CN109966266A - 红细胞膜包裹的聚合物基载药纳米复合体系及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种红细胞膜包裹的聚合物基载药纳米复合体系及其制备方法和应用，本发明提供的制备方法通过首先将红细胞分散于低渗生理盐水中裂解，得到红细胞血影，然后将得到的红细胞血影进行超声、挤出，得到红细胞膜囊泡；最后将红细胞膜囊泡和聚合物载药纳米粒子混合、挤压得到红细胞膜包裹的聚合物基载药纳米复合体系；其中，通过选择所述低渗生理盐水的浓度为0.2wt％～0.25wt％；所述低渗生理盐水的pH值为7.0～7.6；进而使得本发明得到的红细胞膜囊泡能够很好的包裹聚合物载药纳米粒子，且得到的复合体系的传递效果好，靶向性强，对正常细胞的毒性较小，而且该制备方法反应条件温和、方法简单，具有很好的工业化应用前景。

Description

红细胞膜包裹的聚合物基载药纳米复合体系及其制备方法
技术领域
本发明涉及生物医药领域，尤其涉及一种红细胞膜包裹的聚合物基载药纳米复合体系及其制备方法。
背景技术
生物可降解聚合物(Biodegradable Polymers)系指在生物体内能被降解或酶解，生成的小分子物质被机体吸收并排出体外的一类高分子材料。多糖可以传递大量的信息，而大分子通过特异性修饰及其本身所固有的物理化学性能可实现主动靶向给药。以果胶为代表的生物可降解聚合物来源丰富，具有良好的生物相容性和低毒性，在体内被特异性酶降解并代谢，其分解产物对人体健康无害，因此被广泛用作生物医用材料。
靶向给药(Targeted drug delivery，TDD)是指药物通过局部或全身血液循环而浓集定位于靶组织、靶器官、靶细胞的给药方式，分为主动靶向和被动靶向两种方式。纳米粒子可以通过肿瘤EPR(Enhanced Permeability and Retention)效应被动靶向于肿瘤组织，同时也可通过对纳米载体上接枝配体，利用肿瘤细胞中某些酶和受体的高水平表达实现主动靶向。纳米靶向给药系统能将抗肝癌药物选择性地运送到肝肿瘤部位，增加肿瘤部位的药物浓度，而且缓慢释放药物，从而使药物浓度可以较长时间地维持在有效浓度，达到持久有效的抗肝癌效果。同时减少药物对正常肝组织和其它脏器的细胞毒性，降低药物的毒副作用。
大分子前药，是指通过共价键将低分子药物连接到合适的大分子上，这种大分子前药在体内经酶解或水解释放出活性药物而发挥药效的化合物。大分子前药能延长药物的释放时间，减少用量，降低毒副作用；可以使溶解性较低或者不溶于水的药物的水溶性增加，能够改善药物的动力学，能够减小多药耐药性。
红细胞，特别是正常的成熟红细胞无核、无细胞器，呈双凹圆碟形，直径7～8μm，中央最薄处仅约1μm，这种特殊的结构有利于增大其表面积以便进行物质交换。红细胞具有可塑变形性，在全身血管中循环运行时，经过变形才能通过口径比它小的毛细血管和血窦孔隙。红细胞膜(RBCm)存在渗透脆性，在低渗溶液中红细胞可发生溶血，利于物质的交换，红细胞膜本身适合在血管内运输。唾液酸(SA)作为膜上的特殊结构是细胞膜负电荷的主要来源，使带负电的红细胞膜能够通过静电作用完全包裹带负电的聚合物载药。红细胞膜作为药物载体主要有以下优势：降解不会产生有毒或有害物质，红细胞的粒径及形状相同，提供相对稳定的内环境，各种化学物质和酶都可包裹在红细胞膜内，防止内源物质降解运载的药物，可调整药物的药代动力学和药效学，保持血浆内药物浓度的稳定，延长药物的全身作用时间，减少药物的不良反应等。
因此，研究和合成红细胞膜包裹的聚合物基载药纳米复合体系具有重要意义。
发明内容
有鉴于此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种红细胞膜包裹的聚合物基载药纳米复合体系及其制备方法，本发明提供的方法能够高效的制备红细胞膜包裹的聚合物基载药纳米复合体系，且该复合体系药物传递效果好，能显著降低药物的毒副作用。
本发明提供了一种红细胞膜包裹的聚合物基载药纳米复合体系的制备方法，包括：
1)将红细胞分散于低渗生理盐水中裂解，得到红细胞血影，
所述低渗生理盐水的浓度为0.2wt％～0.25wt％；
所述低渗生理盐水的pH值为7.0～7.6；
2)将得到的红细胞血影进行超声、挤出，得到红细胞膜囊泡；
3)将红细胞膜囊泡和聚合物载药纳米粒子混合、挤压得到红细胞膜包裹的聚合物基载药纳米复合体系。
优选的，所述低渗生理盐水的浓度为0.225wt％～0.235wt％。
优选的，所述低渗生理盐水的pH值为7.4～7.5。
优选的，所述红细胞按照以下方法制备得到：
将动物全血依次用生理盐水洗涤，然后离心，并重复洗涤、离心操作2～5次，得到红细胞。
优选的，所述步骤2)超声的频率为40～50kHz，功率为80～120W，超声的时间为8～15min。
优选的，所述聚合物载药纳米粒子是通过在聚阴离子大分子化合物上担载小分子药物得到。
优选的，所述聚阴离子大分子化合物为果胶、海藻酸钠和透明质酸中的一种或几种。
优选的，所述小分子药物为阿霉素、紫杉醇、5-氟尿嘧啶、吉西他滨、阿糖胞苷、阿扎胞苷、克拉屈滨、氟达拉滨、柔红霉素、表柔比星、吡柔比星、伊达比星、放线菌素D、丝裂霉素、光辉霉素、更生霉素、多西他赛、喜树碱、羟基喜树碱、长春新碱、长春瑞滨或长春花碱。
本发明还提供了一种本发明所述的制备方法制备的红细胞膜包裹的聚合物基载药纳米复合体系。
本发明还提供了一种本发明所述的红细胞膜包裹的聚合物基载药纳米复合体系在制备抗肝癌药物中的应用。
与现有技术相比，本发明提供了一种红细胞膜包裹的聚合物基载药纳米复合体系的制备方法，通过首先将红细胞分散于低渗生理盐水中裂解，得到红细胞血影，然后将得到的红细胞血影进行超声、挤出，得到红细胞膜囊泡；最后将红细胞膜囊泡和聚合物载药纳米粒子混合、挤压得到红细胞膜包裹的聚合物基载药纳米复合体系；其中，通过选择所述低渗生理盐水的浓度为0.2wt％～0.25wt％；所述低渗生理盐水的pH值为7.0～7.6；进而使得本发明得到的红细胞膜囊泡能够很好的包裹聚合物载药纳米粒子，且得到的复合体系的传递效果好，靶向性强，对正常细胞的毒性较小，且通过实验发现，尤其对于肝细胞具有特异性识别能力。而且，本发明提供的制备方法反应条件温和、方法简单、操作简便、易于实施，最终制剂不涉及增溶剂和有机溶剂，安全可靠，具有很好的工业化应用前景。
附图说明
图1为制备红细胞膜包裹的果胶/阿霉素纳米粒子的工艺流程图；
图2为红细胞膜包裹的果胶/阿霉素纳米粒子粒径图；
图3为红细胞膜包裹的果胶/阿霉素纳米粒子Zeta电位图；
图4为红细胞膜包裹的果胶/阿霉素纳米粒子TEM电镜图；
图5为红细胞膜包裹的果胶/阿霉素纳米粒子体外释放曲线；
图6为红细胞膜包裹的果胶/阿霉素纳米粒子溶血率；
图7为红细胞膜包裹的果胶/阿霉素纳米粒子对心肌细胞H9c2的MTT结果图；
图8为红细胞膜包裹的果胶/阿霉素纳米粒子对正常肝细胞L02的MTT结果图；
图9为红细胞膜包裹的果胶/阿霉素纳米粒子对肝癌细胞7402的MTT结果图；
图10为对比例1得到的红细胞血影；
图11为实施例1得到的红细胞血影；
图12为对比例2得到的红细胞血影；
图13为不同粒径的红细胞囊泡包裹果胶-阿霉素纳米粒子得到的纳米复合物的稳定性结果；
图14为包裹红细胞膜的PDC@RBC-NPs、游离DOX和PDC-NPs在THP-1细胞内的荧光强度；
图15为PDC-NPs组以及PDC@RBC-NPs组在THP-1细胞中荧光拍照结果图。
具体实施方式
本发明提供了一种红细胞膜包裹的聚合物基载药纳米复合体系的制备方法，包括：
1)将红细胞分散于低渗生理盐水中裂解，得到红细胞血影，
所述低渗生理盐水的浓度为0.2wt％～0.25wt％；
所述低渗生理盐水的pH值为7.0～7.6；
2)将得到的红细胞血影进行超声、挤出，得到红细胞膜囊泡；
3)将红细胞膜囊泡和聚合物载药纳米粒子混合、挤压得到红细胞膜包裹的聚合物基载药纳米复合体系。
按照本发明，本发明将红细胞分散于低渗生理盐水中裂解，得到红细胞血影；其中，所述低渗生理盐水的浓度优选为0.2wt％～0.25wt％，更优选为0.225wt％～0.235wt％；所述低渗生理盐水的pH值优选为7.4～7.5；所述低渗生理盐水的温度优选为3～8℃，更优选为4～6℃。
本发明中，本发明对红细胞的来源没有特殊要求，本领域技术人员公知的获得红细胞的方法均可，本发明所述红细胞按照以下方法制备得到：将动物全血依次用生理盐水洗涤，然后离心，并重复洗涤、离心操作2～5次，得到红细胞。其中，所述生理盐水的温度优选为3～8℃，更优选为4～6℃；本发明对离心的方法也没有特殊要求，本领域技术人员可以根据实际情况选择合适的离心方法和时间。
按照本发明，本发明还将得到的红细胞血影进行超声、挤出，得到红细胞膜囊泡；其中，所述超声的频率优选为40～50kHz，更优选为42～48kHz；所述超声的功率优选为80～120W，更优选为100～110W；所述超声的时间优选为8～15min，更优选为10～12min；所述挤出优选为依次经过600-nm、400-nm、200-nm、100-nm聚碳酸酯多孔膜挤出，得到的红细胞囊泡的粒径为600nm、400nm、200nm、100nm。
按照本发明，本发明还将红细胞膜囊泡和聚合物载药纳米粒子混合、挤压得到红细胞膜包裹的聚合物基载药纳米复合体系。其中，本发明所述混合优选为在冰水浴中超声15～30min，更优选为超声20～25min，得到混合液；所述挤压为将混合液通过聚碳酸酯多孔膜进行挤压；所述聚碳酸酯多孔膜的孔径优选为80～120nm，更优选为100～110nm；所述挤压的次数优选为8～12次，更优选为10～11次。
本发明中，所述聚合物载药纳米粒子优选通过在聚阴离子大分子化合物上担载小分子药物得到；其中，所述聚阴离子大分子化合物为果胶、海藻酸钠和和透明质酸中的一种或几种，更优选为聚阴离子大分子化合物为果胶、海藻酸钠或透明质酸；所述小分子药物优选为阿霉素、紫杉醇、5-氟尿嘧啶、吉西他滨、阿糖胞苷、阿扎胞苷、克拉屈滨、氟达拉滨、柔红霉素、表柔比星、吡柔比星、伊达比星、放线菌素D、丝裂霉素、光辉霉素、更生霉素、多西他赛、喜树碱、羟基喜树碱、长春新碱、长春瑞滨或长春花碱，更优选为阿霉素；本发明中，本发明对聚阴离子大分子化合物上担载小分子药物制备聚合物载药纳米粒子的方法没有特殊要求，本领域技术人员可以根据具体的聚合物和小分子药物选择合适的制备方法。
本发明还提供了一种本发明所述的制备方法制备的红细胞膜包裹的聚合物基载药纳米复合体系，通过实验发现，通过本发明通过采用特定的方法制备得到红细胞膜包裹的聚合物基载药纳米复合体系，使得得到的药物纳米粒子呈球形，大小较均匀，大小在110～200nm，且包裹性好，稳定性好，且该药物具有一定的靶向性，尤其是对于肝细胞具有特异性识别能力，因而能够使药物在癌细胞周围集中，进而减少对正常细胞的毒副作用。可以通过静脉注射的方式，进行疾病特别是癌症的治疗，
本发明还提供了本发明所述的红细胞膜包裹的聚合物基载药纳米复合体系在制备抗肝癌药物中的应用。
本发明提供了一种红细胞膜包裹的聚合物基载药纳米复合体系的制备方法，通过首先将红细胞分散于低渗生理盐水中裂解，得到红细胞血影，然后将得到的红细胞血影进行超声、挤出，得到红细胞膜囊泡；最后将红细胞膜囊泡和聚合物载药纳米粒子混合、挤压得到红细胞膜包裹的聚合物基载药纳米复合体系；其中，通过选择所述低渗生理盐水的浓度为0.2wt％～0.25wt％；所述低渗生理盐水的pH值为7.0～7.6；进而使得本发明得到的红细胞膜囊泡能够很好的包裹聚合物载药纳米粒子，且得到的复合体系的传递效果好，靶向性强，对正常细胞的毒性较小，且通过实验发现，尤其对于肝细胞具有特异性识别能力。而且，本发明提供的制备方法反应条件温和、方法简单、操作简便、易于实施，最终制剂不涉及增溶剂和有机溶剂，安全可靠，具有很好的工业化应用前景。
下面将结合本发明实施例的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
制备红细胞膜包裹的果胶/阿霉素纳米体系
(1)称取100mg的低甲氧基果胶溶于50ml水，调节pH至4.5～5.5，搅拌30min，依次加入EDC和NHS，50℃反应30min，加入50ml 0.1mg/ml的阿霉素溶液，50℃反应24h.反应结束后，用旋转蒸发仪把液体浓缩至5ml，用乙醇洗涤，离心去掉上清液，反复操作，直至上清液无红色液体。沉淀于真空干燥箱干燥。
(2)将沉淀加60ml双蒸水复溶，50℃ 100rpm搅拌48h。微滴法加入6ml Ca(OH)2，200rpm搅拌30min，然后微滴法加入18ml NaHCO3，200rpm继续搅拌30min，得到果胶/阿霉素纳米粒子。
(3)取哺乳动物抗凝新鲜全血，加入4℃生理盐水洗涤3次，每次洗涤后，800g离心6min，弃去上清液。然后将沉于底部的红细胞分散于4℃低渗(1/4X)生理盐水(pH为7.4，浓度为0.225wt％)中，红细胞在低渗介质中裂解，释放出血红蛋白，14000r/min离心15min，弃上层血红蛋白，保留底部红细胞膜，重复加入低渗生理盐水清洗红细胞膜至上清液无色。获得淡红色的红细胞血影，放入4℃冰箱保存。
(4)收集的红细胞血影在2ml EP管中使用FS30D浴超声波仪(Fisher Scientific)在频率为42kHZ，功率为100W超声波处理5分钟。随后使用Avanti mini挤出机(AvantiPolar Lipids)将得到的囊泡先后通过400-nm、100-nm聚碳酸酯多孔膜挤出，得到红细胞囊泡。
(5)将以上获得的粒径为100nm红细胞囊泡1ml和果胶/阿霉素纳米粒子1ml混合，冰浴超声20min。然后将混合液使用Avanti mini挤出机，通过100-nm聚碳酸酯多孔膜挤压10遍，最终获得红细胞膜包裹的果胶/阿霉素纳米复合体系。
具体制备工艺流程见图1，图1为制备红细胞膜包裹的果胶/阿霉素纳米粒子的工艺流程图；
对实施例1制备得到的红细胞膜包裹的聚合物载药纳米体系进行检测，结果见图2～图9：
图2为红细胞膜包裹的果胶/阿霉素纳米粒子的粒径图，从图中可以看出，纳米平均粒径在186nm左右，分散性较好；
图3为红细胞膜包裹的果胶/阿霉素纳米粒子Zeta电位图，从图中可以看出，整个纳米粒子带负电，与膜电位和聚阴离子大分子电位一致；
图4为红细胞膜包裹的果胶/阿霉素纳米粒子TEM电镜图，从图中可以看出，本发明得到的纳米粒子表面光滑，大小均一，形貌规则的球形纳米粒子；
图5为红细胞膜包裹的果胶/阿霉素纳米粒子体外释放曲线，从图中可以看出，在pH6.8与pH7.4条件下释放均缓慢。且pH5.0条件下释放速率明显快于pH7.4，这意味着在肿瘤环境pH5.0中，本发明的纳米粒子具有缓控释效果。
图6为红细胞膜包裹的果胶/阿霉素纳米粒子溶血率图，图7为红细胞膜包裹的果胶/阿霉素纳米粒子对心肌细胞H9c2的MTT结果图，图8为红细胞膜包裹的果胶/阿霉素纳米粒子对正常肝细胞L02的MTT结果图，从图6-8可以看出，本发明得到的纳米例子具有良好的生物相容性。
图9为红细胞膜包裹的果胶/阿霉素纳米粒子对肝癌细胞7402的MTT结果图，从图中可以看出该纳米粒子对肝肿瘤细胞良好的抑制效果。
实施例2
制备红细胞膜包裹的海藻酸/阿霉素纳米粒子
(1)称取50mg的海藻酸钠溶于25ml水，调节pH至5.0～6.0，搅拌40min，依次加入EDC和NHS，60℃反应30min，加入15ml 0.1mg/ml的阿霉素溶液，50℃反应24h.反应结束后，用旋转蒸发仪把液体浓缩至10ml，用乙醇洗涤，离心去掉上清液，反复操作，直至上清液无红色液体。沉淀于真空干燥箱干燥，然后将沉淀加60ml双蒸水复溶，50℃ 100rpm搅拌48h，备用。
(2)将以上获得的粒径为100nm的红细胞囊泡1ml和海藻酸/阿霉素纳米粒子1ml混合，冰浴超声20min。然后将混合液使用Avanti mini挤出机，通过100-nm聚碳酸酯多孔膜挤压10遍，最终获得红细胞膜包裹的海藻酸/阿霉素纳米复合体系。
实施例3
制备红细胞膜包裹的透明质酸/阿霉素纳米体系
(1)称取50mg的透明质酸溶于40ml水，调节pH至5.5～6.0，搅拌40min，依次加入EDC和NHS，60℃反应30min，加入30ml 0.1mg/ml的阿霉素溶液，50℃反应24h.反应结束后，用旋转蒸发仪把液体浓缩至5ml，用乙醇洗涤，离心去掉上清液，反复操作，直至上清液无红色液体。沉淀于真空干燥箱干燥，将沉淀加50ml双蒸水复溶，50℃ 100rpm搅拌48h，备用。
(2)将实施例1得到的粒径为100nm的红细胞囊泡1ml和透明质酸/阿霉素纳米粒子1ml混合，冰浴超声20min。然后将混合液使用Avanti mini挤出机，通过100-nm聚碳酸酯多孔膜挤压10遍，最终获得红细胞膜包裹的海藻酸/阿霉素纳米复合体系。
实施例4
制备红细胞膜包裹的果胶基载5-FU纳米体系
(1)0.1g的果胶溶于5mL双蒸水中，55℃水浴，磁力搅拌(600rpm)半个小时后滴入0.01M的Ca(OH)2 1mL，继续搅拌1个小时，然后向溶液中滴加入3mL NaHCO3，继续搅拌3个小时，加入0.1g 5-FU继续搅拌24小时，然后在20℃水浴中降温半个小时后放入透析袋中透析24小时既得到载5-FU果胶基纳米粒子，放入4℃冰箱中待用。
(2)将实施例1得到的粒径为100nm的红细胞囊泡1ml和透明质酸/阿霉素纳米粒子1ml混合，冰浴超声20min。然后将混合液使用Avanti mini挤出机，通过100-nm聚碳酸酯多孔膜挤压10遍，最终获得红细胞膜包裹的果胶基载5-FU纳米体系。
对比例1
红细胞膜血影的制备工艺
将实施例1步骤3)中的低渗生理盐水pH值调至6.8，其它参数不变，得到红细胞膜血影。
对得到的红细胞血影进行检测，结果见图10，图10为对比例1得到的红细胞血影；另外实施例1得到的红细胞血影见图11，从图10～图11可以看出，实施例1得到的红细胞血影血红蛋白留存少，膜结构完整，而对比例1得到的膜结构完整，但是可以看到细胞中依然有大量的血红蛋白。
对实施例1得到的红细胞血影采用纳米粒度仪测平均粒径为2544nm，粒径较大。
对比例2
红细胞膜血影的制备工艺
将实施例1步骤3)中的低渗生理盐水的浓度调至0.675wt％，其它参数不变，得到红细胞膜血影。
对得到的红细胞血影进行检测，结果见图12，图12为对比例2得到的红细胞血影；从图12可以看出，对比例2并未出现明显的破膜现象，依然保持红细胞膜的状态。
实施例5
将实施例1步骤4)的超声时间修改为5min，得到红细胞膜囊泡；
对得到的囊泡的粒径进行测定，其粒径为648.5nm。
将上述红细胞血影通过不同孔径聚碳酸酯膜挤出，得到不同粒径的囊泡；
将得到的囊泡与实施例1制备的果胶-阿霉素纳米粒子混合挤出制备得到纳米复合物，
对得到的复合物进行稳定性测试，结果见图13，图13为不同粒径的红细胞囊泡包裹果胶-阿霉素纳米粒子得到的纳米复合物的稳定性结果，由图可以看出，200nm的红细胞囊泡包裹的效果最好最稳定。
实施例6
THP-1细胞通过加入PMA刺激后，可分化为巨噬细胞。因为阿霉素自带红色荧光，所以我们可以通过流式细胞仪检测到细胞内药物的荧光强度，检测结果见图14，图14为包裹红细胞膜的PDC@RBC-NPs、游离DOX和PDC-NPs在THP-1细胞内的荧光强度，从图中可以看出，在2h内，包裹红细胞膜的PDC@RBC-NPs比游离DOX和PDC-NPs都摄取得少，证明我们合成的PDC@RBC-NPs中红细胞膜确实对药物起到了良好的保护作用，保护药物免于网状内皮系统(RES)的吞噬，有利于药物在体内长循环。
图15为PDC-NPs组以及PDC@RBC-NPs组在THP-1细胞中荧光拍照结果图，其中，A为PDC-NPs组，B为PDC@RBC-NPs组，红色图为阿霉素自带荧光，蓝色图为DAPI染核所产生的荧光，merged为两图结合所产生荧光。颜色的深浅代表了荧光强度的大小。由图可见，PDC@RBC-NPs组的荧光强度明显低于PDC-NPs组，与流式结果相互佐证。
以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。

Claims (10)

1.一种红细胞膜包裹的聚合物基载药纳米复合体系的制备方法，包括：
1)将红细胞分散于低渗生理盐水中裂解，得到红细胞血影，
所述低渗生理盐水的浓度为0.2wt％～0.25wt％；
所述低渗生理盐水的pH值为7.0～7.6；
2)将得到的红细胞血影进行超声、挤出，得到红细胞膜囊泡；
3)将红细胞膜囊泡和聚合物载药纳米粒子混合、挤压，得到红细胞膜包裹的聚合物基载药纳米复合体系。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述低渗生理盐水的浓度为0.225wt％～0.235wt％。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述低渗生理盐水的pH值为7.4～7.5。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述红细胞按照以下方法制备得到：
将动物全血依次用生理盐水洗涤，然后离心，并重复洗涤、离心操作2～5次，得到红细胞。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)超声的频率为40～50KHz，功率为80～120W，超声的时间为8～15min。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述聚合物载药纳米粒子是通过在聚阴离子大分子化合物上担载小分子药物得到。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述聚阴离子大分子化合物为果胶、海藻酸钠和透明质酸中的一种或几种。
8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述小分子药物为阿霉素、紫杉醇、5-氟尿嘧啶、吉西他滨、阿糖胞苷、阿扎胞苷、克拉屈滨、氟达拉滨、柔红霉素、表柔比星、吡柔比星、伊达比星、放线菌素D、丝裂霉素、光辉霉素、更生霉素、多西他赛、喜树碱、羟基喜树碱、长春新碱、长春瑞滨或长春花碱。
9.一种权利要求1～8任意一项所述的制备方法制备的红细胞膜包裹的聚合物基载药纳米复合体系。
10.一种权利要求9所述的红细胞膜包裹的聚合物基载药纳米复合体系在制备抗肝癌药物中的应用。
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