CN110123843B

CN110123843B - 一种减肥降脂的组合物及其应用

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Publication number: CN110123843B
Application number: CN201910449672.3A
Authority: CN
Inventors: 王雪艳; 唐旭东
Original assignee: Shenzhen Research Institute Tsinghua University
Current assignee: Shenzhen Research Institute Tsinghua University
Priority date: 2019-05-28
Filing date: 2019-05-28
Publication date: 2021-06-08
Anticipated expiration: 2039-05-28
Also published as: CN110123843A

Abstract

本发明提供一种减肥降脂的组合物及其应用，涉及生物化学技术领域，本发明所述减肥降脂的组合物，按重量份计，包括6～15份盐酸小檗碱以及1～5份星座短腹海鞘脂溶性提取物；所述星座短腹海鞘脂溶性提取物是将星座短腹海鞘匀浆，过滤得到滤液，以正丁醇萃取滤液并浓缩得到的。本发明提供的组合物具有显著的降低体重、调节血脂的作用，能明显预防、治疗高脂血症、预防肥胖、减轻体重、调节脂蛋白异常、调节脂代谢、降低冠心病发生率。

Description

一种减肥降脂的组合物及其应用

技术领域

本发明涉及生物化学技术领域，尤其涉及一种减肥降脂的组合物及其应用。

背景技术

盐酸小檗碱是一种异喹啉生物碱。分子式[C₂₀H₁₈NO₄]⁺。又称黄连素。存在于小檗科等4科10属的许多植物中。小檗碱从乙醚中可析出黄色针状晶体。熔点145℃。溶于水，难溶于苯、乙醚和氯仿。中国专利CN1939310A公开了一种由黄连素和谷维素组成的减肥用组合物，其公开了黄连素具有抑制脂肪生成的作用，是通过抑制PPARγ2的基因表达，而抑制前脂肪细胞的分化；盐酸黄连素(盐酸小檗碱)的溶解度低，不易于人体吸收，而谷维素是一种三萜烯醇的魏酸酯的混合物，脂溶性强，与盐酸黄连素组合后可促进黄连素的吸收。翟蓓研究了盐酸小檗碱与辛伐他汀联用的降脂作用，盐酸小檗碱和辛伐他汀均具有降血脂的作用，而他汀类药物长期使用易出现不良反应，将盐酸小檗碱与辛伐他汀联用后可，明显降低高脂血症大鼠模型的LDL-C(低密度脂蛋白)和TC(血清总胆固醇)水平(翟蓓.盐酸小檗碱联合辛伐他汀对实验性高脂血症的降血脂作用研究[J].中国医药指南,2015(22):52-53.)。

星座短腹海鞘(Aplidium constellatum)原名星座美洲海鞘、星座列精海鞘，属于三段海鞘科，为复海鞘，是我国海鞘常见优势物种之一。陈立等发现星座美洲海鞘的乙酸乙酯层萃取物在100μg/ml浓度下对小鼠乳腺癌细胞有诱导凋亡活性，而正丁醇层萃取物在100μg/ml浓度下对小鼠乳腺癌细胞有细胞毒活性(陈立,顾谦群.星座美洲海鞘次级代谢产物的研究[J].中国海洋大学学报(自然科学版),2010,40(12):111-114.)。张建同对星座短腹海鞘脂溶性提取物进行了活性测试，在以HepG2细胞为研究对象的体外实验中，海鞘脂溶性提取物具有上调ABCA1的表达的功能、可显著降低氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)荷脂的HepG2细胞的总胆固醇含量；在以高血脂症SD大鼠血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)的水平为指标，探究其体内降血脂活性的研究中，发现高剂量组可显著降低高脂大鼠血清中TC的含量，认为星座短腹海鞘油脂具有一定降血脂活性(张建同.海鞘降血脂有效部位的利用技术研究[D].2015.)。

虽然盐酸小檗碱和星座短腹海鞘的脂溶性提取物均具有一定的降血脂活性，但是现有研究中尚未报道二者联用。

发明内容

本发明提供了一种新的减肥降脂的组合物，包括盐酸小檗碱和/或其结构类似物以及星座短腹海鞘脂溶性提取物。本发明提供的组合物能够显著减少体重，降低高血脂症模型大鼠的血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白(LDL)含量，可有效预防高血脂症以及冠心病等。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种减肥降脂的组合物，按重量份计，包括6～15份盐酸小檗碱以及1～5份星座短腹海鞘脂溶性提取物；

所述星座短腹海鞘脂溶性提取物的制备方法包括以下步骤：

(1)将星座短腹海鞘匀浆，过滤，得到滤液；

(2)以正丁醇萃取滤液，分离正丁醇部分，浓缩至浸膏状，得到星座短腹海鞘脂溶性提取物。

优选的，所述盐酸小檗碱替换为盐酸小檗碱的结构类似物，所述盐酸小檗碱的结构类似物包括药根碱、巴马汀碱、表小檗碱和黄连碱中的一种或多种；

所述盐酸小檗碱替换为盐酸小檗碱及其结构类似物的组合。

优选的，按照星座短腹海鞘的质量与生理盐水的体积之比为1:3～1:5混合，进行匀浆。

优选的，所述步骤(2)中，正丁醇萃取的次数为1～3次。

优选的，所述步骤(2)中，正丁醇萃取时，正丁醇与滤液的体积比为2～5:1。

优选的，所述步骤(2)中，浓缩的温度为40～50℃。

优选的，所述步骤(2)中，浓缩为减压浓缩，减压浓缩的压力≤0.08MPa。

本发明还提供了上述技术方案所述组合物在制备减肥食品、药品或保健品中的应用。

本发明还提供了上述技术方案所述组合物在制备防治高血脂症、调节脂蛋白异常、预防冠心病或保护肝脏的食品、药品或保健品中的应用。

优选的，所述食品、药品或保健品的剂型包括片剂、胶囊剂、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、糖浆剂、透皮贴剂、乳剂、冻干粉针剂或栓剂。

与现有技术相比，本发明的有益效果：

本发明提供了一种减肥降脂的组合物，按重量份计，包括6～15份盐酸小檗碱以及1～5份星座短腹海鞘脂溶性提取物；所述星座短腹海鞘脂溶性提取物是将星座短腹海鞘匀浆，过滤得到滤液，以正丁醇萃取滤液并浓缩得到的。如本发明具体实施方式的实验所示，本发明提供的组合物可显著降低模型大鼠的体重，并且使得模型对照组大鼠体内的白色脂肪堆积明显降低；本发明提供的组合物可显著降低高血脂症模型大鼠的TC、TG和LDL值。可见，本发明提供的组合物具有显著的降低体重、调节血脂的作用，能明显预防、治疗高脂血症、预防肥胖、减轻体重、调节脂蛋白异常、调节脂代谢、降低冠心病发生率。

附图说明

图1为各组小鼠的肝脏染色图；其中，a为正常对照组的肝脏染色图，b为模型对照组的肝脏染色图，c为高剂量实验组的肝脏染色结果，d为中剂量实验组的肝脏染色结果，e为低剂量实验组的肝脏染色结果。

具体实施方式

本发明提供了一种减肥降脂的组合物，按重量份计，包括6～15份盐酸小檗碱以及1～5份星座短腹海鞘脂溶性提取物；优选的包括7～10份盐酸小檗碱和/或其结构类似物以及1.5～3份星座短腹海鞘脂溶性提取物；更优选的包括8份盐酸小檗碱和/或其结构类似物以及2份星座短腹海鞘脂溶性提取物。

在本发明中，所述盐酸小檗碱可替换为盐酸小檗碱的结构类似物；在本发明中，所述盐酸小檗碱的结构类似物是指与盐酸小檗碱具有相同功能的结构类似物，包括但不限于药根碱、巴马汀碱、表小檗碱和黄连碱中的一种或多种。本发明对所述盐酸小檗碱在本发明中，所述盐酸小檗碱替换为盐酸小檗碱及其结构类似物的组合。在本发明中，所述盐酸小檗碱的结构类似物可以单独与星座短腹海鞘脂溶性提取物复配，也可以与盐酸小檗碱、星座短腹海鞘脂溶性提取物一同复配。本发明对盐酸小檗碱的结构类似物与盐酸小檗碱的复配比例无特殊限定，任意比例均可。

在本发明中，所述星座短腹海鞘脂溶性提取物的制备方法包括以下步骤：

(1)将星座短腹海鞘匀浆，过滤，得到滤液；

本发明将星座短腹海鞘匀浆，过滤，得到滤液。在本发明中，所述匀浆前优选的去除星座短腹海鞘的杂质及附着物。本发明优选的，将星座短腹海鞘破碎后与生理盐水混合，进行匀浆。在本发明中，所述星座短腹海鞘与生理盐水的质量比优选为1:3～1:5更优选为1:4。在本发明中，所述匀浆优选为冰浴匀浆，选择冰浴匀浆是为了减少高温带来的成分变化。在本发明中，所述过滤优选的采用布氏漏斗过滤。

得到滤液后，本发明采用正丁醇对滤液进行萃取，分离正丁醇部分进行浓缩，浓缩至浸膏状后，即得星座短腹海鞘脂溶性提取物。本发明采用正丁醇进行萃取的目的是为了更好的提取脂溶性成分。在本发明中，所述萃取的次数优选为1～3次，当多次萃取时，将多次萃取分离的正丁醇部分合并浓缩。在本发明中，所述正丁醇萃取时，每次萃取采用的正丁醇与滤液的体积比优选为2～5:1，更优选为3:1。在本发明中，所述浓缩优选为减压浓缩，减压浓缩的压力优选≤0.08MPa，更优选为0.05MPa。在本发明中，所述浓缩的温度优选为40～50℃，更优选为45℃。

在本发明中，所述组合物的制备方法是将盐酸小檗碱和/或其类似物与星座短腹海鞘脂溶性提取物混合。

本发明还提供了上述技术方案所述组合物在制备减肥食品、药品或保健品中的应用。如本发明具体实施方式记载的实验所示，给予本发明提供的组合物后，模型大鼠的体重有显著降低，并且可减少白色脂肪的积累。在本发明中，所述组合物用于制备减肥食品、药品或保健品时，所述组合物中的星座短腹海鞘提取物给药浓度优选的在25～75mg/kg、盐酸小檗碱和/或其盐酸小檗碱100～300mg/kg。

本发明还提供了前述技术方案所述组合物在制备防治高血脂症、调节脂蛋白异常或预防冠心病的食品、药品或保健品中的应用。如本发明具体实施方式记载的实验所示，向高血脂症模型大鼠给予本发明所述组合物后，高血脂症模型大鼠的TC(血浆总胆固醇)、TG(甘油三酯)、LDL(低密度脂蛋白胆固醇)均有显著的降低。在本发明中，所述组合物用于防止高血脂症、调节脂蛋白异常或预防冠心病时，所述组合物中的星座短腹海鞘提取物给药浓度优选的在25～75mg/kg、盐酸小檗碱和/或其盐酸小檗碱100～300mg/kg。

如本发明具体实施方式记载的实验所示，利用本发明提供的组合物可有效改善肝损伤大鼠的结构完整度和空泡数量，具有显著的肝保护作用。

在本发明中，上述或前述应用所述的食品、药品或保健品除了本发明所述的组合物外，还可以包括辅料，即食品辅料、药品辅料或保健品辅料，具体辅料类型根据所需制备的产品形式和需要进行选择即可。在本发明中，所述食品、药品或保健品的剂型包括片剂、胶囊剂、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、糖浆剂、透皮贴剂、乳剂、冻干粉针剂或栓剂。

下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

1.星座短腹海鞘提取物制备

去除星座短腹海鞘的杂质及附着物，手术剪剪碎成小块，按照星座短腹海鞘：生理盐水体积比1:4比例加入生理盐水，分3次冰浴匀浆，每次匀浆换新冰水浴，以避免温度升高带来活性物质变化。浆液用布氏漏斗过滤，收集滤液。滤液加正丁醇萃取(体积比1:3)，重复3次，合并萃取所得正丁醇部分，在45℃下减压浓缩至浸膏状，得星座短腹海鞘脂溶性提取物，备用。

2.组合物制备

取星座短腹海鞘脂溶性提取物，与市售盐酸小檗碱(纯度≥90％)按照重量比为2:8的比例混合，得到减肥降脂的组合物。

实施例2组合物减肥及降脂活性

1主要仪器

全自动酶标仪(TECAN)；二氧化碳培养箱(Thermo)；恒温培养箱(中国，哈东联)；显微镜(日本，OLYMPUS)；电泳仪(美国，Bio-Rad)；垂直电泳槽(北京，君意)；水平摇床(北京，鼎国)；化学发光成像系统(DNR)等。

2主要试剂

血清总胆固醇(TC)，甘油三脂(TG)，低密度脂蛋白(LDL)，高密度脂蛋白(HDL)检测试剂盒(购自南京建成生物研究所)；泌乳素(Prolactin)ELISA检测试剂盒(购自武汉优尔生)；Ham’s F12k培养基(美国，Gibco)；胎牛血清(以色列，BI)；马血清(MRC)；腺苷A1受体抗体(北京博奥森)；GAPDH抗体；辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔的IgG(Bioworld)；R-PIA(Sigma)；DPCPX(Sigma)；BCA蛋白浓度测定试剂盒，超敏ECL发光试剂盒(北京，碧云天)。

3供试药物

实施例1制备的减肥降脂的组合物。

4实验动物及饲料

SD大鼠50只，雄性，清洁级，体重180～200g，由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心，实验动物使用许可证号：SCXK2015-0001。实验使用的饲料为60％的高脂饲料(Research diets，美国)。

5体内实验：

5.1高脂饮食诱导大鼠肥胖

健康的SPF级雄性SD大鼠(体重250±10g)50只，用普通饲料喂养，正常饮食饮水一周后分别对体重进行检测，综合分析后将体重均匀的大鼠进行随机分为5组，每组10只，空白对照组给予基础饲料，其余各组均给予高脂饲料，连续喂养30d后，禁食12h，于末次给药1h后称重，断尾取血，血液常温放置2h，3000r/min离心30min后收集血清，用于检测TC、TG、LDL、HDL四项血脂指标，并将大鼠麻醉处死后，取腹腔内的白色脂肪称重。

试验结果如表1所示，模型组大鼠与空白组比较，体重、腹部白色脂肪重、血清TC均值明显增加，差异极显著；TG、LDL明显增加，差异显著；HDL明显降低，差异极显著；造模成功。

表1高脂饮食诱导大鼠肥胖造模结果

注：**代表结果差异极显著；*代表结果差异显著。

5.2给药

取50只大鼠，随机分为5组，每组10只。选取其中四组按照5.1所示的方法构建高血脂症模型大鼠，剩余一组作为正常对照组。从构建了高血脂症模型大鼠的四组中随机挑选三组，分别按照50mg/kg/d、25mg/kg/d和12.5mg/kg/d灌胃给予实施例1制备得到的组合物，记为高剂量实验组、中剂量实验组和低剂量实验组，剩余一组作为模型对照组。正常对照组和模型对照组分别灌胃等量体积的生理盐水。

观察各组大鼠的体重和脂肪系数的变化，并且检测各组大鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量，对各组大鼠的肝脏进行切片染色。

6实验结果

6.1减肥降脂的组合物对大鼠体重和脂肪系数的影响

试验结果表明(表2)，与正常对照组相比，模型对照组体重显著高于正常对照组，表明模型建立成功。星座短腹海鞘提取物与盐酸小檗碱组合物组高剂量实验组、中剂量实验组和低剂量实验组均能显著的降低大鼠体重，并且高剂量实验组、中剂量实验组和低剂量实验组的体内的白色脂肪堆积明显少于模型对照组。

表2组合物对高脂饮食诱导的肥胖大鼠体重的影响

注：“##”表示模型对照组与正常对照组比较在P＜0.01水平有显著差异，“**”表示实验组与模型对照组组比较在P＜0.01水平有显著性差异，“*”表示各实验组与模型对照组组比较在P＜0.05水平有显著差异，下表与此相同。

6.2减肥降脂的组合物对血清脂质水平的影响

试验结果表明(表3)，与正常对照组比较，模型对照组大鼠血清中TC(血浆总胆固醇)、TG(甘油三酯)、LDL(低密度脂蛋白胆固醇)含量有显著升高，HDL(高密度脂蛋白胆固醇)显著降低；与模型对照组比较，星座短腹海鞘提取物与盐酸小檗碱组合物组高、中、低剂量组TC、TG、LDL显著的降低；与模型对照组比较，高剂量实验组的HDL显著升高，而中剂量实验组及低剂量实验组均无显著差异。

表3星座短腹海鞘提取物对高脂饮食诱导的肥胖大鼠脂代谢的影响

6.3减肥降脂的组合物对肝脏保护作用的影响

与正常对照组比较，高脂血症模型组大鼠肝脏表面粗糙，颜色偏黄，且体积肿胀较大，各叶之间黏连较严重。星座短腹海鞘提取物与盐酸小檗碱组合物组与正常对照组相比肝脏体积均较大，但与模型对照组相比明显减小，其中高剂量组大鼠肝脏外观最接近于正常组。

对各组大鼠肝脏染色的结果如图1所示，与正常对照组(图1-a)大鼠肝细胞比较，模型对照组(图1-b)大鼠肝细胞结构破坏较严重，视野范围内几乎无完整细胞，且分布有较多不规则的空泡，说明肝细胞水变性和气球样变性较严重。各给实验组大鼠肝细胞的受损均小于模型对照组组，其中高剂量实验组组、中剂量实验组大鼠肝细胞(图1-c～图1-d)结构较完整，排列较整齐，空泡较少；低剂量实验组组大鼠肝细胞(图1-e)完整性较低、空泡数量较多。说明组合物对高脂血症引起的大鼠肝损伤有较好的调节作用。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种减肥降脂的组合物，其特征在于，按重量份计，由6~15份盐酸小檗碱以及1~5份星座短腹海鞘脂溶性提取物组成；

所述星座短腹海鞘脂溶性提取物的制备方法由以下步骤组成：

（1）将星座短腹海鞘匀浆，过滤，得到滤液；

（2）以正丁醇萃取滤液，分离正丁醇部分，浓缩至浸膏状，得到星座短腹海鞘脂溶性提取物；

所述步骤（2）中，正丁醇萃取时，正丁醇与滤液的体积比为3:1；

所述组合物用于制备减肥食品、药品或保健品时，剂量为50mg/kg；

步骤（2）中，所述浓缩的温度为40~50℃。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述盐酸小檗碱替换为盐酸小檗碱的结构类似物，所述盐酸小檗碱的结构类似物包括药根碱、巴马汀碱、表小檗碱和黄连碱中的一种或多种；

所述盐酸小檗碱替换为盐酸小檗碱及其结构类似物的组合。

3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述步骤（1）中，按照星座短腹海鞘的质量与生理盐水的体积之比为1:3~1:5混合，进行匀浆。

4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述步骤（2）中，正丁醇萃取的次数为1~3次。

5.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述步骤（2）中，浓缩为减压浓缩，减压浓缩的压力≤0.08MPa。

6.权利要求1~5任意一项所述组合物在制备减肥食品、药品或保健品中的应用。

7.权利要求1~5任意一项所述组合物在制备防治高血脂症、调节脂蛋白异常、预防冠心病或保护肝脏的食品、药品或保健品中的应用。

8.根据权利要求6或7所述的应用，其特征在于，所述食品、药品或保健品的剂型包括片剂、胶囊剂、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、糖浆剂、透皮贴剂、乳剂、冻干粉针剂或栓剂。