CN110078842B - 皱盖假芝多糖f212的制备方法和用于预防和/或治疗乳腺癌的应用 - Google Patents
皱盖假芝多糖f212的制备方法和用于预防和/或治疗乳腺癌的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110078842B CN110078842B CN201910437189.3A CN201910437189A CN110078842B CN 110078842 B CN110078842 B CN 110078842B CN 201910437189 A CN201910437189 A CN 201910437189A CN 110078842 B CN110078842 B CN 110078842B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- polysaccharide
- percent
- breast cancer
- rudis
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 title claims abstract description 82
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title claims abstract description 82
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 title claims abstract description 82
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 42
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 42
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 241000123370 Antrodia Species 0.000 title claims description 11
- 241000698291 Rugosa Species 0.000 title description 10
- -1 pplication Species 0.000 title description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 claims abstract description 10
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 claims abstract description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 7
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 claims abstract description 7
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 claims abstract description 6
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 claims abstract description 6
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 claims abstract description 6
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 6
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 claims abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 26
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 14
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 10
- 241000222336 Ganoderma Species 0.000 claims description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 7
- 229920002271 DEAE-Sepharose Polymers 0.000 claims description 5
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 5
- 241001480533 Amauroderma Species 0.000 claims description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 4
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 33
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 abstract description 7
- 241000123326 Fomes Species 0.000 abstract description 6
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 5
- 241001248610 Ophiocordyceps sinensis Species 0.000 abstract description 4
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 abstract description 3
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 241001149422 Ganoderma applanatum Species 0.000 abstract 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 8
- 241000123330 Fomes fomentarius Species 0.000 description 7
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 241001115039 Ruditapes Species 0.000 description 4
- 241000512743 Sarcophyton <anthozoan> Species 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 230000036541 health Effects 0.000 description 4
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 4
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 4
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 3
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 2
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 2
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 2
- 240000000599 Lentinula edodes Species 0.000 description 2
- 241000222355 Trametes versicolor Species 0.000 description 2
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 201000011531 vascular cancer Diseases 0.000 description 2
- 206010055031 vascular neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 240000008397 Ganoderma lucidum Species 0.000 description 1
- 235000001637 Ganoderma lucidum Nutrition 0.000 description 1
- 208000006083 Hypokinesia Diseases 0.000 description 1
- 238000004566 IR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 241000414067 Inonotus obliquus Species 0.000 description 1
- 235000001715 Lentinula edodes Nutrition 0.000 description 1
- 241000149440 Lentinus tuber-regium Species 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001138370 Pleurotus pulmonarius Species 0.000 description 1
- 241000899394 Pseudocercospora Species 0.000 description 1
- 244000100338 Pseuduvaria rugosa Species 0.000 description 1
- 244000184734 Pyrus japonica Species 0.000 description 1
- 241000229286 Rudbeckia Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 208000013738 Sleep Initiation and Maintenance disease Diseases 0.000 description 1
- 102100023935 Transmembrane glycoprotein NMB Human genes 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 238000003304 gavage Methods 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 1
- 241000411851 herbal medicine Species 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 230000003832 immune regulation Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 206010022437 insomnia Diseases 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 201000002364 leukopenia Diseases 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- OQUKIQWCVTZJAF-UHFFFAOYSA-N phenol;sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O.OC1=CC=CC=C1 OQUKIQWCVTZJAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000012465 retentate Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 206010043554 thrombocytopenia Diseases 0.000 description 1
- 108091007466 transmembrane glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 230000005747 tumor angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000004565 tumor cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000005760 tumorsuppression Effects 0.000 description 1
- 238000003809 water extraction Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L31/00—Edible extracts or preparations of fungi; Preparation or treatment thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/125—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives containing carbohydrate syrups; containing sugars; containing sugar alcohols; containing starch hydrolysates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Mycology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明涉及多糖，具体涉及一种皱盖假芝多糖F212的制备方法和应用，按照质量百分比的单糖组成为：核糖4.3％，鼠李糖0.7％，阿拉伯糖5.3％，木糖4.5％，甘露糖30.5％，葡萄糖37.3％，半乳糖17.4％。多糖F212的制备方法从皱盖假芝子实体中分离纯化所得。多糖F212用于预防和/或治疗乳腺癌。本发明提供了一种皱盖假芝多糖F212的制备方法和应用，本发明申请的研究表明，皱盖假芝多糖F212具有抗肿瘤特性并且安全无毒，特别是乳腺癌肿瘤，具有广阔的应用前景和良好的经济价值。
Description
技术领域
本发明涉及多糖，具体涉及一种皱盖假芝多糖F212的制备方法和用于预防和/或治疗乳腺癌的应用。
背景技术
美国癌症学会官方期刊发表了《2018年全球癌症统计数据》报告，这篇文章评估了185个国家中36种癌症发病率和死亡率。根据数据，肺癌发病率高居不下，而在女性中，乳腺癌占据榜首。全球每新增100个癌症患者，中国人占21个。相当于中国每天有超过1万人确诊癌症，平均每分钟有7个人得癌症。触目惊心的大数据告知了公众严酷的癌症现状。癌症死亡率高，容易复发和转移。目前的抗肿瘤药物普遍存在毒副作用大(如引起白细胞、血小板减少，免疫功能减低，体虚乏力、失眠多梦、食欲不振等)、价格昂贵的特点。
因此，从天然中草药中提取有效成分，开发疗效确切、成本低廉、毒副作用小的抗癌新药具有积极的意义。
食药用菌是一类可以食用的大型真菌，在民间用来预防和治疗多种疾病。自1969年日本学者千原首次报道了从香菇子实体中分离出一种抗肿瘤多糖以来，食用菌多糖的生物活性和功能已受到国内外研究人员的广泛关注。现代研究表明，多种食药用菌如灵芝、香菇、桦褐孔菌、虎奶菇、凤尾菇、皱盖假芝等具有显著抑制肿瘤的功效，因而成为探索和发掘新型药物及功能新产品的重要领域。目前，这类研究主要着眼于对食药用菌进行粗略的提取用于免疫调节、肿瘤抑制等方面的研究，并且主要作为保健品使用。这类研究一方面提取物的成分模糊且混杂，另一方面，效果也难以达到药用程度。
因此，对食药用菌抗肿瘤活性成分及作用机理进行深入研究，开发天然抗肿瘤活性药物具有广阔的市场前景。
发明内容
针对以上不足，本发明提供一种皱盖假芝多糖F212的制备方法和在抗乳腺癌肿瘤方面的新应用。
本发明通过以下方案达到上述目的：
第一方面，提供一种皱盖假芝多糖F212，按照质量百分比的单糖组成为：核糖4.3％，鼠李糖0.7％，阿拉伯糖5.3％，木糖4.5％，甘露糖30.5％，葡萄糖37.3％，半乳糖17.4％。
第二方面，提供一种上述皱盖假芝多糖F212的制备方法，从皱盖假芝子实体中分离纯化所得。
一种上述皱盖假芝多糖F212的制备方法，包括：
(1)将皱盖假芝子实体经干燥、粉碎、水浸提，优选用热水进行浸提，得到皱盖假芝水提液，向水提液中加入酒精，优选为质量百分浓度为95％-100％的酒精，进一步优选为质量百分浓度为95％的酒精，调节至酒精质量百分浓度为80％，常温静置，优选静置过夜，后离心，将沉淀分离收集沉淀物，得到皱盖假芝粗多糖F0；
(2)对F0采用DEAE sepharose fast flow进行纯化，采用氯化钠溶液作为洗脱液进行梯度洗脱，流速优选为20-40ml/min，氯化钠溶液的浓度优选为0.1、0.5、1、2Mol/l，收集得到4个组分；
(3)采用乳腺癌细胞对4个组分进行活性筛选，得到活性最好的组分F1；
(4)采用Sephaacyl S-200chromatography对组分F1进行纯化，用水优选纯水进行洗脱，流速2-5ml/min，根据多糖含量收集得到3个组分；
(5)采用乳腺癌细胞对3个组分进行活性筛选，得到活性最好的组分F212。
第三方面，提供一种上述制备方法制备得到的皱盖假芝多糖F212。
第四方面，提供一种皱盖假芝多糖F212的应用，用于预防和/或治疗乳腺癌。
第五方面，提供一种皱盖假芝多糖F212的应用，用于制备预防和/或治疗乳腺癌的药物或保健品。
第六方面，提供一种预防和/或治疗乳腺癌的药物或保健品，包括有效量的皱盖假芝多糖F212和药学上可接受的载体。
本发明提供了一种皱盖假芝多糖F212的制备方法和应用，本发明申请的研究表明，皱盖假芝多糖F212具有抗肿瘤特性并且安全无毒，特别是乳腺癌肿瘤，具有广阔的应用前景和良好的经济价值。
附图说明
图1为皱盖假芝多糖F212的凝胶色谱图。
图2为皱盖假芝多糖F212的红外光谱图。
图3为皱盖假芝多糖F212显著抑制肿瘤细胞生长图。
图4为皱盖假芝活性成分F212显著抑制肿瘤小鼠的肿瘤生长图。
图5为肿瘤组织切片染色图。
图6为活性成分对Ki67和CD34的抑制效果图。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明进行进一步说明。
多糖是食药用菌的重要活性成分。在之前的发明申请中，发明人对皱盖假芝粗多糖进行分离纯化，得到具有显著抗肿瘤活性的多糖F212，并分析了其组成和结构特征。
在本发明申请中，发明人进一步分析了其结构特征，并且根据其结构特征，开发了其在抗肿瘤方面的新应用。
第一方面，提供一种皱盖假芝多糖F212，按照质量百分比的单糖组成为：核糖4.3％，鼠李糖0.7％，阿拉伯糖5.3％，木糖4.5％，甘露糖30.5％，葡萄糖37.3％，半乳糖17.4％。
进一步的，上述皱盖假芝多糖F212的分子量为4.5852e3g/mol(数均分子量)。
进一步的，上述皱盖假芝多糖F212的分子量为5.8659e3g/mol(重均分子量)。
进一步的，上述皱盖假芝多糖F212为含有糖醛酸的杂多糖。
本发明在之前发明申请提供的皱盖假芝多糖F212的制备方法基础上，对制备方法继续进行改进，得到制备步骤更加简洁、成本更低的而提取率和纯度并未降低的制备方法。
第二方面，提供一种上述皱盖假芝多糖F212的制备方法，从皱盖假芝子实体中分离纯化所得。
一种上述皱盖假芝多糖F212的制备方法，包括：
(1)将皱盖假芝子实体经干燥、粉碎、水浸提，优选用热水进行浸提，得到皱盖假芝水提液，向水提液中加入酒精，优选为质量百分浓度为95％-100％的酒精，进一步优选为质量百分浓度为95％的酒精，调节至酒精质量百分浓度为80％，常温静置，优选静置过夜，后离心，将沉淀分离收集沉淀物，得到皱盖假芝粗多糖F0；
(2)对F0采用DEAE sepharose fast flow进行纯化，采用氯化钠溶液作为洗脱液进行梯度洗脱，流速优选为20-40ml/min，氯化钠溶液的浓度优选为0.1、0.5、1、2Mol/l，收集得到4个组分；
(3)采用乳腺癌细胞对4个组分进行活性筛选，得到活性最好的组分F1；
(4)采用Sephaacyl S-200chromatography对组分F1进行纯化，用水优选纯水进行洗脱，流速2-5ml/min，根据多糖含量收集得到3个组分；
(5)采用乳腺癌细胞对3个组分进行活性筛选，得到活性最好的组分F212。
在上述制备方法中，对皱盖假芝粗多糖F0不需要经过第二次沉淀后进行葡聚糖凝胶柱纯化的步骤，就可以直接采用DEAE sepharose fast flow纯化，而在后续对F1进行纯化后的洗脱步骤根据多糖含量收集3个组分即可，简化了步骤和试剂消耗，降低了成本而未影响提取率和纯度。
优选的，上述制备方法中的采用乳腺癌细胞进行活性筛选的过程包括：(1)制备乳腺癌细胞液；(2)向乳腺癌细胞液中加入样品组分；(3)培养后测定乳腺癌细胞的增殖情况。
优选的，上述乳腺癌细胞可以为乳腺癌细胞4T1细胞或MDA-MB-231细胞。
经过大量实验发现，上述制备得到的皱盖假芝多糖F212对肿瘤具有显著的抑制效果，特别是对乳腺癌细胞(4T1或MDA-MB-231)都有显著的抑制作用。
第三方面，提供一种上述制备方法制备得到的皱盖假芝多糖F212。
第四方面，提供一种皱盖假芝多糖F212的应用，用于预防和/或治疗乳腺癌，优选的，所述乳腺癌为乳腺癌细胞4T1细胞或MDA-MB-231引发的乳腺癌。
第五方面，提供一种皱盖假芝多糖F212的应用，用于制备预防和/或治疗乳腺癌的药物或保健品，优选的，所述乳腺癌为乳腺癌细胞4T1细胞或MDA-MB-231引发的乳腺癌。
第六方面，提供一种预防和/或治疗乳腺癌的药物或保健品，包括有效量的皱盖假芝多糖F212和药学上可接受的载体，优选的，所述乳腺癌为乳腺癌细胞4T1细胞或MDA-MB-231引发的乳腺癌。
体内药理学实验表明，肿瘤小鼠连续灌胃给予皱盖假芝多糖F212 30天，可显著降低肿瘤体积。抑制肿瘤的机制主要是通过调节免疫系统功能和抑制肿瘤相关靶蛋白表达实现。
本发明的皱盖假芝多糖F212安全无毒，检测大鼠体质量、脏器系数、血常规及血生化各项指标，各组间比较无显著性差异，表明安全无毒。
实施例1：皱盖假芝多糖F212的制备
1、皱盖假芝子实体1kg经干燥、粉碎，采用热水浸提，得到皱盖假芝水提浓缩液；往浓缩液中加入95％-100％的酒精，调节至80％，常温静置过夜，接下来离心沉淀分离，收集沉淀物，得到皱盖假芝粗多糖F0，得率为1％-4％；
2、对F0进行DEAE sepharose fast flow纯化，进行梯度洗脱，流速5ml/min洗脱液依次用0.1、0.5、1,、2Mol/l的氯化钠进行洗脱，进行梯度收集，分别得到4个组分；
3、活性筛选实验：用乳腺癌细胞(4T1和MDA-MB-231)对此4个组分进行活性筛选。
4、筛选出活性最好的组分F1，用Sephaacyl S-200chromatography进行纯化，用纯水进行洗脱，流速2ml/min，每分钟收集一管，然后测每管多糖含量，用硫酸-苯酚法测多糖，做出多糖含量-时间曲线，根据多糖含量收集得到3个组分；
5、用乳腺癌细胞(4T1和MDA-MB-231)对此3个组分进行活性筛选，筛选出活性好的组分F212。
实施例2：皱盖假芝多糖F212的组成分析
经检测皱盖假芝多糖F212分子量为MN(数均分子量)：4.5852e3g/mol，MW(重均分子量)：5.8659e3g/mol。
经检测，皱盖假芝多糖F212单糖组成为：核糖4.307％，鼠李糖0.717％，阿拉伯糖5.265％，木糖4.527％，甘露糖30.527％，葡萄糖37.284％，半乳糖17.374％。
对皱盖假芝多糖F212进行凝胶色谱分析和红外光谱分析，色谱图如图1所示，光谱图如图2所示。红外光谱吸收峰的归属诠释如表1所示。
表1皱盖假芝多糖F212红外光谱吸收峰的归属诠释
对红外光谱图的吸收峰进行诠释，各峰的归属见表1。结合红外光谱图的图2分析，由C＝O伸缩振动引起的1597.2cm-1的吸收峰与-CO伸缩振动引起的1396.7cm-1吸收峰，说明多糖中可能含有-COOH(Zhao et al,2007)，也就是说含有糖醛酸，这与多糖F212含有2.9％的糖醛酸的结果吻合，因此，单峰多糖F212推测为主要由β糖苷键相连的吡喃环组成的，含有糖醛酸的杂多糖。
实施例3皱盖假芝多糖F212的部分酸水解分析
皱盖假芝多糖F212经酸水解透析后，透析袋袋外的低分子截留液为F212-L，袋内的高分子截留液为F212-H。结果如表2所示。
表2部分酸水解产物的单糖组分与组成
从表2应该看出，F212由7种单糖组成，其中核糖Rib、鼠李糖Rha、半乳糖Gal只存在F212-L中，这表明它们主要分布在支链或主链末端，因此在弱酸条件下，容易与主链分离；反之，高分子截留液F212-H的检出成分表明甘露糖Man和葡萄糖Glc主要分布在主链上。
实施例4皱盖假芝多糖F212有效抑制乳腺癌细胞生长
将不同浓度的活性成分皱盖假芝多糖F212水溶液(0、100、200、300、400μg/mL)加入肿瘤细胞(4T1和MDA-MB-231)中，48小时后进行观察，结果如图3所示，结果显示，皱盖假芝多糖F212能显著抑制肿瘤细胞生长，促进肿瘤细胞凋亡，并且随着浓度的提高，效果越来越显著，在低剂量下即可达到显著的凋亡效果。
实施例5皱盖假芝多糖F212对肿瘤小鼠的抑制作用
将肿瘤干细胞注射小鼠体内形成肿瘤，用皱盖假芝多糖F212进行腹腔注射，每两天注射一次，时间为30天，其中每10天测量一次肿瘤大小，结果如图4所示(2.4mg组代表每只小鼠每次注射2.4mg F212，4.8mg组代表每只小鼠每次注射4.8mg F212)。实验结束后取出肿瘤组织切片进行HE染色并观察。结果如图5和图6所示。
图4的实验结果显示，皱盖假芝多糖F212能显著抑制乳腺癌小鼠肿瘤的生长，并且随着浓度提高，抑制效果更加显著。
图5和图6的结果为对肿瘤组织进行切片染色观察，在图5中，S代表基质组织；T代表肿瘤组织；而Tumor-C代表阴性对照组，Tumor-L指低剂量组(2.4mg/只小鼠)，Tumor-H指高剂量组(4.8mg/只小鼠)。图5中的两个Tumor-H图是从不同视野范围观察。从图5中可以看出，经过多糖F212处理后，肿瘤细胞大量死亡，且能抑制肿瘤血管的生成。
图6中的C代表阴性对照组，L代表低剂量组，H代表高剂量组，Ki67标记的是处于增殖周期中的细胞。该标记阳性率越高，肿瘤生长越快，组织分化越差，对化疗也越敏感。CD34分子是高度糖基化的i型跨膜糖蛋白，选择性地表达于人类及其他哺乳动物造血干或者祖细胞表面，并随细胞的成熟逐渐减弱至消失，用在血管肿瘤诊断时提示血管肿瘤起源，具有判定肿瘤的意义。从图6中可以看出，多糖F212能显著抑制肿瘤蛋白Ki67和CD34的生成，并且具有浓度依赖性。这表明，多糖F212可能有助于乳腺癌肿瘤的化疗治疗敏感性和诊断等。
以上所述，仅为本发明的较佳的具体实施例，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围内。
Claims (1)
1.皱盖假芝多糖F212的应用，其特征在于，用于制备治疗乳腺癌细胞4T1细胞或MDA-MB-231引发的乳腺癌的药物；所述皱盖假芝多糖F212按照质量百分比的单糖组成为：核糖4.3%，鼠李糖0.7%，阿拉伯糖5.3%，木糖4.5%，甘露糖30.5%，葡萄糖37.3%，半乳糖17.4%，皱盖假芝多糖F212的制备方法包括：
（1）将皱盖假芝子实体经干燥、粉碎、水浸提，得到皱盖假芝水提液，向水提液中加入酒精，调节至酒精质量百分浓度为80%，常温静置过夜，后离心，将沉淀分离收集沉淀物，得到皱盖假芝粗多糖F0；
（2）对F0采用DEAE sepharose fast flow进行纯化，采用氯化钠溶液作为洗脱液进行梯度洗脱，流速为5mL/min，氯化钠溶液的浓度为0.1、0.5、1、2mol/L，收集得到4个组分；
（3）采用乳腺癌细胞4T1细胞或MDA-MB-231对4个组分进行活性筛选，得到活性最好的组分F1；
（4）采用Sephacyl S-200 chromatography对组分F1进行纯化，用水进行洗脱，流速为2mL/min，根据多糖含量收集得到3个组分；
（5）采用乳腺癌细胞4T1细胞或MDA-MB-231对3个组分进行活性筛选，得到活性最好的组分F212。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910437189.3A CN110078842B (zh) | 2019-05-24 | 2019-05-24 | 皱盖假芝多糖f212的制备方法和用于预防和/或治疗乳腺癌的应用 |
| PCT/CN2019/090763 WO2020237724A1 (zh) | 2019-05-24 | 2019-06-11 | 皱盖假芝多糖f212的制备方法和用于预防和/或治疗乳腺癌的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910437189.3A CN110078842B (zh) | 2019-05-24 | 2019-05-24 | 皱盖假芝多糖f212的制备方法和用于预防和/或治疗乳腺癌的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110078842A CN110078842A (zh) | 2019-08-02 |
| CN110078842B true CN110078842B (zh) | 2021-08-10 |
Family
ID=67421654
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910437189.3A Active CN110078842B (zh) | 2019-05-24 | 2019-05-24 | 皱盖假芝多糖f212的制备方法和用于预防和/或治疗乳腺癌的应用 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110078842B (zh) |
| WO (1) | WO2020237724A1 (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102258563A (zh) * | 2010-05-28 | 2011-11-30 | 浦元清 | 一种抗癌药物组合物和一种中药组合物 |
| CN104725521A (zh) * | 2015-03-31 | 2015-06-24 | 广东省微生物研究所 | 一种皱盖假芝单峰多糖f212及其制备方法和应用 |
| CN108753869A (zh) * | 2018-06-26 | 2018-11-06 | 广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心） | 一种皱盖假芝胞外多糖的制备方法及应用 |
-
2019
- 2019-05-24 CN CN201910437189.3A patent/CN110078842B/zh active Active
- 2019-06-11 WO PCT/CN2019/090763 patent/WO2020237724A1/zh active Application Filing
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102258563A (zh) * | 2010-05-28 | 2011-11-30 | 浦元清 | 一种抗癌药物组合物和一种中药组合物 |
| CN104725521A (zh) * | 2015-03-31 | 2015-06-24 | 广东省微生物研究所 | 一种皱盖假芝单峰多糖f212及其制备方法和应用 |
| CN108753869A (zh) * | 2018-06-26 | 2018-11-06 | 广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心） | 一种皱盖假芝胞外多糖的制备方法及应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2020237724A1 (zh) | 2020-12-03 |
| CN110078842A (zh) | 2019-08-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR100361187B1 (ko) | 조혈 촉진작용, 골수 방어작용, 암세포 살해 면역세포생성작용 및 방사선 민감작용이 우수한 인삼 다당체 | |
| CN1891240A (zh) | 一种含多种灵芝活性成分的中药组合物及其制备方法 | |
| US4289688A (en) | Protein-bound polysaccharides | |
| CN109400741B (zh) | 一种灵芝孢子多糖的分离纯化方法 | |
| CN102584963A (zh) | 一种活性灵芝多糖肽对照品、制备方法及应用 | |
| CN101306077B (zh) | 一种治疗癌症的中药注射制剂及其制备方法 | |
| CN104042623A (zh) | 一种黑根霉胞外多糖在制备治疗或预防消化道肿瘤药物中的应用 | |
| EP0058093B1 (en) | Glycoprotein having anti-tumour and lectin-like activity | |
| WO2017177934A1 (zh) | 白及提取物或魔芋提取物在防治白细胞减少症中的应用 | |
| CN105017441B (zh) | 灵芝多糖的提取方法 | |
| CN112274529B (zh) | 一种平菇多糖硒苷-ⅲ抗癌活性成分在用于制备抗胃癌的药物中的应用 | |
| CN110078842B (zh) | 皱盖假芝多糖f212的制备方法和用于预防和/或治疗乳腺癌的应用 | |
| CN113717296B (zh) | 一种杜仲酸性多糖、提取方法及其在制备抗结肠癌药物中的应用 | |
| CN109602759A (zh) | 罗汉松实多糖的用途 | |
| US8486914B2 (en) | Hirsutella sinensis mycelia compositions and methods for treating sepsis and related inflammatory responses | |
| CN112237588B (zh) | 一种平菇多糖硒苷-ⅲ抗癌活性成分在制备抗前列腺癌的药物中的应用 | |
| CN103374078A (zh) | 紫芝液体深层发酵菌丝体均一多糖及其制备方法以及应用 | |
| CN110698567B (zh) | 阿魏菇中抗氧化多糖提取物及其制备方法和应用 | |
| CN100532395C (zh) | 一种源自灰树花子实体的α-葡聚糖、其制备方法及用途 | |
| CN102078560B (zh) | 一种复方斑蝥总提取物制剂及其制备方法 | |
| KR100893533B1 (ko) | 신규 균주로부터 분리된 면역 증진 및 항암 효과를갖는 β－１,３ 글루코만난 분리다당체 | |
| CN109678981A (zh) | 一种红花多糖的制备方法、产品及应用 | |
| KR970011556B1 (ko) | 장수버섯 추출물의 정제방법 | |
| MXPA01008280A (es) | Extractos, de alto peso molecular, de convolvulus arvensis (enredadera silvestre). | |
| CN114533755B (zh) | 一种绞股蓝多糖与靛玉红在抗黑色素瘤药物上的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CP03 | Change of name, title or address |
Address after: 510070 No. 58, courtyard, No. 100, Xianlie Middle Road, Yuexiu District, Guangzhou, Guangdong Province Patentee after: Institute of Microbiology, Guangdong Academy of Sciences Patentee after: GUANGDONG YUEWEI EDIBLE FUNGI TECHNOLOGY Co.,Ltd. Address before: 510070 courtyard, No. 100, Xianlie Middle Road, Yuexiu District, Guangzhou City, Guangdong Province Patentee before: GUANGDONG INSTITUTE OF MICROBIOLOGY (GUANGDONG DETECTION CENTER OF MICROBIOLOGY) Patentee before: GUANGDONG YUEWEI EDIBLE FUNGI TECHNOLOGY Co.,Ltd. |
|
| CP03 | Change of name, title or address | ||
| OL01 | Intention to license declared | ||
| OL01 | Intention to license declared |