CN109965056A - 一种沙棘叶发酵茶及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种沙棘叶发酵茶及其制备方法，属于茶叶加工领域。本发明通过将沙棘老叶杀青、揉捻、配合特定菌株发花，得到总黄酮和总多酚含量均显著提高、富含黄酮苷元的沙棘茶产品。本发明方法制备得到的沙棘叶茶具有发酵茶的风味与口感，同时提升了沙棘叶抗氧化、降血脂、抗肿瘤等功效，具有非常好的应用前景。

Description

一种沙棘叶发酵茶及其制备方法

技术领域

本发明属于茶叶加工领域，具体涉及一种沙棘叶发酵茶及其制备方法。

背景技术

沙棘(Hippophae rhumnoides L)，属于蔷薇目胡颓子科沙棘属，常种植于高寒、缺水、荒漠地区，是一种具有较多用途的高纬度植物，在医药和保健食品中应用十分广泛。我国沙棘资源丰富，沙棘叶天然、无毒，而且含有多种对人体有益的功能成分，尤其是富含黄酮类化合物。沙棘叶具有产量大、易收集、采集周期长、易贮藏等优于果实的自然优势，对沙棘叶进行开发和研究将有利于促进沙棘资源的合理利用。

目前沙棘叶茶的生产和加工大致有三类方式，一类是按照绿茶的加工工艺进行的，如CN200410013506.2沙棘茶，又如高原圣果沙棘制品有限公司的产品“高原圣果百通茶(沙棘茶)”以及山东东营立强沙棘开发有限公司出品的“沙棘茶”，其原料都是沙棘嫩叶，采摘沙棘嫩叶制茶技术的缺陷是会严重影响沙棘灌木生长，有碍改善生态环境。第二类加工方式是以沙棘叶和其他原材料如红茶、苦荞、山楂、菊花等材料拼配制茶，如专利CN201810974914.6一种沙棘茶的制备方法、CN201810036123.9沙棘保健茶及制备方法等。还有一类就是简单的发酵茶，沿用黑茶加工工艺，将沙棘叶和带金花黑茶混合进行制茶，如CN201410766432.3一种金花沙棘叶茶的生产方法、CN201610305889.3一种沙棘茯茶及其生产工艺，这些方法虽然利用金花菌发酵可以在一定程度上降低咖啡因含量、提高茶色素，得到风味较好的沙棘茶，然而，沙棘叶中一些固有的重要功效成分却没有得到很好的利用，大大降低了沙棘叶的功能价值。因此，开发一种营养丰富、功效强化的沙棘茶是有十分重要的意义的。

发明内容

为了克服上述技术中存在的不足之处，本发明提供一种加工简便、成本低廉、营养丰富、功效强化的沙棘老叶发酵茶。

本发明的第一个目的是提供一种沙棘叶发酵茶的制备方法，所述方法包括：

(1)沙棘叶经过杀青、揉捻得到沙棘叶茶坯；

(2)发花：将阿姆斯特丹散囊菌ACCC 32729接种在沙棘叶茶坯中进行发酵，即得沙棘叶发酵茶。

在本发明的一种实施方式中，所述步骤(1)中沙棘叶经过杀青后的含水量为30-50％。

在本发明的一种实施方式中，所述步骤(1)中杀青的工艺参数是温度60-70℃，杀青时间6-10min。

在本发明的一种实施方式中，所述步骤(1)的揉捻是将杀青后的沙棘叶在30-40℃进行揉捻。

在本发明的一种实施方式中，所述揉捻的时间为3-5min。

在本发明的一种实施方式中，所述步骤(2)中的阿姆斯特丹散囊菌ACCC 32729可在中国农业微生物菌种保藏管理中心购买得到。

在本发明的一种实施方式中，所述步骤(2)是将阿姆斯特丹散囊菌ACCC 32729的孢子悬浮液接种于沙棘叶茶坯中进行发酵。

在本发明的一种实施方式中，所述步骤(2)是按照每千克沙棘叶茶坯接种1×10⁹-9×10⁹个阿姆斯特丹散囊菌ACCC32729孢子进行发酵。

在本发明的一种实施方式中，所述步骤(2)中阿姆斯特丹散囊菌ACCC 32729继续扩大培养，制备得到金花孢子悬浮液。

在本发明的一种实施方式中，所述培养基为栀子苷0.05％-0.2％，谷氨酸钠1％-3％，蛋白胨0.1％-1％，磷酸二氢钾1％-3％，硫酸镁0.02％-0.1％，琼脂粉1％-5％。

在本发明的一种实施方式中，所述步骤(3)中发酵的湿度为30-80％。

在本发明的一种实施方式中，所述步骤(3)中发酵的温度22-32℃。

在本发明的一种实施方式中，所述步骤(3)中发酵是在通风环境下进行的。

在本发明的一种实施方式中，所述步骤(3)中发酵的时间为10-15d。

在本发明的一种实施方式中，所述发酵是在湿度30-80％、温度28-32℃的通风环境下发酵4-6d，然后调节温度至22-26℃继续发酵6-11d。

在本发明的一种实施方式中，所述步骤(3)还包括在发酵后进行干燥，得到发酵沙棘茶。

在本发明的一种实施方式中，所述干燥是在45-65℃下干燥4-8h。

在本发明的一种实施方式中，所述发酵沙棘茶的含水量为8-15％。

在本发明的一种实施方式中，所述沙棘叶可以是成熟沙棘叶。

在本发明的一种实施方式中，所述方法具体包括：

(1)采摘成熟沙棘叶：采摘非嫩芽状态的沙棘叶片，清水冲洗去除叶片泥沙，晾晒至叶面无明显水痕；

(2)杀青：将沙棘叶进行杀青，得到含水量为30-50％的沙棘叶；

(3)揉捻：将杀青后的沙棘叶放入揉捻机轻度揉捻3-5分钟，温度维持在30-40℃，得沙棘叶茶坯；

(4)发花：引入阿姆斯特丹散囊菌ACCC 32729，按比例接种揉捻后的沙棘叶，置于湿度30-80％、温度28-32℃的通风环境下发酵，4天后调节温度至22-26℃继续发酵6-11天；

(5)将所述发酵后的沙棘叶在45-65℃下干燥4-8h，得到含水量8-15％的发酵沙棘茶。

本发明的第二个目的是提供一种沙棘叶发酵茶，所述沙棘叶发酵茶是利用上述方法制备得到的。

本发明的第三个目的是提供一种抗氧化制剂，所述抗氧化制剂包含上述的沙棘叶发酵茶。

本发明的第四个目的是提供一种提高沙棘茶叶中多酚或者黄酮含量的方法，所述方法为上述的方法。

本发明的第五个目的是提供一种提高沙棘茶叶中黄酮苷元含量的方法，所述方法为上述的方法。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

1.本发明通过特点的阿姆斯特丹散囊菌ACCC 32729代谢产生胞外酶作用于沙棘叶中的多种功效成分，使得沙棘叶中黄酮苷高效转化生成黄酮苷元(槲皮素、山奈酚和异鼠李素等)；总黄酮和总酚含量有显著提高，抗氧化活性显著提升，得到营养丰富、功效强化的沙棘茶。

2.同时，本发明方法制备的沙棘茶的茶汤苦涩味减少，口感醇厚，且工艺简单实用，工业化适应性好，具有非常好的工业应用前景。

附图说明

图1为金花菌的菌落形态；

图2为沙棘叶茶的表面金花生长情况；

图3为沙棘叶茶发酵前后黄酮苷元的检测分析结果；

图4为不同沙棘茶叶总黄酮和总酚含量的测定结果。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步的解释说明，但本发明的实施方式不限于此。

本发明阿姆斯特丹散囊菌ACCC 32729可购买于中国农业微生物菌种保藏管理中心。

实施例1

(1)采摘沙棘老叶，清水冲洗去除叶片泥沙，晾晒；

(2)杀青：将沙棘叶放在杀青机内，翻动，完成杀青；

(3)揉捻：用揉捻机轻度搓揉3-5分钟，温度维持在30℃；

(4)发花：将阿姆斯特丹散囊菌ACCC 32729孢子悬浮液按每千克沙棘叶1×10⁹个孢子的比例接种揉捻后的沙棘叶，32℃持续4天，通风换气6次，25℃继续发酵10天；

(5)干燥：将完成发酵的沙棘叶在50℃下干燥4h，即得沙棘茶叶。

实施例2

(1)采摘沙棘老叶，清水冲洗去除叶片泥沙，晾晒；

(2)杀青：将沙棘叶放在杀青机内，翻动，完成杀青；

(3)揉捻：用揉捻机轻度搓揉3-5分钟，温度维持在30℃；

(4)发花：将阿姆斯特丹散囊菌ACCC 32729孢子悬浮液按每千克沙棘叶9×10⁹个孢子的比例接种揉捻后的沙棘叶，32℃持续4天，通风换气6次，25℃继续发酵6天；

(5)干燥：将完成发酵的沙棘叶在60℃下干燥4h，即得沙棘茶叶。

实施例3

(1)采摘沙棘老叶，清水冲洗去除叶片泥沙，晾晒；

(2)杀青：将沙棘叶放在杀青机内，翻动，完成杀青；

(3)揉捻：用揉捻机轻度搓揉3-5分钟，温度维持在30℃；

(4)发花：将阿姆斯特丹散囊菌ACCC 32729孢子悬浮液按每千克沙棘叶1×10¹¹个孢子的比例接种揉捻后的沙棘叶，32℃持续4天，通风换气6次，25℃继续发酵10天；

(5)干燥：将完成发酵的沙棘叶在50℃下干燥4h，即得沙棘茶叶。

对照例1未经发酵的沙棘茶叶

参照实施例1，省略步骤(4)，其他条件不变，得到沙棘茶叶。

对照例2茯砖茶直接提取的金花菌发酵的沙棘茶叶

参照实施例1，将步骤(4)中阿姆斯特丹散囊菌ACCC32729替换为如下方法制备的金花菌：取含金花的茯砖茶1000g，粉碎过筛，获得金花菌孢子粉末，计数。按每千克沙棘叶1×10⁹个孢子的比例直接接种于揉捻后的沙棘叶，其他条件不变，制备得到沙棘茶叶。

对实施例1-3和对照例1-2所得的沙棘茶叶进行检测：

实施例1-3和对照例1-2制备的沙棘叶发酵茶以及未处理的沙棘叶粉碎，过60目筛，用于以下成分的检测：

①总酚含量的测定

用每克提取物中所含没食子酸毫克数来表示沙棘茶叶中所含总酚的量。吸取0.5mL稀释到适当浓度的提取液和没食子酸标准液(10-100μg/mL)，依次加入1mL Folin-Ciocalteu试剂(稀释10倍)，1mL 87.56g·L^-1碳酸钠溶液，摇匀后室温下放置60min，于750nm下测定吸光值。

②总黄酮含量的测定

分别吸取1mL稀释到合适浓度的样液或者芦丁标准溶液(10-100μg/mL)，依次加0.3mL亚硝酸钠溶液(50mg·mL^-1)，混匀后室温反应6min，加0.3mL硝酸铝溶液(100mg·mL^-1)，混匀后室温放置6min，加2mL氢氧化钠溶液(200mg·mL^-1)，加水至刻度，混匀后室温放置15min，于510nm处测定吸光值。

③抗氧化活性的检测

A：DPPH自由基清除能力

分别吸取100μL沙棘叶提取液，稀释至合适浓度。取100μL样液或者维生素C标准液(5-50μg/mL)，加入400μL DPPH-甲醇试剂，于30℃，暗处静置30min，以水作阴性对照，VC作阳性对照，测510nm下的吸光值。样品的DPPH自由基清除能力用VC表示，即每g沙棘叶样品相当于VC的mmol/L数。

B：ABTS⁺自由基清除能力

分别吸取100μL沙棘叶提取液，稀释至合适浓度。取50μL样液或者维生素C标准液(5-50μg/mL)，加入ABTS⁺(7mM ABTS与2.45mM K₂S₂O₈以2:1体积比混合，黑暗静置16h)试剂，于30℃，暗处静置30min，以水作阴性对照，VC作阳性对照，测510nm下的吸光值。样品的ABTS⁺自由基清除能力用VC表示，即每g沙棘叶样品相当于VC的mmol/L数。

检测结果如下：

各沙棘茶叶中的总多酚含量和总黄酮含量如表1所示。

表1不同沙棘茶叶的总多酚含量和总黄酮含量

结合图4和表1，发现按照实施例1、2和3，将预选的具有特定产酶活性的金花菌接种沙棘叶发酵数天后，沙棘叶中可溶性总多酚含量均有增加，可溶性总黄酮含量也明显增加。

实施例2加工后总多酚和总黄酮含量最高，相对于对照例1中未加工的沙棘叶中的多酚含量提高了88.07％，总黄酮提高了209.49％。这说明金花菌丰富的酶系促进了沙棘叶胞内非游离态酚类化合物尤其是黄酮的释放。

采用HPLC法同时检测实施例2发酵前后沙棘叶中黄酮苷元的含量。黄酮苷元(槲皮素、山奈酚、异鼠李素)同时检测的方法：HPLC分析的检测条件为Agilent ZORBAX EclipseXDBC18色谱柱(150mm×4.6mm，5μm)，柱温35℃，流动相为甲醇：0.2％磷酸(V：V)＝50:50，进样量10μm，流速0.8mL/min，检测波长370nm。

结果如表2，发酵后槲皮素可达75±2.84mg/100g DM、山奈酚可达105±3.01mg/100g DM、异鼠李素可达50±1.37mg/100g DM，相对于未加工组，分别提高了2.26倍、5.56倍和3.54倍，黄酮苷元含量显著增加。

同时，DPPH，ABTS⁺自由基清除能力也有非常明显的提升，检测数据见表2。

表2不同沙棘茶叶的黄酮苷元含量及抗氧化能力分析

尽管已经对本发明的技术方案做了较为详细的阐述和列举，应当理解，对于本领域技术人员来说，对上述实施例做出修改或者采用等同的替代方案，这对本领域的技术人员而言是显而易见，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种沙棘叶发酵茶的制备方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)沙棘叶经过杀青、揉捻得到沙棘叶茶坯；

(2)发花：将阿姆斯特丹散囊菌ACCC 32729接种在沙棘叶茶坯中，发酵即得沙棘叶发酵茶。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)是按照每千克沙棘叶茶坯接种1×10⁹-9×10⁹个阿姆斯特丹散囊菌ACCC 32729孢子进行发酵。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)是将阿姆斯特丹散囊菌ACCC 32729继续培养，得到阿姆斯特丹散囊菌ACCC 32729孢子悬浮液，然后进行接种发酵。

4.根据权利要求1～3任一所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中发酵的湿度为30-80％。

5.根据权利要求1～3任一所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中发酵的温度22-32℃。

6.根据权利要求1-5任一所述的方法，其特征在于，所述发酵是在温度28-32℃下发酵，然后调节温度至22-26℃继续发酵。

7.权利要求1-6任一所述的方法制备得到的沙棘叶发酵茶。

8.一种抗氧化制剂，其特征在于，所述抗氧化制剂包含权利要求7所述的沙棘叶发酵茶。

9.权利要求1-6任一所述的方法在提高沙棘茶中多酚或者黄酮含量中的应用。

10.权利要求1-6任一所述的方法在提高沙棘茶中黄酮苷元含量中的应用。