CN105732650A - 一种醋氨苯砜的药物组合物及其在骨科方面的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种醋氨苯砜的药物组合物及其在骨科方面的应用，本发明提供的醋氨苯砜的药物组合物中含有醋氨苯砜和一种从商陆的干燥根中分离得到的结构新颖的天然产物化合物(Ⅰ)，醋氨苯砜和该天然产物化合物(Ⅰ)单独作用时，对骨破坏性疾病的治疗效果一般；二者联合作用时，对骨破坏性疾病的治疗效果显著提高，可以开发成治疗骨破坏性疾病的药物，与现有技术相比具有突出的实质性特点和显著的进步。

Description

一种醋氨苯砜的药物组合物及其在骨科方面的应用
技术领域
本发明属于生物医药领域，涉及醋氨苯砜的新用途，具体涉及一种醋氨苯砜的药物组合物及其在骨科方面的应用。
背景技术
醋氨苯砜化学名为4,4'-磺酰基双(乙酰苯胺)。其分子式：C16H16N2O4S，分子量：332.38。
醋氨苯砜为砜类抑菌剂，在体内缓慢地分解成氨苯砜或单乙酰氨苯砜而起抗麻风杆菌作用。用于麻风病的预防及不能口服砜类药物者。该品具长效作用，注射一次可维持60～75天。
破骨细胞是具有蚀骨功能的细胞，其形态多样，通常呈油煎蛋状，长条形等，并可见到伪足，较一般细胞大，多含有几个至几十个细胞核。破骨细胞与成骨细胞在骨的新陈代谢中起着主要的作用，两者间靠未知的机理维持着动态平衡。当破骨细胞活性增强时，则以骨吸收为主，有可能发生以骨吸收为主要特征的疾病如牙周炎，骨质疏松症等疾病；当破骨细胞活性受到抑制时也就是成骨细胞活性增强时，则以骨形成为主，有可能发生以骨过量形成为主的疾病如石骨症等疾病。
牙周炎及骨质疏松症等以骨吸收为主要特征的疾病严重影响人类健康，虽然治疗方法多样，但总的治疗效果不佳。牙槽骨吸收是牙周炎的主要病理变化之一，也是造成牙周炎患者牙齿松动和脱落的主要原因。骨质疏松是以骨量减少，骨组织显微结构退化，骨脆性增加，骨折发生率升高为特征的全身性骨骼疾病。随着人口老龄化的加剧，WHO已将骨质疏松症列为老年三大疾病之一。临床上将骨质疏松分为原发性骨质疏松和继发性骨质疏松。原发性骨质疏松分为绝经后骨质疏松与老年性骨质疏松。目前认为本病的发生与遗传因素，绝经，各种激素的代谢异常，生活习惯与方式有关。人体的骨骼处在不断的新陈代谢过程中，在这一过程中，成骨细胞与破骨细胞靠未知的机制巧妙的维系着骨吸收与骨形成之间的平衡。因此如何抑制破骨细胞活性则是治疗诸如骨质疏松等疾病的关键所在。目前，临床上治疗骨质疏松症的药物较多，西药方面主要包括抑制骨吸收的制剂与刺激骨形成的制剂，近期疗效满意，远期效果尚不肯定，况且药物的副作用多，价格昂贵。
目前尚未见醋氨苯砜及其药物组合物在骨科方面的应用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种醋氨苯砜的药物组合物，该药物组合物中含有醋氨苯砜和一种从草本中分离得到的结构新颖的天然产物，醋氨苯砜和该天然产物可以协同治疗骨破坏性疾病。
本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
一种具有下述结构式的化合物(Ⅰ)，
一种醋氨苯砜的药物组合物，包括醋氨苯砜、如上所述的化合物(Ⅰ)和药学上可以接受的载体。
如上所述的化合物(Ⅰ)的制备方法，包含以下操作步骤：(a)将商陆的干燥根粉碎，用75％乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤(a)中正丁醇萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用8％乙醇洗脱6个柱体积，再用70％乙醇洗脱8个柱体积，收集70％洗脱液，减压浓缩得70％乙醇洗脱浓缩物；(c)步骤(b)中70％乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；(d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为10:1、5:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；(e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70％的甲醇水溶液等度洗脱，收集8～12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物(Ⅰ)。
如上所述的化合物(Ⅰ)在制备治疗骨破坏性疾病的药物中的应用。
如上所述的醋氨苯砜的药物组合物在制备治疗骨破坏性疾病的药物中的应用。
本发明的优点：
本发明提供的醋氨苯砜的药物组合物中含有醋氨苯砜和一种从草本中分离得到的结构新颖的天然产物，醋氨苯砜和该天然产物单独作用时，对骨破坏性疾病的治疗效果一般；二者联合作用时，对骨破坏性疾病的治疗效果显著提高，可以开发成治疗骨破坏性疾病的药物。
具体实施方式
下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容。
实施例1：化合物(Ⅰ)分离制备及结构确证
试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
分离方法：(a)将商陆的干燥根(2kg)粉碎，用75％乙醇热回流提取(20L×3次)，合并提取液，浓缩至无醇味(4L)，依次用石油醚(4L×3次)、乙酸乙酯(4L×3次)和水饱和的正丁醇(4L×3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤(a)中正丁醇萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用8％乙醇洗脱6个柱体积，再用70％乙醇洗脱8个柱体积，收集70％洗脱液，减压浓缩得70％乙醇洗脱浓缩物；(c)步骤(b)中70％乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为50:1(8个柱体积)、25:1(8个柱体积)、15:1(8个柱体积)和5:1(10个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；(d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为10:1(8个柱体积)、5:1(10个柱体积)和2:1(5个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；(e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70％的甲醇水溶液等度洗脱，收集8～12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物(Ⅰ)(233mg，HPLC归一化纯度大于98％)。
结构确证：黄色无定形固体；HR-ESI-MS给出的准分子离子峰m/z397.1438[M+H]+，表明化合物分子式为C21H20N2O6，不饱和度为12。1H-NMR谱(CD3OD，500MHz)中，H-3(4.16，d，J＝10.5Hz)，H-5(6.89，s)，H-9(6.77，d，J＝2.3Hz)，H-11(6.71，dd，J＝8.6，2.3Hz)，H-12(7.14，d，J＝8.6Hz)，H-14a(2.92，d，J＝14.1Hz)，H-14b(1.75，ddd，J＝14.1，11.2，10.1Hz)，H-15(2.86，d，J＝11.2Hz)，H-17(7.66，s)，H-18(1.43，d，J＝5.5Hz)，H-19(4.47，dq，J＝10.3，5.5Hz)，H-20(1.97，m)，H-21a(4.08，d，J＝12.3Hz)，H-21b(3.14，m)；13C-NMR谱(CD3OD，125MHz)中，C-2(131.1，C)，C-3(62.5，CH)，C-5(156.2，CH)，C-6(99.2，C)，C-7(115.5，C)，C-8(128.2，C)，C-9(104.0，CH)，C-10(152.2，C)，C-11(112.8，CH)，C-12(112.3，CH)，C-13(131.7，C)，C-14(32.6，CH2)，C-15(31.5，CH)，C-16(109.8，C)，C-17(157.8，CH)，C-18(18.5，CH3)，C-19(72.1，CH)，C-20(38.5，CH)，C-21(53.4，CH2)，C-22(170.3，C)，C-23(174.7，C)。红外波谱表明该化合物含有α,β-不饱和羰基(1625cm-1)基团；紫外波谱表明该化合物含有吲哚(最大吸收222nm与274nm)基团。1H-NMR谱显示存在1,2,4-三取代苯基质子信号δH6.77(1H，d，J＝2.3Hz，H-9)，6.71(1H，dd，J＝8.6，2.3Hz，H-11)与7.14(1H，d，J＝8.6Hz，H-12)；一个烯烃质子信号δH6.89(1H，s，H-5)；一个连氧烯烃质子信号δH7.66(1H，s，H-17)；两组亚甲基质子信号δH2.92(1H，d，J＝14.1Hz，H-14a)与1.75(1H，ddd，J＝14.1，11.2，10.1Hz，H-14b)、4.08(1H，d，J＝12.3Hz，H-21a)与3.14(1H，m，H-21b)；三组次甲基质子信号δH4.16(1H，d，J＝10.5Hz，H-3)、2.86(1H，d，J＝11.2Hz，H-15)与1.97(1H，m，H-20)；一组连氧次甲基质子信号δH4.47(1H，dq，J＝10.3，5.5Hz，H-19)；一个甲基质子信号δH1.43(3H，d，J＝5.85Hz，H-18)。13C-NMR谱与DEPT谱显示有两组双键，一组连氧双键，两个羰基，一个甲基，两个亚甲基，四个次甲基。此外，在1H-1HCOSY谱中，证明存在明显的H-3/H2-14/H-15/H-20，H3-18/H-19/H-20/H2-21，以及H-11/H-12信号相关；通过2D-INADEQUAR分析δC120-180范围内的碳碳直接相关信号可知，C-6与C-23以及C-16与C-22存在相关信号，证明两个羧基分别与C-6位与C-16位相连。在这类生物碱骨架中，H-15总是处在构型的α位；另外，H-3、H-14b与H-15三者之间以及H-19与H-20两者之间的偶合常数J3，14b、J14b，15与J19，20为11.2、10.1与10.3Hz，表明H-3、H-14b与H-15、H-20为顺式构型。ROESY谱中，H-19与H-14b的相关信号暗示了H-19为β构型。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和ROESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如下所示，立体构型进一步通过ECD试验确定，理论值与实验值基本一致。该化合物的化学结构及碳原子标号如下：
实施例2：对骨破坏性疾病的的治疗作用
一、材料和仪器
SD雄性大鼠(4周龄)购于南京大学动物实验中心，清洁级，体重150g。醋氨苯砜购自中国药品生物制品检定所。化合物(Ⅰ)按照实施例1方法自制，HPLC归一化纯度大于98％。1α,25(OH)2D3购于英国普利茅斯生物研究实验室。α-MEM培养基购于美国GIBCOBRL。SolubleRANKL购于英国PeprotecScience。抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)试剂盒购于美国Sigma公司。葡聚糖凝胶购于上海如吉科技发展有限公司。标准胎牛血清购于山东银香伟业生物有限公司。注射用青霉素钠购于华北制药有限公司。注射用硫酸链霉素购于深圳华药南方制药有限公司。丙酮、甲醛溶液购于石家庄市有机化工厂。异氟烷购于鲁南贝特制药有限公司。二甲基亚砜购于天津市光复精细化工研究所。
BB5060/BB16二氧化碳培养箱上海(Heraeus公司)，VD-650型桌上式细胞培养超净操作台(苏州净化设备有限公司)，BFX5-320型低速离心机(中国上海泸南科学仪器联营厂)，XD-1019810倒置显微镜(江南公司)，CX-21光学显微镜(日本OLYMPUS)，微量加样器(法国GILSON)，2510型变频振荡仪(上海新波生物技术有限公司)，GF-300型电子天(JapanA&DCompany，limited)，725型超低温冰箱(FormaScientific.Inc)。
药液的配制及葡聚糖凝胶柱的制备：
1、α-MEM培养液的制备
(1)α-MEM粉一袋+超纯净水800ml，完全溶解；
(2)加碳酸氢钠3.02g待完全溶解后加盐酸测pH达7.2；
(3)再次加超纯净水至1000ml；
(4)加抗生素(青霉素及链霉素)；
(5)滤过灭菌(0.22微米微孔滤膜过滤，Pomp排气)；
(6)500ml灭菌瓶分装4℃储藏备用。
2、1α,25(OH)2D3储存液的分装
(1)取1α,25(OH)2D3原液50微升(50微升一支)，加入无水乙醇1150微升，使总量至1200微升(即24倍稀释)；
(2)以100ul/只分装于12支灭菌试管内，-30℃冰箱内储存备用；
(3)应用前再次稀释1000倍，使最终浓度为1×10-8M。
3、SolubleRANKL储存液分装
(1)取RANKL冻干粉一支(10微克)；
(2)0.1Mtris-HClbuffer50微升溶解；
(3)以5ul/只分装于10支灭菌冷冻管内，-30℃冰箱内储存备用；
(4)使用前取出一支，先用含10％FBSα-MEM培养液495微升稀释(即稀释100倍)；添加前再次稀释100倍，使最终浓度为20ng/ml。
4、TRAP(抗酒石酸酸性磷酸酶)固定液的制备
在染色之前，按产品说明书配制。首先取无菌20ml试管一支，按以下顺序依次加入试剂：丙酮6.5ml，枸橼酸2.5ml，甲醛0.8ml，充分混匀，计9.8ml，现配现用。
5、TRAP染色液的制备：同样是在染色之前配制，按产品说明制备。
6、葡聚糖凝胶柱的制备
(1)消毒后50ml注射器一个，除去内芯；
(2)注射筒与注射头交接处置消毒后的脱脂棉球一个；
(3)固定架固定针筒，针头处接关闭状的三通；
(4)将灭菌的葡聚糖凝胶混匀，抽取30ml注入针筒内，打开三通，缓慢过滤沉淀，待凝胶沉淀液面至15ml时为止；关闭三通，放入4℃恒温冰箱过夜；
(5)实验前1小时用含有15％胎牛血清的α-MEM培养液50ml缓慢注入凝胶柱内，打开三通，自然过滤洗涤凝胶柱后待用。
二、试验方法
1、全骨髓细胞培养
1.1全骨髓细胞提取
实验开始前30分钟将标准胎牛血清放入37℃水浴箱内解冻；取50mL无菌离心管一个，装入40mL不含胎牛血清的α-MEM培养液，以备冲洗全骨髓细胞用。
(1)选4周龄SD雄性大鼠1只，75％乙醇消毒后，采用异氟烷吸入麻醉；(2)待麻醉起效后，无菌条件下取大鼠两侧胫骨和股骨，剪掉骨垢端暴露骨髓腔；(3)用10mL注射器抽取不含血清的α-MEM培养液，换用25号针头后自骨髓腔内冲出骨髓细胞至50mL无菌离心管内；(4)将所提取的细胞悬液充分吹打，待没有团块后，将盛有细胞的离心管与平衡管一起放入离心机内离心，调整转速(2000转/分)，离心5分钟；离心过程中配制含有15％胎牛血清的α-MEM培养液50mL(7.5mL胎牛血清加入42.5mLα-MEM培养液中)备用；(5)离心结束后弃去上清液，加入含15％胎牛血清的α-MEM培养液20mL，充分吹打混匀，形成细胞悬液，此液简称为细胞原液。
1.2细胞数的计算(原液浓度及稀释倍数)
(1)取以上提取的细胞悬液25μL放入试管内，然后加入5％Acoh(醋酸)475μL，即形成20倍稀释的细胞悬液；将试管放在振荡器上，振荡20秒钟，目的是去除红细胞；(2)计算细胞数：取振荡后细胞悬液滴入细胞计数盘，勿超过边缘，盖玻片覆盖，倒置显微镜下计算细胞数，计数盘4个大格内所有细胞均计入。本实验计算细胞数为537个，根据公式(细胞数/4)×20×104cells/mL推算细胞原液的浓度，本实验计算如下(537/4)×20×104＝26.85×106cells/mL即本实验细胞原液浓度为26.85×106cells/mL，而我们需要的目的浓度是2×106cells/mL，所以细胞原液需要稀释。(3)稀释倍数计算如下：稀释倍数＝原液浓度/目的浓度；本实验稀释倍数＝26.85×106cells/mL/2×106cells/mL＝13.425，即原液需要稀释13.425倍才能达到需要的目的浓度。本实验需要2×106cells/mL的细胞悬液40mL，简称为目的量。(4)达到目的浓度所需原液的量，计算如下：达到目的浓度所需原液的量＝目的量/稀释倍数。本实验计算如下：达到目的浓度所需原液的量＝40mL/13.425≌2.98mL。即取26.85×106cells/mL的细胞原液2.98mL放入灭菌的50mL离心管内，然后加入37.02mL(40-2.98)含15％胎牛血清的α-MEM培养液即可配成2×106cells/mL的细胞悬液40mL，然后加入1α，25(OH)2D3储存液40μL，操作过程应避光，即1α，25(OH)2D3终浓度为1×10-8M；再加入4μLsolubleRANKL储存液，即solubleRANKL终浓度为20ng/mL；加液过程在超净工作台上操作，至此，所需2×106cells/mL的细胞悬液目的量配置完成。
1.3培养细胞、加药
配制醋氨苯砜储存液(1mg/mL)、化合物(Ⅰ)储存液(1mg/mL)、醋氨苯砜与化合物(Ⅰ)组合物储存液(0.5mg/mL醋氨苯砜+0.5μg/mL化合物(Ⅰ))。DMSO超声溶解。
(1)细胞接种：取4行6列24孔培养板一块，每孔加入2×106cells/mL的细胞悬液0.5mL(1×106cells)。(2)加药：取醋氨苯砜储存液一支于培养板的第2列分别加入2.5μL，每加一孔均需换一个吸头；取化合物(Ⅰ)储存液一支于培养板的第3列分别加入2.5μL，每加一孔均需换一个吸头；取醋氨苯砜与化合物(Ⅰ)组合物储存液一支于培养板的第4列分别加入2.5μL，每加一孔均需换一个吸头。至此，第一列为对照组，第二列为醋氨苯砜组，第三列为化合物(Ⅰ)组，第四列为醋氨苯砜与化合物(Ⅰ)组合物组。醋氨苯砜组和化合物(Ⅰ)组每孔药物浓度为5μg/mL；醋氨苯砜与化合物(Ⅰ)组合物组每孔含醋氨苯砜2.5μg/mL和化合物(Ⅰ)2.5μg/mL。加完后剩余药液放入4℃恒温冰箱保存。第一列不加药物，作为对照组。(3)培养细胞：加完药后，将培养板放入CO2培养箱内，在37℃、5％CO2及饱和湿度条件下，培养7天。培养至第4天时换培养液一次，配制含有15％胎牛血清的α-MEM培养液40ml(6mL胎牛血清加入34mLα-MEM培养液中)，内含10μL青霉素8μL链霉素(80万u青霉素，100万链霉素分别用2mL灭菌蒸馏水溶解)，加入4μLsolubleRANKL储存液，然后取1α,25(OH)2D3储存液40μL加入。从培养箱内取出培养板后，倒置显微镜下观察细胞生长状况，每孔吸出旧培养液300μL，加入新培养液400μL，每吸出一列更换一次吸头，每加一孔更换一次吸头。换液完成后，将培养板继续放入CO2培养箱内，在37℃、5％CO2及饱和湿度条件下，再培养3天。
2、破骨前驱细胞(POC)培养
2.1全骨髓细胞的提取：如同以上所述方法，制备全骨髓细胞悬液1.5mL。
2.2非附着骨髓细胞的提取
(1)把用培养液冲洗过的凝胶柱，固定在固定架上；(2)缓慢向凝胶柱内注入全骨髓细胞1.5mL，打开三通，缓慢过滤；待1.5mL全骨髓细胞渗入凝胶柱内后，再缓慢注入含15％胎牛血清的α-MEM培养液10mL。(3)收集含有非附着骨髓细胞的培养液共计12～15mL，此液称为非附着骨髓细胞原液。
2.3细胞数的计算(原液浓度及稀释倍数)及达到目的浓度
所需原液的量如同以上所述方法，计算细胞数，稀释倍数，达到目的浓度所需原液的量。本实验计算细胞数为337个，推算细胞原液的浓度为16.85×106cells/ml；稀释倍数为8.425，即细胞原液需稀释8.425倍才能达到需要的目的浓(2×106cells/ml)；达到目的浓度所需原液的量40ml/8.425≌4.75ml，即取4.75ml细胞原液放入灭菌的50ml离心管内，然后加入35.25ml(40-4.75)含15％胎牛血清的α-MEM培养液即可配成2×106cells/ml的目的细胞悬液40ml，然后加入1α,25(OH)2D3储存液40ul，操作过程应避光，即1α,25(OH)2D3终浓度为1×10-8M；加入solubleRANKL储存液4ul，即solubleRANKL终浓度为20ng/ml；加液过程均在超净工作台上操作，至此，未附着骨髓细胞悬液目的量配置完成。
2.4细胞培养及加药同1.3。
3、倒置显微镜下观察
3.1TRAP染色
(1)培养7天后，将培养板从培养箱内取出，弃去培养液；(2)加入固定液0.4mL/孔，固定1分钟；(3)弃去固定液，蒸馏水冲洗四次；(4)加入染色液3-4滴/孔，用锡纸包裹培养板；(5)在37℃、5％CO2及饱和湿度条件下孵育30分钟后，取出培养板，弃去染色液，蒸馏水冲洗四次，自然干燥。
3.2光镜观察
带染色液倒置显微镜下观察后，弃去染色液，蒸馏水洗4次，自然干燥，普通光镜下观察计算破骨细胞数。
4、统计学分析
使用SPSS19.0统计学软件进行分析。数据处理采用mean±SD表示。
三、结果及结论
在全骨髓细胞培养系中，与对照组比较，醋氨苯砜与化合物(Ⅰ)组合物组TRAP染色阳性细胞(3核以上)数显著减少，比醋氨苯砜组、化合物(Ⅰ)组减少更为显著，说明醋氨苯砜与化合物(Ⅰ)组合物对破骨细胞的形成有显著的抑制作用，且强于醋氨苯砜或化合物(Ⅰ)单独的抑制作用。
结果见表1。
在破骨前驱细胞培养系中，与对照组比较，醋氨苯砜与化合物(Ⅰ)组合物组TRAP染色阳性细胞(单核或2核)数显著减少，比醋氨苯砜组、化合物(Ⅰ)组减少更为显著，说明醋氨苯砜与化合物(Ⅰ)组合物对破骨前驱细胞的形成有显著的抑制作用，且强于醋氨苯砜或化合物(Ⅰ)单独的抑制作用。
结果见表2。
表1全骨髓细胞培养系中TRAP染色阳性细胞(3核以上)数
组别 数量/个
对照组 86
醋氨苯砜组 47
化合物(Ⅰ)组 35
醋氨苯砜与化合物(Ⅰ)组合物组 3
表2破骨前驱细胞培养系中TRAP染色阳性细胞(单核或2核)数
组别 数量/个
对照组 136
醋氨苯砜组 87
化合物(Ⅰ)组 49
醋氨苯砜与化合物(Ⅰ)组合物组 4
实验结果表明，醋氨苯砜与化合物(Ⅰ)组合物对破骨细胞的分化及增殖具有抑制作用，且强于醋氨苯砜或化合物(Ⅰ)单独的抑制作用。应用醋氨苯砜与化合物(Ⅰ)组合物治疗以破骨细胞活性增强为主的骨破坏性疾病有可能成为一种有前景的治疗方法。
上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。

Claims (5)

1.一种具有下述结构式的化合物(Ⅰ)，
2.一种醋氨苯砜的药物组合物，其特征在于：包括醋氨苯砜、如权利要求1所述的化合物(Ⅰ)和药学上可以接受的载体。
3.权利要求1所述的化合物(Ⅰ)的制备方法，其特征在于，包含以下操作步骤：(a)将商陆的干燥根粉碎，用75％乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤(a)中正丁醇萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用8％乙醇洗脱6个柱体积，再用70％乙醇洗脱8个柱体积，收集70％洗脱液，减压浓缩得70％乙醇洗脱浓缩物；(c)步骤(b)中70％乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；(d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为10:1、5:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；(e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70％的甲醇水溶液等度洗脱，收集8～12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物(Ⅰ)。
4.权利要求1所述的化合物(Ⅰ)在制备治疗骨破坏性疾病的药物中的应用。
5.权利要求2所述的醋氨苯砜的药物组合物在制备治疗骨破坏性疾病的药物中的应用。
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CN105646642A (zh) * 2016-03-23 2016-06-08 钱浩 一种巴氯芬的药物组合物及其在骨破坏性疾病中的应用
CN106083771A (zh) * 2016-06-13 2016-11-09 崔坤峰 卡比多巴的药物组合物及其治疗肝癌的医药用途

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