CN110214003A

CN110214003A - 包含莕菜属植物提取物作为有效成分的皮肤防污用组合物

Info

Publication number: CN110214003A
Application number: CN201780083933.3A
Authority: CN
Inventors: 金甫润; 郑铉静; 金惟我; 朴炳俊; 金姛熺
Original assignee: South Korea Kema Corp
Current assignee: South Korea Kema Corp
Priority date: 2017-01-23
Filing date: 2017-12-14
Publication date: 2019-09-06
Anticipated expiration: 2037-12-14
Also published as: KR20180087103A; KR101886688B1; CN110214003B

Abstract

本说明书公开包含莕菜属植物提取物作为有效成分的皮肤防污用组合物及皮肤细胞保护用组合物。本发明具备保护皮肤不被对皮肤细胞具备毒性的化学物质损伤的防污功效。具体地，当在处理了毒性化学物质的皮肤上处理上述组合物时，能够将由化学物质导致的皮肤细胞的死灭最小化，增加丝聚蛋白的合成，从而能够改善因毒性化学物质变差的皮肤状态。

Description

包含莕菜属植物提取物作为有效成分的皮肤防污用组合物

技术领域

本说明书公开包含莕菜属植物提取物作为有效成分的皮肤防污用组合物及皮肤细胞保护用组合物。

背景技术

皮肤作为直接暴露于外部环境的身体部位，不仅起到在外部环境中保护我们身体的重要的器官的保护膜作用，而且还起到调节水分蒸发并保护身体不被外部感染。但是，现代人的皮肤不断暴露于随着产业化而研发的各种化学物质的制造过程或废弃过程中产生的公害物质和较强的紫外线，受到红斑、浮肿、发痒等皮肤烦恼和急剧的皮肤老化烦恼的事例不断增加。这样的皮肤烦恼不仅引起美观上的问题，并且在炎症反应过程中产生的物质连带地引起皮肤的色素沉淀，促进皮肤弹性纤维的衰变，甚至还导致皮肤皱纹的增加。对此，目前积极研发着用于屏蔽紫外线的化妆品，但用于在化学物质中保护皮肤的产品的研发还非常薄弱。近年来研发出了用于防止污染物质或公害物质渗透或附着到皮肤的化妆品或强化了对污染物质的清洗力的清洁剂等，但这样的产品对污染物质的皮肤渗透防止力微弱，仅仅是从皮肤去除污染源而已，因此不能从根本上保护皮肤不被污染物质损伤，并且作为主成分而包含化学物质，因此反而引起皮肤烦恼的事例也频频发生。因此，需要研发一种利用对皮肤无刺激的自然提取物，且能够从根本上改善被化学物质污染的皮肤的状态的组合物。

[现有技术文献]

(非专利文献1)Marcelo C.L.et al，J.invest.Dermatol.，pages 37-44，1983

发明内容

技术课题

在一个侧面中，本发明的目的在于提供一种莕菜属植物的新用途。

在一个侧面中，本发明的目的在于利用包含自然物即莕菜属植物提取物作为有效成分的组合物来将皮肤刺激最小化的同时有效地保护皮肤不被污染物质损伤。

在一个侧面中，本发明的目的在于将由化学物质引起的皮肤角质细胞的死灭最小化。

在一个侧面中，本发明的目的在于增加丝聚蛋白的表达。

课题解决手段

为了达到上述目的，本发明提供包含莕菜属植物提取物作为有效成分的组合物。

发明效果

本发明的一个侧面即作为有效成分而包含莕菜属植物提取物的组合物具备保护皮肤不被对皮肤细胞具有毒性的化学物质损伤的防污功效。具体地，当在处理了毒性化学物质的皮肤上处理上述组合物时，能够将皮肤细胞的死灭最小化，增加丝聚蛋白的合成，改善因毒性化学物质而变差的皮肤状态。

附图说明

图1是确认在处理苯并芘之后处理了本发明的一个侧面的组合物的情况下的皮肤角质细胞的生存率的图。

图2是确认处理硝酸铵之后处理了本发明的一个侧面的组合物的情况下的皮肤角质细胞的生存率的图。

图3是确认处理甲醛之后处理了本发明的一个侧面的组合物的情况下的皮肤角质细胞的生存率的图。

图4和图5是对在处理了本发明的一个侧面的组合物的情况下的丝聚蛋白的蛋白质表达变化(图4)和mRNA表达变化(图5)进行观察的图(NIE表示金银莲花)。

具体实施方式

本研究是在韩国科玛(KOLMAR)(株)的主管下，通过韩国保健福利部下属全球化妆品研发工作团的全球化妆品新材料/新技术研发支援工作的支援而进行的，研究课题名称为利用智能植物工厂栽培的莕菜属水生植物的抗老化化妆品研发(课题编号：HN15C0103)，研究期间为2015.11.01～2018.10.31。

下面，对本发明进行详细说明。

本发明的一个侧面提供一种包含莕菜属(Nymphoides)植物提取物作为有效成分的皮肤防污用组合物。

另外，本发明的一个侧面提供一种作为有效成分而包含莕菜属(Nymphoides)植物提取物的皮肤细胞保护用组合物。

本发明提供一种包含莕菜属(Nymphoides)植物提取物作为有效成分的皮肤细胞死灭抑制或防止用组合物。

本说明书中“皮肤”是指覆盖动物的体表的组织，是不仅包括覆盖脸部或身体等的体表的组织，而且还包括头皮的广范围的概念。

本说明书中，用语“防污(anti-pollution)”是指，防止或改善由对皮肤具有毒性的物质引起皮肤状态变差。

另外，在本说明书中用语“皮肤细胞保护”是指，将皮肤细胞的坏死或死灭最小化或改善细胞增殖的阻碍。

本说明书中“提取物”是指，包括与提取方法、提取溶剂、提取的成分或提取物的形态无关地提取天然物的成分而获得的所有的物质，另外还包括在提取通过提取天然物的成分而获得的物质之后通过其他的方法进行加工或处理来可获得的所有的物质的广范围的概念。

本说明书中“莕菜属植物提取物”是指，包括与提取方法、提取溶剂、提取的成分或提取物的形态无关地通过提取莕菜属植物的成分而获得的所有的物质，并包括在提取其成分的过程中通过包括用热、酸(acid)、盐基(base)、酶等进行处理的工序在内的提取方法而获得的物质，另外还包括在提取通过提取莕菜属植物的成分而获得的物质之后利用其他的方法加工或处理来可获得的所有的物质的广范围的概念。

在一个侧面中，上述莕菜属植物优选为金银莲花(Nymphoides indica)。

关于金银莲花(Nymphoides indica)，在淤泥中须根向四周延伸，在长叶柄的末端生出1～3片叶子。叶子浮于水面，呈圆心状，且一侧大幅开裂，边缘光滑。8月开花，花冠为白色，中心部为黄色，围绕叶柄的底部花开10余朵。金银莲花可用来治疗口渴、口干等疾病。

在一个侧面中，上述组合物可改善由化学物质引起的皮肤污染、皮肤细胞死灭或皮肤细胞增殖阻碍或皮肤状态的变差。

上述化学物质包括多环芳烃(polycyclic aromatic hydrocarbon)、醛类及氮氧化物类。

具体地，上述多环芳烃包括苯并芘，上述醛类包括甲醛。另外，上述氮氧化物类包括由NOx的化学式表示的氮氧化物，例如可包括NO、NO2、N2O、N4O、N2O3、N2O4、N2O5、N4O6或它们的离子化物。另外，上述氮氧化物类包括铵或其盐，例如，上述铵的盐可包括铵的硝酸盐即硝酸铵。

苯并芘是通过汽车排气或烟草烟雾等不完全燃烧而产生，并通过向环氧化物的代谢转换和与DNA的反应而引起细胞损伤的有毒物质。

甲醛又被称为蚁醛(methanal)，在福尔马林溶液制造、合板制造、合成树脂及化学产品制造、石油精炼等中产生，对人体的毒性强，是可引发呼吸道疾病、头痛、呕吐、腹泻、甚至毒性肺气肿的有毒物质(杨芝燕等(2007)，室内环境中醛浓度分布及影响要素评价，J.ENVIRON.TOXICOL.Vol.22，No.1,37～47)。

另外，氮氧化物类是主要通过石油或煤炭等的燃烧而产生，并导致肺气肿、支气管炎这样的呼吸道疾病的有毒物质。

在一个侧面中，以总重量为基准，上述组合物包含0.01重量％～30重量％的上述莕菜属植物提取物，优选为，包含0.1重量％～20重量％的上述莕菜属植物提取物，更优选为，包含1重量％～10重量％的上述莕菜属植物提取物，进一步优选为包含1重量％～5重量％的上述莕菜属植物提取物。当上述莕菜属植物提取物的包含量为0.01重量％以下时，无法实现上述列举的效果。

在一个侧面中，上述组合物可促进丝聚蛋白的合成。

皮肤疾病在多数情况下从皮肤屏障(skin barrier)功能的恶化或瓦解开始，而对皮肤屏障功能起到重要作用的是丝聚蛋白。因丝聚蛋白的减少而导致皮肤屏障及保湿力变差，其结果，可引起特应性皮炎这样的皮肤疾病。在一般情况下，公害物质引发氧化反应，从而形成高反应性活性氧自由基，通过高反应性活性氧自由基而引发炎症反应，其结果引发Thelper cell2(Th2)的免疫反应，IL-4、IL-13的分泌增加，由此抑制丝聚蛋白的合成。因此，促进丝聚蛋白的合成的物质对改善皮肤状态起到重要的作用(Michael D.et al(2009),Cytokine modμlation of atopic dermatitis filaggrin skin expression,Journal ofAllergy and Clinical Immunology,2009,vol.124(3))。

在本说明书的一个侧面中，莕菜属植物提取物通过清洗莕菜属植物进行干燥的步骤和从所干燥的莕菜属植物提取溶剂的步骤及对所提取的莕菜属植物进行过滤的步骤而获得。上述中溶剂包括选自由水、有机溶剂及水和有机溶剂的混合物构成的组的一个以上。上述中水包括蒸馏水或纯净水，有机溶剂包括以C_1～6的低级醇为例的选自由醇、丙酮、醚、乙酸乙酯、二乙醚、乙基甲基酮及三氯甲烷构成的组的一个以上，但不限于此。

上述莕菜属植物提取物包含莕菜属植物的C_1～6醇提取物，具体地上述醇为甲醇或乙醇，优选为甲醇。

本说明书中上述莕菜属植物提取物为选自由水、C_1～6醇及它们的组合构成的组的溶剂的粗提物。上述C_1～6醇具体为甲醇。在从莕菜属植物提取溶剂时，优选添加莕菜属植物的约5至15倍左右的溶剂而进行提取，具体地添加约10倍的溶剂而进行提取，但不限于此。关于上述提取，可利用加热提取、冷萃取、回流冷却提取或超声波提取等，只要是本领域技术人员显而易见的提取方法，则不作限制。上述提取可在室温中执行，但为了进行更有效的提取，可在加热条件下进行上述提取，优选为在约40至100℃(摄氏度)下进行提取，更优选为在约80℃的温度下进行提取，但不限于此。提取时间优选为约2至4小时，更优选为约3小时，但不限于此，可根据提取溶剂及提取温度等条件而进行变更。关于上述提取，为了获得更多的活性成分，可进行1次以上的多次提取，优选为进行1至5次提取，更优选为连续提取三次而利用将其相加的提取液。

在本说明书中，如上述，莕菜属植物提取物可包含莕菜属植物的粗提物，并且也可以包含将上述粗提物进一步提取为极性低的有机溶剂而获得的有机溶剂的可溶性分化物。作为上述有机溶剂，可利用己烷、亚甲基氯、乙酸乙酯、n-丁醇等，但不限于此。通过上述的方法而提取的提取物或其提取物的可溶性分化物既可以直接使用，也可以在过滤之后进行浓缩而以浓缩液的形态使用，并在浓缩之后进行冻结干燥而作为冻结干燥物的形态使用。

在一体现例中，上述莕菜属植物提取物可以是莕菜属植物的前哨提取物。

在一个侧面中，上述组合物为化妆料组合物。

上述化妆料组合物可与在皮肤学上可允许的赋形剂配合而制造成基础化妆品组合物(化妆水、霜、精华、如洗面奶及卸妆水这样的洁面剂、面膜、润肤油)、彩妆组合物(粉底霜、唇膏、睫毛膏、隔离霜)、头发或头皮产品组合物(洗发水、护发素、修护润发精华素、发胶)及皂等形态。

作为上述赋形剂，例如可包含皮肤柔润剂、皮肤渗透增强剂、着色剂、芳香剂、乳化剂、增稠剂及溶剂，但不限于此。另外，还可追加包含香料、色素、杀菌剂、防氧化剂、防腐剂及保湿剂等，为了改善物性，可包含增稠剂、无机盐类、合成高分子物质等。例如，利用本发明的化妆料组合物而制造洁面剂及皂的情况下，可在通常的洁面剂及皂基中添加本发明的联芳基酰胺衍生物而容易地进行制造。在制造霜的情况下，可在一般的水包油型(O/W)的膏基中添加本发明的联芳基酰胺衍生物而进行制造。在此，还可以追加添加香料、螯合剂、色素、防氧化剂、防腐剂等和用于改善物性的蛋白质、矿物质、维生素等合成或天然材料。

在一个体现例中，上述皮肤细胞包含皮肤角质细胞。

下面，以实施例及实验例为例，对本发明的结构及效果进行更具体的说明。但这仅仅是为了帮助理解本发明而例示的，本发明的范畴及范围不限于下述例。

[实施例1]金银莲花甲醇提取物的制造

在金银莲花(Nymphoides indica)的50g的前哨中添加500ml的甲醇，并在常温下将其浸渍24小时，然后用滤纸过滤了提取液。将过滤的过滤液通过浓缩机而使溶剂挥发，然后进行冻结干燥，由此制造了金银莲花的甲醇提取物。

[实验例1]防污活性检测

使用通常直接接触公害物质的皮肤角质细胞而检测了由公害物质导致的细胞损伤程度，并将实施例1的金银莲花提取物按照浓度而分别进行处理，从而确认了皮肤细胞损伤抑制效果。将人角质细胞HaCaT按照5X10³cells/ml的浓度而分注到96-孔板并培养了24小时，然后分别对苯并芘(10μM)、硝酸铵(500μg/ml)及甲醛(1.5μg/ml)和实施例1的金银莲花提取物进行处理，还追加45小时而进行了培养。之后，放入5mg/ml浓度的MTT solution而培养3小时之后去除培养基，将二甲基亚砜(dimethyl sμlfoxide)按150μl放入各个孔(well)中而摇晃(shaking)10分钟，并在570nm下检测了吸光度。

其结果，确认到在处理了本发明的提取物的情况下，根据不同浓度而获得了不同的对公害物质的细胞损伤抑制效果。

特别地，在对苯并芘进行处理的情况下，在将实施例1的组合物处理为75ug/ml时，与仅处理苯并芘的组相比，确认到细胞生存率提高了35.85％以上(图1)。

另外，在对硝酸铵进行处理并将实施例1的组合物处理为50μg/ml的情况下，与处理硝酸铵的组相比，确认到细胞生存率提高了约16％以上(图2)。另外，在对甲醛进行处理并将实施例1的组合物处理为50μg/ml的情况下，与处理甲醛的组相比，确认到细胞生存率提高了约25％以上(图3)。

[实验例2]丝聚蛋白(filaggrin)合成促进能力确认

[实验例2-1]丝聚蛋白蛋白质合成确认

为了在HaCat细胞内观察HAS和丝状聚集蛋白(filaggrin protein)的活性，在60mm的细胞培养皿(tissue cμlture dish)中进行细胞接种(cell seeding)之后培养了24小时，从而将细胞(cell)稳定化。在去除培养基之后，利用按照浓度而进行处理的培养基将提取物培养24小时，然后重新去除培养基，利用PBS清洗了2次。在10ml的细胞裂解液(RIPAbuffer)中添加complete mini 1 tab而溶解为100μl，从而在4℃下以12,000rmp进行了20分钟的圆心分离。通过布拉德福德鉴定(Bradford assay)对通过圆心分离获得的上层液进行测量，从而将30μl的蛋白质在10％的十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)中进行电泳而进行了分离。利用半干转印槽(semi dry transfer cell)器具(Hofer，USA)，将分离的蛋白质移送到聚偏氟乙烯膜(PVDF membrane)，然后在室温下的封闭液(blockingbuffer)(包含5％脱脂奶的洗涤缓冲液(5％skim milk in TBST))中进行了1小时孵化(incubation)。稀释1次抗体而在4℃下放置一夜(overnight)，然后重新以10分钟的间隔在TBST中清洗(washing)3次，并将抗小鼠IgG HRP(mouse anti-rabbit IgG HRP)2抗体按照1:1,000进行稀释，并在室温中培养了1小时。在清洗3次之后，利用LAS4,000器具而确认带并进行了定量。

其结果，确认到在金银莲花提取物的情况下，均根据浓度而促进了丝聚蛋白的合成(图4)。

[实验例2-2]丝聚蛋白mRNA表达检测

在60mm的盘(dish)中对细胞进行细胞接种(cell seeding)，然后培养了24小时，然后将样品按照浓度进行处理而培养了24小时。在去除培养基上清液之后将trizol裂解液(trizol lysis buffer)按1ml分注到各个孔(well)中，将细胞裂解(lysis)之后在-70℃下进行了保管。将从细胞提取的RNA在260nm和280nm下检测吸光度并进行了测量。将测量的RNA与5μg的Oligo(dT)15 0.5μg/反应，无核酸酶水(Oligo(dT)15 0.5μg/reaction，Nuclease-Free Water)(promega kit，USA)进行混合，然后在70℃下利用冰块而冷却了5分钟。利用反应搅拌机(Reaction mixture)将10倍的RT buffer、MgCl2DTT、RNase进行混合而准备。在25℃下加热10分钟，在42℃下加热50分钟，在70℃下加热15分钟而进行灭活(inactivate)之后利用冰块进行了冷却。分别放入cDNA和2X SYBR green mix、primer、ROX，并利用ABI step one plus(Applied biosystem，USA)器具实时进行了定量分析，然后利用分析程序而分析了结果。

使用的丝聚蛋白的引物序列如表1所示。

【表1】

其结果，确认到在金银莲花提取物的情况下，均按照浓度而具备丝聚蛋白mRNA合成性能(图5)。

序列目录

序列目录1和2涉及丝聚蛋白的引物序列(序列目录1：正向，序列目录2：逆向)，序列目录3和4涉及β-肌动蛋白的引物序列(序列目录3：正向，序列目录4：逆向)。

<110> 韩国科玛株式会社

<120> 包含莕菜属植物提取物作为有效成分的皮肤防污用组合物

<130> PCT17-41

<150> KR 10-2017-0010672

<151> 2017-01-23

<150> KR 10-2017-0108733

<151> 2017-08-28

<160> 4

<170> KoPatentIn 3.0

<210> 1

<211> 21

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Primer for filaggrin(forward)

<400> 1

ttgttctttg atgcagtcag c 21

<210> 2

<211> 18

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Primer for filaggrin(reverse)

<400> 2

gatttgcgcc aaaagtgc 18

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Primer for beta-actin(forward)

<400> 3

attgttgcca tcaatgaccc 20

<210> 4

<211> 18

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Primer for beta-actin(reverse)

<400> 4

agtagaggca gggatgat 18

Claims

1.一种皮肤防污用组合物，其包含莕菜属(Nymphoides)植物提取物作为有效成分。

2.一种皮肤细胞保护用组合物，其包含莕菜属(Nymphoides)植物提取物作为有效成分。

3.一种皮肤细胞死灭抑制或防止用组合物，其包含莕菜属(Nymphoides)植物提取物作为有效成分。

4.根据权利要求1至3中的任意一项所述的组合物，其中，

上述莕菜属植物包含选自由金银莲花(Nymphoides indica)构成的组的一个以上。

5.根据权利要求1至3中的任意一项所述的组合物，其中，

上述组合物改善由化学物质引起的皮肤污染、皮肤细胞死灭或皮肤细胞增殖阻碍。

6.根据权利要求1至3中的任意一项所述的组合物，其中，

上述组合物促进丝聚蛋白的合成。

7.根据权利要求1至3中的任意一项所述的组合物，其中，

上述莕菜属植物提取物的提取溶剂包含水、有机溶剂或它们的混合物。

8.根据权利要求1至3中的任意一项所述的组合物，其中，

上述组合物为化妆料组合物。

9.根据权利要求2或3所述的组合物，其中，

上述皮肤细胞包含皮肤角质细胞。

10.根据权利要求5所述的组合物，其中，

上述化学物质包含多环芳烃(polycyclic aromatic hydrocarbon)、醛类及氮氧化物类。

11.根据权利要求10所述的组合物，其中，

上述多环芳烃包含苯并芘，

上述醛类包含甲醛，

上述氮氧化物类包含硝酸铵。