CN104159910B - 一种甾醇类衍生物及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种甾醇类衍生物及其制备方法与应用。该甾醇类衍生物包括具有结构式(Ⅰ)的甾醇类化合物或其药学上可接受的盐、或包含其的提取物、或包含其的组合物。结构式(Ⅰ)中，其中，R1为‑OH、＝O、H、或C1‑C3烷基；R2为‑OH、H、或C1‑C3烷基；R3为‑OH、＝O、H、或C1‑C3烷基；R4为‑OH、H、或C1‑C3烷基，且R1、R2、R3、R4中的至少一个为‑OH。该具有结构式(Ⅰ)的化合物能够用以制备具有HMG‑CoA还原酶活性抑制作用的药物，且其所制备的药物能够有效抑制HMG‑CoA还原酶活性或者用于制备具有抗癌作用的药物。

Description

一种甾醇类衍生物及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及制药领域，具体涉及一种具有结构式(Ⅰ)的甾醇类衍生物及其制备方法与应用。
背景技术
红曲(Monascus-fermented rice)是以大米为原料，经红曲霉菌(Monascus)发酵制成的一种紫红色米曲。红曲古代称丹曲，是将红曲霉为主的曲母或酒曲接种于米饭上发酵而成，其色赤红，故又名赤曲、红米、红大米、红糟，又因主产于福建等地.故又名福曲、福米等。
红曲是一味食疗兼备的传统中药。早在古代它已被广泛应用于食品着色、酿酒、发酵、中医中药方面。《饮膳正要》有红曲“味甘、平、无毒”“健脾、益气、温中”；《本草纲目》有“甘、温、无毒”，“治女人血痛及产后恶血不净，擂酒饮之良”；《本草衍义补遗》有“活血、消食、健脾暖胃、治赤白下痢、跌打损伤”等记载。
上世纪70年代，日本Endo教授首次从红色红曲霉(Monascus ruber)中分离出生理活性物质莫纳克林K(monacolin K)以来，众多国内外学者在红曲霉代谢产物中不断发现生理活性物质，包括monacolin类化合物,红曲色素,降压成分GABA及抗氧化成分dimerumicacid及最近分离的一些萜类化合物等等。随着现代生物化学与药理学的发展，红曲的降压，降糖，抗肥胖，抗癌，防治老年痴呆及骨质疏松等功效不断被挖掘。从而使传统的红曲增添了新的内涵。但是由于红曲中成分繁多，人们对红曲中各成分发挥怎样的功效还了解甚少，这在一定程度上限制了红曲的科学使用，阻碍了红曲的广泛应用。
发明内容
本发明从红曲制备物中成功分离得到了一种具有结构式(Ⅰ)的甾醇类化合物，该化合物能够用以制备具有HMG-CoA还原酶活性抑制作用的药物或者用于制备具有抗癌作用的药物。
在本发明的一个方面，提供了一种具有结构式(Ⅰ)的甾醇类化合物或其药学上可接受的盐，结构式(Ⅰ)如下：
其中，R1为-OH、＝O(羰基)、H、或C1-C3烷基；R2为-OH、H、或C1-C3烷基；R3为-OH、＝O、H、或C1-C3烷基；R4为-OH、H、或C1-C3烷基；且R1、R2、R3、R4中的至少一个为-OH。
进一步地，上述甾醇类化合物或其药学上可接受的盐具有结构式(Ⅱ)，结构式(Ⅱ)如下：
进一步地，上述甾醇类化合物或其药学上可接受的盐中具有结构式(Ⅰ)的甾醇类化合物中R1＝R2＝R3＝R4＝-O C(＝O)-CH3，或者R1＝R2＝R3＝R4＝－OTs。
在本发明的另一个方面，还提供了一种上述具有结构式(Ⅰ)的甾醇类化合物的制备方法，包括以下步骤：取红曲制备物，加入溶剂后进行超声提取，并将提取液减压浓缩得精提物；将精提物上硅胶柱色谱分离，分离过程中采用石油醚和乙酸乙酯对精提物进行梯度洗脱，梯度洗脱过程中石油醚和乙酸乙酯的体积比依次为75:25、50:50～25:75、0:100；取石油醚和乙酸乙酯的体积比为50:50～25:75时所得到的洗脱液，以体积比为1：1的二氯甲烷和甲醇的混合液为流动相进行sephadex LH-20凝胶柱层析，经TLC追踪检测合并相同的部分，得到6个部分流分；对第4部分流分进行柱色谱分离，色谱柱为C18反相硅胶柱，流动相为体积比为75：25甲醇和水混合液，经TLC检测，去除杂质带后收集得到甾醇类化合物。
进一步地，上述制备方法进一步对甾醇类化合物进行硅胶柱纯化处理，用体积比为20：20：1的二氯甲烷、乙酸乙酯及甲醇的混合液进行洗脱，去除杂质带后收集得到纯化后的甾醇类化合物。
进一步地，上述超声提取过程中的溶剂为石油醚，二氯甲烷，乙酸乙酯，乙醇，甲醇、或正己烷中的一种或几种，体积为红曲制备物的2-6倍；且/或超声提取过程中提取次数为2-6次，每次的时间为20-40min；且/或梯度洗脱过程中石油醚和乙酸乙酯的体积比依次为75:25、50:50、25:75、0:100，取石油醚和乙酸乙酯的体积比为25:75时所得到的洗脱液进行sephadex LH-20凝胶柱层析。
在本发明的另一个方面，还提供了一种甾醇类化合物的合成方法，将具有结构式(Ⅲ)的甾醇类化合物与5，10，15，20-四苯基卟啉在溶剂中混合溶解，在-5℃～5℃下通入氧气，反应后用柱层析分离得具有结构式(II)的甾醇类化合物，
在本发明的另一个方面，还提供了具有结构式(Ⅰ)的甾醇类化合物及其衍生物的合成方法，该方法包括以具有结构式(III)的化合物为原料，先通过衍生化反应生成酯/苯磺酸酯，再氧化反应生成具有结构式(Ⅰ)的甾醇类化合物中R1＝R2＝R3＝R4＝-O C(＝O)-CH3，或者R1＝R2＝R3＝R4＝－OTs，或者以具有结构式(III)的化合物为原料，氧化反应生成具有结构式(II)化合物，再通过衍生化反应生成具有结构式(Ⅰ)的甾醇类化合物中R1＝R2＝R3＝R4＝-O C(＝O)-CH3；或者R1＝R2＝R3＝R4＝－OTs。
在本发明的另一个方面，还提供了一种甾醇类化合物的合成方法，当R1＝R2＝R3＝R4＝-O C(＝O)-CH3；合成方法包括：将具有结构式(II)中的甾醇类化合物与乙酸酐催化反应合成所述R1＝R2＝R3＝R4＝-O C(＝O)-CH3的甾醇类化合物；当R1＝R2＝R3＝R4＝－OTs；合成方法包括：将摩尔比为1：4～1：8的所述甾醇类化合物(II)与对甲苯磺酰氯，以三乙胺为除酸剂，在二氯甲烷中反应合成所述R1＝R1＝R2＝R3＝R4＝－OTs的甾醇类化合物，所述结构式(Ⅱ)如下：
在本发明的另一个方面，还提供了一种提取物，该提取物包含上述甾醇类化合物。
进一步地，上述提取物为红曲制备物的提取物。
进一步地，上述提取物包括：(1)上述甾醇类化合物的制备方法中梯度洗脱过程中石油醚和乙酸乙酯的体积比为50:50～25:75时所得到的洗脱液；(2)上述甾醇类化合物的制备方法中TLC追踪检测过程中得到的第4部分流分；(3)上述甾醇类化合物的制备方法中TLC检测去除杂质带后收集得到的甾醇类化合物；或者(4)上述甾醇类化合物的制备方法中纯化后的甾醇类化合物。
在本发明的另一个方面，还提供了一种组合物，其包含上述甾醇类化合物、和/或上述提取物；可选地，还包括药学上可接受的载体或辅料。
在本发明的另一个方面，还提供了一种上述甾醇类化合物或者上述提取物或者上述组合物在制备预防和/或治疗和/或辅助治疗癌症的药物中的用途。
进一步地，上述用途中抗癌药物为抗肝癌药物和抗淋巴瘤药物。
在本发明的另一个方面，还提供了一种上述甾醇类化合物或者上述提取物或者上述组合物在制备降低或调节血脂或者预防和/或治疗血脂异常、高血脂症、高胆固醇血症、或动脉粥样硬化、或改善血管内皮功能、或抑制血小板聚集的药物中的用途。
在本发明的另一个方面，还提供了一种在体内或体外抑制HMG-CoA还原酶的方法，包括使用有效量的HMG-CoA还原酶抑制剂抑制HMG-CoA还原酶的步骤，HMG-CoA还原酶抑制剂为上述甾醇类化合物或者上述提取物或者上述组合物。
在本发明的另一个方面，还提供了一种体外或体内抑制癌症细胞的方法，包括用癌症抑制剂抑制所述癌症细胞，所述癌症细胞抑制剂包括上述化合物或者上述的提取物或者上述组合物；癌症细胞为肝癌细胞或者淋巴瘤细胞。
本发明的有益效果：本发明成功地从红曲制备物中分离得到了一种化合物，该化合物具有结构式(Ⅰ)中的结构，其能够有效地抑制HMG-CoA还原酶；具有作为降低或调节血脂或者预防和/或治疗血脂异常、高血脂症、高胆固醇血症、或动脉粥样硬化、或改善血管内皮功能、或抑制血小板聚集的药物的潜力，同时，还能够有效地抑制癌细胞(肿瘤细胞)的增殖，且抑制作用且呈浓度-效应关系；从而具有作为预防和/或治疗和/或辅助治疗癌症的药物的潜力。
附图说明
说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本发明的一部分，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：
图1示出了实施例1所制备的具有结构式(Ⅱ)的化合物的紫外光谱图；
图2示出了实施例1所制备的具有结构式(Ⅱ)的化合物的红外光谱图；
图3示出了实施例1所制备的具有结构式(Ⅱ)的化合物的高分辨质谱图；
图4示出了实施例1所制备的具有结构式(Ⅱ)的化合物的氢谱图；
图5示出了实施例1所制备的具有结构式(Ⅱ)的化合物的碳谱图；
图6示出了实施例1所制备的具有结构式(Ⅱ)的化合物的DEPT信号图；
图7示出了实施例1所制备的具有结构式(Ⅱ)的化合物的HSQC相关信号图；
图8示出了实施例1所制备的具有结构式(Ⅱ)的化合物的HMBC相关信号图；
图9示出了实施例1所制备的具有结构式(Ⅱ)的化合物对小鼠肝癌细胞株H22细胞生长的抑制作用曲线；
图10示出了实施例1所制备的具有结构式(Ⅱ)的化合物对小鼠肝癌细胞株HepG2细胞生长的抑制作用曲线；
图11示出了实施例1所制备的具有结构式(Ⅱ)的化合物对小鼠肉瘤细胞株S180细胞生长的抑制作用曲线；
图12示出了实施例1所制备的具有结构式(Ⅱ)的化合物对小鼠淋巴瘤细胞YAC-1细胞生长的抑制作用曲线；
图13示出了实施例1所制备的具有结构式(Ⅱ)的化合物对人单核淋巴瘤细胞THP1细胞生长的抑制作用曲线；以及
图14示出了实施例1所制备的具有结构式(Ⅱ)的化合物对人组织淋巴瘤细胞U937细胞生长的抑制作用曲线。
具体实施方式
需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将参考附图并结合实施例来详细说明本发明。
在本发明的一种典型的实施方式中，提供了一种具有结构式(Ⅰ)的甾醇类化合物或其药学上可接受的盐，结构式(Ⅰ)如下：
其中，R1为-OH、＝O(羰基)、H、或C1-C3烷基；R2为-OH、H、或C1-C3烷基；R3为-OH、＝O、H、或C1-C3烷基；R4为-OH、H、或C1-C3烷基；且R1、R2、R3、R4中的至少一个为-OH。本发明中，术语“C1-C3烷基”包括甲基、乙基、丙基或异丙基。
优选地，上述甾醇类化合物或其药学上可接受的盐具有结构式(Ⅱ)，结构式(Ⅱ)如下：
经长期研究，发明人从红曲制备物中提取出了具有上述结构式(Ⅰ)的化合物。本申请中所指“红曲制备物”是指含有红曲的组合物、混合物等，本领域技术人员能够根据物质的成分合理地分析出是否可以作为红曲制备物使用。例如北京北大维信生物科技有限公司生产的血脂康胶囊、市售的红曲粉、以及市售的红曲冻干粉等均可用作红曲制备物。本发明从上述红曲制备物中得到的化合物为一种全新化合物，该结构式中具有甾醇类化合物母核，不饱和键以及双氧桥环状结构，此化合物在红曲提取物中并未见到相关报道。并且发明人对此类化合物的活性进行了进一步研究，惊喜地发现其具有HMG-CoA还原酶活性抑制作用以及具有抗癌作用，特别是抗肝癌和淋巴瘤作用。
在本发明的一种典型的实施方式中，上述化合物的制备方法，包括以下步骤：取红曲制备物，加入溶剂后进行超声提取，并将提取液减压浓缩得精提物。将精提物上硅胶柱色谱分离，柱色谱分离过程中采用石油醚和乙酸乙酯对精提物进行梯度洗脱，梯度洗脱过程中石油醚和乙酸乙酯的体积比依次为75:25、50:50～25:75、0:100，取石油醚和乙酸乙酯的体积比为50:50～25:75时所得到的洗脱液，优选地，梯度洗脱过程中石油醚和乙酸乙酯的体积比依次为75:25、50:50、25:75、0:100，取石油醚和乙酸乙酯的体积比为25:75时所得到的洗脱液，以体积比为1：1的二氯甲烷和甲醇的混合液为流动相进行sephadex LH-20凝胶柱层析，经TLC追踪检测合并相同的部分，得到6个部分流分。对第4部分流分进行柱色谱分离，色谱柱为C18反相硅胶柱，流动相为体积比为75：25甲醇和水混合液，经TLC检测，去除杂质带后收集得到甾醇类化合物。TLC检测条件为正相硅胶板：展开剂为二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇＝8：8：1，该甾醇类化合物的Rf值约为0.3，收集该Rf值的流分即得到该甾醇类化合物。
优选地，上述制备方法中对甾醇类化合物进行硅胶柱纯化处理，用体积比为20：20：1的二氯甲烷、乙酸乙酯及甲醇的混合液进行洗脱，去除杂质带后收集得到纯化后的所述甾醇类化合物。
优选地，上述制备方法的超声提取过程中的溶剂为石油醚，二氯甲烷，乙酸乙酯，乙醇，甲醇、或正己烷中的一种或几种，更为优选地为正己烷。所使用溶剂的体积为红曲制备物的2-6倍。优选地，上述超声提取过程中提取次数为2-6次，每次的时间为20-40min。在该范围内能够合理地兼顾时间与产物含量。
本发明所提供的上述具有结构式(Ⅰ)的甾醇类化合物除了通过上述提取方法制备以外，还可以通过有机合成的方法制备，本领域技术人员在本发明的教导下，有能力根据现有甾醇类化合物的人工合成方法，制备得出具有结构式(Ⅰ)的甾醇类化合物。
在本发明的一种实施方式中，提供了一种具有结构式(II)的甾醇类化合物的制备方法，该方法包括将具有结构式(Ⅲ)的甾醇类化合物与5，10，15，20-四苯基卟啉在溶剂中混合溶解，在-5℃～5℃下通入氧气，投影灯照射反应后用柱层析分离得具有结构式(II)的甾醇类化合物，
在上述方法中所使用的5，10，15，20-四苯基卟啉的结构具有上述结构式(IV)。上述具有结构式(Ⅲ)的甾醇类化合物为16,22-环氧麦角甾-5,7-二烯-3,20,23,25-四醇(16,22-epoxy-ergosta-5,7-dien-3,20,23,25-tetraol)。其可以采用以下方法制备该化合物的方法如下：
1)取血脂康胶囊(北大维信生产)内容物干粉约1kg，用2～6倍体积的二氯甲烷为溶剂超声提取3次，每次20～40分钟，合并提取液，减压浓缩并回收溶剂，得到二氯甲烷精提物91g。
2)取二氯甲烷精提物50g，上硅胶柱色谱分离，用石油醚和乙酸乙酯进行梯度洗脱。石油醚-乙酸乙酯的体积比依次为75:25，50:50，25:75，0:100。
3)取石油醚-乙酸乙酯为25:75部分5.0g，经C18反相柱色谱进行分离，甲醇-水(10:90-100:0)梯度洗脱得到4个部分(甲醇-水10：90、50：50、75：25、100：0)，其中甲醇-水(75:25)洗脱部分1.3g用半制备高效液相色谱纯化，以乙腈-0.2％乙酸水溶液(45：55)为流动相，流速为4mL/min，C18半制备色谱柱(10×250mm，5μm)为固定相，DAD检测器检测波长为270nm，收集9.2min的色谱峰，多次累加后浓缩，冷冻干燥得该化合物约40mg。
在本发明的一种实施方式中，还提供了一种具有结构式(Ⅰ)的甾醇类化合物及其衍生物的合成方法，其可以通过以具有结构式(III)的化合物为原料，先通过衍生化反应生成酯/苯磺酸酯，再氧化反应生成具有结构式(Ⅰ)的甾醇类化合物中R1＝R2＝R3＝R4＝-O C(＝O)-CH3；或者R1＝R2＝R3＝R4＝－OTs；或以具有结构式(III)的化合物为原料，氧化反应生成具有结构式(II)化合物，再通过衍生化反应生成具有结构式(Ⅰ)的甾醇类化合物中R1＝R2＝R3＝R4＝-O C(＝O)-CH3；或者R1＝R2＝R3＝R4＝－OTs；形成酯/苯磺酸酯键及形成双氧结构的方法均可采用本领域的常规方法。
在本发明的一种实施方式中，上述具有结构式(Ⅰ)的所述甾醇类化合物中R1＝R2＝R3＝R4＝-O C(＝O)-CH3时的合成方法包括：将具有结构式(II)中的甾醇类化合物与乙酸酐催化反应合成所述R1＝R2＝R3＝R4＝-O C(＝O)-CH3的甾醇类化合物。优选地，在催化量的吡啶下于40－80℃下反应1－3小时后制得。
在本发明的一种实施方式中，上述具有结构式(Ⅰ)的所述甾醇类化合物中R1＝R2＝R3＝R4＝－OTs(OTs为对甲苯磺酰氧基)时的合成方法包括：将摩尔比为1：4～1：8的所述甾醇类化合物(II)与对甲苯磺酰氯，以三乙胺为除酸剂，在二氯甲烷中反应合成所述R1＝R1＝R2＝R3＝R4＝－OTs的甾醇类化合物。优选地，反应时间为20℃－40℃。
在本发明的一种典型的实施方式中，还提供了一种提取物，该提取物包含上述具有结构式(Ⅰ)的甾醇类化合物。
优选地，该提取物为红曲制备物的提取物。
优选地，该提取物包括：(1)本发明提供的制备具有结构式(Ⅰ)的甾醇类化合物的梯度洗脱过程中石油醚和乙酸乙酯的体积比为50:50～25:75时所得到的洗脱液；(2)本发明提供的制备具有结构式(Ⅰ)的甾醇类化合物的过程中TLC追踪检测过程中得到的第4部分流分；(3)本发明提供的制备具有结构式(Ⅰ)的甾醇类化合物的过程中TLC检测去除杂质带后收集得到甾醇类化合物；或者(4)本发明提供的制备具有结构式(Ⅰ)的甾醇类化合物的纯化后的甾醇类化合物。
在本发明的一种典型的实施方式中，还提供了一种组合物，其包含上述甾醇类化合物、和/或上述提取物；可选地，还包括药学上可接受的载体或辅料。
通常本发明药物组合物含有0.1－90重量％的具有结构式(Ⅰ)或结构式(Ⅱ)甾醇类化合物和/或其药学上可接受的盐或者上述提取物。药物组合物可根据本领域已知的方法制备。用于此目的时，如果需要，可将具有结构式(Ⅰ)或结构式(Ⅱ)甾醇类化合物和/或立体异构体与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅剂结合，制成可作为人用适当的施用形式或剂量形式。
本发明的具有结构式(Ⅰ)或结构式(Ⅱ)甾醇类化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。给药剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、脂质体、透皮剂、口含片、栓剂、冻干粉针剂等。可以是普通制剂、缓释制剂、控释制剂及各种微粒给药系统。为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等；湿润剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，例如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯、山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等；吸收促进剂，例如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高岭土、滑石粉等；粘合剂如阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解剂，如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。为了将给药单元制成栓剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高级醇、高级醇的酯、明胶、半合成甘油酯等。为了将给药单元制成胶囊，将有效成分具有结构式(Ⅰ)的化合物或其立体异构体与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬的明明胶囊或软胶囊中。也可将有效成分具有结构式(Ⅰ)的化合物或其立体异构体制成微囊剂，混悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。为了将给药单元制成注射用制剂，如溶液剂、乳剂、冻干粉针剂和混悬剂，可以使用本领域常用的所有稀释剂，例如，水、乙醇、聚乙二醇、1,3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，为了制备等渗注射液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等。
此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。
本发明具有结构式(Ⅰ)或结构式(Ⅱ)甾醇类化合物，或其可药用盐的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、体重及个体反应，所用的具体化合物，给药途径及给药次数等。上述剂量可以单一剂量形式或分成几个，例如二、三或四个剂量形式给药。
对于组合物而言，可通过改变本发明药物组合物中各活性成分的实际剂量水平，以便所得的活性化合物量能有效针对具体患者、组合物和给药方式得到所需的治疗反应。剂量水平须根据具体化合物的活性、给药途径、所治疗病况的严重程度以及待治疗患者的病况和既往病史来选定。但是，本领域的做法是，化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。
当用于上述治疗和/或预防或辅助治疗时，治疗和/或预防有效量的一种本发明化合物可以以纯形式应用，或者以药学可接受的酯或前药形式(在存在这些形式的情况下)应用。或者，所述化合物可以以含有该目的化合物与一种或多种药物可接受赋形剂的药物组合物给药。术语“有效量”是指可在受试者中实现治疗、预防、减轻和/或缓解本发明所述疾病或病症的剂量。但应认识到，本发明化合物和组合物的总日用量须由主诊医师在可靠的医学判断范围内作出决定。对于任何具体的患者，具体的治疗有效剂量水平须根据多种因素而定，所述因素包括所治疗的障碍和该障碍的严重程度；所采用的具体化合物的活性；所采用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；所采用的具体化合物的给药时间、给药途径和排泄率；治疗持续时间；与所采用的具体化合物组合使用或同时使用的药物；及医疗领域公知的类似因素。例如，本领域的做法是，化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。一般说来，本发明具有结构式(Ⅰ)的化合物用于哺乳动物特别是人的剂量可以介于0.001－1000mg/kg体重/天，例如介于0.01－100mg/kg体重/天，例如介于0.01－10mg/kg体重/天。
在本发明的一种典型的实施方式中，还提供了一种上述甾醇类化合物或者提取物或者组合物在制备预防和/或治疗和/或辅助治疗癌症的药物中的用途；具体地，所述癌症为肝癌或淋巴瘤。
在本发明的一种典型的实施方式中，上述甾醇类化合物或者提取物或者组合物在制备降低或调节血脂或者预防和/或治疗血脂异常、高血脂症、高胆固醇血症、或动脉粥样硬化、或改善血管内皮功能、或抑制血小板聚集的药物中的用途。
在本发明的一种典型的实施方式中，还提供了一种在体内或体外抑制HMG-CoA还原酶的方法，包括使用有效量的HMG-CoA还原酶抑制剂抑制HMG-CoA还原酶，HMG-CoA还原酶抑制剂为上述化合物或者上述提取物或者上述组合物。
在本发明的一种典型实施方式中，还提供了一种体外或体内抑制癌症细胞的方法，包括用癌症抑制剂抑制所述癌症细胞，癌症细胞抑制剂包括甾醇类衍生物，甾醇类衍生物包括具有结构式(Ⅰ)的甾醇类化合物、其药学上可接受的盐、含有甾醇类化合物的提取物、或者含有甾醇类化合物的组合物，癌症细胞优选为肝癌细胞或者淋巴瘤细胞。
以下将结合实施例1至3具体说明本发明所提供的具有结构式(Ⅰ)的甾醇类化合物抑制HMG-CoA还原酶的活性效果及抗癌效果。
一、具有结构式(Ⅱ)的甾醇类化合物的制备方法：
实施例1：
原料：北京北大维信生物科技有限公司生产的血脂康胶囊内装物2kg。
实施例2：
原料：市售红曲粉3kg。
分别采用实施例1和2中原料制备具有结构式(Ⅱ)的甾醇类化合物的方法：
1)取血脂康胶囊内装物2kg或者红曲粉约3kg，以2-6倍体积的正己烷为溶剂超声提取3次，每次20-40分钟，合并提取液，减压浓缩得正己烷精提物84g。
2)取正己烷精提物50g，上硅胶柱色谱分离，用石油醚和乙酸乙酯进行梯度洗脱。石油醚-乙酸乙酯的体积比依次为75:25、50:50、25:75、0:100。
3)取石油醚-乙酸乙酯为25:75洗脱得到的提取物3.0g，旋蒸减压浓缩的油状物。用微量二氯甲烷：甲醇＝1：1溶解之后，上柱，以二氯甲烷-甲醇(1：1)为流动相，进行sephadex LH-20凝胶柱层析。共接收了120个流分，每流分为5mL。经TLC追踪检测合并相同的部分，得到6个部分。分别为1-50；51-75；76-80；81-93；94-110；111-120流分。取第4个部分(81-93流分)1.55g，旋蒸减压浓缩的油状物，用微量100％甲醇溶解之后，上C18反相硅胶柱，用甲醇-水(75：25)洗脱，根据TLC检测结果，收集含该化合物的流分，干燥浓缩得到该甾醇类化合物。TLC检测条件为正相硅胶板：展开剂为二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇＝8：8：1，该甾醇类化合物的Rf值约为0.3，收集该Rf值的流分即得到该甾醇类化合物。为了进一步纯化此化合物，可进一步通过硅胶柱层析纯化、用二氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇(20：20：1)洗脱，即可得到纯化后的化合物5mg。
实施例3
具有结构式(Ⅱ)的甾醇类化合物的化学合成方法：以具有结构式(Ⅲ)的甾醇类化合物为原料。
具有结构式(Ⅲ)的甾醇类化合物的提出方法如下：
1)取血脂康胶囊(北大维信生产)内容物干粉约1kg，用2～6倍体积的二氯甲烷为溶剂超声提取3次，每次20～40分钟，合并提取液，减压浓缩并回收溶剂，得到二氯甲烷精提物91g。
2)取二氯甲烷精提物50g，上硅胶柱色谱分离，用石油醚和乙酸乙酯进行梯度洗脱。石油醚-乙酸乙酯的体积比依次为75:25，50:50，25:75，0:100。
3)取石油醚-乙酸乙酯为25:75部分5.0g，经C18反相柱色谱进行分离，甲醇-水(10:90-100:0)梯度洗脱得到4个部分(甲醇-水10：90、50：50、75：25、100：0)，其中甲醇-水(75:25)洗脱部分1.3g用半制备高效液相色谱纯化，以乙腈-0.2％乙酸水溶液(45：55)为流动相，流速为4mL/min，C18半制备色谱柱(10×250mm，5μm)为固定相，DAD检测器检测波长为270nm，收集9.2min的色谱峰，多次累加后浓缩，冷冻干燥得该化合物约40mg。
具有结构式(Ⅱ)的甾醇类化合物的合成方法：
将上述具有结构式(Ⅲ)的甾醇类化合物(23.49g,50.97mmol)和5,10，15，20-四苯基卟啉(31.33mg,50.97μmol)溶于四氯化碳200ml中于0℃下通入氧气，5min后用450W投影灯照射反应7h，用柱层析分离得产品化合物(II)。
实施例1、2和3所制备的化合物结构鉴定方法为：
1.化合物的理化数据
实施例1-3所制备的化合物为无色油状物，其旋光度为[α]25 D-21.59(c0.082,CH2Cl2:MeOH＝1:1)。由图1所示，实施例1-3所制备的化合物的UV光谱中有最大吸收峰λmax(CH2Cl2:MeOH)为228.40nm。由图2所示，实施例1-3所制备的化合物的FT-IR(KBr,cm-1)光谱：3391(-OH)，2971，2932(饱和碳氢)，1722(C＝C)，1456，1378(偕二甲基)，1043，945(-O-O-)。
2.实施例1、2和3所制备的化合物分子式的确定
如图3所示，FT-ICR-MS给出的m/z493.31596[M+H]+(calcd.493.31665，err0.69)，推断为该化合物的分子量为492.31。如图4中1H-NMR图和图5中13C-NMR图所示，共有40个氢信号和28个碳信号。从图6 DEPT信号图显示，有6个季碳，10个CH，6个CH2及6个CH3。在图5中13C-NMR图中，136.9ppm(C-6)和131.8ppm(C-7)处的两个烯碳信号表明，该化合物有一个双键。结合图7 HSQC相关信号图与图5 13C-NMR图分析，67.2ppm，83.8ppm，80.2ppm，84.6ppm，81.0ppm，85.8ppm，73.3ppm，75.6ppm处，存在与氧原子相连的8个碳。结合分子量和图4 1H-NMR图、图513C-NMR图及图6DEPT信号图，如果该化合物拥有8个氧原子的话分子量超过492.31，由此推断该化合物具有7个氧原子和未体现氢谱信号的4个氢原子。从而可以判断上述7个氧原子中，4个氧原子归属为4个羟基，其余3个氧原子以非羟基形式存在。根据上述分析，可以确定该分子中有28个碳原子，44个氢原子及7个氧原子，分子式为C28H44O7。
3.实施例1、2和3所制备的化合物结构式的确定：
分析该化合物的碳谱(13C-NMR及DEPT)，有28个碳原子并其中6个碳为甲基及2个烯碳。并且，如图1中该化合物的紫外光谱图所示，其与麦角甾醇过氧化物的紫外光谱图非常接近，初步推断该化合物具有麦角甾醇过氧化物的骨架及-O-O-过氧化部分。由此可以得出，3个非羟基氧原子中2个氧原子归属于-O-O-。图7HSQC相关信号图与图8 HMBC相关信号图相结合分析，与氧原子相连的8个碳，分别归属为4个羟基相连的4个碳(67.2，73.3，75.6及81.0ppm)、与-O-O-相连的2个碳(80.2和83.8ppm)及第7个氧原子相连的2个碳(84.6和85.8ppm)。从分子式可以计算得其不饱和度为7。从而可以推断：该化合物除了1个双键和过氧化甾醇骨架5个环的6个不饱和处外，还有一个不饱和处而且此处只能是一个环，由此可以判断该环是由第7个氧原子为中心，由C-16(84.6ppm),C-17(68.5ppm),C-20(81.0ppm)及C-22(85.8ppm)4个碳原子组成的5元环。这不但满足不饱和度，而且还满足与氧原子相连的碳原子数。进一步分析质谱分析系统给出的分子量及上述分子式，证实了上述分析。综合上述分析可推测该化合物为：5,8-环二氧-16,22-环氧麦角甾-5,76-二烯-3,20,23,25-四醇。
4.实施例1和2所制备的化合物的结构式如下：
二、具有结构式(Ⅱ)的甾醇类化合物的衍生物的制备
以下实施例4至7是以实施例1-3所制备的具有结构式(Ⅱ)的甾醇类化合物为原料进一步合成的甾醇类化合物。
实施例4
具有结构式(Ⅰ)且R1＝R2＝R3＝R4＝-O C(＝O)-CH3的甾醇类化合物(化合物4)的合成方法：
将20mL的乙酸酐，实施例1中所制备的具有结构式(Ⅱ)的甾醇类化合物(4.24g,9.2mmol)和3滴吡啶(1滴约40-50μL)的混合液在水浴上加热至50℃，反应2小时。冷却，加饱和NaHCO3水溶液，用甲苯提取3次，旋蒸有机层得成品，柱层析得化合物(II)的四乙酸酯，即具有结构式(Ⅰ)且R1＝R2＝R3＝R4＝-O C(＝O)-CH3的甾醇类化合物。
实施例4所合成的化合物结构鉴定方法为：
分析该化合物的氢谱(1H-NMR)，基于具有结构式(Ⅱ)的甾醇类化合物的结构，发现在2.06ppm(each，3H，S,OAc)处有4个甲基信号，其它的信号基本与结构式(II)的氢信号一致。这说明，该化合物中有4个乙酰氧基也就是成功合成了结构式(II)的四乙酸酯。通过ESI-MS：m/z 683.36[M+Na]+进一步确认了该化合物具有上述结构。
实施例5
具有结构式(Ⅰ)且R1＝R2＝R3＝R4＝－OTs的甾醇类化合物(化合物5)的合成方法：
在干燥的250mL烧瓶中，加入实施例2中所制备的具有结构式(Ⅱ)的甾醇类化合物(4.24g,9.2mmol)与50mL干燥二氯甲烷.冷却至0℃，投人对甲苯磺酰氯(10.56g,55.3mmol).在搅拌下.滴加三乙胺(7.46g,73.6mmol).滴加完毕，20℃搅拌1h，反应混合液水洗(50mL×3)，无水硫酸钠干燥.过滤，蒸干溶剂得到粗品，快速柱层析得到化合物(II)的四对甲苯磺酯，即具有结构式(Ⅰ)且R1＝R2＝R3＝R4＝－OTs的甾醇类化合物。
实施例5所合成的化合物结构鉴定方法为：
分析该化合物的氢谱(1H-NMR)，基于具有结构式(Ⅱ)的甾醇类化合物的结构，发现在7.20-7.90ppm(16H，m，Ar)处有16个芳香氢信号及2.45ppm(each,3H，S，Ar-CH3)处有4个甲基信号，其它的信号基本与结构式(II)的氢信号一致。这说明，该化合物拥有4个-OTs基并成功合成了结构式(II)的四对甲苯磺酰酯。通过ESI-MS：m/z1109.32[M+H]+进一步确认了该化合物具有上述结构。
三、实施例1、4或5中所制备的化合物的HMG-CoA还原酶抑制活性实验
1 实验材料
1.1 测试样
实施例1、4或5所制备的化合物(以下简称具有结构式(Ⅱ)的化合物、化合物4、化合物5)；洛伐他汀标准品(购于Sigma公司)
1.2 酶
大鼠肝脏微粒体(HMG-CoA还原酶)：可以商购，也可以参考如下的制备方法：取出雄性大鼠的肝脏，用KESD缓冲液冲洗之后，1200g离心15min，取上清液。再用105000g离心90min两次之后，收集离心沉淀。离心沉淀中加入8.3％甘油，用37℃温浴加热1h。大鼠肝脏微粒体粗体物用饱和硫酸铵纯化并收集35-50％纯化部分。可以将得到的纯化部分存放在-80℃冰箱中。
1.3 试剂
氯化钾，磷酸二氢钾,乙二胺四乙酸,二硫苏糖醇，购于北京化学试剂公司
烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADPH)，购于Merck公司
3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)，购于Sigma公司
2 实验方法
将实施例1所制备的具有结构式(Ⅱ)的化合物、化合物4或化合物55.0mg、和洛伐他汀2.0mg，各用1mL75％乙醇溶液溶解；
测定体系中总体积为250μL，各成分的浓度为：氯化钾200mM,磷酸二氢钾160mM,乙二胺四乙酸4mM，二硫苏糖醇10mM，两个底物烟酰胺腺嘌呤二核苷酸和3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A的浓度分别为200μM和50μM,pH6.8,酶加30μL。
试验组加5μL具有实施例1所制备的化合物的乙醇溶液或化合物4的乙醇溶液或化合物5的乙醇溶液；阳性对照组加5μL洛伐他汀乙醇溶液；空白对照组加5μL75％乙醇。在Versamax酶标仪上37℃条件下检测OD340的动态变化。通过检测OD340在5分钟内下降的快慢(以斜率值表示)，来评价HMG-CoA还原酶活性的强弱，进而评价酶抑制剂活性的强弱，结果见表1。
3 实验结果
表1
由表1中结果表明，实施例1所制备的具有结构式(Ⅱ)的化合物以及实施例4或5所合成的化合物4或5对HMG-CoA还原酶的活性有抑制作用。虽然该化合物对HMG-CoA还原酶的抑制作用没有洛伐他汀的效果好，但其抑制率已经达到了31.4％，药效结果显示在相同剂量下，化合物4的活性要好于结构式(Ⅱ)的化合物，其抑制率为37.8％。结果显示结构式(Ⅱ)的化合物和化合物4具有较好的HMG-CoA还原酶抑制活性，完全可以将该化合物应用在制备具有HMG-CoA还原酶活性抑制作用的药物中。
虽然本申请仅对对实施例1至5中化合物提供了制备方法，及HMG-CoA还原酶抑制作用，并未对每一种具有结构式(Ⅰ)化合物的制备方法及对HMG-CoA还原酶的抑制作用进行描述，但是基于相似结构化合物具有相似性能的原理，本领域技术人员完全能够了解其他化合物的制备方法及其具有的HMG-CoA还原酶的抑制作用。
由此可见，本申请成功地通过从红曲制备物中提取得到具有结构式(Ⅰ)的化合物，此化合物的结构式并未见到相关报道，为新化合物。经过相关实验研究发现，此化合物具有HMG-CoA还原酶的抑制作用，为制备HMG-CoA还原酶抑制药物提供了一种全新的化合物，具有作为降低或调节血脂或者预防和/或治疗血脂异常、高血脂症、高胆固醇血症、或动脉粥样硬化、或改善血管内皮功能、或抑制血小板聚集药物的潜力，这无疑是广大血脂异常患者、高血脂症患者、高胆固醇血症患者、动脉粥样硬化患者、血管内皮功能异常患者、以及血小板聚集患者的福音。
四、实施例1、4或5所制备的化合物的抗癌效果数据：
1 实验材料
1.1 细胞株
H22 购于韩国细胞株银行，首尔，韩国。
S180，HepG-2，YAC-1，Thp1，U937及B16-F10购于中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库。
1.2 药品
实施例1至3所制备的具有结构式(Ⅱ)的化合物；实施例4所制备的化合物4；实施例5所制备的化合物5。
1.3 试剂
MTT为购于Amresco公司；RPMI1640和双抗购于Sigma公司；胎牛血清(FBS)购于美国Gibco公司；其它试剂均为国产分析纯。
2 实验方法
取对数生长期的癌细胞，以2×104个/孔，接种于96孔培养板，加入药物至药物终浓度为：500,250,125,62.5,31.25,15.625及7.8125μg/mL，于37℃，5％CO2细胞培养箱中培养72 h后加入MTT 10μL/孔，于37℃避光孵育4h，去除培养液，加入150μL DMSO或酸化异丙醇，振荡5 min后，于570 nm波长测定OD值。重复3次，设空白对照。各种细胞株所用培养基都相同，均为含10％胎牛血清和1％双抗(青霉素和链霉素)的RPMI1640培养基。
3 细胞存活率计算公式
细胞存活率＝(实验组OD值/对照组OD值)×100％。
4 实施例1所制备化合物的体外抗癌(肝癌及淋巴瘤)活性
4.1 体外抗肝癌活性
4.1.1 小鼠肝癌细胞株H22
图9为实施例1所制备的具有结构式(Ⅱ)的化合物对小鼠肝癌细胞株H22细胞生长的抑制作用曲线。由图9可以看出，采用实施例1所制备的具有结构式(Ⅱ)的化合物对小鼠肝癌细胞株H22进行体外抗癌(肝癌)活性测试时，该具有结构式(Ⅱ)的化合物对小鼠肝癌细胞株H22的生长有抑制作用，且呈浓度-效应关系。其IC50值约为200μg/mL，表明对小鼠肝癌细胞增殖有较好的抑制作用。
表2为实施例4及5所制备的化合物4和5中对小鼠肝癌细胞株H22细胞生长的抑制数据，结果如表2所示：
表2
样品名称 癌或肿瘤细胞株 样品浓度 抑制率
化合物4 小鼠肝癌细胞株H22 375μg/mL 45％
化合物5 小鼠肝癌细胞株H22 375μg/mL 42％
由表2中数据可知，实施例4及5所制备的化合物4和5对小鼠肝癌细胞株H22的生长具有明显的抑制作用。
4.1.2 小鼠肝癌细胞株HepG2
图10为实施例1所制备的具有结构式(Ⅱ)的化合物对小鼠肝癌细胞株HepG2细胞生长的抑制作用曲线。由图10可以看出，采用实施例1所制备的具有结构式(Ⅱ)的化合物对小鼠肝癌细胞株HepG2进行体外抗癌(肝癌)活性测试时，该具有结构式(Ⅱ)的化合物对小鼠肝癌细胞株HepG2的生长有抑制作用，且呈浓度-效应关系。其IC50值约为400μg/mL，表明对小鼠肝癌细胞增殖有较好的抑制作用。
4.1.3 小鼠肉瘤细胞株S180(肝组织中生长的肉瘤)
图11为实施例1所制备的具有结构式(Ⅱ)的化合物对小鼠肉瘤细胞株S180细胞生长的抑制作用曲线。由图11可以看出，采用实施例1所制备的具有结构式(Ⅱ)的化合物对小鼠肉瘤细胞株S180进行体外抗癌(小鼠肉瘤)活性测试时，该具有结构式(Ⅱ)的化合物对小鼠肉瘤细胞株S180的生长有抑制作用，且呈浓度-效应关系。其IC50值约为460μg/mL，表明对小鼠肉瘤细胞增殖有较好的抑制作用。
4.2 体外抗淋巴瘤活性
4.2.1 小鼠淋巴瘤细胞YAC-1
图12为实施例1所制备的具有结构式(Ⅱ)的化合物对小鼠淋巴瘤细胞YAC-1细胞生长的抑制作用曲线。由图12可以看出，采用实施例1所制备的具有结构式(Ⅱ)的化合物对小鼠淋巴瘤细胞YAC-1进行体外抗癌(淋巴瘤)活性测试时，该具有结构式(Ⅱ)的化合物对小鼠淋巴瘤细胞YAC-1的生长有抑制作用，且呈浓度-效应关系。其IC50值约为350μg/mL，表明对小鼠淋巴瘤细胞增殖有较好的抑制作用。
4.2.2 人单核淋巴瘤细胞THP1
图13为实施例1所制备的具有结构式(Ⅱ)的化合物对人单核淋巴瘤细胞THP1细胞生长的抑制作用曲线。由图13可以看出，采用实施例1所制备的具有结构式(Ⅱ)的化合物对人单核淋巴瘤细胞THP1进行体外抗癌(淋巴瘤)活性测试时，该具有结构式(Ⅱ)的化合物对人单核淋巴瘤细胞THP1的生长有抑制作用，且呈浓度-效应关系。其IC50值约为400μg/mL，表明对人单核淋巴瘤细胞增殖有较好的抑制作用。
4.2.3 人组织淋巴瘤细胞U937
图14为实施例1所制备的具有结构式(Ⅱ)的化合物对人组织淋巴瘤细胞U937细胞生长的抑制作用曲线。由图14可以看出，采用实施例1所制备的具有结构式(Ⅱ)的化合物对人组织淋巴瘤细胞U937进行体外抗癌(淋巴瘤)活性测试时，该具有结构式(Ⅱ)的化合物对人组织淋巴瘤细胞U937的生长有抑制作用，且呈浓度-效应关系。其IC50值约为320μg/mL，表明对人组织淋巴瘤细胞增殖有较好的抑制作用。
表3为实施例4及5所制备的化合物4和5中对人组织淋巴瘤细胞U937细胞生长的抑制作用数据，结果如表3所示，
表3
样品名称 癌或肿瘤细胞株 样品浓度 抑制率
化合物4 人组织淋巴瘤细胞U937 375μg/mL 39％
化合物5 人组织淋巴瘤细胞U937 375μg/mL 47％
由表3中数据可知，实施例4及5所制备的化合物4和5对人组织淋巴瘤细胞U937的生长具有明显的抑制作用。
由上述测试结果可见，本申请通过从红曲制备物中提取得到具有结构式(Ⅰ)的化合物，此化合物的结构式并未见到相关报道，为新化合物。经过相关实验研究发现，此化合物具有抗癌作用，为制备抗癌药物，特别是抗肝癌药物、抗淋巴瘤药物提供了一种全新的化合物，这无疑是广大癌症患者的福音。
虽然本申请仅对实施例1提供的化合物制备方法，及抗癌效果进行了详细描述，并未对每一种具有结构式(Ⅰ)化合物的制备方法及涵盖作用进行描述，但是基于相似结构化合物具有相似性能的原理，本领域技术人员完全能够了解其他化合物的制备方法及其具有的抗癌作用。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (11)

1.一种具有结构式(Ⅰ)的甾醇类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述结构式(Ⅰ)如下：
其中，R1为-OH、＝O、H、或C1-C3烷基；R2为-OH、H、或C1-C3烷基；R3为-OH、＝O、H、或C1-C3烷基；R4为-OH、H、或C1-C3烷基；且R1、R2、R3、R4中的至少一个为-OH。
2.一种具有结构式(Ⅰ)的甾醇类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述结构式(Ⅰ)如下：
其中，所述具有结构式(Ⅰ)的甾醇类化合物中R1＝R2＝R3＝R4＝-O C(＝O)-CH3；或者R1＝R2＝R3＝R4＝－OTs。
3.一种具有结构式(II)的甾醇类化合物的合成方法，其特征在于，将具有结构式(Ⅲ)的甾醇类化合物与5，10，15，20-四苯基卟啉在溶剂中混合溶解，在-5℃～5℃下通入氧气，反应后用柱层析分离得具有结构式(II)的甾醇类化合物，所述结构式(Ⅱ)和(III)如下：
4.一种如权利要求2所述的甾醇类化合物的合成方法，其特征在于，
以具有结构式(III)的化合物为原料，先通过衍生化反应生成酯/苯磺酸酯，再氧化反应生成具有结构式(Ⅰ)的甾醇类化合物中R1＝R2＝R3＝R4＝-O C(＝O)-CH3，或者R1＝R2＝R3＝R4＝－OTs；或者
以具有结构式(III)的化合物为原料，氧化反应生成具有结构式(II)化合物，再通过衍生化反应生成具有结构式(Ⅰ)的甾醇类化合物中R1＝R2＝R3＝R4＝-O C(＝O)-CH3；或者R1＝R2＝R3＝R4＝－OTs；
所述结构式(Ⅱ)和(III)如下：
5.根据权利要求4所述的合成方法，其特征在于，
当R1＝R2＝R3＝R4＝-O C(＝O)-CH3，所述合成方法包括：将具有结构式(II)中的甾醇类化合物与乙酸酐催化反应合成所述R1＝R2＝R3＝R4＝-OC(＝O)-CH3的甾醇类化合物；
当R1＝R2＝R3＝R4＝－OTs，所述合成方法包括：将摩尔比为1：4～1：8的所述甾醇类化合物(II)与对甲苯磺酰氯，以三乙胺为除酸剂，在二氯甲烷中反应合成所述R1＝R1＝R2＝R3＝R4＝－OTs的甾醇类化合物。
6.权利要求1或2所述的甾醇类化合物在制备预防和/或治疗和/或辅助治疗癌症的药物中的用途。
7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述药物为抗肝癌药物和抗淋巴瘤药物。
8.权利要求1或2所述的甾醇类化合物在制备降低或调节血脂或者预防和/或治疗血脂异常或改善血管内皮功能、或抑制血小板聚集的药物中的用途。
9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述血脂异常为高血脂症、高胆固醇血症或动脉粥样硬化。
10.权利要求1或2所述的甾醇类化合物在制备体内或体外抑制HMG-CoA还原酶的药物中的应用。
11.权利要求1或2所述的甾醇类化合物在制备体内或体外抑制癌细胞的药物中的应用，所述癌细胞为肝癌细胞或者淋巴瘤细胞。
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