CN110153177A - 一种利用真菌修复多环芳烃污染土壤的方法 - Google Patents

一种利用真菌修复多环芳烃污染土壤的方法 Download PDF

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Abstract

本发明实施例公开了一种利用真菌修复多环芳烃污染土壤的方法，其包括以下步骤:步骤A：筛选真菌；步骤B：制备真菌培养基质；步骤B1：将质量浓度为10‑20％的玉米淀粉溶液加热搅拌成玉米淀粉糊；步骤B2：配制调制混合物，所述调制混合包括以下质量分数的原料，85％‑95％的木屑，6％‑10％的麦麸，1％‑5％的木质素磺酸钠以及0.1％‑0.2％的水杨酸。本发明实施例有效的将真菌修复技术实际运用到多环芳烃污染土壤治理，本发明实施例将游离的真菌包封在海藻酸钠成型培养基质体中，解决外界环境条件波动对真菌生长带来的不利影响，屏蔽土著微生物和毒性物质对外源菌种的恶性竞争与毒害，使真菌能在复杂的污染土壤环境中，稳定高效的发挥降解作用。

Description

一种利用真菌修复多环芳烃污染土壤的方法
技术领域
本发明涉及修复多环芳烃污染土壤技术领域，具体涉及一种利用真菌修复多环芳烃污染土壤的方法。
背景技术
多环芳烃(PAHs)是一类含有2个或2个以上苯环，以线形、角形、簇生等形式连接而成的稠环化合物，是有机物不完全燃烧或高温裂解的副产物。多环芳烃广泛存在于多种生态系统中，并由于其潜在的致癌、致畸、致突变效应，对人类健康构成极大威胁。由于多环芳烃的疏水性和低生物可利用性，其易于同土壤中的固体颗粒物相结合并长期存在于土壤环境中，土壤是环境中PAHs的储存库和中转站。
目前，多环芳烃污染土壤的修复主要包括化学手段、物理手段和生物手段。化学手段是指采用化学氧化剂，如Fenton试剂、臭氧等，利用其高度活性的羟基自由基氧化降解PAHs。物理修复技术主要是指采用不同物理过程分离或去除土壤中有机污染物，包括热处理技术、超临界流体萃取技术、表面活性剂淋洗法等。前两者操作简便，但成本较高，实际应用中不经济，并且在应用中易对环境造成二次污染；相比前两种修复手段，生物修复因其环境友好及成本低廉的优势得到广泛重视。
但是，传统的生物降解修复方法存在着生物菌种由于其本身的特性，降解有机污染物能力较低；传统生物降解修复方法降解多环芳烃有机物的过程中，利用的培养生物菌的方法不合理，导致其对多环芳烃有机物降解的能力不足，修复效果较差，亟待发现新的可高效降解有机污染物的菌种以及利用该菌种降解有机污染物的新方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种利用真菌修复多环芳烃污染土壤的方法，用以解决现有传统方法降解有机物效能力不足，修复土壤能力差的缺陷。
为实现上述目的，本发明实施例提供一种利用真菌修复多环芳烃污染土壤的方法，其包括以下步骤:
步骤A：筛选真菌；
步骤B：制备真菌培养基质；
步骤B1：将质量浓度为10-20％的玉米淀粉溶液加热搅拌成玉米淀粉糊；
步骤B2：配制调制混合物，所述调制混合包括以下质量分数的原料，85％-95％的木屑，6％-10％的麦麸，1％-5％的木质素磺酸钠以及 0.1％-0.2％的水杨酸；
步骤B3：将所述调制混合物与所述玉米淀粉糊混合成成型培养基质；
步骤B4：将所述成型培养基质灭菌备用；
步骤C：将所述真菌接入马铃薯葡萄糖液体培养基培养获得真菌培养液，得到真菌菌丝；
步骤D：将所述真菌菌丝制成真菌菌丝悬浊液；
步骤E：包封真菌；
步骤E1:配制2％-5％的海藻酸钠溶液并灭菌，将所述真菌菌丝悬浊液与所述海藻酸钠溶液搅拌混匀得到真菌菌丝海藻酸钠混合液；
步骤E2：将所述成型培养基质与所述真菌菌丝海藻酸钠混合液混合，同时，加入质量浓度为1-4％的无菌氯化钙溶液，处理25-35min，形成真菌菌丝海藻酸钠成型培养基质体；
步骤F：将所述真菌菌丝海藻酸钠成型培养基质体在28-35℃内培养4-8天；
步骤G：将培养的真菌菌丝海藻酸钠成型培养基质体加入污染土壤中处理25-35天。
优选的，所述真菌为木霉Trichoderma longibrachiatum FLQ-4，已于2018年6月25日在广东省微生物菌种保藏中心登记保藏，保藏号为 GDMCC NO：60392。
优选的，所述木霉Trichoderma longibrachiatum FLQ-4的ITS序列如SEQ IDNO.1所示。
优选的，所述成型培养基质的制备过程为将混合后的调制混合物和所述玉米粉糊翻入制条机中加工成长条状培养基质，并将其制成直径为 6-10mm的球状培养基质，60-75℃干燥，2-3h。
优选的，所述步骤G中，真菌菌丝海藻酸钠成型培养基质体的接种量为污染土壤质量分数的5-10％。
优选的，所述步骤B4中，所述成型培养基质在121℃灭菌，灭菌 15-25min。
优选的，所述步骤C中，所述真菌接入马铃薯葡萄糖培养基中， 180r/min，摇床内培养5-8天。
优选的，所述步骤B2中，所述木屑过400目筛。
本发明实施例具有如下优点：
本发明实施例有效的将真菌修复技术实际运用到多环芳烃污染土壤治理，本发明实施例将游离的真菌包封在海藻酸钠成型培养基质体中，既解决外界环境条件波动对真菌生长带来的不利影响，提高单位介质中真菌的数量，又可以为真菌提供易于生长的微环境，屏蔽土著微生物和毒性物质对外源菌种的恶性竞争与毒害，使真菌能在复杂的污染土壤环境中，稳定高效的发挥降解作用；本发明的实施例以菌丝网络为基础的长距离运输机制，增大了PAHs的降解效率；可分解代谢高分子量多环芳烃，可对重金属-有机物复合污染土壤进行修复；本发明实施例提供了一种新的木霉真菌Trichoderma longibrachiatum FLQ-4，降解多环芳烃(PAHs)能力较强。本发明实施例中，在制备成型培养基质过程中，所采用的调制混合物中加入了水杨酸，通过共代谢作用，提高了真菌对多环芳烃的降解率，尤其是明显提高了真菌对多环芳烃的处理效果。
附图说明
图1为本发明实施例中30天内木霉真菌Trichoderma longibrachiatum FLQ-4在各处理组中的生长情况；其中，A：灭菌土壤 +木霉真菌FLQ-4真菌组，S1S组；B：原始土壤+未包封木霉真菌FLQ-4 真菌组，N1S组；C：原始土壤+包封木霉真菌FLQ-4真菌组，N1PS组。
图2为本发明实施例中30天内各处理组土壤中真菌含量的相对丰度，(1)原始土壤组，NS组；(2)原始土壤+未接菌基质组，LS组；(3) 原始土壤+包封处理木霉真菌FLQ-4组，N1PS组；(4)原始土壤+未包封木霉真菌FLQ-4组，N1S组。
图3为本发明实施例中30天内各处理组对土壤中菲的去除效果，其中，试验组别分别为：(1)灭菌处理后土壤组，SS组；(2)原始土壤组， NS组；(3)原始土壤+未包封木霉真菌FLQ-4组，N1S组；(4)原始土壤+包封处理木霉真菌FLQ-4组，N1PS组，其中，培养基质的调制混合物中未加入水杨酸；(5)原始土壤+包封处理木霉真菌FLQ-4，N2PS组，其中，培养基质的调制混合物中加入水杨酸；(6)灭菌土壤+未包封木霉真菌FLQ-4组，S1S组。
图4为本发明实施例中的利用真菌修复多环芳烃污染土壤的方法的流程图。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
下面将更详细地描述本发明的具体实施例。提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本发明，并且能够将本发明的范围完整的传达给本领域的技术人员。
如在通篇说明书及权利要求当中所提及的“包含”或“包括”为一开放式用语，故应解释成“包含但不限定于”。说明书后续描述为实施本发明的较佳实施方式，然所述描述乃以说明书的一般原则为目的，并非用以限定本发明的范围。本发明的保护范围当视所附权利要求所界定者为准。
实施例1本发明实施例利用真菌修复多环芳烃污染土壤的方法
如图4所示，本发明实施例提供的利用真菌修复多环芳烃污染土壤的方法，其包括以下步骤：
步骤A：筛选真菌；
本发明实施例的木霉真菌的筛选步骤：称取5g石油污染土壤，放入 250mL三角瓶中，加入100mL含菲浓度为200ppm的无机盐培养基，置于摇床中，30℃，180rpm富集培养30天。转移5ml悬浊液至100mL含菲浓度500ppm的无机盐培养基中，继续培养一周。吸取1ml悬浊液，稀释105-107后，涂布于含菲浓度500ppm的马铃薯葡萄糖固体培养基平板，放入培养箱中，保持温度30℃培养1-2天，挑取单菌落，转移至马铃薯葡萄糖固体培养基上富集培养后，送华大基因对该真菌的ITS序列进行 DNA检测，鉴定其种属。鉴定得到本发明的真菌为木霉Trichoderma longibrachiatum FLQ-4，本发明实施例的木霉Trichodermalongibrachiatum FLQ-4的ITS序列如SEQ ID NO:1所示。具体的，本发明实施例的木霉Trichoderma longibrachiatum FLQ-4已于2018年6月 25日在广东省微生物菌种保藏中心登记保藏，保藏号为GDMCC NO： 60392。
步骤B：制备真菌培养基质；
步骤B1：将质量浓度为10-20％的玉米淀粉溶液加热搅拌成玉米淀粉糊；玉米粉溶液在电炉上加热搅拌至淀粉溶液变性为半透明糊状物质。
步骤B2：配制调制混合物，调制混合物包括以下质量分数的原料，85％-95％的木屑，6％-10％的麦麸，以及1％-5％的木质素磺酸钠；需要木屑过400目筛。
步骤B3：将调制混合物与玉米淀粉糊混合成成型培养基质，通过淀粉糊对其组分进行粘合，形成团状体；成型培养基质的制备过程为将混合后的调制混合物和玉米粉糊放入制条机中加工成长条状培养基质，并将其制成直径为6-10mm的球状培养基质，60-75℃干燥2-3h，放置，待用。
步骤B4：将成型培养基质灭菌备用，具体的，将成型培养基质放入灭菌锅，121℃灭菌20min，封口，待用。
步骤C：收集真菌菌丝；
将木霉真菌Trichoderma longibrachiatum FLQ-4接入250mL锥形瓶内的100mL马铃薯葡萄糖液体培养基培养获得真菌培养液，于30℃， 180r/min，摇床内培养5-8天，收集真菌菌丝。
步骤D：将真菌菌丝制成真菌菌丝悬浊液；
步骤E：包封真菌；
步骤E1:配制2％-5％的海藻酸钠溶液并灭菌300ml，121℃，灭菌 20min，将冷却的真菌菌丝悬浊液50ml与海藻酸钠溶液搅拌混匀得到真菌菌丝海藻酸钠混合液；
步骤E2：将成型培养基质与真菌菌丝海藻酸钠混合液混合，同时，加入质量浓度为1-4％的无菌氯化钙溶液，硬化处理25-35min，形成真菌菌丝海藻酸钠成型培养基质体，使得真菌菌丝与固体培养基质包封在海藻酸钠凝胶中。
步骤F：将真菌菌丝海藻酸钠成型培养基质体在28-35℃内培养4-8 天，使得真菌菌丝在真菌菌丝海藻酸钠成型培养基质体表面富集生长；
步骤G：将培养的真菌菌丝海藻酸钠成型培养基质体加入污染土壤中处理25-35天。真菌菌丝海藻酸钠成型培养基质体的接种量为污染土壤质量分数的5-10％。
在上述步骤B2，调制混合物中还可加入质量分数为0.1％-0.2％的水杨酸，以提高本发明实施例真菌的存活率以及提高本发明实施例的真菌木霉Trichodermalongibrachiatum去除多环芳烃能力。
本发明实施例的利用真菌修复多环芳烃污染土壤的方法，通过本发明实施例筛选得到的木霉真菌Trichoderma longibrachiatum FLQ-4对多环芳烃污染的土壤进行处理，通过真菌培养基质的配制，以及将真菌菌丝体包封到海藻酸钠凝胶中，可对多环芳烃污染的土壤有效降解土壤中的多环芳烃。
实施例2本发明实施例的木霉真菌在土壤中的生长情况
如图1所示，将实施例1中获得的包封的真菌菌丝海藻酸钠成型基质体与未包封的木霉真菌分别在灭菌土壤、原始土壤进行处理30天，真菌在土壤中的生长情况如图1所示，A为灭菌土壤+木霉真菌FLQ-4真菌组(S1S组)，B为原始土壤+未包封木霉真菌FLQ-4真菌组(N1S组)， C为原始土壤+包封木霉真菌FLQ-4真菌组(N1PS组)，灭菌土壤中，由于对土壤进行了灭菌，导致土壤中不存在其他杂菌，木霉真菌FLQ-4真菌生长繁殖情况最好，包封后的木霉真菌Trichoderma longibrachiatum FLQ-4在原始土壤中生长繁殖情况较好，而未包封的木霉真菌FLQ-4真菌组生长情况最差。上述结果说明，本发明实施例所筛选到的木霉真菌在成型培养基质以及包封的培养方法，能够较好的与土壤中的原生菌进行竞争生长繁殖，具有在土壤中较好的生长和对多环芳烃的处理效果。
实施例3本发明实施例的木霉真菌在多环芳烃污染土壤中菌种丰度
本发明实施例的木霉真菌FLQ-4对多环芳烃污染的土壤处理，总共分为四组：1、原始土壤组(NS组)；2、原始土壤+未接菌基质组(LS 组)；3、原始土壤+包封处理木霉真菌FLQ-4组(N1PS组)；4、原始土壤+未包封木霉真菌FLQ-4组(N1S组)，分别在30℃条件下，培养30天，检测各组中，培养的菌种的丰度，检测结果，如图2所示，通过ITS 高通量测序，结果表明，在原始土壤土壤里，镰刀菌Fusarium是土著优势菌种，相对丰度占总真菌含量的43％；而接入木霉Trichoderma longibrachiatum FLQ-4的实验组中，木霉成为优势菌种，相对丰度50％-70％。而原土著优势菌镰刀菌Fusarium的相对丰度下降到5％-12％左右。说明所接入的木霉真菌Trichoderma longibrachiatum FLQ-4很好的克服了土著微生物的拮抗作用并存活下来。而接入包封处理木霉 Trichoderma longibrachiatum FLQ-4的N1PS组和未包封处理木霉 Trichoderma longibrachiatum FLQ-4的N1S组，可发现原始土壤组(NS 组)，原始土壤+未包封木霉真菌FLQ-4组(N1S组)木霉在土壤中相对丰度先升后降，在第15天时达到最高，大约84％左右，但到30天时，降至29％；而原始土壤+包封处理木霉真菌FLQ-4组(N1PS组)，三十天内木霉在土壤中的相对丰度稳定上升，由46％(3d)提高至69％ (30d)。本发明实施例的培养基质以及通过包封处理综合处理有效地提高了木霉Trichodermalongibrachiatum FLQ-4在土壤中的存活度，并且能够较使得本发明实施例的木霉Trichoderma longibrachiatum FLQ-4在较长时间内维持较高的丰度。
本发明实施例通过筛选出木霉Trichoderma longibrachiatum FLQ-4，同时根据木霉Trichoderma longibrachiatum FLQ-4开发和优化包封真菌技术，尤其是培养基质的成分较为独特，该培养基质极为适于真菌的生长，本发明实施例制备的调制混合物的组成成分非常有助于真菌的生长以及提高对多环芳烃的降解能力，为真菌在土壤中生长提供微环境，建立一种适用于多环芳烃污染土壤的原位生物修复方法。本发明的封装方法简化、加工方便、生产效率提高、产品收率提高、环境污染减少。
实施例4本发明实施例的方法对多环芳烃菲污染土壤的修复效果实验
本实施例中，利用本发明实施例的木霉真菌Trichoderma longibrachiatum FLQ-4对含有菲的土壤进行处理，实验组总共分为：1、灭菌处理后的土壤组(SS组)；2、原始土壤组(NS组)；3、原始土壤+ 未包封木霉真菌FLQ-4组(N1S组)；4、原始土壤+包封处理木霉真菌FLQ-4组(N1PS组)；5、原始土壤+包封处理木霉真菌FLQ-4(N2PS组) 6、灭菌土壤+未包封木霉真菌FLQ-4组(S1S组)。将上述试验组在同等条件下，温度30℃，培养30天。
实验结果如图3所示，原始土壤组NS组，30天内对菲自然耗散约为21％；原始土壤+包封处理木霉真菌FLQ-4组(N1PS组)，其中，培养的调制混合物中未加入水杨酸；30天对菲的去除率约82.7％；原始土壤+包封处理木霉真菌FLQ-4(N2PS组)，培养基质的调制混合物中加入水杨酸，30天对菲的去除率约87.4％；接种到灭菌土壤+未包封木霉真菌FLQ-4组(S1S组)的去除率为83.8％；而直接接种真菌原始土壤+未包封木霉真菌FLQ-4组(N1S组)，30天内对菲的去除率约为57.2％，未包封的木霉真菌FLQ-4组修复效果明显低于包封真菌处理组。表1本发明实施例的方法对多环芳烃菲污染土壤的修复效果实验。
表1
表1说明未包封真菌受到土著微生物的抑制，降解效果受到影响，而本发明实施例中的包封处理有效地阻止了土著微生物对营养物质的竞争，生长情况好，而且对土壤修复修复效果良好，尤其是培养基质的调制混合物中加入水杨酸，大大提高了真菌对菲的去除率。
实施例5本发明实施例的木霉Trichoderma longibrachiatum FLQ-4与其他真菌在多环芳烃污染土壤修复效果比较
将本发明实施例1利用木霉真菌Trichoderma longibrachiatum FLQ-4 的处理多环芳烃污染土壤的方法与其他真菌及相关处理方法对多环芳烃污染的土壤修复的效果比较，如表1所示：
表1
上表说明，利用本发明实施例的培养基质以及木霉真菌Trichodermalongibrachiatum FLQ-4对多环芳烃的去除率进行比较，通过上表数据可知，利用本发明实施例的培养基质及木霉真菌Trichoderma longibrachiatum FLQ-4对多环芳烃的去除率，远远高于现有技术中其他方法及真菌对多环芳烃的去除率，且相对修复时间短，对多环芳烃的去除效率高。而达到上述效果，主要是由于本发明实施例筛选到的木霉真菌Trichoderma longibrachiatum FLQ-4，以及本发明实施例提供的可提高木霉真菌生长的培养基质和包封方法。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
序列表
<110> 中国科学院广州地球化学研究所
<120> 一种利用真菌修复多环芳烃污染土壤的方法
<130> GG17103667CA
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 628
<212> DNA
<213> Trichoderma longibrachiatum
<400> 1
ttcctccgct tattgatatg cttaagttca gcgggtattc ctacctgatc cgaggtcaac 60
atttcagaag tttggggtgt tttacggctg tggccgcgcc gcgctcccgg tgcgagtgtg 120
caaactactg cgcaggagag gctgcggcga gaccgccact gtatttcggg ggcggcccgg 180
tgaggggccg atccccaacg ccgacccccc ggaggggttc gagggttgaa atgacgctcg 240
gacaggcatg cccgccagaa tactggcggg cgcaatgtgc gttcaaagat tcgatgattc 300
actgaattct gcaattcaca ttacttatcg catttcgctg cgttcttcat cgatgccaga 360
accaagagat ccgttgttga aagttttgat tcattttcga gacgcccgct agggtcgccg 420
agaaaggctc agagcaaaaa taaaacagag ccgcgacggg agccgcgacg gagagaaaaa 480
aagagtttgg agttggtcct ccggcgggcg ccatgggatc cggggctgcg acgcgcccgg 540
ggcaagagaa tcccgccgag gcaacagatt ggtaacgttc acattggggt ttgggagttg 600
taaactcggt aatgatccac tccgcagg 628

Claims (9)

1.一种利用真菌修复多环芳烃污染土壤的方法，其包括以下步骤:
步骤A：筛选真菌；
步骤B：制备真菌培养基质；
步骤B1：将质量浓度为10-20％的玉米淀粉溶液加热搅拌成玉米淀粉糊；
步骤B2：配制调制混合物，所述调制混合包括以下质量分数的原料，85％-95％的木屑，6％-10％的麦麸，以及1％-5％的木质素磺酸钠；
步骤B3：将所述调制混合物与所述玉米淀粉糊混合成成型培养基质；
步骤B4：将所述成型培养基质灭菌备用；
步骤C：将所述真菌接入马铃薯葡萄糖液体培养基培养获得真菌培养液，得到真菌菌丝；
步骤D：将所述真菌菌丝制成真菌菌丝悬浊液；
步骤E：包封真菌；
步骤E1:配制2％-5％的海藻酸钠溶液并灭菌，将所述真菌菌丝悬浊液与所述海藻酸钠溶液搅拌混匀得到真菌菌丝海藻酸钠混合液；
步骤E2：将所述成型培养基质与所述真菌菌丝海藻酸钠混合液混合，同时，加入质量浓度为1-4％的无菌氯化钙溶液，处理25-35min，形成真菌菌丝海藻酸钠成型培养基质体；
步骤F：将所述真菌菌丝海藻酸钠成型培养基质体在28-35℃内培养4-8天；
步骤G：将培养的真菌菌丝海藻酸钠成型培养基质体加入污染土壤中处理25-35天。
2.根据权利要求1所述的利用真菌修复多环芳烃污染土壤的方法，其特征在于，
所述真菌为木霉Trichoderma longibrachiatum FLQ-4，已于2018年6月27日在广东省微生物菌种保藏中心登记保藏，保藏号为GDMCC NO：60392。
3.根据权利要求2所述的利用真菌修复多环芳烃污染土壤的方法，其特征在于，
所述木霉Trichoderma longibrachiatum FLQ-4的ITS序列如SEQ ID NO.1所示。
4.根据权利要求1所述的利用真菌修复多环芳烃污染土壤的方法，其特征在于，
所述成型培养基质的制备过程为将混合后的调制混合物和所述玉米粉糊翻入制条机中加工成长条状培养基质，并将其制成直径为6-10mm的球状培养基质，60-75℃干燥，2-3h。
5.根据权利要求1所述的利用真菌修复多环芳烃污染土壤的方法，其特征在于，
所述步骤G中，真菌菌丝海藻酸钠成型培养基质体的接种量为污染土壤质量分数的5-10％。
6.根据权利要求1所述的利用真菌修复多环芳烃污染土壤的方法，其特征在于，
所述步骤B4中，所述成型培养基质在121℃灭菌，灭菌15-25min。
7.根据权利要求1所述的利用真菌修复多环芳烃污染土壤的方法，其特征在于，
所述步骤C中，所述真菌接入马铃薯葡萄糖培养基中，180r/min，摇床内培养5-8天。
8.根据权利要求1所述的利用真菌修复多环芳烃污染土壤的方法，其特征在于，
所述步骤B2中，所述木屑过400目筛。
9.根据权利要求1所述的利用真菌修复多环芳烃污染土壤的方法，其特征在于，
所述调制混合物还包括质量分数为0.1％-0.2％的水杨酸。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110756577A (zh) * 2019-10-30 2020-02-07 东营金岛环境工程有限公司 一种石油污染场地微生物修复技术
CN111069273A (zh) * 2019-12-16 2020-04-28 安徽洁然环境科技有限公司 微生物修复球空间填充prb辅助电动修复场地污染的应用
CN111729624A (zh) * 2020-07-08 2020-10-02 江苏科技大学 一种用于环境修复的生物凝胶的制备及应用方法

Citations (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005023963A1 (fr) * 2003-09-05 2005-03-17 Ivan Yurievich Limbah Biopreparation permettant de recultiver les sols et procede de production de cette biopreparation
CN1699220A (zh) * 2005-05-23 2005-11-23 南京工业大学 固定化细胞处理废水的方法及其装置
CN1788869A (zh) * 2005-12-21 2006-06-21 中国石油化工股份有限公司 一种土壤修复用固体复合微生物微球及其制备方法
CN1952124A (zh) * 2005-10-21 2007-04-25 中国科学院沈阳应用生态研究所 一种用于多环芳烃污染土壤修复的固定化颗粒制备方法
CN101134955A (zh) * 2007-08-02 2008-03-05 中国石油化工股份有限公司 一种用于有机污染物生物降解的固体复合微生物微球及其制备方法
CN101168736A (zh) * 2006-10-27 2008-04-30 中国科学院沈阳应用生态研究所 一种用于土壤修复的引进菌微生物固定化方法及专用装置
CN101372688A (zh) * 2008-10-20 2009-02-25 浙江大学 用于污染土壤修复的微生物固定化材料的制备及使用方法
CN102070283A (zh) * 2010-12-19 2011-05-25 范子山 一种高效处理畜禽养殖废水的技术
CN102114492A (zh) * 2010-12-06 2011-07-06 沈阳工业大学 一种新型载体固定化微生物降解污染物的方法
CN102199589A (zh) * 2010-12-27 2011-09-28 北京师范大学 石油污染土壤修复用固定化微球、制法及应用
CN102465100A (zh) * 2010-11-18 2012-05-23 南开大学 一株苯并[a]芘高效降解菌及其应用
US20120178624A1 (en) * 2009-09-17 2012-07-12 Susan Gail Willets Kaminskyj Method for Increasing Plant Growth Using the Fungus Trichoderma Harzianum
CN103949224A (zh) * 2014-04-24 2014-07-30 东华理工大学 一种处理含铀废水的黄绿木霉颗粒吸附剂及其制备与应用
CN104312951A (zh) * 2014-10-13 2015-01-28 华南理工大学 一种多环芳烃降解微生物菌剂及其制备方法和应用
CN104762288A (zh) * 2015-04-08 2015-07-08 华南农业大学 一种蔗渣固定化组合菌及其在土壤多环芳烃菲污染修复中的应用
CN105347884A (zh) * 2015-11-20 2016-02-24 河北慈心环保科技有限公司 土壤污染的生物有机型修复剂及其使用和制备方法
CN106010564A (zh) * 2016-06-17 2016-10-12 战锡林 苯胺类污染土壤修复材料
CN106047364A (zh) * 2016-06-17 2016-10-26 战锡林 多环芳烃类污染土壤修复剂
CN106517535A (zh) * 2016-09-30 2017-03-22 洛阳茂生生物技术有限公司 一种污水厂污水的处理方法
CN106635048A (zh) * 2016-09-29 2017-05-10 江西天祥通用航空股份有限公司 一种土壤修复剂及其应用
BR102016015329A2 (pt) * 2016-06-29 2018-01-16 Universidade Federal Do Rio De Janeiro Produto e processo de biorremediação de ambientes contaminados por óleos
PL229070B1 (pl) * 2015-09-17 2018-06-29 Politechnika Czestochowska Sposób otrzymywania biopreparatu o przedłużonym działaniu organicznej substancji aktywnej
CN108410748A (zh) * 2017-12-07 2018-08-17 安徽农业大学 一种用于降解三嗪类除草剂的菌剂及制备方法
CN109182193A (zh) * 2018-09-26 2019-01-11 陕西赛恩农业科技股份有限公司 微生物菌剂及其制备方法和应用
CN109396179A (zh) * 2018-10-18 2019-03-01 浙江田成环境科技有限公司 一种污染土壤或沉积物中烃类的生物修复工艺

Patent Citations (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005023963A1 (fr) * 2003-09-05 2005-03-17 Ivan Yurievich Limbah Biopreparation permettant de recultiver les sols et procede de production de cette biopreparation
CN1699220A (zh) * 2005-05-23 2005-11-23 南京工业大学 固定化细胞处理废水的方法及其装置
CN1952124A (zh) * 2005-10-21 2007-04-25 中国科学院沈阳应用生态研究所 一种用于多环芳烃污染土壤修复的固定化颗粒制备方法
CN1788869A (zh) * 2005-12-21 2006-06-21 中国石油化工股份有限公司 一种土壤修复用固体复合微生物微球及其制备方法
CN101168736A (zh) * 2006-10-27 2008-04-30 中国科学院沈阳应用生态研究所 一种用于土壤修复的引进菌微生物固定化方法及专用装置
CN101134955A (zh) * 2007-08-02 2008-03-05 中国石油化工股份有限公司 一种用于有机污染物生物降解的固体复合微生物微球及其制备方法
CN101372688A (zh) * 2008-10-20 2009-02-25 浙江大学 用于污染土壤修复的微生物固定化材料的制备及使用方法
US20120178624A1 (en) * 2009-09-17 2012-07-12 Susan Gail Willets Kaminskyj Method for Increasing Plant Growth Using the Fungus Trichoderma Harzianum
CN102465100A (zh) * 2010-11-18 2012-05-23 南开大学 一株苯并[a]芘高效降解菌及其应用
CN102114492A (zh) * 2010-12-06 2011-07-06 沈阳工业大学 一种新型载体固定化微生物降解污染物的方法
CN102070283A (zh) * 2010-12-19 2011-05-25 范子山 一种高效处理畜禽养殖废水的技术
CN102199589A (zh) * 2010-12-27 2011-09-28 北京师范大学 石油污染土壤修复用固定化微球、制法及应用
CN103949224A (zh) * 2014-04-24 2014-07-30 东华理工大学 一种处理含铀废水的黄绿木霉颗粒吸附剂及其制备与应用
CN104312951A (zh) * 2014-10-13 2015-01-28 华南理工大学 一种多环芳烃降解微生物菌剂及其制备方法和应用
CN104762288A (zh) * 2015-04-08 2015-07-08 华南农业大学 一种蔗渣固定化组合菌及其在土壤多环芳烃菲污染修复中的应用
PL229070B1 (pl) * 2015-09-17 2018-06-29 Politechnika Czestochowska Sposób otrzymywania biopreparatu o przedłużonym działaniu organicznej substancji aktywnej
CN105347884A (zh) * 2015-11-20 2016-02-24 河北慈心环保科技有限公司 土壤污染的生物有机型修复剂及其使用和制备方法
CN106010564A (zh) * 2016-06-17 2016-10-12 战锡林 苯胺类污染土壤修复材料
CN106047364A (zh) * 2016-06-17 2016-10-26 战锡林 多环芳烃类污染土壤修复剂
BR102016015329A2 (pt) * 2016-06-29 2018-01-16 Universidade Federal Do Rio De Janeiro Produto e processo de biorremediação de ambientes contaminados por óleos
CN106635048A (zh) * 2016-09-29 2017-05-10 江西天祥通用航空股份有限公司 一种土壤修复剂及其应用
CN106517535A (zh) * 2016-09-30 2017-03-22 洛阳茂生生物技术有限公司 一种污水厂污水的处理方法
CN108410748A (zh) * 2017-12-07 2018-08-17 安徽农业大学 一种用于降解三嗪类除草剂的菌剂及制备方法
CN109182193A (zh) * 2018-09-26 2019-01-11 陕西赛恩农业科技股份有限公司 微生物菌剂及其制备方法和应用
CN109396179A (zh) * 2018-10-18 2019-03-01 浙江田成环境科技有限公司 一种污染土壤或沉积物中烃类的生物修复工艺

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110756577A (zh) * 2019-10-30 2020-02-07 东营金岛环境工程有限公司 一种石油污染场地微生物修复技术
CN111069273A (zh) * 2019-12-16 2020-04-28 安徽洁然环境科技有限公司 微生物修复球空间填充prb辅助电动修复场地污染的应用
CN111729624A (zh) * 2020-07-08 2020-10-02 江苏科技大学 一种用于环境修复的生物凝胶的制备及应用方法

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