CN110183548A - 一种低分子葡聚糖铁的制备方法及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种重均分子量在1500‑4000Da之间的葡聚糖铁的制备方法与应用。具体是以麦芽糖和蔗糖为底物，在葡聚糖蔗糖酶的作用下与三氯化铁络合制备得到低分子葡聚糖溶液，并使用该葡聚糖铁溶液制备低分子量的葡聚糖铁注射液。本发明以小分子聚合的方式代替常规大分子降解的方法，制备出分子量较低的葡聚糖铁注射液，以廉价的麦芽糖和蔗糖为底物，制备成本低；并通过调整底物麦芽糖和蔗糖的比例来制备不同糖链长度的葡聚糖铁；在铁的络合过程中引入络合催化剂提高络合效率；所得低分子葡聚糖注射液具有刺激性小、吸收好、补铁效果佳等优点，可作为猪、牛、羊等家畜的优选补铁剂。

Description

一种低分子葡聚糖铁的制备方法及其应用
技术领域
本发明属于兽用补铁药物领域，具体涉及一种低分子葡聚糖铁的制备方法及其应用。
背景技术
葡聚糖，又称右旋糖酐，是指以葡萄糖为单糖组成的同型多糖。葡聚糖链长短的不同决定了其药用价值不同，长链葡聚糖通常为血容量扩充药，分子量在几万到十几万；而短链葡聚糖可以与氢氧化铁进行络合，制成葡聚糖铁，即右旋糖酐铁。
葡聚糖铁作为兽用补铁制剂，多为注射液，供肌肉注射用，多用于仔猪或母猪的补铁。研究表明，仔猪出生时体内只有约50mg铁，每天从母猪母乳中可以获得1mg铁，但是仔猪正常生长需要每天补充7mg铁，如果得不到有效补充措施，会导致仔猪生产缓慢、抵抗力低下、体重减轻，死亡率高等。葡聚糖铁是目前国内公认较好的用于仔猪或母猪的补铁剂。
中国药典2015年版规定的右旋糖酐铁的重均分子量应在5000-7500Da之间,分布系数D(MW/Mn)应小于1.8，目前国内厂商生产的产品也是按照这个标准进行，但是目前国内相关市售制剂存在着较明显的副作用。经市场人员对多家猪场及市面上补血产品的调查反馈，一些市售葡聚糖铁注射液产品，对猪注射后，会产生明显的刺激性，注射部位会有大约2～3cm2的着色，严重的甚至有几率出现整条腿着色不下退的情况，个别有母猪致死案例；这些产品的重均分子量较大，分子量布较宽，较大的分子量会影响肌注后机体对药物的吸收，造成注射部位有深褐色的坏死灶而影响胴体质量。而从欧洲进口的某品牌的葡聚糖铁注射液重均分子量在4000-5000Da，大大减轻了上述不良反应，且推针较为顺畅。
根据以上所述，葡聚糖铁分子量的大小会对用药的刺激性造成不同影响。为了制备低分子量的葡聚糖铁，减小不良反应，中国专利CN101205256A提出直接利用右旋糖酐5(重均分子量4500-5500Da)为底物进行降解，原料成本偏高；分子量的降解采用酸加热的方法，需要大量的碱来中和，增加了“三废”处理压力，且高温长时间的降解过程，能耗很高，进一步增加了生产成本。中国专利CN1041762A提出了用碱解法来降解分子量较大的右旋糖酐，需要大量的酸来中和，同样是存在原料成本高、“三废”处理压力大、能耗成本高等缺点。
中国专利CN102942638A公开了一种重均分子量为3000-6000Da的右旋糖酐的制备方法：具体是以重均分子量为7000-80000Da的右旋糖酐为底物，在右旋糖酐酶的作用下，降解生成重均分子量为3000-6000Da的右旋糖酐。虽然使用酶解法相对酸解法和碱解法而言有所改进，但得到的低分子葡聚糖链长短不一，且通过该方法得到的特定分子量的葡聚糖链，经分离纯化后的收率较低，生产成本较高。
因此，国内家畜养殖场急需一种生产成本低，污染小，且易于工业化，且重均分子量较小、铁含量高的葡聚糖铁的制备方法，以及一种不仅铁吸收率高，且刺激性小的葡聚糖铁注射液。
发明内容
本发明旨在解决现有技术存在的缺陷，提供一种低分子葡聚糖铁的制备方法及其应用。该方法以麦芽糖为起始底物，用葡聚糖蔗糖酶将蔗糖分子中的葡萄糖苷连接到起始底物，同时脱除果糖，生成分子量较低的葡聚糖链，再加入络合催化剂，经活化后与铁进行络合制备得到重均分子量在1500-4000Da之间的低分子葡聚糖铁，并将其应用于葡聚糖铁注射液的制备。本发明原料廉价易得、通过酶连接法制备低分子葡聚糖链，选择性高，收率好；使用络合催化剂提高了铁的络合效果，提高了铁含量。所得葡聚糖铁溶液可应用于低分子葡聚糖注射液的制备，尤其是分子量在2000-3000Da之间的葡聚糖铁注射液的制备，该注射液不仅铁吸收率高，还具有着色浅、刺激性小，耐受性好等优点，在家畜补铁方面效果显著。
本发明的技术方案如下：
第一方面，提供了一种低分子葡聚糖的制备方法，所述葡聚糖铁重均分子量在1500-4000Da之间，主要包括1500-2000Da、2000-3000Da、3000-4000Da三个分子段，具体包括以下步骤：
(1)低分子葡聚糖溶液的制备：制备一定浓度的蔗糖/麦芽糖的混合溶液；加入氯化钙，用醋酸调节pH至5.0-6.0，加入葡聚糖蔗糖酶；15-30℃下搅拌20～40h；将反应液加热至70-100℃并持续搅拌1-2h，使酶失活；过滤除去蛋白杂质及其他不溶性杂质，得到低分子葡聚糖溶液。所得溶液不需经纯化和固化，可直接用于下一步反应。
(2)低分子葡聚糖铁溶液的制备：向步骤(1)中所得葡聚糖溶液中加入络合催化剂，70-100℃搅拌0.5-3h，加20％氢氧化钠溶液，70-100℃搅拌6-10h；将反应体系降温至50-70℃，用盐酸溶液调节pH至5.0-6.0，滴加2.0mol/L三氯化铁溶液，同时滴加20％氢氧化钠溶液使pH在5.0-6.0之间，70-100℃搅拌10-20h，得到低分子葡聚糖铁粗品溶液。
(3)低分子葡聚糖铁溶液的分离纯化：将葡聚糖铁粗品溶液过滤除去不溶性杂质；将滤液用超滤柱A超滤，将原液超滤至原体积的1/10，加入至原液同体积的水，重复3次，收集滤过液；用超滤柱B进行超滤，此次弃掉滤过液，收集原液至原体积的1/10，加入至原液相同体积的水，重复3次，得到纯化后的低分子葡聚糖铁溶液。
步骤(1)中所述蔗糖/麦芽糖的混合溶液中蔗糖含量为10-40％，麦芽糖含量为2-10％。
步骤(1)中所述氯化钙的加入量为每100mL混合溶液中加入0.01g-0.05g。
步骤(1)中所述葡聚糖蔗糖酶的加入量为每1mL混合溶液中加入10-15U。
步骤(2)中所述的络合催化剂为柠檬酸钠；所述柠檬酸钠的加入量为每100mL葡聚糖溶液中加入3-6g。
步骤(2)中所述第一次滴加氢氧化钠溶液的体积为每100mL葡聚糖溶液中加入15-25mL。
步骤(2)中所述三氯化铁溶液的加入量为每100mL葡聚糖溶液中加入15-25mL。
步骤(3)中所述超滤柱A的孔径为0.05-0.1μm；所述超滤柱B为截留分子量3000-10000Da的中空纤维柱。
第二方面，提供了一种低分子葡聚糖铁在用于制备低分子葡聚糖铁制剂中的应用。
所述低分子葡聚糖铁制剂可以包括但不限于注射液、口服液、片剂、颗粒剂等剂型。
所述低分子葡聚糖铁制剂可用于制备防治家畜，尤其是猪、牛、羊等缺铁性贫血的药物。
第三方面，提供了一种重均分子量在2000-3000Da之间的葡聚糖铁注射液的制备方法，具体步骤为：将上述低分子葡聚糖的制备方法步骤(3)中纯化后的分子量在2000-3000Da之间的低分子葡聚糖溶液，在真空度为0.1—-0.09Mpa，温度为30-100℃的条件下浓缩到铁含量为150-250mg/mL；加入苯酚，用10％的磷酸调节pH值至5.5-6.2，用注射用水定容至所需体积，0.22μm微孔滤膜过滤，灌装，100-120℃下灭菌15-30min，即得到所需铁含量的所需重均分子量的葡聚糖铁注射液产品。
所述苯酚的加入量为注射液总体积的0.1-0.3％。
所述葡聚糖铁分子量及铁含量的测定是按照《2015版中国药典》右旋糖酐铁注射液中相应的检测方法进行。
有益效果：
(1)本发明使用葡聚糖蔗糖酶连接法，相对于酶切法，原料廉价易得，制备低分子葡聚糖的选择性更好、效率更高。
(2)该方法制备得到低分子葡聚糖后不需经处理纯化，可直接用于低分子葡聚糖铁溶液的制备，属于连投反应，简化了操作，降低了能耗及人工成本。
(3)在络合反应中，引入了络合催化剂柠檬酸钠，大大提高了铁的络合效果，所得低分子葡聚糖溶液更稳定，铁含量更高，收率更好。
(4)采用双超滤膜节流的分离纯化方法，使产品的分子量分布范围更窄，品质更优；相对于分级醇沉的方法，更符合绿色化学的要求。
(5)本发明制备得到的葡聚糖铁注射液重均分子量在2000-3000Da之间，通过动物实验证明，该注射液补铁效果显著，相对于较小分子量葡聚糖铁注射液吸收好，相对于大分子量葡聚糖铁注射液应激反应小。
具体实施方式
下面是本发明的实施例，可以详细的解释本发明，但是本发明并不局限于以下实施例。
实施例1
(1)低分子葡聚糖溶液的制备：称取蔗糖200g,称取麦芽糖100g,加水溶解并稀释至1000mL，投入到2L三口瓶中；加入氯化钙0.1g，并用10％的醋酸调节pH至5.2-5.5，加入葡聚糖蔗糖酶10000U；在15-30℃下搅拌反应24h；将反应液加热至80-90℃并持续搅拌1-2小时，使酶失活；过滤除去蛋白杂质及其他不溶性杂质，得到低分子葡聚糖溶液。
(2)低分子葡聚糖铁溶液的制备：向步骤(1)中所得的低分子葡聚糖溶液中加入柠檬酸钠45g，升温至80℃搅拌2小时，滴加20％氢氧化钠溶液200mL，滴加毕，80-85℃保温搅拌反应7小时；将反应体系降温至55℃，用盐酸溶液调节pH至5.0-5.5，然后滴加2.0mol/L的三氯化铁溶液200mL，同时滴加氢氧化钠溶液以保证pH在5.0-5.5之间；滴加毕，升温至80℃搅拌反应20小时，得到低分子葡聚糖铁粗品溶液。
(3)低分子葡聚糖铁溶液的分离纯化：将葡聚糖铁粗品溶液过滤除去不溶性杂质；将所得液体用超滤柱A超滤，将原液超滤至原体积的1/10，加入至原液同体积的水，重复3次，收集滤过液；用超滤柱B进行超滤，此次弃掉滤过液，收集原液至原体积的1/10，加入至原液相同体积的水，重复3次，得到纯化后的低分子葡聚糖铁溶液。
(4)低分子葡聚糖铁注射液的制备：步骤(3)纯化后的低分子葡聚糖铁溶液，在真空度-0.1—-0.09Mpa，温度60-70℃的条件下浓缩到铁含量约为200mg/mL，经测定为233mg/mL，精密量取42.92mL,加入苯酚0.2g，用10％的磷酸调节pH值至5.5-6.2，注射用水定容至100mL，用0.22μm滤膜过滤，灌封，于105±2.5℃温度下，灭菌30分钟，即得到10％铁含量的低分子葡聚糖铁注射液，检测重均分子量为1784Da。
实施例2
(1)低分子葡聚糖溶液的制备：称取蔗糖250g,称取麦芽糖50g，加水溶解并稀释至1000mL，投入到2L三口瓶中；加入氯化钙0.2g，并用10％的醋酸调节pH至5.2-5.5，加入葡聚糖蔗糖酶11000U；在15-30℃下搅拌反应30h；将反应液加热至80-90℃并持续搅拌1-2小时，使酶失活从而终止反应；过滤除去蛋白杂质及其他不溶性杂质，得到低分子葡聚糖溶液不经纯化和固化直接用于下一步的制备。
(2)低分子葡聚糖铁溶液的制备：向步骤(1)中所得的低分子葡聚糖溶液中加入柠檬酸钠40g，升温至80℃搅拌2小时，滴加20％氢氧化钠溶液200mL，滴加毕，80-85℃保温搅拌反应7小时；将反应体系降温至55℃，用盐酸溶液调节pH至5.0-5.5，然后滴加2.0mol/L的三氯化铁溶液200mL，同时滴加氢氧化钠溶液以保证pH在5.0-5.5之间；滴加毕，升温至80℃搅拌反应20小时，得到低分子葡聚糖铁粗品溶液。
(3)低分子葡聚糖铁溶液的分离纯化：将葡聚糖铁粗品溶液过滤除去不溶性杂质；将所得液体用超滤柱A超滤，将原液超滤至原体积的1/10,加入至原液同体积的水，重复3次，收集滤过液；用超滤柱B进行超滤，此次弃掉滤过液，收集原液至原体积的1/10，加入至原液相同体积的水，重复3次，得到纯化后的低分子葡聚糖铁溶液。
(4)低分子葡聚糖铁注射液的制备：步骤(3)纯化后的低分子葡聚糖铁溶液，在真空度为-0.1—-0.09Mpa，温度为60-70℃的条件下浓缩到铁含量约为200mg/mL，经测定为227mg/mL，精密量取44.05mL，加入苯酚0.2g，用10％的磷酸调节pH值至5.5-6.2，用注射用水定容至100mL，用0.22μm滤膜过滤，灌封，于105±2.5℃温度下，灭菌30分钟，即得到10％铁含量的低分子葡聚糖铁注射液，检测重均分子量为2617Da。
实施例3
(1)低分子葡聚糖溶液的制备：称取蔗糖270g,称取麦芽糖27g，加水溶解并稀释至1000mL，投入到2L三口瓶中；加入氯化钙0.4g，并用10％的醋酸调节pH至5.2-5.5，加入葡聚糖蔗糖酶13000U；在15-30℃下搅拌反应36h；将反应液加热至80-90℃并持续搅拌1-2小时，使酶失活从而终止反应；过滤除去蛋白杂质及其他不溶性杂质，得到低分子葡聚糖溶液不经纯化和固化直接用于下一步的制备。
(2)低分子葡聚糖铁溶液的制备：向步骤(1)中所得的低分子葡聚糖溶液中加入柠檬酸钠45g，升温至80℃搅拌2小时，滴加20％氢氧化钠溶液200mL，滴加毕，80-85℃保温搅拌反应7小时；将反应体系降温至55℃，用盐酸溶液调节pH至5.0-5.5，然后滴加2.0mol/L的三氯化铁溶液200mL，同时滴加氢氧化钠溶液以保证pH在5.0-5.5之间；滴加毕，升温至80℃搅拌反应20小时，得到低分子葡聚糖铁粗品溶液。
(3)低分子葡聚糖铁溶液的分离纯化：将葡聚糖铁粗品溶液过滤除去不溶性杂质；将所得液体用超滤柱A超滤，将原液超滤至原体积的1/10,加入至原液同体积的水，重复3次，收集滤过液；用超滤柱B进行超滤，此次弃掉滤过液，收集原液至原体积的1/10，加入至原液相同体积的水，重复3次，得到纯化后的低分子葡聚糖铁溶液。
(4)低分子葡聚糖铁注射液的制备：步骤(3)纯化后的低分子葡聚糖铁溶液，在真空度为-0.1—-0.09Mpa，温度为60-70℃的条件下浓缩到铁含量为200mg/mL左右，经测定为218mg/mL，精密量取45.87mL，加入苯酚0.2g，用10％的磷酸调节pH值至5.5-6.2，用注射用水定容至100mL，用0.22μm滤膜过滤，灌封，于105±2.5℃温度下，灭菌30分钟，即得到10％铁含量的低分子葡聚糖铁注射液，检测重均分子量为3333Da。
实施例4络合效果实验
实验目的：通过对比实验证实加入柠檬酸钠的络合催化效果
实验原理：在碱性条件下，柠檬酸钠中的羟基和羧基，会首先与Fe3+结合生成氧桥和羟基桥而形成柠檬酸铁聚合物，该聚合物微粒的外表面与亲水性配体发生结合而形成“增溶”微粒表面络合物——聚合铁核，随后右旋糖酐和氢氧化铁会围绕聚合铁核而发生络合反应。因此柠檬酸钠在葡聚糖铁合成反应中起催化剂的作用。
实验方法：依据实施例1的操作进行，只是不同实验批柠檬酸钠的加入量不同，考察低分子葡聚糖铁粗品溶液的粘稠度、纯化后葡聚糖铁溶液浓缩至相同体积后的铁含量、经浓缩干燥后制得的葡聚糖铁粉的水复溶性。实验结果如下表：
表1催化剂柠檬酸钠的络合效果实验
实验组 柠檬酸钠添加量 粗品溶液粘稠度 纯品溶液铁含量 水复溶性
1 0g 多次补水仍然粘稠 183mg/mL 差，有大量沉淀
2 10g 不粘稠 205mg/mL 有少量沉淀
3 20g 不粘稠 212mg/mL 好，溶液澄清
4 40g 不粘稠 233mg/mL 好，溶液澄清
5 60g 不粘稠 226mg/mL 好，溶液澄清
结果分析：通过实验结果可知，加入催化剂柠檬酸钠的葡聚糖铁溶液比不加柠檬酸钠的粗品溶液的黏度低，制成低分子葡聚糖铁粉末后，在水中的复溶性好，铁含量高说明铁的络合效率提高。
实施例5分子量及其分布测定
实验目的：比较本发明实施例1、实施例2、实施例3产品和市售右旋糖酐铁注射液肌内注射时的应激性和高剂量的毒性反应。
实验方法：分别对欧洲进口右旋糖酐铁制剂A、国内一个厂家右旋糖酐铁注射液B、国内另一厂家注射液C、本发明实施例1产品、实施例2产品、实施例3产品共六个样品进行分子量分布的测定。按照《2015版中国药典》右旋糖酐铁注射液中“分子量与分子量分布”检测项下的方法进行检测，实验结果如下表：
表2产品分子量及其分布测定结果
样品标号 样品名称 重均分子量/Da 分布系数
1 进口A 4487 1.50
2 国产B 6708 1.65
3 国产C 7310 1.66
4 实施例1产品 1784 1.36
5 实施例2产品 2617 1.40
6 实施例3产品 3333 1.41
实验结论：通过本发明三个实施例制备的葡聚糖铁注射液重均分量明显低于市售品，均在1500-4000Da之间，其中实施例1产品在1500-2000Da之间，实施例2产品在2000-3000Da之间，实施例3产品在3000-4000Da之间。
实施例6未吸收铁含量测定
考查本发明三个实施例的产品和一个进口产品A以及两个国产市售产品B、C的吸收率，并对测定结果进行比较和评价。
实验方法：主要参照《2010版中国药典》右旋糖酐铁相关检测项的描述，选用12只体型相当、体重在2.0～2.5kg的健康家兔，每两只一组，共6组，以每只家兔右后腿进行股内肌注射，每kg体重注射10mg铁，以同一只家兔左腿为空白对照，给药7天以后处死，并采用紫外可见分光光度法测定注射部位铁的含量，分别计算每种铁制剂的未吸收铁含量。实验结果如下表：
表3产品未吸收铁含量测定
实验结论：本发明制备的注射液产品，未吸收铁含量低于市售品，吸收率明显偏高。在本发明3个实施例中，实施例2制备的注射液属于2000-3000Da的范围时，铁吸收率最高；当分子量进一步减小到1500-2000Da(实施例1)，铁吸收率反而减小。
实施例7大鼠应激性实验
实验目的：比较本发明三个实施例产品和市售右旋糖酐铁注射液肌内注射时的应激性和高剂量的毒性反应。
实验方法：以欧洲进口右旋糖酐铁制剂A、国内一个厂家右旋糖酐铁注射液B、国内另一厂家注射液C及本发明实施例1产品、实施例2产品、实施例3产品共6个同样为10％的制剂进行对比实验，分别以0.5mL、1.5mL对体重和体型相当的大鼠进行给药，观察不同给药组的应激性差异。实验结果如下表：
表4大鼠应激性实验结果
组别 产品名称及用量 大鼠注射数量 存活数量 刺激性
1组 进口A：0.5mL 6 6 局部明显染色
2组 进口A：1.5mL 6 6 内脏肌肉明显染色
3组 国产B：0.5mL 6 6 内脏肌肉染色
4组 国产B：1.5mL 6 2 死亡、溃烂
5组 国产C：0.5mL 6 6 内脏肌肉染色
6组 国产C：1.5mL 6 1 死亡、溃烂
7组 实施例1：0.5mL 6 6 局部轻微染色
8组 实施例1：1.5mL 6 6 内脏肌肉轻微染色
9组 实施例2：0.5mL 6 6 局部轻微染色
10组 实施例2：1.5mL 6 6 内脏肌肉轻微染色
11组 实施例3：0.5mL 6 6 局部少许染色
12组 实施例3：1.5mL 6 6 内脏肌肉少许染色
实验结论：本发明制备的低分子葡聚糖注射液比市售产品分子量小，正常剂量给药局部染色不明显，刺激性小；超剂量给药，耐受性好，毒性低。并发现本发明实施例2注射液给药后的刺激性明显低于实施例3注射液。
实施例8仔猪补铁效果实验
实验目的：验证实施例2中制备的分子量2000-3000Da的葡聚糖铁注射液对仔猪补铁的效果
实验原理：出生后不久的仔猪生长发育快饲料利用率最高、可塑性最大，生长速度最快，之后生长速度逐渐缓慢。而如此快的生长发育速度需要有足量铁的补充，仔猪从母乳中获得的铁远不能够满足其生长发育需要，一旦仔猪得不到足量的铁补充就会导致体重增长缓慢、免疫力降低、发病率增高、死亡率增高等。
实验方法：试验选择20日龄健康仔猪30头，并将仔猪随机区分试验组、阳性对照组和空白对照组。供试仔猪统一编制耳号、逐头称重、分组记录，对注射组仔猪逐头注射实施例2制备的低分子葡聚糖铁注射液(10％)2ml，对阳性对照组仔猪逐头注射10％的右旋糖酐铁国产B制剂2mL，对空白对照组不注射补铁剂，同时对三组仔猪逐头称重并记录，在相同的饲养管理条件下，分别记录各组发病、死亡头数，到60日龄断奶称重，并进行比较。实验结果如下表：
表5右旋糖酐铁注射液对仔猪补铁的效果
组别 仔猪数 发病 死亡 存活 始总重 末总重 净增重 均增重
供试组 10头 1头 0头 10头 33.2kg 124.2kg 91.0kg 9.1kg
阳性组 10头 1头 1头 9头 30.5kg 108.8kg 78.3kg 8.7kg
空白组 10头 4头 2头 8头 29.0kg 86.6kg 57.6kg 7.2kg
实验结论：本发明制备的低分子葡聚糖铁注射液都可以促进仔猪生长发育，提高机体免疫力，降低患病率，达到较好的补铁效果。
本实施例以仔猪为例，但本发明同样可适用于其他家畜如牛、羊等，同样可获得较好的补铁效果，尤其是对未断奶的动物幼崽。
以上为对本发明实施例的描述，通过对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (10)

1.一种低分子葡聚糖铁的制备方法，其特征在于，所述葡聚糖铁重均分子量在1500-4000Da之间，主要包括1500-2000Da、2000-3000Da、3000-4000Da三个分子段，其制备步骤如下：
(1)低分子葡聚糖溶液的制备：制备一定浓度的蔗糖/麦芽糖的混合溶液，加入氯化钙，用醋酸调节pH至5.0-6.0，加入葡聚糖蔗糖酶；15-30℃下搅拌20～40h；将反应液加热至70-100℃并持续搅拌1-2h，使酶失活；过滤除去蛋白杂质及其他不溶性杂质，得到低分子葡聚糖溶液；
(2)低分子葡聚糖铁溶液的制备：向步骤(1)中所得低分子葡聚糖溶液中加入络合催化剂，70-100℃搅拌0.5-3h，加20％氢氧化钠溶液，70-100℃搅拌6-10h；降温至50-70℃，用盐酸溶液调节pH至5.0-6.0，滴加2.0mol/L三氯化铁溶液，同时滴加20％氢氧化钠溶液使pH在5.0-6.0之间，70-100℃搅拌10-20h，得到低分子葡聚糖铁粗品溶液；
(3)低分子葡聚糖铁溶液的分离纯化：将葡聚糖铁粗品溶液过滤除去不溶性杂质；将滤液用超滤柱A超滤，将原液超滤至原体积的1/10，加入至原液同体积的水，重复3次，收集滤过液；再用超滤柱B进行超滤，弃滤过液，收集原液至原体积的1/10，加入至原液相同体积的水，重复3次，得到纯化后的低分子葡聚糖铁溶液。
2.根据权利要求1所述的低分子葡聚糖铁的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述蔗糖/麦芽糖混合溶液中含蔗糖为10-40％，含麦芽糖为2-10％；所述氯化钙的加入量为每100mL溶液中加入0.01g-0.05g。
3.根据权利要求1所述的低分子葡聚糖铁的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述葡聚糖蔗糖酶的加入量为每1mL混合溶液中加入10-15U。
4.根据权利要求1所述的低分子葡聚糖铁注射液的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述络合催化剂为柠檬酸钠；所述柠檬酸钠的加入量为每100mL葡聚糖溶液中加入3-6g。
5.根据权利要求1所述的低分子葡聚糖铁的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述第一次滴加氢氧化钠溶液的体积为每100mL葡聚糖溶液中加入15-25mL。
6.根据权利要求1所述的低分子葡聚糖铁的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述三氯化铁溶液的加入量为每100mL葡聚糖溶液中加入15-25mL。
7.根据权利要求1所述的低分子葡聚糖铁的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述超滤柱A的孔径为0.05-0.1μm；所述超滤柱B为截留分子量3000-10000Da的中空纤维柱。
8.一种如权利要求1～7任一所述的低分子葡聚糖铁的应用，其特征在于，可用于制备低分子葡聚糖铁制剂。
9.一种重均分子量在2000-3000Da之间的葡聚糖铁注射液的制备方法，其特征在于，具体步骤为：将纯化后的分子量在2000-3000Da之间的低分子葡聚糖铁溶液，在真空度为0.1—-0.09Mpa，温度为30-100℃的条件下浓缩到铁含量为150-250mg/mL；加入苯酚，用10％的磷酸调节pH值至5.5-6.2，用注射用水定容至所需体积，0.22μm微孔滤膜过滤，灌装，100-120℃下灭菌15-30min，即得到所需铁含量的所需重均分子量的葡聚糖铁注射液产品。
10.根据权利要求9所述的低分子葡聚糖铁注射液的制备方法，其特征在于，所述苯酚的加入量为注射液总体积的0.1-0.3％。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113480678A (zh) * 2021-08-06 2021-10-08 江西华太药业有限公司 右旋糖酐铁合成方法及其分散片

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN85104452A (zh) * 1984-06-15 1986-12-10 派弗·兰根公司 制造水溶性铁葡聚糖的方法
US5756715A (en) * 1996-11-08 1998-05-26 Abbott Laboratories Process for making crystalline iron dextran
WO1999048533A1 (en) * 1998-03-25 1999-09-30 Pharmacosmos Holding A/S An iron-dextran compound for use as a component in a therapeutical composition for prophylaxis or treatment of iron-deficiency, a process for producing said iron-dextran compound and use of said compound for the preparation of a parenterally administrable therapeutical composition
CN1308539A (zh) * 1998-11-20 2001-08-15 法玛科思莫斯控股有限公司 铁－葡聚糖化合物的制法
CN1353194A (zh) * 2000-11-02 2002-06-12 杨敏 生产20%右旋糖酐铁的方法
CA2195283C (en) * 1997-01-16 2008-07-22 Thomas C. Usher Process for manufacturing iron dextran using ultrafiltration
CN101967205A (zh) * 2010-10-12 2011-02-09 滨州学院 一种β-葡聚糖铁复合物及其制备方法
CN102942638A (zh) * 2012-10-16 2013-02-27 广西壮族自治区化工研究院 一种重均分子量为3000-6000Da的右旋糖酐的制备方法
CN104031170A (zh) * 2014-05-22 2014-09-10 海纳阳光（北京）医药控股有限公司 一种人静脉注射用右旋糖酐铁原料及其制备方法
CN107201387A (zh) * 2017-07-26 2017-09-26 合肥工业大学 一种右旋糖酐铁的制备方法

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN85104452A (zh) * 1984-06-15 1986-12-10 派弗·兰根公司 制造水溶性铁葡聚糖的方法
US5756715A (en) * 1996-11-08 1998-05-26 Abbott Laboratories Process for making crystalline iron dextran
CA2195283C (en) * 1997-01-16 2008-07-22 Thomas C. Usher Process for manufacturing iron dextran using ultrafiltration
WO1999048533A1 (en) * 1998-03-25 1999-09-30 Pharmacosmos Holding A/S An iron-dextran compound for use as a component in a therapeutical composition for prophylaxis or treatment of iron-deficiency, a process for producing said iron-dextran compound and use of said compound for the preparation of a parenterally administrable therapeutical composition
CN1308539A (zh) * 1998-11-20 2001-08-15 法玛科思莫斯控股有限公司 铁－葡聚糖化合物的制法
CN1353194A (zh) * 2000-11-02 2002-06-12 杨敏 生产20%右旋糖酐铁的方法
CN101967205A (zh) * 2010-10-12 2011-02-09 滨州学院 一种β-葡聚糖铁复合物及其制备方法
CN102942638A (zh) * 2012-10-16 2013-02-27 广西壮族自治区化工研究院 一种重均分子量为3000-6000Da的右旋糖酐的制备方法
CN104031170A (zh) * 2014-05-22 2014-09-10 海纳阳光（北京）医药控股有限公司 一种人静脉注射用右旋糖酐铁原料及其制备方法
CN107201387A (zh) * 2017-07-26 2017-09-26 合肥工业大学 一种右旋糖酐铁的制备方法

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113480678A (zh) * 2021-08-06 2021-10-08 江西华太药业有限公司 右旋糖酐铁合成方法及其分散片
CN113480678B (zh) * 2021-08-06 2022-03-25 江西华太药业有限公司 右旋糖酐铁合成方法及其分散片

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