CN110100944A - 富含活性亚铁离子畜禽血寡肽的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了富含活性亚铁离子畜禽血寡肽的制备方法，步骤包括：1)分离血球与血清；2)均质破壁；3)血红蛋白溶液中加入复合蛋白酶，酶量为1.0～2.5％，搅拌转速为60～110转/分，酶解时间为4～7h后加入风味蛋白酶，酶量为0.3～0.8％，酶解时间为1～2h，搅拌转速为60～90转/分，酶解过程冲入氮气；4)将酶解液在9000～14000转/分的转速下沉降分离，制得酶解上清液和下层沉淀；5)将步骤4制得的上清液进行纳滤脱灰、浓缩处理，收集截留液；6)将截留液加入到步骤4制得的沉淀物中，同时加入包埋剂后冻干制粉。本发明制备方法简单、纯度高、经济效益突出，适合于大规模工业化生产。
Description
技术领域
本发明属于血液加工技术领域，特别是一种富含活性亚铁离子畜禽血寡肽的制备方法。
背景技术
畜禽血液营养丰富，含有200多种功能成分，蛋白含量16.4～18.9％，包含人体必需的8种氨基酸，尤其以赖氨酸和亮氨酸含量高，还含有钙、磷、镁、钾、铁等微量元素及多种维生素、糖类、脂类。畜禽血液约占动物体重的5～8％，屠宰后可收集血液量占屠宰体重的4～5％，其中含有丰富的营养和生物活性物质，尤其是蛋白质含量丰富可与瘦肉媲美，所以血液在西方素有“液体肉”之称，血液中蛋白质的必需氨基酸总量高于人乳和全蛋，特别是赖氨酸的含量很高，接近9％，完全符合人类和畜禽有机体的需要，被广泛应用于各个行业。
以肉鸡为例，我国肉鸡出栏量位居世界第一，2016年为82.1亿只，按照每只75g血液量计算，鸡血原料量为61.5万吨。我国鸡血产业化利用率低大约只有25％，只简单加工为饲料用血粉或血豆腐、血肠等，大部分作为废弃物排放，不仅造成蛋白资源流失，还会造成环境污染。研究表明，每1kg血液造成污染负荷为BOD为150g，需要花费0.4～0.6元，经济与环境效益差。加深对鸡血高值化加工的研究，不仅对于企业增加效益、减少治污费用，而且对于生产环境优化意义重大。
畜禽血液中血红蛋白肽不仅具有良好的营养性，而且具备极佳的生理功能，可以作为保健食品和功能食品，可以提供易于人体吸收的有机铁、多肽、氨基酸，有实验证明蛋白肽在预防癌症、降低血脂、抗动脉硬化、促进免疫等方面表现出良好效果。另外在制药行业中，血红素不仅可以作为胆红素原料，还可以作为制备抗癌药物。临床上多使用作为补铁剂，可以被人体直接吸收，副作用小。以氧化血红蛋白为原料制备原卟啉二钠可用于治疗急性肝炎、慢性衍生型肝炎、慢性活动性肝炎。
但是，目前生产中加工方法多是针对单一组分进行，过程易产生副产物废料，过程复杂、助剂多，难以实现可调组分的联产，效益低下。
发明内容
本发明的目的是提供一种以畜禽血球为主要原料制备富含活性亚铁离子畜禽血寡肽的制备方法。
针对所提到的问题，本发明提供了一种富含活性亚铁离子畜禽血寡肽的制备方法，步骤包括：
1)分离血球与血清
将畜禽血液加入抗凝剂，搅拌溶解，采用离心技术将畜禽血液分离出血球和血清，将血球进行等渗液清洗；
2)均质破壁
向血球中加入抗氧化剂及纯水，制得溶血液，将溶血液进行高压均质，离心后收集上层清液，即畜禽血红蛋白；
3)蛋白酶解
血红蛋白溶液中加入复合蛋白酶，酶量为1.0～2.5％，搅拌转速为60～110转/分，酶解时间为4～7h后加入风味蛋白酶，酶量为0.3～0.8％，酶解时间为1～2h，搅拌转速为60～90转/分，酶解过程冲入氮气；
4)将酶解液在9000～14000转/分的转速下沉降分离，制得酶解上清液和下层沉淀；
5)将步骤4制得的上清液进行纳滤脱灰、浓缩处理，收集截留液；
6)将截留液加入到步骤4制得的沉淀物中，同时加入包埋剂后冻干制粉。
优选方案是：畜禽血液采用60～100目不锈钢网过滤后再加入抗凝剂进行血球与血清分离。
优选方案是：按血球质量计，所述抗凝剂为质量百分比3～6‰的柠檬酸钠。
优选方案是：分离血清和血球的离心分离的转速为4000～8000转/分。
优选方案是：采用质量浓度为0.9％氯化钠等渗盐水反复冲洗三次。
优选方案是：向血球中加入质量百分比为3～7‰抗坏血酸钠溶液，同时加入比例为1：1～2的纯水进行高压均质破膜，均质压力为30～60MPa。
优选方案是：酶解时通入氮气，流速为10L/min。
优选方案是：将步骤4制得的上清液进入300～1000Da孔径纳滤，待纳滤清液通量降低至50～55％时，在原液中加入1～1.5倍纯水，继续过滤，通量再次降低至50～55％时收集截留液，达到浓缩目的。
优选方案是：将截留液加入到步骤4制得的沉淀物中，同时加入质量百分比为3～5％的明胶包埋剂，搅拌转速为100～120转/分，时间为10～15min，温度为50～55℃，制得配置液。
优选方案是：将配置液送入到冻干机中，温度为-30～-45℃，真空度为20～30Pa。
本发明的有益效果为：
1、在工艺中采用两步脱盐，第一步是通过等渗盐水对血球外表面灰分进行洗脱；第二步是采用纯水和纳滤结合方法对酶解后的分离上清液进行脱盐处理；
2、在工艺中采用两步酶解，第一步是采用复合蛋白酶对血红蛋白进行酶解，得到多肽与血红素，多肽进一步降解为寡肽，血红素不溶于水而沉降；第二步是采用风味蛋白酶对酶解液进行再次酶解，目的是提升产品的风味口感；
3、在工艺中采用两次抗氧化，第一步是在均质前加入异抗坏血酸钠，保证在均质破膜时对血红素的保护；第二步是在酶解过程中充入惰性气体，由于酶解过程时间长、温度偏高，而且搅拌容易混入洋气，惰性气体可以有效阻隔罐体内氧气对血红素的氧化；
4、本申请注重Fe2+的过程保护与小分子寡肽的酶解程度控制，所得畜禽血寡肽产品珠蛋白得到较完全的水解，血红素得到很好的保护，同时通过反复洗脱结合纳滤，脱除血球中的Na+、K+使得产品灰分降低而人体易吸收的血红素含量提高，产品含有丰富的Fe2+与寡肽，具备双重营养性显著高于目前市场的现有类似产品。
采用本发明方法可以显著提高产品的品质；采用冻干工艺所的产品具有很高的经济价值。本发明工艺操作较为简便，已完成中试生产，可形成规模化生产。
附图说明
图1为本发明的流程框图；
图2为不同蛋白酶对血细胞酶解的影响；
图3为不同酶解时间对血细胞酶解的影响；
图4为不同酶活力对血细胞酶解的影响；
图5为不同料液比例对血细胞酶解的影响；
图6为不同酶添加量对蛋白回收率的影响；
图7为不同酶添加量对血红素的影响；
图8为不同酶添加量对酶解液中>10KDa的多肽含量的影响；
图9为不同酶添加量对酶解液中2K-10KDa的多肽含量的影响；
图10为不同酶添加量对酶解液中400-1KDa的多肽含量的影响；
图11为不同酶添加量对酶解液中＜400Da的多肽含量的影响；
图12为不同Vc-Na添加对蛋白回收率的影响；
图13为不同Vc-Na添加对血红素的影响；
图14为不同Vc-Na添加对酶解液中>10KDa的多肽含量的影响；
图15为不同Vc-Na添加对酶解液中2K-10KDa的多肽含量的影响；
图16为不同Vc-Na添加对酶解液中400-1KDa的多肽含量的影响；
图17为不同Vc-Na添加对酶解液中＜400Da的多肽含量的影响。
具体实施方式
下面对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不配出一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。
实施例1
本实施例提供了一种富含活性亚铁离子畜禽血寡肽的制备方法，步骤包括：
1)分离血球与血清
将鸡血采用60目不锈钢网过滤后加入质量百分比为3～6‰的柠檬酸钠抗凝剂，搅拌溶解，采用4000转/分的离心转速将畜禽血液分离出血球和血清，采用质量浓度0.9％氯化钠等渗盐水将血球反复冲洗三次；
2)均质破壁
向血球中加入质量百分比为4‰抗坏血酸钠溶液，同时加入比例为1：1的纯水制得溶血液，将溶血液进行高压均质破膜，均质压力为30MPa，离心后收集上层清液，即畜禽血红蛋白；
3)蛋白酶解
血红蛋白溶液中加入复合蛋白酶，酶量为1.5％，搅拌转速为60转/分，酶解时间为4h后加入风味蛋白酶，酶量为0.3％，酶解时间为1h，搅拌转速为60转/分，酶解过程冲入流速为10L/min的氮气；
4)将酶解液在9000转/分的转速下沉降分离，制得酶解上清液和下层沉淀；
5)将步骤4制得的上清液进入300Da孔径纳滤，待纳滤清液通量降低至50％时，在原液中加入1倍纯水，继续过滤，通量再次降低至50％时收集截留液；
6)将截留液加入到步骤4制得的沉淀物中，质量百分比为3％的明胶包埋剂，搅拌转速为100转/分，时间为10min，温度为50℃，制得配置液，将配置液送入到冻干机中，温度为-35℃，真空度为30Pa，所得冻干粉成品水分不大于10％；内层用洁净塑料袋，每袋按5Kg/袋进行包装。
实施例2
本实施例提供了一种富含活性亚铁离子畜禽血寡肽的制备方法，步骤包括：
1)分离血球与血清
猪血液采用80目不锈钢网过滤后加入质量百分比为5‰的柠檬酸钠抗凝剂，搅拌溶解，采用6000转/分的离心转速将畜禽血液分离出血球和血清，采用质量浓度0.9％氯化钠等渗盐水将血球反复冲洗三次；
2)均质破壁
向血球中加入质量百分比为5‰抗坏血酸钠溶液，同时加入比例为1：1.5的纯水制得溶血液，将溶血液进行高压均质破膜，均质压力为40MPa，离心后收集上层清液，即畜禽血红蛋白；
3)蛋白酶解
血红蛋白溶液中加入复合蛋白酶，酶量为1.5％，搅拌转速为90转/分，酶解时间为5h后加入风味蛋白酶，酶量为0.6％，酶解时间为1.5h，搅拌转速为70转/分，酶解过程冲入流速为10L/min的氮气；
4)将酶解液在11000转/分的转速下沉降分离，制得酶解上清液和下层沉淀；
5)将步骤4制得的上清液进入500Da孔径纳滤，待纳滤清液通量降低至50％时，在原液中加入1倍纯水，继续过滤，通量再次降低至50％时收集截留液；
6)将截留液加入到步骤4制得的沉淀物中，质量百分比为4％的明胶包埋剂，搅拌转速为110转/分，时间为12min，温度为50℃，制得配置液，将配置液送入到冻干机中，温度为-40℃，真空度为25Pa，所得冻干粉成品水分不大于10％；内层用洁净塑料袋，每袋按5Kg/袋进行包装。
实施例3
本实施例提供了一种富含活性亚铁离子畜禽血寡肽的制备方法，步骤包括：
1)分离血球与血清
牛血液采用100目不锈钢网过滤后加入质量百分比为6‰的柠檬酸钠抗凝剂，搅拌溶解，采用8000转/分的离心转速将畜禽血液分离出血球和血清，采用质量浓度0.9％氯化钠等渗盐水将血球反复冲洗三次；
2)均质破壁
向血球中加入质量百分比为7‰抗坏血酸钠溶液，同时加入比例为1：2的纯水制得溶血液，将溶血液进行高压均质破膜，均质压力为60MPa，离心后收集上层清液，即畜禽血红蛋白；
3)蛋白酶解
血红蛋白溶液中加入复合蛋白酶，酶量为2.5％，搅拌转速为110转/分，酶解时间为7h后加入风味蛋白酶，酶量为0.8％，酶解时间为2h，搅拌转速为90转/分，酶解过程冲入流速为10L/min的氮气；
4)将酶解液在14000转/分的转速下沉降分离，制得酶解上清液和下层沉淀；
5)将步骤4制得的上清液进入1000Da孔径纳滤，待纳滤清液通量降低至55％时，在原液中加入1.5倍纯水，继续过滤，通量再次降低至55％时收集截留液；
6)将截留液加入到步骤4制得的沉淀物中，质量百分比为5％的明胶包埋剂，搅拌转速为120转/分，时间为15min，温度为55℃，制得配置液，将配置液送入到冻干机中，温度为-45℃，真空度为30Pa。
实施例4
本实施例提供了一种富含活性亚铁离子畜禽血寡肽的制备方法，步骤包括：
1)分离血球与血清
猪血液采用60目不锈钢网过滤后加入质量百分比为3‰的柠檬酸钠抗凝剂，搅拌溶解，采用4000转/分的离心转速将畜禽血液分离出血球和血清，采用质量浓度0.9％氯化钠等渗盐水将血球反复冲洗三次；
2)均质破壁
向血球中加入质量百分比为3‰抗坏血酸钠溶液，同时加入比例为1：1的纯水制得溶血液，将溶血液进行高压均质破膜，均质压力为30MPa，离心后收集上层清液，即畜禽血红蛋白；
3)蛋白酶解
血红蛋白溶液中加入复合蛋白酶，酶量为1.0％，搅拌转速为60转/分，酶解时间为4h后加入风味蛋白酶，酶量为0.3％，酶解时间为1h，搅拌转速为60转/分，酶解过程冲入流速为10L/min的氮气；
4)将酶解液在14000转/分的转速下沉降分离，制得酶解上清液和下层沉淀；
5)将步骤4制得的上清液进入300Da孔径纳滤，待纳滤清液通量降低至50％时，在原液中加入1倍纯水，继续过滤，通量再次降低至50％时收集截留液；
6)将截留液加入到步骤4制得的沉淀物中，质量百分比为3％的明胶包埋剂，搅拌转速为100转/分，时间为10min，温度为50℃，制得配置液，将配置液送入到冻干机中，温度为-30℃，真空度为20Pa。
对比例
1.改性畜禽血浆蛋白粉的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
A.用食品级柠檬酸钠配制质量百分比5～6％的抗凝液，采集新鲜的畜禽血液，按照畜禽血液和抗凝液体积比10/1(V/V)，向畜禽血液中添加抗凝液，缓慢搅拌均匀，得到抗凝畜禽血液；将所得抗凝畜禽血液用隔膜泵泵入密封冷藏罐内0℃～6℃下保藏、备用，罐藏时间≤12h；
B.将抗凝畜禽血液过20目不锈钢滤网，用分离型管式分离机进行分离，得到血球液和血浆液，其中血浆液固形物含量6～9％，将血浆液过100目滤袋，泵入截留分子量为5000～10000D卷式超滤膜浓缩系统，循环浓缩脱盐脱水，得到固形物含量达16-20％的浓缩血浆液；
C.将浓缩血浆液泵入装有嵌入式超声波发生器的反应釜，按照血浆总量的质量百分比0.05-0.2％添加活性碳，在16～20℃温度下、转子转速为180～240rmp，超声均质、吸附20～60min，得到吸附血浆液；
D.将反应釜里的吸附血浆液泵入澄清型管式分离机，分离去除活性碳；再经微孔膜孔径为50μm微滤器过滤，泵入喷雾干燥系统，进行喷雾干燥，即得到血浆蛋白粉；
E.将血浆蛋白粉在托盘上均匀摊成0.5-1.0cm厚度，置于远红外焙烤箱中，80～120℃温度下，处理10～60min，再于微波炉中在200-500W功率下处理1～6min，即可得到改性血浆蛋白粉；所述改性血浆蛋白粉，具有淡淡烘焙香味，基本无血腥味，产品蛋白含量提高到80％，灰分降低到8％以内，与普通血浆蛋白粉相比，蛋白凝胶强度最高可提高7倍以上，蛋白乳化活性和乳化稳定性分别提高3-4倍和2-3倍。
实施例效果数据
对本发明实施例1～4及对比例制得的产品主要指标进行检测，并统计结果如表1所示：
| 破膜率％ | 血红素含量mmol | 血寡肽色泽 | 血寡肽风味 | |
| 实施例1 | 99.2 | 9.5 | 淡黄色 | 无腥味、清香 |
| 实施例2 | 99.9 | 9.2 | 黄色 | 无腥味、清香 |
| 实施例3 | 99.5 | 9.7 | 黄色 | 无腥味、清香 |
| 实施例4 | 99.3 | 9.4 | 淡黄色 | 无腥味、清香 |
| 对比例 | 95.8 | 9.0 | 黄色 | 有腥味 |
表1
由表1可以得出，本发明制备的方法生产效率高，所得的畜禽血小肽粉破膜率高，血红素含量高，为后期高附加值产品开发提供优质原料。本发明工艺操作简便，设备造价低，有利于形成规模化生产。
实验验证
1.不同酶种类对血细胞酶解的影响
在酶活力：8000U，温度：50℃(胰蛋白酶：37℃)，pH：7(胰蛋白酶：4)，时间：60min，料液比例1:2条件下对血细胞进行酶解，探究不同种类的酶对血细胞酶解的影响，试验结果如图2所示。由图可知，不同蛋白酶对血细胞酶解的效率不同，相同酶活力和酶解时间条件下，酶解效率：复合蛋白酶>中性蛋白酶>风味蛋白酶>碱性蛋白酶>胰蛋白酶>木瓜蛋白酶>胰酶：复合蛋白酶＝3:1。
2.不同酶解时间对血细胞酶解的影响
在复合蛋白酶酶活力：8000U，温度：50℃，pH：7，料液比例1:2条件下对血细胞进行酶解，探究不同酶解时间对血细胞酶解的影响，试验结果如图3所示。由图可知，随酶解时间的延长酶解效率上升，当酶解150min后，蛋白回收率达97.17％，继续延长时间，蛋白回收率无显著性变化。
3.不同酶活力对血细胞酶解的影响
在温度：50℃，pH：7，时间：90min，料液比例1:2条件下对血细胞进行酶解，探究不同酶活力对血细胞酶解的影响，试验结果如图4所示。由图可知，随酶活力提高酶解效率上升，当酶活力为10000U时，蛋白回收率达81.71％。
4.不同料液比例对血细胞酶解的影响
在复合蛋白酶活力8000U，温度：50℃，pH：7，时间：90min条件下对血细胞进行酶解，探究不同料液比例对血细胞酶解的影响，试验结果如图5所示。由图可知，随溶剂体积的增大，蛋白回收率逐渐上升，料液比例1:4时蛋白回收率最高，达94.50％。
基于单因素试验结果，发现酶解效率随酶活力的增大、酶解时间的延长、料液比例的减小而增大，基于此结果发现在复合蛋白蛋白酶活力10000U，温度：50℃，pH：7，时间：150min，料液比例1:4时酶解效果最好。但在企业实际生产中，该条件生产成本过高，加酶量大，且料液中水的添加量大，增加后续的血肽浓缩和喷雾干燥成本。
5.不同酶添加量对血细胞酶解的影响
在酶解时间5h，温度：50℃，料液比例1:1，pH：7条件下对血细胞进行酶解，探究不同酶添加量对血细胞酶解的影响，试验结果如图6、7所示。研究发现随着酶添加量的增加，蛋白回收率上升而血红素含量下降；当酶添加量<1.5％时，蛋白回收率上升速率较大，而酶添加量>1.5％时血红素下降速率较大。酶添加量为1.5％时蛋白回收率约为64％，血红素含量约为7.2mmol；而酶添加量为2.5％时蛋白回收率约为70％，此时血红素含量约为5.5mmol。
分析酶解液中血肽的分子量分布，如图8～11所示，发现酶解液中的多肽分子量随着酶添加量的增加，>2KDa的多肽含量显著下降；而<1KDa的多肽含量显著上升，且<400Da的多肽含量上升幅度更显著。整体来看，酶添加量对血细胞酶解液中的分子量分布影响较大。在酶解时间为5h时，酶添加量从0.5％增加到2.5％，>10KDa的多肽含量从33.59％降低为12.04％，2K-10KDa的多肽含量从27.80％降为3.94％，400-1KDa的多肽含量总体所占比重较少，从2.36％增加到6.17％；<400Da的多肽含量最高，从36.25％增加为77.84％。
依据酶解过程中蛋白回收率、血红素含量及酶解液中多肽的各分子量肽段分布，考虑酶解效率与成本的问题，最终确定血细胞酶解条件为：分离后的血细胞与蒸馏水1:1比例高压均质后采用中性蛋白酶添加量为1.5％(以血细胞计)，pH＝7，50℃条件下酶解5h，在此条件下，蛋白回收率达65.17％，血红素含量达7.83mmol。此时酶解液中>10KDa的多肽含量约为21％，2K-10KDa的多肽含量约为12％，400-1KDa的多肽含量约为5％，<400Da的多肽含量最高，约为61％。此外，为减缓血细胞酶解过程中血红素的氧化，在血细胞中添加Vc-Na作为抗氧化剂，探究不同浓度Vc-Na对血红素的保护作用。
6.不同Vc-Na添加对血细胞酶解的影响
在复合蛋白酶1.5％，酶解时间5h，温度：50℃，料液比例1:1，pH：7条件下对血细胞进行酶解，探究不同Vc-Na添加对血细胞酶解过程中抗氧化的影响，试验结果如图12、13所示。研究发现随着Vc-Na添加量的增加，蛋白回收率降低，0.3％Vc-Na添加量时酶解程度最高，约达65％，此时血红素含量约为7.46mmol；血红素含量先升高后降低，0.7％Vc-Na添加量时酶解液中血红素含量最高，约达9.65mmol，此时蛋白回收率约达60％。推测其原因，随着Vc-Na含量增加，抗氧化性增强，因而酶解液中的血红素含量升高，但当Vc-Na含量达到0.7％后抗氧化能力达到饱和，继续增加Vc-Na抗氧化保护作用下降；此外，Na+含量的增加对酶解效果有削弱作用，因而酶解程度降低。
分析酶解液中血肽的分子量分布，如图14～17所示，发现酶解液中的多肽分子量随着Vc-Na添加量的增加，>2KDa的多肽含量逐渐上升，其中Vc-Na添加量<0.7％时，>10KDa的多肽含量<25％，而当Vc-Na>0.7％时，>10KDa的多肽含量增加较大，约为33％；而<1KDa的多肽含量逐渐下降，其中<400Da的多肽含量下降幅度更显著。整体上来看，0.3％Vc-Na添加血细胞经酶解之后，>10KDa的多肽含量最小，约为24％，得到的酶解液中小分子多肽的含量更高。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。
Claims (10)
1.富含活性亚铁离子畜禽血寡肽的制备方法，其特征在于，步骤包括：
1)分离血球与血清
将畜禽血液加入抗凝剂，搅拌溶解，采用离心技术将畜禽血液分离出血球和血清，将血球进行等渗液清洗；
2)均质破壁
向血球中加入抗氧化剂及纯水，制得溶血液，将溶血液进行高压均质，离心后收集上层清液，即畜禽血红蛋白；
3)蛋白酶解
血红蛋白溶液中加入复合蛋白酶，酶量为1.0～2.5％，搅拌转速为60～110转/分，酶解时间为4～7h后加入风味蛋白酶，酶量为0.3～0.8％，酶解时间为1～2h，搅拌转速为60～90转/分，酶解过程冲入氮气；
4)将酶解液在9000～14000转/分的转速下沉降分离，制得酶解上清液和下层沉淀；
5)将步骤4制得的上清液进行纳滤脱灰、浓缩处理，收集截留液；
6)将截留液加入到步骤4制得的沉淀物中，同时加入包埋剂后冻干制粉。
2.根据权利要求1所述的富含活性亚铁离子畜禽血寡肽的制备方法，其特征在于，畜禽血液采用60～100目不锈钢网过滤后再加入抗凝剂进行血球与血清分离。
3.根据权利要求1所述的富含活性亚铁离子畜禽血寡肽的制备方法，其特征在于，按血球质量计，所述抗凝剂为质量百分比3～6‰的柠檬酸钠。
4.根据权利要求1所述的富含活性亚铁离子畜禽血寡肽的制备方法，其特征在于，分离血清和血球的离心分离的转速为4000～8000转/分。
5.根据权利要求1所述的富含活性亚铁离子畜禽血寡肽的制备方法，其特征在于，采用质量浓度为0.9％氯化钠等渗盐水反复冲洗三次。
6.根据权利要求1所述的富含活性亚铁离子畜禽血寡肽的制备方法，其特征在于，向血球中加入质量百分比为3～7‰抗坏血酸钠溶液，同时加入比例为1：1～2的纯水进行高压均质破膜，均质压力为30～60MPa。
7.根据权利要求1所述的富含活性亚铁离子畜禽血寡肽的制备方法，其特征在于，酶解时通入氮气，流速为10L/min。
8.根据权利要求1所述的富含活性亚铁离子畜禽血寡肽的制备方法，其特征在于，将步骤4制得的上清液进入300～1000Da孔径纳滤，待纳滤清液通量降低至50～55％时，在原液中加入1～1.5倍纯水，继续过滤，通量再次降低至50～55％时收集截留液，达到浓缩目的。
9.根据权利要求1所述的富含活性亚铁离子畜禽血寡肽的制备方法，其特征在于，将截留液加入到步骤4制得的沉淀物中，同时加入质量百分比为3～5％的明胶包埋剂，搅拌转速为100～120转/分，时间为10～15min，温度为50～55℃，制得配置液。
10.根据权利要求9所述的富含活性亚铁离子畜禽血寡肽的制备方法，其特征在于，将配置液送入到冻干机中，温度为-30～-45℃，真空度为20～30Pa。
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