CN110025788B - 一种变应原溶媒及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种变应原溶媒以及该溶媒的制备方法。通过在传统变应原溶媒的基础上添加相应的缓冲液以及抑菌剂成分，使得采用本发明提供的变应原溶媒稀释配制的变应原产品稳定，不易变色，活性蛋白不容易发生变性或被吸附在玻璃容器内表面，提高了需经溶媒稀释的变应原疫苗及变应原皮内诊断制剂的稳定性和效价，具有较高的推广价值。

Description

一种变应原溶媒及其制备方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种变应原溶媒及其制备方法。
背景技术
随着全球气候和人类生存环境的变化，过敏性疾病呈逐年上升的趋势。2010年WHO把变态反应性疾病定义为世界上第四类最重要的慢性疾病。目前，变态反应性疾病是全球性重大卫生问题之一。工业化国家超过25％的人口被变应性哮喘、变应性鼻结膜炎及变应性皮炎困扰。
上世纪初，牧草、杂草、树木等植物花粉的提取液广泛用于花粉症的体内、体外诊断和免疫治疗，世界卫生组织WHO在其关于免疫脱敏的指导性文件中明确指出：“脱敏治疗是唯一可以改变过敏性疾病自然进程的治疗方法”。在变应原特异性脱敏治疗的100多年历史中，治疗用的变应原产品经历了一系列的技术变革。从最初的变应原粗浸液到标准化的变应原疫苗(包括修饰变应原、基因重组变应原等)。目前为止最常用的特异性脱敏治疗方法仍然以皮下注射为主。
变应原溶媒主要用于使用变应原浸液的注射脱敏治疗中：用变应原溶媒将变应原浸液或标准化的变应原疫苗稀释成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5------等10倍稀释梯度系列后，通过皮试确定合适的起始最低剂量，然后从最低剂量开始逐级递增给药剂量直到增加到维持剂量并维持注射一段时间后完成整个疗程。目前全世界的变态反应特异性脱敏治疗主要采用这种方法。由于稀释梯度的范围极广(可达1012倍)，合适的变应原溶媒在治疗过程中是必不可少的。美国市场上90％以上产品都需要医生用变应原溶媒配制成合适浓度后给药。
近几年来，变应原疫苗生产企业正在研究开发变应原疫苗的冻干制剂。变应原疫苗的冻干制剂相对液体变应原疫苗较稳定，降低了变应原疫苗运输和储存的困难。变应原疫苗的冻干制剂在使用时也需要用变应原溶媒溶解后使用，所以开发一种稳定的变应原溶媒具有广泛的应用前景。
目前在中国市场的变应原溶媒的主要成分为含有苯酚的盐溶液，名称为变应原溶媒(Solvent of Allergen)，又称抗原溶媒，主要成分为：每9ml含氯化钠81mg；苯酚18mg，主要用于支气管哮喘、过敏性鼻炎、花粉症等速发型过敏性疾病配制脱敏注射用。
由于变应原疫苗在使用时可能需要以非常高的稀释比例稀释。高稀释度时变应原疫苗有效活性蛋白浓度很低，在此条件下蛋白稳定性差，而且容易因容器的吸附或者蛋白降解而损失，因此变应原缓冲液在不同稀释度下的稳定性，以及保证稀释液中的变应原疫苗的稳定性就非常重要，这是考察变应原缓冲液是否适用和稳定的最重要的标准。。
为此，研究人员作出了很多的努力，在溶媒中加入适宜浓度的人血白蛋白作为一种蛋白稳定剂是比较好的解决方法。国外上市的两种主要的变应原溶也是这样设计，其组分如下所示：
国外上市变应原溶媒A由0.9g/100ml氯化钠、0.03g/100ml人血白蛋白、0.4g/100ml苯酚组成；
国外上市变应原溶媒B由0.8g/100ml氯化钠、0.03g/100ml人血白蛋白、0.02g/ml氯化钾、0.12g/ml磷酸氢二钠、0.02g/100ml磷酸二氢钾组成；
其中，国外上市变应原溶媒A不含有缓冲液组分，在变应原疫苗贮存的过程中不能提供一种稳定的pH环境；国外上市变应原溶媒B的缓冲体系采用了PBS缓冲液(8g/100ml氯化钠、0.02g/100ml氯化钾、0.12g/100ml磷酸氢二钠、0.02g/100ml磷酸二氢钾)，但是由于该溶媒中不含有抑菌剂，易在脱敏治疗使用中染菌污染。另外，发明人发现大部分变应原疫苗蛋白的PI＜7.35(PI：等电点)，加入略偏碱性溶液中对变应原疫苗的使用保存更有利。而国外上市变应原溶媒B的缓冲体系的缓冲范围一般在pH7.2-7.4，会造成部分变应原疫苗蛋白沉淀，对变应原疫苗的使用保存效果略差。从临床效果来看，注射制剂液中的人血白蛋白的浓度影响到临床使用的痛感体验，从更优化的角度来看，需要进行更进一步的人血白蛋白的浓度筛选。而且苯酚作为一种抑菌剂的加入，需要对稀释使用的变应原浸液进行抑菌保护，但苯酚本身具有毒性，须对用量进行适当的调整。
另外，变应原溶媒的质量优劣，直接关系到用它稀释后的药液效价的高低。鉴于此，对变应原溶媒质量的要求必须达到国家制剂标准。在中国专利申请中，也公开了一种变应原溶媒及其制备方法(201110105489.5)。该变应原溶媒含有以下成分:人血白蛋白、氯化钠、苯酚和磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液，但该变应原溶媒的制备工艺操作性较差，得到的变应原溶媒的稳定性较差，而且本申请的变应原溶媒的配方中的缓冲体系是一个波动值，没有明确的配方配比，pH值的变化范围比较大，实际应用成倍稀释时，其pH值的变动范围更大，因此按照该专利申请所述制备方法不能制备出达到国家制剂标准的稳定产品。
因此，有必要提供一种安全有效、可以保障稳定性的变应原溶媒。
发明内容
为解决现有技术中存在的问题，本发明提供了一种相对稳定的pH环境，改善了稀释后的稳定性，提高了变应原疫苗使用时的有效性的变应原溶媒。
本发明是采用如下技术方案实现的：
本发明提供了一种变应原溶媒，所述变应原溶媒包含以下成分：人血白蛋白、氯化钠、磷酸盐缓冲液和苯酚抑菌剂，其中，所述磷酸盐缓冲液为磷酸二氢钾-磷酸氢二钠缓冲液。优选的，所述应变原溶媒包含：0.031％-0.042％质量比的人血白蛋白、0.45％-0.55％质量比氯化钠、0.21％-0.39％质量比的苯酚、0.030％-0.040％质量比的磷酸二氢钾、0.65％-0.75％质量比的磷酸氢二钠。
更优选的，所述变应原溶媒的配方为：0.036％质量比人血白蛋白、0.50％质量比的氯化钠、0.30％质量比的苯酚、0.036％质量比的磷酸二氢钾、0.70％质量比的磷酸氢二钠，余量为水。由于配制工艺与检测方法的误差及容器的吸附作用，上述配方得到的变应原溶媒中的各组分含量会有一定的波动。
优选的，所述变应原溶媒采用确定质量比的磷酸二氢钾和磷酸氢二钠缓冲体系，pH缓冲范围为7.8-8.2，略偏碱性，在溶媒产品稳定性方面更为出色，实验证明，高倍率稀释后的变应原疫苗制剂的pH值稳定性更好，其对变应原疫苗有效活性蛋白的保护也更好。而且临床数据显示，皮内诊断痛感较轻，病人体验更好。
本发明进一步提供上述变应原溶媒的的制备方法，包括以下步骤：
(1)分别配制磷酸盐缓冲溶液，苯酚和氯化钠溶液，并混匀；
(2)在混合溶液中，加入人血白蛋白，定容；
(3)过滤除去不溶杂质；
(4)除菌过滤；
(5)无菌分装。
优选的，上述方法包括以下步骤：
(1)在净化车间内D级洁净条件下，分别用注射用水配制磷酸盐缓冲溶液，苯酚和氯化钠溶液，溶解完全后，混匀备用；
(2)在净化车间内D级洁净条件下，在步骤(1)混匀的溶液中加入人血白蛋白搅拌混匀，用注射用水定容；
(3)在净化车间内D级洁净条件下，用0.22μm的滤膜过滤，除去不溶杂质；
(4)在净化车间内C级洁净条件下，将过滤后的溶液经无菌0.22μm膜或滤芯除菌过滤；
(5)在净化车间内B+A级洁净条件下，无菌分装。
(6)正常条件下，灯检；
(7)正常条件下，包装；
(8)[2，8]℃存放；
做两次过滤是因为直接经过0.22um滤膜不易通过，二次过滤可以减少除菌过滤时大颗粒对过滤效果的影响。
本发明进一步请求保护变应原溶媒在制备药物中的用途。
优选的，所述用途为用于制备治疗变态反应性疾病的药物。
优选的，所述用途用于稀释变应原制剂。
优选的，所述变应原制剂包括天然变应原提取物、重组变应原、类变应原、变应原肽段疫苗。
本发明提供的变应原溶媒的配方明确，且制备工艺操作性较强，可以制备出达到国家制剂标准的稳定产品。在变应原浸液的梯度稀释中，稀释液中的变应原疫苗有效活性蛋白的稳定性好，能保证有效稳定的治疗效果，而且临床痛感较轻，苯酚的用量经过适当控制，病人体验更好。
附图说明
图1.变应原溶媒制备的流程图
图2.等电聚焦(IEF)电泳结果图谱
图3.15例健康受试者对4种溶媒的VAS量表评分
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
人血白蛋白购自华兰生物工程股份有限公司，规格为10g(20％50ml)，在此只是为了说明本发明，不应该用来限制本发明的范围。特别指明，中国药品生产洁净区(室)的空气洁净级别标准如表1所示：
表1中国药品生产洁净区(室)的空气洁净级别标准
Figure BDA0002000364310000061
实施例1变应原溶媒配制
1、配方(以配制1000ml变应原溶媒为例)：
表2：变应原溶媒配方表
Figure BDA0002000364310000062
2、变应原溶媒配制
1)按照变应原溶媒配方称重70.64g磷酸氢二钠、1.44g磷酸二氢钾、20.00g氯化钠和12.00g苯酚，用2L注射用水完全溶解，备用；
2)量取7.2ml 20％的人血白蛋白，加入盐溶液中混匀，用注射用水定容至4.0L，混匀备用；
3)将0.22μm的聚醚砜滤膜预先用注射用水浸泡12小时以上，然后平放在滤器内金属网上，将滤器组装紧牢，将配制的浸提液用≤0.2MPa的压力进行正压过滤。[2，8]℃放置待用，保存期不超过30天；
4)将0.22μm的聚醚砜滤膜预先用注射用水浸泡12小时以上，然后平放在滤器内金属网上，将滤器组装紧牢，并进行完整性测试。检测合格后，与其他所需灭菌物品一同放入湿热灭菌柜进行湿热灭菌(121℃，30分钟)；
5)在净化车间内B+A级洁净条件下，将除菌滤器连接到滤瓶上，将溶液缓缓倒入滤桶内，接上压缩空气，用≤0.2MPa的压力进行正压过滤。用三层无菌布袋将除菌过滤后的无菌溶液接收瓶包裹放置储存待用。过滤完毕，将压力放掉，使压力达到0MPa，并将使用后的滤器进行完整性测试。若完整性测试不合格，重新灭菌过滤；
6)瓶、塞、器具、滤器灭菌，将除菌过滤后的溶液按照0.90±0.05ml/瓶的装量进行无菌分装，压塞，轧盖。
7)连续批量生产三批，做稳定性研究。
3、各项检定指标如下：理化检测、无菌检查、人血白蛋白含量检测。
具体检测方法参照：
1)理化检测：
表3：理化检测指标
Figure BDA0002000364310000071
Figure BDA0002000364310000081
2)无菌检查：不得有菌生长，详见2015版药典三部通则1101；
3)人血白蛋白含量检测：[0.01％，0.04％]，检测方法：人血白蛋白(HSA)含量检测试剂盒(ELISA法)；
表4：理化检测结果
批次 第一批 第二批 第三批
理化检测 各项均符合规定 各项均符合规定 各项均符合规定
无菌检查 无菌生长 无菌生长 无菌生长
人血白蛋白含量检测 符合规定 符合规定 符合规定
实施例2：稳定性考察
根据(中国药典2015年版四部通则9001)中的原料药物与制剂稳定性试验指导原则，分别对实例1的三批溶媒进行影响因素试验、加速试验和长期试验的稳定性研究考察，以理化检测、无菌检查、人血白蛋白含量检测为考察指标，方法如同实例1。
1、影响因素试验：
1)高温试验：取实例1其中1批，除去外包装，置于40℃恒温箱中10天，于第5天和第10天取样考察。
2)高湿试验：取实例1其中1批，除去外包装，置于恒湿密闭容器中，在25℃分别于相对湿度90％±5％条件下放置10天，于第5天和第10天取样考察，同时准确称量试验前后重量，计算吸潮增重，以考察吸湿潮解性能。
3)强光照射试验：取实例1其中1批，除去外包装，置于装有日光灯的光照箱内，于照度为4500 lx±500 lx的条件下放置10天，于第5天和第10天取样考察。
测定结果见表5。与0天比较，样品的理化性质、无菌状态、人血白蛋白含量几乎没有变化，表明在影响因素试验条件下，样品基本稳定。
2、加速试验：
取实例1的三批溶媒，于温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置6个月，分别于第1个月、2个月、3个月、6个月末取样考察。
测定结果见表6。与0月比较，三批样品的理化性质、无菌状态、人血白蛋白含量几乎没有变化，表明在加速试验条件下，样品基本稳定。
3、长期试验：
取实例1的三批溶媒，于温度6℃±2℃条件下放置36个月，分别于3个月、6个月、9个月、12个月、18个月、24个月、36个月末取样考察(24个月、36个月考察时间未到，检测未开始)。
测定结果见表7。与0月比较，三批样品的理化性质、无菌状态、人血白蛋白含量几乎没有变化，表明在长期试验条件下，样品基本稳定。
表5：影响因素试验稳定性考察
Figure BDA0002000364310000091
表6：加速试验稳定性考察
Figure BDA0002000364310000101
表7：长期试验稳定性考察
Figure BDA0002000364310000102
Figure BDA0002000364310000111
实施例3：在变应原制剂梯度稀释应用中的溶液pH稳定性作用
本实验主要验证溶媒在变应原制剂梯度稀释应用中的溶液pH稳定性作用，采用等电聚焦(IEF)电泳进行变应原制剂有效活性蛋白的等电点PI测定作为辅助证明实验。用国内外市售变应原溶媒和本发明的变应原溶媒分别将10000AU/瓶(AU：allergy unit，变应原生物效价单位，是一种衡量变应原在特异性过敏患者体内皮试反应强度的生物效价单位)的葎草花粉变应原冻干参考品、10000AU/瓶的圆柏花粉变应原冻干参考品、10000AU/瓶的大籽蒿花粉变应原冻干参考品、10000AU/瓶的户尘螨变应原冻干参考品、10000AU/瓶的枝状枝孢变应原冻干参考品、10000AU/瓶的猫毛皮屑变应原冻干参考品稀释形成1、10-1、10-2三个梯度(因活性检测精度限制划定本梯度)，分别在0天、10天、1月、2月、3月、6月等时间段考察其pH值稳定性：
1、等电聚焦(IEF)电泳进行变应原制剂有效活性蛋白的等电点PI测定实验：
将10000AU/瓶的葎草花粉变应原冻干参考品、10000AU/瓶的圆柏花粉变应原冻干参考品、10000AU/瓶的标准化大籽蒿花粉变应原冻干参考品、10000AU/瓶的标准化户尘螨变应原冻干参考品、10000AU/瓶的标准化枝状枝孢变应原冻干参考品、10000AU/瓶的猫毛皮屑变应原冻干参考品复溶之后水化过夜，IEF电泳(电泳参数设置见表8)，电泳设备：GE的ElectrophoresisPower Supply-EPS3501XL。
表8：电泳参数设置表格
Figure BDA0002000364310000121
等电聚焦(IEF)电泳结果图谱见图2；
由结果可见：几种常见变应原制剂的大部分蛋白的PI＜7.35，加入略偏碱性溶液中对变应原制剂的使用保存更有利，而且不会影响人体注射使用。故最好采用pH缓冲范围略偏碱性的缓冲体系来制备溶媒。经筛选，确定采用pH缓冲范围为7.8-8.2的确定质量比的磷酸二氢钾和磷酸氢二钠缓冲体系来配制溶媒。
2、溶媒在变应原制剂梯度稀释应用中的溶液pH稳定性作用实验：
①、实验方法：用本发明实施例1提供的一批变应原溶媒，采用国内市售的变应原溶媒(成分为0.9％氯化钠、0.2％苯酚)、国外上市变应原溶媒A(成分：9g/100ml氯化钠、0.03g/100ml人血白蛋白、0.4g/100ml苯酚)与国外上市变应原溶媒B(成分：0.8g/100ml氯化钠、0.03g/100ml人血白蛋白、0.02g/ml氯化钾、0.12g/ml磷酸氢二钠、0.02g/100ml磷酸二氢钾)作为对比，分别将10000AU/瓶的葎草花粉变应原冻干参考品、10000AU/瓶的圆柏花粉变应原冻干参考品、10000AU/瓶的大籽蒿花粉变应原冻干参考品、10000AU/瓶的户尘螨变应原冻干参考品、10000AU/瓶的枝状枝孢变应原冻干参考品、10000AU/瓶的猫毛皮屑变应原冻干参考品稀释形成1、10-1、10-2三个梯度。
②、具体操作方法：是从上一个浓度的制剂中，用1ml注射器吸取0.1ml药液转移到0.9ml溶媒中，形成一个新的梯度。将稀释配制的变应原制剂分别置于2-8℃条件下，于0天、10天、1月、2月、3月、6月测定pH值。
葎草花粉变应原冻干参考品pH值测定结果见表9；
圆柏花粉变应原冻干参考品pH值测定结果见表10；
大籽蒿花粉变应原冻干参考品pH值测定结果见表11；
户尘螨变应原冻干参考品pH值测定结果见表12；
枝状枝孢变应原冻干参考品pH值测定结果见表13；
猫毛皮屑变应原冻干参考品pH值测定结果见表14；
结果总结：用实例1制备的变应原溶媒稀释配制的6种变应原冻干参考品在贮存6个月中，pH变化均不明显(P＞0.05)；而含缓冲液的变应原溶媒(国外上市变应原溶媒B)稀释配制的，前2个月pH变化均不明显(P＞0.05)，之后变化逐渐明显(P＜0.05)；不含缓冲液的变应原溶媒(国内市售的变应原溶媒与国外上市变应原溶媒A)稀释配制的，pH变化均明显(P＜0.05)。因pH变化是变应原疫苗活性损失一个主要原因，本发明的变应原溶媒含有稳定的略偏碱的缓冲体系，可以为一般PI＜7.35的变应原疫苗有效活性蛋白提供一个稳定pH环境，稳定变应原活性成分的活性。
表9：葎草花粉变应原冻干参考品pH值测定结果
Figure BDA0002000364310000141
表10：圆柏花粉变应原冻干参考品pH值测定结果
Figure BDA0002000364310000142
表11：大籽蒿花粉变应原冻干参考品pH值测定结果
Figure BDA0002000364310000151
表12：户尘螨变应原冻干参考品pH值测定结果
Figure BDA0002000364310000152
表13：枝状枝孢变应原冻干参考品pH值测定结果
Figure BDA0002000364310000161
表14：猫毛皮屑变应原冻干参考品pH值测定结果
Figure BDA0002000364310000162
实施例4：在变应原制剂梯度稀释应用中有效活性成分的稳定性作用
本实验模拟变应原临床使用的过程，用国内外市售变应原溶媒和本发明的变应原溶媒分别将10000AU/瓶的葎草花粉变应原冻干参考品、10000AU/瓶的圆柏花粉变应原冻干参考品、10000AU/瓶的大籽蒿花粉变应原冻干参考品、10000AU/瓶的户尘螨变应原冻干参考品、10000AU/瓶的枝状枝孢变应原冻干参考品、10000AU/瓶的猫毛皮屑变应原冻干参考品稀释形成1、10-1、10-2三个梯度(因活性检测精度限制划定本梯度)，理论活性依次为10000CAU/ml、1000CAU/ml、100CAU/ml，分别在各个时间段考察其活性：
1、实验方法：用本发明实施例1提供的一批变应原溶媒、国内市售的变应原溶媒(成分为0.9％氯化钠、0.2％苯酚)、国外上市变应原溶媒A(成分：0.9％氯化钠、0.03％人血白蛋白、0.4％苯酚)和国外上市变应原溶媒B(0.8％氯化钠、0.03％人血白蛋白、0.02％氯化钾、0.12％磷酸氢二钠、0.02％磷酸二氢钾)分别将10000AU/瓶的葎草花粉变应原冻干参考品、10000AU/瓶的圆柏花粉变应原冻干参考品、10000AU/瓶的大籽蒿花粉变应原冻干参考品、10000AU/瓶的户尘螨变应原冻干参考品、10000AU/瓶的枝状枝孢变应原冻干参考品、10000AU/瓶的猫毛皮屑变应原冻干参考品稀释形成1、10-1、10-2三个梯度(因活性检测精度限制划定本梯度)，理论活性依次为10000AU/ml、1000AU/ml、100AU/ml。
2、具体操作方法：是从上一个浓度的制剂中，用1ml注射器吸取0.1ml药液转移到0.9ml溶媒中，形成一个新的梯度。将四种溶媒稀释配制的变应原制剂分别置于2-8℃条件下，于0天、10天、1月、2月、3月、6月考察活性，其中活性的检测方法是用免疫荧光竞争抑制法。
葎草花粉变应原冻干参考品活性测定结果见表15；
圆柏花粉变应原冻干参考品活性测定结果见表16；
大籽蒿花粉变应原冻干参考品活性测定结果见表17；
户尘螨变应原冻干参考品活性测定结果见表18；
枝状枝孢变应原冻干参考品活性测定结果见表19；
猫毛皮屑变应原冻干参考品活性测定结果见表20；
结果总结：各品种变应原冻干参考品之间活性变化趋势基本一致，证明本实验使用的溶媒的适用范围均比较宽广，故进行统一总结。国内市售的变应原溶媒稀释配制的变应原制剂，放置6月，活性损失比较大；国外上市变应原溶媒A稀释配制的变应原制剂，在前3月中活性值预期理论值和实际测量值相差不大，但之后活性下降明显；国外上市变应原溶媒B稀释配制的变应原制剂，放置6月，活性变化不大；但比较而言，本发明的变应原溶媒的活性稳定性最好。
国内市售的变应原溶媒稀释配制的100AU/ml变应原制剂，实际测量活性和预期理论活性值相差较大，而本专利发明的变应原溶媒和国外上市变应原溶媒稀释配制的系列梯度变应原制剂，实际测量活性和预期理论活性值差异性不大。
原因分析：
1)因国内市售的变应原溶媒不但缺少磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液体系，而且未含有人血白蛋白，人血白蛋白作为一种蛋白稳定剂，对稀释浓度下的蛋白稳定有一定的作用，所以国内市售的变应原溶媒稀释下的变应原活性稳定性较差；
2)相比国外上市变应原溶媒A，本发明的变应原溶媒配以磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液体系，提高了溶液pH的稳定，维持了变应原活性的长期稳定性；
3)与国外上市的变应原溶媒B相比，本发明的变应原溶媒因稀释后pH更稳定，人血白蛋白浓度更为适宜，所以稀释后稳定性更好，而且含有0.30％苯酚，抑菌效果较好。
表15：葎草花粉变应原冻干参考品活性测定结果
Figure BDA0002000364310000191
表16：圆柏花粉变应原冻干参考品活性测定结果
Figure BDA0002000364310000192
Figure BDA0002000364310000201
表17：大籽蒿花粉变应原冻干参考品活性测定结果
Figure BDA0002000364310000202
Figure BDA0002000364310000211
表18：户尘螨变应原冻干参考品活性测定结果
Figure BDA0002000364310000212
表19：枝状枝孢变应原冻干参考品活性测定结果
Figure BDA0002000364310000213
Figure BDA0002000364310000221
表20：猫毛皮屑变应原冻干参考品活性测定结果
Figure BDA0002000364310000222
Figure BDA0002000364310000231
实施例5：在皮下免疫注射方面的应用
临床上皮下免疫注射，通常需使用变应原溶媒对不同种类的变应原进行稀释后进行皮下免疫注射，达到脱敏治疗目的，一般需进行1：100及更大浓度的稀释。本实施例利用视觉模拟评分法(VAS)考察人体主观上对变应原溶媒的疼痛程度。一般将疼痛的程度用0到10共11个数字表示，0表示无痛，10代表最痛，病人根据自身疼痛程度在这11个数字中挑选一个数字代表疼痛程度。VAS疼痛评分标准(0分-10分)如表21所示：
表21：VAS疼痛评分标准(0分-10分)
Figure BDA0002000364310000232
1、实验方法：配制本发明实施例1提供的一批变应原溶媒、国内市售的变应原溶媒(成分为0.9％氯化钠、0.2％苯酚)、国外上市变应原溶媒A(成分：0.9％氯化钠、0.03％人血白蛋白、0.4％苯酚)和国外上市变应原溶媒B(0.8％氯化钠、0.03％人血白蛋白、0.02％氯化钾、0.12％磷酸氢二钠、0.02％磷酸二氢钾)分别对15例健康受试者进行皮内注射，测定皮内注射VAS疼痛评分。
2、具体操作方法：分别对15例健康受试者(无致敏疾病人员)进行皮内注射，做好VAS疼痛评分评估15例健康受试者对4种溶媒的VAS量表评分结果见图3；
通过VAS疼痛评分结果分析：采用非参数检验，Mann-Whitney U Test方法进行两两比较，P＜0.05认为有统计学意义。对图3的统计结果分析显示，本发明制造的溶媒与其余三种比较，有统计学差异(P＜0.05)，且其VAS疼痛评分均值均低于其余三种。结果显示：在临床皮内注射方面，本发明制造的溶媒作为阴性对照液或者稀释溶剂均会使受试者的痛感减轻，体验更好。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (6)

1.一种变应原溶媒，其特征在于，所述变应原溶媒的配方为：0.036％质量比人血白蛋白、0.50％质量比的氯化钠、0.30％质量比的苯酚、0.036％质量比的磷酸二氢钾、0.70％质量比的磷酸氢二钠，余量为水，所述变应原溶媒的pH值为7.8- 8.2。
2.根据权利要求1所述的变应原溶媒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)分别配制磷酸盐缓冲溶液，苯酚和氯化钠溶液，并混匀；
(2)在混合溶液中，加入人血白蛋白，然后定容；
(3)过滤除去不溶杂质；
(4)除菌过滤；
(5)无菌分装。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)在净化车间内D级洁净条件下，分别用注射用水配制磷酸盐缓冲溶液，苯酚和氯化钠溶液，溶解完全后，混匀备用；
(2)在净化车间内D级洁净条件下，在步骤(1)混匀的溶液中加入人血白蛋白搅拌混匀，用注射用水定容；
(3)在净化车间内D级洁净条件下，用0.22μm的滤膜过滤，除去不溶杂质；
(4)在净化车间内C级洁净条件下，将过滤后的溶液经无菌0.22μm膜或滤芯除菌过滤；
(5)在净化车间内B+A级洁净条件下，无菌分装；
(6)正常条件下，灯检；
(7)正常条件下，包装。
4.权利要求1所述的变应原溶媒在制备药物中的用途，
所述用途为用于制备治疗变态反应性疾病的药物。
5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于：用于稀释变应原制剂。
6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述变应原制剂包括天然变应原提取物、重组变应原、类变应原、变应原肽段疫苗。
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