CN110012748A - 聚合雌蕊中单雌蕊的剥离方法 - Google Patents
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Abstract
一种聚合雌蕊中单雌蕊的剥离方法，涉及植物解剖领域。该聚合雌蕊中单雌蕊的剥离方法包括：将固定完成的聚合雌蕊复水，将复水后的聚合雌蕊经解离液解离以使单雌蕊间细胞排列由致密状态变为疏松状态，从聚合雌蕊的外层到内层自心皮尖端将单雌蕊层层剥离。该聚合雌蕊中单雌蕊的剥离方法，通过复水解离的步骤，使细胞壁中层的果胶质溶解，从而单雌蕊间细胞排列疏松，使得单雌蕊易于剥离，实现了剥离完整的单雌蕊的目的。
Description
技术领域
本申请涉及植物解剖领域，具体而言，涉及一种聚合雌蕊中单雌蕊的剥离方法。
背景技术
传统的聚合雌蕊中单雌蕊的剥离方法是将固定好的聚合雌蕊直接用镊子自心皮尖端剥离单雌蕊，但单雌蕊很难剥取，在剥的过程中，雌蕊易受损，很难剥离完整的单雌蕊。
发明内容
本申请提供一种聚合雌蕊中单雌蕊的剥离方法，以缓解现有的难以剥离完整的单雌蕊的现状。
根据本申请实施例提供的一种聚合雌蕊中单雌蕊的剥离方法，其包括：
将固定完成的聚合雌蕊复水，将复水后的聚合雌蕊经解离液解离以使单雌蕊间细胞排列由致密状态变为疏松状态，从聚合雌蕊的外层到内层自心皮尖端将单雌蕊层层剥离。
本申请提供的聚合雌蕊中单雌蕊的剥离方法，通过复水解离的步骤，使细胞壁中层的果胶质溶解，从而单雌蕊间细胞排列疏松，使得单雌蕊易于剥离，实现了剥离较为完整的单雌蕊的目的。
需要注意的是，固定步骤可以由使用者自行固定，也可以由第三方做，也即是直接获得固定好的聚合雌蕊，直接进行复水、解离、剥离的操作。
本申请中的聚合雌蕊是指离生心皮雌蕊，由多个新皮聚合形成聚合状，其中，单雌蕊是由心皮构成。
另外，根据本申请实施例的聚合雌蕊中单雌蕊的剥离方法还具有如下附加的技术特征：
本申请示出的一些实施例中，解离液包括碱性解离液和酸性解离液中的任一种，碱性解离液包括氢氧化钠溶液、氢氧化锂溶液或氢氧化钾溶液，酸性解离液包括盐酸溶液或醋酸溶液。需要说明的是，解离液的溶剂可以为水，也可以为其他的溶剂，例如酸性解离液为盐酸-乙醇溶液等，可选地，解离液的溶剂为水。
可选地，解离液包括质量浓度为2.5-3.2mol/L的氢氧化钠溶液。
上述氢氧化钠不仅容易获得，同时碱性适中，应用于聚合雌蕊中单雌蕊的剥离中，在上述浓度范围内，不仅解离效果佳，可有效使细胞壁中层的果胶质溶解，同时有效避免解离液破坏子房壁等组织。
可选地，解离包括：
将复水后的聚合雌蕊于58-62℃的解离液中浸泡预设时间。
该温度范围内，有效促进解离的效率，同时浸泡的方式，相比于将解离液喷洒于复水后的聚合雌蕊的方式，解离更为充分。
其中，加热手段有多种，例如水浴、油浴、微波加热等，由于本申请中的剥离过程中，为了保证聚合雌蕊的完整性，防止解离效果过于强烈导致细胞破损，因此，可选地，解离采用水浴加热，也即是，解离为58-62℃水浴解离。
本申请示出的一些实施例中，聚合雌蕊的长度大于2cm，聚合雌蕊浸泡于解离液中的预设时间随着其长度的增大而逐渐减小。
可选地，聚合雌蕊的长度大于2cm且不大于6cm。
采用本申请的剥离方法对于以上长度的聚合雌蕊的剥离效果佳。
可选地，聚合雌蕊包括长度大于2cm且不大于3cm的第一聚合雌蕊、长度大于3cm且不大于4cm的第二聚合雌蕊、以及长度大于4cm且不大于6cm的第三聚合雌蕊，第一聚合雌蕊浸泡于解离液中的预设时间大于6min且不超过6.5min，第二聚合雌蕊浸泡于解离液中的预设时间大于5.5min且不超过6min，第三聚合雌蕊浸泡于解离液中的预设时间大于5min且不超过5.5min。
可选地，聚合雌蕊包括长度大于0cm且不大于2cm的第四聚合雌蕊，以及长度大于4cm且不大于6cm的第三聚合雌蕊，第四聚合雌蕊浸泡于解离液中的预设时间小于第三聚合雌蕊浸泡于解离液中的预设时间。
可选地，第四聚合雌蕊浸泡于解离液中的预设时间不超过1min。
换言之，不同长度的聚合雌蕊解离所需时间也不同，根据不同长度的聚合雌蕊的实际情况，进行针对性的解离，通过解离时间的控制，以得到最佳的解离效果，保证单雌蕊易于剥离的同时，保证剥离的单雌蕊的完整度。
本申请示出的一些实施例中，聚合雌蕊的长度为大于0且不大于6cm。
需注意的是，本申请中，聚合雌蕊的长度为构成其的多个单雌蕊的最大长度，换言之，聚合雌蕊的部分单雌蕊的长度可以略小于聚合雌蕊的长度。
本申请提供的一些实施例中，固定采用FAA固定液；换言之，固定过程中采用的固定液包括FAA固定液。其中，FAA固定液又名标准固定液，其由体积浓度为50％或70％的乙醇、冰醋酸以及福尔马林(体积浓度为30-40％甲醛)按照体积比为90:5:5混合所得。
需注意的是，固定液还可以根据实际情况选择其他的，例如乙醇-福尔马林固定液或FPA固定液等。
可选地，复水包括对固定后的聚合雌蕊依次浸泡于浓度顺次减小的至少两组乙醇溶液中后再次浸泡于水中；
其中，在水中浸泡期间，每次浸泡8-12min后换水且至少换2次水，例如水中浸泡期间换水2、3或4次，有效提高复水的效果。
其中，乙醇溶液的乙醇体积浓度不大于固定液中的乙醇的体积浓度。
由于FAA是乙醇配制的，解离液是水配制的，通过上述复水操作，可以使细胞的状态和解离液一致，可以有效防止固定后的细胞吸水过多膨胀破碎，无法得到完整的单雌蕊。同时，浓度顺次减小的至少两组乙醇溶液可以使复水过程相比于直接放置于水中更为柔和，有效避免细胞吸水过多膨胀破碎。
可选地，换水处理两次。
可选地，本申请提供的一些具体的实施例中，FAA为体积浓度为50％的FAA，复水包括：将固定后的聚合雌蕊先浸泡于浓度为50％的乙醇溶液中，浸泡0.8-1.2h左右，再转至25-35％乙醇溶液中，浸泡0.8-1.2h左右，再置于水中浸泡8-12min后进行第一次换水，继续浸泡8-12min后进行第二次换水，继续浸泡8-12min即可。其中，为了防止因水中含有盐等杂质导致的复水效果不佳，可选地，水为超纯水。
需要说明的是50％FAA是指由体积浓度为50％乙醇、冰醋酸以及福尔马林(体积浓度为30-40％甲醛)按照体积比为90:5:5混合所得，本申请中简写为50％FAA。
可选地，固定包括：将聚合雌蕊浸泡于0-30℃的固定液中至少24h。
为了提高固定效率，固定温度为1-10℃。
本申请提供的一些实施例中，聚合雌蕊包括鹅掌楸聚合雌蕊。
需要说明的是，除了上述鹅掌楸聚合雌蕊，本申请提供的聚合雌蕊还可以为浆果等其他植物的聚合雌蕊。
需注意的是，本申请提供的聚合雌蕊中单雌蕊的剥离方法适用于新鲜的聚合雌蕊。
需要说明的是，本申请中，所有提及的体积浓度为30％、50％或70％的乙醇/乙醇溶液均指乙醇的水溶液。
本申请的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本申请的实践了解到。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本申请的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为鹅掌楸聚合雌蕊的显微示意图；
图2为本申请实施例1提供的剥离后的单雌蕊的照片；
图3为本申请对照组1提供的剥离后的单雌蕊的照片；
图4为本申请实施例2提供的剥离后的单雌蕊的照片；
图5为本申请对照组2提供的剥离后的单雌蕊的照片；
图6为本申请实施例3提供的剥离后的单雌蕊的照片；
图7为本申请对照组3提供的剥离后的单雌蕊的照片；
图8为本申请实施例4提供的剥离后的单雌蕊的照片；
图9为本申请对照组4提供的剥离后的单雌蕊的照片；
图10为本申请实施例5提供的剥离后的单雌蕊的照片；
图11为本申请对照组5提供的剥离后的单雌蕊的照片；
图12为本申请实施例6提供的剥离后的单雌蕊的照片；
图13为本申请对照组6提供的剥离后的单雌蕊的照片。
具体实施方式
为使本申请实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
鹅掌楸属，落叶乔木，树皮灰白色，纵裂小块状脱落；小枝具分隔的髓心。叶互生，具长柄，托叶与叶柄离生，花无香气，单生枝顶，与叶同时开放，两性，花被片9-17，3片1轮，近相等，蕊群无柄，心皮多数，螺旋状排列，分离，最下部不育，每心皮具胚珠2颗，自子房顶端下垂。聚合果纺锤状，成熟心皮木质，种皮与内果皮愈合，顶端延伸成翅状，鹅掌楸是供建筑、造船、家具、细木工的优良用材，亦可制胶合板；叶和树皮入药。树干挺直，树冠伞形，叶形奇特，古雅，为世界最珍贵的树种。鹅掌楸是异花受粉种类。
鹅掌楸的雌蕊研究是鹅掌楸研究中的一个重要组成部分，但是在实验过程中，申请人发现采用传统方式，即将固定好的聚合雌蕊采用镊子剥离单雌蕊时，单雌蕊很难剥取，在剥的过程中，雌蕊易受损，同时，其他的植物，例如浆果等的聚合雌蕊分离单雌蕊时也存在上述问题。
经申请人研究发现，其原因是聚合雌蕊中，单雌蕊之间细胞排列紧密，导致单雌蕊黏连过紧导致很难剥离完整的单雌蕊。例如如图1所示，其为鹅掌楸聚合雌蕊的显微示意图，其中，红色部分为单雌蕊之间的细胞，可以看出，单雌蕊间细胞排列紧密。
基于上述原因，申请人提出了本申请，以解决聚合雌蕊分离单雌蕊时易破碎、不完整的问题。
同时，实际的操作过程中，发明人发现，聚合雌蕊的长度与其心皮间细胞黏连程度以及心皮木质化程度具有一定的对应关系，以鹅掌楸为例，长度大于2cm且不大于3cm的聚合雌蕊的心皮间细胞黏连程度较重，且心皮木质化程度较轻，心皮黏连十分紧密，单心皮最难剥取，易将心皮剥碎；长度大于3cm且不大于4cm的聚合雌蕊逐渐成熟，心皮木质化程度加重，心皮黏连依旧紧密，但相比起长度大于2cm且不大于3cm的聚合雌蕊，其单心皮较容易剥取，但还是易将心皮剥碎。长度大于4cm且不大于6cm的聚合雌蕊心皮更加成熟，心皮木质化程度最重，虽然心皮黏连紧密，易将心皮剥碎，但相比于长度大于3cm且不大于4cm的聚合雌蕊，单心皮较容易剥取。
而长度大于0cm且不大于2cm的聚合雌蕊心皮较嫩，心皮间细胞黏连不是很紧密，因此，其较容易剥离。除了本申请提供的方法，长度大于0cm且不大于2cm的聚合雌蕊也可以采用经固定液固定后直接从聚合雌蕊的外圈到内圈自心皮尖端将单雌蕊层层剥离的方式剥离，其采用上述剥离方式剥离后较为完整。
本申请中采用的从聚合雌蕊的外层到内层自心皮尖端将单雌蕊层层剥离的具体方式例如为：一手用镊子将整个聚合雌蕊固定住，一手用镊子或解剖针将单心皮的柱头剖分轻轻挑起，然后，捏住柱头部分向子房方向拉，拉起一部分心皮，就将镊子向下捏一点，再继续拉，若拉的过程中单心皮有断的趋势，则停止下拉，将镊子插入单心皮和聚合雌蕊的交界处，轻轻将交界处的单心皮组织挑起，一点一点把整个单心皮从聚合雌蕊上剥离即可。
以下结合实施例对本申请的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
一种鹅掌楸聚合蕊中单雌蕊的剥离方法，其包括：
(1)固定：将采集的新鲜的鹅掌楸聚合雌蕊置于4℃的50％FAA固定液中24h，得到固定后的鹅掌楸聚合雌蕊。其中，采集的新鲜的鹅掌楸聚合雌蕊的长度为2.6cm。
(2)复水：对步骤(1)得到的固定后的所述聚合雌蕊先在50％乙醇溶液中，浸泡1h后，再转移至30％乙醇溶液中浸泡1h，再置于超净水中浸泡30min，在超净水中浸泡期间，每浸泡10min换一次水，共换水2次。
(3)解离：将步骤(2)中得到的复水后的鹅掌楸聚合雌蕊浸泡于3mol/L的氢氧化钠溶液中，在60℃水浴解离6.3min，以使单雌蕊间细胞排列由致密状态变为疏松状态，得到解离后的鹅掌楸聚合雌蕊。
(4)剥离：将步骤(3)得到解离后的鹅掌楸聚合雌蕊从其外圈到内圈自心皮尖端将单雌蕊层层剥离。
实施例2
一种鹅掌楸聚合蕊中单雌蕊的剥离方法，其与实施例1的区别仅在于：在60℃水浴解离6.2min。
实施例3
一种鹅掌楸聚合蕊中单雌蕊的剥离方法，其包括：
(1)固定：将采集的新鲜的鹅掌楸聚合雌蕊置于4℃的50％FAA固定液中24h，得到固定后的鹅掌楸聚合雌蕊。其中，采集的新鲜的鹅掌楸聚合雌蕊的长度均为3.6cm。
(2)复水：对步骤(1)得到的固定后的所述聚合雌蕊先在50％乙醇溶液中，浸泡1h后，再转移至30％乙醇溶液中浸泡1h，再置于超净水中浸泡30min，在超净水中浸泡期间，每浸泡10min换一次水，共换水2次。
(3)解离：将步骤(2)中得到的复水后的鹅掌楸聚合雌蕊浸泡于3mol/L的氢氧化钠溶液中，在60℃水浴解离6min，以使单雌蕊间细胞排列由致密状态变为疏松状态，得到解离后的鹅掌楸聚合雌蕊。
(4)剥离：将步骤(3)得到解离后的鹅掌楸聚合雌蕊从其外圈到内圈自心皮尖端将单雌蕊层层剥离。
实施例4
一种鹅掌楸聚合蕊中单雌蕊的剥离方法，其与实施例3的区别仅在于：在60℃水浴解离5.7min。
实施例5
一种鹅掌楸聚合蕊中单雌蕊的剥离方法，其包括：
(1)固定：将采集的新鲜的鹅掌楸聚合雌蕊置于4℃的50％FAA固定液中24h，得到固定后的鹅掌楸聚合雌蕊。其中，采集的新鲜的鹅掌楸聚合雌蕊的长度为4.2cm。
(2)复水：对步骤(1)得到的固定后的所述聚合雌蕊先在50％乙醇溶液中，浸泡1h后，再转移至30％乙醇溶液中浸泡1h，再置于超净水中浸泡30min，在超净水中浸泡期间，每浸泡10min换一次水，共换水2次。
(3)解离：将步骤(2)中得到的复水后的鹅掌楸聚合雌蕊浸泡于3mol/L的氢氧化钠溶液中，在60℃水浴解离5.5min，以使单雌蕊间细胞排列由致密状态变为疏松状态，得到解离后的鹅掌楸聚合雌蕊。
(4)剥离：将步骤(3)得到解离后的鹅掌楸聚合雌蕊从其外圈到内圈自心皮尖端将单雌蕊层层剥离。
实施例6
一种鹅掌楸聚合蕊中单雌蕊的剥离方法，其与实施例5的区别仅在于：在60℃水浴解离5.1min。
实施例7
一种鹅掌楸聚合蕊中单雌蕊的剥离方法，其包括：
(1)固定：将采集的新鲜的鹅掌楸聚合雌蕊置于4℃的50％FAA固定液中24h，得到固定后的鹅掌楸聚合雌蕊。其中，采集的新鲜的鹅掌楸聚合雌蕊的长度为大于1.8cm。
(2)复水：对步骤(1)得到的固定后的所述聚合雌蕊先在50％乙醇溶液中，浸泡1h后，再转移至30％乙醇溶液中浸泡1h，再置于超净水中浸泡30min，在超净水中浸泡期间，每浸泡10min换一次水，共换水2次。
(3)解离：将步骤(2)中得到的复水后的鹅掌楸聚合雌蕊浸泡于3mol/L的氢氧化钠溶液中，在60℃水浴解离0.5min，以使单雌蕊间细胞排列由致密状态变为疏松状态，得到解离后的鹅掌楸聚合雌蕊。
(4)剥离：将步骤(3)得到解离后的鹅掌楸聚合雌蕊从其外圈到内圈自心皮尖端将单雌蕊层层剥离。
试验例
设置对照组1-6，其中，对照组1-6分别与实施例1-6一一对应，对照组1-6与实施例1-6的区别在于：对照组缺少步骤(2)和(3)，在步骤(1)固定后直接进行剥离。
其中，实施例1得到的剥离后的单雌蕊如图2所示，对照组1得到的剥离后的单雌蕊如图3所示，对比图2以及图3可得，对照组1剥离后的单雌蕊破损较多，而实施例1中剥离的单雌蕊形态完整。
实施例2得到的剥离后的单雌蕊如图4所示，对照组2得到的剥离后的单雌蕊如图5所示，对比图4以及图5可得，对照组2剥离后的单雌蕊破损较多，而实施例2中剥离的单雌蕊形态完整。
实施例3得到的剥离后的单雌蕊如图6所示，对照组3得到的剥离后的单雌蕊如图7所示，对比图6以及图7可得，对照组3剥离后的单雌蕊破损较多，而实施例3中剥离的单雌蕊形态完整。
实施例4得到的剥离后的单雌蕊如图8所示，对照组4得到的剥离后的单雌蕊如图9所示，对比图8以及图9可得，对照组4剥离后的单雌蕊破损较多，而实施例4中剥离的单雌蕊形态完整。
实施例5得到的剥离后的单雌蕊如图10所示，对照组5得到的剥离后的单雌蕊如图11所示，对比图10以及图11可得，对照组5剥离后的单雌蕊破损较多，而实施例5中剥离的单雌蕊形态完整。
实施例6得到的剥离后的单雌蕊如图12所示，对照组6得到的剥离后的单雌蕊如图13所示，对比图12以及图13可得，对照组6剥离后的单雌蕊破损较多，而实施例6中剥离的单雌蕊形态完整。
承上述，本申请提供的聚合雌蕊中单雌蕊的剥离方法，操作简单，使得单雌蕊易于剥离且能够实现剥离完整的单雌蕊的目的。
以上仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种聚合雌蕊中单雌蕊的剥离方法，其特征在于，包括：
将固定完成的所述聚合雌蕊复水，将复水后的所述聚合雌蕊经解离液解离以使所述单雌蕊间细胞排列由致密状态变为疏松状态，从所述聚合雌蕊的外层到内层自心皮尖端将所述单雌蕊层层剥离。
2.根据权利要求1所述的剥离方法，其特征在于，所述解离液包括碱性解离液和酸性解离液中的任一种，所述碱性解离液包括氢氧化钠溶液、氢氧化锂溶液或氢氧化钾溶液，所述酸性解离液包括盐酸溶液或醋酸溶液；
可选地，所述解离液包括质量浓度为2.5-3.2mol/L的氢氧化钠溶液。
3.根据权利要求1所述的剥离方法，其特征在于，所述解离包括：
将复水后的所述聚合雌蕊于58-62℃的所述解离液中浸泡预设时间。
4.根据权利要求1所述的剥离方法，其特征在于，所述聚合雌蕊的长度大于2cm，所述聚合雌蕊浸泡于所述解离液中的预设时间随着其长度的增大而逐渐减小。
5.根据权利要求1所述的剥离方法，其特征在于，所述聚合雌蕊的长度大于2cm且不大于6cm；
可选地，所述聚合雌蕊包括长度大于2cm且不大于3cm的第一聚合雌蕊、长度大于3cm且不大于4cm的第二聚合雌蕊、以及长度大于4cm且不大于6cm的第三聚合雌蕊，所述第一聚合雌蕊浸泡于所述解离液中的预设时间大于6min且不超过6.5min，所述第二聚合雌蕊浸泡于所述解离液中的预设时间大于5.5min且不超过6min，所述第三聚合雌蕊浸泡于所述解离液中的预设时间大于5min且不超过5.5min。
6.根据权利要求1所述的剥离方法，其特征在于，所述聚合雌蕊包括长度大于0cm且不大于2cm的第四聚合雌蕊，以及长度大于4cm且不大于6cm的第三聚合雌蕊，所述第四聚合雌蕊浸泡于所述解离液中的预设时间小于所述第三聚合雌蕊浸泡于所述解离液中的预设时间；
可选地，所述第四聚合雌蕊浸泡于所述解离液中的预设时间不超过1min。
7.根据权利要求1所述的剥离方法，其特征在于，所述聚合雌蕊的长度为大于0且不大于6cm。
8.根据权利要求1所述的剥离方法，其特征在于，所述固定采用FAA固定液；
可选地，所述复水包括对固定后的所述聚合雌蕊依次浸泡于浓度顺次减小的至少两组乙醇溶液中后再次浸泡于水中；
其中，在水中浸泡期间，每次浸泡8-12min后换水且至少换2次水，所述乙醇溶液的乙醇体积浓度不大于所述固定液中的乙醇的体积浓度。
9.根据权利要求1所述的剥离方法，其特征在于，所述固定包括：将所述聚合雌蕊浸泡于0-30℃的固定液中至少24h。
10.根据权利要求1所述的剥离方法，其特征在于，所述聚合雌蕊包括鹅掌楸聚合雌蕊。
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