CN109999202A - 一种介导紫杉醇递送的多功能肽及其应用 - Google Patents

一种介导紫杉醇递送的多功能肽及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN109999202A
CN109999202A CN201910046802.9A CN201910046802A CN109999202A CN 109999202 A CN109999202 A CN 109999202A CN 201910046802 A CN201910046802 A CN 201910046802A CN 109999202 A CN109999202 A CN 109999202A
Authority
CN
China
Prior art keywords
taxol
multifunctional polypeptide
delivering
multifunctional
cell
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201910046802.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109999202B (zh
Inventor
韦宇平
崔艳
张彩莹
王小立
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Nanyang Normal University
Original Assignee
Nanyang Normal University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nanyang Normal University filed Critical Nanyang Normal University
Priority to CN201910046802.9A priority Critical patent/CN109999202B/zh
Publication of CN109999202A publication Critical patent/CN109999202A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109999202B publication Critical patent/CN109999202B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/337—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having four-membered rings, e.g. taxol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Epoxy Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明涉及了一种介导紫杉醇递送的多功能肽及其应用，所述多功能肽的氨基酸序列为Arg‑Arg‑Lys‑Lys‑Tyr‑Pro‑Pro‑Tyr，所述多功能肽安全无毒、免疫原性低，且由固相合成而得，廉价易得，便于质量管控，能高效介导紫杉醇递送至细胞内。

Description

一种介导紫杉醇递送的多功能肽及其应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种介导紫杉醇递送的多功能肽及其应用。
背景技术
紫杉醇是一种红豆杉的天然次生代谢产物，可以有效的抑制癌细胞有丝分裂，是目前已发现的最优秀的天然抗癌药物，在临床上已经广泛用于乳腺癌、卵巢癌、部分头颈癌和肺癌的治疗。但紫杉醇是一种脂溶性物质，因其结构高度疏水，在水溶液和其它许多溶剂中都难以溶解，这些问题最终导致药物的递送效果较差，利用度低。临床上使用的紫杉醇注射剂采用聚氧乙烯蓖麻油(Cremophor EL)-无水乙醇(V/V＝50/50)作为增溶剂，然而，经过长期临床使用发现该增溶剂伴随有很多难以解决的临床问题，比如该增溶剂容易引起一系列严重的毒副作用，其在用法或给药剂量上受到严重的限制。因此选择合适的紫衫醇递送体系对紫杉醇药效的发挥具有重要的意义。
目前，紫杉醇递送过程主要有两大方式，一是纳米给药体系，包括脂质体、聚合物纳米颗粒、胶束等，紫杉醇的递呈主要通过胞吞来实现，但是这种方法存在包裹效率较低、生物相容性较差、靶向性分子和纳米药物的连接效率较低以及连接后活性的降低等问题，而且通过胞吞作用实现递呈，紫杉醇由于内吞形成胞内体，继而须从胞内体中逃逸出来才能发挥药效，导致紫杉醇释放困难，同时，紫杉醇从胞内体释放也需要溶酶体，严重影响药效。二是通过理化机械递送将紫杉醇直接导入细胞质或细胞核的方法，如电穿孔和显微注射等方法，但这类方法普遍存在导入效率低、难于推广和易造成细胞损伤甚至死亡的问题。因此开发新的紫杉醇递送体系十分重要。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种毒副作用小、能高效介导紫杉醇递送的多功能肽及其应用。
为克服现有技术的不足，本发明的技术方案如下：
在第一方面，本发明提供了一种介导紫杉醇递送的多功能肽，所述多功能肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1中所示：Arg-Arg-Lys-Lys-Tyr-Pro-Pro-Tyr。
上述的介导紫衫醇递送的多功能肽，其中，所述多功能肽与紫杉醇非共价作用相互结合，介导紫杉醇递送至细胞内。
在第二方面，本发明提供了一种紫杉醇组合物，其包括紫杉醇和根据第一方面所述的多功能肽。
在第三方面，本发明提供了根据第一方面所述的多功能肽在介导紫杉醇递送中的应用。
在第四方面，本发明提供了根据第一方面所述的多功能肽在用于需要进入细胞内完成诊断和/或治疗的紫杉醇组合物的制备中的应用。
本发明提供的一种介导紫杉醇递送的多功能肽安全无毒、免疫原性低，且由固相合成而得，廉价易得，便于质量管控，能高效介导紫杉醇递送至细胞内。
具体实施方式
以下是对本发明的具体实施方式进行详细说明，仅用于对本发明提供进一步说明解释，但并不构成对本发明的限制。
实施例1：多功能肽的合成
(1)活化树脂：称取2000mg的Fmoc-Tyr wang Resin，加入20mL的DMF浸泡30min，使其充分溶胀。
(2)脱保护：压滤除去浸泡树脂的DMF，加入10mL含有20％哌啶的DMF溶液，氮气吹沸反应15min，然后压滤除去，脱除氨基的Fmoc基团，用10mL的异丙醇和10mL的DMF交替洗涤树脂三次，然后用茚三酮法检测树脂应成黑色或紫色。
(3)缩合反应：连接下一个氨基酸，称取1.4mmol/g树脂的Fmoc-氨基酸，以910mgTBTU，0.45g HOBt和0.52mLDIEA的20mL DMF为反应液，室温下氮气吹沸反应3h，反应结束后，用10mL的异丙醇和10mL的DMF交替洗涤树脂三次。检测氨基。
(4)重复步骤(2)-(3)步骤：按多肽的顺序自C端向N端延伸多肽。重复脱保护、洗涤、缩合的过程至剩余的氨基酸连接完毕，完成多肽的连接。
(5)多肽切割：用氮气将多肽-树脂复合物吹干，按体积比为80/5/5/5/3/2将TFA/phenol/超纯水/thioanisole/EDT/TIS配成20mL的混合切割试剂。将肽树脂置于圆底烧瓶中，加入切割液磁力搅拌3h，用200目砂芯过滤器除去树脂，滤液直接滴入冷冻乙醚中，5000r/min离心沉淀，冻干至恒重即得粗肽。
(6)粗肽用HPLC纯化至纯度大于95％。
根据上述方法合成的氨基酸序列为Arg-Arg-Lys-Lys-Tyr-Pro-Pro-Tyr。
实施例2：细胞毒性实验
(1)接种细胞：取96孔板，每孔加入含有5×103个宫颈癌Hela细胞培养液，37℃，5％二氧化碳培养箱24小时，使细胞贴壁。
(2)培养细胞：配置含1mM浓度的多功能肽的培养基，以无多功能肽的培养基为阴性对照孔(Control)，37℃，5％二氧化碳培养24h。
(3)显色：贴壁细胞每孔加入20μLMTT，继续孵育4h之后弃掉培养液，每孔加入150μL DMSO，震荡10min。
(4)比色：选择490nm波长，在酶标仪免疫检测仪上通过光吸收值计算细胞存活率。结果见表1。
表1多功能肽毒性测试结果
由表1可知，本发明提供的多功能肽在高浓度(1mM)、长时间(24h)条件下对细胞未有明显伤害，安全无毒。
实施例3：介导紫杉醇递送实验
(1)加入含有5微克/毫升紫杉醇和0.1mM功能肽的培养基孵育宫颈癌Hela细胞，孵育30min后小心吸去培养基，并PBS洗涤贴壁细胞三次。以单仅含有5微克/毫升紫杉醇的培养基作为对照。
2)加入新鲜细胞培养基培养24h。
3)Hela细胞每孔加入150μL DMSO，震荡10min后10000rpm离心取上清，得胞内提取液。
4)HPLC测定胞内提取液紫杉醇浓度。具体测试结果如表2。
表2多功能肽介导紫杉醇递送测试
由表2可知，本发明的多功能肽能够高效介导紫杉醇递送至细胞内，其胞内紫杉醇浓度较紫杉醇对照组提高5倍以上。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 南阳师范学院
<120> 一种介导紫杉醇递送的多功能肽及其应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Arg Arg Lys Lys Tyr Pro Pro Tyr
1 5

Claims (5)

1.一种介导紫杉醇递送的多功能肽，其特征在于，所述多功能肽的氨基酸序列如SEQID No.1所示。
2.根据权利要求1所述的介导紫衫醇递送的多功能肽，其特征在于，所述多功能肽与紫杉醇非共价作用相互结合，介导紫杉醇递送至细胞内。
3.一种紫杉醇组合物，其特征在于，包括紫杉醇和根据权利要求1或2所述的多功能肽。
4.根据权利要求1或2所述的多功能肽在介导紫杉醇递送中的应用。
5.根据权利要求1或2所述的多功能肽在用于需要进入细胞内完成诊断和/或治疗的紫杉醇组合物的制备中的应用。
CN201910046802.9A 2019-01-18 2019-01-18 一种介导紫杉醇递送的多功能肽及其应用 Active CN109999202B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910046802.9A CN109999202B (zh) 2019-01-18 2019-01-18 一种介导紫杉醇递送的多功能肽及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910046802.9A CN109999202B (zh) 2019-01-18 2019-01-18 一种介导紫杉醇递送的多功能肽及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109999202A true CN109999202A (zh) 2019-07-12
CN109999202B CN109999202B (zh) 2022-03-22

Family

ID=67165381

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910046802.9A Active CN109999202B (zh) 2019-01-18 2019-01-18 一种介导紫杉醇递送的多功能肽及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109999202B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114835775A (zh) * 2022-02-24 2022-08-02 南阳师范学院 一种新型细胞穿膜肽及其应用

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6191290B1 (en) * 1999-02-24 2001-02-20 Uab Research Foundation Taxane derivatives for targeted therapy of cancer
CN101421295A (zh) * 2006-02-09 2009-04-29 先锋高级育种国际公司 用于提高作物植物中的氮利用效率的基因
NZ576739A (en) * 2003-04-22 2011-01-28 Sod Conseils Rech Applic Peptide vectors for delivering paclitaxel
CN104530188A (zh) * 2014-12-11 2015-04-22 上海海洋大学 一种由功能肽r11修饰的基因载体及其制备方法和应用
CN107417769A (zh) * 2016-05-19 2017-12-01 中国科学院过程工程研究所 一种介导药物递送的新型穿膜肽及其应用
CN108727469A (zh) * 2017-04-17 2018-11-02 北京翼方生物科技有限责任公司 一种介导药物递送的新型穿膜肽及其应用
CN108882692A (zh) * 2016-02-24 2018-11-23 瑞克斯旺种苗集团公司 显示减少的伤口诱导的表面变色的植物

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6191290B1 (en) * 1999-02-24 2001-02-20 Uab Research Foundation Taxane derivatives for targeted therapy of cancer
NZ576739A (en) * 2003-04-22 2011-01-28 Sod Conseils Rech Applic Peptide vectors for delivering paclitaxel
CN101421295A (zh) * 2006-02-09 2009-04-29 先锋高级育种国际公司 用于提高作物植物中的氮利用效率的基因
CN104530188A (zh) * 2014-12-11 2015-04-22 上海海洋大学 一种由功能肽r11修饰的基因载体及其制备方法和应用
CN108882692A (zh) * 2016-02-24 2018-11-23 瑞克斯旺种苗集团公司 显示减少的伤口诱导的表面变色的植物
CN107417769A (zh) * 2016-05-19 2017-12-01 中国科学院过程工程研究所 一种介导药物递送的新型穿膜肽及其应用
CN108727469A (zh) * 2017-04-17 2018-11-02 北京翼方生物科技有限责任公司 一种介导药物递送的新型穿膜肽及其应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
YUPING WEI等: "Noncovalent interaction-assisted drug delivery system with highly efficient uptake and release of paclitaxel for anticancer therapy", 《INTERNATIONAL JOURNAL OF NANOMEDICINE》 *
YUPING WEI等: "Rapid delivery of paclitaxel with an organic solvent-free system based on a novel cell penetrating peptide for suppression of tumor growth", 《J. MATER. CHEM. B》 *
刘百川等: "负载紫杉醇CSNRDARRC-PCL-PGA/TPGS多肽纳米颗粒调控膀胱癌RT112细胞增生及促凋亡", 《现代泌尿生殖肿瘤杂志》 *
潘英等: "紫杉醇纳米粒作为药物递送载体的研究", 《中国抗生素杂志》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114835775A (zh) * 2022-02-24 2022-08-02 南阳师范学院 一种新型细胞穿膜肽及其应用
CN114835775B (zh) * 2022-02-24 2023-09-19 南阳师范学院 一种细胞穿膜肽及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN109999202B (zh) 2022-03-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102570210B1 (ko) 펩티드모방 거대고리 및 이의 제제
CN106421806B (zh) 一种逐级响应纳米自组装树枝状前药及制备方法和应用
Ying et al. A stabilized peptide ligand for multifunctional glioma targeted drug delivery
CN105566452B (zh) 一种具有环状结构的抗菌肽及其制备方法和应用
CN108379549A (zh) 含酪丝缬肽并基于d构型短肽自组装的抗癌超分子水凝胶的制备方法与应用
Yang et al. Design, synthesis and biological evaluation of novel peptide MC2 analogues from Momordica charantia as potential anti-diabetic agents
CN104530199A (zh) 一种抗肿瘤多肽及其制备方法和应用
CN109608519B (zh) 一种穿膜肽及其应用
CN109999202A (zh) 一种介导紫杉醇递送的多功能肽及其应用
CN107474117B (zh) 一种抗肿瘤环肽及其制备方法和医药应用
CN107226847B (zh) 具有双重靶向性和选择性的抗肿瘤多肽分子及其应用
ES2395894T3 (es) Hemoglobinas de mamífero compatibles con plasma sanguíneo, reticuladas y conjugadas con poli(óxidos de alquileno) como portadores de oxígeno médicos artificiales, su preparación y su uso
CN106883299A (zh) 脂肪组织靶向多肽及其制备方法和应用
CN108676074B (zh) 一种促肝细胞生长的活性多肽
CN108727583A (zh) 多臂靶向抗癌偶联物
CN108379595B (zh) 多功能靶向性基因载体及制备方法及用途
CN109734780A (zh) 一种穿膜肽及其制备方法和用途
CN104231059B (zh) 一种多肽及其制备方法和用途
CN108727469B (zh) 一种介导药物递送的新型穿膜肽及其应用
CN105820217B (zh) 合成肽疫苗及其制备方法
KR102006632B1 (ko) 일산화탄소 방출용 하이드로겔 조성물 및 그 제조방법
CN105395491B (zh) 一种含阿霉素七肽多孔微球的制备方法
CN105131101B (zh) 一种人类核糖体蛋白rps6亚基抗癌肽段及其应用
CN108888628A (zh) 一种人参皂苷GRh2在制备抗弓形虫复方制剂中的应用及其药物
CN117531021B (zh) 一种刺五加苷e-靶向肽偶联物及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant