CN109997690A

CN109997690A - 一种提高西瓜组培苗移栽成活率的方法

Info

Publication number: CN109997690A
Application number: CN201811347128.XA
Authority: CN
Inventors: 徐洪国; 祁宏英; 高美玲
Original assignee: Qiqihar University
Current assignee: Qiqihar University
Priority date: 2018-11-15
Filing date: 2018-11-15
Publication date: 2019-07-12

Abstract

本发明公开了一种提高西瓜组培苗移栽成活率的方法，属植物组织培养技术领域。该方法包括以下步骤：西瓜子叶节诱导的不定芽进行壮苗培养，生根时在组培瓶中添加基质（草炭土：蛭石：珍珠岩=1:1:1），在基质中添加等质量的含有IBA 0.3 mg/L的1/2 MS液体培养基，不加蔗糖与琼脂，然后，对基质进行高温高压灭菌，组培苗接种到基质中用以生根，无菌条件下生根培养16d后，对生根组培苗进行驯化移栽，移栽时，将组培苗连同根部粘连的基质一起取出，移入含营养土的营养钵中。本发明采用的壮苗生根培养方法能很好的达到壮苗生根的目的，达到移栽要求，减轻移栽对根的伤害，显著提高了移栽的成活率。

Description

一种提高西瓜组培苗移栽成活率的方法

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，涉及ー种组培苗壮苗、生根与驯化移栽方法。

背景技术

西瓜（Citrullus lanatus Thumb）是一种重要的瓜类作物，己经成为世界园艺业的重要组成部分，其种植面积仅次于葡萄、香蕉、柑橘和苹果。我国是西瓜生产大国，在2006年种植面积超过了201万hm²，面积占全球的58%，产量占全球的72%。但是由于西瓜种质资源缺乏，遗传基础狭窄，利用常规育种选育新品种较为困难。利用分子克隆技术提取分离或人工合成具有某一特性的基因，如改良西瓜品质基因，西瓜抗虫、抗病或抗逆性基因以及西瓜雄性不育基因等，采用农杆菌介导法或基因枪法等，将这些基因导入西瓜，可以获得利用常规育种难以得到的新种质，为西瓜育种开辟新的途径。高效离体再生体系是转基因技术成功的关键，所以建立高效离体再生体系显得至关重要，西瓜组织培养经过几十年的发展，在外植体(原生质体、幼胚、胚根、胚轴、子叶、子叶节、真叶、节间等)的多样性、再生途径(器官发生途径和胚胎发生途径)的创新性方面已经取得了重要的突破，通过直接器官发生途径，在较短时间内即可获得再生植株。然而，西瓜组培苗经常会发生玻璃化现象，造成生根困难，移栽不易成活。因此，加强西瓜组培苗生根与驯化移栽的研究，有助于建立一套通用、稳定、高效的离体再生体系对于推进西瓜的组织培养和遗传转化的快速发展具有重要的意义。

发明内容

为了克服西瓜组培苗生根困难，移栽不易成活这一问题。本发明提供了一种西瓜组培苗壮苗、生根与驯化移栽方法，能显著提高西瓜组培苗移栽成活率。

本发明所采用的技术方案包括以下步骤：

（1）壮苗培养

在超净工作台中，将西瓜子叶节诱导的不定芽转移到壮苗培养基上，壮苗培养培养以MS为基本培养基,添加6-BA 0.5 mg /L，蔗糖3%，琼脂0.9%，培养温度为25℃，光周期为16h，光照强度为20000 lx 左右。壮苗培养21d后，切取取3-4 cm长的不定芽分株接进行生根培养，

（2）生根培养

生根时在组培瓶中添加基质（草炭土：蛭石：珍珠岩=1:1:1），厚度3-4 cm，在基质中添加等质量的含有IBA 0.3 mg /L的1/2 MS液体培养基，然后，对基质进行高温高压灭菌，选择3-4 cm高、状态较一致的组培苗接种到基质中用以生根，无菌条件下生根培养16 d后，对组培苗进行驯化移栽。

（3）驯化移栽

准备营养土，进行高温高压灭菌，无菌苗生长至高3-4 cm时，将无菌苗连同根部粘连的基质取出小苗，移入含水量70%左右的营养土中，压紧营养土，记载过程中尽量较少对根系的伤害。喷水，用塑料薄膜覆盖保湿，一周后，逐渐掀开薄膜，21 d后统计生根苗移栽成活结果。

本发明采用的壮苗生根培养方法能很好达到壮苗生根的目的，达到移栽要求，减轻移栽对根的伤害，显著提高了移栽的成活率。

附图说明

图 1 为；西瓜子叶节诱导的不定芽

图 2 为：西瓜组培苗壮苗培养

图 3 为：西瓜组培苗于基质中诱导出不定根

图 4 为：西瓜组培移栽成活

具体实施方式

1材料与方法

本发明实施的实验材料为齐齐哈尔大学生命科学与农林学院西甜瓜遗传育种实验室保存的西瓜西瓜自交系L1，于齐齐哈尔大学生命科学与农林学院园林园艺植物组织培养实验室进行。选用西瓜自交系L1子叶节诱导初代不定芽。在超净工作台中，将西瓜子叶节诱导的初代不定芽转移到壮苗培养基上，壮苗培养以MS为基本培养基, 添加不同浓度的6-BA和NAA，蔗糖3%，琼脂0.9%，培养温度为25℃，光周期为16 h，光照强度为20000 lx 左右。壮苗培养21 d后统计西瓜组培苗生长情况。

生根时，分别利用琼脂培养基和基质进行培养生根。琼脂培养基为1/2 MS+IBA0.3 mg /L，蔗糖3%，琼脂0.9%。基质生根法是在组培瓶中添加基质（草炭土：蛭石：珍珠岩=1:1:1），厚度3-4 cm，在基质中添加等质量的含有IBA 0.3 mg /L的1/2 MS液体培养基，不加蔗糖，然后，对基质进行高温高压灭菌。选择3-4 cm高、状态较一致的组培苗，分别用两种方法进行生根培养，生根培养16 d后，对组培苗进行驯化移栽。

准备营养土，进行高温高压灭菌后，装入营养钵中。组培苗生长至高3-4 cm时，琼脂培养基生根组培苗取出小苗，用清水洗净根部琼脂培养基，栽入营养钵中。对于基质生根组培苗，移栽时，将组培苗连同根部粘连的基质取出小苗，移入含营养土的营养钵中，压紧营养土，移栽过程中尽量较少对根系的伤害。对移栽组培苗进行统一管理，喷水，用塑料薄膜覆盖保湿，一周后，逐渐掀开薄膜，21 d后统计生根苗移栽成活结果。

2 结果与分析

（1）壮苗培养

结果见表1，我们发现2号培养基虽然增殖系数不是最高，但是芽苗生长健壮，生长快，且无玻璃化现象，增殖产生的组培苗适合下一步生根培养。

表 1 不同壮苗培养基对西瓜组培苗的影响

培养基(mg/L）	增值系数	组培苗生长状态
			MS+6BA0.1	2.35	芽苗瘦弱，生长慢
MS+6BA0.5	3.83	生长健壮，生长快
			MS+6BA1.0	6.23	芽丛生，生长较壮，有玻璃化现象
MS+6BA0.5+NAA 0.1 mg /L	3.38	芽丛生，基部形成愈伤组织，有玻璃化现象
			MS+6BA1.0+NAA 0.1 mg /L	5.72	芽丛生，基部形成愈伤组织，玻璃化严重

（2）生根培养

利用两种方法进行生根培养，生根培养16 d后，统计生根结果，结果见表2，两种方法的生根数与生根率差别不大，说明可以用基质法进行生根培养，而且利用基质生根法所诱导根系比较粗壮

表 2 不同培养基对试管苗生根的影响

生根方法	生根率	生根数	根系生长形态
				琼脂培养基生根	91.34	4.53	白色，细长
基质生根法	90.28	4.87	白色，根较粗壮，

（3）驯化移栽

比较两种生根法诱导的生根组培苗驯化移栽效果，结果见表3，利用基质生根法获得的组培苗移栽后移栽成活率达到90.56%，显著高于琼脂培养基生根组培苗，而且组培苗生长健壮，生长快。

表3 不同生根组培苗驯化移栽效果

生根方法	移栽成活率（%）	组培苗生长状态
			琼脂培养基生根	52.78	芽苗瘦弱，生长慢
基质生根法	90.56	生长健壮，生长快

Claims

1.将西瓜子叶节诱导的不定芽转移到壮苗培养基上，培育壮苗，然后进行生根。

2.生根时在组培瓶中添加基质（草炭土：蛭石：珍珠岩=1:1:1），厚度3-4 cm，在基质中添加等质量的含有IBA 0.3 mg /L的1/2 MS液体培养基，然后，对基质进行高温高压灭菌，选择3-4cm高、状态较一致的组培苗接种到基质中用以生根。

3.无菌条件下生根培养16d后，对组培苗进行驯化移栽，移栽时，将组培苗连同根部粘连的基质一起取出，移入含营养土的营养钵中。

4.本发明采用的壮苗生根培养方法能很好达到壮苗生根的目的，达到移栽要求，减轻移栽对根的伤害，显著提高了移栽的成活率。