CN110157670A - 用于捕获特定细胞的方法 - Google Patents

用于捕获特定细胞的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN110157670A
CN110157670A CN201910088843.4A CN201910088843A CN110157670A CN 110157670 A CN110157670 A CN 110157670A CN 201910088843 A CN201910088843 A CN 201910088843A CN 110157670 A CN110157670 A CN 110157670A
Authority
CN
China
Prior art keywords
specific cells
blood
biofluid
hydrophilic polymer
capturing
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201910088843.4A
Other languages
English (en)
Inventor
皆川康久
田中贤
干场隆志
江村遥
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sumitomo Rubber Industries Ltd
Yamagata University NUC
Original Assignee
Sumitomo Rubber Industries Ltd
Yamagata University NUC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sumitomo Rubber Industries Ltd, Yamagata University NUC filed Critical Sumitomo Rubber Industries Ltd
Publication of CN110157670A publication Critical patent/CN110157670A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602Vertebrate cells
    • C12N5/0693Tumour cells; Cancer cells
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5002Partitioning blood components
    • BPERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01DSEPARATION
    • B01D21/00Separation of suspended solid particles from liquids by sedimentation
    • B01D21/26Separation of sediment aided by centrifugal force or centripetal force
    • B01D21/262Separation of sediment aided by centrifugal force or centripetal force by using a centrifuge
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N15/00Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
    • G01N15/10Investigating individual particles
    • G01N15/14Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5091Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing the pathological state of an organism
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/536Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase
    • G01N33/537Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase with separation of immune complex from unbound antigen or antibody
    • G01N33/5375Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase with separation of immune complex from unbound antigen or antibody by changing the physical or chemical properties of the medium or immunochemicals, e.g. temperature, density, pH, partitioning
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/536Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase
    • G01N33/537Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase with separation of immune complex from unbound antigen or antibody
    • G01N33/539Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase with separation of immune complex from unbound antigen or antibody involving precipitating reagent, e.g. ammonium sulfate
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2509/00Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N15/00Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
    • G01N15/10Investigating individual particles
    • G01N15/14Optical investigation techniques, e.g. flow cytometry
    • G01N2015/1486Counting the particles
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N35/00Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor
    • G01N2035/00465Separating and mixing arrangements
    • G01N2035/00495Centrifuges

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Sampling And Sample Adjustment (AREA)

Abstract

本发明提供一种用于捕获特定细胞(例如,多种癌细胞,包括不表达EpCAM的癌细胞)的方法以及一种涉及该方法的用于分析特定细胞的方法。本发明包括一种用于捕获血液或生物流体中存在的特定细胞的方法,所述方法包括:凝集采样血液或生物流体中的血细胞;离心所获得的血液或生物流体;然后将特定细胞从血液或生物流体中捕获到亲水聚合物层上。

Description

用于捕获特定细胞的方法
技术领域
本发明涉及一种用于从血液或者生物流体中捕获特定细胞(例如,血液或者生物流体中存在的癌细胞)的方法以及一种用于分析特定细胞的方法。
背景技术
当形成癌细胞时,已知它们到一定时候将出现在血液或者生物流体中。血液中的这样的癌细胞被称为“循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)”。由此,可以预期:可对循环肿瘤细胞进行分析,例如用于评价癌症治疗效果、预测预后预期寿命、预测给药之前抗癌药物的效果、或者检验基于癌细胞遗传分析的治疗方法。
然而,存在下述问题:由于循环肿瘤细胞的数量非常少(若干~数百个细胞/1mL血液),因此难以捕获这样的癌细胞。
例如,CellSearch系统被称为用于捕获循环肿瘤细胞的技术。涉及抗原-抗体反应(通过EpCAM抗体进行捕获)的该技术仅能够捕获表达EpCAM的癌细胞,因此,能够被捕获的癌细胞的种类是有限的。
引用文献列表
专利文献
专利文献1:JP 2005-523981 T
发明内容
技术问题
本发明的目的在于解决上述问题,并提供一种用于捕获特定细胞(例如,多种癌细胞,包括不表达EpCAM的癌细胞)的方法以及一种涉及该方法的用于分析特定细胞的方法。
解问题的方案
本发明涉及一种用于捕获血液或生物流体中存在的特定细胞的方法,所述方法包括:凝集采样血液或生物流体中的血细胞;离心所获得的血液或生物流体;然后将特定细胞从血液或生物流体中捕获到亲水聚合物层上。
优选地,特定细胞为癌细胞。
优选地,用于捕获特定细胞的方法中,在凝集和离心之前,稀释采样血液或生物流体。
优选地,将缓冲溶液或液体培养基用于稀释。
优选地,凝集血细胞包括抗原-抗体反应。
优选地,亲水聚合物层由选自聚(甲基)丙烯酰吗啉和下式(I)所示的聚合物中的至少一种亲水聚合物形成:
式中,R1表示氢原子或甲基,R2表示烷基,m表示1~5,n表示重复数。
优选地,亲水聚合物层由选自(甲基)丙烯酰吗啉和下式(I-1)所示的化合物中的至少一种亲水性单体与附加单体的共聚物形成:
式中,R1、R2和m如上所述。
优选地,亲水聚合物层的厚度为10~500nm。
本发明的另一方面涉及一种用于分析特定细胞的方法,包括:通过用于捕获特定细胞的方法从血液或生物流体中捕获特定细胞,以及分析特定细胞。
发明的有益效果
本发明的用于捕获血液或生物流体中存在的特定细胞的方法包括:凝集采样血液或生物流体中的血细胞,离心所获得的血液或生物流体,然后将特定细胞从血液或生物流体中捕获到亲水聚合物层上。这种方法可以有效地捕获特定细胞(例如,多种癌细胞,包括不表达EpCAM的癌细胞)。因此,例如,它可以充分地从血液或生物流体中捕获特定细胞比如癌细胞,并且还可以降低血细胞(包括红细胞、白细胞以及血小板)的粘附或附着,从而选择性地捕获特定细胞。
附图说明
图1显示具有其上形成有亲水聚合物层的孔的多孔板的示例性示意图。
[符号说明]
1:多孔板
11:孔
21:亲水聚合物层
具体实施方式
本发明提供一种用于捕获血液或生物流体中存在的特定细胞的方法。所述方法包括:凝集采样血液或生物流体中的血细胞;离心所获得的血液或生物流体;然后将特定细胞从血液或生物流体中捕获到亲水聚合物层上。
具体地,根据本发明方法,可首先凝集取样自例如身体的血液或者生物流体中的血细胞,然后可离心所获得的血液或生物流体,制备具有低于采样血液或生物流体的血细胞水平的试样。然后,可将试样与亲水聚合物层接触,以捕获试样中的特定细胞比如癌细胞。特别是,与不凝集血细胞时相比,这种方法改善白细胞等的分离以及降低特定细胞比如癌细胞的损失(因特定细胞被混入红细胞等的部分中而造成的损失)。因此,由于血细胞等的细胞粘附抑制作用降低,因此特定细胞显示出它们固有的粘附于亲水聚合物的能力。因此,本发明方法显著改善特定细胞比如癌细胞的捕获以及降低血细胞的捕获,由此在选择性地捕获特定细胞比如癌细胞方面可以实现在高水平存在血细胞时永远无法获得的效果。
例如,首先,可通过例如包括通过抗原-抗体反应来结合和凝集红细胞和白细胞的方法来凝集采样血液或生物流体中的血细胞;然后可通过离心来分离(除去)血液或者生物流体中的血细胞比如红细胞、白细胞和血小板等,制备包含降低水平的它们的试样;随后可将试样与亲水聚合物层接触,选择性地捕获特定细胞。由此,可以有效地将血液或生物流体中的肿瘤细胞等捕获到亲水聚合物层上。然后,可以预期:通过计数被捕获的肿瘤细胞等的数量,可以确定血液或生物流体中的肿瘤细胞等的数量,例如用于评价癌症治疗效果。此外,可将被捕获的肿瘤细胞等进行培养,然后用来判定药物比如抗癌药物的效果。这使得我们能够确定在给药之前药物比如抗癌药物的体外效果,并且还有助于筛选药物比如抗癌药物。
在用于捕获特定细胞的方法中使用的特定细胞的例子包括癌细胞(任何癌细胞,包括不表达EpCAM的癌细胞)。癌细胞的例子包括循环肿瘤细胞(CTCs)。
用于捕获特定细胞的方法包括首先凝集采样血液或生物流体中的血细胞。
血细胞可通过能够产生该凝集的任何方法凝集。这种方法之中,基于抗原-抗体反应进行的那些方法是适宜的。具体地说,可适宜地使用凝集反应比如血凝反应。
在通过血凝反应凝集血液或者生物流体中的血细胞以制备包含凝集步骤中的凝集物的试样时,可以通过随后的试样离心来除去包含血细胞的凝集物。因此,可以有效地将试样中剩余的高水平特定细胞(例如,癌细胞)捕获到亲水聚合物层上。
血细胞的凝集可适当地使用例如用于凝集红细胞和白细胞的抗体试剂(用于凝集红细胞和白细胞的抗体组合物)进行。尽管具有接近于特定细胞比如癌细胞的比重的某些白细胞可以通过离心被不良地分离,但是在使用抗体组合物通过抗原-抗体反应来结合和凝集红细胞和白细胞时,不仅可以从具有与特定细胞不同的比重的红细胞、血小板等中,而且还可以从白细胞中良好地分离特定细胞。因此,可以进一步改善特定细胞的粘附和捕获。
用于捕获特定细胞的方法可包括:在血细胞凝集之前,降低血液或生物流体中的蛋白质水平的附加预处理。降低血液或生物流体中的蛋白质水平的附加预处理可例如通过稀释采样血液或生物流体来进行。稀释可使用具有与人类血液相同的pH(约7.4)的缓冲溶液比如磷酸盐缓冲盐水(PBS)或者液体培养基比如杜尔贝科改良伊格尔培养基(DMEM)来实施。具体地,其可通过用缓冲溶液稀释采样血液或生物流体、或者通过将采样血液或生物流体添加至用于稀释的液体培养基中来进行,以获得低于采样血液或生物流体的蛋白质水平。
用于捕获特定细胞的方法中,在可选地实施附加预处理之后,可凝集血细胞,随后进行离心。离心除去试样中的凝集血细胞。
优选地,在200~3000G(×g)的离心力下进行离心工艺。200G以上的离心力改善血细胞的分离并且降低特定细胞的损失(因特定细胞被混入红细胞等的部分中而导致的损失),从而有效地选择性地捕获特定细胞。3000G以下的离心力可以减少对特定细胞的压力,从而维持它们的原始性质。离心力更优选为300~2800G,还更优选为400~2500G。
离心的持续时间和温度可例如考虑分离血细胞的能力来适当地进行选择。例如,离心可在2~40℃(优选地,3~30℃)的条件下,实施1~120分钟(优选地,1~60分钟)。离心可通过公知技术进行,比如使用公知的离心分离器进行。
离心工艺中,可离心采样血液或生物流体,随后除去包含血小板的上层清液,制备具有低于采样血液或生物流体的血小板水平的试样。此外,可离心采样血液或生物流体,随后分离中间单核细胞层,分离和除去红细胞和血小板,从而制备具有提高水平的特定细胞比如癌细胞的试样。
用于捕获特定细胞的方法中,离心工艺之后是将特定细胞捕获到亲水聚合物层上。
亲水聚合物层(由亲水聚合物形成的层)可形成在特定基底上。基底的例子包括:丙烯酸(酯)类树脂(聚丙烯酸(酯)类树脂),比如聚丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚丙烯酸和聚甲基丙烯酸;环烯烃类树脂(聚环烯烃);碳酸酯类树脂(聚碳酸酯);苯乙烯类树脂(聚苯乙烯);聚酯类树酯,比如聚对苯二甲酸乙二酯(PET);聚二甲基硅氧烷;以及玻璃,比如钠钙玻璃和硼硅(酸盐)玻璃。
亲水聚合物层(由亲水聚合物形成的层)的厚度优选为10~500nm,更优选为30~400nm,还更优选为50~350nm。在将厚度调整在上述范围之内时,可以良好地实现癌细胞的选择俘获以及其它蛋白质和细胞的低吸附。
亲水聚合物可适当地选自具有亲水性的聚合物。例如,其可为一种或两种或更多种亲水性单体的均聚物或者共聚物,或者一种或两种或更多种亲水性单体与附加单体的共聚物。这样的均聚物和共聚物的例子包括聚丙烯酸、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸、聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯酰吗啉、聚甲基丙烯酰吗啉、聚丙烯酰胺以及聚甲基丙烯酰胺。
亲水性单体可为包含亲水基的任何单体。亲水基的例子包括公知的亲水基,比如酰胺基、硫酸基、磺酸基、羧酸基、羟基、氨基以及氧(化)乙烯基。
亲水性单体的具体例子包括:(甲基)丙烯酸、(甲基)丙烯酸酯(例如,(甲基)丙烯酸烷氧基烷基酯比如(甲基)丙烯酸甲氧基乙酯,以及(甲基)丙烯酸羟烷基酯比如(甲基)丙烯酸羟乙酯)、(甲基)丙烯酰胺以及包含环基的(甲基)丙烯酰胺衍生物(例如,(甲基)丙烯酰吗啉)。其中,优选(甲基)丙烯酸、(甲基)丙烯酸酯、(甲基)丙烯酸烷氧基烷基酯以及(甲基)丙烯酰吗啉,其中更优选(甲基)丙烯酸烷氧基烷基酯,其中特别优选丙烯酸-2-甲氧基乙酯。
可适当地选择附加单体,只要它没有抑制亲水聚合物的效果即可。其例子包括可以赋予温度响应性的芳香族单体,比如苯乙烯、乙酸乙烯酯以及N-异丙基丙烯酰胺。
特别是,亲水聚合物优选选自聚(甲基)丙烯酰吗啉和下式(I)所示的聚合物中的至少一种:
式中,R1表示氢原子或甲基,R2表示烷基,m表示1~5,n表示重复数。
R2表示的烷基优选具有1~10个碳原子,更优选1~5个碳原子。特别是,R2特别优选为甲基或者乙基。符号m优选为1~3。符号n(重复单元的数量)优选为15~1500,更优选为40~1200。
或者,亲水聚合物还可合适地为选自(甲基)丙烯酰吗啉和下式(I-1)所示的化合物中的至少一种亲水性单体与附加单体的共聚物。
式(I-1)中,R1、R2和m如上所述。
亲水聚合物层的表面优选至少部分(部分或者全部)与水的接触角为25°~75°,更优选为35°~75°,还更优选为35°~70°。在亲水聚合物层具有这种预定的与水的接触角时,可以良好地实现本发明的效果。
亲水聚合物层可通过下述方法形成:将亲水聚合物溶解或者分散在任何溶剂中以制备亲水聚合物溶液或分散体,并且通过公知方法(比如方法(1):通过将亲水聚合物溶液或分散体注入基底表面(基底的凹处)中并且将其保留干燥预定时间,或者,方法(2):通过将亲水聚合物溶液或分散体涂布(喷雾)到基底表面并且将其保留干燥预定时间)用亲水聚合物溶液或分散体全部或者部分地涂覆基底表面。据此,可以制造配置有由亲水聚合物形成的聚合物层的基底。然后,可将配置有亲水聚合物层的基底与视需要的其它部件组合,以制备能够分析特定细胞的装置。
溶剂、注射法、涂布(喷雾)法以及其它条件可采用传统公知的材料或方法。
方法(1)或方法(2)中的保留/干燥时间可根据基底尺寸、引入液体的种类以及其它参数适当地进行选择。保留时间优选为5分钟~10个小时,更优选为10分钟~5个小时,还更优选为15分钟~2个小时。干燥优选在室温(约23℃)~80℃下实施,更优选在室温~50℃下实施。此外,干燥可在减压条件下实施。此外,可将亲水聚合物溶液或分散体保留特定时间段,可选地随后在干燥之前排出过剩溶液或分散体。
溶剂可为能够溶解亲水聚合物的任何溶剂,并且可根据所使用的亲水聚合物适当地选择。其例子包括:水、有机溶剂和它们的溶剂混合物。有机溶剂的例子包括:醇类,比如甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇和甲氧基丙醇;酮类,比如丙酮和甲基乙基酮;四氢呋喃;乙腈;乙酸乙酯;以及甲苯。
用于捕获特定细胞的方法中,可将通过使血液或生物流体经过血细胞凝集和离心而制得的试样(具有较低血细胞水平的试样)与配置有亲水聚合物层的基底接触,以捕获特定细胞。将试样与亲水聚合物层接触可通过能够进行这种接触的任何方法进行,例如通过注射或者涂布(喷雾)试样进行。
通过将试样与亲水聚合物层接触,可以将试样中存在的特定细胞捕获到亲水聚合物层上,同时降低血细胞等的吸附。因此,可例如通过将接触试样保留预定时间然后将其进行洗涤,选择性地将特定细胞捕获到亲水聚合物层上。然后,可以预期:通过计数被捕获的特定细胞的数量,可以确定采样血液或生物流体中的特定细胞的数量,例如用于评价癌症治疗效果。
用于捕获特定细胞的方法可使用例如包括基底(比如多孔板或者腔室载玻片)与可选的附加部件的装置来实施。图1图示了示例性的多孔板1。
图1中的多孔板1是旨在捕获特定细胞的装置(其中孔11以所谓的矩阵式排列)。多孔板1具备多个具有圆形开口的孔11。孔11凹陷,可将通过使采样血液或生物流体经过血细胞凝集和离心以降低血细胞(比如红细胞和白细胞和血小板)的水平而制得的试样注入其中。与直接对采样血液或生物流体进行分析时相比,在对注入试样进行分析时,可以有效地捕获特定细胞。因此,可以确认血液或生物流体中特定细胞的存在与否、计数特定细胞的数量、培养特定细胞、判定药物效果以及筛选药物。
虽然图1图示了作为示例的具有以4行×6列排列的24个孔11的24孔板,但是多孔板1具有至少两个孔11即可,并且可设置任何数量的孔11。除24孔板外的示例包括其中孔11的数量为6、96、384个等的常规多孔板。
每个孔11是在多孔板1的表面开口的非贯通孔。可通过各开口,将通过使血液或生物流体经过血细胞凝集和离心而制得的试样注入孔11中。如果确认存在特定细胞的话,则还可注射用于培养特定细胞的培养液。
对各孔11的开口的直径R和深度D没有特别限定,其可为常规的多孔板1的那些参数。虽然图1中各孔11的内侧表面大致垂直于多孔板1的相对面,但是各孔11的内侧表面可从开口到底部倾斜以变细。或者,内侧表面可从开口到底部倾斜以扩张。
虽然图1中的孔11为圆形开口,但是孔11的开口可为任何形状比如四边形。
多孔板1可适宜地为其中多个孔11为可分(离)的多孔板。由于配置有多个孔,因此可以将它们分成用于计数特定细胞的数量的孔和用于培养特定细胞的孔。例如,可首先在用于计数的孔中确定特定细胞的存在与否,并且如果确定存在的话,可在用于培养的孔中培养特定细胞,然后将其用来判定药物效果。适宜的腔室载玻片中,腔室的数量为至少一个但不大于十个。
多孔板1或腔室载玻片中,孔11优选具有至少部分地形成在其内表面上的亲水聚合物层。图1所示的示例中,亲水聚合物层21形成在孔的底表面和一部分侧表面上。
一旦将通过使血液或生物流体经过血细胞凝集和离心而制得的试样引入孔11中,则可将试样中存在的特定细胞捕获到亲水聚合物层21上,同时降低血细胞等的吸附。因此,可通过将引入试样保留预定时间然后将其进行洗涤,选择性地将特定细胞捕获到亲水聚合物层21上。
本发明的用于分析特定细胞的方法包括:按照上述方法从血液或生物流体中捕获特定细胞比如癌细胞,以及分析特定细胞。例如,通过该方法,可捕获特定细胞(例如,多种癌细胞,包含不表达EpCAM的癌细胞)。此外,这种方法可以充分地从血液或生物流体中捕获特定细胞,同时降低其它蛋白质和细胞的粘附或者附着,从而选择性地捕获特定细胞。
用于分析特定细胞的方法中,可适宜地将亲水聚合物层与(已将血细胞等从其中除去的)血液接触。这可以进一步增强特定细胞比如癌细胞的选择性捕获。血细胞等的除去可通过公知技术(比如膜分离以及如上所述的离心)进行。
实施例
本发明通过参照以下实施例进行具体说明,但不限于以下实施例。
(装置实施例1)
使用偶氮二异丁腈(AIBN),在80℃的温度下将丙烯酸-2-甲氧基乙酯进行热聚合6个小时,制备聚(丙烯酸-2-甲氧基乙酯)(分子量:Mn=约15,000,Mw=约50,000)。然后,制备1.0%的聚(丙烯酸-2-甲氧基乙酯)在甲醇中的溶液。
将该聚(丙烯酸-2-甲氧基乙酯)溶液(1质量%)注入聚苯乙烯24孔板的孔中,并且在室温下放置30分钟。其后,使用吸液管部分地吸取溶液,随后进行干燥,制备医用分析装置。
(装置实施例2)
如装置实施例1那样制备医用分析装置,所不同的只是:将聚(丙烯酸-2-甲氧基乙酯)溶液的浓度变更为2.5质量%。
(装置实施例3)
如装置实施例1那样制备医用分析装置,所不同的只是:将聚(丙烯酸-2-甲氧基乙酯)溶液的浓度变更为5.0质量%。
(装置实施例4)
如装置实施例1那样制备医用分析装置,所不同的只是:使用硼硅(酸盐)玻璃腔室载玻片,并且将聚(丙烯酸-2-甲氧基乙酯)溶液的浓度变更为0.3质量%。
(装置实施例5)
如装置实施例4那样制备医用分析装置,所不同的只是:将聚(丙烯酸-2-甲氧基乙酯)溶液的浓度变更为0.5质量%。
(装置实施例6)
如装置实施例1那样制备医用分析装置,所不同的只是:未注射聚(丙烯酸-2-甲氧基乙酯)溶液,并且未形成聚(丙烯酸-2-甲氧基乙酯)层。
[亲水聚合物层(涂层)的厚度]
各医用分析装置的亲水聚合物层的厚度通过使用TEM,在加速电压为15kV、放大倍率为1000倍的条件下,测量(图示)亲水聚合物层的截面来测定。
[与水的接触角]
将2μL体积的蒸馏水滴落在各医用分析装置的亲水聚合物层的表面上。三十秒后,在室温下通过θ/2方法测量接触角。
[掺入癌细胞的全血的分析]
以每mL血液为100个细胞的浓度将染色的人类结肠腺癌(HT-29)细胞悬浮在全血中,制备掺料血液。使用等体积的液体培养基稀释掺料血液以制备掺料血液稀释物,然后将其直接使用或者使其经过如下所述的血细胞凝集。接下来,向15mL离心管中添加用于分离的溶液(Lymphoprep,密度=1.077±0.001g/mL),然后添加掺料血液稀释物或者其中血细胞被凝集的掺料血液稀释物,随后在室温(约23℃)下以800G的离心力离心20分钟。然后,分离单核细胞层。向分离的单核细胞层中添加磷酸盐缓冲(PBS)溶液,随后再次离心,富集单核细胞层。在离心之后,将最下层的聚集体悬浮在体积等于初始全血体积的含有10%胎牛血清(FBS)的液体培养基中。将1mL部分的悬浮物注入各孔中,并且在37℃的温度下放置1个小时以产生粘附。然后,用PBS溶液洗去未粘附细胞。其后,使用荧光显微镜计数粘附癌细胞的数量。
(血细胞凝集的方法)
向通过用等体积的液体培养基稀释掺料血液而制得的掺料血液稀释物中,以1/20未稀释掺料血液的体积添加RosetteSep Human CD45 Depletion Cocktail(STEMCELL(干细胞)技术,用于凝集红细胞和白细胞的抗体试剂)。将该混合物在室温下静置20分钟以产生凝集。
在将通过使血液或者生物流体经过血细胞凝集和离心而制得的试样与亲水聚合物层(涂层)接触时,选择性地捕获了特定细胞比如癌细胞,并且提高了粘附特定细胞的数量。

Claims (9)

1.一种用于捕获血液或生物流体中存在的特定细胞的方法,所述方法包括:
凝集采样血液或生物流体中的血细胞;
离心所获得的血液或生物流体;以及
然后将特定细胞从血液或生物流体中捕获到亲水聚合物层上。
2.根据权利要求1所述的用于捕获特定细胞的方法,
其中,特定细胞为癌细胞。
3.根据权利要求1或2所述的用于捕获特定细胞的方法,
其中,在凝集和离心之前,稀释采样血液或生物流体。
4.根据权利要求3所述的用于捕获特定细胞的方法,
其中,将缓冲溶液或液体培养基用于稀释。
5.根据权利要求1~4中任一项所述的用于捕获特定细胞的方法,
其中,凝集血细胞包括抗原-抗体反应。
6.根据权利要求1~5中任一项所述的用于捕获特定细胞的方法,
其中,亲水聚合物层由选自聚(甲基)丙烯酰吗啉和下式(I)所示的聚合物中的至少一种亲水聚合物形成:
式中,R1表示氢原子或甲基,R2表示烷基,m表示1~5,n表示重复数。
7.根据权利要求1~5中任一项所述的用于捕获特定细胞的方法,
其中,亲水聚合物层由选自(甲基)丙烯酰吗啉和下式(I-1)所示的化合物中的至少一种亲水性单体与附加单体的共聚物形成:
其中,R1表示氢原子或者甲基,R2表示烷基,m表示1~5。
8.根据权利要求1~7中任一项所述的用于捕获特定细胞的方法,
其中,亲水聚合物层的厚度为10~500nm。
9.一种用于分析特定细胞的方法,包括:
通过权利要求1~8中任一项所述的用于捕获特定细胞的方法从血液或生物流体中捕获特定细胞,以及
分析特定细胞。
CN201910088843.4A 2018-02-14 2019-01-29 用于捕获特定细胞的方法 Pending CN110157670A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2018024118A JP7109719B2 (ja) 2018-02-14 2018-02-14 特定細胞捕捉方法
JP2018-024118 2018-02-14

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110157670A true CN110157670A (zh) 2019-08-23

Family

ID=65241115

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910088843.4A Pending CN110157670A (zh) 2018-02-14 2019-01-29 用于捕获特定细胞的方法

Country Status (4)

Country Link
US (1) US11573232B2 (zh)
EP (1) EP3553516B1 (zh)
JP (1) JP7109719B2 (zh)
CN (1) CN110157670A (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2021187907A (ja) * 2020-05-27 2021-12-13 住友ゴム工業株式会社 親水性基材及び親水性基材作製方法
EP4389714A1 (en) * 2022-12-23 2024-06-26 Sumitomo Rubber Industries, Ltd. Polymer-coated glass substrate

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090081632A1 (en) * 2005-04-08 2009-03-26 Medical Discovery Partners Llc Method for Enriching Rare Cell Subpopulations From Blood
CN106635995A (zh) * 2017-03-10 2017-05-10 亚能生物技术(深圳)有限公司 一种循环肿瘤细胞阴性富集方法
CN107367454A (zh) * 2016-05-09 2017-11-21 住友橡胶工业株式会社 医疗分析装置和细胞分析方法
CN107881150A (zh) * 2016-09-29 2018-04-06 住友橡胶工业株式会社 捕获癌细胞的方法
CN107881080A (zh) * 2016-09-29 2018-04-06 住友橡胶工业株式会社 医疗分析装置及细胞分析方法

Family Cites Families (93)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4695553A (en) * 1985-11-01 1987-09-22 Becton Dickinson And Co., Inc. Method for increasing agglutination of groups of cells to produce improved cell layer interface in centrifuged blood sample using antibodies
JP2667447B2 (ja) 1988-06-28 1997-10-27 オリンパス光学工業株式会社 固体表面への細胞の固定化方法
US5202025A (en) 1989-04-12 1993-04-13 Terumo Kabushiki Kaisha Porous membrane and method for preparing the same
JPH03110473A (ja) 1989-09-26 1991-05-10 Tokuyama Soda Co Ltd 血液型自動判定方法及びその装置
US6743878B2 (en) * 1991-07-05 2004-06-01 Biocompatibles Uk Limited Polymeric surface coatings
JP3443891B2 (ja) 1993-09-14 2003-09-08 日本油脂株式会社 タンパク質吸着防止剤
US6171780B1 (en) 1997-06-02 2001-01-09 Aurora Biosciences Corporation Low fluorescence assay platforms and related methods for drug discovery
US6517781B1 (en) 1997-06-02 2003-02-11 Aurora Biosciences Corporation Low fluorescence assay platforms and related methods for drug discovery
WO2000020921A1 (en) 1998-10-07 2000-04-13 E Ink Corporation Capsules for electrophoretic displays and methods for making the same
DE19904267A1 (de) 1999-02-03 2000-08-10 Michael W Dahm Verfahren zur Anreicherung von Tumorzellen aus einer Körperflüssigkeit und dazu geeigneter Kit
CN1218182C (zh) 1999-05-28 2005-09-07 干细胞技术公司 利用免疫玫瑰花结分离细胞的方法
AU2001288437C1 (en) 2000-09-09 2009-05-21 The Research Foundation Of State University Of New York Method and compositions for isolating metastatic cancer cells, and use in measuring metastatic potential of a cancer thereof
US20100261159A1 (en) 2000-10-10 2010-10-14 Robert Hess Apparatus for assay, synthesis and storage, and methods of manufacture, use, and manipulation thereof
ES2841433T3 (es) 2001-06-18 2021-07-08 Becton Dickinson Co Tubo para recolección de sangre
US7008979B2 (en) 2002-04-30 2006-03-07 Hydromer, Inc. Coating composition for multiple hydrophilic applications
US20060008807A1 (en) 2002-08-23 2006-01-12 O'hara Shawn M Multiparameter analysis of comprehensive nucleic acids and morphological features on the same sample
JP4518767B2 (ja) 2003-09-09 2010-08-04 チッソ株式会社 刺激応答性ポリマー固定化磁性微粒子及びこれを用いた吸着材
DE602004012161T2 (de) 2003-12-22 2009-03-26 Micro Typing Systems, Inc., Pompano Beach Verkürzung der zeit bis zum vorliegen von blutbankdiagnostikergebnissen
JP4567326B2 (ja) 2003-12-24 2010-10-20 三菱化学メディエンス株式会社 全血を用いる測定法
JP4542409B2 (ja) 2004-10-14 2010-09-15 オリンパス株式会社 骨髄由来間葉系幹細胞の培養方法
EP1655354B1 (en) 2004-11-09 2013-10-23 JSR Corporation A biological substance absorption preventing coating composition, an article coated therewith and a method of using the same
AU2006206426B2 (en) 2005-01-20 2012-03-15 The Regents Of The University Of California Cellular microarrays for screening differentiation factors
EP1693109A1 (de) 2005-02-21 2006-08-23 Hexal Ag Behältnis zur Separation von Tumorzellen
EP1874920A4 (en) 2005-04-05 2009-11-04 Cellpoint Diagnostics DEVICES AND METHODS FOR ENRICHING AND MODIFYING CIRCULATING TUMOR CELLS AND OTHER PARTICLES
EP1905824A4 (en) 2005-05-31 2009-02-25 Olympus Corp TRANSFERRED GENE CELL AND CELL ANALYSIS METHOD
JP4761448B2 (ja) 2005-09-16 2011-08-31 独立行政法人科学技術振興機構 血液エンドトキシン測定方法
JP4053579B2 (ja) 2006-02-22 2008-02-27 富士フイルム株式会社 バイオセンサー
EP1826563A1 (en) 2006-02-22 2007-08-29 Fujifilm Corporation Biosensor
US20080008736A1 (en) 2006-07-06 2008-01-10 Thierry Glauser Random copolymers of methacrylates and acrylates
WO2008057437A2 (en) 2006-11-03 2008-05-15 Purdue Research Foundation Ex vivo flow cytometry method and device
ES2398618T3 (es) 2008-02-25 2013-03-20 Nestec S.A. Selección de fármacos para terapia del cáncer de mama utilizando matrices de anticuerpos
US9128082B2 (en) 2009-03-24 2015-09-08 Biocept, Inc. Devices and methods of cell capture and analysis
WO2010124227A2 (en) 2009-04-24 2010-10-28 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Methods and devices for capturing circulating tumor cells
CN102753977B (zh) 2009-07-27 2016-05-25 梅索磅秤技术有限公司 化验装置、耗材和方法
WO2011012905A2 (en) 2009-07-31 2011-02-03 Simon Stafford Means for improved liquid handling in a microplate
EP2363501A1 (en) 2010-03-02 2011-09-07 Universitätsklinikum Hamburg-Eppendorf Method for isolating target cells
BR112012032202A2 (pt) 2010-06-16 2016-11-22 Dsm Ip Assets Bv formulação de revestimento para a preparação de um revestimento hidrofílico.
GB201010736D0 (en) 2010-06-25 2010-08-11 Imp Innovations Ltd IWAP (Interwell assay plate)
WO2012023298A1 (ja) 2010-08-20 2012-02-23 国立大学法人北陸先端科学技術大学院大学 血球の密度変化を利用した密度勾配遠心による有核赤血球の回収法
RU2477981C2 (ru) 2010-10-13 2013-03-27 Иван Васильевич Крайник Способ хирургического лечения перфорации перегородки носа
US9012202B2 (en) 2010-11-02 2015-04-21 University Of Florida Research Foundation, Inc. Cell-based arrays, methods of making, and methods of using
JP6474540B2 (ja) 2010-11-17 2019-02-27 国立大学法人山形大学 溶液から細胞を分離する細胞分離方法、細胞吸着用水和性組成物、および細胞分離システム
US9926523B2 (en) 2010-12-16 2018-03-27 General Electric Company Cell carriers and methods for culturing cells
US9551700B2 (en) 2010-12-20 2017-01-24 Milagen, Inc. Device and methods for the detection of cervical disease
JPWO2012108087A1 (ja) 2011-02-10 2014-07-03 エドワーズ株式会社 真空ポンプ
EP2712365B1 (en) 2011-03-17 2016-09-21 Corning Incorporated Synthetic coating for cell culture
US9372136B2 (en) * 2011-06-13 2016-06-21 Hitachi Chemical Company, Ltd. Agent for improving cancer cell adhesiveness
US20140335610A1 (en) 2011-11-20 2014-11-13 Tokyo Women's Medical University Cell culture substrate, and method for manufacturing same
JP6070573B2 (ja) 2011-12-28 2017-02-01 Jsr株式会社 細胞接着防止剤
CA2862468A1 (en) 2012-01-23 2013-08-01 The Ohio State University Devices and methods for the rapid and accurate detection of analytes
JP2015514396A (ja) 2012-03-09 2015-05-21 マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー 接着シグネチャー
EP2706357A1 (en) 2012-09-07 2014-03-12 Andreas-Claudius Hoffmann Method for identifying subgroups of circulating tumor cells (CTCs) in a CTC population or a sample
US9846157B2 (en) 2012-10-26 2017-12-19 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions, methods and microfluidics device for telomerase based in vitro diagnostic assays for detecting circulating tumor cells (CTC)
JP2014105159A (ja) 2012-11-22 2014-06-09 Nippon Koden Corp ヒト由来上皮細胞接着分子に対するモノクローナル抗体、およびこれを用いた循環腫瘍細胞の検出方法
US20140158604A1 (en) 2012-12-12 2014-06-12 Jacques Chammas Platelet Storage Container
EP2948776B8 (en) 2013-01-25 2020-02-26 Xcell Biosciences, Inc. Methods, compositions, kits, and systems for selective enrichment of target cells
EP2965084B1 (de) 2013-03-08 2018-07-11 Universität Leipzig Verfahren und kit zur zytokinanalyse aus einer menschlichen vollblutprobe
CN105102606A (zh) 2013-04-04 2015-11-25 日立化成株式会社 生物体物质捕获用的过滤器
JPWO2014203668A1 (ja) 2013-06-20 2017-02-23 住友ゴム工業株式会社 表面改質方法及び表面改質体
CN104520420B (zh) 2013-07-24 2016-09-07 株式会社奥普特尼克斯精密 末梢循环肿瘤细胞或稀少细胞分离用装置及末梢循环肿瘤细胞或稀少细胞分离方法
WO2015046557A1 (ja) 2013-09-30 2015-04-02 積水メディカル株式会社 循環腫瘍細胞濃縮分離デバイス及び循環腫瘍細胞の濃縮分離方法
JP6157429B2 (ja) 2013-10-21 2017-07-05 住友ゴム工業株式会社 潤滑性、低タンパク質吸着性および/または低細胞吸着性を有する金属医療用具及びその製造方法
US9699974B2 (en) 2014-02-03 2017-07-11 Hunter Industries, Inc. Rotor-type sprinkler with pressure regulator in outer case
WO2015137259A1 (ja) 2014-03-11 2015-09-17 テルモ株式会社 医療用具の製造方法および医療用具
EP3112454B1 (en) 2014-05-22 2018-02-14 Sumitomo Bakelite Co.,Ltd. Cell mass culture vessel
JP2015224332A (ja) 2014-05-30 2015-12-14 株式会社日立製作所 刺激応答型材料とそれを用いた細胞培養容器
CA2957419A1 (en) 2014-08-07 2016-02-11 The General Hospital Corporation Platelet-targeted microfluidic isolation of cells
US11167286B2 (en) 2014-09-04 2021-11-09 The University Of Massachusetts Sensors and methods for capturing targeted cells
WO2016069613A1 (en) 2014-10-28 2016-05-06 Microaire Surgical Instruments, Llc Centrifuge tube comprising a floating buoy, and methods for using the same
WO2017087032A1 (en) 2015-11-16 2017-05-26 Sio2 Medical Products, Inc. Polymeric substrate with a surface having reduced biomolecule adhesion, and thermoplastic articles of such substrate
CN107257850A (zh) 2014-12-22 2017-10-17 洛桑联邦理工学院 用于哺乳动物细胞的高通量聚集和操作的装置
US10078778B2 (en) 2015-01-15 2018-09-18 Massachusetts Institute Of Technology Systems, methods, and apparatus for in vitro single-cell identification and recovery
JP2016131561A (ja) 2015-01-22 2016-07-25 国立大学法人山形大学 細胞を回収する方法、及びそれに用いられるポリマー
JP6089052B2 (ja) 2015-02-23 2017-03-01 株式会社エヌ・ティ・ティ・データ 携帯端末及びプログラム
US10317406B2 (en) 2015-04-06 2019-06-11 The Regents Of The University Of Michigan System for detecting rare cells
WO2017030196A1 (ja) 2015-08-20 2017-02-23 東京エレクトロン株式会社 培養容器並びに該培養容器を使用した細胞培養方法及び細胞観察方法
US9968929B2 (en) 2015-10-27 2018-05-15 Apex Biotechnology Corp. Reaction cassette and assay device
JP6617516B2 (ja) 2015-10-27 2019-12-11 東ソー株式会社 血液試料中に含まれる目的細胞の検出方法
JP6639906B2 (ja) 2015-12-25 2020-02-05 東ソー株式会社 生物試料検出方法
WO2017130802A1 (ja) * 2016-01-29 2017-08-03 学校法人東京女子医科大学 間葉系幹細胞を含む細胞シート組成物、及び、それを用いた管腔臓器の治癒方法
JP2017181096A (ja) 2016-03-28 2017-10-05 日立化成株式会社 希少細胞を捕捉する方法
FR3050212B1 (fr) 2016-04-15 2020-09-25 Chu Montpellier Procede de detection et/ou de caracterisation de cellules tumorales et appareil associe
JP6468520B2 (ja) 2016-05-09 2019-02-13 住友ゴム工業株式会社 医療用検査装置及び細胞検査方法
EP3244206A1 (de) 2016-05-13 2017-11-15 Linde Aktiengesellschaft Kodierungskomponente zum kodieren von gasen sowie ein entsprechend kodiertes gas
JP6485783B2 (ja) 2016-09-29 2019-03-20 住友ゴム工業株式会社 医療用検査装置及び細胞検査方法
US10941374B2 (en) 2016-09-29 2021-03-09 Sumitomo Rubber Industries, Ltd. Medical analysis device and cell analysis method
JP7358030B2 (ja) 2018-01-31 2023-10-10 住友ゴム工業株式会社 親水性基材
JP7158671B2 (ja) * 2018-02-14 2022-10-24 住友ゴム工業株式会社 特定細胞捕捉方法
JP7170254B2 (ja) * 2018-02-14 2022-11-14 住友ゴム工業株式会社 特定細胞捕捉方法
WO2020036204A1 (en) 2018-08-16 2020-02-20 Terumo Kabushiki Kaisha Cell culture substrate
WO2020036203A2 (en) 2018-08-16 2020-02-20 Terumo Kabushiki Kaisha Cell culture substrate
EP3830239A1 (en) 2018-08-16 2021-06-09 TERUMO Kabushiki Kaisha Cell culture substrate
WO2020036205A1 (en) 2018-08-16 2020-02-20 Terumo Kabushiki Kaisha Cell culture substrate

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090081632A1 (en) * 2005-04-08 2009-03-26 Medical Discovery Partners Llc Method for Enriching Rare Cell Subpopulations From Blood
CN107367454A (zh) * 2016-05-09 2017-11-21 住友橡胶工业株式会社 医疗分析装置和细胞分析方法
CN107881150A (zh) * 2016-09-29 2018-04-06 住友橡胶工业株式会社 捕获癌细胞的方法
CN107881080A (zh) * 2016-09-29 2018-04-06 住友橡胶工业株式会社 医疗分析装置及细胞分析方法
CN106635995A (zh) * 2017-03-10 2017-05-10 亚能生物技术(深圳)有限公司 一种循环肿瘤细胞阴性富集方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
XIAOSAI YAO等: "Functional analysis of single cells identifies a rare subset of circulating tumor cells with malignant traits", INTEGR BIOL (CAMB), 23 March 2015 (2015-03-23), pages 31 - 36 *
何平 等: "负性筛选策略与食管鳞癌循环肿瘤细胞检测", 癌症进展, vol. 6, no. 4, 31 July 2008 (2008-07-31), pages 402 - 408 *
杜晶辉 等: "微流控芯片分选富集循环肿瘤细胞的研究进展", 色谱, vol. 32, no. 1, 31 January 2014 (2014-01-31), pages 7 - 12 *

Also Published As

Publication number Publication date
JP7109719B2 (ja) 2022-08-01
US20190250150A1 (en) 2019-08-15
US11573232B2 (en) 2023-02-07
EP3553516B1 (en) 2023-04-12
EP3553516A1 (en) 2019-10-16
JP2019138841A (ja) 2019-08-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10941374B2 (en) Medical analysis device and cell analysis method
CN110157671A (zh) 用于捕获特定细胞的方法
US10620186B2 (en) Method for capturing cancer cells
CN110157672A (zh) 用于捕获特定细胞的方法
JP6485783B2 (ja) 医療用検査装置及び細胞検査方法
US10786812B2 (en) Medical analysis device and cell analysis method
EP3301442B1 (en) Medical analysis device and cell analysis method
CN110157670A (zh) 用于捕获特定细胞的方法
EP3686598B1 (en) Specific cell fractionating and capturing methods
JP6886667B2 (ja) がん細胞捕捉方法
CN111500441A (zh) 细胞培养装置以及细胞培养方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination