CN110123823B - 茯苓寡糖的应用和用于治疗糖脂代谢紊乱疾病的药物组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及中药应用领域,公开了茯苓寡糖的应用和用于治疗糖脂代谢紊乱疾病的药物组合物。本发明提供了茯苓寡糖在制备用于治疗糖脂代谢紊乱疾病的药物中的应用;还提供了一种用于治疗糖脂代谢紊乱疾病的药物组合物,该药物组合物含有茯苓寡糖以及药学上可接受的辅料。在本发明中,茯苓寡糖对肥胖、高血脂、高血糖、胰岛素抵抗、葡萄糖耐受等疾病均有较好的调控作用,同时茯苓寡糖还能调节胆汁酸代谢因子。
Description
技术领域
本发明涉及中药应用技术领域,具体涉及茯苓寡糖的应用和用于治疗糖脂代谢紊乱疾病的药物组合物。
背景技术
随着饮食结构和生活方式的改变,肥胖、高脂血症及高血糖、胰岛素抵抗等糖、脂代谢紊乱疾病已成为全球性的流行性疾病。相关资料显示,超过60%的男性和50%的女性体重超重,超重将会诱发一系列的代谢综合征,包括:1)向心性肥胖:腹部及腹部周围脂肪组织过量堆积;2)高血脂症,进而诱发动脉粥样硬化(动脉壁中产生斑块堆积);3)胰岛素抵抗或者葡萄糖耐受不良(机体不能适当的利用胰岛或者葡萄糖);4)II型糖尿病;5)慢性炎症反应及炎症细胞浸润。
茯苓是一种常用中药,为多孔菌科卧孔菌属真菌茯苓的干燥菌核。茯苓性甘、淡、平;入心、脾、肾经。药理实验表明茯苓具有渗湿利尿、合胃健脾、宁心安神、抑菌、增强机体抗病能力及降低血糖的功效。干燥的茯苓中有93%的茯苓多糖,茯苓多糖具有抗肿瘤、保肝、利尿、抗衰老、抗炎、降血脂、增强免疫、催眠等作用。
但是茯苓多糖结构上以(1,3)-β-D葡聚糖为主,仅有少量支链,因此不易溶于水,严重影响其活性和应用效果。本申请人通过研究发现,茯苓多糖经酶水解成茯苓寡糖后,其生理活性大大提高,可应用于调控代谢疾病。
但是目前有关茯苓寡糖在调控代谢疾病方面的研究尚未见应用。本申请为提高其水溶性和生物利用度,通过生物方法将茯苓多糖经酶水解后制备可溶于水的茯苓寡糖,从而提高其生理活性,同时提出茯苓寡糖在调节饮食引起的糖脂代谢紊乱疾病的用途,为防治慢性代谢疾病提供新的选择,为茯苓的深度开发提供新的思路。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术存在的有关茯苓寡糖在调控代谢疾病方面的研究尚未见应用的问题,提供一种茯苓寡糖在制备用于治疗糖脂代谢紊乱疾病的药物中的应用以及用于治疗糖脂代谢紊乱疾病的药物组合物,该应用使茯苓寡糖能调节由多种条件诱导的糖脂代谢紊乱疾病,而且能为防治慢性代谢疾病提供新的选择,为茯苓的深度开发提供新的思路。
为了实现上述目的,本发明一方面提供了一种茯苓寡糖在制备用于治疗糖脂代谢紊乱疾病的药物中的应用。
优选地,所述茯苓寡糖由2-10个单糖聚合而成,且以β-(1,3)-D葡萄糖聚合物为主链,并且可选地以甘露糖、半乳糖和木糖中的至少一种为支链,分子量为200-5000Da。
优选地,所述茯苓寡糖通过多糖水解酶酶解茯苓多糖获得。
优选地,所述多糖水解酶为葡聚糖酶、葡甘露聚糖酶或木聚糖酶。
优选地,所述糖脂代谢紊乱疾病包括肥胖、糖尿病、高血糖、高血脂或胰岛素抵抗。
优选地,所述茯苓寡糖的给药量为1-30mg/kg体重。
本发明另一方面提供了一种用于治疗糖脂代谢紊乱疾病的药物组合物,该药物组合物含有茯苓寡糖以及药学上可接受的辅料。
优选地,所述药物组合物的剂型为散剂、膏剂、粉剂、针剂或水剂。
本发明通过动物实验研究了茯苓寡糖节在糖脂代谢紊乱疾病中的应用,实验结果表明,茯苓寡糖对肥胖、高血脂、高血糖、胰岛素抵抗、葡萄糖耐受等疾病均有较好的调控作用,同时茯苓寡糖还能调节胆汁酸代谢因子。首次验证了茯苓寡糖能够有效地治疗糖脂代谢紊乱疾病,为茯苓的深度开发提供新的思路。
附图说明
图1是茯苓寡糖的高效液相色谱图;
图2是茯苓寡糖对肥胖小鼠体重的控制作用图;
图3是茯苓寡糖对小鼠高血脂的抑制作用图;
图4是茯苓寡糖对小鼠高血糖的调控作用图;
图5是茯苓寡糖对胰岛素抵抗和葡萄糖不耐受的调控作用图;
图6是茯苓寡糖对小鼠肝脏组织脂滴和脂肪组织的调控作用图;
图7是茯苓寡糖对胆汁酸代谢因子的调节作用图。
具体实施方式
以下结合附图对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是,此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明,并不用于限制本发明。
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值,这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说,各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间,以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围,这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
为了实现上述目的,本发明一方面提供了一种茯苓寡糖在制备用于治疗糖脂代谢紊乱疾病的药物中的应用。
在本发明所述的应用中,所述茯苓寡糖由2-10个单糖聚合而成,且以β-(1,3)-D葡萄糖聚合物为主链,并且可选地以甘露糖、半乳糖和木糖中的至少一种为支链,分子量为200-5000Da。
在本发明所述的应用中,所述茯苓寡糖的分子量为200-5000Da。优选地,所述茯苓寡糖的分子量为300-1500Da;更优选地,所述茯苓寡糖的分子量为500-1000Da。
在本发明所述的应用中,所述茯苓寡糖通过多糖水解酶酶解茯苓多糖获得。在具体实施方式中,所述多糖水解酶可以为葡聚糖酶、葡甘露聚糖酶或木聚糖酶。在最优选的实施方式中,所述多糖水解酶为葡聚糖酶。
在本发明所述的应用中,所述糖脂代谢紊乱疾病包括肥胖、糖尿病、高血糖、高血脂或胰岛素抵抗。
所述肥胖、糖尿病、高血糖、高血脂或胰岛素抵抗分别对应的指标为:
所述肥胖为机体体重指数≥25。
所述糖尿病为胰岛素相对或绝对不足导致的高血糖症状。
所述高血糖症状为机体血糖高于正常水平(空腹血糖≥7.0mM,餐后两小时血糖≥11.1mM)。
所述高血脂症状为低密度脂蛋白、胆固醇、甘油三酯高于临床上正常范围,或者高密度脂蛋白低于临床上正常范围。
所述胰岛素抵抗为机体对胰岛素的生理作用的反应性降低或敏感性降低。
在本发明所述的应用中,所述茯苓寡糖的给药量可以为1-30mg/kg体重,在具体实施方式中,所述茯苓寡糖的给药量可以为1mg/kg体重、5mg/kg体重、10mg/kg体重、15mg/kg体重、20mg/kg体重、25mg/kg体重或30mg/kg体重。
在最优选的实施方式中,所述茯苓寡糖的给药量为15mg/kg体重。
本发明另一方面提供了一种用于治疗糖脂代谢紊乱疾病的药物组合物,该药物组合物含有茯苓寡糖以及药学上可接受的辅料。
在本发明所述的药物组合物中,所述药物组合物的剂型可以为散剂、膏剂、粉剂、针剂或水剂。优选地,所述药物组合物的剂型为口服水剂。
本发明所述的含有茯苓寡糖的药物组合物可改善多种条件诱导的肥胖、高血脂、高血糖、胰岛素抵抗等症状,可调节胆汁酸代谢平衡。
以下将通过实施例对本发明进行详细描述,但本发明的保护范围并不仅限于此。
制备例1
本制备例用于说明茯苓寡糖的制备方法。
(1)取底物茯苓5克(标记有效含量为80%),加入100ml去离子水,搅拌加热至沸腾使其充分溶解;
(2)冷却至40℃后加入0.2g的葡聚糖酶,于40℃下搅拌反应24h,反应结束后升高温度至90℃,维持30min以灭活酶;
(3)室温下离心15min以去除少量不溶物,收取上清液进行喷雾干燥即得。
所得茯苓寡糖的高效液相色谱图如图1所示。
实验例1
本实验例用于说明茯苓寡糖对肥胖易感型小鼠的肥胖和高血脂的调控作用。
(1)在本实验例中,为评价茯苓寡糖对于高脂饮食引起的小鼠的肥胖和高血脂的调控作用,将16只4周龄的C57BL/6和16只4周龄ob/ob雄性小鼠随机分成4组,每组8只,分别对应对照组(WT)、肥胖组(Ob)、茯苓寡糖组(PCO)、肥胖加茯苓寡糖组(Ob-PCO)。
(2)小鼠在温度、湿度恒定的环境中饲养,经过环境适应期后,对照组和茯苓寡糖组小鼠予以正常饲料喂养4个月,肥胖组和肥胖加茯苓寡糖组给予高脂饮食4个月,同时在对照组和肥胖组给予正常饮水,而茯苓寡糖组和肥胖加茯苓寡糖组给予1mg/mL茯苓寡糖饮水。
(3)小鼠喂养过程中每隔半个月进行体重监测一次,并记录其体重变化,制成小鼠生长曲线,如图2所示。与对照组相比,肥胖组小鼠体重明显高于对照组,并有显著性差异(P<0.05),同时高脂饮食加茯苓寡糖组体重明显下降,而且具有显著性差异(P<0.05)。说明茯苓寡糖对于转基因肥胖小鼠有很好的减肥作用。
(4)喂食4个月后将小鼠麻醉处死,并取小鼠血浆,低温离心机下4度5000g高速离心后取上清液,并对血脂相关指标高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、甘油三酯、胆固醇进行检测,结果如图3所示。在与对照组相比,肥胖组低密度脂蛋白、甘油三酯、胆固醇的含量增加,而高密度脂蛋白含量降低,高脂饮食加茯苓寡糖后,其血脂相关指标均发生了逆转,结果进一步说明茯苓寡糖对转基因肥胖小鼠有很好的降脂作用。
实验例2
本实验例用于说明茯苓寡糖对高脂饮食诱导的高血糖、胰岛素抵抗和葡萄糖耐受的调控作用。
(1)在本实验例中,为评价茯苓寡糖对于高脂饮食诱导的高血糖、胰岛素抵抗和葡萄糖耐受的调控作用,将32只四周龄的C57BL/6雄性小鼠随机分成4组,每组8只,分别对应对照组(NCD)、高脂组(HFD)、茯苓寡糖组(PCO)、高脂加茯苓寡糖组(HFD-PCO)。
(2)小鼠在温度、湿度恒定的环境中饲养,经过环境适应期后,对照组和茯苓寡糖组小鼠予以正常饲料喂养4个月,高脂组和高脂加茯苓寡糖组给予高脂饮食四个月,同时在对照组和高脂组给予正常饮水,而茯苓寡糖组和高脂加茯苓寡糖组给予1mg/ml茯苓寡糖。
(3)小鼠喂养四个月后,将小鼠饥饿处理12小时,立即测量小鼠空腹血糖,绘制成图,如图4所示。记录每只小鼠体重,并根据体重腹腔注射1g/kg葡萄糖,并在0min,15min,30min,45min,60min,120min分别记录每只小鼠的血糖浓度,绘制出葡萄糖耐受图,如图5所示。给小鼠恢复饮食后,再饥饿处理12小时,记录每只小鼠体重,根据体重腹腔注射0.75U/kg胰岛素,并在0min,15min,30min,45min,60min,120min分别测量并记录每只小鼠的血糖浓度,绘制出胰岛素抵抗图,如图5所示。
与正常组相比,高脂组空腹血糖明显增加,并有显著性差异(P<0.05),加茯苓寡糖以后小鼠空腹血糖降至正常水平,并呈现显著性差异(P<0.05),说明茯苓寡糖对于高脂诱导的高血糖有很好的调控作用,可以用于高血糖的预防和治疗。同时我们做了小鼠胰岛素抵抗和葡萄糖耐受实验,通过结果可以显示出茯苓寡糖对于小鼠血糖和胰岛素有很好的调节作用,可以逆转高脂饮食引起的高血糖,从而降低Ⅱ型糖尿病及其他代谢病的风险因素。
实验例3
本实验例用于说明茯苓寡糖对糖尿病易感型小鼠肝脏组织脂滴和脂肪组织的调控作用。
(1)在本实验例中,为评价茯苓寡糖对于高脂饮食诱导的脂肪肝的调控作用,将4周龄的C57BL/6野生型和db/db糖尿病雄性小鼠各16只,分成4组,每组8只,分别对应野生型(WT)、糖尿病组(DB)、野生型加茯苓寡糖组(WT-PCO)、糖尿病加茯苓寡糖组(DB-PCO)。
(2)小鼠在温度、湿度恒定的环境中饲养,经过环境适应期后,野生型组和野生型加茯苓寡糖组小鼠予以正常饲料喂养4个月,糖尿病组和糖尿病加茯苓寡糖组给予高脂饮食四个月,同时在野生型组和糖尿病组给予正常饮水,而糖尿病组和糖尿病加茯苓寡糖组给予1mg/mL茯苓寡糖。
(3)小鼠喂养四个月后,将小鼠麻醉处死,取小鼠肝脏组织和脂肪组织固定于多聚甲醛溶液中,一段时间后做成石蜡切片,进行HE染色,在荧光显微镜下观察肝脏组织脂滴情况和脂肪组织大小并拍照,如图6所示。
相比于对照组,糖尿病组肝脏组织脂滴明显增加,且脂肪细胞面积明显增加,加茯苓寡糖后,肝脏组织的脂滴情况和脂肪组织面积均有所逆转,说明茯苓寡糖对于糖尿病易感型小鼠肝脏组织脂滴和脂肪组织有较好的调控作用。
实验例4
本实验例用于说明茯苓寡糖对小鼠胆汁酸代谢因子的调节作用。
(1)在本实验例中,为评价茯苓寡糖对于高脂饮食诱导的脂代谢的调控作用,将4周龄的C57BL/6和ApoE-/-雄性小鼠各16只,分成4组,每组8只,分别对应野生型组(WT)、载脂蛋白缺陷组(ApoE-/-)、野生型加茯苓寡糖组(WT-PCO)、载脂蛋白缺陷加茯苓寡糖组(ApoE-/--PCO)。
(2)小鼠在温度、湿度恒定的环境中饲养,经过环境适应期后,野生型组和野生型加茯苓寡糖组小鼠予以正常饲料喂养4个月,载脂蛋白缺陷组和载脂蛋白缺陷加茯苓寡糖组给予高脂饮食4个月,同时在野生型组和载脂蛋白缺陷组给予正常饮水,而野生型加茯苓寡糖组和载脂蛋白缺陷加茯苓寡糖组给予1mg/mL茯苓寡糖。
(3)小鼠喂养四个月后,将小鼠麻醉处死,称取小鼠肝脏组织30mg进行RNA提取,用cDNA快速合成试剂盒进行逆转录后,用RT-PCR检测胆汁酸代谢相关因子的表达,用2-ΔΔCT法计算相对基因表达水平,如图7所示。
相比于野生型组,载脂蛋白缺陷组在经过高脂饲养后与胆汁酸代谢相关的因子胆固醇7-羟化酶、固醇12α-羟化酶、法尼醇受体、肝X受体表达均下降,给予茯苓寡糖用药处理的小鼠表达均呈现显著性增加的趋势,说明茯苓寡糖促进胆汁酸代谢相关因子的表达。
由此可见,本发明所述的含有茯苓寡糖的药物组合物可以治疗肥胖、高血脂、高血糖、胰岛素抵抗等糖脂代谢紊乱疾病,可调节胆汁酸代谢平衡。
以上详细描述了本发明的优选实施方式,但是,本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内,可以对本发明的技术方案进行多种简单变型,包括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合,这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容,均属于本发明的保护范围。
Claims (2)
1.茯苓寡糖作为唯一活性成分在制备用于调节胆汁酸代谢平衡的药物中的应用;
所述茯苓寡糖由2-10个单糖聚合而成,且以β-(1,3)-D葡萄糖聚合物为主链,以甘露糖、半乳糖和木糖中的至少一种为支链,分子量为500-1000Da;
所述茯苓寡糖通过葡聚糖酶酶解茯苓多糖获得。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述茯苓寡糖的给药量为1-30mg/kg体重。
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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GR01 | Patent grant | ||
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