CN110167522B

CN110167522B - 包括亲吻素的抗老化或抗炎症的组合物

Info

Publication number: CN110167522B
Application number: CN201880004016.6A
Authority: CN
Inventors: 郑秀敬; 牟相炫; 尹锡均; 李敬银; 庆瑞娟; 姜承贤; 金延埈; 朴明三; 李政勋; 徐孝铉
Original assignee: Biological Fd&c Co ltd; Cosmax Inc
Current assignee: Biological Fd&c Co ltd; Cosmax Inc
Priority date: 2017-12-12
Filing date: 2018-12-11
Publication date: 2022-05-31
Anticipated expiration: 2038-12-11
Also published as: WO2019117577A1; CN110167522A

Abstract

本发明公开了一种包括亲吻素的组合物。根据一方面的亲吻素或所述亲吻素的活性片段，具有对MMP‑1或炎症性细胞因子的抑制活性，因此具有可有效地用于对皮肤老化、皮肤损伤、皮肤状态或炎症性疾病的预防、改善或治疗的效果。

Description

包括亲吻素的抗老化或抗炎症的组合物

技术领域

本公开涉及一种包括亲吻素(kisspeptin)的组合物。

背景技术

功能性化妆品可包括通过延缓皮肤老化来帮助改善皮肤皱纹的产品、保护皮肤免受紫外线和外部环境的影响的产品或有助于皮肤美白的产品。为了开发功能性化妆品，需要预先开发能够在皮肤中发挥生理作用的功能性原料。

随着年龄的增长，人的皮肤因各种内外因素而发生变化。换句话说，对于内部来说，用于调节新陈代谢的各种激素的分泌减少，并且免疫细胞的功能和细胞的活性降低，从而活体所必需的免疫蛋白和活体构成蛋白的生物合成减少。对于外部来说，由于因臭氧层的破坏而造成太阳光线中到达地表的紫外线量增加，随着环境污染进一步加剧而自由基和活性有害氧气增加，因此会引起如下多种变化：皮肤厚度减少且皱纹增多，并且不仅弹性降低，而且肤色暗沉，经常出现皮肤问题，褐斑、雀斑和老年斑也增加等。

关于皮肤老化现象的详细机制如下：角质形成细胞和成纤维细胞的分裂减少，胶原蛋白合成减少，基质金属蛋白酶(MMP)生成增加，生成黑色素的信号传输增加等。因此，皱纹增多，皮肤的弹性降低，褐斑、雀斑和老年斑等增多。特别是，由于在四十岁左右，激素平衡被打破，因此细胞再生能力、胶原蛋白的合成能力和在皮肤保湿中起重要作用的皮肤脂质生成能力大大降低。此外，众所周知，在绝经后的前五年，胶原蛋白减少约30％，由于这些胶原纤维的异常缠结现象增加而皮肤弹性显著降低，并且充当皮肤中的水分的透明质酸和作为糖蛋白质中的一种的糖胺聚糖的生成量显著地低。

另一方面，紫外线通过反复激活应激激素来损害皮肤。与将类固醇过量涂覆到皮肤上相同，这会引起诸如真皮纤维组织崩溃的皮肤副作用。紫外线刺激是激活人体皮肤中的糖皮质激素，糖皮质激素被看作是诸如皮质醇的应激激素。另外，它增加对作为激活皮质醇的人体内的酶的11β-羟基类固醇脱氢酶1型(11β-HSD1)的表达。因为紫外线引起的11β-HSD1的激活和表达增加与皮肤老化密切相关，所以被关注为用于抑制皮肤老化的新的目标。

炎症是一种生理反应，可以保护身体免受有害周边环境(即，诸如细菌的外部异物)的侵入和机械损伤，但过度的炎症反应也是皮肤损伤的主要原因。当发生炎症时，造成多种多核型白血球(PMN)和免疫物质的增加，并且这些细胞将分泌作为炎症性细胞产物的多种种类的蛋白质分解酶(弹性蛋白酶、透明质酸酶和脂肪氧合酶)和细胞因子(cytokine)。此后，它们的作用在于也对邻近的组织细胞和非组织细胞成分造成有害的损伤，并带来慢性炎症的严重的组织损伤。另外，结缔组织的损伤不仅是通过减少皮肤的弹力来形成皱纹的原因，还对细胞的再生和增殖造成坏的影响从而导致快速的皮肤老化。

正在应用用于改善如上所述的皮肤老化现象和炎症的多种方法，并且最近对多种蛋白质进行研究以用于恢复如上的皮肤损伤。近年来，亲吻素蛋白作为性成熟和癌抑制剂的调节剂已被积极研究，然而，涉及由亲吻素表达引起的皮肤老化和炎症的研究和试验是微不足道的。

发明内容

技术问题

一方面在于提供一种包括亲吻素或所述亲吻素的活性片段作为有效成分的化妆品组合物。

另一方面在于提供将亲吻素或所述亲吻素的活性片段用于制备化妆品组合物的用途。

另一方面在于提供一种包括亲吻素或所述亲吻素的活性片段作为有效成分的皮肤外用制剂组合物，所述皮肤外用制剂组合物用于对皮肤状态的预防，改善或治疗或用于预防或改善皮肤老化。

再一方面在于提供包括亲吻素或所述亲吻素的活性片段作为有效成分的药物组合物，所述药物组合物用于抑制或改善皮肤老化，预防和治疗炎症性疾病。

再一方面在于提供一种对皮肤状态进行预防，改善或治疗的方法，所述方法包括：将亲吻素或所述亲吻素的活性片段施用于需要的个体。

再一方面在于提供一种亲吻素或所述亲吻素的活性片段的用途，所述用途是用于制备用于抑制或改善皮肤老化，预防和治疗炎症性疾病。

再一方面在于提供一种包括亲吻素或所述亲吻素的活性片段的保健食品，所述保健食品用于对皮肤状态的预防，改善或治疗或用于预防或改善皮肤老化。

再一方面在于提供一种亲吻素或所述亲吻素的活性片段的用途，所述用途是用于制备用于对皮肤状态进行预防、改善或治疗的组合物。

技术方案

一方面在于提供一种包括亲吻素或所述亲吻素的活性片段作为有效成分的组合物。

术语“亲吻素(kisspeptin)”与转移抑制素(metastin)或KISS-1多肽互换使用，并可表示通过KISS1基因编码的蛋白质。亲吻素是对于GPR54的G-蛋白结合受体配体，并被认为具有抑制黑色素瘤和乳腺癌转移的能力的人类转移抑制基因。亲吻素-GPR54信令在青春期开始分泌促性腺激素释放激素方面起着重要的作用，并且由于在丘脑释放促性腺激素释放激素，因此促性腺激素释放激素作用于脑垂体前叶，从而诱发促黄体激素(LH)和卵泡刺激素(FSH)的释放。由于亲吻素可直接刺激GnRH释放，因此亲吻素可将类固醇激素的负反馈信号和正反馈信号传送到GnRh神经细胞(neuron)，充当关于青春期开始的守门员(gatekeeper)，并传送中继(relaying)和光周期性信息。所述亲吻素与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有75％以上、80％以上、85％以上、90％以上、95％以上、96％以上、97％以上、98％以上、99％以上或100％的序列同一性。

所述活性片段由SEQ ID NO:1的氨基酸序列的从N-末端开始第27个氨基酸序列至第54个氨基酸序列、第45个氨基酸序列至第49个氨基酸序列或第45个氨基酸序列至第54个氨基酸序列组成。所述活性片段的C末端可被酰胺化。在一个实施例中，所述活性片段可与从由SEQ ID NO:2至SEQ ID NO:7组成的组中选择的任意一个氨基酸序列具有以下序列同一性：75％以上、80％以上、85％以上、90％以上、95％以上、96％以上、97％以上、98％以上、99％以上或100％。

术语“治疗或改善”指示或包括对疾病、障碍、状态或病态或者其一个以上的症状的减轻，抑制进展或预防。“有效成分”或“药剂学上的有效量”可表示实施为了充分实现以下目的而提供的发明的过程中使用到的任意量的组合物：对疾病、障碍、状态或病态或者其一个以上的症状的减轻，抑制进展或预防。所述有效量(或施用量)可以是0.0001mg至10,000mg、0.001mg至1000mg、1.0mg至100mg、0.01mg至1000mg、0.01mg至100mg、0.01mg至10mg或0.01mg至1mg。所述亲吻素或其活性片段可包括对于组合物的总重量的0.001重量％至80重量％。例如，可包括0.01重量％至60重量％、0.01重量％至40重量％、0.01重量％至30重量％、0.01重量％至20重量％、0.01重量％至10重量％、0.01重量％至5重量％、0.05重量％至60重量％、0.05重量％至40重量％、0.05重量％至30重量％、0.05重量％至20重量％、0.05重量％至10重量％、0.05重量％至5重量％、0.1重量％至60重量％、0.1重量％至40重量％、0.1重量％至30重量％、0.1重量％至20重量％、0.1重量％至10重量％、0.1重量％至5重量％。

在一个实施例中，所述亲吻素或其活性片段可以具有抑制基质金属蛋白酶(MMP)、11β-HSD1或炎症因子(例如，炎症性细胞因子、IL-6或IL-8)的活性。因此，所述亲吻素或其活性片段具有可用于对皮肤老化、皮肤损伤、皮肤状态或炎症性疾病的预防、改善或治疗的效果。

因此，所述组合物可用于对老化(例如，皮肤老化)、皮肤损伤、皮肤状态或炎症性疾病的预防，改善或治疗。

本说明书中的术语“皮肤老化”是关于随着年龄增长而在皮肤中出现的有形和无形的变化的统称。例如，所述变化表示表皮厚度变薄的现象、真皮的细胞数或血管数、DNA损伤修复能力、细胞更换周期、伤口恢复、皮肤屏障功能、表皮的水分维持、汗分泌、皮脂分泌、维生素D生成、物理损伤防御、化学物质去除能力、免疫反应、感官功能、体温调节能力的减少。所述亲吻素或其活性片段可用于改善外因性因素或内因性因素诱发的皮肤老化。所述外因性因素是指多种外因(例如，紫外线(光))，内因性因素也被称为时间的因素，主要是指因时间流逝而发生的因素。也就是说，具体地，所述皮肤老化不仅包括因紫外线、污染、香烟烟雾和化学物质等引起的外部刺激诱发的过早衰老症状，还包括由于因年龄增长而导致的皮肤细胞增殖减少而出现的自然老化现象。此外，所述皮肤老化还包括皱纹、弹力减少、皮肤松弛和干燥现象等。另外，皱纹包括通过由内外因的变化引起的刺激改变构成皮肤组织的成分来诱发皱纹。

所述皮肤状态或与皮肤相关的状态的示例可包括：皮肤老化、皮肤光老化、伤口、皮炎、特应性皮炎、瘙痒症、湿疹性皮肤病、干性湿疹、红斑、荨麻疹、银屑病、药疹或痤疮、丘疹鳞屑性疾病、昆虫和寄生虫媒介疾病、浅表性皮肤真菌病、细菌感染性疾病、病毒性疾病、成人疾病、自身免疫性大疱性疾病、结缔组织疾病、色素异常症、色素性干皮症等。

所述皮肤损伤可包括皮肤组织或细胞的临床和美容方面的观点上的损伤，所述损伤包括：外部的物理损伤、化学物质、细菌、霉菌和病毒等的渗透、暴露于紫外线、皮肤损失水分、因老化等引起的皱纹、自由基(活性氧)等引起的氧化、皮肤色素沉着、皮肤炎症、脂溢性皮炎、皮肤潮红(发红、红斑)、浮肿、苔藓化、湿疹、瘙痒感(痒)和特应性皮炎等。

所述皮肤包括身体的所有皮肤部位，包括面部、手部、手臂、腿部、脚部、胸部、腹部、背部、臀部和头皮。

所述炎症性疾病或与炎症相关的状态的示例可包括：皮炎、过敏、特应性、结膜炎、牙周炎、鼻炎、中耳炎、喉咙炎、扁桃体炎、肺炎、胃溃疡、胃炎、克罗恩病、结肠炎、痛风、强直性脊柱炎，风湿热、狼疮、纤维肌痛(fibromyalgia)、银屑病关节炎、骨关节炎、类风湿性关节炎、肩周炎、腱炎、腱鞘炎、肌腱炎、肌炎、肝炎、膀胱炎、肾炎、干燥综合征(sjogren'ssyndrome)、多发性硬化症和急慢性炎症性疾病。

所述组合物可以是化妆品组合物。

在一实施例中，所述化妆品组合物可用于预防或改善皮肤老化，皮肤保湿，皮肤屏障强化，预防或改善皮肤皱纹，预防或改善皮肤损伤或者预防或改善皮肤炎症。

所述化妆品组合物可具有例如以下类型的化妆品剂型：柔软化妆水、营养化妆水、按摩乳、营养乳、精华液、膜、凝胶、浓缩精华或皮肤贴附。

除所述组合物以外，包括在所述化妆品组合物中的成分还可包括通常用于化妆品组合物的成分作为有效成分，例如，可包括诸如稳定剂、溶解剂、维生素、颜料和香料的常用补充剂和载体。

另外，所述组合物可以是皮肤外用制剂组合物。

在本说明书中，所述皮肤外用制剂可以是乳膏、凝胶、软膏、皮肤乳化剂、皮肤悬浮液、透皮贴、含药绷带、乳液或其组合。所述皮肤外用制剂可通过制成软膏制剂、乳液制剂、喷雾制剂、贴剂、乳膏制剂、散剂、悬浮制剂、凝胶制剂或凝胶形态来使用。所述皮肤外用制剂可根据需要适当地与通常用于化妆品或药品等的皮肤外用制剂的成分进行混合。例如，所述成分是水性成分、油性成分、粉末成分、醇类、保湿剂、增稠剂、紫外线吸收剂、美白剂、防腐剂、抗氧化剂、表面活性剂、香料、色剂、各种皮肤营养剂或其组合。所述皮肤外用制剂可适当地混合以下项：依地酸二钠、依地酸三钠、柠檬酸钠、多聚磷酸钠、偏磷酸钠、葡萄糖酸等的金属螯合剂、咖啡因、单宁、戊脉安、甘草提取物、光甘草定、大蓟果实的热水提取物、各种生药、生育酚乙酸酯、甘草酸、氨甲环酸及其衍生物或其盐等的药剂、维生素C、抗坏血酸磷酸镁、抗坏血酸葡萄糖苷、熊果苷、曲酸、葡萄糖，果糖，海藻糖等的糖类等。

另外，所述组合物可以是医药外品组合物。

术语“医药外品”是指排除以下项的物品并还可包括皮肤外用制剂和个人卫生用品：为治疗，减轻，处置或预防人或动物的疾病的目的而使用的纤维、橡胶制品或与其类似的、对人体的作用较弱或不直接作用于人体并且不是仪器或机器以及与其类似的、作为与用于为预防感染而杀菌、杀虫以及类似的用途的制剂中的一个相对应的物品，为诊断，治疗，减轻，处置或预防人或动物的状态或疾病的目的而使用的物品中的不是仪器、机器或装置的以及为对人或动物的结构和功能产生药理学影响的目的而使用的物品中的不是仪器、机器或装置的。

如果将所述亲吻素或其活性片段添加到医药外品组合物中，则可原样添加香叶醇或将所述香叶醇与其他医药外品成分一起使用，并且可根据常用方法来适当地使用。可根据使用目的(预防、健康或治疗性处置)来适当地确定有效成分的混合量。

虽然所述医药外品组合物尤其不限于此，但所述医药外品组合物包括个人卫生用品、皮肤外用制剂、消毒清洁剂、沐浴泡沫、漱口水、湿纸巾、肥皂洗涤剂、洗手液、加湿器填充剂、口罩、软膏制剂或过滤器填充器。所述个人卫生用品可以是肥皂、湿纸巾、手纸、洗发水、牙膏、护发产品、空气清新剂凝胶或清洁凝胶。

所述组合物可以是药物组合物。

所述药物组合物还可包括药剂学上可接受的稀释剂或载体。所述稀释剂可以是乳糖、玉米淀粉、大豆油、微晶纤维素或甘露糖醇，作为润滑剂可以是硬脂酸镁、滑石或其组合。所述载体可以是赋形剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂或其组合。所述赋形剂可以是微晶纤维素、乳糖、低取代羟基纤维素或其组合。所述崩解剂可以是羧甲基纤维素钙、羟基乙酸淀粉钠、无水磷酸氢钙或其组合。所述粘合剂可以是聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙基纤维素、羟丙基纤维素或其组合。所述润滑剂可以是硬脂酸镁、二氧化硅、滑石或其组合。

所述药物组合物的剂型可被制备为口服或非口服施用剂型。口服施用剂型可以是颗粒制剂、散剂、液体制剂、片剂、胶囊制剂、干糖浆制剂或其组合。非口服施用剂型可以是注射制剂。

所述组合物可以是保健食品组合物。

所述保健食品组合物可单独使用亲吻素或其活性片段或将亲吻素或其活性片段与其他食品或食品成分一起使用，并根据常用方法适当地使用。可根据使用目的(预防、健康或治疗性处置)来适当地确定有效成分的混合量。一般来说，在制备食品或饮料时，可按照对于原料的15重量份以下的量添加本说明书的组合物。所述保健食品的种类没有特别的限制。保健食品的种类中的饮料组合物如同常用的饮料一样可包含多种香料或天然碳水化合物等作为附加成分。所述天然碳水化合物是诸如葡萄糖和果糖的单糖、诸如麦芽糖和蔗糖的二糖以及诸如糊精、环糊精的多糖、木糖醇、山梨糖醇和赤藓糖醇等的糖醇。作为甜味剂，可使用诸如奇异果甜蛋白和甜菊提取物的天然甜味剂或诸如糖精和阿斯巴甜的合成甜味剂。所述保健食品组合物还可包含营养素、维生素、电解质、调味剂、着色剂、果胶酸及其盐、海藻酸及其盐、有机酸、保护胶体增稠剂、pH调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、醇、用于碳酸饮料的碳酸化剂或其组合。所述保健食品组合物还可包含天然果汁、果汁饮料、用于制造蔬菜饮料的果肉或其组合。

另外，另一方面在于提供一种对个体的状态进行预防、改善或治疗的方法，包括：将有效量的所述组合物施用于需要它的个体。

关于所述个体的状态或组合物，如上所述。所述个体可以是哺乳动物，例如人、牛、马、猪、狗、羊、山羊或猫。

有益效果

根据一方面的亲吻素或所述亲吻素的活性片段具有对MMP-1或炎症性细胞因子的抑制活性，因此具有可用于对皮肤老化、皮肤损伤、皮肤状态或炎症性疾病的预防、改善或治疗的效果。

附图说明

图1是示出根据一实施例的关于亲吻素的活性片段的HPLC分析结果的曲线图。

图2是根据一实施例的关于亲吻素的活性片段的化学机构和三维预测结构模型的示图；亲吻素-1(C63H83N17O14)的(a)化学结构；(b)三维预测结构模型；亲吻素-E(C31H39N9O9)的(c)化学结构；(d)三维预测结构。

图3是示出根据一实施例的亲吻素-1和亲吻素-E抑制MMP-1的表达的曲线图。

图4是示出根据一实施例的亲吻素-1和亲吻素-E抑制IL-6的表达的曲线图。

图5是示出根据一实施例的亲吻素-1和亲吻素-E抑制IL-8的表达的曲线图。

图6是示出根据一实施例的亲吻素-1和亲吻素-E抑制11β-HSD1的表达的曲线图。

具体实施方式

以下，通过实施例进行更详细的说明。然而，这些实施例用于示例性地说明一个以上的实施例，本发明的范围不由这些实施例限定。

实施例1制备亲吻素的活性片段

按照以下方式从用SEQ ID NO:1表示的亲吻素制备亲吻素活性片段、亲吻素-1(全部亲吻素的氨基酸序列中的从N-末端开始的第45个至第54个氨基酸序列(SEQ ID NO:3))和SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:4。

[合成方案]

首先，可通过包括以下步骤来制备所述亲吻素的活性片段：(1)获得通过固相多肽合成(Solid-Phase Peptide Synthesis；SPPS)被NH2-保护的氨基酸残基-树脂的步骤；(2)使用裂解(Cleavage)溶液从树脂获得去除了保护基的多肽；(3)使用HPLC对获得的未被提纯的多肽进行提纯的步骤。具体地，通过常规的固相多肽合成法使用9-芴甲氧羰基(9-fluorenylmethoxycarbonyl；Fmoc)来合成出SEQ ID NO:2，并且作为树脂，使用了结合了用Fmoc保护氨基的苯丙氨酸的王树脂。氨基酸残基的延长通过将N-羟基苯并三唑(Nhydroxybenzotriazole；HOBt)和N，N'-二异丙基碳二亚胺(N,N'-Diisopropylcarbodiimide；DIC)用作活性剂来进行反应。各个步骤的结合时使用的氨基酸和HOBt、DIC可使用树脂的5当量，在室温下反应2个小时。在反应结束后，在用二甲基甲酰胺(DMF)洗涤6次以后，用二氯甲烷(DCM)洗涤6次，随后对树脂进行干燥。通过用三氟乙酸：三异丙基硅烷：水(90：5：5(v/v))的混合溶液使干燥后的SEQ ID NO:1-树脂在室温下反应2小时，从树脂分离出多肽，随后用凉的乙醚使所述多肽沉淀，并且使用离心分离器来获得粗肽。将包括0.1％三氟乙酸的水和乙腈用作溶剂，并使用反相高效液相色谱法(Reverse-Phase HighPerformance Liquid Chromatography,柱(column):Kromasil,C18,5μ,

250*21.2mm)来对获得的SEQ ID NO:1的多肽进行分离提纯(收率：34.8％)。SEQ ID NO:3、SEQID NO:4和SEQ ID NO:5也使用如上的方法来合成，收率分别为32.4％、38.0％和35％。

试验例1亲吻素的MMP-1抑制活性评价

为了确定亲吻素模拟多肽是否具有抑制皮肤老化和皮肤损伤的活性，对亲吻素的MMP-1抑制活性进行评价。

具体地，使用以下来确定是否MMP-1抑制：亲吻素1(全部亲吻素的氨基酸序列(SEQID NO:1)的在从N-末端开始第45个氨基酸序列至第54个氨基酸序列中NH2被加帽的(SEQID NO:3))以及亲吻素E(全部亲吻素的氨基酸序列(SEQ ID NO:1)的在从N-末端开始第45个氨基酸序列至第49个氨基酸序列中NH2被加帽的(SEQ ID NO:5))。

使用人的成纤维细胞株Hs68来测量MMP-1表达量，以对亲吻素对于因紫外线增加的胶原酶(MMP-1)的抑制活性进行比较。在将数量为4x10⁵的成纤维细胞株Hs68分株到6孔平板上之后，在37℃，5％CO₂条件下的培养箱中培养24小时。随后，在去除培养基并加入DPBS以后，对除UVB非照射组以外的剩余细胞组照射12mJ/cm²的UVB。然后，作为阳性对照组按照浓度添加抗坏血酸(AA)，作为实验组按照浓度添加亲吻素模拟肽，并额外培养24小时。随后，在使用TRIZOL试剂(RNA提取试剂(RNA iso)，达卡拉(DAKARA)，日本)从处理了各个样本的细胞中分离出RNA后，使用仪器(Nanodrop)在260nm等级对RNA进行定量后，分别使用2μg的RNA来在放大器中合成出cDNA(C1000热循环仪，Bio-Rad，美国)。使用添加了作为靶蛋白的MMP-1引物和作为花青燃料的赛博格林(SYBR Green supermis，应用生物系统(AppliedBiosystems)，美国)的混合物来在实时PCR(real-time PCR)机器中对合成的cDNA执行实时聚合酶连锁反应，从而最终对MMP-1基因的表达程度进行评价。用于PCR的引物的序列和反应条件如下面的表1所示。通过关于β-肌动蛋白(β-actin)基因的修补来最终分析基因的表达量，其结果如表1所示。

【表1】

图1是示出根据一实施例的亲吻素抑制MMP-1的表达的曲线图。

结果，如图1所示，与UVB照射组中MMP-1表达量激增相反，可获知亲吻素处理组中的表达量减少。以上结果意味着由于亲吻素抑制MMP-1的表达量，因此抑制了皮肤老化和皮肤损伤。

试验例2亲吻素的对炎症性因子的抑制活性评价

为了确认亲吻素是否具有抗炎症活性，对作为亲吻素的致炎(pro-inflammatory)因子的IL-6和IL-8的抑制活性进行评价。

具体地，在将数量为4x10⁵的成纤维细胞株Hs68分株到6孔平板上之后，在37℃，5％CO₂条件下的培养箱中培养24小时。此后，在去除培养基并加入DPBS以后，对除UVB非照射组以外的剩余细胞组照射15mJ/cm²的UVB。然后，根据浓度(1nM,10nM,100nM和1000nM)添加亲吻素，并额外培养24小时。随后，除使用了下面的表2中的引物以外，按照与所述试验例1相同的方法，对因UVB而过度表达的IL-6和IL-8的表达程度进行评价，其结果分别如图2和图3所示。

【表2】

图2是示出根据一实施例的亲吻素抑制IL-6的表达的曲线图。

图3是示出根据一实施例的亲吻素抑制IL-8的表达的曲线图。

如图2和图3所示，可获知与无处理对照组相比，亲吻素处理组中的被LPS诱导的IL-6和IL-8的表达显著减少。尤其是，IL-6的表达量减少到与正常对照组类似的水平。以上结果意味着根据一实施例的亲吻素具有抗炎症活性，并可用于对炎症(例如，皮肤炎症)或皮肤损伤的预防、改善或治疗的组合物。

试验例3亲吻素的对应激因子的抑制活性评价

因为紫外线引起的11β-HSD1的激活和表达增加与皮肤老化密切相关，所以被关注为用于抑制皮肤老化的新的目标。

因此，在本试验例中，确认亲吻素模拟多肽是否抑制通过UVB诱导的11β-HSD1的mRNA表达。

具体地，在按照4x10⁵的密度将人的成纤维细胞株接种到6孔细胞培养皿上之后，在37℃，5％CO₂条件下的培养箱中培养24小时。在将UVB照射12mJ之后，根据浓度添加抗坏血酸作为阳性对照组并根据浓度添加亲吻素模拟多肽作为实验组，并培养24小时。随后，回收细胞，并通过添加1ml的TRIZOL试剂(RNA提取试剂(RNA iso)，达卡拉(DAKARA)，日本)来分离RNA。随后，除使用了下面的表3中的引物以外，按照与所述试验例1相同的方法，对因UVB而过度表达的11β-HSD1的表达程度进行评价，其结果如图4所示。

【表3】

图4是示出根据一实施例的亲吻素的对11β-HSD1表达的抑制程度的曲线图。如图4所示，可获知与无处理对照组相比，在亲吻素-1和亲吻素-E处理组中作为应激激素转换酶的11β-HSD1表达显著地减少。尤其，对于亲吻素-E来说，可获知即使与作为阳性对照组的抗坏血酸相比，也能够显著地抑制11β-HSD1的表达。

以上结果意味着根据一实施例的亲吻素不仅具有抗炎症活性还抑制皮肤应激激素诱导酶的表达，从而能够有效地抑制可能因外部刺激引起的皮肤老化。

SEQUENCE LISTING

<110> 科丝美诗株式会社;

生物 FD&C 株式会社

<120> 包括亲吻素的抗老化或抗炎症的组合物

<130> MX-57820-[P19111006WP]

<150> KR10-2017-170450

<151> 2017-12-12

<150> KR10-2018-125412

<151> 2018-10-19

<160> 17

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 138

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 1

Met Asn Ser Leu Val Ser Trp Gln Leu Leu Leu Phe Leu Cys Ala Thr

1 5 10 15

His Phe Gly Glu Pro Leu Glu Lys Val Ala Ser Val Gly Asn Ser Arg

20 25 30

Pro Thr Gly Gln Gln Leu Glu Ser Leu Gly Leu Leu Ala Pro Gly Glu

35 40 45

Gln Ser Leu Pro Cys Thr Glu Arg Lys Pro Ala Ala Thr Ala Arg Leu

50 55 60

Ser Arg Arg Gly Thr Ser Leu Ser Pro Pro Pro Glu Ser Ser Gly Ser

65 70 75 80

Pro Gln Gln Pro Gly Leu Ser Ala Pro His Ser Arg Gln Ile Pro Ala

85 90 95

Pro Gln Gly Ala Val Leu Val Gln Arg Glu Lys Asp Leu Pro Asn Tyr

100 105 110

Asn Trp Asn Ser Phe Gly Leu Arg Phe Gly Lys Arg Glu Ala Ala Pro

115 120 125

Gly Asn His Gly Arg Ser Ala Gly Arg Gly

130 135

<210> 2

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 亲吻素片段 1

<400> 2

Tyr Asn Trp Asn Ser Phe Gly Leu Arg Phe

1 5 10

<210> 3

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 亲吻素片段 2，C-末端酰胺化

<220>

<221> MOD_RES

<222> (10)..(10)

<223> C-末端酰化

<400> 3

Tyr Asn Trp Asn Ser Phe Gly Leu Arg Phe

1 5 10

<210> 4

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 亲吻素片段3

<400> 4

Tyr Asn Trp Asn Ser

1 5

<210> 5

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 亲吻素片段4，C-末端酰胺化

<220>

<221> MOD_RES

<222> (5)..(5)

<223> C-末端酰化

<400> 5

Tyr Asn Trp Asn Ser

1 5

<210> 6

<211> 27

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 亲吻素片段5

<400> 6

Ile Pro Ala Pro Gln Gly Ala Val Leu Val Gln Arg Glu Lys Asp Leu

1 5 10 15

Pro Asn Tyr Asn Trp Asn Ser Gly Leu Arg Phe

20 25

<210> 7

<211> 27

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 亲吻素片段6，C-末端酰胺化

<220>

<221> MOD_RES

<222> (27)..(27)

<223> C-末端酰化

<400> 7

Ile Pro Ala Pro Gln Gly Ala Val Leu Val Gln Arg Glu Lys Asp Leu

1 5 10 15

Pro Asn Tyr Asn Trp Asn Ser Gly Leu Arg Phe

20 25

<210> 8

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> MMP1上游引物

<400> 8

cgaattgccg acagagatga 20

<210> 9

<211> 22

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> MMP1下游引物

<400> 9

gtccctgaac agcccagtac tt 22

<210> 10

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> b-actin上游引物

<400> 10

ggccatctct tgctcgaagt 20

<210> 11

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> b-actin下游引物

<400> 11

gagaccttca acaccccagc 20

<210> 12

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> IL6上游引物

<400> 12

tacccccagg agaagattcc 20

<210> 13

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> IL6下游引物

<400> 13

ttttctgcca gtgcctcttt 20

<210> 14

<211> 24

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> IL8上游引物

<400> 14

ccaacacaga aattattgta aagc 24

<210> 15

<211> 21

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> IL8下游引物

<400> 15

tgaattctca gccctcttca a 21

<210> 16

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 11b-HSD1上游引物

<400> 16

aagcagagca atggaagcat 20

<210> 17

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 11b-HSD1下游引物

<400> 17

gaagaaccca tccaaagcaa 20

Claims

1.一种包括亲吻素的活性片段作为有效成分的化妆品组合物；

其中，所述亲吻素的活性片段由从SEQ ID NO:2至SEQ ID NO:5组成的组中选择的任意一个氨基酸序列组成。

2.如权利要求1所述的化妆品组合物，其中，所述亲吻素的活性片段对基质金属蛋白酶或炎症因子进行抑制。

3.一种包括亲吻素的活性片段作为有效成分的用于预防，改善或治疗皮肤状态的皮肤外用制剂组合物；

4.如权利要求3所述的皮肤外用制剂组合物，所述皮肤状态是由以下组成的组中选择的任何一个或更多个：皮肤伤口、瘙痒症、湿疹皮肤病、红斑、荨麻疹、银屑病和痤疮。

5.如权利要求3所述的皮肤外用制剂组合物，所述皮肤状态是由以下组成的组中选择的任何一个或更多个：特应性皮肤炎、干性湿疹和药疹。

6.如权利要求3所述的皮肤外用制剂组合物，所述皮肤状态是皮肤炎。

7.一种包括亲吻素的活性片段作为有效成分的用于预防或改善皮肤老化的皮肤外用制剂组合物；

8.一种包括亲吻素的活性片段作为有效成分的用于预防和治疗炎症性疾病的药物组合物；

9.根据权利要求8所述的药物组合物，所述炎症性疾病是由以下组成的组中选择的任意一个或更多个：皮炎和过敏。

10.根据权利要求8所述的药物组合物，所述炎症性疾病是特应性皮炎。

11.一种包括亲吻素的活性片段的用于改善皮肤状态的保健食品；

12.一种亲吻素的活性片段的用途，用于制备用于预防或改善皮肤老化、预防或改善皮肤皱纹、预防或改善皮肤损伤、或者预防或改善皮肤炎症的组合物；