CN
Inventors: 李医明; 吴迎春; 陈瀛澜; 郭夫江; 吕少东; 张捷; 伍宇娟
Original assignee: Shanghai University of Traditional Chinese Medicine
Current assignee: Shanghai University of Traditional Chinese Medicine
Priority date: 2017-06-20
Filing date: 2017-06-20
Publication date: 2017-08-18
Anticipated expiration: 2037-06-20
Also published as: CN107056877B

Abstract

本发明公开了一种甾体类化合物及其用途，所述甾体类化合物是具有式Ⅰ结构的化合物或所述化合物的药学上可接受的盐、互变异构体、立体异构体、前体化合物、水合物或溶剂化物：

Description

一种甾体类化合物及其用途

技术领域

本发明涉及一种甾体类化合物及其用途，属于医药领域。

背景技术

心衰(heart failure，HF)是指心脏功能异常导致心脏泵血量不能满足组织代谢需要的一种病理生理状态([J].Circulation,2008,117(4):e25-e146)。心衰是各种心脏病最终进展的复杂临床表现，体循环与肺循环游血以及人体组织低灌注是其主要特点，其主要的病理生理机制是左心室和或右心室功能障碍及神经体液调节的失常，从而导致液体潴留、运动耐量减低和存活时间明显缩短([M].人民卫生出版社,2009:129.)。目前认为心衰的发病与心肌病理性重构有关，其有两个关键病理环节，一是急性心肌梗死、重症心肌炎等疾病导致的心肌细胞的死亡(包括细胞的凋亡、坏死与自我吞唆)；二是神经内分泌系统如肾素-血管紧张素-醛固酮系统(MAS)激活([J],Lancet,2011,378:704-712.)，其中后者所起到的作用更为重要，防治心衰需有效切断以上两个环节方可([J].N Engl J Med,2010,362:228-238.)。中医药辨证治疗心衰在控制症状、改善预后、减少具有副反应的西药、以及调整患者机体的免疫功能、减少心衰复发、提高患者生存质量等方面具有独特的疗效和优势([J].中国中西医结合杂志,2008,28(12):1124-1126.)。

随着心衰病人的不断增多，治疗难度很难取得新的突破，除了遵循以往的治疗思路和理念外，我们还应该努力发挥中医药的优势，采用中西医结合的方法对心衰进行控制。而补益心气中药在改善心肌能量代谢、防治心衰上具有一定的优势。中药是我国特有的天然宝库，已经有不少中药的活性成分被证实对急性心衰具有治疗作用。

蟾酥为蟾蜍科动物中华大蟾蜍(Bofo bufo andrewsi Schmidt)或黑眶蟾蜍(Bufomelanostitus Schneider)的干燥分泌物，是名贵中药，性辛、温，有毒，具有解毒、消肿、醒神、开窍、强心和止痛等作用。蟾酥中主要的强心主要活性成分为蟾毒配基类化合物，蟾毒配基类化合物属于强心甾体类化合物，目前已经有大量的蟾毒配基类化合物被发现和报道，例如蟾毒灵、脂蟾毒配基、华蟾毒它灵、华蟾毒精等。这些化合物虽然具有很好地强心活性，但大多也具有较强的心脏毒性和细胞毒性，严重影响其临床应用。因此，有必要开发出一种高效低毒的甾体类化合物。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明的目的是提供一种高效低毒的具有强心作用的甾体类化合物及其用途，以促进该类化合物在医药领域的广泛应用。

本发明所述的甾体类化合物是具有式Ⅰ结构的化合物或所述化合物的药学上可接受的盐、互变异构体、立体异构体、前体化合物、水合物或溶剂化物：

其中：R₁选自OH、OCORa、OCOORa、OCONRaRb、OSO₂Ra、OSO₃Ra、OCO(CH₂)nCOOH、OCO(CH₂)nCOArg.OH中的任意一种，或R₁与其所连接的碳形成羰基；R₂选自H、OH、OCORa、OCOORa、OCONRaRb、OSO₂Ra、OSO₃Ra中的任意一种，或R₂与其所连接的碳形成羰基；Ra、Rb选自氢、取代或未取代的C1～C12烷基、取代或未取代的C2～C12烯基、取代或未取代的C2～C12炔基、取代或未取代的C6～C30芳基、取代或未取代的C1～C30杂芳基中的任意一种，n为1到10的任意整数。其中，Arg.OH是精氨酸的缩写。

作为优选方案，R₁选自OH、OCORa、OCO(CH₂)nCOOH、OCO(CH₂)nCOArg.OH中的任意一种，或R₁与其所连接的碳形成羰基；R₂选自H、OH、OCORa中的任意一种，或R₂与其所连接的碳形成羰基；Ra选自氢、C1～C5烷基、C2～C5烯基中的任意一种，n为4、5或6。

作为进一步优选方案，R₁选自OH、OCOCH₃、OCO(CH₂)nCOOH、OCO(CH₂)nCOArg.OH中的任意一种，R₂选自H、OH、OCOCH₃中的任意一种，n为4、5或6。

作为更进一步优选方案，所述甾体类化合物选自如下化合物或所述化合物的药学上可接受的盐、互变异构体、立体异构体、前体化合物、水合物或溶剂化物：

本发明所述的甾体类化合物可通过化学合成或/和从天然药物中提取得到，例如：从蟾酥中分离获得，或者从蟾酥中分离部分化合物后对其进行化学修饰。

当然，本领域技术人员也可根据具体化学结构式，利用本领域的熟知手段进行人工合成制备本发明所述的甾体类化合物。

具体说，从蟾酥中分离制备所述结构式为式Ⅱ、式Ⅲ、式Ⅳ化合物的方法，包括如下步骤：

a)以蟾酥干浆为原料，加甲醇水溶液，进行回流提取1～3次，每次1～6小时；合并滤液，减压浓缩至无醇味，得流浸膏；将所得流浸膏混悬于水中，以二氯甲烷萃取至萃取液无色；合并萃取液，减压浓缩至浸膏，得到粗提物；

b)将粗提物进行硅胶柱层析分离，以体积比为10:10:1～1:1:1的石油醚-二氯甲烷-甲醇混合溶剂进行梯度洗脱，每份洗脱液减压蒸发后经TLC薄层分析，按洗脱顺序得到八个组分；

c)对第二组分进行制备液相色谱柱分离，TLC薄层分析，收集含有化合物的流份，浓缩，即分别可得式Ⅱ、式Ⅲ、式Ⅳ化合物。

步骤a)中所述甲醇水溶液的质量分数为50～95％，每次提取所加入的甲醇水溶液的重量为原料重量的6～10倍。

步骤c)中制备液相色谱柱分离时，采用体积比为50:50的乙腈-水进行洗脱。

本发明所述的甾体类化合物可作为活性成分用于制备预防和/或治疗急性心衰的药物。

本发明所述药物的剂型不限，只要是能够使活性成分有效地到达体内的剂型都可以，例如可选自：片剂、胶囊剂、粉末、颗粒剂、糖浆、溶液、悬浮液、注射剂、酊剂、口服液、气雾剂、口含剂、冲剂、丸剂、散剂等常见剂型或纳米制剂等缓释剂型。

本发明所述药物中，除了含有主要活性成分之外，还可含有少量的且不影响有效成分的次要成分和/或药学上可接受的载体，例如：可以含有甜味剂以改善口味、抗氧化剂以防止氧化，以及各种制剂所必要的辅料等。

本发明所述活性成分的有效施用剂量可随所用的组合物、给药的模式和待治疗的疾病的严重程度而变化。

本发明中所述术语的定义如下：

术语“C1-C12烷基”是指具有1-12个碳原子的直链或支链烷基或环烷基，例如：甲基、亚甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基，或类似基团。

术语“C2-C12烯基”是指具有2-6个碳原子的、具有一个或多个双键的直链或支链的烯基或环烯基，例如：乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、异丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、环己烯基、环庚烯基、1,3-环己二烯基、1,4-环己二烯基、或类似基团。

术语“C2-C12炔基”是指具有2-12个碳原子的、具有一个或多个三键的直链或支链的炔基，例如：乙炔基、丙炔基、或类似基团。

术语“C6～C30芳基”是指具有6～30个碳原子的芳基，包括单环或二环芳基，例如：苯基、萘基、或类似基团。

术语“C1～C30杂芳基”是指具有1～30个碳原子的杂芳基，例如：吡咯基、吡啶基、呋喃基、或类似基团。

术语“取代”是指基团上的一个或多个氢原子被选自下组的取代基取代：C1～C10烷基、C3～C10环烷基、C1～C10烷氧基、卤素、羟基、羧基(-COOH)、C1～C10醛基、C2～C10酰基、C2～C10酯基、氨基、苯基；所述的苯基包括未取代的苯基或具有1-3个取代基的取代苯基，所述的取代基选自卤素、C1-C10烷基、氰基、OH、硝基、C3～C10环烷基、C1～C10烷氧基或氨基。

术语“药学上可接受的盐”是指所述化合物与药学上可接受的无机酸或有机酸所形成的盐，所述的无机酸包括：盐酸、氢溴酸、磷酸、硝酸、硫酸；所述的有机酸包括：甲酸、乙酸、丙酸、丁二酸、萘二磺酸(1,5)、亚细亚酸、草酸、酒石酸、乳酸、水杨酸、苯甲酸、戊酸、二乙基乙酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、庚二酸、己二酸、马来酸、苹果酸、氨基磺酸、苯丙酸、葡糖酸、抗坏血酸、烟酸、异烟酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸，以及氨基酸。

术语“互变异构体”是指因分子中某一原子在两个位置迅速移动而产生的官能团异构体，例如：烯醇与相应的酮。

术语“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体，例如：顺反异构体、对映异构体、构象异构体、非对映异构体等。

术语“前体化合物”是指在体外无活性，但能够在生物体内进行代谢或化学反应转化为本发明的活性成分，从而发挥其药理作用的化合物。

术语“药学上可接受的”是指适用于人而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)，即有合理的效益/风险比的物质。

与现有技术相比，本发明具有如下显著性有益效果：

本发明的研究结果显示：本发明所述的具有通式Ⅰ结构的甾体类化合物C₁₀上的H被过氧化氢基团取代，可显著增加蛙心的心肌张力，具有显著的强心作用，并且细胞毒性较弱，高效低毒，可望作为活性成分用于制备预防和/或治疗急性心衰的药物，具有广泛的应用前景。

附图说明

图1是实施例4中各化合物对蛙心张力的影响效果图；

图2是实施例5中各化合物对正常人体肝细胞毒性的影响效果图。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。

实施例1：式Ⅱ化合物的制备

a)以蟾酥干浆2kg为原料，加8倍量95wt％甲醇水溶液，进行回流提取3次，每次2小时；合并滤液，减压浓缩至无醇味，得流浸膏；将所得流浸膏混悬于水中，以二氯甲烷萃取至萃取液无色；合并萃取液，减压浓缩至浸膏，得到粗提物；

b)将粗提物进行硅胶柱层析分离，依次以体积比为10:10:1、8:8:1、6:6:1、4:4:1、2:2:1、1:1:1的石油醚-二氯甲烷-甲醇混合溶剂进行梯度洗脱，每份洗脱液减压蒸发后经TLC薄层分析，按洗脱顺序得到八个组分，记为Fr.E1～E8；

c)对第二组分Fr.E2进行制备液相色谱柱分离，流动相为乙腈：水＝50:50，流速为40mL/min，TLC薄层分析，收集收集保留时间为7min的峰，浓缩，得到白色粉末状化合物。

所得化合物的结构鉴定数据如下：

HR-EI-MS m/z:402.2124[M]⁺,(calcd for C₂₃H₃₀O₆,402.2115)；

UV(MeOH)λ_max nm:299；

¹H NMR(600MHz,MeOD)δ_H:7.89(1H,dd,J＝9.7,2.3Hz,H-22)，7.43(1H,d,J＝2.3Hz,H-21)，6.25(1H,d,J＝9.7Hz,H-23)，3.99(1H,s,H-3)，3.57(1H,brs,H-15)，2.58(1H,m,H-5)，2.56(1H,m,H-17)，2.39(1H,m,H-16)，2.26(2H,m,H-1)，2.14(1H,m,H-8)，1.98(1H,m,H-6)，1.91(1H,s,H-16)，1.88(1H,t,J＝5.3Hz,H-4),1.83(1H,m,H-9)，1.70(1H,m,H-2)，1.66(1H,m,H-12)，1.61(1H,m,H-11)，1.61(1H,m,H-7)，1.54(1H,m,H-11)，1.53(1H,m,H-4)，1.46(1H,m,H-12)，1.28(1H,m,H-2)，1.15(1H,m,H-6)，1.04(1H,m,H-7)，0.76(1H,s,H-18)；

¹³C NMR(126MHz,MeOD)δ_C:164.48(C-24)，151.74(C-21)，149.58(C-22)，124.52(C-20)，115.35(C-23)，85.08(C-10)，75.62(C-14)，66.65(C-3)，61.13(C-15)，48.54(C-17),46.12(C-13)，41.54(C-9)，39.95(C-12)，35.89(C-4)，34.49(C-8)，33.23(C-16)，31.09(C-5)，30.46(C-2)，26.31(C-6)，24.16(C-1)，21.45(C-7)，21.45(C-11)，17.01(C-18)；

根据上述数据可确定所得化合物即为式Ⅱ化合物。

实施例2：式Ⅲ化合物的制备

a)以蟾酥干浆2kg为原料，加8倍量60wt％甲醇水溶液，进行回流提取3次，每次2小时；合并滤液，减压浓缩至无醇味，得流浸膏；将所得流浸膏混悬于水中，以二氯甲烷萃取至萃取液无色；合并萃取液，减压浓缩至浸膏，得到粗提物；

c)对第二组分Fr.E2进行制备液相色谱柱分离，流动相为乙腈：水＝50:50，流速为40mL/min，TLC薄层分析，收集收集保留时间为4min的峰，浓缩，得到白色粉末状化合物。

所得化合物的结构鉴定数据如下：

HR-EI-MS m/z:418.1992[M]⁺,(calcd for C₂₃H₃₀O₇,418.1988)；

UV(MeOH)λ_max nm:299；

¹H NMR(600MHz,MeOD)δ_H:8.12(1H,dd,J＝9.7,2.3Hz,H-22)，7.43(1H,d,J＝2.3Hz,H-21)，6.18(1H,d,J＝9.7Hz,H-23)，4.51(brs,1H,H-16)，4.05(1H,s,H-3)，3.57(1H,brs,H-15)，2.74(1H,m,H-17)，2.60(1H,m,H-5)，2.26(1H,m,H-1)，1.91(1H,m,H-2)，1.89(1H,m,H-4)，1.88(1H,m,H-6)，1.84(1H,m,H-7)，1.83(1H,m,H-9)，1.73(1H,m,H-1)，1.70(1H,m,H-2)，1.70(1H,m,H-4)，1.63(1H,m,H-6)，1.61(1H,m,H-11)，1.58(1H,m,H-8)，1.54(1H,m,H-11)，1.36(1H,m,H-12)，1.31(1H,m,H-7)，1.06(1H,m,H-12)，0.77(1H,s,H-18)；

¹³C NMR(126MHz,MeOD)δ_C:165.10(C-24)，152.93(C-21)，151.74(C-22)，120.50(C-20)，112.86(C-23)，85.42(C-10)，75.61(C-14),73.42(C-16)，66.65(C-3)，61.11(C-15)，59.54(C-17)，50.42(C-13)，42.94(C-8)，41.54(C-9)，37.43(C-12)，35.89(C-4)，34.70(C-5)，30.78(C-2)，28.53(C-6)，27.85(C-1)，21.45(C-7)，22.,34(C-11)，17.31(C-18)；

根据上述数据可确定所得化合物即为式Ⅲ化合物。

实施例3：式Ⅳ化合物的制备

c)对第二组分Fr.E2进行制备液相色谱柱分离，流动相为乙腈：水＝50:50，流速为40mL/min，TLC薄层分析，收集收集保留时间为9min的峰，浓缩，得到白色粉末状化合物。

所得化合物的结构鉴定数据如下：

HR-EI-MS m/z:460.2090[M]⁺,(calcd for C₂₅H₃₂O₈,460.2085)；

UV(MeOH)λ_max nm:299；

¹H NMR(600MHz,MeOD)δ_H:8.02(1H,dd,J＝9.7,2.3Hz,H-22)，7.36(1H,d,J＝2.3Hz,H-21)，6.23(1H,d,J＝9.7Hz,H-23)，5.48(dd,J＝9.3,1.1Hz,1H,H-16)，4.05(1H,brs,H-3)，3.73(1H,brs,H-15)，2.91(1H,m,H-17)，2.82(1H,m,H-5)，2.05(1H,m,H-1)，1.99(1H,m,H-2)，1.91(1H,m,H-4)，1.81(1H,m,H-6)，1.77(1H,m,H-7)，1.74(1H,m,H-11)，1.63(1H,m,H-12)，1.58(1H,m,H-1)，1.55(1H,m,H-2),1.52(1H,m,H-4)，1.,50(1H,m,H-6)，1.50(1H,m,H-7)，1.36(1H,m,H-11)，1.30(1H,m,H-8)，1.07(1H,m,H-12)，1.85(1H,s,H-26)，0.77(1H,s,H-18)；

¹³C NMR(126MHz,MeOD)δ_C:171.61(C-25)，164.07(C-24)，153.53(C-21)，150.94(C-22)，118.40(C-20)，114.08(C-23)，85.42(C-10)，76.61(C-14),73.47(C-16)，67.61(C-3)，60.81(C-15)，51.43(C-17)，46.36(C-13)，40.69(C-12)，40.28(C-8)，37.43(C-9)，36.52(C-5)，34.51(C-4)，30.67(C-2)，28.48(C-6)，26.94(C-1)，22.09(C-11)，21.62(C-7)，20.36(C-26)，17.50(C-18)；

根据上述数据可确定所得化合物即为式Ⅳ化合物。

实施例4：考察本发明所述甾体类化合物对离体蛙心灌流模型心肌张力的药效

4.1实验仪器：

RM6240多道信号采集处理系统：成都仪器厂；蛙类手术器械1套(粗剪刀、直剪刀、和眼科剪刀各一把，大小镊子各一把，玻璃分针2根，探针1个)；蛙板1块，大小烧杯各1个，滴管2个，蛙心套管1个，0号手术线；蛙心夹：上海中医药大学机能实验室提供。

4.2实验方法：

中华大蟾蜍共40只，采用动脉插管法(又名straub插管法)制备蛙心标本，取蟾蜍1只，破坏脑和脊髓，以四肢软瘫为度；仰卧位固定于蛙板上，用剪刀暴露心脏；用玻璃分针拨动心脏，改变其位置，认真识别左、右心房、心室(蟾餘一个心室)、动脉圆锥、腹侧主动脉干及其左右分支、静脉窦、前后静脉等主要组织结构，观察心室在收缩时容积的变化；将插管内充入任氏液，进行插管：将插管插入动脉球，插管中的液面随蛙心搏动而上下波动；蛙心插管进入心室后，用预先准备好的松结扎紧，扎线套在蛙心插管的侧钩上打结并固定；剪断主动脉左右分支，立即用吸管吸去管中的血液换成任氏液以免凝血；用新鲜任氏液反复换洗蛙心插管内含血的任氏液，直至蛙心插管内无血液残留为止，此时离体蛙心己制备成功可供实验；将蛙心插管固定在铁支架上，用蛙心夹在心室舒张期夹住心尖，并将蛙心夹的线头通过滑轮连至张力换能器的应变梁上，调节此线张力至1g，插管内加灌流约1-1.5mL，并在插管上标记灌流的高度，在此后的实验过程中，灌流液恒定于该高度；将制备好的蛙心与张力换能器一端连接，另一端张力换能器连接输出线接微机生物信号处理系统第1通道，微机生物信号处理系统参数设置:RM6240系统:点击“实验”菜单，选择“生理科学实验中”的“蛙心灌流”项目，系统进入该实验信号记录状态；计算加药前后收缩幅度(g)比值(加药后收缩幅度基/础收缩幅度)，用D/F表示。

4.3药物处理：

盐酸肾上腺素阳性药对照组：将肾上腺素药物1mg/mL取10μL溶解于200μL的任氏液中，使其在插管中的终浓度为5μg/mL。

式Ⅱ化合物组：将实施例1制备的式Ⅱ化合物溶解于DMSO中，取10μL含DMSO的含药液用任氏液稀释，并至其在插管中的终浓度，分别为1μg/mL，2μg/mL，3μg/mL。

蟾毒灵阴性对照组：将一定量已知化合物蟾毒灵溶解于DMSO中，取10μL含DMSO的含药液用任氏液稀释，并至其在插管中的终浓度分别为低、中、高三个浓度。

华蟾毒它灵组：将一定量已知化合物蟾毒灵溶解于DMSO中，取10μL含DMSO的含药液用任氏液稀释，并至其在插管中的终浓度分别为低、中、高三个浓度。

脂蟾毒配基组：将一定量已知化合物蟾毒灵溶解于DMSO中，取10μL含DMSO的含药液用任氏液稀释，并至其在插管中的终浓度分别为低、中、高三个浓度。

空白对照组：在插管中给予与含药液相等的任氏液。

4.4实验结果：

实验结果如表1和图1所示。

表1各化合物对蛙心张力的影响(n＝9,x±s)

图1是本实施例中各化合物对蛙心张力的影响效果图，图中：control是指空白对照组，DL-1是指1μg/mL剂量组的蟾毒灵，DL-2是指2μg/mL剂量组的蟾毒灵，DL-3是指3μg/mL剂量组的蟾毒灵，ZC-1是指1μg/mL剂量组的脂蟾毒配基，ZC-2是指2μg/mL剂量组的脂蟾毒配基，ZC-3是指3μg/mL剂量组的脂蟾毒配基，HTL-1是指1μg/mL剂量组的华蟾毒它灵，HTL-2是指2μg/mL剂量组的华蟾毒它灵，HTL-3是指3μg/mL剂量组的华蟾毒它灵，式-1是指1μg/mL剂量组的式Ⅱ化合物，式-2是指2μg/mL剂量组的式Ⅱ化合物，式-3是指3μg/mL剂量组的式Ⅱ化合物。

从表1和图1可见，本发明的式Ⅱ化合物高剂量组(3μg/mL)可以显著增加蛙心的心肌张力(****P<0.0001，具有差异有统计学意义)，具有显著的强心作用，可望作为活性成分用于制备预防和/或治疗急性心衰的药物，并且其作用效果明显优于传统的用来治疗心力衰竭的药物：蟾毒灵、华蟾毒它灵、脂蟾毒配基，这说明，本发明相对于现有技术取得了显著性进步和出乎意料的效果。

实施例5：考察本发明所述甾体类化合物对人肝细胞L02毒性的影响

4.1肝细胞培养：

将购自中科院细胞库的L02细胞置于pH 7.2～7.4的含10％新生牛血清的RPMI-1640培养液中，在37℃、5％CO₂饱和湿度条件的恒温培养箱内培养；在倒置显微镜下观察细胞的生长，待细胞铺满瓶底的70％～80％时用0.25％胰蛋白酶消化后进行传代；液氮冻存；取对数生长期细胞用于实验。

5.2MTT比色法测细胞抑制率：

将对数生长期细胞用0.25％的胰酶消化，经1000r/min离心5min后倾去消化液，加入培养液制成单细胞悬液，计数并调整细胞密度为5×104个/mL；在96孔板上每孔加入100μL细胞悬液，再加入培养液使每孔体积为200μL；将培养板放回孵箱内继续培养；24h后观察到细胞贴壁即倒掉旧培养液，加入含本化合物的培养液；调整药物剂量使实验组药物终浓度分别为3、6、12.5、25、50mmol/L，阳性组中加cisplatin(顺铂)10μM；另外设立空白组(仅有培养液，无细胞)，模型组(不加药与给药组等量的DMSO)，每组设6个复孔；分别于加入药物后72h终止培养，加入20μL浓度为5mg/mL的MTT溶液，培养箱内继续孵育4h后终止培养；每孔中加入150μL DMSO振荡后，在酶联免疫检测仪上测定570nm波长时各孔吸光度(absorbance,A)值，并计算细胞抑制率(inhibitoryrate,IR):IR＝(对照孔A值-实验孔A值)/对照孔A值×100％。

5.3实验结果：

实验结果如表2和图2所示。

表2各化合物对肝细胞的细胞生长抑制率

由表2可见：本发明的式Ⅱ化合物对正常人体肝细胞的抑制率要明显低于传统的用来治疗心力衰竭的药物：蟾毒灵、华蟾毒它灵、脂蟾毒配基，进而说明本发明的式Ⅱ化合物对正常人体肝细胞的细胞毒性要低于传统的用来治疗心力衰竭的药物：蟾毒灵、华蟾毒它灵、脂蟾毒配基。

图2是本实施例中各化合物对正常人体肝细胞毒性的影响效果图，图中，control是指空白对照组，DL-1是指3mmol/L浓度组的蟾毒灵，DL-1右面的四个柱状图从左到右依次是6、12.5、25、50mmol/L浓度组的蟾毒灵，ZC-1是指3mmol/L浓度组的脂蟾毒配基，ZC-1右面的四个柱状图从左到右依次是6、12.5、25、50mmol/L浓度组的脂蟾毒配基，HTL-1是指3mmol/L浓度组的华蟾毒它灵，HTL-1右面的四个柱状图从左到右依次是6、12.5、25、50mmol/L浓度组的华蟾毒它灵，式-1是指3mmol/L浓度组的式Ⅱ化合物，式-1右面的四个柱状图从左到右依次是6、12.5、25、50mmol/L浓度组的式Ⅱ化合物。

由图2可见，与对照组蟾毒灵、顺铂相比，本发明的式Ⅱ化合物细胞毒性弱，尤其是高浓度(50mmol/L)时，式Ⅱ化合物对正常人体肝细胞毒性要明显低于蟾毒灵、华蟾毒它灵、脂蟾毒配基。

综上所述，本发明的甾体类化合物可以显著促进蛙心张力，具有显著的强心作用，作用效果明显优于传统的用来治疗心力衰竭的药物：蟾毒灵、华蟾毒它灵、脂蟾毒配基，同时其对正常人体肝细胞毒性要明显低于蟾毒灵、华蟾毒它灵、脂蟾毒配基，高效低毒，可望作为活性成分用于制备预防和/或治疗急性心衰的药物。

最后需要在此指出的是：以上仅是本发明的部分优选实施例，不能理解为对本发明保护范围的限制，本领域的技术人员根据本发明的上述内容做出的一些非本质的改进和调整均属于本发明的保护范围。

Claims

1.一种甾体类化合物，其特征在于，是具有式Ⅰ结构的化合物或所述化合物的药学上可接受的盐、互变异构体、立体异构体、前体化合物、水合物或溶剂化物：

其中：R₁选自OH、OCORa、OCOORa、OCONRaRb、OSO₂Ra、OSO₃Ra、OCO(CH₂)nCOOH、OCO(CH₂)nCOArg.OH中的任意一种，或R₁与其所连接的碳形成羰基；R₂选自H、OH、OCORa、OCOORa、OCONRaRb、OSO₂Ra、OSO₃Ra中的任意一种，或R₂与其所连接的碳形成羰基；Ra、Rb选自氢、取代或未取代的C1～C12烷基、取代或未取代的C2～C12烯基、取代或未取代的C2～C12炔基、取代或未取代的C6～C30芳基、取代或未取代的C1～C30杂芳基中的任意一种，n为1到10的任意整数。

2.根据权利要求1所述的甾体类化合物，其特征在于：R₁选自OH、OCORa、OCO(CH₂)nCOOH、OCO(CH₂)nCOArg.OH中的任意一种，或R₁与其所连接的碳形成羰基；R₂选自H、OH、OCORa中的任意一种，或R₂与其所连接的碳形成羰基；Ra选自氢、C1～C5烷基、C2～C5烯基中的任意一种，n为4、5或6。

3.根据权利要求2所述的甾体类化合物，其特征在于：R₁选自OH、OCOCH₃、OCO(CH₂)nCOOH、OCO(CH₂)nCOArg.OH中的任意一种，R₂选自H、OH、OCOCH₃中的任意一种，n为4、5或6。

4.根据权利要求3所述的甾体类化合物，其特征在于，所述甾体类化合物选自如下化合物或所述化合物的药学上可接受的盐、互变异构体、立体异构体、前体化合物、水合物或溶剂化物：

5.根据权利要求4所述的甾体类化合物，其特征在于，从蟾酥中分离制备所述结构式为式Ⅱ、式Ⅲ、式Ⅳ化合物的方法，包括如下步骤：

6.根据权利要求5所述的甾体类化合物，其特征在于：步骤a)中所述甲醇水溶液的质量分数为50～95％，每次提取所加入的甲醇水溶液的重量为原料重量的6～10倍。

7.根据权利要求5所述的甾体类化合物，其特征在于：步骤c)中制备液相色谱柱分离时，采用体积比为50:50的乙腈-水进行洗脱。

8.一种权利要求1所述的甾体类化合物的用途，其特征在于：以所述的甾体类化合物作为活性成分用于制备预防和/或治疗急性心衰的药物。