CN110201024A - 一种促进创面愈合的含干细胞提取物的组合物及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种促进创面愈合的组合物，包含间充质干细胞提取物和中药提取物，所述中药提取物包含以下组分：佩兰、牛大力、苦丁茶和元宝草。同时，本发明还公开了所述组合物在制备创面愈合的药物中的用途。本申请发明人经过研究发现，间充质干细胞提取物与上述中药提取物复配可产生协同作用，有效抗菌和消炎，促进创面高质量愈合，减少患者疼痛感消失所需的时间，且伤口平整，能抑制疤痕的形成。当间充质干细胞提取物和中药提取物的质量比为1:6时效果最好，创面恢复需要的时间最短，且无明显疤痕形成。

Description

一种促进创面愈合的含干细胞提取物的组合物及其用途

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种促进创面愈合的含干细胞提取物的组合物及其用途。

背景技术

间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是一种负责组织再生和修复的成体干细胞，最初发现于骨髓中，后来研究发现在胎儿肝脏、肺脏、心脏等实质脏器、脐带及脐带血中均提取到了与骨髓基质细胞生物学特性相似、免疫表型相同的干细胞，因此将间质组织来源的与骨髓MSCs生物学性状相似，具有多向分化潜能的细胞统称为间充质干细胞。由于间充质干细胞具有再生和免疫调节的潜能，已在各大领域得到广泛的关注和应用。人类脐带间充质干细胞，尤其是来源于Wharton's jelly(脐带中包绕两条脐动脉和一条脐静脉黏蛋白样结缔组织)被认为是细胞治疗和再生医学中理想的种子细胞。脐带是一种胚胎外组织，因此脐带间充质干细胞具备胚胎干细胞和成体干细胞的双重特性，其自我更新及多向分化潜能明显优于骨髓间充质干细胞。

创伤是正常皮肤(组织)在外界致伤因子如外科手术、外力、热、电流、化学物质、低温以及机体内在因素如局部血液供应障碍等作用下所导致的损害。常见的创伤有手术切开、擦伤、烧伤、烫伤、褥疮、下肢血管性溃疡、糖尿病溃疡以及其他难愈合性创面等。随着社会的发展，各种创伤、老年性疾病、代谢性疾病日益多发，并往往伴随着各种各样的创面问题。创面是临床常见问题，给患者及其家庭造成沉重的经济与心理负担。仅有少数人创面易于愈合，大部分人创面难愈合或形成严重瘢痕，影响患者的生活质量。

发明内容

基于此，本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种促进创面愈合的组合物，其包含间充质干细胞提取物和中药提取物，能有效抗菌和消炎，促进创面高质量愈合，有效缓解疼痛感，降低痛感消失所需的时间，且抑制疤痕的形成。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：一种促进创面愈合的组合物，包含间充质干细胞提取物和中药提取物，所述中药提取物包含以下重量份的组分：佩兰5～30份、牛大力1～10份、苦丁茶0.5～8份和元宝草2.5～20份。

本申请发现，间充质干细胞提取物与所述中药提取物之间可以协同增效，大大提高组合物的促进创面愈合的效果。且只有当所述间充质干细胞提取物与佩兰、牛大力、苦丁茶和元宝草四种中药原料制备的中药提取物复配，得到的组合物才能协同增效；所述间充质干细胞提取物与佩兰、牛大力、苦丁茶和元宝草四种中药原料中的任一种、两种或三种制备成的中药提取物复配，得到的组合物并不能协同增效。

佩兰，别名鸡骨香、水香、兰草；多年生草本，根茎横走；茎直立，绿色或紫红色，下部光滑无毛，叶对生，在下部的叶常枯萎，中部的叶有短柄；微辛、平；入脾、胃、肺经；化湿和中、生津止渴；主治伤暑头痛、无汗发热、胸闷腹满、口中甜腻、口臭。

牛大力，别名猪脚笠、金钟根、山莲藕、倒吊金钟、大力薯；豆科豆科崖豆藤属，以根入药；块根圆柱状或几个纺锤状体连城一串，浅黄色或土黄色，稍粗糙，有环纹；甘，平；归肺、肾经；主治腰肌劳损、风湿性关节炎、肺热、肺虚咳嗽、肺结核、慢性支气管炎、慢性肝炎。

苦丁茶，别名毛叶黄牛木、黄浆果、土茶、茶盖、角刺茶；常绿乔木，叶呈卵状长圆形，革质，不皱缩，有的纵向微卷曲，上面黄绿色或灰绿色，有光泽，下面黄绿色；甘，苦，寒；入肝、肺、胃经；含苦丁皂甙、氨基酸、维生素C、多酚类、黄酮类、咖啡碱、蛋白质等200多种成分；疏风清热，明目生津；主治风热头痛、齿痛、目赤、聤耳、口疮、热病烦渴、泄泻、痢疾。

元宝草：别名对月莲、穿心草、红旱莲；多年生草本植物，全株平滑无毛，叶对生，条状长圆形，长3～6.5cm，两叶基部连合，茎贯穿其中，两面均散生黑色腺点；辛、苦、平；通经活络，消肿解毒，治吐血、风湿关节痛、坐骨神经痛、月经不调、乳腺炎、鼻出血、牙痛、跌打损伤、烧烫伤、毒蛇咬伤。

优选地，所述间充质干细胞提取物和中药提取物的质量比为(0.5～3)：(1～10)。

更优选地，所述间充质干细胞提取物和中药提取物的质量比为1:6。本申请发明人经过大量的研究和统计分析发现，当所述间充质干细胞提取物与中药提取物的质量比为1:6时，两者之间的协同作用最强，组合物所取得的促进创面愈合的效果最好，消除疼痛感所需的时间最短，基本无明显疤痕形成。

优选地，所述中药提取物包含以下重量份的组分：佩兰20份、牛大力3份、苦丁5份和元宝草15份。

本发明还提供了所述间充质干细胞提取物制备方法，包括以下步骤：

(1)取新生儿脐带，分离华通氏胶，剪碎，利用Ⅱ型胶原蛋白酶消化成单细胞悬液，然后接种于含10％胎牛血清的DEME完全培养基中培养；

(2)待步骤(1)中培养的细胞融合度达到80～90％时，对细胞进行传代培养；

(3)取传代至3～5代的细胞，用无血清DEME培养基进行培养，待细胞融合度达到80～90％时，分别收集细胞培养上清液和细胞；

(4)对步骤(3)获得的细胞进行超声提取，提取液过滤，收集滤液，与步骤(3)获得的细胞培养上清液按体积比为(1～2)：1混合均匀，浓缩后冷冻干燥，即得所述间充质干细胞提取物。

优选地，所述步骤(4)中超声提取的条件为：功率250～400W，时间15～30min，超声10s停10s。

本发明还提供了所述中药提取物的制备方法，包括以下步骤：按重量称取各组分，粉碎，按料液比为1：(8～12)加入去离子水，煮沸提取1～2h，过滤，取滤液，浓缩干燥，即得所述中药提取物。

优选地，所述料液比为1:10。

本发明还提供了所述促进创面愈合的组合物在制备促进创面愈合的药物中的用途。

本发明提供的促进创面愈合的组合物能有效促进组织和皮肤再生，可用于制备治疗手术切开、擦伤、烧伤和烫伤的药物。

本发明还提供了一种促进创面愈合的药物，包含所述的促进创面愈合的组合物和药物学上可接受的载体。

优选地，所述药物剂型为膏剂、凝胶剂或溶液剂。

相对于现有技术，本发明的有益效果为：(1)本申请发明人经过研究发现间充质干细胞提取物与佩兰、牛大力、苦丁茶和元宝草之间可产生协同作用，有效抗菌和消炎，促进创面高质量愈合，减少患者疼痛感消失所需的时间，且伤口平整，能抑制疤痕的形成。且只有当所述间充质干细胞提取物与佩兰、牛大力、苦丁茶和元宝草四种中药原料制备的中药提取物复配，得到的组合物才能协同增效；所述间充质干细胞提取物与佩兰、牛大力、苦丁茶和元宝草四种中药原料中的任一种、两种或三种制备成的中药提取物复配，得到的组合物并不能协同增效；(2)当间充质干细胞提取物和中药提取物的质量比为1:6时效果最好，创面恢复需要的时间最短，且无明显疤痕形成。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。

实施例1

本发明所述促进创面愈合的组合物的一种实施例，所述组合物包含间充质干细胞提取物和中药提取物，所述中药提取物包含以下重量份的组分：佩兰5份、牛大力5份、苦丁茶0.5份和元宝草12份。

所述间充质干细胞提取物制备方法包括以下步骤：

(1)取新生儿脐带，用生理盐水清洗后，剪成小段，剥离动脉和静脉，分离得到华通氏胶，剪碎，加入浓度为1mg/mL的Ⅱ型胶原蛋白酶，于37℃消化6h，得到单细胞悬液，加入PBS终止消化，离心，然后接种于含10％胎牛血清的DEME完全培养基中培养；

(2)待步骤(1)中培养的细胞融合度达到80～90％时，对细胞进行传代培养：弃培养上清，加入0.25％胰酶，于37℃消化2～3min，待细胞变圆脱落，加入PBS终止消化，离心弃上清，将细胞接种于含10％胎牛血清的DEME完全培养基中培养；

(3)取传代至3～5代的细胞，用无血清DEME培养基进行培养，待细胞融合度达到80～90％时，分别收集细胞培养上清液和细胞；

(4)对步骤(3)获得的细胞进行超声提取，超声提取的条件为：功率250W，时间30min，超声10s停10s；提取液过滤，收集滤液，与步骤(3)获得的细胞培养上清液按体积比为1：1混合均匀，浓缩后冷冻干燥，即得所述间充质干细胞提取物。

所述中药提取物的制备方法包括以下步骤：按重量称取各组分，粉碎，按料液比为1：10加入去离子水，煮沸提取1h，过滤，取滤液，浓缩干燥，即得所述中药提取物。

将所述间充质干细胞提取物与中药提取物按质量比为0.5：2混合均匀，即得所述促进创面愈合的组合物。

实施例2

本发明所述促进创面愈合的组合物的一种实施例，所述组合物包含间充质干细胞提取物和中药提取物，所述中药提取物包含以下重量份的组分：佩兰12份、牛大力1份、苦丁茶6份和元宝草20份。

所述间充质干细胞提取物制备方法包括以下步骤：

(1)取新生儿脐带，用生理盐水清洗后，剪成小段，剥离动脉和静脉，分离得到华通氏胶，剪碎，加入浓度为1mg/mL的Ⅱ型胶原蛋白酶，于37℃消化6h，得到单细胞悬液，加入PBS终止消化，离心，然后接种于含10％胎牛血清的DEME完全培养基中培养；

(2)待步骤(1)中培养的细胞融合度达到80～90％时，对细胞进行传代培养：弃培养上清，加入0.25％胰酶，于37℃消化2～3min，待细胞变圆脱落，加入PBS终止消化，离心弃上清，将细胞接种于含10％胎牛血清的DEME完全培养基中培养；

(3)取传代至3～5代的细胞，用无血清DEME培养基进行培养，待细胞融合度达到80～90％时，分别收集细胞培养上清液和细胞；

(4)对步骤(3)获得的细胞进行超声提取，超声提取的条件为：功率400W，时间15min，超声10s停10s；提取液过滤，收集滤液，与步骤(3)获得的细胞培养上清液按体积比为1.5：1混合均匀，浓缩后冷冻干燥，即得所述间充质干细胞提取物。

所述中药提取物的制备方法包括以下步骤：按重量称取各组分，粉碎，按料液比为1：8加入去离子水，煮沸提取2h，过滤，取滤液，浓缩干燥，即得所述中药提取物。

将所述间充质干细胞提取物与中药提取物按质量比为3：8混合均匀，即得所述促进创面愈合的组合物。

实施例3

本发明所述促进创面愈合的组合物的一种实施例，所述组合物包含间充质干细胞提取物和中药提取物，所述中药提取物包含以下重量份的组分：佩兰30份、牛大力8份、苦丁茶3份和元宝草2.5份。

所述间充质干细胞提取物制备方法包括以下步骤：

(1)取新生儿脐带，用生理盐水清洗后，剪成小段，剥离动脉和静脉，分离得到华通氏胶，剪碎，加入浓度为1mg/mL的Ⅱ型胶原蛋白酶，于37℃消化6h，得到单细胞悬液，加入PBS终止消化，离心，然后接种于含10％胎牛血清的DEME完全培养基中培养；

(2)待步骤(1)中培养的细胞融合度达到80～90％时，对细胞进行传代培养：弃培养上清，加入0.25％胰酶，于37℃消化2～3min，待细胞变圆脱落，加入PBS终止消化，离心弃上清，将细胞接种于含10％胎牛血清的DEME完全培养基中培养；

(3)取传代至3～5代的细胞，用无血清DEME培养基进行培养，待细胞融合度达到80～90％时，分别收集细胞培养上清液和细胞；

(4)对步骤(3)获得的细胞进行超声提取，超声提取的条件为：功率300W，时间30min，超声10s停10s；提取液过滤，收集滤液，与步骤(3)获得的细胞培养上清液按体积比为2：1混合均匀，浓缩后冷冻干燥，即得所述间充质干细胞提取物。

所述中药提取物的制备方法包括以下步骤：按重量称取各组分，粉碎，按料液比为1：12加入去离子水，煮沸提取1.5h，过滤，取滤液，浓缩干燥，即得所述中药提取物。

将所述间充质干细胞提取物与中药提取物按质量比为3：10混合均匀，即得所述促进创面愈合的组合物。

实施例4

本发明所述促进创面愈合的组合物的一种实施例，所述组合物包含间充质干细胞提取物和中药提取物，所述中药提取物包含以下重量份的组分：佩兰25份、牛大力10份、苦丁茶8份和元宝草18份。

所述间充质干细胞提取物制备方法包括以下步骤：

(1)取新生儿脐带，用生理盐水清洗后，剪成小段，剥离动脉和静脉，分离得到华通氏胶，剪碎，加入浓度为1mg/mL的Ⅱ型胶原蛋白酶，于37℃消化6h，得到单细胞悬液，加入PBS终止消化，离心，然后接种于含10％胎牛血清的DEME完全培养基中培养；

(2)待步骤(1)中培养的细胞融合度达到80～90％时，对细胞进行传代培养：弃培养上清，加入0.25％胰酶，于37℃消化2～3min，待细胞变圆脱落，加入PBS终止消化，离心弃上清，将细胞接种于含10％胎牛血清的DEME完全培养基中培养；

(3)取传代至3～5代的细胞，用无血清DEME培养基进行培养，待细胞融合度达到80～90％时，分别收集细胞培养上清液和细胞；

(4)对步骤(3)获得的细胞进行超声提取，超声提取的条件为：功率350W，时间20min，超声10s停10s；提取液过滤，收集滤液，与步骤(3)获得的细胞培养上清液按体积比为1：1混合均匀，浓缩后冷冻干燥，即得所述间充质干细胞提取物。

所述中药提取物的制备方法包括以下步骤：按重量称取各组分，粉碎，按料液比为1：9加入去离子水，煮沸提取2h，过滤，取滤液，浓缩干燥，即得所述中药提取物。

将所述间充质干细胞提取物与中药提取物按质量比为2：1混合均匀，即得所述促进创面愈合的组合物。

实施例5

本发明所述促进创面愈合的组合物的一种实施例，所述组合物包含间充质干细胞提取物和中药提取物，所述中药提取物包含以下重量份的组分：佩兰20份、牛大力3份、苦丁5份和元宝草15份。

所述间充质干细胞提取物制备方法包括以下步骤：

(1)取新生儿脐带，用生理盐水清洗后，剪成小段，剥离动脉和静脉，分离得到华通氏胶，剪碎，加入浓度为1mg/mL的Ⅱ型胶原蛋白酶，于37℃消化6h，得到单细胞悬液，加入PBS终止消化，离心，然后接种于含10％胎牛血清的DEME完全培养基中培养；

(2)待步骤(1)中培养的细胞融合度达到80～90％时，对细胞进行传代培养：弃培养上清，加入0.25％胰酶，于37℃消化2～3min，待细胞变圆脱落，加入PBS终止消化，离心弃上清，将细胞接种于含10％胎牛血清的DEME完全培养基中培养；

(3)取传代至3～5代的细胞，用无血清DEME培养基进行培养，待细胞融合度达到80～90％时，分别收集细胞培养上清液和细胞；

(4)对步骤(3)获得的细胞进行超声提取，超声提取的条件为：功率300W，时间25min，超声10s停10s；提取液过滤，收集滤液，与步骤(3)获得的细胞培养上清液按体积比为1.5：1混合均匀，浓缩后冷冻干燥，即得所述间充质干细胞提取物。

所述中药提取物的制备方法包括以下步骤：按重量称取各组分，粉碎，按料液比为1：10加入去离子水，煮沸提取1h，过滤，取滤液，浓缩干燥，即得所述中药提取物。

将所述间充质干细胞提取物与中药提取物按质量比为1：6混合均匀，即得所述促进创面愈合的组合物。

实施例6

本实施例研究所述促进创面愈合的组合物在治疗烧伤患者时的效果。

取相同重量的实施例1～5中促进创面愈合的组合物，按组合物与凡士林的重量比为1:10称取凡士林，将所述组合物与凡士林混合均匀，即得到可直接使用的药膏。

选取深二度烧伤患者50例(均告知患者治疗方案，并取得患者的同意)，随机分为5组，每组10例患者。经统计分析，各组患者在年龄、性别和烧伤程度上无统计学差异，各组结果具有可比性。各组患者分别使用实施例1～5中组合物制备得到的药膏，使用方法为：患者清创后，在创面上均匀涂敷本发明药膏，外用消毒纱布包扎，每隔12h涂药一次。各组患者在使用本发明药膏的疗程中不再额外使用其他药物治疗，期间如果患者发生过敏不适或病程加重则退出实验，改用其他方法治疗。

利用以下指标评价各组药膏的治疗效果：平均疼痛缓解时间、平均疼痛消失时间、创面平均愈合时间和留疤痕比例。

整个研究过程中无患者出现过敏不适或病程加重等现象，无患者退出研究。各实施例组合物制备得到的药膏的疗效如表1所示：

表1各实施例组合物制备得到的药膏的疗效

由上述结果可知，实施例1～5中促进创面愈合的组合物能有效促进烧伤患者创面的愈合，平均疼痛缓解时间、平均疼痛消失时间和创面平均愈合时间均较短，且50例患者中仅有2例患者痊愈后留下轻微疤痕。其中，实施例5中促进创面愈合的组合物治疗效果最好，平均疼痛缓解时间、平均疼痛消失时间和创面平均愈合时间最短；说明所述间充质干细胞提取物和中药提取物的质量比为1：6时可取得最好的治疗效果。所有患者在治疗过程中均无出现过敏或不适现象，说明本发明组合物安全高效，无副作用。

实施例7

本实施例以实施例5中组合物为例，研究本发明促进创面愈合的组合物中间充质干细胞提取物和中药提取物的协同效果。

设置4个实验组，分别使用实施例5组合物、实施例5组合物中间充质干细胞提取物和实施例5组合物中中药提取物制备得到的药膏进行实验，同时设置空白组。具体如表2所示：

表2实验设计

组别	药膏活性成分
		实验组1	实施例5组合物
实验组2	实施例5组合物中间充质干细胞提取物
		实验组3	实施例5组合物中中药提取物
空白组	生理盐水

按表2中的设计称取相同重量的药膏活性成分，按实施例6所述方法制备得到实验用的药膏。

选取8周龄的雄性SD大鼠60只，随机分为4组，各组大鼠制备皮肤破损模型：直径2cm的伤口，伤口深度一样。各组大鼠造模成功后，实验组1～3分别涂抹相应的药膏进行治疗，每只大鼠涂抹计量相同，间隔12h涂抹一次；空白组涂抹生理盐水。给药后每隔1～2天(实验前期间隔2天，后期间隔1天)对伤口的直径进行测量，记录数据，实验结束后对数据进行统计分析。

实验结果如表3所示：

表3各组大鼠给药治疗后伤口直径测量结果

给药后天数	空白组(cm)	实验组1(cm)	实验组2(cm)	实验组3(cm)
					第0天	2.00	2.00	2.00	2.00
第2天	1.58	1.16	1.34	1.52
					第4天	1.21	0.38	0.85	1.18
第5天	1.13	0	0.64	0.94
					第6天	0.89	0	0.41	0.73
第7天	0.61	0	0.22	0.51
					第8天	0.40	0	0.12	0.33
第9天	0.31	0	0	0.16
					第10天	0.13	0	0	0
第12天	0	0	0	0

由表3中的实验结果可知，本发明实施例5组合物(实验组1)促进小鼠伤口愈合的效果最好，在治疗第5天时小鼠伤口即可痊愈。实施例5中组合物(实验组1)包含间充质干细胞提取物和中药提取物，两者可产生明显的协同作用，使组合物促进伤口愈合的效果显著优于单独使用间充质干细胞提取物(实验组2)和中药提取物(实验组3)进行治疗。本发明其他实施例中组合物也能有效促进大鼠伤口愈合，但效果较实施例5组合物稍差，但还是明显优于单独使用间充质干细胞提取物和中药提取物进行治疗的效果，具体数据省略。

实施例8

本申请发明人发现只有当所述间充质干细胞提取物与佩兰、牛大力、苦丁茶和元宝草四种中药原料制备的中药提取物复配，得到的组合物才能协同增效；所述间充质干细胞提取物与佩兰、牛大力、苦丁茶和元宝草四种中药原料中的任一种、两种或三种制备成的中药提取物复配，得到的组合物并不能协同增效。

以实施例5中组合物为例，研究所述间充质干细胞提取物与所述中药提取物之间的协同效果，设置实验组4～10，分别将所述间充质干细胞提取物与佩兰、牛大力、苦丁茶和元宝草中任一种、两种或三种制备得到的中药提取物进行复配，具体如表4所示：

表4实验设计

组别	中药提取物原料
		实验组4	佩兰+牛大力+苦丁茶+元宝草
实验组5	佩兰
		实验组6	苦丁茶
实验组7	佩兰+牛大力
		实验组8	苦丁茶+元宝草
实验组9	佩兰+牛大力+苦丁茶
		实验组10	牛大力+苦丁茶+元宝草

根据表4的设计，按实施例5所述中药提取物组分总重量份称取相应的原料，制备得到各组中药提取物，制备方法同实施例5。将各组制备得到的中药提取物与实施例5所述间充质干细胞提取物按1:6混合得到组合物，然后按组合物与凡士林的重量比为1:10称取凡士林，将各组组合物与凡士林混合均匀，即得到可直接使用的药膏。

选取8周龄的雄性SD大鼠70只，随机分为7组，各组大鼠制备皮肤破损模型：直径2cm的伤口，伤口深度一样。各组大鼠造模成功后，分别涂抹相应的药膏进行治疗，每只大鼠涂抹计量相同，间隔12h涂抹一次。给药后每隔1～2天(实验前期间隔2天，后期间隔1天)对伤口的直径进行测量，记录数据，实验结束后对数据进行统计分析。

实验结果如表5所示：

表5各组大鼠给药治疗后伤口直径测量结果

由上述结果可知，所述间充质干细胞提取物只有与佩兰、牛大力、苦丁茶和元宝草四种中药原料制备的中药提取物复配，得到的组合物才具有协同效果(实验组4)，有效促进创面高质量愈合。所述间充质干细胞提取物与佩兰、牛大力、苦丁茶和元宝草四种中药原料中的一种、两种或三种制备成的中药提取物复配，得到的组合物并不能协同增效(实验组5～10)，其对创面愈合的治疗效果与单独使用所述间充质干细胞提取物相似。所述间充质干细胞提取物与佩兰、牛大力、苦丁茶和元宝草四种中药原料中其他一种、两种或三种制备成的中药提取物复配，得到的组合物也不具备协同作用，效果与本实施例类似，具体数据省略。

实施例9

何某，女性，46岁，经诊断为深二度烧伤。何某为疤痕体质，以往创面愈合后很容易留下疤痕。在此次治疗过程中，何某使用本发明实施例5组合物制备得到的药膏(药膏制备方法同实施例6)，清创后将所述药膏均匀涂抹于创面，每天早晚各一次。据何某反馈，涂抹本发明药膏约2min左右，痛感得到有效缓解，3.5h后痛感基本消失；创面于第6天完全愈合，期间没有出现感染或发炎症状。创面愈合后无明显可见的疤痕，愈合质量高。

最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (10)

1.一种促进创面愈合的组合物，其特征在于，包含间充质干细胞提取物和中药提取物，所述中药提取物包含以下重量份的组分：佩兰5～30份、牛大力1～10份、苦丁茶0.5～8份和元宝草2.5～20份。

2.根据权利要求1所述的促进创面愈合的组合物，其特征在于，所述间充质干细胞提取物和中药提取物的质量比为(0.5～3)：(1～10)。

3.根据权利要求2所述的促进创面愈合的组合物，其特征在于，所述间充质干细胞提取物和中药提取物的质量比为1:6。

4.根据权利要求3所述的促进创面愈合的组合物，其特征在于，所述中药提取物包含以下重量份的组分：佩兰20份、牛大力3份、苦丁5份和元宝草15份。

5.根据权利要求1～4任一项所述的促进创面愈合的组合物，其特征在于，所述间充质干细胞提取物制备方法包括以下步骤：

(1)取新生儿脐带，分离华通氏胶，剪碎，利用Ⅱ型胶原蛋白酶消化成单细胞悬液，然后接种于含10％胎牛血清的DEME完全培养基中培养；

(2)待步骤(1)中培养的细胞融合度达到80～90％时，对细胞进行传代培养；

(3)取传代至3～5代的细胞，用无血清DEME培养基进行培养，待细胞融合度达到80～90％时，分别收集细胞培养上清液和细胞；

(4)对步骤(3)获得的细胞进行超声提取，提取液过滤，收集滤液，与步骤(3)获得的细胞培养上清液按体积比为(1～2)：1混合均匀，浓缩后冷冻干燥，即得所述间充质干细胞提取物。

6.根据权利要求5所述的促进创面愈合的组合物，其特征在于，所述步骤(4)中超声提取的条件为：功率250～400W，时间15～30min，超声10s停10s。

7.根据权利要求1～4任一项所述的促进创面愈合的组合物，其特征在于，所述中药提取物的制备方法包括以下步骤：按重量称取各组分，粉碎，按料液比为1：(8～12)加入去离子水，煮沸提取1～2h，过滤，取滤液，浓缩干燥，即得所述中药提取物。

8.根据权利要求1～7任一项所述的促进创面愈合的组合物在制备促进创面愈合的药物中的用途。

9.一种促进创面愈合的药物，其特征在于，包含权利要求1～7任一项所述的促进创面愈合的组合物和药物学上可接受的载体。

10.根据权利要求9所述的促进创面愈合的药物，其特征在于，所述药物剂型为膏剂、凝胶剂或溶液剂。