CN103030645A - 一种大规模制备高纯度血红素的方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种大规模制备高纯度血红素的方法及应用。通过固液分离、吸附、离心、多次酶解等步骤,首次提供了一种大规模制备高纯度血红素的方法,从而提高血红素纯度。具体地,在一定pH值(pH值=1-4)的条件下,分离的血红素可以高效地与CMC-NA(羧甲基纤维素钠)或羧甲基淀粉发生吸附反应;在通过多次特定的酶解,洗涤,制得的血红素具有铁含量高,适口性好,吸收利用率高、生产过程环保无污染,无毒副作用等优点,非常适合用于补铁用途的饲料和食品。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域,具体地,本发明涉及一种大规模制备高纯度血红素的方法及应用。
背景技术
日前世界范围内屠宰业规模日渐扩大,屠宰畜禽生产肉食品的同时产生大量的血液等副产物,这些巨大的副产资源如不能合理及时的利用或处理,不仅引起环境污染,还将导致资源的严重浪费。
在我国,畜禽副产物血资源年产超过330万吨。动物血液含有人体及其他动物所需的几乎全部的营养物质及元素,包括蛋白质、氨基酸、维生素等营养物质及钠、钾、铁、钙等微量元素。目前及过去相当长的时间内,采集的大部分畜禽动物鲜血用于加工全血粉、血浆粉、血球粉等饲料原料、血豆腐等低附加值产品阶段。
血液新功效产品的开发对于提高其附加值、增加收入、减少污染等均有重要的意义。近年来在对食品、医药方面的应用研究表明,来自血液中的血红素铁在治疗缺铁性贫血方面有着显著疗效,在肠道中的吸收率远高于无机铁。目前生产血红素铁的方法主要有:丙酮法、冰醋酸法、表面活性剂法等,其主要的缺点是生产过程中使用有毒化学试剂,产生较大的环境污染,规模化生产难度大。其中,用丙酮法制备血红素工艺不仅对生产人员健康有危害,而且产品中存在丙酮残留。因此,本领域迫切需要开发一种能够大规模、无污染、高效生产血红素的方法。
发明内容
本发明的目的就是提供一种大规模制备高纯度血红素的方法及应用。
在本发明的第一方面,提供了一种大规模制备血红素的方法,包括步骤:
(1)获得血球,将所述血球与水混合和/或搅拌,获得破膜的含血红蛋白的混合液;
(2)过滤步骤(1)所述的含血红蛋白的混合液,去除细胞膜,获得血红蛋白混合液;
(3)将步骤(2)的血红蛋白混合液与酸混合和/或搅拌,获得血红素与珠蛋白分离的混合液;
(4)将步骤(3)的血红素与珠蛋白分离的混合液与羧甲基纤维素钠(CMC-NA)或羧甲基淀粉溶液混合和/或搅拌,获得含有血红素-羧甲基纤维素复合物的混合液;
(5)离心步骤(4)获得的含有血红素-羧甲基纤维素复合物的混合液,收集沉淀,即为血红素粗品。
在另一优选例中,在步骤(5)之后,还包括步骤:对步骤(5)获得的血红素粗品进行酶解处理,获得高纯度的血红素产品。
在另一优选例中,所述的酶解处理的次数为1~3次。
在另一优选例中,步骤(1)中血球与水的比例为:血球:水=1:1~1:8。
在另一优选例中,血球与水的比例为:血球:水=1:3~1:6。
在另一优选例中,血球与水的比例为:血球:水=1:4。
在另一优选例中,步骤(1)中所述的血球来源于人或非人动物。
在另一优选例中,所述的非人动物选自下组:猪、牛、羊、鸡、鸭等。
在另一优选例中,所述的血球为新鲜健康的血球。
在另一优选例中,步骤(1)中,所述血球与水混合和/或搅拌时间为1-10小时,较佳地为3-6小时。
在另一优选例中,所述的水为无菌水或纯水。
在另一优选例中,所述的水为反渗透膜过滤后的水。
在另一优选例中,步骤(2)中,通过离心去除细胞膜。
在另一优选例中,所述的离心为管式离心;更佳地转速为:8000-15000转/分钟。
在另一优选例中,步骤(3)中,血红蛋白混合液与酸混合后的pH值为1-4。
在另一优选例中,血红蛋白混合液与酸混合和/或搅拌后的pH值为2-3。
在另一优选例中,所述的酸选自下组:柠檬酸、盐酸、磷酸;优选盐酸。
在另一优选例中,血红蛋白混合液与酸混合和/或搅拌的时间为1-5h。
在另一优选例中,步骤(4)中,所述的羧甲基纤维素钠(CMC-NA)溶液浓度为:0.05%-5%(优选1%)。
在另一优选例中,所述的酶解处理包括步骤:
(i)将步骤(5)获得的血红素粗品与水混合,制为均一的血红素溶液;
(ii)向步骤(i)所述的溶液中加入蛋白酶,获得含蛋白肽和血红素的溶液;
(iii)将步骤(ii)的去除了蛋白肽的含血红素的溶液再次酶解,将去除再次酶解的蛋白肽的溶液制备为血红素纯品。
在另一优选例中,所述的血红素纯品中血红素的纯度≥70%,较佳地≥80%。
在另一优选例中,所述的酶选自下组:碱性蛋白酶、中性蛋白酶、动物蛋白酶、木瓜蛋白酶、血蛋白酶、或其组合。
在另一优选例中,用碱性蛋白酶和血蛋白酶先后进行酶解处理。
在另一优选例中,碱性蛋白酶处理时,pH值为10。
在另一优选例中,血蛋白酶处理时,pH值为8。
在本发明的第二方面,提供了一种高纯度血红素产品,血红素纯度≥70%,较佳地≥80%。
在另一优选例中,所述的血红素产品不含丙酮等有毒化学试剂。
在另一优选例中,使用的酸最终转变成可被人体吸收的盐类。
在另一优选例中,所述的不含丙酮是指:所述产品中丙酮含量≤0.01%,较佳地≤0.005%,更佳地为0。
在本发明的第三方面,提供了本发明第二方面所述的血红素产品的用途,所述产品用于制备食品组合物、药品组合物、或饲料组合物。
应理解,在本发明范围内中,本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合,从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅,在此不再一一累述。
附图说明
下列附图用于说明本发明的具体实施方案,而不用于限定由权利要求书所界定的本发明范围。
图1显示了本发明一个具体实施例的流程图。
具体实施方式
本发明人经过广泛而深入的研究,通过固液分离、吸附、离心、多次酶解等步骤,首次提供了一种大规模制备高纯度血红素的方法,从而提高血红素纯度。具体地,在一定pH值(pH值优选1-4)的条件下,分离的血红素可以高效地与CMC-NA(羧甲基纤维素钠)发生吸附反应;在通过多次特定的酶解,洗涤,制得的血红素具有铁含量高,适口性好,吸收利用率高、无毒副作用、生产过程环保无污染等优点,非常适合用于补铁用途的饲料和食品。在此基础上完成了本发明。
制备方法
本发明方法利用动物加工副产品动物血球为原料,通过吸附、离心、多次酶解及喷雾干燥等技术,能够获得高纯度的血红素产品。
在本发明的一个具体实施例中,包括步骤(图1):
(a)将获得的血球与一定体积的水混合,搅拌混合液,使血细胞膜涨破,得到破膜的血红蛋白液体,并过滤去除细胞膜,获得血红蛋白液体I;
(b)将血红蛋白液体I与酸混合,达到一定pH后,与CMC-NA(羧甲基纤维素钠)溶液混合,充分搅拌,静置,获得血红蛋白液体I与CMC的混合液II;
(c)离心混合液II,收集沉淀,此沉淀即为血红素粗品;
(d)将血红素粗品溶于水中,充分搅拌,获得均一的血红素悬浮液Ⅲ;向溶液Ⅲ中添加蛋白酶,进行酶解反应,获得酶解液Ⅳ;
(e)将酶解液Ⅳ离心处理,收集沉淀;
(f);将步骤(e)中沉淀溶于水中,充分搅拌,获得均一的血红素悬浮液Ⅴ;向溶液Ⅴ中添加另一种蛋白酶,调节pH和温度,进行酶解反应,获得酶解液Ⅵ;
(g)将混合液Ⅵ离心处理,收集沉淀,清洗沉淀,得到血红素沉淀;
(h)将步骤(g)得到的沉淀溶于水中,搅拌均匀,进行喷雾干燥处理,获得血红素成品,所述的血红素成品纯度大于70%。
作为本发明的一种优选实施方式,进一步阐述本发明所述的方法:
(1)将血球与5倍的水混合,搅拌10小时得到破膜的血红蛋白液体,获得血红蛋白液体I;所述的血球来自畜或禽;所述的血球为新鲜健康血球;所述水为纯水;
(2)将破膜的血球液进行离心,去除细胞膜;所述离心采用管式离心机,转速12000转/分钟,下端排渣口排出物为细胞膜;
(3)将血红蛋白液与酸混合,使物料pH在3,搅拌2小时,得到血红素与珠蛋白的混合液;所述酸为盐酸,添加量根据pH而定。
(4)将酸化的血红蛋白液体与等体积的、浓度为1%CMC-NA混合,搅拌2h,,静置4小时,得到血红蛋白与CMC-NA的混合液II;
(5)将混合液II离心,收集沉淀,此沉淀为血红素粗品。
(6)将血红素粗品溶于2倍血球体积的水中,充分搅拌,获得均一的血红素悬浮液Ⅲ;向溶液Ⅲ中添加酶活为40万IU/g的血蛋白酶,具体酶解条件如下:酶添加量为血红蛋白溶液干重的1%;酶解温度58℃;酶解pH8;酶解时间为16小时最终获得酶解液Ⅳ;
(7)将步骤(6)所得的混合液Ⅳ离心处理,收集沉淀。
(8)将沉淀溶于血球体积1倍水中,充分搅拌,获得均一的血红素悬浮液Ⅴ;向溶液Ⅴ中添加酶活为20万IU/g的碱性蛋白酶,具体酶解条件如下:酶添加量为血红蛋白溶液干重的1%,酶解温度为55℃;酶解pH10;酶解时间为16小时,最终获得酶解液Ⅵ;
(9)将所得的混合液Ⅵ离心处理,收集沉淀,并将沉淀用水清洗3次,离心,得到血红素沉淀;
(10)将血红素沉淀溶于血球体积0.5倍水中,搅拌均匀,进行喷雾干燥,进风温度控制在220~230℃,出风温度75~90℃,喷雾干燥后,进行检测,包装,从而获得纯度大于70%的血红素成品。
原料
本发明方法使用的血球可以来源于任何体内具有血液的生物,包括人或非人哺乳动物(如猪、牛、羊、兔、狗)或禽类等动物。本领域人员均了解,非人哺乳动物或禽类等动物的血液成分是非常相似的,因此任何具有血液的生物都可以作为原料来源。较佳地,宜采用新鲜健康的血球作为生产高纯度血红素的原料。
本领域技术人员可以使用各种常规的熟知技术从血液中分离出血球,本发明对此不作特别的限制。例如:将抗凝全血进行分离,可得到血浆和血球,分离获得其中的血球,作为生产血红素的原料。
固液分离
在本方发明中,所述的固液分离是指:当血球的细胞膜破后碎,将血球中的成分(其中包括血红蛋白)与沉淀分离。
将血球在水中破细胞膜的方法是:将血球与1-8倍体积(较佳地3-6倍体积,更佳地4倍体积)的水混合,搅拌处理1-10小时,得到破膜的血红蛋白液体。加水搅拌处理可使细胞膜溶胀破裂,释放出血红蛋白。按照重量比计算,血球和水的重量比为1:1-8(w/w);按血球与水混合物的总重量计,血球浓度为3.5-18%(w/v)。
本发明的方法采用的水较佳地为纯水;更佳地为经反渗透膜过滤的水。
可以通过离心的方式将血球的细胞膜去除。离心后,血球的细胞膜形成沉淀,可方便地与液体通过固液分离的方法进行分离。使用的离心机的种类可以视生产的规模而定;较佳地,采用管式离心机,转速8000-15000转/分钟,细胞膜从下端排渣口排出;更佳地,排渣时间为20-30分钟/次。
酸处理
将获得的血红蛋白液与酸混合,搅拌1-5h,得到血红素与珠蛋白混合液。酸的主要作用是调节液体的pH值,在pH1-4条件下,有利于血红蛋白中的血红素与珠蛋白分离。
所述的酸是指具有安全实用、质优价廉特征的酸,选自(但不限于):柠檬酸、盐酸、磷酸等。作为一种优选的实施方式,所述的酸是盐酸,所述盐酸的添加量具体需视混合液的PH值而定。
作为本发明的优选方式,将去膜的血红蛋白液与无机酸搅拌1-5小时,得到血红素与珠蛋白混合液。加水搅拌处理可使细胞膜溶胀破裂,释放出血红蛋白。
吸附
获得酸性血红素与珠蛋白混合液后,混合液与CMC-NA(羧甲基纤维素钠)溶液混合、搅拌、静置。CMC溶液可以吸附血红素,而不吸附珠蛋白成分,低pH条件下混合液中的珠蛋白以游离方式存在,而血红素被吸附在CMC上沉淀下来。较佳地,所述的CMC溶液浓度为0.05%-5%之间,添加的体积为所述血红蛋白液体I的0.5~3倍。更加地,所述的CMC为食品级添加剂。
作为本发明的优选方式,将酸性的血红蛋白液与CMC-NA混合,静置4h以上,得到血红蛋白与CMC-NA的混合液I。
作为本发明的另一优选方式,因羧甲基淀粉对血红素的吸附功能与羧甲基纤维素相似,故此处可用羧甲基淀粉代替羧甲基纤维素。
酶解
获得混合液Ⅲ后,溶液仍含有较多的蛋白,需要进一步将蛋白组分降低,从而提高血红素纯度。所述的酶组合为优选:血蛋白酶与碱性蛋白酶,两种酶均为生物酶,具有专一性,能有效酶解动物源性的蛋白而不会酶解血红素,从而降解粘附在血红素表面的蛋白。
作为本发明的优选方式,采用40万IU/g血蛋白酶在温度58℃、pH8的条件下搅拌酶解16h,得到酶解液Ⅳ。第二次酶解采用的20万IU/g的碱性蛋白酶在温度55℃,pH10的条件下酶解16h。较佳的血蛋白酶及碱性蛋白酶的添加量均为血红蛋白液I干物质的1%
在另一优选例中,对混合液Ⅲ先采用碱性蛋白酶酶解再用血蛋白酶酶解,调换后酶的添加量有所变动,较佳的是碱性蛋白酶添加量为血红蛋白液I干物质的2%,血蛋白酶添加量为血红蛋白液I干物质的0.5%。
干燥
最后将反复清洗的沉淀再次溶解于水中,搅拌均匀后进行干燥,所述干燥可采用本领域技术人员常用的干燥方法,优选喷雾干燥,可采用进风温度220℃~230℃,出风温度80℃~85℃。
高纯度血红素
本发明提供了一种高纯度血红素产品,其中,血红素纯度≥70%,较佳地≥80%;所述的血红素产品不含丙酮等有毒化学试剂,使用的酸最终转变成可被人体吸收的盐类。
在另一优选例中,所述的不含丙酮是指:所述产品中丙酮含量≤1%,较佳地≤0.5%,更佳地为0%。
本发明提供的高纯度血红素具有适口性好,吸收利用率高,无毒副等特点。
用途
本发明提供的高纯度血红素,可应用于饲料、药品、和食品等领域。例如将干燥的血红素与谷物、玉米、大豆等饲料原料混合加工,从而获得颗粒状饲料组合物,从而应用于仔猪、母猪及蛋禽的喂养。或添加在食品辅料中,制成补铁剂等。
本发明的主要优点在于:
1.本发明采用安全无毒的生物方法进行血红素的提取制备,替代丙酮等化学方法,生产的血红素产品具有含铁量高,吸收利用率高,使用的酸也最终转变成可被人体吸收的盐类,无毒害残留等优点;
2.本方法采用了高压喷雾干燥技术,保证了血红素产品颗粒均匀,各项指标优良等品质;
3.本发明所述方法制备的高纯度血红素各项指标优良,可以获得血红素含量达到70%以上的产品;
4.本发明制备的高纯度血红素在仔猪、母猪及蛋禽日粮添加高纯度血红素的饲养试验中,在其日粮中添加无机补铁剂的对比试验中,高纯度血红素的饲喂效果最好,提高了动物的营养代谢和免疫水平。
下面结合具体实施,进一步阐述发明。应理解,这些实施例仅用于说明发明而不用于限制本发明的范围。下列实施中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件,例如按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明,否则百分比和份数按重量计算。
实施例1
利用猪血生产高纯度血红素铁
(1)将3吨来自猪的血球与12吨纯水混合,搅拌8小时,得到破膜的血红蛋白液体(即血红蛋白液体I);所述的血球为新鲜健康血球;所述水为纯水;
(2)将破膜的15吨血红蛋白液I采用管式离心,以便去除细胞膜;离心转速为12000转/分钟,下端排渣口排出物为细胞膜;
(3)将20公斤盐酸(浓度38%(w/v))与63公斤纯水混合(盐酸终浓度约为9%(w/v)),缓慢加入到去膜的15吨血红蛋白液中,搅拌3小时,血红素与珠蛋白分离,并得到血红素与珠蛋白混合液;pH约为3;
(4)将3吨浓度为1%CMC-NA缓慢加入到15吨混合液中,搅拌3h,静置10小时,得到血红蛋白与CMC-NA的混合液II;
(5)将混合液II离心,收集沉淀,此沉淀为血红素粗品;
(6)将血红素粗品溶于4.5吨纯水中,充分搅拌,获得均一的血红素悬浮液Ⅲ;向溶液Ⅲ中添加9公斤的酶活为40万IU/g的血蛋白酶,在温度58℃,pH8的条件下,酶解16小时最终获得酶解液Ⅳ;
(7)将步骤(6)所得的混合液Ⅳ离心处理,收集沉淀;
(8)将沉淀溶于4.5吨纯水中,充分搅拌,获得均一的血红素悬浮液Ⅴ;向溶液Ⅴ中添加9公斤的酶活为20万IU/g的碱性蛋白酶,在温度55℃,pH10的条件下,酶解16小时最终获得酶解液Ⅳ;
(9)将所得的混合液Ⅵ离心处理,收集沉淀,并将沉淀用水清洗4次,离心,得到血红素沉淀;
(10)将血红素沉淀溶于1吨纯水中,搅拌均匀,进行喷雾干燥,得到血红素成品。
结果表明:采用以上方法,3吨血球得到约41公斤的高纯度血红素,指标检测结果如表1:
表1
实施例2
利用禽血生产血红素铁
(1)将3吨来自禽的血球与12吨纯水混合,搅拌8小时得到破膜的血红蛋白液体,获得血红蛋白液体I;所述的血球为新鲜健康血球;所述水为纯水;
(2)将破膜的15吨血红蛋白液采用管式离心,去除细胞膜;离心转速为12000转/分钟,下端排渣口排出物为细胞膜;
(3)将20公斤盐酸(浓度38%(w/v))与63公斤纯水混合(盐酸终浓度约为9%(w/v)),缓慢加入去膜的15吨血红蛋白液重,搅拌3小时,得到血红素与珠蛋白混合液;pH约为3;
(4)将3吨浓度为1%CMC-NA缓慢加入到15吨混合液中,搅拌3h,,静置10小时,得到血红蛋白与CMC-NA的混合液II;
(5)将混合液II离心,收集沉淀,此沉淀为血红素粗品。
(6)将血红素粗品溶于4.5吨纯水中,充分搅拌,获得均一的血红素悬浮液Ⅲ;向溶液Ⅲ中添加18公斤酶活为20万IU/g的碱性蛋白酶,在温度55℃,pH10的条件下,酶解16小时最终获得酶解液Ⅳ;
(7)将步骤(6)所得的混合液Ⅳ离心处理,收集沉淀。
(8)将沉淀溶于4.5吨纯水中,充分搅拌,获得均一的血红素悬浮液Ⅴ;向溶液Ⅴ中添加4.5公斤酶活为40万IU/g的蛋白酶,在温度58℃,pH8的条件下,酶解16小时最终获得酶解液Ⅳ;
(9)将所得的混合液Ⅵ离心处理,收集沉淀,并将沉淀用水清洗4次,离心,得到血红素沉淀;
(10)将血红素沉淀溶于1吨纯水中,搅拌均匀,进行喷雾干燥,得到血红素成品。
结果表明:采用本实施例的方法,3吨血球得到约42公斤的高纯度血红素,具体指标如表2:
表2
实施例3
粘度调节实验
(1)将3吨来自禽的血球与6吨纯水混合,搅拌8小时得到破膜的血红蛋白液体,获得血红蛋白液体I;所述的血球为新鲜健康血球;所述水为纯水;
(2)将破膜的9吨血红蛋白液采用管式离心,去除细胞膜;离心转速为12000转/分钟,下端排渣口排出物为细胞膜;
(3)将20公斤盐酸(浓度38%(w/v))与63公斤纯水混合(盐酸终浓度约为9%(w/v)),缓慢加入去膜的9吨血红蛋白液重,搅拌3小时,得到血红素与珠蛋白混合液;pH约为3;
(4)将3吨浓度为5%CMC-NA缓慢加入到9吨混合液中,搅拌3h,,静置10小时,得到血红蛋白与CMC-NA的混合液II;
(5)将混合液II离心,收集沉淀,此沉淀为血红素粗品;
(6)将血红素粗品溶于4.5吨纯水中,充分搅拌,获得均一的血红素悬浮液Ⅲ;向溶液Ⅲ中添加18公斤酶活为20万IU/g的碱性蛋白酶,在温度55℃,pH10的条件下,酶解16小时最终获得酶解液Ⅳ;
(7)将步骤(6)所得的混合液Ⅳ离心处理,收集沉淀;
(8)将沉淀溶于4.5吨纯水中,充分搅拌,获得均一的血红素悬浮液Ⅴ;向溶液Ⅴ中添加4.5公斤酶活为40万IU/g的蛋白酶,在温度58℃,pH8的条件下,酶解16小时最终获得酶解液Ⅳ;
(9)将所得的混合液Ⅵ离心处理,收集沉淀,并将沉淀用水清洗4次,离心,得到血红素沉淀;
(10)将血红素沉淀溶于1吨纯水中,搅拌均匀,进行喷雾干燥,得到血红素成品。
结果表明:采用本实施例的方法,3吨血球得到约44公斤血红素,具体指标见表3:
表3
结果可见,物料(如CMC-NA)粘度过高,会导致血红素得率和含量同时偏低。
实施例4
酶解与吸附顺序的对照
(1)将3吨来自猪的血球与3吨纯水混合,搅拌8小时,得到破膜的血红蛋白液体(即血红蛋白液体I);所述的血球为新鲜健康血球;所述水为纯水;
(2)将破膜的6吨血红蛋白液I采用管式离心,以便去除细胞膜;离心转速为12000转/分钟,下端排渣口排出物为细胞膜;
(3)向除去细胞膜的溶液I中添加9公斤的酶活为40万IU/g的血蛋白酶,在温度58℃,pH8的条件下,酶解16小时最终获得酶解液II;
(4)将步骤(3)所得的酶解液II离心处理,收集沉淀I;
(5)将沉淀I溶于3吨纯水中,充分搅拌,获得均一的血红素悬浮液;向此溶液中添加9公斤的酶活为20万IU/g的碱性蛋白酶,在温度55℃,pH10的条件下,酶解16小时最终获得酶解液Ⅲ;
(6)将所得的酶解液Ⅲ离心处理,收集沉淀,并将沉淀用水清洗4次,离心,得到血红素沉淀II;
(7)将血红素沉淀II溶于1吨纯水中,搅拌均匀,用浓度约为9%(w/v)的盐酸将其调节到pH3,搅拌3小时,获得溶液Ⅳ;
(8)将3吨浓度为1%CMC-NA溶液缓慢加入到溶液Ⅳ中,搅拌3h,静置10小时,得到混合液Ⅴ;
(9)将混合液Ⅴ离心,收集沉淀,并将沉淀用水清洗4次;
(10)将血红素沉淀溶于1吨纯水中,搅拌均匀,进行喷雾干燥,得到血红素成品。
结果表明:采用以上方法,3吨血球得到约100公斤的血红素,指标检测结果如表4:
表4
结果可见,采用先酶解后吸附的工艺,血红素得率相差不大,但纯度较低。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考,就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解,在阅读了本发明的上述讲授内容之后,本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改,这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
Claims (10)
1.一种大规模制备血红素的方法,其特征在于,包括步骤:
(1)获得血球,将所述血球与水混合和/或搅拌,获得破膜的含血红蛋白的混合液;
(2)过滤步骤(1)所述的含血红蛋白的混合液,去除细胞膜,获得血红蛋白混合液;
(3)将步骤(2)的血红蛋白混合液与酸混合和/或搅拌,获得血红素与珠蛋白分离的混合液;
(4)将步骤(3)的血红素与珠蛋白分离的混合液与羧甲基纤维素钠(CMC-NA)或羧甲基淀粉溶液混合和/或搅拌,获得含有血红素-羧甲基纤维素复合物的混合液;
(5)离心步骤(4)获得的含有血红素-羧甲基纤维素复合物的混合液,收集沉淀,即为血红素粗品。
2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,在步骤(5)之后,还包括步骤:对步骤(5)获得的血红素粗品进行酶解处理,获得高纯度的血红素产品。
3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)中血球与水的比例为:血球:水=1:1~1:8。
4.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(2)中,通过离心去除细胞膜。
5.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(3)中,血红蛋白混合液与酸混合后的pH值为1-4。
6.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(4)中,所述的羧甲基纤维素钠(CMC-NA)溶液浓度为:0.05%-5%(优选1%)。
7.如权利要求2所述的方法,其特征在于,所述的酶解处理包括步骤:
(i)将步骤(5)获得的血红素粗品与水混合,制为均一的血红素溶液;
(ii)向步骤(i)所述的溶液中加入蛋白酶,获得含蛋白肽和血红素的溶液;
(iii)将步骤(ii)的去除了蛋白肽的含血红素的溶液再次酶解,将去除再次酶解的蛋白肽的溶液制备为血红素纯品。
8.如权利要求7所述的方法,其特征在于,所述的酶选自下组:碱性蛋白酶、中性蛋白酶、动物蛋白酶、木瓜蛋白酶、血蛋白酶、或其组合。
9.一种高纯度血红素产品,其特征在于,血红素纯度≥70%,较佳地≥80%。
10.权利要求9所述的血红素产品的用途,其特征在于,所述产品用于制备食品组合物、药品组合物、或饲料组合物。
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