CN113425734B - 党参炔苷在制备治疗糖尿病的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了党参炔苷在制备治疗糖尿病的药物中的应用，属于化合物的医药应用领域。本发明经体内外研究表明，党参炔苷治疗后能够显著降低高脂饮食联合链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠血糖浓度，改善糖尿病大鼠的葡萄糖耐量；通过体外INS‑1832/13细胞的胰岛素分泌实验证明，党参炔苷能够抑制P2Y₁₄受体的活性显著增加高糖刺激的INS‑1832/13细胞分泌胰岛素。本发明证明了党参炔苷能够通过抑制胰岛P2Y₁₄受体促进胰岛素分泌，从而缓解糖尿病，具有潜在的药物开发前景。

Description

党参炔苷在制备治疗糖尿病的药物中的应用

技术领域

本发明属于化合物放入制药应用，特别是涉及党参炔苷在制备治疗糖尿病的药物中的应用。

背景技术

糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病，高血糖则是由胰岛素分泌不足或胰岛素生物功能损伤所致。长期存在的高血糖会引起各种组织损伤、功能障碍，临床主要表现为多饮、多尿、多食和消瘦以及疲乏无力和肥胖。目前糖尿病治疗药物主要包括磺脲类、双胍类、格列奈类、α-葡萄糖苷酶抑制剂、胰岛素增敏剂和胰岛素治疗。

中药党参为桔梗科植物党参的干燥根，具有调节血糖、增强免疫系统、降血压、抗溃疡等多种药理作用。目前关于党参调节血糖的活性成分研究主要集中在党参多糖，它能够降低血糖、改善胰岛素抵抗、改善糖尿病大鼠血脂代谢紊乱。党参炔苷(Lobetyolin，C₂₀H₂₈O₈)，结构式如下所示：

其是从党参中分离出来的聚乙炔类化合物，是党参中重要的有效成分之一，研究表明党参炔苷具有抗病毒、抗炎抗氧化、抑制细胞增殖和保护粘膜等多重药理作用。目前关于党参炔苷药理作用的研究主要包括减轻顺铂导致的急性肾损伤、心律失常、降脂、胃黏膜保护和抗癌作用；还可能通过抑制黄嘌呤氧化酶的活性对高尿酸血症有缓解作用。但是尚未有关于党参炔苷调节胰岛素分泌从而影响血糖的相关研究。

P2Y₁₄受体是一种抑制环磷酸腺苷的Gi蛋白偶联受体，属于P2Y嘌呤能受体家族成员之一，能被尿苷-5'-二磷酸葡萄糖(UDPG)和其他内源性UDP-糖激活。P2Y₁₄受体在组织中分布广泛，在胰腺、胃肠道、血管、肺和子宫的平滑肌细胞亚群中表达，参与机体炎症反应和过敏性疾病。近期研究表明，P2Y₁₄受体可以调节胰岛素分泌，拮抗P2Y₁₄受体具有潜在的治疗Ⅱ型糖尿病的作用。目前尚未有关于党参炔苷降血糖以及P2Y₁₄受体抑制的相关报道。

发明内容

发明目的：针对上述现有技术，本发明提供了党参炔苷在制备治疗糖尿病的药物中的应用。

技术方案：本发明公开了党参炔苷在制备治疗糖尿病的药物中的应用。

其中，所述糖尿病为Ⅱ型糖尿病。

所述党参炔苷通过拮抗P2Y₁₄受体活性发挥降糖作用。

本发明所述的一种药物组合物，其以党参炔苷作为唯一活性成分或与其它药物组合，添加药学上可接受的载体制备所得。

所述药物剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、粉针剂、丸剂、乳剂、混悬剂、溶液剂、喷雾剂、贴剂或舌下片剂等。

上述药物组合物在制备治疗糖尿病的药物中的应用也在本发明的保护范围内。

有益效果：本发明通过在稳转P2Y₁₄受体的HEK293细胞株中，预先加入不同浓度的受试物，以PPTN为阳性对照，检测细胞内cAMP含量，根据cAMP含量计算IC₅₀和对cAMP的相对抑制率，结果显示党参炔苷对P2Y₁₄受体有较高的抑制活性。以高脂饮食联合STZ诱导糖尿病大鼠作为疾病模型，通过灌胃治疗发现党参炔苷能够降低高脂饮食联合STZ诱导的糖尿病大鼠血糖浓度，改善葡萄糖耐量；通过体外实验表明，党参炔苷可以通过抑制P2Y₁₄受体活性从而促进INS-1832/13细胞分泌胰岛素。综上，本发明通过实验证明了党参炔苷通过抑制P2Y₁₄受体从而促进高糖条件下胰岛素的分泌，起到降低血糖的作用，具有临床糖尿病制药应用价值。

附图说明

图1是不同浓度党参炔苷对cAMP生成的抑制率；

图2是给药结束后大鼠葡萄糖耐量结果；

图3是党参炔苷对INS-1832/13细胞分泌胰岛素的影响。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作出详细说明。

实施例1天然化合物作为P2Y₁₄受体抑制剂的抑制活性评价

稳转P2Y₁₄受体的HEK293细胞株(购自江苏凯基生物技术股份有限公司)培养于DMEM培养基中(含10％胎牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素)，实验前一天接种至384孔培养板，接种密度为1×10⁴个细胞/孔，细胞于37℃、95％O₂、5％CO₂湿度条件下培养。实验前弃去培养基，改用无血清培养基，加入IBMX(500μM)和Ro 20-1724(100μM)抑制PDEs活性，以保证cAMP在一个较高的水平上。采用AC激动剂Forskolin(30μM)刺激细胞cAMP的产生，预先加入不同浓度的党参炔苷(0.01、0.1、1、10、100nM)，以PPTN(CAS号：1160271-30-6)作为阳性对照。同时加入10μM的P2Y₁₄受体激动剂UDPG，30min后根据cAMP GloTM Assay试剂盒(PROMEGA Co.Ltd，美国)说明书步骤检测细胞内cAMP的含量。根据对cAMP含量计算IC₅₀值和对cAMP的相对抑制率，结果见图1和表1。

表1

结果显示，党参炔苷对cAMP的抑制率(100nM)；其中党参炔苷的半数抑制浓度IC₅₀为5.803μM。

实施例2党参炔苷在高脂饮食联合STZ诱导的大鼠糖尿病模型中的药理实验研究

雄性清洁级SD大鼠，体重200±20g，自由水食，每天12h照明，环境温度为25±2℃。动物分为4组：正常对照组、模型对照组、二甲双胍阳性对照组(75mg/kg)和党参炔苷组(10mg/kg)。高脂喂养3周后，连续5天腹腔注射链脲佐菌素(STZ，50mg/kg)诱导大鼠糖尿病模型，以空腹血糖≥16.7mmol/L的大鼠定为糖尿病模型；正常对照组给予普通饲料自由饮食饮水，3周后注射同等剂量生理盐水；党参炔苷连续30天灌胃治疗，每天一次。给药结束后对禁食过夜的糖尿病大鼠进行口服葡萄糖耐量实验，给予20％葡萄糖溶液(2g/kg)，尾尖取血测定0、0.5、1、1.5、2h的血糖值。

结果如图2和表2所示，图2为给药结束后大鼠葡萄糖耐量结果；党参炔苷治疗后可显著改善糖尿病大鼠葡萄糖耐量，与正常组相比，^##P＜0.01，^###P＜0.001；与模型组相比，^*P＜0.05，^**P＜0.01。表2数据是党参炔苷治疗前后大鼠血糖变化情况(

n＝8)；用one-way ANOVA进行方差分析(与模型组相比，^**p＜0.01)。

表2

由表可知，党参炔苷治疗30天相比于模型组血糖显著降低，与空白对照组和二甲双胍组无显著性差异，表明党参炔苷对高脂饮食联合STZ诱导的大鼠糖尿病具有较好的缓解作用。

实施例3高糖刺激下INS-1832/13细胞胰岛素分泌实验

INS-1832/13细胞(购自北京科瑞思博生物技术有限公司)接种于48孔板，按分组给药干预；分为5组：空白对照组、模型组、UDPG(10μM)组、UDPG(10μM)+PPTN(10μM)组和UDPG(10μM)+党参炔苷(10μM)组。INS-1832/13细胞于RPMI 1640培养基(含10％胎牛血清、11.1mM葡萄糖)培养24h后弃去上清液。空白对照组和模型组给予完全培养液，UDPG组、UDPG+PPTN组和UDPG+党参炔苷组给予含有相应药物的完全培养液进行培养。干预48h后，弃上清，PBS洗涤后加入500μL HBSS缓冲液37℃平衡30min。模型组、UDPG组、UDPG+PPTN组和UDPG+党参炔苷组给予高糖刺激(16.7mmol/L)，空白对照组给予HBSS缓冲液，每孔500μL。37℃孵育1h，取上清使用胰岛素ELISA试剂盒(购自北京北方生物技术研究所)测定胰岛素量，然后提取各孔蛋白用于校正各孔胰岛素量，结果以单位质量胰岛素浓度(每孔胰岛素含量/相应的蛋白含量)表示。

结果如图3所示，文献报道UDPG激活P2Y₁₄受体后会抑制胰岛细胞胰岛素分泌，因此采用P2Y₁₄受体特异性抑制剂PPTN作为阳性对照，UDPG作为阴性对照。由图可知，当单独给予UDPG时，INS-1832/13细胞在高糖条件下胰岛素分泌受损，在同时给予UDPG和党参炔苷或PPTN时，胰岛素分泌量有所回升。说明党参炔苷能够抑制UDPG引起的P2Y₁₄受体激活，从而增加胰岛素的分泌。^***P＜0.001，^****P＜0.0001。

Claims (3)

1.党参炔苷作为唯一活性成分在制备治疗糖尿病的药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述糖尿病为Ⅱ型糖尿病。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，党参炔苷通过拮抗P2Y₁₄受体活性发挥降糖作用。

Images