CN110057961B - 一种仙灵骨葆胶囊成品检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种仙灵骨葆胶囊成品检测方法，仙灵骨葆胶囊包括以下中药药材：淫羊藿、续断、丹参、知母、补骨脂、地黄；制备方法：续断、丹参、补骨脂粉碎成细粉，淫羊藿、知母和地黄加水煎煮三次，合并煎液，浓缩至稠膏，加入所述细粉，混匀，制成颗粒，干燥，装入胶囊，制得仙灵骨葆胶囊成品，检测方法包括对丹参和补骨脂采用同一薄层色谱法鉴别、对淫羊藿与续断采用同一薄层色谱法鉴别和知母鉴别。本发明中增加了续断和知母两种药材的鉴定，使得仙灵骨葆胶囊内含物的检测建立明确专属性强的鉴别，鉴别更全面，能够对其成品质量进行更科学、可行、有效、可靠的控制，采用同一薄层色谱法分别对两对药材进行鉴定，鉴定时间缩短和成本降低。

Description

一种仙灵骨葆胶囊成品检测方法

技术领域

本发明属于仙灵骨葆胶囊质量检测技术领域，具体涉及一种仙灵骨葆胶囊成品检测方法。

背景技术

仙灵骨葆胶囊滋补肝肾，活血通络，强筋壮骨，用于肝肾不足，瘀血阻络所致骨质疏松症，症见腰脊疼痛，足膝酸软，乏力，仙灵骨葆胶囊内含物成分含有淫羊藿、续断、丹参、知母、补骨脂、地黄。

而现有成品原标准中，仅规定了以丹参中活性成分丹参酮ⅡA、淫羊藿中活性成分淫羊藿苷、补骨脂中活性成分补骨脂素和异补骨脂素为定性指标进行薄层鉴别，活性成分鉴别少，而且都是独立进行鉴定，薄层板使用率低，鉴别项目少， 鉴定检测时间大，效率低，成本高；中国专利申请（授权公告号为CN100533139C）中公开了一种仙灵骨葆药物制剂的检测方法，针对仙灵骨葆药物中只针对丹参和补骨脂进行分别鉴定，并未对淫羊藿、续断、知母进行鉴定，鉴定不全面，鉴定费时，无法对药物产品质量起到全面控制。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提供一种仙灵骨葆胶囊成品检测方法，以解决现有技术中存在的问题。

本发明采取的技术方案为：一种仙灵骨葆胶囊成品检测方法，所述仙灵骨葆胶囊由原材料淫羊藿、续断、丹参、知母、补骨脂和地黄通过以下方法制备而得：续断、丹参、补骨脂粉碎成细粉，淫羊藿、知母和地黄加水煎煮三次，合并煎液，浓缩至稠膏，加入所述细粉，混匀，制成颗粒，干燥，装入胶囊即得，所述仙灵骨葆胶囊成品检测方法包括以下具体步骤：

A、丹参和补骨脂鉴别：以丹参和补骨脂为对照药材，以丹参酮ⅡA、补骨脂素、异补骨脂素为对照品，采用同一薄层色谱法同时鉴别仙灵骨葆胶囊内容物中丹参和补骨脂；

B、淫羊藿与续断鉴别：以淫羊藿和续断为对照药材，以淫羊藿苷、川续断皂苷Ⅵ为对照品，采用同一薄层色谱法同时鉴别仙灵骨葆胶囊内容物中淫羊藿与续断；

C、知母鉴别：以知母为对照药材，以知母皂苷BⅡ为对照品，采用薄层色谱法鉴别仙灵骨葆胶囊内容物中知母。

优选的，上述采用同一薄层色谱法同时鉴别仙灵骨葆胶囊内容物中丹参和补骨脂，包括以下具体步骤：

1）供试品溶液的制备：取仙灵骨葆胶囊成品内容物3-5g，置具塞锥形瓶中，加45-55ml乙醚，超声处理4-6分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1-3ml使溶解，作为供试品溶液；

2）对照药材溶液的制备：取丹参对照药材0.8-1.2g，采用步骤（1）的方法制成丹参对照药材溶液；

再取补骨脂对照药材0.1-0.3g，加乙酸乙酯18-22ml，超声处理13-16分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1.5-2.5ml使溶解，作为补骨脂对照药材溶液；

3）对照品溶液的制备：取丹参酮ⅡA对照品、补骨脂素对照品和异补骨脂素对照品，分别加乙酸乙酯制成每1ml含丹参酮ⅡA 0.5mg、补骨脂素0.2mg、异补骨脂素0.2mg的混合溶液，作为对照品溶液；

4）吸取步骤1）-3）中制备的四种溶液各2-5µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条带状，以体积比14:1:0.5的甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，在日光下检视；供试品色谱中，在与丹参对照药材和丹参酮ⅡA对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以10%氢氧化钾甲醇溶液，晾干，在日光下检视；供试品色谱中，在与补骨脂对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置105℃下加热3-6分钟，在365nm紫外光下放置4-6分钟检视；供试品色谱中，在与补骨脂对照药材和补骨脂素、异补骨脂素对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

优选的，上述采用同一薄层色谱法同时鉴别仙灵骨葆胶囊内容物中淫羊藿与续断，包括以下具体步骤：

1）供试品溶液的制备：取仙灵骨葆胶囊成品内容物0.8-1.2g，置具塞锥形瓶中，加28-32ml甲醇，超声处理20-30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10-15ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取1-3次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1-3ml使溶解，作为供试品溶液；

2）对照药材溶液的制备：取淫羊藿对照药材和续断对照药材各0.1-0.3g，采用步骤1）的方法分别制成淫羊藿对照药材溶液和续断对照药材溶液；

3）对照品溶液的制备：取淫羊藿苷对照品和川续断皂苷Ⅵ对照品，分别加甲醇制成每1ml分别含0.2mg和1mg的溶液，作为淫羊藿苷对照品溶液和川续断皂苷Ⅵ对照品溶液；

4）吸取步骤1）-3）中制备的五种溶液各2-5µl，进行薄层鉴别试验，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条带状，以体积比7:3:1三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3%三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热3-6分钟，置365nm紫外光下检视；供试品色谱中，在与淫羊藿对照药材和淫羊藿苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；再喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视；供试品色谱中，在与续断对照药材和川续断皂苷Ⅵ对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

优选的，上述采用薄层色谱法鉴别仙灵骨葆胶囊内容物中知母，包括以下具体步骤：

1）供试品溶液的制备：取仙灵骨葆胶囊成品内容物2-4g，置具塞锥形瓶中，加50-60ml甲醇，超声处理20-30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水18-22ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取1-3次，每次15ml，弃去乙酸乙酯层，合并水层，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次15ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤4次，每次20ml，取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇0.8-1.2ml使溶解，作为供试品溶液；

2）对照药材溶液的制备：取知母对照药材0.1-0.3g，采用步骤1）的方法制成知母对照药材溶液；

3）对照品溶液的制备：取知母皂苷BⅡ对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的知母皂苷BⅡ对照品溶液；

4）吸取步骤1）-3）中制备的三种溶液各2-5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条带状，以体积比6.5:3.5:0.5:1.5的三氯甲烷-甲醇-甲酸-水的下层溶液展开，取出，晾干，再以体积比4:0.5:0.5的正丁醇-三氯甲烷-甲酸展开，取出，晾干，喷以体积比1:6的5%香草醛硫酸溶液-乙醇的混合溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视；供试品色谱中，在与知母皂苷BⅡ对照品和知母对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

优选的，上述一种仙灵骨葆胶囊成品检测方法，包括以下具体步骤：

A、丹参和补骨脂鉴别：

供试品溶液的制备：取仙灵骨葆胶囊成品内容物4g，置具塞锥形瓶中，加50ml乙醚，超声处理5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液；

对照药材溶液的制备：取丹参对照药材1g，采用供试品溶液的制备的方法制成丹参对照药材溶液；

再取补骨脂对照药材0.2g，加乙酸乙酯20ml，超声处理14分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为补骨脂对照药材溶液；

对照品溶液的制备：取丹参酮ⅡA对照品、补骨脂素对照品和异补骨脂素对照品，分别加乙酸乙酯制成每1ml含丹参酮ⅡA 0.5mg、补骨脂素0.2mg、异补骨脂素0.2mg的混合溶液，作为对照品溶液；

吸取上述四种溶液各3µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条带状（长8mm），以体积比14:1:0.5的甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，在日光下检视；供试品色谱中，在与丹参对照药材和丹参酮ⅡA对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以10%氢氧化钾甲醇溶液，晾干，在日光下检视；供试品色谱中，在与补骨脂对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置105℃下加热4分钟，在365nm紫外光下放置5分钟检视；供试品色谱中，在与补骨脂对照药材和补骨脂素、异补骨脂素对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

B、淫羊藿与续断鉴别：

供试品溶液的制备：取仙灵骨葆胶囊成品内容物1g，置具塞锥形瓶中，加30ml甲醇，超声处理25分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水13ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；

对照药材溶液的制备：取淫羊藿对照药材和续断对照药材各0.2g，采用供试品溶液的制备的方法分别制成淫羊藿对照药材溶液和续断对照药材溶液；

对照品溶液的制备：取淫羊藿苷对照品和川续断皂苷Ⅵ对照品，分别加甲醇制成每1ml分别含0.2mg和1mg的溶液，作为淫羊藿苷对照品溶液和川续断皂苷Ⅵ对照品溶液；

吸取上述五种溶液各3µl，进行薄层鉴别试验，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条带状（长8mm），以体积比7:3:1三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3%三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热4分钟，置365nm紫外光下检视；供试品色谱中，在与淫羊藿对照药材和淫羊藿苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；再喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视；供试品色谱中，在与续断对照药材和川续断皂苷Ⅵ对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

C、知母鉴别：

供试品溶液的制备：取仙灵骨葆胶囊成品内容物3g，置具塞锥形瓶中，加55ml甲醇，超声处理25分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次15ml，弃去乙酸乙酯层，合并水层，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次15ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤4次，每次20ml，取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；

对照药材溶液的制备：取知母对照药材0.2g，采用供试品溶液的制备的方法制成知母对照药材溶液；

对照品溶液的制备：取知母皂苷BⅡ对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的知母皂苷BⅡ对照品溶液；

吸取上述三种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条带状（长6mm），以体积比6.5:3.5:0.5:1.5的三氯甲烷-甲醇-甲酸-水的下层溶液展开，取出，晾干，再以体积比4:0.5:0.5的正丁醇-三氯甲烷-甲酸展开，取出，晾干，喷以体积比1:6的5%香草醛硫酸溶液-乙醇的混合溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视；供试品色谱中，在与知母皂苷BⅡ对照品和知母对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

本发明的有益效果：与现有技术相比，本发明的效果如下：

1、本发明做了大量的实验研究，在该品种的质量标准中制定了补骨脂、丹参、淫羊藿、续断和知母等5味药材成分的鉴别,并实现了同时鉴别补骨脂和丹参、淫羊藿和续断，在增加了鉴别项目的同时，简化方法，节约成本和时间，快速满足大生产的需求。

2、本发明的鉴别方法，分离度及呈点性较好，阴性无干扰，展开时间较短，检视清晰，具有较强的专属性和良好的重现性，能更好地控制药品的质量，真正体现药品安全有效、质量可控。

附图说明

图1为成品（淫羊藿、续断）系统适用性薄层色谱图；

图2为成品（丹参、补骨脂）系统适用性薄层色谱图；

图3为成品（知母）系统适用性薄层色谱图；

图4为成品1-7批仙灵骨葆胶囊（丹参、补骨脂）重现性薄层色谱图；

图5为成品8-15批仙灵骨葆胶囊（丹参、补骨脂）重现性薄层色谱图；

图6为成品1-7批仙灵仙灵骨葆胶囊（淫羊藿、续断）重现性薄层色谱图；

图7为成品8-15批仙灵骨葆胶囊（淫羊藿、续断）重现性薄层色谱图；

图8为成品1-7批仙灵仙灵骨葆胶囊（知母）重现性薄层色谱图；

图9为成品8-15批仙灵骨葆胶囊（知母）重现性薄层色谱图；

图10为仙灵骨葆胶囊（丹参、补骨脂）专属性考察薄层色谱图；

图11为仙灵骨葆胶囊（淫羊藿、续断）专属性考察薄层色谱图；

图12为仙灵骨葆胶囊（知母）专属性考察薄层色谱图；

图13为仙灵骨葆胶囊（丹参、补骨脂）自制硅胶G板薄层色谱图；

图14为仙灵骨葆胶囊（丹参、补骨脂）国药厂家硅胶G板薄层色谱图；

图15为仙灵骨葆胶囊（丹参、补骨脂）海浪厂家硅胶G板薄层色谱图；

图16为仙灵骨葆胶囊（丹参、补骨脂）海洋厂家硅胶G板薄层色谱图；

图17为仙灵骨葆胶囊（丹参、补骨脂）5℃薄层色谱图；

图18为仙灵骨葆胶囊（丹参、补骨脂）20℃薄层色谱图；

图19为仙灵骨葆胶囊（丹参、补骨脂）35℃薄层色谱图；

图20为仙灵骨葆胶囊（丹参、补骨脂）湿度32%薄层色谱图；

图21为仙灵骨葆胶囊（丹参、补骨脂）湿度65%薄层色谱图；

图22为仙灵骨葆胶囊（丹参、补骨脂）湿度88%薄层色谱图；

图23为仙灵骨葆胶囊（淫羊藿、续断）自制硅胶G板薄层色谱图；

图24为仙灵骨葆胶囊（淫羊藿、续断）国药厂家硅胶G板薄层色谱图；

图25为仙灵骨葆胶囊（淫羊藿、续断）海浪厂家硅胶G板薄层色谱图；

图26为仙灵骨葆胶囊（淫羊藿、续断）海洋厂家硅胶G板薄层色谱图；

图27为仙灵骨葆胶囊（淫羊藿、续断）5℃薄层色谱图；

图28为仙灵骨葆胶囊（淫羊藿、续断）20℃薄层色谱图；

图29为仙灵骨葆胶囊（淫羊藿、续断）35℃薄层色谱图；

图30为仙灵骨葆胶囊（淫羊藿、续断）湿度32%薄层色谱图；

图31为仙灵骨葆胶囊（淫羊藿、续断）湿度65%薄层色谱图；

图32为仙灵骨葆胶囊（淫羊藿、续断）湿度88%薄层色谱图；

图33为仙灵骨葆胶囊（知母）自制硅胶G板薄层色谱图；

图34为仙灵骨葆胶囊（知母）国药厂家硅胶G板薄层色谱图；

图35为仙灵骨葆胶囊（知母）海浪厂家硅胶G板薄层色谱图；

图36为仙灵骨葆胶囊（知母）海洋厂家硅胶G板薄层色谱图；

图37为仙灵骨葆胶囊（知母）5℃薄层色谱图；

图38为仙灵骨葆胶囊（知母）20℃薄层色谱图；

图39为仙灵骨葆胶囊（知母）35℃薄层色谱图；

图40为仙灵骨葆胶囊（知母）湿度32%薄层色谱图；

图41为仙灵骨葆胶囊（知母）湿度65%薄层色谱图；

图42为仙灵骨葆胶囊（知母）湿度88%薄层色谱图；

图43为仙灵骨葆胶囊（淫羊藿、续断）样品稳定性薄层色谱图；

图44为仙灵骨葆胶囊（丹参、补骨脂）样品稳定性薄层色谱图；

图45为仙灵骨葆胶囊（知母）样品稳定性薄层色谱图。

具体实施方式

下面结合附图及具体的实施例对本发明进行进一步介绍。

实施例1： 一种仙灵骨葆胶囊成品检测方法，仙灵骨葆胶囊包括以下中药药材：淫羊藿、续断、丹参、知母、补骨脂和地黄；仙灵骨葆的中药制剂为胶囊；仙灵骨葆胶囊制备方法：将续断、丹参、补骨脂粉碎成细粉，淫羊藿、知母和地黄加水煎煮三次，合并煎液，浓缩至稠膏，加入续断、丹参和补骨脂粉碎的细粉，混匀，制成颗粒，干燥，装入胶囊，制得仙灵骨葆胶囊成品，仙灵骨葆胶囊成品检测方法包括以下具体步骤：

A、丹参和补骨脂鉴别：

供试品溶液的制备：取仙灵骨葆胶囊成品内容物3g，置具塞锥形瓶中，加45ml乙醚，超声处理4分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；

对照药材溶液的制备：取丹参对照药材0.8g，采用供试品溶液的制备的方法制成丹参对照药材溶液；

再取补骨脂对照药材0.1g，加乙酸乙酯18ml，超声处理13分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1.5ml使溶解，作为补骨脂对照药材溶液；

对照品溶液的制备：取丹参酮ⅡA对照品、补骨脂素对照品和异补骨脂素对照品，分别加乙酸乙酯制成每1ml含丹参酮ⅡA 0.5mg、补骨脂素0.2mg、异补骨脂素0.2mg的混合溶液，作为对照品溶液；

吸取上述四种溶液各2µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条带状（长8mm），以体积比14:1:0.5的甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，在日光下检视；供试品色谱中，在与丹参对照药材和丹参酮ⅡA对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以10%氢氧化钾甲醇溶液，晾干，在日光下检视；供试品色谱中，在与补骨脂对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置105℃下加热3分钟，在365nm紫外光下放置4分钟检视；供试品色谱中，在与补骨脂对照药材和补骨脂素、异补骨脂素对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

B、淫羊藿与续断鉴别：

供试品溶液的制备：取仙灵骨葆胶囊成品内容物0.8g，置具塞锥形瓶中，加28ml甲醇，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取1次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；

对照药材溶液的制备：取淫羊藿对照药材和续断对照药材各0.1-0.3g，采用供试品溶液的制备的方法分别制成淫羊藿对照药材溶液和续断对照药材溶液；

对照品溶液的制备：取淫羊藿苷对照品和川续断皂苷Ⅵ对照品，分别加甲醇制成每1ml分别含0.2mg和1mg的溶液，作为淫羊藿苷对照品溶液和川续断皂苷Ⅵ对照品溶液；

吸取上述五种溶液各2µl，进行薄层鉴别试验，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条带状（长8mm），以体积比7:3:1三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3%三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热3分钟，置365nm紫外光下检视；供试品色谱中，在与淫羊藿对照药材和淫羊藿苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；再喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视；供试品色谱中，在与续断对照药材和川续断皂苷Ⅵ对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

C、知母鉴别：

供试品溶液的制备：取仙灵骨葆胶囊成品内容物2g，置具塞锥形瓶中，加50ml甲醇，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水18ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取1次，每次15ml，弃去乙酸乙酯层，合并水层，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次15ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤4次，每次20ml，取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇0.8ml使溶解，作为供试品溶液；

对照药材溶液的制备：取知母对照药材0.1g，采用供试品溶液的制备的方法制成知母对照药材溶液；

对照品溶液的制备：取知母皂苷BⅡ对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的知母皂苷BⅡ对照品溶液；

吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条带状（长6mm），以体积比6.5:3.5:0.5:1.5的三氯甲烷-甲醇-甲酸-水的下层溶液展开，取出，晾干，再以体积比4:0.5:0.5的正丁醇-三氯甲烷-甲酸展开，取出，晾干，喷以体积比1:6的5%香草醛硫酸溶液-乙醇的混合溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视；供试品色谱中，在与知母皂苷BⅡ对照品和知母对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

实施例2：一种仙灵骨葆胶囊成品检测方法，仙灵骨葆胶囊包括以下中药药材：淫羊藿、续断、丹参、知母、补骨脂和地黄；仙灵骨葆的中药制剂为胶囊；仙灵骨葆胶囊制备方法：将续断、丹参、补骨脂粉碎成细粉，淫羊藿、知母和地黄加水煎煮三次，合并煎液，浓缩至稠膏，加入续断、丹参和补骨脂粉碎的细粉，混匀，制成颗粒，干燥，装入胶囊，制得仙灵骨葆胶囊成品，仙灵骨葆胶囊成品检测方法包括以下具体步骤：

A、丹参和补骨脂鉴别：

供试品溶液的制备：取仙灵骨葆胶囊成品内容物4g，置具塞锥形瓶中，加50ml乙醚，超声处理5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液；

对照药材溶液的制备：取丹参对照药材1g，采用供试品溶液的制备的方法制成丹参对照药材溶液；

再取补骨脂对照药材0.2g，加乙酸乙酯20ml，超声处理14分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为补骨脂对照药材溶液；

对照品溶液的制备：取丹参酮ⅡA对照品、补骨脂素对照品和异补骨脂素对照品，分别加乙酸乙酯制成每1ml含丹参酮ⅡA 0.5mg、补骨脂素0.2mg、异补骨脂素0.2mg的混合溶液，作为对照品溶液；

照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述四种溶液各3µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条带状（长8mm），以体积比14:1:0.5的甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，在日光下检视；供试品色谱中，在与丹参对照药材和丹参酮ⅡA对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以10%氢氧化钾甲醇溶液，晾干，在日光下检视；供试品色谱中，在与补骨脂对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置105℃下加热4分钟，在365nm紫外光下放置5分钟检视；供试品色谱中，在与补骨脂对照药材和补骨脂素、异补骨脂素对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

B、淫羊藿与续断鉴别：

供试品溶液的制备：取仙灵骨葆胶囊成品内容物1g，置具塞锥形瓶中，加30ml甲醇，超声处理25分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水13ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；

对照药材溶液的制备：取淫羊藿对照药材和续断对照药材各0.2g，采用供试品溶液的制备的方法分别制成淫羊藿对照药材溶液和续断对照药材溶液；

对照品溶液的制备：取淫羊藿苷对照品和川续断皂苷Ⅵ对照品，分别加甲醇制成每1ml分别含0.2mg和1mg的溶液，作为淫羊藿苷对照品溶液和川续断皂苷Ⅵ对照品溶液；

照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述五种溶液各3µl，进行薄层鉴别试验，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条带状（长8mm），以体积比7:3:1三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3%三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热4分钟，置365nm紫外光下检视；供试品色谱中，在与淫羊藿对照药材和淫羊藿苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；再喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视；供试品色谱中，在与续断对照药材和川续断皂苷Ⅵ对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

C、知母鉴别：

供试品溶液的制备：取仙灵骨葆胶囊成品内容物3g，置具塞锥形瓶中，加55ml甲醇，超声处理25分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次15ml，弃去乙酸乙酯层，合并水层，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次15ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤4次，每次20ml，取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；

对照药材溶液的制备：取知母对照药材0.2g，采用供试品溶液的制备的方法制成知母对照药材溶液；

对照品溶液的制备：取知母皂苷BⅡ对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的知母皂苷BⅡ对照品溶液；

照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取步骤1）-3）中制备的三种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条带状（长6mm），以体积比6.5:3.5:0.5:1.5的三氯甲烷-甲醇-甲酸-水的下层溶液展开，取出，晾干，再以体积比4:0.5:0.5的正丁醇-三氯甲烷-甲酸展开，取出，晾干，喷以体积比1:6的5%香草醛硫酸溶液-乙醇的混合溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视；供试品色谱中，在与知母皂苷BⅡ对照品和知母对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

实施例3：一种仙灵骨葆胶囊成品检测方法，仙灵骨葆胶囊包括以下中药药材：淫羊藿、续断、丹参、知母、补骨脂和地黄；仙灵骨葆的中药制剂为胶囊；仙灵骨葆胶囊制备方法：将续断、丹参、补骨脂粉碎成细粉，淫羊藿、知母和地黄加水煎煮三次，合并煎液，浓缩至稠膏，加入续断、丹参和补骨脂粉碎的细粉，混匀，制成颗粒，干燥，装入胶囊，制得仙灵骨葆胶囊成品，仙灵骨葆胶囊成品检测方法包括以下具体步骤：

A、丹参和补骨脂鉴别：

供试品溶液的制备：取仙灵骨葆胶囊成品内容物5g，置具塞锥形瓶中，加55ml乙醚，超声处理6分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯3ml使溶解，作为供试品溶液；

对照药材溶液的制备：取丹参对照药材1.2g，采用供试品溶液的制备的方法制成丹参对照药材溶液；

再取补骨脂对照药材0.3g，加乙酸乙酯22ml，超声处理16分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯2.5ml使溶解，作为补骨脂对照药材溶液；

对照品溶液的制备：取丹参酮ⅡA对照品、补骨脂素对照品和异补骨脂素对照品，分别加乙酸乙酯制成每1ml含丹参酮ⅡA 0.5mg、补骨脂素0.2mg、异补骨脂素0.2mg的混合溶液，作为对照品溶液；

照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述制备的四种溶液各5µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条带状（长8mm），以体积比14:1:0.5的甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，在日光下检视；供试品色谱中，在与丹参对照药材和丹参酮ⅡA对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以10%氢氧化钾甲醇溶液，晾干，在日光下检视；供试品色谱中，在与补骨脂对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置105℃下加热6分钟，在365nm紫外光下放置6分钟检视；供试品色谱中，在与补骨脂对照药材和补骨脂素、异补骨脂素对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

B、淫羊藿与续断鉴别：

供试品溶液的制备：取仙灵骨葆胶囊成品内容物1.2g，置具塞锥形瓶中，加32ml甲醇，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，作为供试品溶液；

对照药材溶液的制备：取淫羊藿对照药材和续断对照药材各0.1-0.3g，采用供试品溶液的制备的方法分别制成淫羊藿对照药材溶液和续断对照药材溶液；

对照品溶液的制备：取淫羊藿苷对照品和川续断皂苷Ⅵ对照品，分别加甲醇制成每1ml分别含0.2mg和1mg的溶液，作为淫羊藿苷对照品溶液和川续断皂苷Ⅵ对照品溶液；

照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述制备的五种溶液各5µl，进行薄层鉴别试验，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条带状（长8mm），以体积比7:3:1三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3%三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热6分钟，置365nm紫外光下检视；供试品色谱中，在与淫羊藿对照药材和淫羊藿苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；再喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视；供试品色谱中，在与续断对照药材和川续断皂苷Ⅵ对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

C、知母鉴别：

供试品溶液的制备：取仙灵骨葆胶囊成品内容物4g，置具塞锥形瓶中，加60ml甲醇，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水22ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取3次，每次15ml，弃去乙酸乙酯层，合并水层，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次15ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤4次，每次20ml，取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1.2ml使溶解，作为供试品溶液；

对照药材溶液的制备：取知母对照药材0.3g，采用供试品溶液的制备的方法制成知母对照药材溶液；

对照品溶液的制备：取知母皂苷BⅡ对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的知母皂苷BⅡ对照品溶液；

照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述制备的三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条带状（长6mm），以体积比6.5:3.5:0.5:1.5的三氯甲烷-甲醇-甲酸-水的下层溶液展开，取出，晾干，再以体积比4:0.5:0.5的正丁醇-三氯甲烷-甲酸展开，取出，晾干，喷以体积比1:6的5%香草醛硫酸溶液-乙醇的混合溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视；供试品色谱中，在与知母皂苷BⅡ对照品和知母对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

上述三个实施例中的产品质量控制还包括：性状观察：仙灵骨葆胶囊内容物为棕黄色至棕褐色的颗粒及粉末；味微苦；显微法鉴别：取仙灵骨葆胶囊内容物设定量，置显微镜下观察：草酸钙簇晶存在于淡棕黄色皱缩的薄壁细胞中，常数个排列成行，种皮栅状细胞淡棕色或红棕色，表面观类多角形，壁稍厚，胞腔含红棕色物；检查：应符合胶囊剂项下有关的各项规定（通则0103）。

仙灵骨葆胶囊功能主治：滋补肝肾，接骨续筋，强身健骨。用于骨质疏松或骨质疏松症，骨折，骨关节炎，骨无菌性坏死等。

仙灵骨葆胶囊的用法与用量：口服，一次3粒，一日2次，4-6周为一个疗程或遵医嘱。

仙灵骨葆胶囊的注意事项：重症感冒期间不宜服用。

仙灵骨葆胶囊规格：每粒装0.5g；仙灵骨葆胶囊贮藏：密封。

为了验证本发明试验方法、条件及重现性，做如下实验：

1 系统适用性

一般以对照药材或对照提取物进行系统适用性阐述，说明薄层鉴别条件的合理性，描述对照药材或对照提取物与对照品斑点的颜色和位置的一致性，描述对照药材或对照提取物图谱中对照品斑点位置上方和下方薄层斑点的数量、颜色和斑点强度。

1.1 仙灵骨葆胶囊（淫羊藿、续断）系统适用性

如图1所示，喷以3%三氯化铝乙醇溶液显色后，在365nm紫外光灯（365nm）下检视，仙灵骨葆胶囊供试品色谱在与淫羊藿苷对照品色谱及淫羊藿对照药材色谱相对应位置显相同颜色的黄色荧光斑点，淫羊藿对照药材分离出四个斑点，其中淫羊藿苷斑点最亮；喷以10%硫酸乙醇，在日光下检视成品供试品色谱在与川续断皂苷Ⅵ及续断对照药材色谱相对应位置显相同颜色的紫色斑点，斑点颜色清晰，续断对照药材分离出的斑点中川续断皂苷Ⅵ斑点最明显，其余斑点强度不高，检视不清晰，比移值（淫羊藿苷）为0.5，比移值（川续断皂苷Ⅵ）为0.2，均符合2015版《中国药典》四部薄层色谱法中系统适用性的要求（0.2-0.8之间），图中：展开剂配比：三氯甲烷-甲醇-水（7:3:1）的下层溶液；展开温湿度条件： T=20℃，RH=65%；基线至斑点中心：3.9cm；基线至展开剂前沿：8.0cm；Rf值（淫羊藿苷）= 0.5；基线至斑点中心：1.5cm；基线至展开剂前沿：8.0cm；Rf值（川续断皂苷Ⅵ）= 0.2；显色剂：3%三氯化铝乙醇溶液、10%硫酸乙醇溶液；样品编号：1.淫羊藿苷、川续断皂苷Ⅵ混合对照品；2.淫羊藿对照药材；3.成品供试品溶液；4.续断对照药材；5.成品供试品溶液。

1.2仙灵骨葆胶囊（丹参、补骨脂）系统适用性

如图2所示，未喷显色剂前在日光下检视，仙灵骨葆胶囊供试品色谱在与丹参酮ⅡA及丹参对照药材色谱相对应位置显相同颜色的红色斑点，斑点检视清晰，丹参对照药材分离出2个斑点与成品供试品色谱对应，喷以10%氢氧化钾甲醇溶液显色后，在日光下检视，成品供试品色谱在与补骨脂对照药材相对应位置有相同颜色的黄色斑点对应，补骨脂对照药材分离出多个黄色斑点与成品供试品色谱对应；在365nm紫外光灯（365nm）下检视，成品供试品色谱在与异补骨脂素对照品相对应位置显蓝色荧光斑点，在与补骨脂素对照品相对应位置显相同颜色的黄色荧光斑点，各斑点分离效果好，对照品成分荧光强度高，检视清晰；比移值（丹参酮ⅡA）为0.5，异补骨脂素为0.5，补骨脂素为0.4，均符合2015版《中国药典》要求（比移值在0.2-0.8之间）；图中：展开剂配比：甲苯-乙酸乙酯-甲酸（14:1:0.5）；展开温湿度条件： T=20℃，RH=65%；基线至斑点中心：4.2cm；基线至展开剂前沿：8.0cm；Rf值（丹参酮ⅡA）= 0.5；基线至斑点中心：3.8cm；基线至展开剂前沿：8.0cm；Rf值（异补骨脂素）= 0.5；基线至斑点中心：3.4cm；基线至展开剂前沿：8.0cm；Rf值（补骨脂素）= 0.4；显色剂：10%氢氧化钾甲醇溶液；样品编号：1.丹参酮ⅡA、补骨脂素、异补骨脂素混合对照品；2.丹参对照药材；3.成品供试品溶液；4.补骨脂对照药材；5.成品供试品溶液。

1.3仙灵骨葆胶囊（知母）系统适用性

如图3所示，仙灵骨葆胶囊成品供试品色谱在与知母皂苷BⅡ及知母对照药材供试品色谱相对应位置显相同的黄色斑点，知母对照药材分离出2个明显的黄色斑点，对照品知母皂苷BⅡ比移值为0.4，符合2015版《中国药典》四部项下薄层色谱法中系统适用性试验要求（比移值Rf在0.2-0.8之间），成品（知母）分离出4个黄色斑点，其中与之母对照药材上方对应的斑点不太明显，其余三个斑点均检视清晰，各斑点之间分离度好，检视效果好。图中：展开剂配比：三氯甲烷-甲醇-甲酸-水（6.5:3.5:0.5：1.5）的下层溶液；正丁醇-三氯甲烷-甲酸（4：0.5：0.5）；展开温湿度条件： T=15℃，RH=57%；基线至斑点中心：2.8cm；基线至展开剂前沿：8.0cm；Rf值= 0.4；显色剂：5%香草醛硫酸溶液-乙醇（1：6）的混合溶液；样品编号：1.知母皂苷BⅡ对照品（1mg/ml）；2.成品供试品溶液；3.知母对照药材溶液；4.成品供试品溶液。

2 方法学验证

应以阴性制剂为对比，说明方法的专属性。根据中国药典薄层色谱方法学验证要求进行各参数的验证和耐用性说明，阐述样品溶液的稳定性、不同厂家薄层板、不同温湿度等参数对薄层图谱的影响，如有较大影响应在标准中注明系统适用性要求。

2.1重现性考察

2.1.1仙灵骨葆胶囊（丹参、补骨脂）重现性

取15批仙灵骨葆胶囊成品粉末各4g，加50ml乙醚，超声处理5分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液，另取丹参对照药材1g，同法制成丹参对照药材溶液，再取补骨脂对照药材0.2g，加20ml乙酸乙酯超声处理15分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为补骨脂对照药材溶液。

照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502）试验，吸取上述成品供试品溶液及各对照药材溶液各3µl，丹参酮ⅡA、补骨脂素、异补骨脂素混合对照品3μl，进行薄层鉴别试验，采用条带状点样（8mm），分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（14:1:0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，先在日光下检视，喷以10%氢氧化钾甲醇溶液，晾干，在日光下检视，置105℃加热数分钟，在365nm紫外光灯（365nm）下放置5分钟检视。

如图4-5所示，仙灵骨葆胶囊15批成品薄层展开效果相当，各个供试品色谱斑点检视清晰，分离效果好，未喷显色剂前，在日光下检视，成品供试品色谱在与丹参酮ⅡA及丹参对照药材相对应位置显相同颜色的斑点，喷以10%氢氧化钾甲醇溶液，在日光下检视，成品供试品色谱在与补骨脂对照药材相对应位置显相同颜色的斑点，喷显色剂后在365nm紫外光灯（365nm）下检视，成品供试品色谱在与补骨脂素、异补骨脂素对照品色谱及补骨脂对照药材色谱相对应位置显相同颜色的荧光斑点，说明该方法的重现性好。图4中：展开剂配比：甲苯-乙酸乙酯-甲酸（14:1:0.5）；展开温湿度条件： T=19℃，RH=43%；显色剂：10%氢氧化钾甲醇溶液；样品编号：1.丹参酮ⅡA、补骨脂素、异补骨脂素混合对照品；2.丹参对照药材；3.补骨脂对照药材；4-10.成品（1-7号）。图5中：展开剂配比：甲苯-乙酸乙酯-甲酸（14:1:0.5）；展开温湿度条件： T=19℃，RH=43%；显色剂：10%氢氧化钾甲醇溶液；样品编号：1.丹参酮ⅡA、补骨脂素、异补骨脂素混合对照品；2.丹参对照药材；3.补骨脂对照药材；4-11.成品（8-15号）。

2.1.2仙灵骨葆胶囊（淫羊藿、续断）重现性

取15批仙灵骨葆胶囊成品粉末各1g，加30ml甲醇，超声处理30分钟，滤过。滤液蒸干，残渣加水10ml溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇3ml使溶液，作为供试品溶液，另取淫羊藿对照药材0.2g，续断对照药材0.3g，同法制成淫羊藿对照药材、续断对照药材溶液。

照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502）试验，吸取成品供试品溶液、淫羊藿对照药材溶液各2µl，续断对照药材溶液3μl，淫羊藿苷、川续断皂苷Ⅵ混合对照品溶液5μl，进行薄层鉴别试验，采用条带状点样（8mm），分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（7:3:1）的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，先喷以3%三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热数分钟，置365nm紫外光灯（365nm）下检视，再喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。

如图6-7所示，仙灵骨葆胶囊15批成品薄层展开效果相当，各个供试品色谱斑点检视清晰，分离效果好，说明该方法的重现性好。图中：展开剂配比：三氯甲烷-甲醇-水（7:3:1）的下层溶液；展开温湿度条件： T=17℃，RH=54%；显色剂：3%三氯化铝乙醇溶液、10%硫酸乙醇溶液；样品编号：1.淫羊藿苷、川续断皂苷Ⅵ混合对照品；2.淫羊藿对照药材；3.续断对照药材；4-10.成品（1-7号）。图7中：展开剂配比：三氯甲烷-甲醇-水（7:3:1）的下层溶液；展开温湿度条件： T=17℃，RH=54%；显色剂：3%三氯化铝乙醇溶液、10%硫酸乙醇溶液；样品编号：1.淫羊藿苷、川续断皂苷Ⅵ混合对照品；2.淫羊藿对照药材；3.续断对照药材；4-10.成品（8-18号）。

2.1.3仙灵骨葆胶囊（知母）重现性

取15批仙灵骨葆胶囊成品粉末各3g，置具塞锥形瓶中，加50ml甲醇，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取3次，每次15ml，弃去乙酸乙酯层，合并水层，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次15ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤4次，每次20ml，取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取知母对照药材0.2g，同法制成知母对照药材溶液。再取知母皂苷BⅡ对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的对照品溶液。

照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502）试验，吸取成品供试品溶液及对照品溶液各5µl，知母对照药材溶液3μl，进行薄层鉴别试验，采用条带状点样，分别点于同一硅胶G薄层板上，先以三氯甲烷-甲醇-甲酸-水（6.5:3.5:0.5:1.5）的下层溶液展开，取出，晾干，再以正丁醇-三氯甲烷-甲酸（4：0.5：0.5）展开，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液-乙醇（1：6）的混合溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。

如图8-9所示，仙灵骨葆胶囊15批成品薄层展开效果相当，各个供试品色谱斑点检视清晰，分离效果好，说明该方法的重现性好。图8中：展开剂配比：三氯甲烷-甲醇-甲酸-水（6.5:3.5:0.5：1.5）的下层溶液；正丁醇-三氯甲烷-甲酸（4：0.5：0.5）；展开温湿度条件： T=16.5℃，RH=37%；显色剂：5%香草醛硫酸溶液-乙醇（1：6）的混合溶液；样品编号：1-4，6，8-11.成品供试品溶液（样1-样9）；5.知母皂苷BⅡ对照品；7.知母对照药材。图9中：展开剂配比：三氯甲烷-甲醇-甲酸-水（6.5:3.5:0.5：1.5）的下层溶液；正丁醇-三氯甲烷-甲酸（4：0.5：0.5）；展开温湿度条件： T=16.5℃，RH=37%；显色剂：5%香草醛硫酸溶液-乙醇（1：6）的混合溶液；样品编号：1-3,6-8.成品供试品溶液（样10-样15）；4.知母皂苷BⅡ对照品；5.知母对照药材。

2.2专属性考察

2.2.1仙灵骨葆胶囊（丹参、补骨脂）专属性

取仙灵骨葆胶囊成品粉末、阴性（缺丹参）、阴性（缺补骨脂）粉末各4g，分别加50ml乙醚，超声处理5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，得到成品供试品溶液、阴性供试品溶液；另取丹参对照药材1g，同法制成丹参对照药材溶液；再取补骨脂对照药材0.2g，加乙酸乙酯20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为补骨脂对照药材溶液。

照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502）试验，分别吸取上述成品及阴性供试品溶液、丹参对照药材溶液、补骨脂对照药材溶液以及混合对照品溶液各3µl，进行薄层鉴别试验，采用条带状点样（8mm），分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（14:1:0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，先在日光下检视，喷以10%氢氧化钾甲醇溶液，在日光下检视，置105℃加热数分钟后，在365nm紫外光灯（365nm）下放置5分钟检视。

如图10所示，未喷显色剂前，在日光下检视，成品供试品溶液在与丹参酮ⅡA对照品色谱及丹参对照药材色谱相对应位置显相同颜色的斑点，阴性（缺丹参）无干扰；显色后，在日光下检视，成品供试品色谱在与补骨脂对照药材相对应位置显相同颜色的斑点，阴性（缺补骨脂）无干扰；在365nm紫外光灯（365nm）下检视，成品供试品色谱在与补骨脂素、异补骨脂素对照品色谱及补骨脂对照药材色谱相对应位置显相同颜色的荧光斑点，阴性（缺补骨脂）无干扰，说明此方法专属性强。图中：展开剂配比：甲苯-乙酸乙酯-甲酸（14:1:0.5）；展开温湿度条件： T=18℃，RH=53%；显色剂：10%氢氧化钾甲醇溶液；样品编号：1,2.丹参酮ⅡA、补骨脂素、异补骨脂素混合对照品；3,4.丹参对照药材；5,6.补骨脂对照药材；7,8.阴性（缺丹参）；9,10.阴性（缺补骨脂）；11-13.成品供试品溶液。

2.2.2仙灵骨葆胶囊（淫羊藿、续断）专属性

取仙灵骨葆胶囊成品粉末1g，加30ml甲醇，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，作为供试品溶液；另取淫羊藿对照药材0.2g，续断对照药材0.3g，同法制成淫羊藿对照药材、续断对照药材溶液；再取阴性（缺淫羊藿）、阴性（缺续断）粉末各1g，同法制成阴性供试品溶液。

照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502）试验，吸取上成品及阴性供试品溶液各2μl、混合对照品溶液5μl、淫羊藿对照药材2μl、续断对照药材3μl，进行薄层鉴别试验，采用条带状点样（8mm），分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（7:3:1）的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，先喷以3%三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热数分钟，置365nm紫外光灯（365nm）下检视，再喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视。

如图11所示，在365nm紫外光灯（365nm）下检视，成品供试品色谱在与淫羊藿苷及淫羊藿对照药材色谱相对应位置显相同颜色的斑点，阴性（缺淫羊藿）无干扰；在日光下检视，成品供试品色谱在与川续断皂苷Ⅵ及续断对照药材色谱相对应位置显相同颜色的斑点，阴性（缺续断）无干扰，说明此方法专属性强。图11中：展开剂配比：三氯甲烷-甲醇-水（7:3:1）的下层溶液；展开温湿度条件： T=17℃，RH=54%；显色剂：3%三氯化铝乙醇溶液、10%硫酸乙醇溶液；样品编号：1,2.淫羊藿苷、川续断皂苷Ⅵ混合对照品；3,4.淫羊藿对照药材；5,6.续断对照药材；7,8.阴性（缺续断）；9,10.阴性（缺淫羊藿）；11-13.成品供试品溶液。

2.2.3仙灵骨葆胶囊（知母）专属性

取仙灵骨葆胶囊成品粉末3g，加50ml甲醇，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，先用乙酸乙酯萃取3次，每次15ml，弃去乙酸乙酯液，水层继续用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次15ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤4次，每次20ml，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为成品供试品溶液；另取阴性（缺知母）粉末3g，同法制成阴性供试品溶液。再取知母对照药材0.2g，同成品供试品溶液制备方法制备知母对照药材溶液；另取配制好的知母皂苷BⅡ对照品溶液进行薄层鉴别试验。

照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502）试验，分别吸取上述成品及阴性（缺知母）供试品溶液、知母皂苷BⅡ对照品溶液各5μl、知母对照药材溶液3μl，进行薄层鉴别试验，采用条带状点样（6mm），分别点于同一硅胶G薄层板上，先以三氯甲烷-甲醇-甲酸-水（6.5:3.5:0.5:1.5）的下层溶液展开，取出，晾干，再以正丁醇-三氯甲烷-甲酸（4：0.5：0.5）展开，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液-乙醇（1：6）的混合溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。

如图12所示，在日光下检视，成品供试品溶液与知母对照药材在与知母皂苷BⅡ对照品色谱相对应位置显相同颜色的斑点，成品阴性（缺知母）无干扰，说明此方法专属性强。图中：展开剂配比：三氯甲烷-甲醇-甲酸-水（6.5:3.5:0.5：1.5）的下层溶液；正丁醇-三氯甲烷-甲酸（4：0.5：0.5）；展开温湿度条件： T=18℃，RH=52%；显色剂：5%香草醛硫酸溶液-乙醇（1：6）的混合溶液；样品编号：1-3.知母皂苷BⅡ对照品（1mg/ml）；4-6.知母对照药材；7-9.成品供试品溶液；10-12.成品阴性（缺知母）供试品溶液。

2.3耐用性考察

2.3.1仙灵骨葆胶囊（丹参、补骨脂）耐用性

采用不同生产厂家的硅胶G薄层板进行比较实验：

1 自制硅胶G薄层板，批号：20190324

2 国药集团化学试剂有限公司生产硅胶G薄层板，批号：20180126

3 青岛海浪硅胶干燥剂有限公司生产硅胶G薄层板，批号：20130902

4 青岛海洋化工有限公司生产硅胶G薄层板，批号：20180801

如图13-16所示，不同厂家生产的硅胶G薄层板对成品（丹参、补骨脂）均能达到很好的色谱展开效果，供试品色谱在日光及365nm紫外光灯（365nm）下斑点检视清晰。图13中：展开剂配比：甲苯-乙酸乙酯-甲酸（14:1:0.5）；展开温湿度条件： T=18℃，RH=52%；薄层板：自制硅胶G板；显色剂：10%氢氧化钾甲醇溶液；样品编号：1.丹参酮ⅡA、补骨脂素、异补骨脂素混合对照品；2.丹参对照药材；3.补骨脂对照药材；4.成品供试品溶液；5.成品供试品溶液。图14中：展开剂配比：甲苯-乙酸乙酯-甲酸（14:1:0.5）；展开温湿度条件： T=18℃，RH=46%；薄层板：国药厂家硅胶G板；显色剂：10%氢氧化钾甲醇溶液；样品编号：1.丹参酮ⅡA、补骨脂素、异补骨脂素混合对照品；2.丹参对照药材；3.补骨脂对照药材；4.成品供试品溶液；5.成品供试品溶液。图15中：展开剂配比：甲苯-乙酸乙酯-甲酸（14:1:0.5）；展开温湿度条件： T=18℃，RH=46%；薄层板：海浪厂家硅胶G板；显色剂：10%氢氧化钾甲醇溶液；样品编号：1.丹参酮ⅡA、补骨脂素、异补骨脂素混合对照品；2.丹参对照药材；3.补骨脂对照药材；4.成品供试品溶液。图16中：展开剂配比：甲苯-乙酸乙酯-甲酸（14:1:0.5）；展开温湿度条件：T=18℃，RH=47%；薄层板：硅胶G板；显色剂：10%氢氧化钾甲醇溶液；样品编号：1.丹参酮ⅡA、补骨脂素、异补骨脂素混合对照品；2.丹参对照药材；3.补骨脂对照药材；4.成品供试品溶液；5.成品供试品溶液。

考察在湿度相同65%，温度分别在5℃、20℃、35℃下的薄层展开情况。

照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502）试验，吸取成品供试品溶液、对照药材溶液各3μl，混合对照品溶液5µl，进行薄层鉴别试验，采用条带状点样（8mm），分别点于同一硅胶G薄层板上，重复点3块板，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（14:1:0.5）为展开剂，控制湿度一致（65%），温度分别在5℃、20℃、35℃下展开，取出，晾干，先在日光下检视，喷以10%氢氧化钾甲醇溶液，在日光下检视，置105℃加热数分钟后，在365nm紫外光灯（365nm）下放置5分钟后检视。

如图17-19所示，在湿度相同，温度变化加大的条件下，薄层展开效果相当，斑点分离效果好，检视清晰，说明温度变化的影响小。图17中：展开剂配比：甲苯-乙酸乙酯-甲酸（14:1:0.5）；展开温湿度条件： T=5℃，RH=65%；显色剂：10%氢氧化钾甲醇溶液；样品编号：1.丹参酮ⅡA、补骨脂素、异补骨脂素混合对照品；2.丹参对照药材；3.成品供试品溶液；4.补骨脂对照药材；5.成品供试品溶液。图18中：展开剂配比：甲苯-乙酸乙酯-甲酸（14:1:0.5）；展开温湿度条件： T=20℃，RH=65%；显色剂：10%氢氧化钾甲醇溶液；样品编号：1.丹参酮ⅡA、补骨脂素、异补骨脂素混合对照品；2.丹参对照药材；3.成品供试品溶液；4.补骨脂对照药材；5.成品供试品溶液。图19中：展开剂配比：甲苯-乙酸乙酯-甲酸（14:1:0.5）；展开温湿度条件： T=35℃，RH=65%；显色剂：10%氢氧化钾甲醇溶液；样品编号：1.丹参酮ⅡA、补骨脂素、异补骨脂素混合对照品；2.丹参对照药材；3.成品供试品溶液；4.补骨脂对照药材；5.成品供试品溶液。

考察在温度为25℃，湿度分别为32%、65%、88%条件下，薄层展开情况。

照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502）试验，吸取成品供试品溶液及各对照药材溶液各3µl，丹参酮ⅡA、补骨脂素、异补骨脂素混合对照品溶液5μl，进行薄层鉴别试验，采用条带状点样（8mm），分别点于同一硅胶G薄层板上，重复点3块板，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（14:1:0.5）为展开剂，控制温度一致（25℃），湿度分别在32%、65%、88%下展开，取出，晾干，先在日光下检视，喷以10%氢氧化钾甲醇溶液，在日光下检视，置105℃加热数分钟后，在365nm紫外光灯（365nm）下放置5分钟后检视。

如图20-22所示，在温度不变，湿度变化较大的情况下，供试品色谱展开后的分离效果好，检视清晰，说明湿度变化的影响小。图20中：展开剂配比：甲苯-乙酸乙酯-甲酸（14:1:0.5）；展开温湿度条件： T=25℃，RH=32%；显色剂：10%氢氧化钾甲醇溶液；样品编号：1.丹参酮ⅡA、补骨脂素、异补骨脂素混合对照品；2.丹参对照药材；3.成品供试品溶液；4.补骨脂对照药材；5.成品供试品溶液。图21中：展开剂配比：甲苯-乙酸乙酯-甲酸（14:1:0.5）；展开温湿度条件： T=25℃，RH=65%；显色剂：10%氢氧化钾甲醇溶液；样品编号：1.丹参酮ⅡA、补骨脂素、异补骨脂素混合对照品；2.丹参对照药材；3.成品供试品溶液；4.补骨脂对照药材；5.成品供试品溶液。图22中：展开剂配比：甲苯-乙酸乙酯-甲酸（14:1:0.5）；展开温湿度条件： T=25℃，RH=88%；显色剂：10%氢氧化钾甲醇溶液；样品编号：1.丹参酮ⅡA、补骨脂素、异补骨脂素混合对照品；2.丹参对照药材；3.补骨脂对照药材；4.成品供试品溶液；5.成品供试品溶液。

结论：通过以上对不同厂家生产的硅胶G薄层板的考察，以及对温湿度的考察结果可以得知，该方法的耐用性好。

2.3.2仙灵骨葆胶囊（淫羊藿、续断）耐用性

采用不同生产厂家的硅胶G薄层板进行比较实验：

1自制硅胶G薄层板，批号：20190109

2 国药集团化学试剂有限公司生产硅胶G薄层板，批号：20180529

3 青岛海浪硅胶干燥剂有限公司生产硅胶G薄层板，批号：20140820

4 青岛海洋化工有限公司生产硅胶G薄层板，批号：20180801

如图23-26所示，不同厂家生产的硅胶G薄层板对成品（淫羊藿、续断）均能达到很好的色谱展开效果，供试品色谱在日光及365nm紫外光灯（365nm）下斑点检视清晰。图23中：展开剂配比：三氯甲烷-甲醇-水（7:3:1）的下层溶液；薄层板：自制硅胶G板；展开温湿度条件： T=18℃，RH=54%；显色剂：3%三氯化铝乙醇溶液、10%硫酸乙醇溶液；样品编号：1.淫羊藿苷、川续断皂苷Ⅵ混合对照品；2.淫羊藿对照药材；3.成品供试品溶液；4.续断对照药材；5.成品供试品溶液。图24中：展开剂配比：三氯甲烷-甲醇-水（7:3:1）的下层溶液；薄层板：国药厂家硅胶G薄层板；展开温湿度条件：T=19℃，RH=54%；显色剂：3%三氯化铝乙醇溶液、10%硫酸乙醇溶液；样品编号：1.淫羊藿苷、川续断皂苷Ⅵ混合对照品；2.淫羊藿对照药材；3.成品供试品溶液；4.续断对照药材；5.成品供试品溶液.。图25中：展开剂配比：三氯甲烷-甲醇-水（7:3:1）的下层溶液；薄层板：海浪厂家硅胶G薄层板；展开温湿度条件：T=19℃,RH=56%；显色剂：3%三氯化铝乙醇溶液、10%硫酸乙醇溶液；样品编号：1.淫羊藿苷、川续断皂苷Ⅵ混合对照品；2.淫羊藿对照药材；3.成品供试品溶液；4.续断对照药材；5.成品供试品溶液。图26中：展开剂配比：三氯甲烷-甲醇-水（7:3:1）的下层溶液；薄层板：海洋厂家硅胶G薄层板；展开温湿度条件： T=18℃，RH=54%；显色剂：3%三氯化铝乙醇溶液、10%硫酸乙醇溶液；样品编号：1.淫羊藿苷、川续断皂苷Ⅵ混合对照品；2.淫羊藿对照药材；3.成品供试品溶液；4.续断对照药材；5.成品供试品溶液。

考察在湿度相同65%，温度分别在5℃、20℃、35℃下的薄层展开情况。

照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502）试验，吸取成品供试品溶液及淫羊藿对照药材溶液各2μl，续断对照药材3µl，淫羊藿苷、川续断皂苷Ⅵ混合对照品溶液5μl，进行薄层鉴别试验，采用条带状点样（8mm），分别点于同一硅胶G薄层板上，重复点3块板，以三氯甲烷-甲醇-水（7:3:1）的下层溶液为展开剂，控制湿度一致（65%），温度分别在5℃、20℃、35℃下展开，取出，晾干，先喷以3%三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热数分钟，置365nm紫外光灯（365nm）下检视，再喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。

如图27-29所示，在湿度相同，温度变化较大的条件下，薄层展开后，各供试品溶液均能达到较好的分离效果，说明温度变化的影响不大。图27中：展开剂配比：三氯甲烷-甲醇-水（7:3:1）的下层溶液；展开温湿度条件： T=5℃，RH=65%；显色剂：3%三氯化铝乙醇溶液、10%硫酸乙醇溶液；样品编号：1.淫羊藿苷、川续断皂苷Ⅵ混合对照品；2.淫羊藿对照药材；3.成品供试品溶液；4.续断对照药材；5.成品供试品溶液。图28中：展开剂配比：三氯甲烷-甲醇-水（7:3:1）的下层溶液；展开温湿度条件： T=20℃，RH=65%

显色剂：3%三氯化铝乙醇溶液、10%硫酸乙醇溶液；样品编号：1.淫羊藿苷、川续断皂苷Ⅵ混合对照品；2.淫羊藿对照药材；3.成品供试品溶液；4.续断对照药材；5.成品供试品溶液。图29中：展开剂配比：三氯甲烷-甲醇-水（7:3:1）的下层溶液；展开温湿度条件： T=35℃，RH=65%；显色剂：3%三氯化铝乙醇溶液、10%硫酸乙醇溶液；样品编号：1.淫羊藿苷、川续断皂苷Ⅵ混合对照品；2.淫羊藿对照药材；3.成品供试品溶液；4.续断对照药材；5.成品供试品溶液。

考察在温度为25℃，湿度分别为32%、65%、88%条件下，薄层展开情况。

照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502）试验，吸取成品供试品溶液及淫羊藿对照药材溶液各2μl、续断对照药材溶液3µl，淫羊藿苷、川续断皂苷Ⅵ混合对照品溶液5μl，进行薄层鉴别试验，采用条带状点样（8mm），分别点于同一硅胶G薄层板上，重复点3块板，以三氯甲烷-甲醇-水（7:3:1）的下层溶液为展开剂，控制温度一致（25℃），湿度分别在32%、65%、88%下展开，取出，晾干，先喷以3%三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热数分钟，置365nm紫外光灯（365nm）下检视，再喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。

如图30-32所示，在温度不变，湿度变化较大的情况下，供试品斑点的呈点性及分离效果均较好，说明湿度变化的影响小。图30中：展开剂配比：三氯甲烷-甲醇-水（7:3:1）的下层溶液；展开温湿度条件： T=25℃，RH=32%；显色剂：3%三氯化铝乙醇溶液、10%硫酸乙醇溶液；样品编号：1.淫羊藿苷、川续断皂苷Ⅵ混合对照品；2.淫羊藿对照药材；3.成品供试品溶液；4.续断对照药材；5.成品供试品溶液。图31中：展开剂配比：三氯甲烷-甲醇-水（7:3:1）的下层溶液；展开温湿度条件： T=25℃，RH=65%；显色剂：3%三氯化铝乙醇溶液、10%硫酸乙醇溶液；样品编号：1.淫羊藿苷、川续断皂苷Ⅵ混合对照品；2.淫羊藿对照药材；3.成品供试品溶液；4.续断对照药材；5.成品供试品溶液。图32中：展开剂配比：三氯甲烷-甲醇-水（7:3:1）的下层溶液；展开温湿度条件： T=25℃，RH=88%；显色剂：3%三氯化铝乙醇溶液、10%硫酸乙醇溶液；样品编号：1.淫羊藿苷、川续断皂苷Ⅵ混合对照品；2.淫羊藿对照药材；3.续断对照药材；4.成品供试品溶液；5.成品供试品溶液。

结论：通过以上对不同厂家生产的硅胶G薄层板的考察，以及对温湿度的考察结果可以得知，该方法的耐用性好。

2.3.3仙灵骨葆胶囊（知母）耐用性

采用不同生产厂家的硅胶G薄层板进行比较实验：

1自制硅胶G薄层板，批号：20180705

2 国药集团化学试剂有限公司生产硅胶G薄层板，批号：20180126

3 青岛海洋化工有限公司生产硅胶G薄层板，批号：20180801

4 青岛海洋化工有限公司生产硅胶G薄层板，批号：20180801

如图33-36所示，不同厂家生产的硅胶G薄层板展开后，除自制的硅胶G板展开效果较差外，其余均能对成品（知母）达到很好的色谱展开效果，供试品色谱在日光下斑点检视清晰。图33中：展开剂配比：三氯甲烷-甲醇-甲酸-水（6.5:3.5:0.5：1.5）的下层溶液；正丁醇-三氯甲烷-甲酸（4：0.5：0.5）；薄层板：自制硅胶G板；展开温湿度条件： T=19℃，RH=53%；显色剂：5%香草醛硫酸溶液-乙醇（1：6）的混合溶液；样品编号：1.知母皂苷BⅡ对照品（1mg/ml）；2.知母对照药材；3.成品供试品溶液；4.成品供试品溶液。图34中：展开剂配比：三氯甲烷-甲醇-甲酸-水（6.5:3.5:0.5：1.5）的下层溶液；正丁醇-三氯甲烷-甲酸（4：0.5：0.5）；薄层板：国药厂家硅胶G板；展开温湿度条件： T=15℃，RH=57%；显色剂：5%香草醛硫酸溶液-乙醇（1：6）的混合溶液；样品编号：1.知母皂苷BⅡ对照品（1mg/ml）；2.成品供试品溶液；3.知母对照药材；4.成品供试品溶液。图35中：展开剂配比：三氯甲烷-甲醇-甲酸-水（6.5:3.5:0.5：1.5）的下层溶液；正丁醇-三氯甲烷-甲酸（4：0.5：0.5）；薄层板：海洋厂家硅胶G板；展开温湿度条件： T=15℃，RH=57%；显色剂：5%香草醛硫酸溶液-乙醇（1：6）的混合溶液；样品编号：1.知母皂苷BⅡ对照品（1mg/ml）；2.成品供试品溶液；3.知母对照药材；4.成品供试品溶液。图36中：展开剂配比：三氯甲烷-甲醇-甲酸-水（6.5:3.5:0.5：1.5）的下层溶液；正丁醇-三氯甲烷-甲酸（4：0.5：0.5）；薄层板：海浪厂家硅胶G板；展开温湿度条件： T=19℃，RH=53%；显色剂：5%香草醛硫酸溶液-乙醇（1：6）的混合溶液；样品编号：1.知母皂苷BⅡ对照品（1mg/ml）；2.知母对照药材；3.成品供试品溶液；4.成品供试品溶液。

考察在湿度相同65%，温度分别在5℃、20℃、35℃下的薄层展开情况。

照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502）试验，吸取成品供试品溶液、及知母皂苷BⅡ对照品溶液各5µl，知母对照药材溶液3μl，进行薄层鉴别试验，采用条带状点样，分别点于同一硅胶G薄层板上，重复点3块板，控制湿度一致（65%），温度分别在5℃、20℃、35℃下展开，先以三氯甲烷-甲醇-甲酸-水（6.5:3.5:0.5:1.5）的下层溶液展开，取出，晾干，再以正丁醇-三氯甲烷-甲酸（4：0.5：0.5）展开，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液-乙醇（1：6）的混合溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。

如图37-39所示，在湿度相同，温度变化较大的条件下，薄层展开后，斑点的Rf值随着温度升高而有所增大，但不影响检视效果，说明温度变化的影响不大。图37中：展开剂配比：三氯甲烷-甲醇-甲酸-水（6.5:3.5:0.5：1.5）的下层溶液；正丁醇-三氯甲烷-甲酸（4：0.5：0.5）；展开温湿度条件： T=5℃，RH=65%；显色剂：5%香草醛硫酸溶液-乙醇（1：6）的混合溶液；样品编号：1.知母皂苷BⅡ对照品（1mg/ml）；2.成品供试品溶液；3.知母对照药材；4.成品供试品溶液。图38中：展开剂配比：三氯甲烷-甲醇-甲酸-水（6.5:3.5:0.5：1.5）的下层溶液；正丁醇-三氯甲烷-甲酸（4：0.5：0.5）；展开温湿度条件： T=20℃，RH=65%；显色剂：5%香草醛硫酸溶液-乙醇（1：6）的混合溶液；样品编号：1.知母皂苷BⅡ对照品（1mg/ml）；2.成品供试品溶液；3.知母对照药材；4.成品供试品溶液。图39中：展开剂配比：三氯甲烷-甲醇-甲酸-水（6.5:3.5:0.5：1.5）的下层溶液；正丁醇-三氯甲烷-甲酸（4：0.5：0.5）；展开温湿度条件： T=35℃，RH=65%；显色剂：5%香草醛硫酸溶液-乙醇（1：6）的混合溶液；样品编号：1.知母皂苷BⅡ对照品（1mg/ml）；2.成品供试品溶液；3.知母对照药材；4.成品供试品溶液。

考察在温度为25℃，湿度分别为32%、65%、88%条件下，薄层展开情况。

照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502）试验，吸取成品供试品溶液、知母皂苷BⅡ对照品溶液各5µl，知母对照药材溶液3μl，进行薄层鉴别试验，采用条带状点样，分别点于同一硅胶G薄层板上，重复点3块板，控制温度一致（25℃），湿度分别在32%、65%、88%下展开，先以三氯甲烷-甲醇-甲酸-水（6.5:3.5:0.5:1.5）的下层溶液展开，取出，晾干，再以正丁醇-三氯甲烷-甲酸（4：0.5：0.5）展开，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液-乙醇（1：6）的混合溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。

如图40-42所示，在温度不变，湿度变化较大的情况下，对供试品斑点的呈点性有一定的影响，斑点的呈点性随着湿度在增大变差，但不影响薄层色谱的检视，说明湿度变化的影响小。图40中：展开剂配比：三氯甲烷-甲醇-甲酸-水（6.5:3.5:0.5：1.5）的下层溶液；正丁醇-三氯甲烷-甲酸（4：0.5：0.5）；展开温湿度条件： T=25℃，RH=32%；显色剂：5%香草醛硫酸溶液-乙醇（1：6）的混合溶液；样品编号：1.知母皂苷BⅡ对照品（1mg/ml）；2.成品供试品溶液；3.知母对照药材；4.成品供试品溶液。图41中：展开剂配比：三氯甲烷-甲醇-甲酸-水（6.5:3.5:0.5：1.5）的下层溶液；正丁醇-三氯甲烷-甲酸（4：0.5：0.5）；展开温湿度条件：T=25℃，RH=65%；显色剂：5%香草醛硫酸溶液-乙醇（1：6）的混合溶液；样品编号：1.知母皂苷BⅡ对照品（1mg/ml）；2.成品供试品溶液；3.知母对照药材；4.成品供试品溶液。图42中：展开剂配比：三氯甲烷-甲醇-甲酸-水（6.5:3.5:0.5：1.5）的下层溶液；正丁醇-三氯甲烷-甲酸（4：0.5：0.5）；展开温湿度条件： T=25℃，RH=88%；显色剂：5%香草醛硫酸溶液-乙醇（1：6）的混合溶液；样品编号：1.知母皂苷BⅡ对照品（1mg/ml）；2.成品供试品溶液；3.知母对照药材；4.成品供试品溶液。

结论：通过以上对不同厂家生产的硅胶G薄层板的考察，以及对温湿度的考察结果可以得知，该方法的耐用性好。

2.4样品稳定性考察

2.4.1仙灵骨葆胶囊（淫羊藿、续断）样品稳定性考察

取同一批次仙灵骨葆胶囊成品粉末各1g，加30ml甲醇，超声处理30分钟，滤过。滤液蒸干，残渣加水10ml溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶液，分别放置1天、3天、6天、9天，作为供试品溶液，另取淫羊藿对照药材0.2g，续断对照药材0.3g，同法制成淫羊藿对照药材、续断对照药材溶液。

照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502）试验，吸取上述成品供试品溶液、淫羊藿对照药材溶液各2µl，续断对照药材溶液3μl，淫羊藿苷、川续断皂苷Ⅵ混合对照品溶液5μl，进行薄层鉴别试验，采用条带状点样（8mm），分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（7:3:1）的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，先喷以3%三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热数分钟，置365nm紫外光灯（365nm）下检视，再喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。

如图43所示，考察了成品供试品溶液分别放置1天、3天、6天、9天的薄层展开情况，喷以10%硫酸乙醇显色后，分别在365nm紫外光灯（365nm）及日光下检视，各供试品色谱展开效果相当，各色谱斑点检视清晰，说明仙灵骨葆胶囊供试品溶液在1-9天稳定性较好。图43中：展开剂配比：三氯甲烷-甲醇-水（7:3:1）的下层溶液；展开温湿度条件： T=25℃，RH=88%；显色剂：3%三氯化铝乙醇溶液、10%硫酸乙醇溶液；样品编号：1.淫羊藿苷、川续断皂苷Ⅵ混合对照品；2.淫羊藿对照药材；3.续断对照药材；4.成品供试品溶液（1天）；5.成品供试品溶液（3天）；6.成品供试品溶液（6天）；7.成品供试品溶液（9天）。

2.4.2仙灵骨葆胶囊（丹参、补骨脂）样品稳定性考察

取同一批次仙灵骨葆胶囊成品粉末各4g，加50ml乙醚，超声处理5分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，分别放置1天、3天、6天、9天，作为成品供试品溶液，另取丹参对照药材1g，同法制成丹参对照药材溶液，再取补骨脂对照药材0.2g，加20ml乙酸乙酯超声处理15分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为补骨脂对照药材溶液。

照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502）试验，吸取上述成品供试品溶液及各对照药材溶液各3µl，丹参酮ⅡA、补骨脂素、异补骨脂素混合对照品3μl，进行薄层鉴别试验，采用条带状点样（8mm），分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（14:1:0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，先在日光下检视，喷以10%氢氧化钾甲醇溶液，晾干，在日光下检视，置105℃加热数分钟，在365nm紫外光灯（365nm）下放置5分钟检视。

如图44所示，考察了同一批次样品在分别放置1天、3天、6天、9天后，点于同一硅胶G板的展开情况，未喷显色剂前预喷以10%氢氧化钾甲醇溶液显色后分别在日光及365nm紫外光灯（365nm）下检视，各成品供试品溶液色谱展开效果相当，检视效果相当，说明仙灵骨葆胶囊成品供试品溶液在1-9天稳定性好。图44中：展开剂配比：甲苯-乙酸乙酯-甲酸（14:1:0.5）；展开温湿度条件： T=25℃，RH=88%；显色剂：10%氢氧化钾甲醇溶液；样品编号：1.丹参酮ⅡA、补骨脂素、异补骨脂素混合对照品；2.丹参对照药材；3.补骨脂对照药材；4.成品供试品溶液（1天）；5.成品供试品溶液（3天）；6.成品供试品溶液（6天）；7.成品供试品溶液（9天）。

2.4.3仙灵骨葆胶囊（知母）样品稳定性考察

取同一批次仙灵骨葆胶囊粉末各3g，置具塞锥形瓶中，加50ml甲醇，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取3次，每次15ml，弃去乙酸乙酯层，合并水层，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次15ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤4次，每次20ml，取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，分别放置1天、3天、6天、9天，作为供试品溶液。另取知母对照药材0.2g，同法制成知母对照药材溶液。再取知母皂苷BⅡ对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的对照品溶液。

照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502）试验，吸取上述成品供试品溶液及对照品溶液各5µl，知母对照药材溶液3μl，进行薄层鉴别试验，采用条带状点样，分别点于同一硅胶G薄层板上，先以三氯甲烷-甲醇-甲酸-水（6.5:3.5:0.5:1.5）的下层溶液展开，取出，晾干，再以正丁醇-三氯甲烷-甲酸（4：0.5：0.5）展开，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液-乙醇（1：6）的混合溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。

如图45所示，分别考察了仙灵骨葆胶囊供试品溶液分别放置1天、3天、6天、9天后，点于同一硅胶G板上，薄层展开情况，喷显色剂显色后，在日光下检视，各供试品溶液的薄层展开效果相当，各供试品溶液斑点检视清晰，分离效果好，说明仙灵骨葆胶囊供试品溶液在1-9稳定性较好。图45中：展开剂配比：三氯甲烷-甲醇-甲酸-水（6.5:3.5:0.5：1.5）的下层溶液；正丁醇-三氯甲烷-甲酸（4：0.5：0.5）；展开温湿度条件： T=25℃，RH=88%；显色剂：5%香草醛硫酸溶液-乙醇（1：6）的混合溶液；样品编号：1.知母皂苷BⅡ对照品（1mg/ml）；2.知母对照药材；3.成品供试品溶液（1天）；4.成品供试品溶液（3天）；5.成品供试品溶液（6天）；6.成品供试品溶液（9天）。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，还包括颗粒制剂、药片制剂，均可采用本发明的方法进行鉴定，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内，因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。

Claims (3)

1.一种仙灵骨葆胶囊成品检测方法，所述仙灵骨葆胶囊由原材料淫羊藿、续断、丹参、知母、补骨脂和地黄通过以下方法制备而得：续断、丹参、补骨脂粉碎成细粉，淫羊藿、知母和地黄加水煎煮三次，合并煎液，浓缩至稠膏，加入所述细粉，混匀，制成颗粒，干燥，装入胶囊即得，其特征在于：所述仙灵骨葆胶囊成品检测方法包括以下具体步骤：

A、丹参和补骨脂鉴别：以丹参和补骨脂为对照药材，以丹参酮ⅡA、补骨脂素、异补骨脂素为对照品，采用同一薄层色谱法同时鉴别仙灵骨葆胶囊内容物中丹参和补骨脂；

其中，所述采用同一薄层色谱法同时鉴别仙灵骨葆胶囊内容物中丹参和补骨脂，包括以下具体步骤：

1）供试品溶液的制备：取仙灵骨葆胶囊成品内容物3-5g，置具塞锥形瓶中，加45-55ml乙醚，超声处理4-6分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1-3ml使溶解，作为供试品溶液；

2）对照药材溶液的制备：取丹参对照药材0.8-1.2g，采用步骤1）的方法制成丹参对照药材溶液；

再取补骨脂对照药材0.1-0.3g，加乙酸乙酯18-22ml，超声处理13-16分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1.5-2.5ml使溶解，作为补骨脂对照药材溶液；

3）对照品溶液的制备：取丹参酮ⅡA对照品、补骨脂素对照品和异补骨脂素对照品，分别加乙酸乙酯制成每1ml含丹参酮ⅡA 0.5mg、补骨脂素0.2mg、异补骨脂素0.2mg的混合溶液，作为对照品溶液；

4）吸取步骤1）-3）中制备的四种溶液各2-5µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条带状，以体积比14:1:0.5的甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，在日光下检视；供试品色谱中，在与丹参对照药材和丹参酮ⅡA对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以10%氢氧化钾甲醇溶液，晾干，在日光下检视；供试品色谱中，在与补骨脂对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置105℃下加热3-6分钟，在365nm紫外光下放置4-6分钟检视；供试品色谱中，在与补骨脂对照药材和补骨脂素、异补骨脂素对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

B、淫羊藿与续断鉴别：以淫羊藿和续断为对照药材，以淫羊藿苷、川续断皂苷Ⅵ为对照品，采用同一薄层色谱法同时鉴别仙灵骨葆胶囊内容物中淫羊藿与续断；

其中，所述采用同一薄层色谱法同时鉴别仙灵骨葆胶囊内容物中淫羊藿与续断，包括以下具体步骤：

（1）供试品溶液的制备：取仙灵骨葆胶囊成品内容物0.8-1.2g，置具塞锥形瓶中，加28-32ml甲醇，超声处理20-30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10-15ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取1-3次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1-3ml使溶解，作为供试品溶液；

（2）对照药材溶液的制备：取淫羊藿对照药材和续断对照药材各0.1-0.3g，采用步骤（1）的方法分别制成淫羊藿对照药材溶液和续断对照药材溶液；

（3）对照品溶液的制备：取淫羊藿苷对照品和川续断皂苷Ⅵ对照品，分别加甲醇制成每1ml分别含0.2mg和1mg的溶液，作为淫羊藿苷对照品溶液和川续断皂苷Ⅵ对照品溶液；

（4）吸取步骤（1）-（3）中制备的五种溶液各2-5µl，进行薄层鉴别试验，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条带状，以体积比7:3:1三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3%三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热3-6分钟，置365nm紫外光下检视；供试品色谱中，在与淫羊藿对照药材和淫羊藿苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；再喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视；供试品色谱中，在与续断对照药材和川续断皂苷Ⅵ对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

C、知母鉴别：以知母为对照药材，以知母皂苷BⅡ为对照品，采用薄层色谱法鉴别仙灵骨葆胶囊内容物中知母。

2.根据权利要求1所述的一种仙灵骨葆胶囊成品检测方法，其特征在于：所述采用薄层色谱法鉴别仙灵骨葆胶囊内容物中知母，包括以下具体步骤：

1）供试品溶液的制备：取仙灵骨葆胶囊成品内容物2-4g，置具塞锥形瓶中，加50-60ml甲醇，超声处理20-30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水18-22ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取1-3次，每次15ml，弃去乙酸乙酯层，合并水层，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次15ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤4次，每次20ml，取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇0.8-1.2ml使溶解，作为供试品溶液；

2）对照药材溶液的制备：取知母对照药材0.1-0.3g，采用步骤1）的方法制成知母对照药材溶液；

3）对照品溶液的制备：取知母皂苷BⅡ对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的知母皂苷BⅡ对照品溶液；

4）吸取步骤1）-3）中制备的三种溶液各2-5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条带状，以体积比6.5:3.5:0.5:1.5的三氯甲烷-甲醇-甲酸-水的下层溶液展开，取出，晾干，再以体积比4:0.5:0.5的正丁醇-三氯甲烷-甲酸展开，取出，晾干，喷以体积比1:6的5%香草醛硫酸溶液-乙醇的混合溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视；供试品色谱中，在与知母皂苷BⅡ对照品和知母对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

3.根据权利要求1-2任一项所述的 一种仙灵骨葆胶囊成品检测方法，其特征在于：仙灵骨葆胶囊成品检测方法包括以下具体步骤：

A、丹参和补骨脂鉴别：

供试品溶液的制备：取仙灵骨葆胶囊成品内容物4g，置具塞锥形瓶中，加50ml乙醚，超声处理5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液；

对照药材溶液的制备：取丹参对照药材1g，采用供试品溶液的制备的方法制成丹参对照药材溶液；

再取补骨脂对照药材0.2g，加乙酸乙酯20ml，超声处理14分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为补骨脂对照药材溶液；

对照品溶液的制备：取丹参酮ⅡA对照品、补骨脂素对照品和异补骨脂素对照品，分别加乙酸乙酯制成每1ml含丹参酮ⅡA 0.5mg、补骨脂素0.2mg、异补骨脂素0.2mg的混合溶液，作为对照品溶液；

吸取上述四种溶液各3µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条带状，以体积比14:1:0.5的甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，在日光下检视；供试品色谱中，在与丹参对照药材和丹参酮ⅡA对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；喷以10%氢氧化钾甲醇溶液，晾干，在日光下检视；供试品色谱中，在与补骨脂对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置105℃下加热4分钟，在365nm紫外光下放置5分钟检视；供试品色谱中，在与补骨脂对照药材和补骨脂素、异补骨脂素对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

B、淫羊藿与续断鉴别：

供试品溶液的制备：取仙灵骨葆胶囊成品内容物1g，置具塞锥形瓶中，加30ml甲醇，超声处理25分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水13ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；

对照药材溶液的制备：取淫羊藿对照药材和续断对照药材各0.2g，采用供试品溶液的制备的方法分别制成淫羊藿对照药材溶液和续断对照药材溶液；

对照品溶液的制备：取淫羊藿苷对照品和川续断皂苷Ⅵ对照品，分别加甲醇制成每1ml分别含0.2mg和1mg的溶液，作为淫羊藿苷对照品溶液和川续断皂苷Ⅵ对照品溶液；

吸取上述五种溶液各3µl，进行薄层鉴别试验，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条带状，以体积比7:3:1三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3%三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热4分钟，置365nm紫外光下检视；供试品色谱中，在与淫羊藿对照药材和淫羊藿苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；再喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视；供试品色谱中，在与续断对照药材和川续断皂苷Ⅵ对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

C、知母鉴别：

供试品溶液的制备：取仙灵骨葆胶囊成品内容物3g，置具塞锥形瓶中，加55ml甲醇，超声处理25分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次15ml，弃去乙酸乙酯层，合并水层，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次15ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤4次，每次20ml，取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；

对照药材溶液的制备：取知母对照药材0.2g，采用供试品溶液的制备的方法制成知母对照药材溶液；

对照品溶液的制备：取知母皂苷BⅡ对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的知母皂苷BⅡ对照品溶液；

吸取上述三种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条带状，以体积比6.5:3.5:0.5:1.5的三氯甲烷-甲醇-甲酸-水的下层溶液展开，取出，晾干，再以体积比4:0.5:0.5的正丁醇-三氯甲烷-甲酸展开，取出，晾干，喷以体积比1:6的5%香草醛硫酸溶液-乙醇的混合溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视；供试品色谱中，在与知母皂苷BⅡ对照品和知母对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

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