CN110117572A - 一种脂肪细胞规模化的培养方法及其培养装置 - Google Patents

一种脂肪细胞规模化的培养方法及其培养装置 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种脂肪细胞规模化的培养方法及其培养装置，培养方法包括如下步骤：将待培养细胞与灭菌后的GE微载体接种于含血清的培养基中，接种后的所述GE微载体与所述待培养细胞的总浓度为0.1‑1wt％，搅拌培养24h以上，即可；所述待培养细胞的接种密度为(8‑8.5)*103cell/ml。该培养方法操作简单，操作条件比较温和，细胞成活率高，为后续脂肪细胞规模化的培养提供了参照方法，值得广泛推广应用。

Description

一种脂肪细胞规模化的培养方法及其培养装置
技术领域
本发明涉及脂肪细胞培养领域，具体而言，涉及一种脂肪细胞规模化的培养方法及其培养装置。
背景技术
每个成人体内，大约含有300亿个白色脂肪，功能是将能量以脂肪细胞的形式储存起来。每个脂肪细胞中，都含有三酸甘油脂，俗称脂肪球。脂肪球量变大，脂肪细胞体积就扩增，造成肥胖；反之燃烧三酸甘油脂，细胞萎缩身材就瘦下来了。在正常情形下，脂肪细胞数目到了青春期后就不再增加。身体脂肪的分布，部分取决于遗传及荷尔蒙等影响，例如女性的皮下脂肪多积聚于小腹、臀部及大腿，而男性则囤积于上腹及腰部。
微载体指直径在60-250μm，能适用于贴壁细胞生长的微珠。一般是由天然葡聚糖或者各种合成的聚合物组成。
微载体应用的原理是将对细胞无害的颗粒-微载体加入到培养容器的培养液中，作为载体使细胞在微载体表面附着生长，同时通过持续搅动使微载体始终保持悬浮状态。贴壁依赖性细胞在微载体表面上的增殖，要经历黏附贴壁、生长和扩展成单层三个阶段。细胞只有贴附在固体基质表面才能增殖，故细胞在微载体表面的贴附是进一步铺展和生长的关键。黏附主要是靠静电引力和范德华力。细胞能否在微载体表面黏附，主要取决于细胞与微载体的接触概率和相融性。
现有技术中的微载体培养细胞的方法工艺复杂，操作条件苛刻，细胞成活率不高，接种密度低，而且对微载体本身的要求高，需要采用专用型的微载体才能保证细胞培养的正常进行，间接提高了操作成本，限制了微载体的应用面。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种脂肪细胞规模化的培养方法，上述培养方法操作简单，操作条件比较温和，细胞成活率高，为后续脂肪细胞规模化的培养提供了可供参照的方法，值得广泛推广应用。
本发明的第二目的在于提供上述脂肪细胞规模化的培养装置，该培养装置本身结构简单，成本低，实现了规模化高密度培养细胞，并保证了高效率的制备脂肪细胞，而且培养液可以实现循环利用，非常方便。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
本发明提供了一种脂肪细胞规模化的培养方法，包括如下步骤：
将待培养细胞与灭菌后的GE微载体接种于含血清的培养基中，接种后的所述GE微载体与所述待培养细胞的总浓度为0.1-1wt％，搅拌培养24h以上，即可；
所述待培养细胞的接种密度为(8-8.5)*103cell/ml。
每个成人体内，大约含有300亿个白色脂肪，功能是将能量以脂肪细胞的形式储存起来。每个脂肪细胞中，都含有三酸甘油脂，俗称脂肪球。脂肪球量变大，脂肪细胞体积就扩增，造成肥胖；反之燃烧三酸甘油脂，细胞萎缩身材就瘦下来了。在正常情形下，脂肪细胞数目到了青春期后就不再增加。身体脂肪的分布，部分取决于遗传及荷尔蒙等影响，例如女性的皮下脂肪多积聚于小腹、臀部及大腿，而男性则囤积于上腹及腰部。
微载体指直径在60-250μm，能适用于贴壁细胞生长的微珠。一般是由天然葡聚糖或者各种合成的聚合物组成。
微载体应用的原理是将对细胞无害的颗粒-微载体加入到培养容器的培养液中，作为载体使细胞在微载体表面附着生长，同时通过持续搅动使微载体始终保持悬浮状态。贴壁依赖性细胞在微载体表面上的增殖，要经历黏附贴壁、生长和扩展成单层三个阶段。细胞只有贴附在固体基质表面才能增殖，故细胞在微载体表面的贴附是进一步铺展和生长的关键。黏附主要是靠静电引力和范德华力。细胞能否在微载体表面黏附，主要取决于细胞与微载体的接触概率和相融性。
现有技术中的微载体培养细胞的方法工艺复杂，操作条件苛刻，细胞成活率不高，接种密度低，而且对微载体本身的要求高，需要采用专用型的微载体才能保证细胞培养的正常进行，间接提高了操作成本，限制了微载体的应用面。
本发明为了解决上述技术问题，提供了一种脂肪细胞规模化的培养方法，该培养方法操作简单，操作条件温和，通过不断探索摸索出并建立最佳比例条件，以将微载体结合脂肪细胞进行规模化培养的方式，细胞成活率有保证，接种密度高，对微载体本身的要求低，并不需要配备专用的微载体，降低了操作成本，简化了培养方式，值得广泛推广应用。
优选地，作为进一步可实施的方案，接种后所述GE微载体与所述待培养细胞的总浓度为0.2-0.8wt％之间。
优选地，作为进一步可实施的方案，接种后所述GE微载体与所述待培养细胞的总浓度为0.5wt％，将细胞接种后，对微载体与待培养细胞在培养基中的总浓度进行测定，最适宜的浓度需要控制在0.2-0.8wt％之间，还可以为0.3wt％、0.4wt％、0.6wt％、0.7wt％等。
可以取生长的贴壁细胞进行完消化操作后作为待培养细胞。
上述GE微载体在与细胞结合之前是需要灭菌处理的，具体灭菌处理方法为：
PBS 0.01M pH7.4配制4L高压灭菌121℃15min；
用上述PBS浸泡微载体过夜，洗3次，beads沉淀底部，弃掉上清中破碎的灭菌后室温条件下用培养基平衡过夜，中间换一次培养液。分装10ml/管，4℃保存，用时取1ml加100ml培养基。
优选地，作为进一步可实施的方案，接种后10-15rpm搅拌培养24-26h，18-30rpm搅拌培养24-72h。一般先慢速24h以上，然后再快速搅拌过夜，并观察细胞的生长状况。
优选地，作为进一步可实施的方案，所述GE微载体为Cytodex 1GE。
优选地，作为进一步可实施的方案，搅拌培养72h以上后，吸取培养上清液，采用生理盐水洗涤，添加胰酶消化后，加入含血清的培养基，微载体脱落后，再添加新的GE微载体，即可。
优选地，作为进一步可实施的方案，添加胰酶消化40-60s。
具体传代的方法按照如下步骤进行：
培养72小时后进行传代，吸取培养上清，加入生理盐水洗一遍，弃掉，再加入胰酶消化约40-60sec，加入含血清的培养基摇动转瓶，观察载体脱落，用一次性吸管吹打几次消化下来的载体，使其分散均匀，加入到新的转瓶中，再重新加入新的微载体1ml,密封，平放并转动转瓶让载体平铺至转瓶表面，放置快速转瓶机上，继续观察。
通过观察，发现将微载体和细胞同时传代培养后于镜下可观察到载体呈圆形，均匀，贴壁，平铺于培养皿和转瓶表面上，可观察到载体表面有大量结合细胞，均贴壁生长。一段时间培养液变黄，换新培养液时，将瓶斜倾，轻轻吸取掉，倒入10或100ml新培养基，可见beads平铺于表面上。
上述进行实验室小试试验时采用的是大转瓶、小转瓶来培养细胞，当进行中试试验还需要专门采用培养装置进行培养，因此本发明提供了一种专门用于脂肪细胞规模化培养的培养装置，该培养装置成本低，是发明人自行设计的，比市面上的生物反应器造价低，而且细胞培养的品质有保证。
现有技术中，生物反应器是由一次性细胞培养瓶和控制系统平台组成，每个培养瓶包括一定质量的专用载体，这些装置成本昂贵，耗材依赖进口厂家。
生物反应器设备虽然可以做到自动化，规模化，但其价格昂贵，一般实验室不愿意投入消耗大的实验设备，需要高浓度细胞和载体，这种实验规模成本高，影响因素多，需要厂家进行设备使用专业培训和维护，需要熟练的技术人员完成，前期预实验建立和摸索培养条件非常艰巨。一次性耗材依赖高。
细胞工厂包括5层和10层的结构扩大细胞培养面积，但还是平面的有限空间来实现细胞贴壁培养，不方便在普通显微镜下观察细胞生长情况，难以实现最大空间规模培养。
为了提供一种结构简单，方便观察细胞具体培养状况的培养装置，本发明提供的培养装置具体包括：用于装有GE微载体与待培养细胞的生物培养器，无菌培养袋；
无菌培养袋与所述生物培养器的进口通过接头连接，其中接头处是可以根据需要连接断开的，因此该培养装置可根据需要设置有多个接头，这样当整个培养装置中的某一设备需要更换时，可以从接头处断开进行更换。
优选地，作为进一步可实施的方案，在无菌培养袋与生物培养器之间设置有用于将培养基循环排出的变速泵。
由于微载体与结合细胞体积大小和形状不同，沉降速率不同，可以通过调节变速泵的转速并延长压积时间来达到最大限度的细胞与微载体的结合。
优选地，作为进一步可实施的方案，无菌培养袋为多个，生物培养器为多个，变速泵为单个，每个无菌培养袋与对应的生物培养器均通过所述变速泵连接；
优选地，所述无菌培养袋为两个，互相对称设置；
优选地，所述生物培养器为两个，互相对称设置。
上述装置中的无菌培养袋、生物培养器可以同时为多个，从而形成多套培养系统，但是这些培养系统可共用同一个变速泵，最优的方式是两组培养系统对称设置，变速泵放置中间位置。
采用上述培养装置，微载体可360度表面积结合细胞在相同环境下通过建立的共培养细胞结合微载体方法应用此循环培养微载体细胞方法，最大限度实现空间环境的规模化培养，适合细胞共培养以达到规模化生产效益，可视化操作灵活简单，经济实用，极大地节约空间和节省操作过程。极其方便控制生产高浓度产物制备量和容易从培养基中分离载体细胞。
将脂肪细胞用于本发明新设计的装置系统已实现规模化制备，此系统是基于生物反应器原理结合实际情况进行自行设计的。
该装置的具体运行工艺为：将生物培养器进行预先灭菌，然后用一个可调节的变速泵将培养基循环提供养分，培养基预先装在无菌灭菌袋内利用CO2来调节培养基pH值，并与生物培养器形成循环供给培养基的系统。
其实，还可在生物培养器进出的管道上安装调节阀，这样可随时取样观察脂肪细胞结合微载体的情况，当无菌培养袋中的培养液颜色发黄，则需要更换培养液，通过连接的通道进行新旧培养液更换，从接头处将无菌培养袋取下来。
一定浓度的微载体的表面积结合细胞可以放大培养面积，实现规模化高密度培养细胞，高效率制备相关产品。在生物培养器中设置有一层网板，该网板用以阻挡微载体、培养细胞在培养液循环流动时不会被培养液带走，当微载体、培养细胞需要进一步更换或者移至别处储存时，可将生物培养器直接整个取下进行处理，非常方便，处理后可重复使用。
此外，一般细胞培养液通常要求其颜色澄清、所含的物质互相融合后形成均一的溶液，因此为了促进培养液中各个物质之间的融合度，增加各个物质互相接触的时间，保持培养液稳定的流动性，促进其对细胞培养的作用，并提高培养液的循环使用寿命，提高培养液的品质，本发明提供了一种培养液促混器，该培养液促混器设置在无菌培养袋和生物培养器之间，由多孔进样粗管和多孔进样细管互配组成，
优选地，多孔进样粗管并排设置在靠近进口的位置，多孔进样细管并排设置在靠近出口的位置。
优选地，多孔进样粗管的直径控制在5-10cm，多孔进样细管的直径控制在2-4cm之间。
优选地，多孔进样粗管的个数控制在3-4个，多孔进样细管的个数控制在3-4个。
优选地，多孔进样粗管与多孔进样细管的每个出口均为锥形状，锥形状的斜面与平行面相比向内凹的角度呈30-50度，更优地呈40度。之所以要控制在这样的角度为的是可以让从各个管道出来的培养液喷射出来，以加速培养液的流动，这样通过将管道设计成这种出口尖锥型的结构，从而达到对培养液的流速进行有效的控制，由于在管道中的培养液速率比较慢，其促混效果比较优异，喷嘴处的培养液速率比较快，又加速了流动，促进其运输到生物培养器中，因为如果速率一直比较缓慢，可能会影响到培养液本身的使用寿命，因此最好通过变换速率的方式以达到提升培养液品质的效果。
本发明的培养液促混器的结构是根据培养液的自身特性进行设计的，具有专一性，尤其是通过培养液速率快慢的转换切实提高了培养液本身的品质，也提高了培养的细胞的成活率。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)本发明的细胞培养可在转瓶内培养，随时在镜下观察不同细胞包被微载体的情况，也可在设计的密闭过滤循环培养系统内培养，这种循环培养法可通过变速泵调节培养基流速，减少细胞灌注搅拌及过滤时对细胞的剪切力。持续温和的循环速率使液体处于循环流动状态，给微载体细胞提供好的营养环境，可促进孔隙内细胞之间营养物质交换，微载体结合细胞在高密度环境下可以用无血清培养，同时细胞免受化学因素的影响，如代谢产物堆积对细胞的毒性；
(2)本发明的微载体共同培养法系统可在一个培养箱内实现规模化培养细胞，体现高效率的制备，极大的节约了经费，节省空间、时间以及生产过程中废物处理过程。同时高密度培养细胞可减少额外补充营养，无需添加血清。因为细胞浓度与细胞因子基因表达成正性依赖关系，更加促进细胞分泌活性成分，同时很容易达到细胞与培养上清中分离收集；
(3)本发明的培养装置取样简单，可在生物培养器上安装取样口随时取样，然后置于显微镜下观察载体表面的细胞生长情况；
(4)解离后的载体回收后进行处理可以重复使用，大大减少了生产成本。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例三的脂肪细胞规模化的培养装置的结构示意图；
图2为本发明实施例六的脂肪细胞规模化的培养装置的结构示意图；
图3为本发明实施例六的脂肪细胞规模化的培养装置中的培养液促混器的具体结构示意图。
附图标记：
10-无菌培养袋； 20-生物培养器；
30-变速泵； 40-培养液促混器；
401-多孔进样粗管， 402-多孔进样细管；
50-接头。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
实施例1
脂肪细胞规模化的培养方法按照如下步骤进行：
1)取贴壁的脂肪细胞进行消化后，接种于生物培养器20中与GE微载体共培养，脂肪细胞的接种密度为8*103cell/ml，接种后的终浓度为0.2wt％(GE微载体与待培养细胞的总浓度)；
2)灭菌培养袋10内装有培养液，在灭菌培养袋的侧壁装有接头50，通过该接头与生物培养器20的进口连接，以通过可调式的变速泵30输送营养，生物培养器20的出口设置有接头50，并通过变速泵30将生物培养器20中的培养液排出；
3)慢速10-15rpm搅拌培养24h后，再快速18-30rpm搅拌培养72h，并可通过生物培养器20的出口的接头50处取载体细胞，观察细胞的生长状态；
4)培养后进行传代，吸取培养上清，加入生理盐水洗一遍，弃掉，再加入胰酶消化约40-60sec，加入含血清的培养基摇动生物培养器20，观察载体脱落，用一次性吸管吹打几次消化下来的载体，使其分散均匀，加入到新的生物培养器20中，再重新加入新的微载体，密封，平放并转动让载体平铺至生物培养器20表面，继续观察。
实施例2
脂肪细胞规模化的培养方法按照如下步骤进行：
1)将微载体进行处理：PBS 0.01M pH7.4配制4L高压灭菌121℃15min，用上述PBS浸泡Cytodex 1GE微载体过夜，洗3次，beads沉淀底部，弃掉上清中破碎的灭菌后室温条件下用培养基平衡过夜，中间换一次培养液。分装10ml/管，4℃保存，用时取1ml加100ml培养基；
2)取贴壁的脂肪细胞进行消化后，接种于生物培养器20中与微载体共培养，脂肪细胞的接种密度为8.5*103cell/ml，接种后的终浓度为0.8wt％(GE微载体与待培养细胞的总浓度)；
3)灭菌培养袋10内装有培养液，在灭菌培养袋的侧壁装有接头50，通过该接头与生物培养器20的进口连接，以通过可调式的变速泵30输送营养，生物培养器20的出口设置有接头50，并通过变速泵30将生物培养器20中的培养液排出；
4)慢速10-15rpm搅拌培养26h后，再快速18-30rpm搅拌培养24h，并可通过生物培养器20的出口的接头50处取载体细胞，观察细胞的生长状态；
5)培养后进行传代，吸取培养上清，加入生理盐水洗一遍，弃掉，再加入胰酶消化约40-60sec，加入含血清的培养基摇动生物培养器20，观察载体脱落，用一次性吸管吹打几次消化下来的载体，使其分散均匀，加入到新的生物培养器20中，再重新加入新的微载体，密封，平放并转动让载体平铺至生物培养器20表面，继续观察。
实施例3
脂肪细胞规模化的培养方法按照如下步骤进行：
1)将微载体进行处理：PBS 0.01M pH7.4配制4L高压灭菌121℃15min，用上述PBS浸泡Cytodex 1GE微载体过夜，洗3次，beads沉淀底部，弃掉上清中破碎的灭菌后室温条件下用培养基平衡过夜，中间换一次培养液。分装10ml/管，4℃保存，用时取1ml加100ml培养基；
2)取贴壁的脂肪细胞进行消化后，接种于生物培养器20中与微载体共培养，脂肪细胞的接种密度为8.4*103cell/ml，接种后的终浓度为0.1wt％(GE微载体与待培养细胞的总浓度)；
3)灭菌培养袋10内装有培养液，在灭菌培养袋的侧壁装有接头50，通过该接头与生物培养器20的进口连接，以通过可调式的变速泵30输送营养，生物培养器20的出口设置有接头50，并通过变速泵30将生物培养器20中的培养液排出，灭菌培养袋10为两个，生物培养器20也为两个，相对设置共用一个变速泵30实现培养液的循环；
4)慢速10-15rpm搅拌培养25h后，再快速18-30rpm搅拌培养48h，并可通过生物培养器20的出口的接头50处取载体细胞，观察细胞的生长状态；
5)培养后进行传代，吸取培养上清，加入生理盐水洗一遍，弃掉，再加入胰酶消化约40-60sec，加入含血清的培养基摇动生物培养器20，观察载体脱落，用一次性吸管吹打几次消化下来的载体，使其分散均匀，加入到新的生物培养器20中，再重新加入新的微载体，密封，平放并转动让载体平铺至生物培养器20表面，继续观察，具体培养装置的结构见图1。
实施例4
具体操作步骤与实施例3一致，只是终浓度为1wt％。
实施例5
具体操作步骤与实施例3一致，只是终浓度为0.5wt％。
比较例1
具体操作步骤与实施例3一致，只是终浓度为1.5wt％。
比较例2
具体操作步骤与实施例3一致，只是终浓度为0.01wt％。
比较例3
具体操作步骤与实施例3一致，只是不采用微载体培养。
实验例1
将本发明实施例1-5与比较例1-3的培养方法培养出的脂肪细胞的品质以及成活率进行统计，具体结果见下表1所示：
表1统计结果
从上表1中的数据可以看出，通过采用本发明的培养方法可以显著提高细胞的成活率，通过显微镜的观察，细胞贴壁培养后再加入beads密封和CO2环境下培养,镜下可见beads表面结合细胞，细胞爬行于beads表面，说明beads结合细胞好于器皿表面，细胞结合率高，平铺，贴壁，经过不断的摸索发现最优的操作终浓度为0.5wt％，而且发明人经过大量的实践对于具体操作参数进行了进一步优化，具有一定的参考价值。
实施例6
具体操作步骤与实施例5一致，只是在培养装置中多添加了培养液促混器40，培养液促混器40位于无菌培养袋10与生物培养器20的进口之间，具体流程示意图见图2，该设备的具体结构如下，具体见图3：
由3个多孔进样粗管401与4个多孔进样细管402组成，多孔进样粗管401的直径为5cm，靠近培养液促混器40的进口互相并排设置，多孔进样细管的直径为2cm，靠近培养液促混器40的出口互相并排设置，并且多孔进样粗管401与多孔进样细管402的每个出口均为锥形状，该锥形状的斜面与平行面相比向内凹的角度为30度，培养液依次流通多孔进样粗管401、多孔进样细管402，然后流进生物培养器20中。
实施例7
具体操作步骤与实施例6一致，只是培养液促混器40的结构为：由4个多孔进样粗管401与3个多孔进样细管402组成，多孔进样粗管401的直径为10cm，靠近培养液促混器40的进口互相并排设置，多孔进样细管的直径为4cm，靠近培养液促混器40的出口互相并排设置，并且多孔进样粗管401与多孔进样细管402的每个出口均为锥形状，该锥形状的斜面与平行面相比向内凹的角度为50度，培养液依次流通多孔进样粗管401、多孔进样细管402，然后流进生物培养器20中。
实施例8
具体操作步骤与实施例6一致，只是培养液促混器40的结构为：由4个多孔进样粗管401与4个多孔进样细管402组成，多孔进样粗管401的直径为6cm，靠近培养液促混器40的进口互相并排设置，多孔进样细管的直径为3cm，靠近培养液促混器40的出口互相并排设置，并且多孔进样粗管401与多孔进样细管402的每个出口均为锥形状，该锥形状的斜面与平行面相比向内凹的角度为50度，培养液依次流通多孔进样粗管401、多孔进样细管402，然后流进生物培养器20中。
实验例2
将实施例5-8的培养装置对细胞的生长状况进行试验，具体结果见下表2所示：
表2统计结果
从上表2中可以看出，本发明实施例通过增加了培养液促混器40这个结构，培养液的使用寿命得到了延长，细胞的培养品质也得到了提升。
尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。

Claims (10)

1.一种脂肪细胞规模化的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
将待培养细胞与灭菌后的GE微载体接种于含血清的培养基中，接种后的所述GE微载体与所述待培养细胞的总浓度为0.1-1wt％，搅拌培养24h以上，即可；
所述待培养细胞的接种密度为(8-8.5)*103cell/ml。
2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，接种后所述GE微载体与所述待培养细胞的总浓度为0.2-0.8wt％之间。
3.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，接种后所述GE微载体与所述待培养细胞的总浓度为0.5wt％。
4.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，接种后10-15rpm搅拌培养24-26h，18-30rpm搅拌培养24-72h。
5.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述GE微载体为Cytodex 1 GE。
6.根据权利要求1-5任一项所述的培养方法，其特征在于，搅拌培养72h以上后，吸取培养上清液，采用生理盐水洗涤，添加胰酶消化后，加入含血清的培养基，微载体脱落后，再添加新的GE微载体，即可。
7.根据权利要求6所述的培养方法，其特征在于，添加胰酶消化40-60s。
8.权利要求1-7任一项所述的脂肪细胞规模化的培养装置，其特征在于，包括：用于装有GE微载体与待培养细胞的生物培养器，无菌培养袋；
所述无菌培养袋与所述生物培养器的进口通过接头连接。
9.根据权利要求8所述的培养装置，其特征在于，在所述无菌培养袋与所述生物培养器之间设置有用于将培养基循环排出的变速泵。
10.根据权利要求9所述的培养装置，其特征在于，所述无菌培养袋为多个，所述生物培养器为多个，所述变速泵为单个，每个所述无菌培养袋与对应的所述生物培养器均通过所述变速泵连接；
优选地，所述无菌培养袋为两个，互相对称设置；
优选地，所述生物培养器为两个，互相对称设置。
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