CN110267682A - Wnt抑制剂和抗PD-1抗体分子组合的给药方案 - Google Patents

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Abstract

本公开涉及药学领域，具体涉及用于治疗癌症的Wnt抑制剂和PD‑1抑制剂。具体地，本公开涉及用于治疗癌症的药物组合，所述组合包含Wnt抑制剂或其药学上可接受的盐以及PD‑1抑制剂或其药学上可接受的盐，涉及施用所述组合治疗癌症的方法，并且涉及所述组合用于制造治疗癌症的药物的用途。

Description

Wnt抑制剂和抗PD-1抗体分子组合的给药方案
技术领域
本公开涉及药学领域，具体涉及用于治疗癌症的Wnt抑制剂和抗PD-1抗体分子。具体来说，本公开涉及用于治疗癌症的药物组合，该药物组合包含Wnt抑制剂或其药学上可接受的盐以及抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐；涉及施用所述组合治疗癌症的方法；并且涉及所述组合用于制造治疗癌症的药物的用途。
背景技术
Wnt(Wingless)家族是一组高度保守的分泌蛋白，其在胚胎发生过程中调节细胞间的相互作用，并与癌发生、衰老和纤维化有关。Wnt基因在30年前被鉴定为鼠乳腺肿瘤中的致癌基因，并在许多研究中被证实是关键的致癌途径。Wnt基因家族编码一大类与Int1/Wnt1原癌基因和果蝇无翅基因(“Wg”，果蝇Wnt1同源物)相关的分泌蛋白(Cadigan等人Genes&Development[基因与发育]1997,11,3286)。
程序性死亡1(PD-1)蛋白是T细胞调节子的扩展的CD28/CTLA4家族的抑制性成员(Okazaki等人Curr.Opin.Immunol.[免疫学当前观点]2002,14,391779；Bennett等人J.Immunol.[免疫学杂志]2003,170,711)。CD28受体的配体包括一组相关的B7分子，也称为“B7超家族”(Coyle等人Nature Immunol.[自然免疫学]2001,2(3),203；Sharpe等人NatureRev.Immunol.[自然综述免疫学]2002,2,116；Collins等人Genome Biol.[基因组生物学]2005,6,223.1；Korman等人Adv.Immunol.[免疫学进展]2007,90,297)。B7超家族的几个成员是已知的，包括B7.1(CD80)、B7.2(CD86)、诱导型共刺激配体(ICOS-L)、程序性死亡-1配体(PD-L1；B7-H1)、程序性死亡-2配体(PD-L2；B7-DC)、B7-H3、B7-H4和B7-H6(Collins等人Genome Biol.[基因组生物学]2005,6,223.1)。CD28家族的其他成员包括CD28、CTLA-4、ICOS和BTLA。PD-1被认为作为单体存在，缺乏其他CD28家族成员特有的未配对半胱氨酸残基。PD-1在活化的B细胞、T细胞和单核细胞上表达。
PD-L1大量存在于多种人类癌症中(Dong等人Nat.Med.[自然医学]2002,8,787)。已知PD-1是负调节TCR信号的免疫抑制性蛋白(Ishida等人EMBO J.[欧洲分子生物学学会杂志]1992,11,3887；Blank等人Cancer Immunol.Immunother.[癌症免疫学与免疫治疗]2006,56(5),739)。PD-1和PD-L1之间的相互作用可以充当免疫检查点，该相互作用可以导致例如肿瘤浸润性淋巴细胞的减少、T细胞受体介导的增殖的减少和/或癌细胞的免疫逃避(Dong等人J.Mol.Med.[分子医学杂志]2003,81,281；Blank等人CancerImmunol.Immunother.[癌症免疫学与免疫治疗]2005,54,307；Konishi等人Clin.CancerRes.[临床癌症研究]2004,10,5094)。通过抑制PD-1与PD-L1或PD-L2的局部相互作用可以逆转免疫抑制；当PD-1与PD-L2的相互作用被阻断时，效果是也累加的(Iwai等人Proc.Nat.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊],2002,99:12293-7；Brown等人J.Immunol.[免疫学杂志]2003,170,1257)。
多方证据表明，Wnt途径信号传导在多种癌症中可能是重要的。经典Wnt途径中的组分(如APC和β-连环蛋白)的突变可能在某些恶性肿瘤的发病机制中起重要作用。最近对人转移性黑素瘤样本的分子分析揭示了Wnt/b-连环蛋白信号传导途径的激活与缺乏T细胞基因表达特征之间的关联性(Spranger等人Nature[自然]2015,523,231)。
发明内容
鉴于免疫检查点途径在癌症治疗中调节免疫应答的重要性，需要开发新的激活免疫系统或克服对免疫疗法的抗性的组合疗法。
本发明通过提供如本文所定义的药物组合解决了这种需要。
本公开的第一方面是用于治疗癌症的药物组合，其包含(i)具有式2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺的Wnt抑制剂[具有式(I)的化合物]，或其药学上可接受的盐，
和(ii)抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐，其中在每个周期的第1至15天每天施用(i)，持续最多4个周期，并且每个周期至少施用一次(ii)。
本公开的另一方面提供具有式2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺的Wnt抑制剂(i)或其药学上可接受的盐与抗PD-1抗体分子(ii)或其药学上可接受的盐的组合用于制造治疗癌症的药物的用途，其中(i)和(ii)如本文所定义地施用，优选其中在每个周期的第1至15天每天施用(i)，持续最多4个周期，并且每个周期至少施用一次(ii)。
本公开的又另一方面提供了用于治疗癌症的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的所述(i)和(ii)，其中在每个周期的第1至15天每天施用(i)，持续最多4个周期，并且每个周期至少施用一次(ii)。
附图说明
图1呈现了暴露15天后从肿瘤活检中分离出来的RNA样本的通过NanoString测量得到的基因表达。
图2显示了该分析中9对配对受试者的筛选访视和总结访视时的CD3表达。
图3显示了针对所述研究而选择的T细胞特征之一。
图4显示了治疗后Wnt途径的调节。
图5显示了与CD103+树突细胞募集相关的趋化因子特征。
图6显示了与CD8+T细胞募集相关的趋化因子特征。
图7A和7B：显示了各种类型的癌细胞的癌症基因组图谱(TCGA)中T细胞和Wnt特征之间的关联性。
图8：说明了临床研究设计。
具体实施方式
近来，分泌型糖蛋白R-spondins 1-4(RSPO1-4)已成为经典Wnt信号传导的重要激活剂。RSPO结合富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体(LGR4-6)以及跨膜E3泛素连接酶环指43/锌和环指3(RNF43/ZNRF3)，形成三元复合物(Chen等人Genes Dev[基因与发育]；2013,27,1345)。RNF43/ZNRF3通过促进Fz和LRP6的转换来拮抗Wnt信号传导(Hao等人Nature[自然]2012,485(7397),195-200；Koo等人Nature[自然]2012,488(7413),665)。RSPO的结合诱导RNF43/ZNRF3的内吞作用，从而增加膜结合的Fz和LRP6的水平，并增强Wnt配体介导的信号传导。为激活靶细胞内的信号传导，必须适当地分泌Wnt蛋白并将其运输穿过细胞外空间。Porcupine是膜结合的O-酰基转移酶(MBOAT)，其向Wnt蛋白添加棕榈酰基(Takada等人Dev.Cell[发育细胞]2006,11,791)。经典Wnt途径中的组分(如APC和β-连环蛋白)的突变在一些恶性肿瘤的发病机制中起重要作用，并且那些基因损害影响上游Wnt途径的调节。近来，Wnt途径信号传导的抑制与副作用和剂量限制性毒性等若干缺点有关。这些缺点限制了Wnt抑制剂的抗肿瘤功效。单独地，Wnt途径的激活与对免疫疗法的抗性相关，并且提供了一种机制，通过该机制，肿瘤可以逃避免疫检测并降低对检查点抑制剂的临床益处(Spranger等人Nature[自然]2015,523,231)。例如，测试了本公开的Wnt抑制剂，即2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺，并在皮肤和肿瘤的活检中分析了pLRP6和AXIN2qPCR的水平。在用2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺或其药学上可接受的盐治疗后的皮肤样本活检中，pLRP6和AXIN2的水平受到抑制，这表明对Wnt途径的抑制。不幸的是，在仅使用2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺或其药学上可接受的盐作为单一药剂的其他研究中，显示了增加的细胞毒性基因特征以及肿瘤功效的缺乏。此外，动物研究显示了大鼠研究中骨小梁的减少；大鼠和狗模型中胃肠(GI)道、骨和牙齿的毒性；以及影响大鼠骨髓和狗肾脏的继发效应。
已经发现，单独使用Wnt抑制剂(i)治疗患者会导致肿瘤中免疫特征的改变，用单一药剂Wnt抑制剂(i)治疗8-15天足以导致这些改变。这些发现可以得出以下结论：Wnt抑制剂(i)与抗PD-1抗体分子(ii)或其药学上可接受的盐的间歇给药可以使树突细胞和T细胞致敏，因此足以增强对PD-1抑制的作用，同时减轻长期Wnt施用的一些毒性，特别是对骨的毒性。
Wnt信号传导途径是成骨细胞发育和存活(参与骨形成)所必需的，并且其负调节破骨细胞(参与骨吸收)。与此相关，发现Wnt抑制剂会引起骨吸收和骨质变薄。在Wnt抑制剂的临床研究中，一些患者经历了骨折，这可能与Wnt途径抑制对成骨细胞和破骨细胞的作用有关。因此，施用Wnt抑制剂(i)，例如2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺，或其药学上可接受的盐，持续较短时期(如仅在最多4个治疗周期的第1至15天每天施用)，可以降低Wnt抑制剂引起骨临床相关变化的风险。此外，Wnt抑制剂的短间歇性给药足以导致激活的树突细胞特征的上调。这是相关的，因为这种树突细胞亚型对募集并激活T细胞以获得抗肿瘤应答来说是重要的。在癌症治疗中抑制Wnt信号传导会通过释放树突细胞抑制和T细胞激活来改善PD-1抑制的应答速率。总之，与单独使用Wnt抑制剂(i)相比，Wnt抑制剂(i)和抗PD-1抗体分子的组合(其中仅在治疗周期开始时(例如第8至15天)施用Wnt抑制剂)能显示出这两种化合物的相互协同作用，并提供更好的疗效和大大降低的安全性。
根据本公开，Wnt抑制剂是靶向、降低或抑制细胞中Wnt信号传导活性的化合物。例如，Wnt抑制剂还可以是porcupine抑制剂。Wnt抑制剂(i)是WO 2010/101849中公开的化合物。与抗PD-1抗体分子或其药用盐组合的Wnt抑制剂是具有式(I)的2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺，或其药学上可接受的盐，
如WO 2010/101849中所公开的(化合物86，实例10)。
因此，本公开提供了用于治疗癌症的药物组合，其包含(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺，或其药学上可接受的盐，和(ii)抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐，其中在每个周期的第1至15天每天施用具有式(i)的化合物，即2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺，或其药学上可接受的盐，持续最多4个周期，并且每个周期至少施用一次如本文所述的抗PD-1抗体分子(ii)。Wnt抑制剂可以施用4个周期。
在本公开中，术语“药物组合”是指非固定组合。术语“非固定组合”意指活性成分(例如具有式(i)的化合物，即2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺，或其药学上可接受的盐，以及抗PD-1抗体分子，或药学上可接受的盐形式)以分开的实体被同时或无特定时间限制顺序地施用于患者，其中这类施用在患者体内提供治疗有效水平的所述两种化合物。
术语“组合”或“与……组合”并不旨在暗示疗法或治疗剂必需同时施用和/或将这些疗法或治疗剂配制用于一起递送，尽管这些递送方法也在本文所述的范围内。组合中的治疗剂可以与一种或多种其他另外的疗法或治疗剂同时、在其之前或之后施用。治疗剂或治疗方案能以任何顺序施用。一般而言，每种药剂将以针对该药剂所确定的剂量和/或时间排程施用。还应理解，该组合中使用的另外的治疗剂可以一起施用或以不同成分分开施用。一般而言，预期组合中使用的另外的治疗剂以不超过它们单独使用时的水平使用。在一些实施例中，组合中使用的水平将低于单独使用的水平。
可以与本公开的Wnt抑制剂组合使用的抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐是如本文所公开的任何抗PD-1抗体。例如，抗PD-1抗体分子可包含至少一个抗原结合区，例如可变区或其抗原结合片段，所述抗原结合区来自本文所述抗体，例如选自BAP049-克隆-B或BAP049-克隆-E中的任一个的抗体；或者如表1所述，或由表1中的核苷酸序列所编码；或者与前述序列中任一项基本上相同(例如具有至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高同一性)的序列。抗PD1抗体分子优选地选自纳武单抗(Opdivo)、派姆单抗(Keytruda)、匹地利珠单抗(pidilizumab)、PDR-001、或其药用盐。最优选地，抗PD-1抗体分子是PDR-001或其药用盐。命名为PDR-001的抗PD-1抗体分子描述于PCT/CN2016/099494中。更具体地，PDR-001抑制剂或其药学上可接受的盐包括重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，所述重链可变区包含如表1所述的BAP049-克隆-E的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列，所述轻链可变区包含BAP049-克隆-E的LCDR1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列。
本公开的抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐包括例如至少一个、两个、三个或四个可变区，所述可变区来自本文所述抗体，例如选自BAP049-克隆-B或BAP049-克隆-E中的任一个的抗体；或者如表1所述，或由表1中的核苷酸序列所编码；或者与前述序列中任一项基本上相同(例如，具有至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高同一性)的序列。
本公开的抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐包括例如至少一个或两个重链可变区，所述重链可变区来自本文所述抗体，例如选自BAP049-克隆-B或BAP049-克隆-E中任一个的抗体；或者如表1所述，或由表1中的核苷酸序列所编码；或者与前述序列中任一项基本上相同(例如，具有至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高同一性)的序列。
本公开的抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐包括例如至少一个或两个轻链可变区，所述轻链可变区来自本文所述抗体，例如选自BAP049-克隆-B或BAP049-克隆-E中任一个的抗体；或者如表1所述，或由表1中的核苷酸序列所编码；或者与前述序列中任一项基本上相同(例如，具有至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高同一性)的序列。
本公开的抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐包括例如IgG4(例如人IgG4)的重链恒定区。人IgG4包括根据EU编号的位置228处的取代(例如，Ser被Pro取代)。所述抗PD-1抗体分子包括IgG1(例如人IgG1)的重链恒定区。人IgG1包括根据EU编号的位置297处的取代(例如，Asn被Ala取代)。人IgG1还可包括根据EU编号的位置265处的取代、根据EU编号的位置329处的取代或两者(例如，位置265处的Asp被Ala取代和/或位置329处的Pro被Ala取代)。人IgG1还包括根据EU编号的位置234处的取代、根据EU编号的位置235处的取代或两者(例如，位置234处的Leu被Ala取代和/或位置235处的Leu被Ala取代)。所述重链恒定区包含表3中列出的氨基序列，或与其基本上相同(例如具有至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高同一性)的序列。
根据本公开的抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐包括例如κ轻链恒定区，例如人κ轻链恒定区。所述轻链恒定区包含表3中列出的氨基序列，或与其基本上相同(例如具有至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高同一性)的序列。
根据本公开的抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐还包括例如IgG4(如人IgG4)的重链恒定区，和κ轻链恒定区(例如人κ轻链恒定区)，例如包含表3中列出的氨基序列或与其基本上相同(例如具有至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高同一性)的序列的重链和轻链恒定区。人IgG4包括根据EU编号的位置228处的取代(例如，Ser被Pro取代)。所述抗PD-1抗体分子包括IgG1(例如人IgG1)的重链恒定区，和κ轻链恒定区(例如人κ轻链恒定区)，例如包含表3中列出的氨基序列或与其基本上相同(例如具有至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高同一性)的序列的重链和轻链恒定区。人IgG1还可包括根据EU编号的位置297处的取代(例如Asn被Ala取代)。人IgG1包括根据EU编号的位置265处的取代、根据EU编号的位置329处的取代或两者(例如，位置265处的Asp被Ala取代和/或位置329处的Pro被Ala取代)。人IgG1包括根据EU编号的位置234处的取代、根据EU编号的位置235处的取代或两者(例如，位置234处的Leu被Ala取代和/或位置235处的Leu被Ala取代)。
本公开的抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐还包括例如重链可变结构域和恒定区、轻链可变结构域和恒定区、或两者，所述重链可变结构域和恒定区以及轻链可变结构域和恒定区包含BAP049-克隆-B或BAP049-克隆-E的氨基酸序列；或者如表1所述，或由表1中的核苷酸序列所编码；或者与前述序列中任一项基本上相同(例如具有至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高同一性)的序列。所述抗PD-1抗体分子任选地包含来自如表4中所示的重链、轻链或两者的前导序列；或与其基本上相同的序列。
根据本公开的抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐包括至少一个、两个或三个互补决定区(CDR)，所述CDR来自本文所述抗体的重链可变区，例如选自BAP049-克隆-B或BAP049-克隆-E中任一个的抗体；或者如表1所述，或由表1中的核苷酸序列所编码；或者与前述序列中任一项基本上相同(例如具有至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高同一性)的序列。
根据本公开的抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐包括例如来自重链可变区的至少一个、两个或三个CDR(或总体上所有CDR)，所述重链可变区包含表1所示的氨基酸序列或由表1所示核苷酸序列编码的氨基酸序列。相对于表1中所示的氨基酸序列或由表1中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列，所述CDR中的一个或多个(或总体上所有CDR)具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个变化，例如氨基酸取代或缺失。
根据本公开的抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐包括例如至少一个、两个或三个CDR，所述CDR来自本文所述抗体(例如选自BAP049-克隆-B或BAP049-克隆-E中任一个的抗体)的轻链可变区；或者如表1所述，或由表1中的核苷酸序列所编码；或者与前述序列中任一项基本上相同(例如具有至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高同一性)的序列。
所述抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐包括例如来自重链可变区的至少一个、两个或三个CDR(或总体上所有CDR)，所述重链可变区包含表1所示的氨基酸序列或由表1所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。相对于表1中所示的氨基酸序列或由表1中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列，所述CDR中的一个或多个(或总体上所有CDR)具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个变化，例如氨基酸取代或缺失。
所述抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐包括例如至少一个、两个或三个CDR，所述CDR来自本文所述抗体(例如选自BAP049-克隆-B或BAP049-克隆-E中任一个的抗体)的轻链可变区；或者如表1所述，或由表1中的核苷酸序列所编码；或者与前述序列中任一项基本上相同(例如具有至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高同一性)的序列。
所述抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐包括例如来自轻链可变区的至少一个、两个或三个CDR(或总体上所有CDR)，所述轻链可变区包含表1所示的氨基酸序列或由表1所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。相对于表1中所示的氨基酸序列或由表1中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列，所述CDR中的一个或多个(或总体上所有CDR)具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个变化，例如氨基酸取代或缺失。在某些实施例中，所述抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐包括轻链CDR中的取代，例如轻链的CDR1、CDR2和/或CDR3中的一个或多个取代。所述抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐包括在轻链CDR3中的轻链可变区位置102处的取代，例如在根据表1的轻链可变区的位置102处，半胱氨酸被酪氨酸取代，或半胱氨酸被丝氨酸残基取代(例如，针对经修饰的序列的SEQ ID NO:54或70)。
根据本公开的抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐包括例如来自重链和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR(或总体上所有CDR)，所述重链和轻链可变区包含表1所示的氨基酸序列或由表1所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。在一个实施例中，相对于表1中所示的氨基酸序列或由表1中所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列，CDR中的一个或多个(或总体上全部CDR)具有一个、两个、三个、四个、五个、六个或更多个变化，例如氨基酸取代或缺失。
本公开的抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐包括例如所有六个CDR，所述CDR来自本文所述抗体，例如选自BAP049-克隆-B或BAP049-克隆-E中任一个的抗体；或者如表1所述，或由表1中的核苷酸序列所编码；或者密切相关的CDR，例如相同或具有至少一个氨基酸改变，但不多于两个、三个或四个改变(例如取代、缺失或插入，例如保守取代)的CDR。所述抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐还可包括本文所述的任何CDR。所述抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐包括轻链CDR中的取代，例如轻链CDR1、CDR2和/或CDR3中的一个或多个取代。根据本公开的抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐包括在轻链CDR3中的轻链可变区位置102处的取代，例如在根据表1的轻链可变区的位置102处，半胱氨酸被酪氨酸取代，或半胱氨酸被丝氨酸残基取代。
本公开的抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐包括至少一个、两个或三个根据Kabat等人的CDR(例如，如表1中列出的至少一个、两个或三个根据Kabat定义的CDR)，所述CDR来自本文所述抗体(例如选自BAP049-克隆-B或BAP049-克隆-E中任一个的抗体)的重链可变区；或者如表1所述，或由表1中的核苷酸序列所编码；或者与前述序列中任一项基本上相同(例如具有至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高同一性)的序列；或者相对于表1所示的一个、两个或三个根据Kabat等人的CDR，具有至少一个氨基酸改变但不超过两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如保守取代)的CDR。
本发明的抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐包括例如至少一个、两个或三个根据Kabat等人的CDR(例如，如表1中列出的至少一个、两个或三个根据Kabat定义的CDR)，所述CDR来自本文所述抗体(例如选自BAP049-克隆-B或BAP049-克隆-E中任一个的抗体)的轻链可变区；或者如表1所述，或由表1中的核苷酸序列所编码；或者与前述序列中任一项基本上相同(例如具有至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高同一性)的序列；或者相对于表1所示的一个、两个或三个根据Kabat等人的CDR，具有至少一个氨基酸改变但不超过两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如保守取代)的CDR。
根据本公开的抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐包括例如至少一个、两个、三个、四个、五个或六个根据Kabat等人的CDR(例如，如表1中列出的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个根据Kabat定义的CDR)，所述CDR来自本文所述抗体(例如选自BAP049-克隆-B或BAP049-克隆-E中任一个的抗体)的重链和轻链可变区；或者如表1所述，或由表1中的核苷酸序列所编码；或者与前述序列中任一项基本上相同(例如具有至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高同一性)的序列；或者相对于表1所示的一个、两个、三个、四个、五个或六个根据Kabat等人的CDR，具有至少一个氨基酸改变但不超过两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如保守取代)的CDR。
本公开的抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐包括所有六个根据Kabat等人的CDR(例如，如表1中列出的所有六个根据Kabat定义的CDR)，所述CDR来自本文所述抗体(例如选自BAP049-克隆-B或BAP049-克隆-E中任一个的抗体)的重链和轻链可变区；或者如表1所述，或由表1中的核苷酸序列所编码；或者与前述序列中任一项基本上相同(例如具有至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高同一性)的序列；或者相对于表1所示的全部六个根据Kabat等人的CDR，具有至少一个氨基酸改变但不多于两个、三个或四个改变(例如取代、缺失或插入，例如保守取代)的CDR。根据本公开的抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐还可包括本文所述的任何CDR。
根据本公开的抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐包括例如至少一个、两个或三个Chothia高变环(例如，如表1列出的至少一个、两个或三个根据Chothia定义的高变环)，所述高变环来自本文所述抗体(例如选自BAP049-克隆-B或BAP049-克隆-E中的任一个的抗体)的重链可变区；或者如表1所述，或由表1中的核苷酸序列所编码；或至少来自接触PD-1的那些高变环的氨基酸；或者相对于表1所示的一个、两个或三个根据Chothia等人的高变环，具有至少一个氨基酸改变但不多于两个、三个或四个改变(例如取代、缺失或插入，例如保守取代)的高变环。
根据本公开的抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐包括例如至少一个、两个或三个乔西亚高变环(例如，如表1列出的至少一个、两个或三个根据Chothia定义的高变环)，所述高变环来自本文所述抗体(例如选自BAP049-克隆-B或BAP049-克隆-E中的任一个的抗体)的轻链可变区；或者如表1所述，或由表1中的核苷酸序列所编码；或至少来自接触PD-1的那些高变环的氨基酸；或者相对于表1所示的一个、两个或三个根据Chothia等人的高变环，具有至少一个氨基酸改变但不多于两个、三个或四个改变(例如取代、缺失或插入，例如保守取代)的高变环。
根据本公开的抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐包括例如至少一个、两个、三个、四个、五个或六个高变环(例如，如表1列出的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个根据Chothia定义的高变环)，所述高变环来自本文所述抗体(例如选自BAP049-克隆-B或BAP049-克隆-E中的任一个的抗体)的重链和轻链可变区；或者如表1所述，或由表1中的核苷酸序列所编码；或至少来自接触PD-1的那些高变环的氨基酸；或者相对于表1所示的一个、两个、三个、四个、五个或六个根据Chothia等人的高变环，具有至少一个氨基酸改变但不多于两个、三个或四个改变(例如取代、缺失或插入，例如保守取代)的高变环。
根据本公开的抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐包括例如本文所述抗体(例如，选自BAP049-克隆-B或BAP049-克隆-E中任一个的抗体)的所有六个高变环(例如，表1所示的所有六个根据Chothia定义的高变环)，或者密切相关的高变环，例如相同的或具有至少一个氨基酸改变但不超过两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如保守取代)的高变环；或者相对于表1所示的所有六个根据Chothia等人的高变环，具有至少一个氨基酸改变但不多于两个、三个或四个改变(例如取代、缺失或插入，例如保守取代)的高变环。根据本公开的抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐还可包括本文所述的任何高变环。
根据本公开的抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐包括例如至少一个、两个或三个高变环，所述高变环具有与本文所述抗体(例如，选自BAP049-克隆-B或BAP049-克隆-E中任一个的抗体)的相应高变环相同的规范结构(例如，与本文所述抗体的重链和/或轻链可变结构域的至少环1和/或环2相同的规范结构)。(参见，例如Chothia等人J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]1992,227,799；Tomlinson等人J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]1992,227:776-798中关于高变环规范结构的描述)。这些结构可以通过查阅这些参考文献中描述的表格来确定。
根据本公开的抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐还可包括例如本文表1中所述的根据Kabat等人的和Chothia等人所定义的CDR或高变环的组合。
根据本公开的抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐包括例如至少一个、两个或三个根据Kabat和Chothia定义的CDR或高变环(例如，如表1所示的至少一个、两个或三个根据Kabat和Chothia定义的CDR或高变环)，所述CDR或高变环来自本文所述抗体(例如，选自BAP049-克隆-B或BAP049-克隆-E中任一个的抗体)的重链可变区；或者由表1中的核苷酸序列所编码；或者与前述序列中任一项基本上相同(例如具有至少80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％、99％或更高同一性)的序列；或者相对于表1所示的一个、两个或三个根据Kabat和/或Chothia的CDR或高变环，具有至少一个氨基酸改变但不多于两个、三个或四个改变(例如取代、缺失或插入，例如保守取代)的CDR或高变环。
例如，根据本公开的抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐可以包括根据Kabat等人的VH CDR1、或根据Chothia等人的VH高变环1、或它们的组合，例如如表1中所示。VHCDR1的Kabat和Chothia的CDR组合包含氨基酸序列GYTFTTYWMH(SEQ ID NO:224)，或与其基本相同的氨基酸序列(例如，具有至少一个氨基酸改变，但不超过两个、三个或四个改变(例如，取代、缺失或插入，例如保守取代))。所述抗PD-1抗体分子可以进一步包含例如根据Kabat等人的VH CDR 2-3和根据Kabat等人的VL CDR 1-3，例如如表1中所示。因此，框架区(FW)基于根据Kabat等人定义的CDR和根据Chothia等人定义的高变环的组合来定义。例如，所述抗PD-1抗体分子可包括基于根据Chothia等人的VH高变环1定义的VH FW1和基于根据Kabat等人的VH CDR 1-2定义的VH FW2，例如如表1中所示。所述抗PD-1抗体分子可进一步包含例如基于根据Kabat等人的VH CDR 2-3定义的VH FW 3-4和基于根据Kabat等人的VLCDR 1-3定义的VL FW 1-4。
根据本公开的抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐包括至少一个、两个或三个根据Kabat和Chothia定义的CDR(例如，如表1所示的至少一个、两个或三个根据Kabat和Chothia定义的CDR)，所述CDR来自本文所述抗体(例如，选自BAP049-克隆-B或BAP049-克隆-E中任一个的抗体)的轻链可变区。
根据本公开的抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐包括：
(a)重链可变区(VH)，所述重链可变区包含SEQ ID NO:4的VHCDR1氨基酸序列、SEQID NO:5的VHCDR2氨基酸序列、和SEQID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；以及轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:13的VLCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:14的VLCDR2氨基酸序列、和SEQ ID NO:33的VLCDR3氨基酸序列；
(b)VH，所述VH包含选自SEQ ID NO:1的VHCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:2的VHCDR2氨基酸序列、和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；以及VL，所述VL包含SEQ ID NO:10的VLCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:11的VLCDR2氨基酸序列、和SEQ ID NO:32的VLCDR3氨基酸序列；
(c)VH，所述VH包含SEQ ID NO:224的VHCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:5的VHCDR2氨基酸序列、和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；以及VL，所述VL包含SEQ ID NO:13的VLCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:14的VLCDR2氨基酸序列、和SEQ ID NO:33的VLCDR3氨基酸序列；或
(d)VH，所述VH包含SEQ ID NO:224的VHCDR1氨基酸序列；SEQ ID NO:2的VHCDR2氨基酸序列、和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；以及VL，所述VL包含SEQ ID NO:10的VLCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:11的VLCDR2氨基酸序列、和SEQ ID NO:32的VLCDR3氨基酸序列。
根据本公开的抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐包含重链可变区(VH)，所述重链可变区包含选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4、或SEQ ID NO:224的VHCDR1氨基酸序列；SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:5的VHCDR2氨基酸序列；和SEQ ID NO:3的VHCDR3氨基酸序列；以及轻链可变区(VL)，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:13的VLCDR1氨基酸序列、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:14的VLCDR2氨基酸序列、和SEQ ID NO:32或SEQ ID NO:33的VLCDR3氨基酸序列。
根据本公开的抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐可包含例如含有SEQ IDNO:38的氨基酸序列的重链可变结构域和含有SEQ ID NO:70的氨基酸序列的轻链可变结构域。
根据本公开的抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐可包含例如含有SEQ IDNO:91的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:72的氨基酸序列的轻链。
本公开的抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，所述重链可变区包含如表1中所述的BAP049-克隆-B或BAP049-克隆-E的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列，所述轻链可变区包含如表1中所述的BAP049-克隆-B或BAP049-克隆-E的LCDR1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列。
本公开的抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，所述重链可变区包含如表1中所述的BAP049-克隆-E的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列，所述轻链可变区包含如表1中所述的BAP049-克隆-E的LCDR1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列。
应当理解，本公开的抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐可具有另外的保守或非必需氨基酸取代，这些取代对其功能没有实质性影响。
术语“抗体分子”是指包含至少一种免疫球蛋白可变结构域序列的蛋白质，例如免疫球蛋白链或其片段。术语“抗体分子”包括例如单克隆抗体(包括具有免疫球蛋白Fc区的全长抗体)。抗体分子包含全长抗体、或全长免疫球蛋白链、或者全长抗体或全长免疫球蛋白链的抗原结合片段或功能片段。抗体分子也可以是多特异性抗体分子，例如其包含多个免疫球蛋白可变结构域序列，其中所述多个中的第一免疫球蛋白可变结构域序列对第一表位具有结合特异性，并且所述多个中的第二免疫球蛋白可变结构域序列对第二表位具有结合特异性。
术语“药学上可接受的盐”可以例如作为酸加成盐形成，优选与有机酸或无机酸形成。合适的无机酸是例如氢卤酸，如盐酸。合适的有机酸是例如羧酸或磺酸，例如富马酸或甲磺酸。出于分离或纯化的目的，还可能使用药学上不可接受的盐，例如苦味酸盐或高氯酸盐。对于治疗用途，仅使用药学上可接受的盐或游离化合物(适用于药物制剂形式的情况下)，并且因此这些是优选的。在适当和有利的情况下，对本文游离化合物的任何提及应理解为还指相应的盐。如本文所述，所述抑制剂的盐优选是药学上可接受的盐；形成药学上可接受的盐的合适的反荷离子是本领域已知的。
术语“药学上可接受的”是指那些适合用于与人类和动物组织接触使用而没有过多的毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，与合理的益处/风险比相称的化合物、材料、组合物和/或剂型。
术语“抑制”或“抑制剂”包括给定分子(例如免疫检查点抑制剂，如抗PD-1抗体分子)的某些参数(例如活性)的降低。例如，该术语包括抑制至少5％、10％、20％、30％、40％或更多的活性(例如PD-1或PD-L1活性)。因此，抑制不必是100％。
术语“癌症”是指以快速和不受控制的生长的异常细胞增殖为特征的疾病。癌细胞可以局部地或通过血流和淋巴系统扩散到身体的其他部位。各种癌症的实例包括但不限于白血病、前列腺癌、肾癌、肝癌、脑癌、淋巴瘤、卵巢癌、肺癌、宫颈癌、皮肤癌、乳腺癌、头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)、胰腺癌、胃肠癌、结肠直肠癌、三阴性乳腺癌(TNBC)、肺鳞状细胞癌、食道鳞状细胞癌、宫颈鳞状细胞癌或黑素瘤。根据本公开，特别适合用上述组合治疗的疾病病症是三阴性乳腺癌(TNBC)、胰腺癌、肺鳞状细胞癌、食道鳞状细胞癌、宫颈鳞状细胞癌或黑色素瘤。
术语“肿瘤”和“癌症”在本文中可互换使用，例如，这两个术语包括实体瘤和液体瘤，例如弥漫性或循环性肿瘤。在一个实施例中，术语“癌症”或“肿瘤”包括恶性癌症和肿瘤，以及晚期癌症和肿瘤。
术语“治疗”包括例如如本文所述的，向需要这种治疗的温血动物(特别是人类)治疗性施用Wnt抑制剂或其药学上可接受的盐与抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐的组合，以达到治愈疾病或对疾病消退或延缓疾病进展有效果的目的。任何疾病或障碍的术语“治疗(treat/treating/treatment)”是指减轻所述疾病或障碍(即，减缓或阻止或减少所述疾病或其至少一个临床症状的发展)，是指防止或延迟所述疾病或障碍的发作或发展或进展。
Wnt抑制剂，(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺，或其药学上可接受的盐，可在每个周期的第1至15天或每个周期的第1至8天每天施用。Wnt抑制剂，(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺可施用最多4个周期。Wnt抑制剂(i)可以在4个周期期间施用。其也可仅在第一个周期中施用。优选地，Wnt抑制剂(i)在每个周期的第1至15天期间施用，持续最多4个周期。最优选地，Wnt抑制剂(i)在每个周期的第1至8天每天施用，持续最多4个周期。本发明还提供了(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺或其药学上可接受的盐仅在第一个周期中施用。本发明还提供了(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺或其药学上可接受的盐仅在四个周期期间施用。本文所述的Wnt抑制剂可以每日施用一次或两次，两次连续给药之间间隔12小时。组合配偶体(ii)抗PD-1抗体分子可以继续施用更多周期，只要其具有临床意义。在一个实施例中，所述(ii)抗PD-1抗体分子施用最多4个周期或施用4个周期。
如本文所述，组合配偶体在周期的同一天或不同天施用。术语“周期”是指以常规时间表重复的以天或月表示的特定时间段。如本文所述的周期更优选以天数表示。例如，所述周期可以是但不限于28天、30天、60天、90天。最优选地，本公开中提及的“周期”长28天。这样的周期可以重复数次(例如2次、3次、4次、5次等)，每个周期长度相同并可以重复，只要其具有临床意义，即肿瘤的生长至少在被减少、被控制，或肿瘤缩小，并且不良事件是可以忍受的。当组合配偶体之一(例如Wnt抑制剂)最多施用4个周期时，另一个组合配偶体可继续施用更多周期。通过施用本公开的(i)的治疗最优选最多重复4个周期，特别是4个周期。尽管Wnt抑制剂最多可以施用4个周期，但是本文考虑，在一段时间后-例如，当化合物已经从体内完全排出并且已经施用多达4个周期的Wnt抑制剂不再带来任何积极作用时(无论单独还是通过由抗PD-1抗体分子引起的效果增强)，可再次施用Wnt抑制剂，持续另一轮的最多4个周期。最多4个周期的第一轮(包括仅1个周期或仅4个周期)和最多4个周期的第二轮或以后轮之间的时间段必须足够长，以防止抑制Wnt途径带来的任何累积效应，例如骨密度的降低。
Wnt抑制剂(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺或其药学上可接受的盐可以口服或静脉内施用，最优选口服，每日剂量为2.5mg/天、5mg/天、7.5mg/天、10mg/天、20mg/天、40mg/天、80mg/天、120mg/天、或180mg/天。优选地，每日剂量为2.5mg/天、5mg/天或10mg/天。最优选地，每日剂量为10mg/天。
根据本公开，(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺或其药学上可接受的盐可以例如在药物组合物中与惰性稀释剂或载体一起口服施用。
根据本公开，抗PD-1抗体分子(ii)或其药学上可接受的盐(选自纳武单抗(Opdivo)、派姆单抗(Keytruda)、匹地利珠单抗、PDR-001、或其药用盐)可以用于治疗癌症，并且在一个周期中每两周或每四周施用一次。最优选地，如本文所述的抗PD-1抗体分子PDR-001(ii)或其药学上可接受的盐用于治疗癌症。最优选地，PDR-001(ii)每四周施用一次。PDR-001以300-400mg/天的剂量通过注射(例如皮下或静脉内)施用。优选地，抗PD-1抗体分子PDR-001或其药学上可接受的盐以300至400mg/天的单次剂量静脉内施用。最优选地，抗PD-1抗体分子PDR-001(ii)或其药学上可接受的盐以400mg/天的单次剂量施用。最优选地，抗PD-1抗体分子PDR-001或其药学上可接受的盐以每四周400mg/天的剂量施用。剂量能以单次推注或以若干分次剂量施用。
具体地，给药方案可以按以下变化：2.5mg/天、5mg/天或10mg/天的具有式(i)的Wnt抑制剂2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺，或其药学上可接受的盐(仅在第一个周期或仅在4个周期或最多4个周期中的每个周期的第1-15天或第1-8天)，以及每两周或四周300mg/天至400mg/天的抗PD-1抗体分子(ii)，或其药学上可接受的盐。例如，根据本公开，在第1-8天或第1-15天施用2.5mg/天的(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺或其药学上可接受的盐，并且每4周以400mg/天的剂量施用一次抗PD-1抗体分子(ii)或其药学上可接受的盐，持续4个周期或最多4个周期。根据本公开的另一个实例由以下组成：在第1-8天或第1-15天施用5mg/天的(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺或其药学上可接受的盐，并且每4周以400mg/天的剂量施用一次抗PD-1抗体分子(ii)或其药学上可接受的盐，持续4个周期或最多4个周期。根据本公开的又另一个实例提供了以下：在第1-8天或第1-15天施用10mg/天的(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺或其药学上可接受的盐，并且每4周以400mg/天的剂量施用一次抗PD-1抗体分子(ii)或其药学上可接受的盐，持续4个周期或最多4个周期。
根据本公开的另一个实例提供了以下：在仅第1个周期期间施用2.5mg/天的(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺或其药学上可接受的盐，并且每4周以400mg/天的剂量施用一次抗PD-1抗体分子(ii)或其药学上可接受的盐。根据本公开的另一个实例提供了以下：在仅第1个周期期间施用5mg/天的(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺或其药学上可接受的盐，并且每4周以400mg/天的剂量施用一次抗PD-1抗体分子(ii)或其药学上可接受的盐。根据本公开的又另一个实例提供了以下：在仅第1个周期期间施用10mg/天的(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺或其药学上可接受的盐，并且每4周以400mg/天的剂量施用一次抗PD-1抗体分子(ii)或其药学上可接受的盐。
抗体分子可以通过本领域已知的多种方法施用，但是对于许多治疗性应用，优选的施用途径/方式是静脉内注射或输注。例如，抗体分子能以超过20mg/min的速率(例如20-40mg/min，并且典型地大于或等于40mg/min)通过静脉内输注而施用，以达到约300至400mg/天的剂量。对于静脉内注射或输注，治疗组合物通常在制造和贮藏条件下应该是无菌和稳定的。该组合物可以被配制成溶液、微乳剂、分散体、脂质体或其他适合于高抗体浓度的有序结构。可以通过以下方式来制备无菌可注射溶液：将活性化合物(即抗体或抗体部分)以所需的量与所需的一种成分或成分组合掺入合适的溶剂中，然后进行过滤灭菌。总体上，通过将活性化合物掺入无菌媒介物来制备分散体，所述无菌媒介物含有基础分散介质以及所需其他成分。就用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末而言，优选制备方法是真空干燥和冷冻干燥，这些方法产生活性成分的粉末以及来自其以前的无菌过滤溶液的任何其他所需成分。可以例如通过使用涂层(如卵磷脂)、通过在分散液的情况下维持所需粒度以及通过使用表面活性剂来维持适当的溶液流动性。可以通过在组合物中包含延迟吸收的药剂(例如单硬脂酸盐和明胶)来实现可注射组合物的吸收延长。
应当理解，施用途经和/或方式将随所希望的结果而变化。例如，活性化合物可与将保护该化合物避免快速释放的载体一起制备，如控释配制品，包括植入物、透皮贴剂和微胶囊化递送系统。可以使用可生物降解、生物相容的聚合物，如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐类、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯类、以及聚乳酸。用于制备此类配制品的许多方法是已获专利或本领域技术人员公知的(例如，Sustained and Controlled Release Drug DeliverySystems[持续和控制释放药物递送系统],J.R.Robinson编辑,Marcel Dekker,Inc.[马塞尔·德克尔公司],纽约,1978)。
同样，(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺或其药学上可接受的盐与抗PD-1抗体分子(ii)或其药学上可接受的盐的组合可用于制造治疗癌症的药物。
出于同样的原因，本公开还提供了用于治疗癌症的方法，所述方法包括向需要的患者施用有效量的组合配偶体(例如，(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺或其药学上可接受的盐，以及抗PD-1抗体分子(ii)或其药学上可接受的盐)。
术语“患者”或“受试者”是指温血动物。在最优选的实施例中，受试者或患者是人。如本文所公开的，其可以是已被诊断并且需要治疗疾病或障碍的人。
当用于制造治疗癌症的药物或用于治疗有需要的患者中的癌症的方法中时，(i)和(ii)能以如上所说明的剂量和给药方案使用。
最优选地，所述组合包含Wnt抑制剂(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺或其药学上可接受的盐，以及抗PD-1抗体分子PDR-001(ii)或其药学上可接受的盐。这两个组合配偶体(i)和(ii)均可以根据如本文所述的给药方案施用。例如，可在每个周期的第1至15天或第1至8天每天施用(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺或其药学上可接受的盐，持续最多4个周期，例如持续4个周期或仅第一个周期期间。每个周期至少施用一次PDR-001(ii)或其药学上可接受的盐。例如，以该特定组合施用，以2.5mg/天、5mg/天、7.5mg/天、10mg/天、20mg/天、40mg/天、80mg/天、120mg/天、或180mg/天的剂量施用(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺或其药学上可接受的盐。优选地，剂量为2.5mg/天、5mg/天或10mg/天。最优选地，剂量为10mg/天。PDR-001抑制剂(ii)或其药学上可接受的盐以300-400mg/天的单次剂量，最优选400mg/天的剂量施用。
出于同样的原因，本公开还提供了用于治疗癌症的方法，所述方法包括向需要的患者施用有效量的组合配偶体(例如，(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺或其药学上可接受的盐，以及抗PD-1抗体分子(ii)或其药学上可接受的盐)。
如本文所述的组合配偶体(i)和(ii)可以具有协同活性，同时减少由Wnt信号传导途径抑制引起的副作用，例如骨密度降低。
本公开的组合配偶体的术语“有效量”或“治疗有效量”是指以必要的剂量和在必要的时间段内有效实现所需治疗结果的量。组合配偶体的治疗有效量可根据以下因素而变化，如个体的疾病状态、年龄、性别、和体重。治疗有效量也是其中治疗有益效果超过如本文所述组合的任何毒性或有害作用的量。“治疗有效剂量”优选地抑制可测量的参数，例如相对于未治疗的受试者，肿瘤生长速率抑制至少约20％，更优选至少约40％，甚至更优选至少约60％，并且仍更优选至少约80％。
实例
实例1：
NanoString测量最多约1000个基因的选定组的基因表达。这是使用独特的条形码探针执行的，所述探针直接与靶RNA(核糖核酸)杂交。然后在凝胶上运行RNA-探针杂交体以使条形码线性化。之后，对这些条形码进行计数，然后使用内部开发的流程使其标准化。
在筛选时以及在用具有式(I)的Wnt抑制剂2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺进行治疗的第8天和第28天之间，进行肿瘤活检。将肿瘤固定在福尔马林中，并包埋在石蜡(FFPE)中或直接置于RNA Later中。将这些样本转移至Genoptix，其中将RNA分离，用于药效学(PD)标记AXIN2的实时qPCR分析。将残余的RNA转移至测定研究实验室(ARL)，其中使用(2016)NanoString泛癌免疫谱分析组以及免疫相关基因的定制设计组来分析基因表达。使用NanoString推荐的方法对基因表达进行标准化，不同之处在于将样本在特定适应症中标准化(例如，将黑素瘤或胰腺癌样本分别标准化)，并使用geNorm稳定性度量选择管家基因[PMID:12184808]。某些基因在这两个小组之间重叠，我们用这些基因来评估变异性和其他质量控制参数。由NanoString标准化程序以及手动检查苏木精和伊红(H&E)染色的相邻核心活检所施加的QC度量将所述组缩小至11对配对样本。再除去另外两个样本，因为在主成分分析中发现它们是异常值，分析组剩下9个配对样本。根据NanoString推荐的方法对本文所述的计数数据进行标准化，但有一个例外，即将样本在如本文所述的特定适应症中标准化，并且约40个管家基因(在NanoString网站上确定的，用于其商业上可获得的癌症免疫组，2016)被用于跨样本的生物学标准化。
之前使用基因特征来探测肿瘤免疫微环境中表型变化的数据。先前已经表明，在具有活化的Wnt信号传导的基因工程小鼠中，肿瘤微环境中的树突细胞和T细胞被抑制；然而，尚未证明这种效果是可逆的。因此，我们的目标是在用Wnt抑制剂治疗的患者的样本中使用基因表达分析，来确定Wnt途径的药理学抑制可以多大程度逆转肿瘤中Wnt信号传导对近端免疫细胞的抑制作用。
为了了解具有式(I)的化合物是否对肿瘤免疫微环境有影响，我们研究了免疫基因表达与PD标记AXIN2之间的关系。通过使用该标记，我们可以了解Wnt途径在给定肿瘤中被抑制的程度。我们使用描述特定途径或细胞功能的基因组(基因特征)的几何平均表达，而不是关注单个基因。一个基因特征是与CD8+T细胞募集相关的趋化因子特征[PMID:19293190]，并且其他特征与活化的CD103+树突细胞相关[PMID:25970248]。并非每个受试者都表现出对Wnt途径的强烈抑制，如在AXIN2表达中观察到的倍数变化所证明的。有趣的是，AXIN2抑制与趋化因子特征以及树突细胞特征的表达增加之间似乎存在着相当线性的关系(见下文)。我们观察到Wnt途径的药理学抑制导致伴随的周围树突细胞群受到刺激。这些树突细胞在受到刺激时，起到将T细胞募集到肿瘤中的作用。重要的是，这一观察是在暴露于Wnt抑制剂后的15天之后进行的，这表明间歇给药具有式(I)的化合物可以与检查点抑制剂组合，以在先前缺乏免疫浸润的肿瘤的背景下刺激抗肿瘤免疫应答。
基因特征使我们能够观察到给定适应证中许多样本之间的强相关性以及生物相关性，即使样本量很小。Wnt抑制剂治疗的患者样本具有表达的T细胞特征，并且这在多种患者和治疗条件(例如不同剂量水平)中均出现(图2)。图2描绘了该分析中9对配对受试者在筛选时的CD3表达和总结访视中存在的T细胞水平之间的强关联性。
我们研究中使用的基因特征之一是T细胞特征，如图3所示。
考虑了用具有式(i)的Wnt抑制剂调节Wnt途径，连同这种Wnt抑制剂，即(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺影响肿瘤免疫微环境的方式(图4)。将通过使用相同的精确RNA样本测量得到的AXIN2表达的变化用作Wnt抑制剂(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺如何影响Wnt途径的量度。通过线性模型，将AXIN2表达的变化与免疫特征的变化进行拟合。
图4中的每个图表描绘如下：Y轴描绘了暴露于Wnt抑制剂(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺之后给定免疫特征的变化，X轴提供了AXIN2的变化。两者都是log2规模。正值表示给定特征或AXIN2中基因的平均表达增加。首先，观察到I型干扰素特征与AXIN2抑制之间的较弱关系。其次，观察到干扰素γ(或II型干扰素)与AXIN2抑制之间的关系。干扰素γ通常由CD8+T细胞表达。最后，观察到AXIN2抑制与肥大细胞特征和T-调节(T-reg)特征之间的适度反比关系。已经观察到这两种细胞类型在肿瘤免疫微环境中都是免疫抑制的。有趣的是，AXIN2抑制与趋化因子特征(图6)以及树突细胞特征(图5)的表达增加之间似乎存在着相当线性的关系。这是首次观察到Wnt途径的药理学抑制导致伴随的周围树突细胞群受到刺激。
然后，将被鉴定出在CD103+树突细胞中调节对增加的Wnt信号传导的应答的一些特异性基因(Spranger等人Nature[自然]2015,523,231)用于创建类别特异性特征，并将其针对AXIN2抑制进行模拟(图5)。在图5中，每个点代表来自一名患者的一对样本。在X轴上绘制的是从筛选到治疗中的肿瘤内AXIN2表达的log2倍数变化。在Y轴上绘制的是从筛选到治疗中的肿瘤内树突细胞特征的表达的log2倍数变化。树突特征中包含的基因是：BATF3、ITGAE、IRF8、CCR5、CCL3、CCL4、CXCL1。趋势线是使用稳健线性模型通过数据点回归得到的线性估计。每个点旁边的数字表示治疗开始和治疗中活检之间的天数。根据Spranger等人(Nature[自然]2015,523,231)，响应Wnt的基因是BATF3、ITGAE、IRF8、CCR5、CCL3、CCL4、CXCL1。这里，类似于一些其他特征，观察到AXIN2抑制和与CD103+树突细胞活化相关的基因的表达增加之间的正相关。这是相关的，因为这种树突细胞亚型对于许可和激活T细胞进行抗肿瘤应答是重要的。
这些数据表明Wnt抑制剂(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺或其药学上可接受的盐通过增加免疫细胞浸润和减轻对CD103+树突细胞的抑制来影响肿瘤免疫微环境。这些细胞对于驱动抗肿瘤免疫应答的细胞毒性T细胞的激活和募集十分重要。这有助于添加抗PD-1抗体分子(也称为PD-1抑制剂)，其减轻对T细胞的抑制，以与Wnt抑制剂对树突细胞的作用具有协同作用。
还研究了另一种基因特征，发现该特征与将CD8+T细胞募集到肿瘤内强烈相关。该基因特征主要由趋化因子构成，并且与Spranger等人(Nature[自然]2015,523,231)上述的树突细胞特征有一定重叠。已显示这些趋化因子以剂量依赖性方式募集CD8+T细胞。与CD8+T细胞募集相关的趋化因子是CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CXCL9和CXCL10。当我们在患者样本中测量该趋化因子特征中的基因的平均表达并将它们与AXIN2抑制进行比较时，我们再次观察到Wnt途径被抑制的程度与该基因特征的表达之间的线性关系(图6)。在图6中，每个点代表来自一名患者的一对样本。在X轴上绘制的是从筛选到治疗中的肿瘤内AXIN2表达的log2倍数变化。在Y轴上绘制的是从筛选到治疗中的肿瘤内趋化因子特征的表达的log2倍数变化。趋化因子特征中包含的基因是：CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CXCL9和CXCL10。趋势线是使用稳健线性模型通过数据点回归得到的线性估计。每个点旁边的数字表示治疗开始和治疗中活检之间的天数。如图6所示，所述树突细胞在受到刺激时起到将T细胞募集到肿瘤中的作用。重要的是，这一观察是在暴露于Wnt抑制剂(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺或其药学上可接受的盐约15天之后进行的，这表明间歇给药Wnt抑制剂(i)可以与检查点抑制剂组合，以在先前缺乏免疫浸润的肿瘤的背景下刺激抗肿瘤免疫应答。
发现癌症基因组图谱(TCGA)中T细胞和Wnt/CTNNB1特征之间的逆相关在鳞状细胞癌中是一致的，而与癌细胞的起源组织无关(Sanger等人,2015)。基底样乳腺癌中的逆相关性也很强，基底样乳腺癌是与TNBC关系最密切的基因表达亚型(Bertucci等人,2008)。图7显示了几种不同类型癌细胞的关联性。所述Wnt1特征由六个CTNNB1靶标组成：EFNB3、APC2、HNF1A、TCF12和VEGFA。
表1：
人源化抗体分子的氨基酸和核苷酸序列。所述抗体分子包括BAP049-克隆-B和BAP049-克隆-E。显示了重链和轻链CDR、重链和轻链可变区以及重链和轻链的氨基酸和核苷酸序列。
表2：
人源化mAb BAP049-克隆-B和BAP049-克隆-E的重链和轻链框架区的氨基酸和核苷酸序列
表3：
人IgG重链和人κ轻链的恒定区氨基酸序列
表4：
人源化mAb BAP049-克隆-B和BAP049-克隆-E的重链和轻链前导序列的氨基酸序列
BAP049-克隆-B HC MAWVWTLPFLMAAAQSVQA(SEQ ID NO:221)
LC MSVLTQVLALLLLWLTGTRC(SEQ ID NO:222)
BAP049-克隆-E HC MAWVWTLPFLMAAAQSVQA(SEQ ID NO:221)
LC MSVLTQVLALLLLWLTGTRC(SEQ ID NO:222)
实例2：临床研究总结
以下临床研究将用于证实实例1的基本原理、发现和结论。还将进一步评估实例1预期的安全性和有效性。
临床试验设计显示在图8中。
实例3：单独抑制胰腺生长并与免疫疗法组合
以下实验研究将用于证实实例1的基本原理、发现和结论。还将进一步评估实例1预期的疗效。
本研究将检测具有式(I)的化合物，单独地或与抗PD1分子组合时，抑制PDX-CREKRASG12D P53R172H/+小鼠中胰腺肿瘤细胞生长的能力。
治疗组：
A)媒介物
B)具有式(I)的化合物，5mg/kg BID，PO
C)具有式(I)的化合物，5mg/kg BID，PO，以及抗PD1(每周两次，ip)
D)具有式(I)的化合物，5mg/kg BID，PO，以及同型对照(每周两次，ip)
每个治疗组中将有大约10-15只小鼠
治疗期：在小鼠具有可触及的肿瘤负荷时开始治疗。当小鼠表现出胰腺癌症状时(中值120天)，收获小鼠。对短期治疗(少于7天)后的治疗组和对照组动物进行采样，以分析肿瘤免疫和炎性浸润。
将通过超声波监测肿瘤生长。还将监测胰腺癌症状和转移性扩散的时间。还将监测分化、凋亡、增殖和衰老的标志物的HC。
读数：核β-连环蛋白的IHC，BrdU掺入，CD4+，CD8+，CD3+(T-淋巴细胞)，F4/8-(巨噬细胞)和NIMP(嗜中性粒细胞)。确定用于群组动物的分离RNA形式的材料和dta，以及通过RNASeq与GSEA组合进行的、用于短期干预后的免疫特征和炎性特征的完整转录组分析。
实例4：单独抑制黑素瘤生长并与免疫疗法组合
以下实验研究将用于证实实例1的基本原理、发现和结论。还将进一步评估实例1预期的疗效。
本研究将检测具有式(I)的化合物，单独地或与抗PD1分子组合时，抑制TyrCreERBRafV600E/+Ptenfl/+和TyrCreER BRafV600E/+Ptenfl/+Catnblox(ex3)/+小鼠中黑素瘤肿瘤细胞生长的能力。
治疗组：
A)媒介物
B)具有式(I)的化合物，5mg/kg BID，PO
C)具有式(I)的化合物，5mg/kg BID，PO，以及抗PD1(每周两次，ip)
D)具有式(I)的化合物，5mg/kg BID，PO，以及同型对照(每周两次，ip)
每个治疗组中将有大约10-15只小鼠
治疗期：治疗将在黑素瘤(直径5mm)出现后开始，并持续至肿瘤达到终点(直径15mm)。通过卡尺测量来监测肿瘤生长。
读数：卡尺测量的肿瘤生长，病理学检查的肿瘤细胞结构，β-连环蛋白的IHC和Wnt靶基因的qPCR，通过IHC确定的基质细胞/浸润性免疫细胞标记。
实例5：单独抑制黑素瘤生长并与免疫疗法组合
以下实验研究将用于证实实例1的基本原理、发现和结论。还将进一步评估实例1预期的疗效。
本研究将检测具有式(I)的化合物，单独地或与抗PD1分子组合时，抑制CD-1裸鼠或用小鼠源性黑素瘤移植的C57BL/^小鼠(TyrCreERBRafV600E/+Ptenfl/+和TyrCreERBRafV600E/+Ptenfl/+Catnblox(ex3)/+小鼠)中黑素瘤肿瘤细胞生长的能力。
治疗组：
A)媒介物
B)具有式(I)的化合物，5mg/kg BID，PO
C)具有式(I)的化合物，5mg/kg BID，PO，以及抗PD1(每周两次，ip)
D)具有式(I)的化合物，5mg/kg BID，PO，以及同型对照(每周两次，ip)
每个治疗组中将有大约10-15只小鼠
治疗期：治疗将在黑素瘤(直径5mm)出现后开始，并持续至肿瘤达到终点(直径15mm)。通过卡尺测量来监测肿瘤生长。
读数：卡尺测量的肿瘤生长，病理学检查的肿瘤细胞结构，β-连环蛋白的IHC和Wnt靶基因的qPCR，通过IHC确定的基质细胞/浸润性免疫细胞标记。

Claims (41)

1.一种用于治疗癌症的药物组合，其包含(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺，或其药学上可接受的盐，和(ii)抗PD-1抗体分子，或其药学上可接受的盐，其中在每个周期的第1至15天施用(i)，持续最多4个周期，并且每个周期至少施用一次(ii)。
2.根据权利要求1所述的用于治疗癌症的药物组合，其中在每个周期的第1至8天期间施用(i)，持续最多4个周期。
3.根据权利要求1或2所述的用于治疗癌症的药物组合，其中仅在第一个周期中施用(i)。
4.根据权利要求1或2所述的用于治疗癌症的药物组合，其中仅在4个周期期间施用(i)。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的用于治疗癌症的药物组合，其中每个周期为28天。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的用于治疗癌症的药物组合，其中每日施用两次(i)。
7.根据权利要求6所述的用于治疗癌症的药物组合，其中每隔12小时施用(i)。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的用于治疗癌症的药物组合，其中(i)的每日剂量为2.5mg/天、5mg/天、7.5mg/天、10mg/天、20mg/天、40mg/天、80mg/天、120mg/天或180mg/天。
9.根据权利要求8所述的用于治疗癌症的药物组合，其中(i)的每日剂量为2.5mg/天、5mg/天或10mg/天。
10.根据权利要求8至9中任一项所述的用于治疗癌症的药物组合，其中(i)的每日剂量为10mg/天。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的用于治疗癌症的药物组合，其中在一个周期中每2周或每4周施用一次(ii)。
12.根据权利要求11所述的用于治疗癌症的药物组合，其中每4周施用一次(ii)。
13.根据权利要求11或12所述的用于治疗癌症的药物组合，其中(ii)选自纳武单抗、派姆单抗、匹地利珠单抗、PDR-001、或其药用盐。
14.根据权利要求13所述的用于治疗癌症的药物组合，其中(ii)是PDR-001或其药用盐。
15.根据权利要求13所述的用于治疗癌症的药物组合，其中以300至400mg/天的单次剂量静脉内施用(ii)。
16.根据权利要求15所述的用于治疗癌症的药物组合，其中所述单次剂量为400mg/天。
17.根据权利要求1、2、5至9，或11至16中任一项所述的用于治疗癌症的药物组合，其中在第1-8天施用2.5mg/天的(i)，并且每4周施用一次400mg/天的(ii)，持续最多4个周期。
18.根据权利要求1、5至9，或11至16中任一项所述的用于治疗癌症的药物组合，其中在第1-15天施用2.5mg/天的(i)，并且每4周施用一次400mg/天的(ii)，持续最多4个周期。
19.根据权利要求3至9、或11至18中任一项所述的用于治疗癌症的药物组合，其中仅在第1个周期期间施用2.5mg/天的(i)，并且每4周施用一次400mg/天的(ii)。
20.根据权利要求1、2、5至9，或11至16中任一项所述的用于治疗癌症的药物组合，其中在第1-8天施用5mg/天的(i)，并且每4周施用一次400mg/天的(ii)，持续最多4个周期。
21.根据权利要求1、5至9，或11至16中任一项所述的用于治疗癌症的药物组合，其中在第1-15天施用5mg/天的(i)，并且每4周施用一次400mg/天的(ii)，持续最多4个周期。
22.根据权利要求3至9、11至16、20或21中任一项所述的用于治疗癌症的药物组合，其中仅在第1个周期期间施用5mg/天的(i)，并且每4周施用一次400mg/天的(ii)。
23.根据权利要求1、2、5至16中任一项所述的用于治疗癌症的药物组合，其中在第1-8天每天施用10mg/天的(i)，并且每4周施用一次400mg/天的(ii)，持续最多4个周期。
24.根据权利要求1或5至16中任一项所述的用于治疗癌症的药物组合，其中在第1-15天施用10mg/天的(i)，并且每4周施用一次400mg/天的(ii)，持续最多4个周期。
25.根据权利要求1、3至16，23或24中任一项所述的用于治疗癌症的药物组合，其中仅在第1个周期期间施用10mg/天的(i)，并且每4周施用一次400mg/天的(ii)。
26.根据权利要求1至25中任一项所述的用于治疗癌症的药物组合，其中每4周连续施用(ii)。
27.(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺或其药学上可接受的盐与抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐的组合用于制造治疗癌症的药物的用途，其中如权利要求1至26中任一项所定义地施用(i)和(ii)，优选地其中在每个周期的第1至16天施用(i)，持续最多4个周期，并且每个周期至少施用一次(ii)。
28.根据权利要求27所述的、(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺或其药学上可接受的盐与(ii)抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐的组合用于制造治疗癌症的药物的用途，其中在每个周期的第1至16天、每个周期的第1至8天施用(i)，持续最多4个周期，或仅第一个周期期间施用(i)。
29.根据权利要求27或28所述的、(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺或其药学上可接受的盐与(ii)抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐的组合用于制造治疗癌症的药物的用途，其中(i)的每日剂量为2.5mg/天、5mg/天、7.5mg/天、10mg/天、20mg/天、40mg/天、80mg/天、120mg/天或180mg/天。
30.根据权利要求27至29中任一项所述的、(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺或其药学上可接受的盐与(ii)抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐的组合用于制造治疗癌症的药物的用途，其中(i)的每日剂量为10mg/天。
31.根据权利要求27至30中任一项所述的、(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺或其药学上可接受的盐与(ii)抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐的组合用于制造治疗癌症的药物的用途，其中以300-400mg/天的单次剂量施用(ii)。
32.根据权利要求27至30中任一项所述的、(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺或其药学上可接受的盐与(ii)抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐的组合用于制造治疗癌症的药物的用途，其中以400mg/天的单次剂量施用(ii)。
33.根据权利要求27所述的、(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺或其药学上可接受的盐与(ii)抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐的组合用于制造治疗癌症的药物的用途，其中如权利要求17至25中任一项所定义地施用(i)和(ii)。
34.一种用于治疗癌症的方法，所述方法包含向有需要的患者施用有效量的(i)和(ii)，其中在每个周期的第1至15天施用(i)，持续最多4个周期，并且每个周期至少施用一次(ii)。
35.根据权利要求34所述的用于治疗癌症的方法，所述方法包括如权利要求1至26中任一项所定义地施用有效量的(i)和(ii)。
36.根据权利要求1至26所述的用于治疗癌症的药物组合，根据权利要求27至33所述的、(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺或其药学上可接受的盐与(ii)抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐的组合的用途，或者根据权利要求34至36所述的用于治疗癌症的方法，其中所述癌症是三阴性乳腺癌(TNBC)、头颈部鳞状细胞癌、胰腺癌、胃肠癌、结肠直肠癌、肺鳞状细胞癌、食道鳞状细胞癌、宫颈鳞状细胞癌或黑素瘤。
37.根据权利要求1至26或36所述的用于治疗癌症的药物组合，根据权利要求27至33或36所述的、(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺或其药学上可接受的盐与抗PD-1抗体分子或其药用盐的组合的用途，或根据权利要求34至36所述的用于治疗癌症的方法，其中所述癌症是三阴性乳腺癌(TNBC)、胰腺癌或黑素瘤。
38.根据权利要求1至26、36或37所述的用于治疗癌症的药物组合，根据权利要求27至33、36或37所述的、(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺或其药学上可接受的盐与(ii)抗PD-1抗体分子或其药学上可接受的盐的组合的用途，或根据权利要求34至37所述的用于治疗癌症的方法，其中(i)和(ii)在减少骨吸收方面具有协同活性。
39.根据权利要求1至26、或36至38所述的用于治疗癌症的药物组合，根据权利要求27至33、或36至38所述的、(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺或其药学上可接受的盐与抗PD-1抗体分子或其药用盐的组合的用途，或根据权利要求34至38所述的用于治疗癌症的方法，其中口服或静脉内施用(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺或其药学上可接受的盐，最优选口服施用。
40.根据权利要求1至26或36至39所述的用于治疗癌症的药物组合，根据权利要求27至33或36或39所述的、(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺或其药学上可接受的盐与抗PD-1抗体分子的组合的用途，或根据权利要求34至39所述的用于治疗癌症的方法，其中所述抗PD-1抗体分子(ii)选自纳武单抗、派姆单抗、匹地利珠单抗、PDR-001、或其药用盐。
41.根据权利要求1至26或36至40所述的用于治疗癌症的药物组合，根据权利要求27至33或36至40所述的、(i)2-(2’,3-二甲基-[2,4’-联吡啶]-5-基)-N-(5-(吡嗪-2-基)吡啶-2-基)乙酰胺或其药学上可接受的盐与抗PD-1抗体分子的组合的用途，或根据权利要求34至40所述的用于治疗癌症的方法，其中所述抗PD-1抗体分子(ii)是PDR-001或其药用盐。
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