CN109999059A - 一种妇科微生态抑菌制剂及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于复合益生菌粉制剂领域,具体涉及一种妇科微生态抑菌制剂及其应用,该菌剂将嗜酸乳杆菌NM和动物双歧杆菌V9进行配方优化制成复合抑菌制剂,利用菌种之间的独特协同作用,不仅定植力高,而且能增强免疫细胞活性,开发适合工业化生产的阴道益生乳酸菌制剂。
Description
技术领域
本发明属于复合菌粉剂领域,具体涉及一种妇科微生态抑菌制剂及其应用。
背景技术
由粪肠球菌、铜绿假单胞菌、大肠杆菌及念珠菌等引起的女性阴道炎症是妇科疾病的主要原因。长期以来,患病的妇女主要接受抗生素的治疗。有关乳酸菌抑制妇女阴道炎症的研究报道很少。
对嗜酸乳杆菌的研究表明,以聚苯乙烯为载体,嗜酸乳杆菌可以形成一层生物保护膜,抑制90%的肠球菌(Enterococcofaecalis1131)对聚苯乙烯的吸附。进一步的研究表明,嗜酸乳杆菌对阴道上皮细胞均有一定的粘附能力,将嗜酸乳杆菌NCFM分别与三种阴道致病性微生物大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念球菌共同培养后发现,嗜酸乳杆菌NCFM显著抑制了它们的生长,其抑制水平分别在30%,11%和30%。由于阴道内的糖原是微生物唯一可以利用的碳源,嗜酸乳杆菌等能够发酵糖原,产生乳酸和其它代谢产物,如过氧化氢等,会导致阴道内的pH值降低,以抑制病原微生物的生长繁殖,是嗜酸乳杆菌等抑制妇女阴道炎症的主要机制。
嗜酸乳杆菌NM,属于乳杆菌属,革兰氏阳性,不产芽孢,无鞭毛,不运动,同型发酵乳糖,不液化明胶,接触酶阴性,最适pH值为5.5-6.0,G+C含量为36%-37.4%,是一类厌氧或兼性厌氧的微生物,嗜酸乳杆菌是宿主(人和动物)肠道内的主要微生物种之一,当存在一定数量时,能够调整和改善肠道内的有益微生物和有害微生物之间的平衡,进而促进宿主的健康,起到增进健康的效果,是目前极为重视研究开发的益生菌。长期以来,国外对嗜酸乳杆菌的健康促进作用作了较多的研究,而国内在这方面的研究报道非常有限。
体外和宿主体内实验以及长期的实践观察表明:服用含有嗜酸乳杆菌的制品具有众多的生理作用。嗜酸乳杆菌具有抵御高酸、高胆盐的极端条件的能力,能够促进乳糖的消化吸收,缓解乳糖不忍耐症,提高蛋白质、维生素等的吸收,具有降低血清胆固醇、提高机体免疫力和抑制肿瘤发生的能力。同时,嗜酸乳杆菌具有加工和贮藏中的稳定性,其生长繁殖没有严格的限制。目前,含有嗜酸乳杆菌的产品种类很多,如嗜酸乳杆菌发酵乳、嗜酸乳杆菌与普通酸奶发酵剂混合发酵的乳制品、甜性嗜酸乳杆菌乳、嗜酸乳杆菌胶囊、片剂等。因此,嗜酸乳杆菌受到众多研究者们的广泛关注,开发含有嗜酸乳杆菌的益生菌制品正成为当前研究的热点之一。
动物双歧杆菌V9可以在pH3.0的人工胃液中消化3h后,存活率仍达到90%以上;双歧杆菌V9可以在pH8.0的人工肠液中消化5h后,存活率仍达到95%以上;对肠道致泻菌株志贺氏痢疾杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、埃希氏大肠杆菌、绿脓杆菌均有不同程度的拮抗作用;菌株内不存在质粒DNA,也就不存在在肠道中传播耐药性质粒的风险;具有免疫调节作用,动物试验表明,肉仔鸡服用10天后,用大肠杆菌攻毒,预防有效率达97.5%,对照组死亡率达50%。肉鸡在饲养期内使用双歧杆菌V9制剂后,平均增重提高10.51%,料肉比降低6.12%;试验期介于14日龄、35日龄采集粪便样,检测双歧杆菌和大肠杆菌的活菌数,数据表明,双歧杆菌V9制剂能显著促进肠道内双歧杆菌群的增殖,抑制大肠杆菌的生长。经中试试验后,该菌株在150L规模发酵菌体密度可达6×109cfu/ml,发酵液经离心收集菌体后冷冻干燥可得到平均活菌数1.0×1011cfu/ml的菌粉,而且该菌粉稳定性良好。
“微生态平衡”理念在治疗阴道感染性疾病方面得到广泛重视,该理念的核心是构建阴道内不同微生物的生态平衡。妇科抑菌性泡腾片主要原料为益生乳杆菌,可以有较好的粘附力及较高的活菌数,加以以泡腾片方式给药,可以克服了阴道药物浓度分布不均的问题,结合益生活菌应用产生协同抑菌作用,彻底改变患者阴道内环境,从而减少复发。
本发明微生态抑菌菌剂的主要特点在于,将优良益生菌种双歧杆菌V9、嗜酸乳杆菌NM进行配方优化制成复合益生菌粉,本发明通过实验验证,研究出科学的菌种配比,利用菌种之间的独特协同作用,不仅定植力高,而且能增强免疫细胞活性。本发明筛选出具有自主知识产权的抑菌菌株进行研究,开发适合工业化生产的阴道益生乳酸菌制剂,通过高密度发酵技术;研究冷冻干燥过程中保护剂对乳酸菌细胞的保护机制,在此基础上优化设计高效保护剂,得到高活性抑菌制剂,通过试验验证抑菌效果也得到了显著的成效。
发明内容
在产品开发过程中,主要的技术难点在于具有抑菌效果益生菌菌种的筛选以及产品泡腾片剂型的酸碱协同配伍研究。我们将选择适宜的菌株,进行逐一实验验证和检测抑菌结果指标,研究出了科学合理的能抑制妇科阴道致病菌的复合益生菌配方。
为实现上述目的,本发明提供一种妇科微生态抑菌制剂,其特征在于,其包含下述成分:嗜酸乳杆菌NM和双歧杆菌V9。
本发明还提供一种微生态抑菌制剂在制备妇科微生态抑菌制剂的药物中的应用。
本发明还提供一种微生态抑菌制剂产品,其包含上述所述的复合菌粉制剂,产品为泡腾片剂。
本发明还提供其他制剂药物产品类型,包括栓剂、凝胶剂、粉剂、喷剂,洗液、膏剂或其他外用剂型。
本发明还提供一种妇科抑菌性泡腾片,其包含嗜酸乳杆菌NM和双歧杆菌V9。
本发明中嗜酸乳杆菌NM、双歧杆菌V9均可以市售获得。
本发明通过泡腾片质量的控制,以乳酸杆菌为模型菌株,通过对不同酸、酸碱比例及添加剂的筛选试验,研制适合妇科阴道生理环境的乳酸菌泡腾片制剂,并对其特性进行评估。研究酸、碱比例、乳糖做为填充剂时,泡腾片中活菌数量、酸度、发泡量、崩解时限等均同时符合药典相关规定,保证乳酸菌泡腾片的高活性及抑菌效果。
本发明的主要效果在于:妇科抑菌性泡腾片主要原料为益生乳杆菌,可以有较好的粘附力及较高的活菌数,加以以泡腾片方式给药,可以克服了阴道药物浓度分布不均的问题,结合益生活菌应用产生协同抑菌作用,彻底改变患者阴道内环境,从而减少复发。泡腾片是以适宜的酸和碱为崩解剂制成的一种片剂。泡腾片入水后会产生大量二氧化碳气体从而迅速溶解呈泡腾状,药物起效迅速,生物利用度高,所产生的泡沫有助于局部杀菌,使用方便,可增加药物与粘膜的接触面,提高药效,携带方便且成本低。阴道用泡腾片置于阴道中,泡腾片在大量泡沫产生的同时,增加了菌株与阴道、宫颈黏膜的皱褶部位的接触,发挥其治疗作用。乳酸菌为生殖道微生态系的优势菌,它的性质和理化学特性及自身条件决定了它在调节微生态平衡方面起着重要作用,同时它有扶持正常菌群作用。乳酸菌泡腾片根据微生态学基本原理,用于调节机体微生态平衡,提高机体自身免疫力,起到预防和治疗的作用。
本发明通过研制妇科用乳酸菌泡腾片,旨在能将泡腾片中的主药(乳酸菌)递送至阴道的各个部位,增大乳酸菌与阴道的有效接触范围,从而使乳酸菌与生殖道粘膜充分接触、定植,并通过生物夺氧、竞争吸附位点、产生不利于致病菌生长环境等微生物防御机制,抑制有害细菌生长,避免了使用膏剂、栓剂、液体制剂,只能把药物送到阴道的底部和侧壁的弊端,为有效治疗阴道炎症提供新的抑菌剂型。
附图说明
下面结合附图及实施例对本发明作进一步描述:
图1不同菌种组成对致病菌的综合抑制能力比较。
具体实施方式
为了更详细地进一步阐明而不是限制本发明,给出下列实施例。
实施例1.乳酸菌抑菌能力测试
本试验采用牛津杯法对乳酸菌抑制病原菌生长能力进行测试。取乳酸菌上清液240μL加入事先准备好的病原菌平板上的牛津杯中,每个菌株设3个重复,对照组添加等量的无菌水,将平板放入培养箱中37℃培养48h,培养完后使用游标卡尺测量抑菌环直径。
从普通菌种库中选取乳酸菌,作为益生菌最主要的特性是抑制病原菌的生长,经过对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌的抑菌能力测试,筛选出4株对病原菌抑菌能力较强的分离株,嗜酸乳杆菌NM对3种病原菌的抑菌能力最高,双歧杆菌V9次之。具体结果如表1所示。
表1乳酸菌分离株抑菌能力测定结果
实施例2.复合菌剂抑菌活性的比较
鉴于本产品为妇科微生态菌剂,从抑菌能力测试数据可以筛选双歧杆菌V9、嗜酸乳杆菌两联菌进行研究。将双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、双歧杆菌和嗜酸乳杆菌三种形式加入产品,进行抑菌活性的测定。
试验操作如下:
(1)抑菌片的制备:对液体抑菌剂,取无菌并干燥的滤纸片。每片滴加实际使用浓度抑菌剂溶液20μl,然后将滤纸片平放于清洁的无菌平皿内,开盖置温箱(37℃)中烤干,或置室温下自然干燥后备用。
溶出性抗(抑)菌产品,可直接制成直径为5mm,厚不超过4mm圆片(块),每4片(块)一组。
(2)阴性对照样片的制备:取无菌干燥滤纸片,每片滴加无菌蒸馏水20μl,干燥后备用。
溶出性抗(抑)菌产品的阴性对照样本,应取同种材质不含抑菌成份的样品,制成与试验组大小相同的样片(块)。
(3)试验菌的接种:用无菌棉拭子蘸取浓度为5×105cfu/ml~5×106cfu/ml试验菌悬液,在营养琼脂培养基平板表面均匀涂抹3次。每涂抹1次,平板应转动60°,最后将棉拭子绕平板边缘涂抹一周。盖好平皿,置室温干燥5min。
(4)抑菌剂样片贴放:每次试验贴放1个染菌平板,每个平板贴放4片试验样片,1片阴性对照样片,共5片。用无菌镊子取样片贴放于平板表面。各样片中心之间相距25mm以上,与平板的周缘相距15mm以上。贴放好后,用无菌镊子轻压样片,使其紧贴于平板表面。盖好平皿,置37℃温箱,培养16h~18h观察结果。用游标卡尺测量抑菌环的直径(包括贴片)并记录。试验重复3次。
(5)抑菌作用的判断:
1)抑菌环直径大于7mm者,判为有抑菌作用。
抑菌环直径小于或等于7mm者,判为无抑菌作用。
2)3次重复试验均有抑菌作用结果者,判为合格。
3)阴性对照组应无抑菌环产生,否则试验无效。
具体结果如表2所示:
表2三种形式添加产品抑菌能力测定结果
图1显示了三种产品抑菌能力,根据图1可知,添加嗜酸乳杆菌NM和双歧杆菌V9的产品,对于致病菌的综合抑制能力最好。
Claims (3)
1.一种妇科微生态抑菌制剂,其特征在于,由嗜酸乳杆菌NM和双歧杆菌V9组成。
2.根据权利要求1所述微生态抑菌制剂在制备妇科微生态抑菌的药物中的应用。
3.权利要求2所述的应用,其中所述产品为栓剂、泡腾片剂、凝胶剂、粉剂、喷剂、洗液、膏剂或他药物制剂形式,优选为泡腾片剂。
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