CN115669541A - 一种海丰莕菜组织培养快速繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明专利公开了一种海丰莕菜组织培养快速繁殖方法，其方法包括如下步骤：外植体选取、外植体消毒方法、幼芽诱导、丛生芽的诱导、继代培养、生根培养、炼苗移栽，选取海丰莕菜带芽茎段作为外植体，将海丰莕菜带芽茎段用清水冲洗干净，该方法选取海丰莕菜带芽茎段作为外植体进行培养，并且在不同的培养阶段中选取不同的培养基进行培养，最终诱导率100％，增殖倍数达200‑300倍，使组培苗的生根率达到百分之百，并且本发明还设计了炼苗移栽方案，能够保证组培苗在移栽的过程中达到炼苗成活率100％，该发明采用科学配制的生根培养基，可使生根率为100％，不仅生根时间短，而且苗粗壮、根粗根长、根多，有利于组培苗炼移栽，提高成活率。
Description
技术领域
本发明专利涉及植物繁殖技术领域，具体为一种海丰莕菜组织培养快速繁殖方法。
背景技术
海丰莕菜是莕菜属植物，海丰莕菜花期长，叶片浮水，花挺出水面，黄色色彩鲜艳，可作为园林绿化植物，根据世界自然保护联盟2012年对物种濒危等级的划分标准，海丰莕菜为中国特有的水生植物极度濒危物种。
海丰莕菜繁殖一般有无性繁殖和有性繁殖兼用，通常是播种和分株繁殖，海丰莕菜为濒危物种，播种种苗发芽率低，自然分株繁殖速度慢，为了加速对海丰莕菜种苗扩繁，最好的育种方法是组织培养快繁技术，该技术为保护濒危物种海丰莕菜扩繁具有重要的意义。
发明专利内容
本发明专利的目的在于提供一种海丰莕菜组织培养快速繁殖方法，为实现上述目的，本发明专利提供如下技术方案：一种海丰莕菜组织培养快速繁殖方法，其方法包括如下步骤：
S1外植体选取：选取海丰莕菜带芽茎段作为外植体；
S2外植体消毒方法：将海丰莕菜带芽茎段用清水冲洗干净，再用洗衣粉水洗过，用自来水冲洗30min左右，置于无菌操作台消毒，然后使用无菌水清洗3次后，使用杀菌剂溶液浸泡消毒60min，清洗3～5次待用；
S3幼芽诱导：将消毒好的海丰莕菜带芽茎段芽用手术刀切去外面接触消毒液的材料，置于固体培养基上，置于25～28℃条件下按培养一周，转置LED照明灯光照10～12小时/天；
S4丛生芽的诱导：窃取萌发的幼芽，接入到丛生芽诱导培养基中，置于LED照明灯光照10～12小时/天；
S5继代培养：将丛生芽苗切为叶片、茎段和带愈伤的小丛芽接种到增值培养基中，置于LED照明灯光照10～12小时/天；
S6生根培养：选择生长一致、健壮的丛生芽苗切取单株或小丛芽苗接种到生根培养基中，置于LED照明灯光照16小时/天；
S7炼苗移栽：将海丰莕菜瓶装生根组培苗移到折光处一周左右，慢慢移至光线较好的地方炼苗1周左右，将炼好的组培苗取出洗净根部培养基，置于装有红泥土的空塑料花盆中，浇水后置于自然光下培养。
优选的，所述S2中，消毒溶液采用75％浓度的酒精，消毒时间为1min。
优选的，所述S2中，杀菌剂溶液为2％的S206杀菌剂，所述外植体消毒后的污染率为9％。
优选的，所述S3中，固体培养基为添加MS+0.5mg/L6-BAl+0.5mg/LIAA的固体培养基，所述LED照明灯的光照强度为1000-1200lux，且在温度25～28℃条件下培养。
优选的，所述S4中，丛生芽诱导培养基为MS+0.5mg/L6-BAl+0.5mg/LIAA培养基，所述丛生芽诱导时，LED照明灯的光照强度为1000-1200lux，且在温度25～28℃条件下培养。
优选的，所述S5中，增值培养基为MS+1.0mg/L6-BAl+0.5mg/LIAA培养基，所述继代培养使，LED照明灯的光照强度为1000-1200lux，且在温度25～28℃条件下培养。
优选的，所述S6中，生根培养基为MS+1.0mg/LNAA培养基，所述生根培养时，LED照明灯的光照强度为1000-1200lux，且在温度25～28℃条件下培养。
优选的，所述S7中，炼苗过程中需要经常转动瓶身或袋面，让组培苗受光均匀，使练出来的组培苗受光均匀、健康。
优选的，所述S7中，浇水量要求刚好没过植株。
与现有技术相比，本发明专利的有益效果如下：
本发明专利提出了一种海丰莕菜组织培养快速繁殖方法，该方法选取海丰莕菜带芽茎段作为外植体进行培养，并且在不同的培养阶段中选取不同的培养基进行培养，最终诱导率100％，增殖倍数达200-300倍，使组培苗的生根率达到百分之百，并且本发明还设计了炼苗移栽方案，能够保证组培苗在移栽的过程中达到炼苗成活率100％，该发明采用科学配制的生根培养基，可使生根率为100％，不仅生根时间短，而且苗粗壮、根粗根长、根多，有利于组培苗炼移栽，提高成活率，为濒危物种海丰莕菜扩繁带来极大的优势。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明海丰莕菜各个培养阶段附图。
图中：A-外植体阶段，B-萌发幼芽阶段，C-丛生芽阶段，D-增殖苗阶段，E-生根苗阶段，F-炼苗阶段，G、H-开花植株阶段。
具体实施方式
下面将结合本发明专利中的实施例，对本发明专利实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明专利一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明专利中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明专利保护的范围。
一种海丰莕菜组织培养快速繁殖方法，其方法包括如下步骤：
S1外植体选取：选取海丰莕菜带芽茎段作为外植体；
S2外植体消毒方法：将海丰莕菜带芽茎段用清水冲洗干净，再用洗衣粉水洗过，用自来水冲洗30min左右，置于无菌操作台消毒，消毒溶液采用75％浓度的酒精，消毒时间为1min，然后使用无菌水清洗3次后，使用杀菌剂溶液浸泡消毒60min，清洗3～5次待用，杀菌剂溶液为2％的S206杀菌剂，外植体消毒后的污染率为9％；
S3幼芽诱导：将消毒好的海丰莕菜带芽茎段芽用手术刀切去外面接触消毒液的材料，置于固体培养基上，置于25～28℃条件下按培养一周，转置LED照明灯光照10～12小时/天，固体培养基为添加MS+0.5mg/L6-BAl+0.5mg/LIAA的固体培养基，LED照明灯的光照强度为1000-1200lux，且在温度25～28℃条件下培养，7～10天诱导幼芽萌发，诱导率100％；
S4丛生芽的诱导：窃取萌发的幼芽，接入到丛生芽诱导培养基中，置于LED照明灯光照10～12小时/天，丛生芽诱导培养基为MS+0.5mg/L6-BAl+0.5mg/LIAA培养基，丛生芽诱导时，LED照明灯的光照强度为1000-1200lux，且在温度25～28℃条件下培养，15～20天左右诱导出大量的丛生芽；
S5继代培养：将丛生芽苗切为叶片、茎段和带愈伤的小丛芽接种到增值培养基中，置于LED照明灯光照10～12小时/天，增值培养基为MS+1.0mg/L6-BAl+0.5mg/LIAA培养基，继代培养使，LED照明灯的光照强度为1000-1200lux，且在温度25～28℃条件下培养，15天左右诱导出大量的健壮丛生芽苗，叶片、茎段和带愈伤的小丛芽都能诱导出大量丛生芽，增殖系数高，增殖系数200～300；
S6生根培养：选择生长一致、健壮的丛生芽苗切取单株或小丛芽苗接种到生根培养基中，置于LED照明灯光照16小时/天，生根培养基为MS+1.0mg/LNAA培养基，生根培养时，LED照明灯的光照强度为1000-1200lux，且在温度25～28℃条件下培养，第5天开始有根长出，10d左右有4～6条根，15～20天获得生长健壮、根系发达的健康植株，生根率100％；
S7炼苗移栽：将海丰莕菜瓶装生根组培苗移到折光处一周左右，慢慢移至光线较好的地方炼苗1周左右，将炼好的组培苗取出洗净根部培养基，置于装有红泥土的空塑料花盆中，浇水后置于自然光下培养，浇水量要求刚好没过植株，水不能太深，水太深影响苗的生长，炼苗过程中需要经常转动瓶身或袋面，让组培苗受光均匀，使练出来的组培苗受光均匀、健康，炼苗成活率100％。
实施例一：
表1不同消毒剂及消毒时间对睡莲外植体消毒的影响
由表1可见，对照A1污染率为100％，只用75％乙醇消毒，对海丰莕菜茎段消毒效果不好，A5采用含有1滴吐温的质量浓度0.1％氯化汞消毒20min，可明显增强消毒效果，降低污染率，并随着使用时间增加显著地降低污染率，但是随着消毒时间增加，外植体的褐化率明显增加，A8采用2％S206杀菌剂消毒90min消毒效果最佳，但是褐化率高，A7采用2％S206杀菌剂消毒60min，污染率和褐化率低，综合考虑，消毒效果、投入和对环境影响问题，A7：自来水冲洗10min→无菌水洗3次→体积浓度75％乙醇消毒30s→无菌水洗5次→体积浓度2％S206杀菌剂60min→无菌水洗5次，最为合适作为海丰莕菜外植体的消毒方法。
实施例二：
表2不同植物生长调节剂对海丰莕菜外植体诱导的影响
由表2可见，IAA最适合作为海丰莕菜带芽茎段诱导的植物生长调节剂，诱导率达到100％，没有愈伤，丛生芽数量多；在植物生长调节剂2,4-D培养基中也诱导出部分丛生芽，但是愈伤较多，更适合作为诱导愈伤，在NAA培养基中有单芽，但没有分化为丛生芽；在激素IBA中也有部分单芽，也没有丛生芽，因此，最适合作为海丰莕菜的植物生长调节剂为IAA。
实施例三：
表3不同浓度植物生长调节剂6-BA对海丰莕菜丛生芽增殖的影响
由表3可见，不同浓度植物生长调节剂6-BA对海丰莕菜丛生芽增殖有很大的影响，丛生芽的增殖倍数随着6-BA浓度的增加而增多，但是6-BA浓度到达一定浓度后，愈伤也增多，影响了芽的分化，反而降低了增殖倍数，增殖最合适的浓度为6-BA1.0mg/L，增殖倍数达到200～300，小丛芽、茎段和叶片都可以诱导新的丛生芽，丛生芽繁殖快，芽苗健壮。
实施例四：
表4不同浓度NAA和IBA对海丰莕菜组培苗生根的影响
由表4可见，处理组D3的生根率为100％，组培苗生长好，表明本发明采用科学配制的生根培养基，可使生根率为100％，不仅生根时间短，而且苗粗壮、根粗根长、根多，有利于组培苗炼移栽，提高成活率。
尽管已经示出和描述了本发明专利的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明专利的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明专利的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (9)
1.一种海丰莕菜组织培养快速繁殖方法，其特征在于：其方法包括如下步骤：
S1外植体选取：选取海丰莕菜带芽茎段作为外植体；
S2外植体消毒方法：将海丰莕菜带芽茎段用清水冲洗干净，再用洗衣粉水洗过，用自来水冲洗30min左右，置于无菌操作台消毒，然后使用无菌水清洗3次后，使用杀菌剂溶液浸泡消毒60min，清洗3～5次待用；
S3幼芽诱导：将消毒好的海丰莕菜带芽茎段芽用手术刀切去外面接触消毒液的材料，置于固体培养基上，置于25～28℃条件下按培养一周，转置LED照明灯光照10～12小时/天；
S4丛生芽的诱导：窃取萌发的幼芽，接入到丛生芽诱导培养基中，置于LED照明灯光照10～12小时/天；
S5继代培养：将丛生芽苗切为叶片、茎段和带愈伤的小丛芽接种到增值培养基中，置于LED照明灯光照10～12小时/天；
S6生根培养：选择生长一致、健壮的丛生芽苗切取单株或小丛芽苗接种到生根培养基中，置于LED照明灯光照16小时/天；
S7炼苗移栽：将海丰莕菜瓶装生根组培苗移到折光处一周左右，慢慢移至光线较好的地方炼苗1周左右，将炼好的组培苗取出洗净根部培养基，置于装有红泥土的空塑料花盆中，浇水后置于自然光下培养。
2.根据权利要求1所述的一种海丰莕菜组织培养快速繁殖方法，其特征在于：所述S2中，消毒溶液采用75％浓度的酒精，消毒时间为1min。
3.根据权利要求1所述的一种海丰莕菜组织培养快速繁殖方法，其特征在于：所述S2中，杀菌剂溶液为2％的S206杀菌剂，所述外植体消毒后的污染率为9％。
4.根据权利要求1所述的一种海丰莕菜组织培养快速繁殖方法，其特征在于：所述S3中，固体培养基为添加MS+0.5mg/L6-BAl+0.5mg/LIAA的固体培养基，所述LED照明灯的光照强度为1000-1200lux，且在温度25～28℃条件下培养。
5.根据权利要求1所述的一种海丰莕菜组织培养快速繁殖方法，其特征在于：所述S4中，丛生芽诱导培养基为MS+0.5mg/L6-BAl+0.5mg/LIAA培养基，所述丛生芽诱导时，LED照明灯的光照强度为1000-1200lux，且在温度25～28℃条件下培养。
6.根据权利要求1所述的一种海丰莕菜组织培养快速繁殖方法，其特征在于：所述S5中，增值培养基为MS+1.0mg/L6-BAl+0.5mg/LIAA培养基，所述继代培养使，LED照明灯的光照强度为1000-1200lux，且在温度25～28℃条件下培养。
7.根据权利要求1所述的一种海丰莕菜组织培养快速繁殖方法，其特征在于：所述S6中，生根培养基为MS+1.0mg/LNAA培养基，所述生根培养时，LED照明灯的光照强度为1000-1200lux，且在温度25～28℃条件下培养。
8.根据权利要求1所述的一种海丰莕菜组织培养快速繁殖方法，其特征在于：所述S7中，炼苗过程中需要经常转动瓶身或袋面，让组培苗受光均匀，使练出来的组培苗受光均匀、健康。
9.根据权利要求1所述的一种海丰莕菜组织培养快速繁殖方法，其特征在于：所述S7中，浇水量要求刚好没过植株。
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