CN110092773A - 一种氧杂蒽类衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及荧光探针技术领域，具体涉及一种氧杂蒽类衍生物及其制备方法和应用。本发明提供的氧杂蒽类衍生物可以作为荧光探针，实现苯硫酚的快速、灵敏、特异性检测。在苯硫酚存在的环境下，本发明提供的氧杂蒽类衍生物中2,4‑二硝基苯醚基会水解为羟基，生成具有荧光发射能力的水解产物，该水解产物可以发射近红外荧光(最大发射峰约为740nm)，进而可以实现苯硫酚的快速、灵敏、特异性检测。此外，本发明提供的氧杂蒽类衍生物用于苯硫酚荧光成像检测时，水解产物发光处于近红外光区，在进行生物成像时生物组织背景干扰小，基本不受其他组分的干扰，原位检测对生物组织的损伤较小，可以应用于细胞中苯硫酚的检测，具有广阔的应用前景。

Description

一种氧杂蒽类衍生物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及荧光探针技术领域，具体涉及一种氧杂蒽类衍生物及其制备方法和应用。
背景技术
苯硫酚，又称为苯硫醇，在有机合成中起着重要作用，是制备农药、药品和琥珀染料时广泛使用的化学中间体，但苯硫酚具有很强的毒性，因此被定义为一类污染物。评估苯硫酚毒性的研究表明，鱼的半致死量(LC50)为0.01～0.4mmol/L。长时间接触苯硫酚会导致许多严重的疾病，如对中枢神经和其他神经系统造成严重损害，包括呼吸短促、后肢麻痹、昏迷甚至死亡。因此，开发有效的检测环境和活体样品中苯硫酚的方法就显得十分必要。
荧光探针具有高灵敏度和选择性、高时空分辨率和无创检测等优点，是检测各种分析物如阳离子、阴离子和生物分子的有效工具。近年来，研究者们开发了一些用于检测苯硫酚的荧光探针。但目前报道的苯硫酚荧光探针还存在或多或少的不足，比如大多数的荧光探针对苯硫酚响应速度较慢(大于10min)、发射波长相对较短(位于可见区域)、斯托克斯位移较小等。因此，开发性能更优越的检测苯硫酚荧光探针具有重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种氧杂蒽类衍生物及其制备方法和应用，本发明提供的氧杂蒽类衍生物可以作为荧光探针，实现苯硫酚的快速、灵敏、特异性检测。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种氧杂蒽类衍生物，具有式I所示结构：
本发明提供了上述技术方案所述氧杂蒽类衍生物的制备方法，包括以下步骤：
将对羟基苯甲醛和1-氟-2,4-二硝基苯进行取代反应，得到取代产物；
将所述取代产物与具有式II所示结构的化合物进行加成消除反应，得到具有式I所示结构的氧杂蒽类衍生物；
优选地，所述对羟基苯甲醛和1-氟-2,4-二硝基苯的摩尔比为1：(1.2～2)。
优选地，所述取代反应在保护气氛以及催化剂、缚酸剂和有机溶剂存在条件下进行。
优选地，所述取代反应的温度为40～50℃，时间为5～8h。
优选地，所述取代产物与具有式II所示结构的化合物的摩尔比为1：(1～1.2)。
优选地，所述加成消除反应在保护气氛以及缚酸剂和有机溶剂存在条件下进行。
优选地，所述加成消除反应的温度为75～90℃，时间为2～5h。
本发明提供了上述技术方案所述氧杂蒽类衍生物作为荧光探针在检测苯硫酚中的应用。
优选地，在检测所述苯硫酚时，检测条件包括：激发波长为670nm，收集690～850nm范围内的荧光强度。
本发明提供了一种具有式I所示结构的氧杂蒽类衍生物，本发明提供的氧杂蒽类衍生物可以作为荧光探针，实现苯硫酚的快速、灵敏、特异性检测。具体的，如下反应式所示：
在苯硫酚存在的环境下，本发明提供的氧杂蒽类衍生物中2,4-二硝基苯醚基会水解为羟基，生成具有荧光发射能力的水解产物，该水解产物可以发射近红外荧光(最大发射峰约为740nm)，进而可以实现苯硫酚的快速、灵敏、特异性检测。此外，本发明提供的氧杂蒽类衍生物用于苯硫酚荧光成像检测时，水解产物发光处于近红外光区，在进行生物成像时生物组织背景干扰小，基本不受其他组分的干扰，原位检测对生物组织的损伤较小，可以应用于细胞中苯硫酚的检测，具有广阔的应用前景。
本发明提供了所述氧杂蒽类衍生物的制备方法，反应步骤少、操作简单，条件易控，适于规模化生产。
附图说明
图1为实施例1制备的氧杂蒽类衍生物的核磁共振(1H NMR)谱图；
图2为实施例1制备的氧杂蒽类衍生物的高分辨质谱图；
图3为以实施例1制备的氧杂蒽类衍生物为荧光探针在不同浓度苯硫酚条件下的荧光光谱图；
图4为以实施例1制备的氧杂蒽类衍生物为荧光探针时待测液的荧光强度与苯硫酚浓度的线性关系图；
图5为以实施例1制备的氧杂蒽类衍生物为荧光探针时待测液的荧光强度与苯硫酚的响应时间曲线图；
图6以实施例1制备的氧杂蒽类衍生物为荧光探针与不同活性硫物种作用后的荧光光谱；
图7以实施例1制备的氧杂蒽类衍生物为荧光探针在活细胞中的荧光成像图。
具体实施方式
本发明提供了一种氧杂蒽类衍生物，具有式I所示结构：
本发明提供了上述技术方案所述氧杂蒽类衍生物的制备方法，包括以下步骤：
将对羟基苯甲醛和1-氟-2,4-二硝基苯进行取代反应，得到取代产物；
将所述取代产物与具有式II所示结构的化合物进行加成消除反应，得到具有式I所示结构的氧杂蒽类衍生物；
本发明将对羟基苯甲醛和1-氟-2,4-二硝基苯进行取代反应，得到取代产物。在本发明中，所述对羟基苯甲醛和1-氟-2,4-二硝基苯的摩尔比优选为1：(1.2～2)，更优选为1：2。
在本发明中，所述取代反应优选在保护气氛以及催化剂、缚酸剂和有机溶剂存在条件下进行。在本发明中，所述催化剂优选包括碘化钾或碘化钠，更优选为碘化钾；所述催化剂与对羟基苯甲醛的摩尔比优选为(2～4)：1，更优选为2：1。在本发明中，所述取代反应用缚酸剂优选包括碳酸钾、三乙胺或碳酸钠，更优选为碳酸钾；所述缚酸剂与对羟基苯甲醛的摩尔比优选为(1～2)：1，更优选为1.2：1。在本发明中，所述有机溶剂优选包括N,N-二甲基甲酰胺或1,4-二氧六环，更优选为N,N-二甲基甲酰胺；所述有机溶剂与对羟基苯甲醛的用量比优选为(3～6)mL：2.5mmol，更优选为3mL：2.5mmol。
本发明优选将对羟基苯甲醛、1-氟-2,4-二硝基苯、催化剂、缚酸剂和有机溶剂混合，得到取代反应料液。在本发明中，所述对羟基苯甲醛、1-氟-2,4-二硝基苯、催化剂、缚酸剂和有机溶剂混合优选是将对羟基苯甲醛、缚酸剂和部分有机溶剂在保护气氛下进行混合，得到第一混合物；将1-氟-2,4-二硝基苯、催化剂和剩余有机溶剂混合，得到第二混合物；将所述第一混合物与第二混合物混合，得到取代反应料液。在本发明中，所述部分有机溶剂优选为有机溶剂总量的50％。
得到取代反应料液后，本发明将所述取代反应料液进行取代反应，得到取代产物。在本发明中，所述取代反应的温度优选为40～50℃，时间优选为5～8h。在本发明中，所述取代反应优选在保护气氛、搅拌条件下进行；本发明对于所述搅拌没有特殊的限定，能够保证取代反应顺利进行即可。
完成所述取代反应后，本发明优选将所得体系进行抽滤去除固体(包括催化剂或固体缚酸剂)，将所得滤液转移到分液漏斗中，采用去离子水-二氯甲烷混合物(去离子水与二氯甲烷的体积比为1：3)进行萃取，共重复萃取三次，采用干燥剂(具体如无水硫酸钠)对所得有机相进行干燥2h，之后抽滤除去干燥剂，将干燥后的有机相进行减压旋蒸除去溶剂，以二氯甲烷-石油醚混合物(二氯甲烷与石油醚的体积比为3：1)为洗脱剂对所得粗产物进行柱层析分离，将所得洗脱液进行减压旋蒸除去洗脱剂，得到的白色固体即为取代产物；所述取代产物具有式III所示结构：
得到取代产物后，本发明将所述取代产物与具有式II所示结构的化合物进行加成消除反应，得到具有式I所示结构的氧杂蒽类衍生物；
在本发明中，所述取代产物与具有式II所示结构的化合物的摩尔比优选为1：(1～1.2)，更优选为1：1。本发明对于所述具有式II所示结构的化合物的来源没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的市售商品或熟知的方法制备得到即可。在本发明中，所述具有式II所示结构的化合物的化学名称为9-(2-carboxyphenyl)-6-(diethylamino)-1,2,3,4-tetrahydroxanthylium(参见文献Chemistry ofHeterocyclic Compounds,2004,40,1,116-117)。
在本发明中，所述加成消除反应优选在保护气氛以及缚酸剂和有机溶剂存在条件下进行。在本发明中，所述加成消除反应用缚酸剂优选包括醋酸钾或三乙胺，更优选为醋酸钾；所述缚酸剂与取代产物的摩尔比优选为(1～3)：1，更优选为1：1。在本发明中，所述加成消除反应用有机溶剂优选包括乙酸酐或乙酸，更优选为乙酸酐；所述有机溶剂与取代产物的用量比优选为(6～12)mL：1mmol，更优选为6mL：1mmol。
本发明优选将取代产物、具有式II所示结构的化合物、缚酸剂和有机溶剂混合，得到加成消除反应料液。本发明对所述取代产物、具有式II所示结构的化合物、缚酸剂和有机溶剂混合的方式以及加料顺序没有特殊的限定，能够将各组分混合均匀即可。
得到加成消除反应料液后，本发明将所述加成消除反应料液进行加成消除反应，得到具有式I所示结构的氧杂蒽类衍生物。在本发明中，所述加成消除反应的温度优选为75～90℃，时间优选为2～5h。在本发明中，所述加成消除反应优选在保护气氛、搅拌条件下进行；本发明对于所述搅拌没有特殊的限定，能够保证加成消除反应顺利进行即可。
完成所述加成消除反应后，本发明优选向所得体系中加入适量水，然后搅拌10min，之后缓慢多次加入适量碳酸氢钠至溶液的pH值为6～7(即，呈弱酸性或中性)，此时体系中有大量固体析出，减压抽滤，以二氯甲烷-乙酸乙酯混合物(二氯甲烷与乙酸乙酯体积比为3：5)为洗脱剂对所得固体粗产物进行柱层析分离，将所得洗脱液进行减压旋蒸除去洗脱剂，得到的紫红色固体即为具有式I所示结构的氧杂蒽类衍生物。
本发明对制备氧杂蒽类衍生物过程中提供保护气氛的保护气体没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的保护气体即可，具体如氮气。
在本发明中，制备氧杂蒽类衍生物的反应流程具体如下：
本发明提供了上述技术方案所述氧杂蒽类衍生物作为荧光探针在检测苯硫酚中的应用。在本发明中，在检测所述苯硫酚时，检测条件优选包括：激发波长(λEx)为670nm，收集690～850nm范围内的荧光强度(最大发射峰约为740nm)。
本发明提供的氧杂蒽类衍生物能够作为荧光探针对苯硫酚进行检测，在本发明的实施例中，优选是以二甲基亚砜-磷酸盐缓冲液(简写为DMSO/PBS，二甲基亚砜与磷酸盐缓冲液体积比为1:1，pH＝7.4)为溶剂，将荧光探针和苯硫酚溶于DMSO/PBS中，对所得待测液进行相关检测，结果显示，当苯硫酚浓度在2～20.0μmol/L范围内，待测液的荧光强度与苯硫酚浓度呈良好的线性关系(R＝0.995)，可采用公式Y＝16767.7X-9986.9表示，其中Y为740nm处的荧光强度，X为苯硫酚(PhSH)的浓度；同时，本发明提供的荧光探针对苯硫酚具有较快的响应速率，在较短时间(约10min)内即可达到稳定；而且本发明提供的荧光探针对苯硫酚检测具有高特异性，基本不受其他物质(如二巯基苏糖醇、谷胱甘肽、高半胱氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、亮氨酸、ONOO-、S2O8 2-、NO3 -、NO2 -、S2-、ClO-和SCN-)的干扰。
此外，MCF-7细胞在RPMI 1640培养基中用苯硫酚预孵育，再用荧光探针进一步孵育后，荧光成像时观察到MCF-7细胞上有明显的荧光信号；然而，当MCF-7细胞只在RPMI1640培养基中用荧光探针孵育时，只收集到微弱的荧光信号。这说明本发明提供的荧光探针能够用于活细胞中苯硫酚的检测。
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
将对羟基苯甲醛305mg(2.5mmol)、碳酸钾414mg(3mmol)和N,N-二甲基甲酰胺3mL加入到50mL三颈烧瓶中，在氮气保护下搅拌混合30min；将1-氟-2,4-二硝基苯930mg(5mmol)、碘化钾830mg(5mmol)和N,N-二甲基甲酰胺3mL混合，将所得混合物加入到三颈烧瓶中，在氮气保护中加热至50℃，在搅拌条件下进行取代反应5h；取代反应结束后，将所得体系进行抽滤去除固体，将所得滤液转移到分液漏斗中，采用去离子水-二氯甲烷混合物(去离子水与二氯甲烷的体积比为1：3)进行萃取，共重复萃取三次，采用干燥剂(具体为无水硫酸钠)对所得有机相进行干燥2h，之后抽滤除去干燥剂，将干燥后的有机相进行减压旋蒸除去溶剂，以二氯甲烷-石油醚混合物(二氯甲烷与石油醚的体积比为3：1)为洗脱剂对所得粗产物进行柱层析分离，将所得洗脱液进行减压旋蒸除去洗脱剂，得到白色固体产物。
对所述白色固体产物进行表征，表征数据具体如下：
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ10.00(s,1H),8.86(d,J＝2.7Hz,1H),8.42(dd,J＝9.2,2.8Hz,1H),8.02–7.95(m,2H),7.28(d,J＝2.1Hz,1H),7.26(d,J＝2.0Hz,1H),7.23(d,J＝9.1Hz,1H)。
由上述表征数据可知，所述白色固体产物为具有式III所示结构的取代产物：
将上述取代产物(1mmol)、具有式II所示结构的化合物(1mmol)、醋酸钾(1mmol)和乙酸酐6mL加入到50mL三颈烧瓶中，在氮气保护中加热至90℃，在搅拌条件下进行加成消除反应5h；加成消除反应结束后，向所得体系中加入适量水然后搅拌10min，使体系中乙酸酐和水反应生成乙酸，之后缓慢多次加入适量碳酸氢钠至溶液的pH值为7，此时体系中有大量固体析出，减压抽滤，以二氯甲烷-乙酸乙酯混合物(二氯甲烷与乙酸乙酯体积比为3：5)为洗脱剂对所得固体粗产物进行柱层析分离，将所得洗脱液进行减压旋蒸除去洗脱剂，得到紫红色固体产物。
对所述紫红色固体产物进行表征，表征数据具体如下：
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.88(d,J＝2.8Hz,1H),8.47(dd,J＝9.2,2.8Hz,1H),8.11(dd,J＝7.1,2.0Hz,1H),8.05(s,1H),7.74(d,J＝8.7Hz,2H),7.68–7.59(m,2H),7.30(dd,J＝9.0,4.0Hz,3H),7.22–7.17(m,1H),7.11(d,J＝3.7Hz,3H),3.67(d,J＝7.1Hz,4H),2.95(d,J＝7.6Hz,2H),2.53–2.30(m,2H),1.81(d,J＝8.5Hz,2H),1.29(d,J＝7.1Hz,6H).HR-MS(ESI)Chemical Formula:C37H32N3O8 +,calcd,646.2184；found:646.2186。
所述紫红色固体产物的1HNMR谱和高分辨质谱见图1和图2。
由图1、图2以及上述表征数据可知，所述紫红色固体产物为具有式I所示结构的氧杂蒽类衍生物：
实施例2
以二甲基亚砜-磷酸盐缓冲液(简写为DMSO/PBS，二甲基亚砜与磷酸盐缓冲液体积比为1:1，pH＝7.4)为溶剂，测试实施例1制备的氧杂蒽类衍生物作为荧光探针在不同苯硫酚浓度下的荧光响应性能，具体如下：
将荧光探针溶于DMSO/PBS中，得到浓度为10μmol/L的荧光探针溶液，向所述荧光探针溶液中分别滴加一定量的苯硫酚标准溶液(浓度为2mmol/L)，使所得混合液中苯硫酚的浓度分别为0μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、6μmol/L、8μmol/L、10μmol/L、12μmol/L、14μmol/L、16μmol/L、18μmol/L、20μmol/L、22μmol/L、24μmol/L、26μmol/L、28μmol/L和30μmol/L，在37℃磁力搅拌10min后作为待测液分别进行荧光检测(λEx＝670nm)，通过分析740nm处的荧光强度与苯硫酚浓度的关系，评估该荧光探针对苯硫酚的响应性能。
图3为荧光探针在不同浓度苯硫酚条件下的荧光光谱图，由图3可知，随着苯硫酚浓度的增大，待测液的荧光强度逐渐增强。
图4为待测液的荧光强度与苯硫酚浓度的线性关系图，由图4可知，当苯硫酚浓度在2～20.0μmol/L范围内，待测液的荧光强度与苯硫酚浓度呈良好的线性关系(R＝0.995)，可采用公式Y＝16767.7X-9986.9表示，其中，Y为740nm处的荧光强度，X为苯硫酚(PhSH)的浓度。
实施例3
以二甲基亚砜-磷酸盐缓冲液(简写为DMSO/PBS，二甲基亚砜与磷酸盐缓冲液体积比为1:1，pH＝7.4)为溶剂，测试实施例1制备的氧杂蒽类衍生物作为荧光探针在不同摩尔当量苯硫酚条件下的荧光强度随时间的变化情况，具体如下：
将荧光探针溶于DMSO/PBS中，得到浓度为10μmol/L的荧光探针溶液，向所述荧光探针溶液中分别滴加一定量的苯硫酚标准溶液(浓度为2mmol/L)，使所得混合液中苯硫酚的摩尔当量分别为0、1.5eq和2.5eq(eq是苯硫酚摩尔摩尔浓度与荧光探针摩尔浓度的比值，即CPhSH/C荧光探针)，在37℃磁力搅拌10min后作为待测液分别进行荧光检测(λEx＝670nm)，得到740nm处的荧光强度与苯硫酚的响应时间关系，如图5所示。由图5可知，当用1.5eq和2.5eq的PhSH处理荧光探针溶液后，所得待测液的荧光强度迅速增强，且在较短时间(约10min)内即可达到稳定，说明本发明提供的荧光探针对苯硫酚具有较快的响应速率，表明该荧光探针可以作为苯硫酚的实时检测荧光探针。
实施例4
以二甲基亚砜-磷酸盐缓冲液(简写为DMSO/PBS，二甲基亚砜与磷酸盐缓冲液体积比为1:1，pH＝7.4)为溶剂，以不同活性硫物种作为干扰分析物，测试实施例1制备的氧杂蒽类衍生物作为荧光探针对苯硫酚检测的特异性，具体如下：
将荧光探针溶于DMSO/PBS中，得到浓度为10μmol/L的荧光探针溶液，向所述荧光探针溶液中分别添加苯硫酚以及干扰分析物二巯基苏糖醇(DTT)、谷胱甘肽(GSH)、高半胱氨酸(Hcy)、半胱氨酸(Cys)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)、亮氨酸(Leu)、ONOO-、S2O8 2-、NO3 -、NO2 -、S2-、ClO-和SCN-，其中，苯硫酚以及各干扰分析物的浓度均为50μmol/L，在37℃磁力搅拌10min后作为待测液分别进行荧光检测(λEx＝670nm)，通过分析740nm处的荧光强度评估各干扰分析物对荧光探针检测苯硫酚的干扰性，结果如图6所示。由图6可知，当荧光探针溶液中加入不同的分析物时，只有苯硫酚显示出显著的荧光，而加入干扰分析物时待测液的荧光强度基本没有变化，这表明本发明提供的荧光探针对苯硫酚检测具有高特异性，基本不受其他物质的干扰。
实施例5
分析实施例1制备的荧光探针在活细胞中的成像应用，具体如下：
将MCF-7细胞接种在含有RPMI 1640培养基(其中含有10％(v/v)胎牛血清)的共聚焦成像皿中，在37℃、5％二氧化碳条件下培养过夜，将所得MCF-7细胞按照下述对照组和实验组进行处理：
作为对照组，在RPMI 1640培养基中添加二甲基亚砜(0.5％，v/v)和实施例1制备的荧光探针(10μmol/L)，将MCF-7细胞在所得RPMI 1640培养基中，于37℃、5％二氧化碳条件下培养30min。
作为实验组，在RPMI 1640培养基中添加添加二甲基亚砜(5％，v/v)和苯硫酚(50μmol/L)，将MCF-7细胞在所得RPMI 1640培养基中，于37℃、5％二氧化碳条件下培养2h，将所得MCF-7细胞样品进行洗涤以去除多余的苯硫酚；在RPMI 1640培养基中添加二甲基亚砜(5％，v/v)和实施例1制备的荧光探针(10μmol/L)，将洗涤后MCF-7细胞样品在所得RPMI1640培养基中，于37℃、5％二氧化碳条件下培养30min。
用倒置共聚焦荧光显微镜(Olympus FV1000)和40倍物镜对实验组和对照组培养后的MCF-7细胞进行荧光成像，结果见图7(上图对应实验组，即用苯硫酚预孵育MCF-7细胞2h，然后用荧光探针孵育30min；下图对应对照组，即用荧光探针孵育MCF-7细胞30min)。由图7可知，MCF-7细胞在RPMI 1640培养基中用苯硫酚预孵育，再用荧光探针进一步孵育后，荧光成像时观察到MCF-7细胞上有明显的荧光信号(图7的叠加场)。然而，当MCF-7细胞只在RPMI 1640培养基中用荧光探针孵育时，只收集到微弱的荧光信号(图7的荧光场)。因此，通过细胞荧光成像的实验结果，表明本发明提供的荧光探针能够用于活细胞中苯硫酚的检测。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种氧杂蒽类衍生物，其特征在于，具有式I所示结构：
2.权利要求1所述氧杂蒽类衍生物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将对羟基苯甲醛和1-氟-2,4-二硝基苯进行取代反应，得到取代产物；
将所述取代产物与具有式II所示结构的化合物进行加成消除反应，得到具有式I所示结构的氧杂蒽类衍生物；
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述对羟基苯甲醛和1-氟-2,4-二硝基苯的摩尔比为1：(1.2～2)。
4.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，所述取代反应在保护气氛以及催化剂、缚酸剂和有机溶剂存在条件下进行。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述取代反应的温度为40～50℃，时间为5～8h。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述取代产物与具有式II所示结构的化合物的摩尔比为1：(1～1.2)。
7.根据权利要求2或6所述的制备方法，其特征在于，所述加成消除反应在保护气氛以及缚酸剂和有机溶剂存在条件下进行。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述加成消除反应的温度为75～90℃，时间为2～5h。
9.权利要求1所述氧杂蒽类衍生物作为荧光探针在检测苯硫酚中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，在检测所述苯硫酚时，检测条件包括：激发波长为670nm，收集690～850nm范围内的荧光强度。
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