CN110184345B - 用于检测精神及神经类疾病用药相关snp位点的引物组、应用、产品及方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种用于检测精神及神经类疾病用药相关SNP位点的引物组、应用、产品及方法，涉及生物技术领域，本发明提供的用于检测精神及神经类疾病用药相关SNP位点的引物组，对应的SNP位点包括rs3892097、rs28371725、rs2742390、rs762551、rs4713916、rs12248560、rs1799978、rs1160351、rs1065852、rs951439、rs4532、rs776746、rs1415744、rs1902023、rs6295、rs1360780、rs1414334、rs7997012、rs5030865、rs489693、rs10484555、rs144012689、rs2571375、rs2234922、rs1051740、rs3812718、rs2011425、rs1799853、rs1057910、rs4244285、rs4986893、rs1045642、rs113994095、rs113994097、rs1800497、rs2032582、rs2298771和rs2304016。该引物组针对与精神及神经类疾病用药相关的主要突变位点进行设计，特异性强，检测结果可同时指导多种精神及神经类疾病的合理用药，预防药物不良反应，实现药物的个体化治疗。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种用于检测精神及神经类疾病用药相关SNP位点的引物组、应用、产品及方法。
背景技术
精神疾病主要指在各种生物学、心理学以及社会环境因素影响下，大脑功能失调、导致认知、情感、意志和行为等精神活动出现不同程度障碍为临床表现的疾病。主要分为轻型精神疾病和重型精神疾病，常见的轻型精神疾病有抑郁症、焦虑症、强迫症等，常见的重型精神疾病有精神分裂症等。神经类疾病是指发生于中枢神经系统、周围神经系统、植物神经系统的以感觉、运动、意识、植物神经功能障碍为主要表现的疾病。常见的主要有脑出血、癫痫、阿尔兹海默症等等。著名英国医学期刊《柳叶刀》在2009年发表研究报告，估计中国大约有1.73亿人遭受精神类疾病，而92％的人从未接受过专业治疗。截至2017年底，全国精神障碍患者达2.43亿人，总患病率高达17.5％；严重精神障碍患者超1600万人，发病率超过1％，而且这一数字还在逐年增长。
目前，无论精神还是神经类疾病的治疗方式主要还是药物治疗，尽管用于抗精神及神经类疾病的药物种类很多，但临床治疗效果却不理想，有30～50％的患者对药物应答不佳，甚至可能面临众多不良反应，严重影响了患者的生活质量。药物基因组学是研究由药物代谢(药物代谢动力学效应)以及药物受体和其他效应器(药物药效动力学效应)的多态性所引起的人群中及人群间药物剂量反应的差异，从而解决为什么不同的病人对同一种药物有不同反应这一临床难题的学科。药物代谢酶的遗传多态性是药物发挥疗效时引发个体差异的重要因素，药物代谢酶和药物作用靶点基因特性的变化可影响药物的体内浓度和靶组织对药物的敏感性，导致药物反应性(包括药物的疗效和不良反应发生)差异。因此，对药物代谢酶和药物靶点基因进行检测可指导临床针对特定的患者选择合适的药物和给药剂量，实现个体化用药，从而提高药物治疗的有效性和安全性，防止严重药物不良反应的发生。
目前，药物代谢酶和药物作用靶点基因检测的方法主要有Sanger测序、探针法、基因芯片法、ARMS法等等，精神及神经类药物基因检测的方法亦如此。但上述方法都存在通量低、检测位点较少及价格昂贵等缺点，尤其是ARMS方法引物设计困难，对技术人员要求较高。
因此，为了克服现有技术的壁垒，亟需一种价格低廉、准确性高、检测时间短、通量高的技术来实现精神及神经类疾病用药相关SNP的快速检测。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的第一个目的在于提供一种用于检测精神及神经类疾病用药相关SNP位点的引物组，以至少缓解现有技术中存在的技术问题之一。
本发明的第二个目的在于提供上述的用于检测精神及神经类疾病用药相关SNP位点的引物组在制备用于检测精神及神经类疾病的产品中的应用。
本发明的第三个目的在于提供一种用于检测精神及神经类疾病的产品，以缓解现有技术中缺少能够高通量、易操作且低成本的针对精神及神经类疾病进行用药检测的产品的技术问题。
本发明的第四个目的在于提供一种检测精神及神经类疾病用药相关SNP位点的方法，以缓解现有的检测方法通量较低、操作繁琐、价格昂贵等技术问题。
本发明提供了一种用于检测精神及神经类疾病用药相关SNP位点的引物组，所述引物组对应的SNP位点包括rs3892097、rs28371725、rs2742390、rs762551、rs4713916、rs12248560、rs1799978、rs1160351、rs1065852、rs951439、rs4532、rs776746、rs1415744、rs1902023、rs6295、rs1360780、rs1414334、rs7997012、rs5030865、rs489693、rs10484555、rs144012689、rs2571375、rs2234922、rs1051740、rs3812718、rs2011425、rs1799853、rs1057910、rs4244285、rs4986893、rs1045642、rs113994095、rs113994097、rs1800497、rs2032582、rs2298771和rs2304016。
进一步地，所述引物组包括38对引物对，所述引物对包括如SEQ ID NO.1-76所示的核苷酸序列，或与SEQ ID NO.1-76所示的核苷酸序列具有至少85％同一性的核苷酸序列。
进一步地，所述引物组还包括性别鉴定引物对，所述性别鉴定引物对包括如SEQID NO.77-78所示的核苷酸序列，或与SEQ ID NO.77-78所示的核苷酸序列具有至少85％同一性的核苷酸序列。
进一步地，所述引物组还包括39个延伸引物，所述延伸引物包括如SEQ ID NO.79-117所示的核苷酸序列，或与SEQ ID NO.79-117所示的核苷酸序列具有至少85％同一性的核苷酸序列。
进一步地，所述精神及神经类疾病包括精神分裂症、抑郁症、焦虑症、偏头痛、多动症和癫痫。
本发明还提供了上述的用于检测精神及神经类疾病用药相关SNP位点的引物组在制备用于检测精神及神经类疾病的产品中的应用。
本发明还提供了一种用于检测精神及神经类疾病用药的产品，所述产品包括上述的引物组；
优选地，所述产品还包括用于检测SNP位点的试剂和/或软件；
优选地，所述软件包括MassARRAY软件，优选为MassARRAY Type4.1。
另外，本发明还提供了一种检测精神及神经类疾病用药相关SNP位点的方法，所述方法包括应用上述的用于检测精神及神经类疾病用药相关SNP位点的引物组对待测样品基因组中SNP位点的核苷酸序列进行检测。
进一步地，应用上述的用于检测精神及神经类疾病用药相关SNP位点的引物组对待测对象基因组进行PCR扩增和单碱基延伸反应，然后应用MassARRAY平台对反应产物进行检测，确定所述待测对象基因组中SNP位点的基因型；
优选地，所述方法还包括在单碱基延伸反应前对PCR产物进行去磷酸化的步骤；
优选地，所述方法还包括在单碱基延伸反应后对所述反应产物进行纯化的步骤，然后再应用MassARRAY平台检测所述反应产物。
进一步地，将所述引物组分为如下2组检测待测对象基因组中SNP位点的基因型：
第一组包括检测rs3892097、rs28371725、rs2742390、rs762551、rs4713916、rs12248560、rs1799978、rs1160351、rs1065852、rs951439、rs4532、rs776746、rs1415744、rs1902023、rs6295、rs1360780、rs1414334、rs7997012、rs5030865和rs489693的引物组；
第二组包括检测rs10484555、rs144012689、rs2571375、rs2234922、rs1051740、rs3812718、rs2011425、rs1799853、rs1057910、rs4244285、rs4986893、rs1045642、rs113994095、rs113994097、rs1800497、rs2032582、rs2298771和rs2304016的引物组；
优选地，所述第二组还包括检测AMEL的引物组。
本发明提供的用于检测精神及神经类疾病用药相关SNP位点的引物组，包括如SEQID NO.1-76所示的核苷酸序列，或与SEQ ID NO.1-76所示的核苷酸序列具有至少85％同一性的核苷酸序列。
本发明有益效果：
1)本发明引物组针对与精神及神经类疾病用药相关的主要突变位点进行设计，可以对与精神及神经类疾病相关的26个基因的38个位点突变进行特异性检测，特异性强，检测结果可同时指导精神分裂症、抑郁症、焦虑症、偏头痛、多动症以及癫痫等多种精神及神经类疾病的合理用药，预防药物不良反应，实现药物的个体化治疗。具体涉及包括氟西汀、右旋安非他明、阿戈美拉汀、利培酮、氟哌啶醇等药物，实现个体化用药。
2)本发明经过多个SNP位点的选取和优化筛选，以及多重引物序列和引物体系的最优化，所有引物序列都能对样本进行准确分型，同时也能够达到质谱检测技术的要求，实现在多重扩增体系内检测的灵敏度、兼容性、准确性和精密性，实现应用MassARRAY平台对待测样品的药物代谢能力进行快速有效的检测。
3)本发明综合考虑不同多重体系间的干扰问题，对引物进行合理分组。本发明仅2个反应孔，一块384孔板即可完成多达190个样本的检测，且操作简单，检测结果直观可看，省去生信分析的流程和时间，特别适于批量检测。
4)本发明提供的用于检测精神及神经类疾病用药的产品，包括用于检测SNP位点的试剂和/或软件以及本发明提供的引物组，该用于检测精神及神经类疾病的产品能够对与精神及神经类疾病用药相关的位点突变实现特异性检测，具有检测成本低、检测周期短、操作简单且准确度高的优点，具有极大的临床应用价值及非常开阔的市场推广前景。
5)本发明提供的检测精神及神经类疾病用药相关SNP位点的方法，包括应用上述的引物组检测待测对象基因组中SNP位点的基因型。该方法操作步骤简单，首次将核酸质谱平台与精神及神经类疾病个体化用药基因检测相结合，该检测方法经济、高效、快速，可在临床中大面积推广，大大减轻患者的用药风险，从而实现个体化用药，市场反馈极好。
6)本发明提供的检测精神及神经类疾病用药的产品既可以指导某一类精神及神经类疾病的用药，又可以综合同时指导某几种精神及神经类疾病的用药，用药指导灵活。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1A为本发明实施例1提供的应用PCR程序1进行检测的聚类图；
图1B为本发明实施例1提供的应用PCR程序2进行检测的聚类图；
图2A为本发明实施例1提供的rs3892097假阳性峰的结果图；
图2B为本发明实施例1提供的rs5030865假阳性峰的结果图；
图3A为本发明实施例1提供的rs3892097正常峰的结果图；
图3B为本发明实施例1提供的rs5030865正常峰的结果图；
图4A为本发明实施例1提供的更改引物前的rs144012689的聚类峰图；
图4B为本发明实施例1提供的更改引物后的rs144012689的聚类峰图；
图5A为本发明实施例2提供的sample1号样本rs1800497位点的MassARRAY峰图；
图5B为本发明实施例2提供的sample1号样本rs1800497位点的Sanger测序图谱；
图6A为本发明实施例2提供的sample18号样本rs1360780位点的MassARRAY峰图；
图6B为本发明实施例2提供的sample18号样本rs1360780位点的Sanger测序图谱。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
除非本文另有定义，连同本发明使用的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员通常理解的含义。术语的含义和范围应当清晰，然而，在任何潜在不明确性的情况下，本文提供的定义优先于任何字典或外来定义。在本申请中，除非另有说明，“或”的使用意味着“和/或”。此外，术语“包括”及其他形式的使用是非限制性的。
一般地，连同本文描述的细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学以及蛋白和核酸化学和杂交使用的命名法和其技术是本领域众所周知和通常使用的那些。除非另有说明，本发明的方法和技术一般根据本领域众所周知，且如各种一般和更具体的参考文献中所述的常规方法来进行，所述参考文献在本说明书自始至终引用和讨论。酶促反应和纯化技术根据制造商的说明书、如本领域通常实现的或如本文所述来进行。连同本文描述的分析化学、合成有机化学以及医学和药物化学使用的命名法、以及其实验室程序和技术是本领域众所周知和通常使用的那些。
根据本发明的一个方面，提供了一种用于检测精神及神经类疾病相关SNP位点的引物组，所述引物组对应的SNP位点包括rs3892097、rs28371725、rs2742390、rs762551、rs4713916、rs12248560、rs1799978、rs1160351、rs1065852、rs951439、rs4532、rs776746、rs1415744、rs1902023、rs6295、rs1360780、rs1414334、rs7997012、rs5030865、rs489693、rs10484555、rs144012689、rs2571375、rs2234922、rs1051740、rs3812718、rs2011425、rs1799853、rs1057910、rs4244285、rs4986893、rs1045642、rs113994095、rs113994097、rs1800497、rs2032582、rs2298771和rs2304016。
该引物组针对与精神及神经类疾病用药相关的主要突变位点进行设计，可以对与精神及神经类疾病用药相关的位点突变进行特异性检测，特异性强，检测结果可同时指导精神分裂症、抑郁症、焦虑症、偏头痛、多动症以及癫痫等多种精神及神经类疾病的合理用药，预防药物不良反应，实现药物的个体化治疗。具体涉及包括氟西汀、右旋安非他明、阿戈美拉汀、利培酮、氟哌啶醇等药物，实现个体化用药。
所述引物组包括38对引物对，所述引物对包括如SEQ ID NO.1-76所示的核苷酸序列，或与SEQ ID NO.1-76所示的核苷酸序列具有至少85％同一性的核苷酸序列。
本发明经过多个位点的引物更改优化及大样本测试实验，得出了最优的引物序列，所有引物序列都能对样本进行准确分型，同时也能够达到质谱检测技术的要求，实现应用MassARRAY平台对待测样品的药物代谢能力进行快速有效的检测。
可以理解的是，本发明中所述的引物对为PCR引物对；术语“同一性”指的是核苷酸序列间的相似性。“同一性”包括与本发明所述的SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.76所示的单链DNA具有至少85％(例如可以为，但不限于85％、90％、95％或者更高)同一性的核苷酸序列。
需要说明的是，本发明中的每一对引物对均独立地包括一个上游引物和一个下游引物，其中，上游引物包括如SEQ ID NO.1-38所示的核苷酸序列，或与SEQ ID NO.1-38所示的核苷酸序列具有至少85％同一性的核苷酸序列，下游引物包括如SEQ ID NO.39-76所示的核苷酸序列，或与SEQ ID NO.39-76所示的核苷酸序列具有至少85％同一性的核苷酸序列。因此，可以理解的是，本发明中的引物对的对应关系例如，第一引物对包括如SEQ IDNO.1所示的核苷酸序列的上游引物和如SEQ ID NO.39所示的核苷酸序列的下游引物、第二引物对包括如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列的上游引物和如SEQ ID NO.40所示的核苷酸序列的下游引物、第三引物对包括如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列的上游引物和如SEQID NO.41所示的核苷酸序列的下游引物等。
在一些优选的实施方式中，所述引物组还包括性别鉴定引物对，所述性别鉴定引物对包括如SEQ ID NO.77-78所示的核苷酸序列，或与SEQ ID NO.77-78所示的核苷酸序列具有至少85％同一性的核苷酸序列。
可以理解的是，因本发明的检测位点中包含一条X染色体上的位点rs1414334，故本发明在反应体系中加设能够检测性别鉴定位点的性别鉴定引物对，研究表明该性别位点在中国人群中的突变频率不到万分之三，可作为本发明受检测人员的二次确认并明确rs1414334位点的基因型(当rs1414334位点只有一个报出峰“N”时，若检测样本为男性样本，则报出基因型为“N”，若检测样本为女性，则报出基因型为“NN”)，增加引用本发明提供的引物组进行精神及神经类疾病相关SNP位点检测的结果准确性。
在一些优选的实施方式中，当实际检测过程中需要延伸引物时，所述引物组还包括39个延伸引物，所述延伸引物包括如SEQ ID NO.79-117所示的核苷酸序列，或与SEQ IDNO.79-117所示的核苷酸序列具有至少85％同一性的核苷酸序列。
可以理解的是，本发明中引物对和延伸引物一一对应，且对应的引物对和延伸引物用于检测同一位点的核苷酸。例如，第一引物对包括如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列的上游引物、如SEQ ID NO.39所示的核苷酸序列的下游引物和如SEQ ID NO.79所示的核苷酸序列的延伸引物，上述引物均用于检测同一位点的核苷酸；第二引物对包括如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列的上游引物、如SEQ ID NO.40所示的核苷酸序列的下游引物和如SEQ IDNO.80所示的核苷酸序列的延伸引物，上述引物均用于检测同一位点的核苷酸；第三引物对包括如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列的上游引物、如SEQ ID NO.41所示的核苷酸序列的下游引物和如SEQ ID NO.81所示的核苷酸序列的延伸引物，上述引物均用于检测同一位点的核苷酸等。
在一些优选的实施方式中，所述精神及神经类疾病包括精神分裂症、抑郁症、焦虑症、偏头痛、多动症和癫痫。
具体地，26个基因的38个位点，以及性别鉴定基因的相关信息见下表：
进一步的，在一些具体的实施方式中，部分位点不同基因型对应的用药建议，具体见下表：
根据本发明的第二方面，提供了上述的用于检测精神及神经类疾病用药相关SNP位点的引物组在制备用于检测精神及神经类疾病用药的产品中的应用。
根据本发明的第三方面，提供了一种用于检测精神及神经类疾病用药的产品，所述产品包括上述的引物组。
该用于检测精神及神经类疾病用药的产品能够对与精神及神经类疾病用药相关的位点突变实现特异性检测，具有检测成本低、检测周期短、操作简单且准确度高的优点，具有极大的临床应用价值及非常开阔的市场推广前景。
优选地，所述产品还包括用于检测SNP位点的试剂和/或软件。
可以理解的是，所述用于检测SNP位点的试剂和/或软件可以为可通过市售购得的、本领域用于检测SNP位点核苷酸的常规通用试剂和/或软件，例如，可以为用于检测SNP位点核苷酸的试剂或试剂盒，或者为用于检测SNP位点核苷酸的包括试剂的试剂盒。
优选地，所述软件包括MassARRAY软件，优选为MassARRAY Type4.1。
根据本发明的第四方面，提供了一种检测精神及神经类疾病用药相关SNP位点的方法，所述方法包括应用上述的用于检测精神及神经类疾病用药相关SNP位点的引物组对待测样品基因组中SNP位点的核苷酸进行检测。
该方法操作步骤简单，首次将核酸质谱平台与精神及神经类疾病个体化用药基因检测相结合，该检测方法经济、高效、快速，特别适合在临床中推广。
可以理解的是，本发明可以对待测对象的全基因组进行检测，也可以筛选特定基因进行检测(例如对rs3892097、rs28371725、rs2742390、rs762551、rs4713916、rs12248560、rs1799978、rs1160351、rs1065852、rs951439、rs4532、rs776746、rs1415744、rs1902023、rs6295、rs1360780、rs1414334、rs7997012、rs5030865、rs489693、rs10484555、rs144012689、rs2571375、rs2234922、rs1051740、rs3812718、rs2011425、rs1799853、rs1057910、rs4244285、rs4986893、rs1045642、rs113994095、rs113994097、rs1800497、rs2032582、rs2298771和rs2304016特定的基因进行检测)，当对特定的基因进行检测时，干扰更小，检测结果更加精确。
需要说明的是，本发明提供的检测精神及神经类疾病用药相关SNP位点的方法为非疾病的诊断与治疗目的。
在一些优选的实施方式中，应用上述的用于检测精神及神经类疾病用药相关SNP位点的引物组对待测对象基因组进行PCR扩增和单碱基延伸反应，然后应用MassARRAY平台对反应产物进行检测，确定所述待测对象基因组中SNP位点的基因型。
MassARRAY技术为基于MALDT-TOF飞行时间质谱技术而得到的基因分析技术，该MassARRAY技术先通过PCR扩增目标序列，然后根据需要加入特定的对应延伸引物，在SNP位点上进行碱基的延伸。由于质谱分析对质量的灵敏度特别高，因此该技术能够有效将仅有一个不同碱基的两段基因序列区别开，进而推到出SNP分型，检测限低、灵敏度高。
在本发明的优选实施方式中采用MassARRAY平台进行检测，可在同一反应孔中同时检测多达20个SNP位点，适合批量检测，极大的提高了检测效率，为个体化用药提供参考。并且，所需样本的适应性强，外周血和口腔脱落细胞均能较好的检出。
优选地，所述方法还包括在单碱基延伸反应前对PCR产物进行去磷酸化的步骤；具体地，使用虾碱性磷酸酶对PCR产物进行去磷酸化。
优选地，所述方法还包括在单碱基延伸反应后对所述反应产物进行纯化的步骤，然后再应用MassARRAY平台检测所述反应产物。具体地，可使用树脂盐脱的方式对反应产物进行纯化。
在一些优选的实施方式中，将所述引物组分为如下2组检测待测对象基因组中SNP位点的核苷酸：
第一组包括检测rs3892097、rs28371725、rs2742390、rs762551、rs4713916、rs12248560、rs1799978、rs1160351、rs1065852、rs951439、rs4532、rs776746、rs1415744、rs1902023、rs6295、rs1360780、rs1414334、rs7997012、rs5030865和rs489693的引物组；
第二组包括检测rs10484555、rs144012689、rs2571375、rs2234922、rs1051740、rs3812718、rs2011425、rs1799853、rs1057910、rs4244285、rs4986893、rs1045642、rs113994095、rs113994097、rs1800497、rs2032582、rs2298771和rs2304016的引物组。
优选地，所述第二组还包括检测AMEL的引物组。
该分组综合考虑到所检测的SNP位点的间隔距离、延伸引物大小等因素，保证了每组内引物间互相无干扰，避免假阳性的产生。
在一个具体的实施方式中，通过如下方法检测精神及神经类疾病用药相关SNP位点：
1、多重引物设计：进行39个位点(包括性别鉴定位点AMEL)的PCR和UEP的引物设计。
2、多重引物配制：按照计算好的引物配制表进行扩增引物MIX和延伸引物MIX的配制，后并进行延伸引物MIX的微调，以最低峰达到最高峰的一半以上时为微调成功。
3、目的片段扩增：待测DNA样品稀释至所需浓度并与扩增引物MIX进行多重PCR反应，获取含目标SNP位点的PCR产物混合物。
4、虾碱性磷酸酶(SAP)消化：配制SAP混液并加入到上述步骤3中进行反应，以消化上述PCR产物中剩余的dNTP。
5、单碱基延伸反应：配制延伸反应混液与步骤4中消化后的产物进行单碱基延伸反应，获取多重位点的延伸产物。
6、树脂纯化：在步骤5的延伸产物中加入适量的树脂，纯化延伸产物。
7、点样分析：使用MassARRAY CPM系统进行自动点样分析，得出各位点的基因分析图谱。
8、结果分析及判断：首先分析NTC孔，观察有无假阳性出峰；然后分析各位点的聚类、转化效率及出峰情况，以出峰明显、聚类清晰且转化效率在50％以上的位点为成功指标。若达不到上述指标可通过增加PCR或UEP引物来实现，若还是达不到成功指标则重新设计引物并重复按上述流程。
下面通过具体的实施例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。
本发明实施例中用到的主要试剂信息如下：
本发明实施例中用到的主要仪器信息如下：
实施例1引物序列及引物浓度优化
疾病类型的组合及SNP位点的选择
本发明所选的疾病种类和SNP位点依据中国人特征而定，均为中国人群常见所患精神及神经类疾病，所选SNP位点包括药物作用靶点基因、药物代谢与清除基因、参与药物转运的基因等等，能够指导多达53种精神及神经类药物的剂量选择与使用，可为患者的选药决策提供更多的信息，使之能够得到个体化治疗、降低药物不良反应的发生。
(1)引物序列优化
首先登录MassARRAY网址，打开Assay Design Suite V2.0，调整相关参数(忽略突变频率小于0.1％的SNP位点)，初步进行PCR和UEP的引物设计，导出设计引物序列信息，并将引物合成。按照引物配置表配制扩增引物MIX和延伸引物MIX，微调延伸引物MIX直至符合要求。然后进行引物测试和优化。
首先，PCR扩增程序优化。本实施例所设计的引物体系经不同PCR程序(其他所有条件均相同)测试后部分位点的实验结果相差很大，PCR程序1的检测效果明显优于PCR程序2，具体的PCR程序见下表：
表1 PCR程序1(56℃退火)
表2 PCR程序2(60℃退火)
更进一步，为了更好的展现上述测试效果，在此以rs2304016位点为例，在所有条件均相同仅PCR扩增程序不同时，用PCR程序1测试所有样本都能较好分型，而用PCR程序2测试时所有样本均无转化，可知rs2304016位点的PCR扩增引物在退火温度为60℃时无扩增，UEP引物无法延伸，具体的聚类图如图1A和图1B所示，通过比较所有检测位点在PCR程序1和PCR程序2的检测结果，最终确定PCR程序1为本实施例的扩增程序。
其次，位点更换孔优化。具体列举为：rs3892097和rs5030865两个SNP位点分配在两个well时都会出现假阳性，而当这两个位点放置在同一well时(这两个位点仅间隔87bp，同一well时共用一对PCR引物)，假阳性峰消失。下面以同一样本(一代验证过该样本rs3892097位点的基因型为纯合CC、rs5030865位点的基因型为纯合CC)在上述不同体系中的峰图列举如图2A、图2B、图3A和图3B，从结果图中可以看出当rs3892097和rs5030865在同一反应孔中时，无假阳性现象，说明本实施例通过对引物进行合理的分组，能够保证引物间无干扰，增加检测结果的准确性。
再次，引物优化。
(1)引物序列优化
本实施例经过引物的多次更改和测试最终确立了最优的引物序列(引物序列见表3和表4)。具体优化过程以rs144012689位点为例列举如下：rs144012689位点用PCR程序1进行测试，所有位点的转化效率都很低，UEP基本无延伸，经过更改该位点的PCR上游引物和下游引物后进行测试，发现新更改引物的测试效果很好，所有样本都能成功报出基因型，具体的聚类峰图如图4A和图4B所示，从图4A中可以看出更改引物前该位点测试的样本的峰高均在2～4之间，说明该位点的PCR引物扩增效率不佳，UEP引物无底物进行延伸反应；从图4B中可以看出更改引物后所有测试样本的检测峰高基本都在9～15之间且能成功报出样本基因型，说明更改的PCR引物扩增效率较好，符合MassARRAY平台样本的检出要求，引物更改成功。
上述引物序列优化仅为一个示例，大部分引物序列都经过优化调整，最后确定的引物序列如表3、4所示。
表3 PCR引物序列
表4 UEP引物序列
(2)引物浓度优化
本实施例在体系优化过程中，综合考虑各位点的出峰及转化效率等因素，经过多次引物浓度的微调测试，最终确定了各位点在该体系中的最优终浓度，具体见表5：
表5引物序列终浓度
| SEQ ID NO. | 浓度(μM) | SEQ ID NO. | 浓度(μM) | SEQ ID NO. | 浓度(μM) |
| 1 | 0.28 | 40 | 0.28 | 79 | 0.66 |
| 2 | 0.2 | 41 | 0.2 | 80 | 0.67 |
| 3 | 0.1 | 42 | 0.1 | 81 | 0.75 |
| 4 | 0.2 | 43 | 0.2 | 82 | 0.78 |
| 5 | 0.1 | 44 | 0.1 | 83 | 0.83 |
| 6 | 0.2 | 45 | 0.2 | 84 | 0.86 |
| 7 | 0.1 | 46 | 0.1 | 85 | 0.90 |
| 8 | 0.28 | 47 | 0.28 | 86 | 0.93 |
| 9 | 0.1 | 48 | 0.1 | 87 | 0.95 |
| 10 | 0.1 | 49 | 0.1 | 88 | 0.97 |
| 11 | 0.1 | 50 | 0.1 | 89 | 1.00 |
| 12 | 0.1 | 51 | 0.1 | 90 | 1.01 |
| 13 | 0.18 | 52 | 0.18 | 91 | 1.04 |
| 14 | 0.28 | 53 | 0.28 | 92 | 1.10 |
| 15 | 0.1 | 54 | 0.1 | 93 | 1.13 |
| 16 | 0.1 | 55 | 0.1 | 94 | 1.15 |
| 17 | 0.1 | 56 | 0.1 | 95 | 1.16 |
| 18 | 0.1 | 57 | 0.1 | 96 | 1.20 |
| 19 | 0.33 | 58 | 0.33 | 97 | 1.22 |
| 20 | 0.2 | 59 | 0.2 | 98 | 1.23 |
| 21 | 0.15 | 60 | 0.15 | 99 | 0.59 |
| 22 | 0.15 | 61 | 0.15 | 100 | 0.62 |
| 23 | 0.1 | 62 | 0.1 | 101 | 0.67 |
| 24 | 0.2 | 63 | 0.2 | 102 | 0.67 |
| 25 | 0.1 | 64 | 0.1 | 103 | 0.70 |
| 26 | 0.35 | 65 | 0.35 | 104 | 0.70 |
| 27 | 0.2 | 66 | 0.2 | 105 | 0.74 |
| 28 | 0.1 | 67 | 0.1 | 106 | 0.77 |
| 29 | 0.25 | 68 | 0.25 | 107 | 0.79 |
| 30 | 0.15 | 69 | 0.15 | 108 | 0.80 |
| 31 | 0.1 | 70 | 0.1 | 109 | 0.83 |
| 32 | 0.1 | 71 | 0.1 | 110 | 0.85 |
| 33 | 0.1 | 72 | 0.1 | 111 | 0.87 |
| 34 | 0.2 | 73 | 0.2 | 112 | 0.90 |
| 35 | 0.1 | 74 | 0.1 | 113 | 0.93 |
| 36 | 0.3 | 75 | 0.3 | 114 | 1.00 |
| 37 | 0.1 | 76 | 0.1 | 115 | 1.01 |
| 38 | 0.1 | 77 | 0.1 | 116 | 1.08 |
| 39 | 0.15 | 78 | 0.15 | 117 | 1.12 |
实施例2精神及神经类用药个体化基因检测的流程建立及验证
(1)检测流程的建立
①基因组DNA的提取及稀释
对于外周血样本，可采用凯杰或天根的全血提取试剂盒进行提取；口腔拭子样本可采用天根的高效口腔拭子提取试剂盒进行提取。提取完成后，Nanodrop测定DNA的浓度及纯度，并将DNA样本稀释至10ng/μl备用。
②多重PCR扩增
本实施例所有反应体系都是在384孔板中进行，按下表配制PCR反应MIX(以下为单个样本量)：
表6 PCR反应体系
封膜，vortex混匀30秒，4000rpm离心1分钟，将板放上PCR仪进行以下热循环：
③SAP消化
按下表配制SAP反应体系(以下为单个样本量)：
表7 SAP反应体系
在步骤(2)的PCR产物中各加2μl SAP混液，封膜，vortex混匀30秒，4000rpm离心1分钟，将板放上PCR仪进行以下热循环：
| 温度(℃) | 时间 |
| 37 | 40min |
| 85 | 5min |
| 4 | 保温 |
按下表配制EXT反应体系，其中Extend Primer Mix分为两组(以下为单个样本量)：
表8 EXT反应体系
在步骤(3)的相应孔中加入2μl延伸混液，封膜，vortex混匀30秒，4000rpm离心1分钟，将板放上PCR仪进行以下热循环：
⑤树脂纯化
首先在384dimple plate对应孔里加入6mg树脂，并风干至少10min；其次，在384孔板的每个反应孔中加入16ul纯水，并轻轻将样本板凌空翻转，放在已放树脂的384dimpleplate上，然后将dimple plate连样本板一起翻转，让树脂掉到孔里；最后，取下dimpleplate，将384样本板封板，旋转器上颠倒摇匀15～30分钟，4000rpm离心5分钟。
⑥质谱分析
启动MassARRAY CPM质谱仪，将384反应板和384芯片放置在相应位置，进行点样及质谱飞行检测。质谱飞行结束后，使用Type4.1进行结果分析，观察各位点的原始峰图及基因型，如有必要可直接将基因型结果导出备用。
(2)反应体系的验证
本实施例在确认反应体系后，根据CAP(College of American Pathologists)的要求做了一系列的验证实验，主要有准确性实验、精密度实验以及人员间及试剂间的比对实验等等。
以准确性实验方案为例：随机选取20例样本(sample1～10为外周血和sample11～20为口腔拭子)运用本实施例的反应体系进行检测，具体的检测流程如上，得出20例样本的检测结果；后随机选取20个位点，每个位点对应一个样本进行一代扩增并测序，比较一代平台与MassARRAY平台检测结果，一致性大于95％则验证通过。本次验证实验准确性实验的结果见表9。
表9准确性结果
为了更好的展现本发明的准确性结果，列举sample1号样本的rs1800497和sample18号样本的rs1360780位点的MassARRAY峰图和Sanger测序图谱，如图5A、图5B、图6A和图6B所示，经过与一代测序结果比对，结果一致性为100％。结论：实验证明该方法能够应用于临床表现精神及神经类疾病的用药检测。
本发明的反应体系经过准确性验证、精密度验证、以及试剂和人员间比对等一系列验证实验证实其检测结果准确可靠，可用于临床样本检测。另外，本发明仅2个反应孔，一块384孔板即可完成多达190个样本的检测，且操作简单，检测结果直观可看，省去生信分析的流程和时间，特别适合于批量检测，可在临床中大面积推广，可协助临床医师对患者的用药进行指导，大大减轻患者的用药风险，从而实现个体化用药。
实施例3临床样本检测
选取两例精神科患者sampleA和sampleB的外周血样本进行基因检测，具体的检测方法参照
实施例2。具体的检测结果见下表：
| SNP位点 | sampleA | sampleB | SNP位点 | sampleA | sampleB |
| AMEL | CG | CC | rs2234922 | AA | AA |
| rs1045642 | GG | GG | rs2298771 | TT | TT |
| rs10484555 | TT | TT | rs2304016 | AG | AG |
| rs1051740 | TT | CT | rs2571375 | AA | AA |
| rs1057910 | AA | AA | rs2742390 | GG | AG |
| rs1065852 | AG | AG | rs28371725 | CC | CC |
| rs113994095 | GG | GG | rs3812718 | CC | CC |
| rs113994097 | GG | GG | rs3892097 | CC | CC |
| rs1160351 | CC | CC | rs4244285 | GA | AA |
| rs12248560 | CC | CC | rs4532 | TT | CT |
| rs1360780 | CC | CT | rs4713916 | GG | GA |
| rs1414334 | GG | GG | rs489693 | CA | AA |
| rs1415744 | CT | TT | rs4986893 | GG | GG |
| rs144012689 | TT | TT | rs5030865 | CC | CC |
| rs1799853 | CC | CC | rs6295 | GG | CC |
| rs1799978 | CT | CT | rs762551 | CA | AA |
| rs1800497 | AA | AA | rs776746 | CC | TC |
| rs1902023 | AA | CA | rs7997012 | GG | AA |
| rs2011425 | TT | TT | rs951439 | CT | CC |
| rs2032582 | CT | CT |
对于这两例精神疾病患者，临床医生计划用阿立哌唑药物作为治疗首选，而该药物的代谢和常见不良反应主要与CYP2D6基因编码的药物代谢酶P450和MC4R基因多态性相关，根据检测结果可知，上述两位患者均属于CYP2D6*1/*10型快代谢者(EM)，药物代谢正常，但患者B由于MC4R基因多态性为AA型，用药后增重和高甘油三酯血症风险可能较高，故临床医生可建议患者A使用正常剂量的药物进行常规治疗，而医生需要对患者B是否可以使用该药物进行慎重利益权衡，尽量减少或避免药物不良反应的发生。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 南京先声医学检验有限公司
江苏先声医学诊断有限公司
北京先声医学检验实验室有限公司
<120> 用于检测精神及神经类疾病用药相关SNP位点的引物组、应用、产品及方法
<160> 117
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
acgttggatg ggagaccagg gggagcata 29
<210> 2
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
acgttggatg cccgttctgt cccgagtatg 30
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<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
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acgttggatg gataagcttc ttacatgtgc 30
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<212> DNA
<213> 人工序列
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acgttggatg gaatcttgag gctcctttcc 30
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<213> 人工序列
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acgttggatg aggacccagc ctgcaatca 29
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<213> 人工序列
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<212> DNA
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<213> 人工序列
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acgttggatg atctgactga cccctattcc 30
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<213> 人工序列
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acgttggatg ccataatctc tttaaagagc 30
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<213> 人工序列
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<400> 42
acgttggatg ctaagctcca tctaccatgc 30
<210> 43
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 43
acgttggatg taacctctct ggactcctac 30
<210> 44
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 44
acgttggatg aacaaagttt tagcaaacg 29
<210> 45
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 45
acgttggatg ttttgaggcg ggaacgcaac 30
<210> 46
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 46
acgttggatg aaagggaata acccaggagc 30
<210> 47
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 47
acgttggatg acctggtcga agcagtatgg 30
<210> 48
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 48
acgttggatg ctgctgtgtg gctgaatgtc 30
<210> 49
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 49
acgttggatg gttcagagtc ctcatcttcc 30
<210> 50
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 50
acgttggatg gatgaagggt aatgtggtcc 30
<210> 51
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 51
acgttggatg ctagaggtga ccctatgaac 30
<210> 52
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 52
acgttggatg tacagagctt gttactgtag tcat 34
<210> 53
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 53
acgttggatg tgaacagtcc tgggtcagtc 30
<210> 54
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 54
acgttggatg aggcacagaa ggctttcaca 30
<210> 55
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 55
acgttggatg ggcctcatct acccaataac 30
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<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 56
acgttggatg caggaaagaa cgctgagttg 30
<210> 57
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 57
acgttggatg gctcacggct ttgtccaaga 30
<210> 58
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 58
acgttggatg ctgcctaccg gtctaaaatc 30
<210> 59
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 59
acgttggatg atgacccagg acacaccttg 30
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<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 60
acgttggatg tccagcggga gatgaagaag 30
<210> 61
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 61
acgttggatg aacatcagga ttgtaagcac 30
<210> 62
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 62
acgttggatg acatgatgcc ctgctttcgg 30
<210> 63
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 63
acgttggatg cagtgatatg gagtagggtc 30
<210> 64
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 64
acgttggatg gggacatttc gaggaaagg 29
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<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 65
acgttggatg tgttggtggt gcccactgat 30
<210> 66
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 66
acgttggatg gaaaatgttg tctggacaag c 31
<210> 67
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 67
acgttggatg caggtagaag tgttccctgc 30
<210> 68
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 68
acgttggatg ctggcgtttt gcaaacatac 30
<210> 69
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 69
acgttggatg agaaagacag ttgtatgtcc 30
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<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 70
acgttggatg tgtcacaggt cactgcatgg 30
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<212> DNA
<213> 人工序列
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acgttggatg ttgactgcag cattgctgag 30
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<211> 30
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<400> 72
acgttggatg gcaataattt tcccactatc 30
<210> 73
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 73
acgttggatg ggctggacat ccacttcatc 30
<210> 74
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 74
acgttggatg agagcatcat tttgcccctc 30
<210> 75
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 75
acgttggatg ctcttcgcac tttcagagtc 30
<210> 76
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 76
acgttggatg atcccaagat aatccacggc 30
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<211> 30
<212> DNA
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<400> 77
acgttggatg gagcttaaac tgggaagctg 30
<210> 78
<211> 30
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acgttggatg cagctatgag gtaatttttc 30
<210> 79
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 79
cgcgaaaggg gcgtc 15
<210> 80
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 80
cccccgcctg taccctt 17
<210> 81
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 81
tgtgccctga agaaaac 17
<210> 82
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 82
tatctaccat gcgtcctg 18
<210> 83
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 83
ggagttattg gaccaaga 18
<210> 84
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 84
gtgtcttctg ttctcaaag 19
<210> 85
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 85
cccacccaca cccagagtaa 20
<210> 86
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 86
gctagagaga ccaagaaaca 20
<210> 87
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 87
caacgctggg ctgcacgcta c 21
<210> 88
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 88
gtgtggctga atgtctgccc c 21
<210> 89
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 89
gctctgacac ccctcaagtt cc 22
<210> 90
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 90
ttaaagagct cttttgtctt tca 23
<210> 91
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 91
gcacgtggcc ttttgtcaag cttc 24
<210> 92
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 92
ttttcagaag agaatcttcc aaat 24
<210> 93
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 93
tggaagaaga ccgagtgtgt cttc 24
<210> 94
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 94
gaaggctttc acataagcaa agtta 25
<210> 95
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 95
cttatctaca gtgactttgc taccct 26
<210> 96
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 96
ttgccattat cttcaaagac ttaatt 26
<210> 97
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 97
ctttgtgccc ttctgcccat cacccac 27
<210> 98
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 98
tgtcttaatt ctgttgtcat tagttcc 27
<210> 99
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 99
acatccctgg ctgct 15
<210> 100
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 100
ggcaggcatc attgg 15
<210> 101
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 101
ctggccttac ctggat 16
<210> 102
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 102
cctcaaagtg ctggtc 16
<210> 103
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 103
gaggagcatt gaggac 16
<210> 104
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 104
ttctcacctt caccttt 17
<210> 105
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 105
ggcatggagc tcccgca 17
<210> 106
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 106
cttgactcac cttcccag 18
<210> 107
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 107
aatgcgttag cccctgtg 18
<210> 108
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 108
gtggagattc tcaacaga 18
<210> 109
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 109
agatctttcc caatttctg 19
<210> 110
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 110
gcacgaggtc cagagatac 19
<210> 111
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 111
cccgcctttg ctgccctcac 20
<210> 112
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 112
agtaatttgt tatgggttcc 20
<210> 113
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 113
ggggtaaggg cttcggggta 20
<210> 114
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 114
tgaagtgttt tacaggattt ta 22
<210> 115
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 115
cctatccttt actctaatca ctt 23
<210> 116
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 116
caaaatttat ggatttactt cattg 25
<210> 117
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 117
cactattctt tacagagccc aggg 24
Claims (8)
1.一种基于MassARRAY平台的用于检测精神及神经类疾病用药相关SNP位点的引物组，其特征在于，所述引物组对应的SNP位点为rs3892097、rs28371725、rs2742390、rs762551、rs4713916、rs12248560、rs1799978、rs1160351、rs1065852、rs951439、rs4532、rs776746、rs1415744、rs1902023、rs6295、rs1360780、rs1414334、rs7997012、rs5030865、rs489693、rs10484555、rs144012689、rs2571375、rs2234922、rs1051740、rs3812718、rs2011425、rs1799853、rs1057910、rs4244285、rs4986893、rs1045642、rs113994095、rs113994097、rs1800497、rs2032582、rs2298771和rs2304016；
所述引物组包括38对引物对，所述引物对如SEQ ID NO.1-76所示的核苷酸序列。
2.根据权利要求1所述的用于检测精神及神经类疾病用药相关SNP位点的引物组，其特征在于，将所述引物组分为如下2组：第一组包括检测rs3892097、rs28371725、rs2742390、rs762551、rs4713916、rs12248560、rs1799978、rs1160351、rs1065852、rs951439、rs4532、rs776746、rs1415744、rs1902023、rs6295、rs1360780、rs1414334、rs7997012、rs5030865和rs489693的引物组；第二组包括检测rs10484555、rs144012689、rs2571375、rs2234922、rs1051740、rs3812718、rs2011425、rs1799853、rs1057910、rs4244285、rs4986893、rs1045642、rs113994095、rs113994097、rs1800497、rs2032582、rs2298771和rs2304016的引物组。
3.根据权利要求2所述的用于检测精神及神经类疾病用药相关SNP位点的引物组，其特征在于，所述引物组还包括性别鉴定引物对，所述性别鉴定引物对包括如SEQ ID NO.77-78所示的核苷酸序列。
4.根据权利要求3所述的用于检测精神及神经类疾病用药相关SNP位点的引物组，其特征在于，所述引物组还包括39个延伸引物，所述延伸引物包括如SEQ ID NO.79-117所示的核苷酸序列。
5.根据权利要求1-4任一项所述的用于检测精神及神经类疾病用药相关SNP位点的引物组，其特征在于，所述精神及神经类疾病包括精神分裂症、抑郁症、焦虑症、偏头痛、多动症和癫痫。
6.如权利要求1-5任一项所述的用于检测精神及神经类疾病用药相关SNP位点的引物组在制备用于检测精神及神经类疾病用药的产品中的应用，其特征在于，所述精神及神经类疾病包括精神分裂症、抑郁症、焦虑症、偏头痛、多动症和癫痫。
7.一种用于检测精神及神经类疾病用药的产品，其特征在于，所述产品包括权利要求1-5任一项所述的引物组。
8.权利要求7所述的用于检测精神及神经病用药的产品，其特征在于，所述产品还包括用于检测SNP位点的试剂和/或软件；所述软件包括MassARRAY软件。
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