CN109952102B

CN109952102B - 使用色氨酸代谢物治疗肌肉萎缩

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Publication number: CN109952102B
Application number: CN201780054428.6A
Authority: CN
Inventors: S·N·雷尔内; A·奥黛; V·奥蒂耶; C·沙隆; J-D·杜朗; M·喀尔哥特
Original assignee: Metabrain Research
Current assignee: Metabrain Research
Priority date: 2016-09-05
Filing date: 2017-09-05
Publication date: 2023-08-04
Anticipated expiration: 2037-09-05
Also published as: ES2878042T3; CA3034635A1; PL3506901T3; RU2019109914A3; RU2019109914A; FR3055548A1; EP3506901A1; AU2017318536C1; FR3055548B1; CN109952102A; US11369595B2; WO2018042141A1; KR20190121285A; AU2017318536B2; JP7175272B2; EP3506901B1; AU2017318536A1; US20190247385A1; JP2019530743A; DK3506901T3

Abstract

本发明涉及一种色氨酸代谢物，其选自犬尿喹啉酸、邻氨基苯甲酸、喹啉酸、吡啶甲酸、喹哪啶酸及其混合物或其对映异构体、非对映异构体、水合物、溶剂化物、互变异构体、外消旋混合物或药学上可接受的盐，其作为药物，打算用于在哺乳动物中提高和/或维持肌肉量和/或强度，特别是打算用于在哺乳动物中治疗和/或预防肌肉萎缩，和/或用于在进行锻炼并旨在提高肌肉量和/或品质和/或强度的哺乳动物中促进肌肉生长，用于防止出现少肌症的症状，或用于肌肉丧失后康复，和/或用于改进剧烈体能支出之后的恢复时间。

Description

使用色氨酸代谢物治疗肌肉萎缩

技术领域

本发明涉及用于治疗和预防与肌肉萎缩相关的疾病的色氨酸代谢物。

背景技术

从功能的观点来看，将参与许多基本活动(从坐到站立、上台阶、行走)的肌肉力量与持续力(在持续用力期间维持最大收缩水平的能力)和肌肉品质(每单位肌肉量的力的度量)分开是重要的，它们可能随着情况而变差，例如在与肌肉虚弱或萎缩相关的某些疾病(恶病质、少肌症、少肌性肥胖症、癌症、杜氏肌营养不良(DMD)、肌萎缩性脊髓侧索硬化(ALS)、强直性肌营养不良(MDA)、心力衰竭等)中或在过剧烈体能支出后的肌肉损伤期间。等速肌耐力系数(最后三次肌肉向心收缩相对于前三次的力之比)和肌肉强度损失的变化，不论情况如何通常都是良好的指标。

由肌肉量和性能和/或强度的逐渐降低造成的肌肉功能的衰老或肌肉减少也被称为少肌症，造成了值得注意的并发症，例如跌倒次数增加、身体自主性降低、免疫系统受损。多种复杂机制参与其中，例如无活动、身体活力降低、营养状况不良、潜伏的炎性病症，但是也包括激素和神经源性因素，例如肌肉蛋白质降解与合成之间的失衡，其最终引起肌纤维萎缩和产生力的能力降低。同样的这些贡献随情况而变的机制，也存在于癌症期间的长期固定不动、心脏或肾衰竭或其他严重的慢性或急性疾病(恶病质、少肌性肥胖症、杜氏肌营养不良(DMD)、肌萎缩性脊髓侧索硬化(ALS)、强直性肌营养不良(MDA))以及肌肉损伤或过剧烈体能支出之后的情形中。

例如，在老年个体中，当氨基酸从肌肉转移时，普遍性随年龄而提高的胰岛素抗性，通过增加肌肉蛋白质的蛋白水解而发挥不利作用，引起肌肉量和强度的损失(Bauer等，2013；Biolo等，2014)。同样地，同化激素(睾酮、GH-IGF1、DHEA)水平的降低与促炎性细胞因子(特别是IL-6和TNF-α)水平的提高一样，放大蛋白水解过程(Bosutti等，2008；Biolo等，2008；Guillet等，2009)。此外，负责肌肉再生的卫星细胞的活化的降低，已知在骨骼肌中表达并在肌肉生长和发育中发挥抑制作用的肌生成抑制蛋白(或GDF-8)(Lee，2010)、肌萎缩蛋白-1(或MAFbx)和MURF-1的水平的提高，线粒体老化和凋亡(引起程序化细胞死亡)，也对这种现象有贡献，在少肌性肥胖症的情况下这种现象也可能被肌肉内脂肪的增加所恶化(Beyer等，2012)。相反，例如肌生成抑制蛋白基因中的遗传突变，由于肌纤维的增生性和肥大性生长两者，增加动物中的骨骼肌量(McPherron和Lee，2002和2003；Bass等，1999)。

尽管肌肉强化可以至少部分通过体力活动的增加和额外摄入膳食蛋白来补偿(Deutz等，2014)，但少肌症的预防或治疗目前只是基于适应于每位个体的日常体力活动计划和蛋白质-能量摄入的监测。当前的推荐标准推荐身体耐力(有氧)活动，但是也推荐肌肉强化(抗阻力)活动，以及具体来说被称为平衡的锻炼。从治疗的观点来看，睾酮和生长激素(GH)只对具有性腺机能减退或具有GH缺乏症的个体改善肌肉性能；DHEA不幸地在肌肉性能方面不显示出益处；维生素D降低跌倒的风险，不直接改善肌肉强度或力量。因此，目前正在进行其他的研究方向，以便确定新的治疗和预防性方法。目前正在研究的某些选择性雄激素受体调节剂或SARM以及肌生成抑制蛋白抑制剂，可以被证明是有益的，如同以食品增补剂的形式提供的某些氨基酸一样，特别是在营养失调的老年个体中。

色氨酸(TRP)是蛋白质生物合成所需的必需氨基酸，并且也是集中生物分子的前体。基本上通过犬尿氨酸途径(KP)代谢，色氨酸产生大量代谢物(至少约一百种)，例如特别是犬尿氨酸(KYN)、犬尿喹啉酸(KA)、邻氨基苯甲酸(AA)、黄尿酸、喹啉酸(QUIN)、吡啶甲酸(PICO)、喹哪啶酸(QL-Dic)或3OH-犬尿氨酸(Widner B等，1997)，并且也构成了NAD⁺或烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的从头合成的重要来源。

已显示，在经历蛋白质不足饮食的小鼠中增补TRP，能够通过提高肌肉中的IGF-1含量并改变在蛋白质合成、肌肉发育或纤维尺寸中发挥重要作用的基因的表达，来减少肌肉量的损失(Dukes A.等，2015)，而L-犬尿氨酸的效果随着试验的剂量而变(有益的或负面的)。以前的研究已经证实了TRP对肌肉、其形态和蛋白质合成的有益效果(Sanfilippo等，1995；Lin等，1988)。

然而，没有文献描述或提出了选自犬尿喹啉酸、邻氨基苯甲酸、喹啉酸、吡啶甲酸和喹哪啶酸的色氨酸代谢物可以对肌肉量具有正面效果。相反，在本发明的实施例1中甚至证明了色氨酸代谢物之一3OH-犬尿氨酸在C2C12细胞中对蛋白质合成没有效果。

在迄今为止不存在有效治疗的情况下，应该考虑到表现出肌肉性能和/或肌肉强度/力量降低的个体和更广泛地哺乳动物，可能从旨在最大化肌肉组织合成代谢和降低肌肉组织分解代谢的药物治疗、强化营养食品或食品增补剂极大地获益。

由于肌生成抑制蛋白在几个物种例如人类中是肌肉发育的下调物，因此所述酶的活性及其表达的抑制事实上代表了一种用于治疗和预防肌肉功能障碍的有趣的治疗性方法或干预。

发明内容

因此，本发明涉及一种或多种色氨酸(TRP)代谢物(根据本发明，也被称为产物)，其选自犬尿喹啉酸(KA)、邻氨基苯甲酸(AA)、喹啉酸(QUIN)、吡啶甲酸(PICO)和喹哪啶酸(QL-Dic)及其混合物或其对映异构体、非对映异构体、水合物、溶剂化物、互变异构体、外消旋混合物或药学上可接受的盐，所述代谢物用作药物，打算用于在哺乳动物中提高和/或维持肌肉量和/或力量。

在本发明的情形中，最有利的代谢物是犬尿喹啉酸(KA)，其可以单独地或与邻氨基苯甲酸(AA)、喹啉酸(QUIN)、吡啶甲酸(PICO)和喹哪啶酸(QL-Dic)中的一者或多者相组合使用。

具体来说，本发明涉及犬尿喹啉酸(KA)或其对映异构体、非对映异构体、水合物、溶剂化物、互变异构体、外消旋混合物或药学上可接受的盐，其用作药物，打算用于在哺乳动物中提高和/或维持肌肉量和/或力量。

本发明还涉及邻氨基苯甲酸(AA)或其对映异构体、非对映异构体、水合物、溶剂化物、互变异构体、外消旋混合物或药学上可接受的盐，其用作药物，打算用于在哺乳动物中提高和/或维持肌肉量和/或力量。

本发明还涉及喹啉酸(QUIN)或其对映异构体、非对映异构体、水合物、溶剂化物、互变异构体、外消旋混合物或药学上可接受的盐，其用作药物，打算用于在哺乳动物中提高和/或维持肌肉量和/或力量。

此外，本发明还涉及吡啶甲酸(PICO)或其对映异构体、非对映异构体、水合物、溶剂化物、互变异构体、外消旋混合物或药学上可接受的盐，其用作药物，打算用于在哺乳动物中提高和/或维持肌肉量和/或力量。

本发明还涉及喹哪啶酸(QL-Dic)或其对映异构体、非对映异构体、水合物、溶剂化物、互变异构体、外消旋混合物或药学上可接受的盐，其用作药物，打算用于在哺乳动物中提高和/或维持肌肉量和/或力量。

最后，本发明还涉及选自犬尿喹啉酸(KA)、邻氨基苯甲酸(AA)、喹啉酸(QUIN)、吡啶甲酸(PICO)和喹哪啶酸(QL-Dic)的至少两种产物、有利情况下至少三种产物、特别是至少四种产物的混合物，更有利情况下所有这些产物的混合物，或其对映异构体、非对映异构体、水合物、溶剂化物、互变异构体、外消旋混合物或药学上可接受的盐的混合物，其用作药物，打算用于在哺乳动物中提高和/或维持肌肉量和/或力量。

有利情况下，符合本发明的代谢物/产物打算用于在哺乳动物中治疗和/或预防肌肉萎缩，和/或用于在哺乳动物中限制肌肉萎缩，和/或用于在进行锻炼并旨在提高肌肉量和/或品质和/或力量的哺乳动物中促进肌肉生长，用于防止出现少肌症的症状，或用于肌肉丧失后康复，和/或用于改进剧烈体能支出之后的恢复时间。

具体来说，所述肌肉萎缩与年龄、和/或药物治疗的结果、和/或与肌营养不良蛋白异常相关的疾病、和/或固定不动、和/或恶病质、和/或神经性厌食症、和/或营养不足的状况、和/或病理状况后的吞咽困难相关。

有利情况下，所述肌肉萎缩是少肌症前兆、少肌症或严重少肌症。有利情况下，所述少肌症前兆、少肌症或严重少肌症与衰老、肥胖症或慢性疾病例如糖尿病或心力衰竭相关。

在一个特定实施方式中，所述肌肉萎缩与特别是选自杜氏肌营养不良、贝克肌营养不良、肌萎缩性脊髓侧索硬化和Steinert’s强直性肌营养不良的与肌营养不良蛋白异常相关的疾病相关。

在另一个特定实施方式中，所述肌肉萎缩与特别是不论何种原因的固定不动相关，例如由于与年龄相关的虚弱、由于肌肉损伤或由于住院治疗(例如骨折后恢复、在肥胖症治疗之前/之后发生的、烧伤)、由于事故或由于手术程序例如置换性膝或髋的插入而造成的固定不动。

在另一个特定实施方式中，所述肌肉萎缩与恶病质相关，特别是与选自癌症、获得性免疫缺陷综合征(AIDS)、慢性阻塞性肺病(COPD)、心力衰竭、肝衰竭、结核病、终末期慢性肾病(ESRD)和慢性炎性肠病(IBD)的慢性疾病相关的恶病质。

在另一个特定实施方式中，所述肌肉萎缩与食物行为障碍例如神经性厌食症相关。

在另一个特定实施方式中，所述肌肉萎缩与病理状况后(例如中风后、帕金森氏症、眼咽肌肉萎缩症(OPMD))的吞咽困难相关。

具体来说，向其给药符合本发明的代谢物/产物的所述哺乳动物还患有代谢病例如糖尿病、肥胖症、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)或非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，患有慢性炎性肠病(IBD)，患有癌症，患有肾或心力衰竭，患有神经变性的病理状况或患有精神障碍例如抑郁症。

事实上，在所述哺乳动物患有这些代谢病例如糖尿病、肥胖症、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)或非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、慢性炎性肠病(IBDs)、癌症、肾或心力衰竭、神经变性的病理状况或精神障碍例如抑郁症的情况下，除了上面描述的效果之外，符合本发明的代谢物也对这些疾病具有有益效果。

符合本发明的代谢物/产物也用于在进行锻炼并旨在提高肌肉量和/或品质和/或力量的哺乳动物中促进肌肉生长，用于防止例如与年龄相关的少肌症症状的出现，或用于肌肉丧失后康复，和/或用于改进剧烈体能支出之后的恢复时间。

所述哺乳动物可以是动物(宠物例如狗或猫)或其他动物(牛、猪科动物的成员、绵羊科动物的成员、山羊科动物的成员、马科动物的成员)或人类；有利情况下，它是人类。

本发明人已发现，符合本发明的代谢物/产物可以在C2C12肌细胞中增加蛋白质合成，在C2C12肌细胞中降低肌生成抑制蛋白基因的表达，和/或增加C2C12细胞肌管的直径并因此增加这些肌纤维的尺寸。

本发明还涉及如上所定义的符合本发明的色氨酸代谢物/产物的用途，其用于生产药物，打算用于在哺乳动物中提高和/或维持肌肉量和/或力量，和/或用于在哺乳动物中治疗和/或预防肌肉萎缩，和/或用于在哺乳动物中限制肌肉萎缩，和/或用于在进行锻炼并旨在提高肌肉量和/或品质和/或力量的哺乳动物中促进肌肉生长，用于防止出现少肌症的症状，或用于肌肉丧失后康复，和/或用于改进剧烈体能支出之后的恢复时间。

最后，本发明涉及一种用于在哺乳动物中维持和/或提高肌肉量和/或力量，和/或用于在哺乳动物中治疗和/或预防性治疗肌肉萎缩和/或延迟肌肉萎缩的出现，和/或用于在哺乳动物中限制肌肉萎缩，和/或用于在进行锻炼并旨在提高肌肉量和/或品质和/或力量的哺乳动物中促进肌肉生长，用于防止出现少肌症的症状，或用于肌肉丧失后康复，和/或用于改进剧烈体能支出之后的恢复时间的方法，所述方法包括向需要的对象给药有效量的符合本发明的色氨酸代谢物/产物。

所述有效量将根据待治疗的症状的本质和严重性、给药途径和所述对象的体重和年龄进行调整。一般来说，当所述对象是人类时，平均剂量单位将在每天50至300mg的代谢物/产物、特别是犬尿喹啉酸(KA)的剂量之间变化，一次或分多次摄入。

因此，本发明可以被有利地使用在各种不同的营养不良情况或与肌肉虚弱或萎缩相关的情况中：少肌症(与衰老、肥胖症或慢性疾病例如糖尿病或心力衰竭相关的)，与某些疾病(例如特别是癌症、获得性免疫缺陷综合征(AIDS)、慢性阻塞性肺病(COPD)、终末期慢性肾病(ESRD))相关的恶病质，病理状况(例如中风后、帕金森氏症、眼咽肌肉萎缩症(OPMD))后的吞咽困难，肌肉损伤或住院治疗(例如骨折后恢复、在肥胖症治疗之前/之后发生的、烧伤)，神经性厌食症，稀有疾病(例如杜氏肌营养不良(DMD)、肌萎缩性脊髓侧索硬化(ALS)、强直性肌营养不良(MD)等)。本发明也可用于运动医学，用于例如改进剧烈体能支出之后的恢复时间，或作为用于在某些动物中提高肌肉量和/或品质的兽药产品的组合物的一部分。

在一个有利实施方式中，符合本发明的代谢物/产物是纯化形式，例如通过化学合成获得，或者是(粗品或部分纯化的)植物提取物的形式，其通过本领域技术人员公知的方法(浸渍、渗滤等)在极性或有机溶剂或其混合物中获得。

事实上，色氨酸及其代谢物例如犬尿喹啉酸在常规食品或某些植物例如马铃薯块茎、蜂蜜、花椰菜、药草中是相对丰富的(Turski MP等，2011；Turski MP等，2012；Donarski等，2010)。

因此，通过消费食品增补剂或通过摄食富含提取物或天然或合成的纯化活性物质的食物(例如乳制品或饮料)，可以提供有益剂量的符合本发明的TRP的活性代谢物/产物。

有利情况下，符合本发明的代谢物/产物是包含药学上可接受的赋形剂的药物组合物或兽药组合物的形式。它也可以是旨在口服给药的营养组合物或食品增补剂的形式。

在一个有利实施方式中，符合本发明的药物、兽药或营养组合物或食品增补剂还包含另一种活性药剂，其在有利情况下具有互补或协同效果。

该第二种活性药剂可以在与本发明的代谢物相同的药物或营养或兽药组合物或相同的食品增补剂中给药。它也可以分开地，在同一时间或随时间顺序给药。

这种活性药剂可以是在预防或治疗肌肉功能障碍或肌肉量减少中常用的一种或多种药物或食品增补剂或食品或兽药制品或抗体，其取决于情况(少肌症、少肌性肥胖症、心力或肾衰竭、厌食、与癌症或其他慢性疾病相关的恶病质、杜氏肌营养不良(DMD)、肌萎缩性脊髓侧索硬化(ALS)、强直性肌营养不良(MD)、与某些病理状况相关的吞咽困难、肌肉损伤或住院治疗、肥胖症手术、剧烈体能支出等)，可以与符合本发明的代谢物产生有用的药理协同作用。

这种活性药剂可能对应于营养品，例如蛋白质(例如肌酐)或氨基酸(例如赖氨酸、精氨酸、亮氨酸、β-羟基-β-甲基丁酸、瓜氨酸)、维生素(例如维生素D、B族维生素等)、矿物质(例如镁、钙等)或已知具有抗炎性质的其他营养剂(例如ω-3多不饱和脂肪酸(DHA、EPA))或促进细胞作用的其他活性营养物例如磷脂(例如磷脂酰胆碱、磷酯酰丝氨酸)的混合物。

这种活性药剂也可能对应于某些激素(例如生长激素(GH)、胰岛素样生长因子(IGF-1))，用于优化它们的效果并潜在地降低它们的副作用。

这种活性药剂也可能对应于药物治疗(例如血管紧张肽II受体拮抗剂或选择性雄激素受体调节剂(SARM)或肌生成抑制蛋白抑制剂或抗体)。

这种活性药剂还可能对应于软骨保护剂(例如葡萄糖胺、硫酸软骨素、透明质酸或胶原蛋白水解物)，目的在于在患有骨关节炎的个体中增强由固定不动而损失的肌肉量。

定义

在本发明的情形中，术语“药学上可接受的”打算意味着可用于制备药物或兽药组合物，通常是安全、无毒的，既不是生物学上不理想也不是以其他方式不理想的，并且对于兽医用途以及人类制药用途是可接受的。

在本发明的情形中，表述“代谢物或产物的药学上可接受的盐”打算意味着如上所定义的药学上可接受的的并且具有母体代谢物的所需药理活性的盐。因此，它们是有机和无机酸加成盐和碱加成盐，它们在给药到人类或动物时是生理耐受的，并且不产生过敏或类似的不幸反应例如头晕。盐的实例包括但不限于：乙酸盐，己二酸盐，藻酸盐，天冬氨酸盐，苯甲酸盐，苯磺酸盐，硫酸氢盐，丁酸盐，柠檬酸盐，樟脑酸盐，樟脑磺酸盐，环戊基丙酸盐，二葡萄糖酸盐，十二烷基硫酸盐，乙磺酸盐，延胡索酸盐，氟代庚酸盐，甘油磷酸盐，半硫酸盐，庚酸盐，己酸盐，盐酸盐，氢溴酸盐，氢碘酸盐，2-羟乙基甲磺酸盐，乳酸盐，马来酸盐，甲磺酸盐，2-萘磺酸盐，烟酸盐，草酸盐，棕榈酸盐，果胶酸盐，过硫酸盐，苯基丙酸盐，苦味酸盐，新戊酸盐，丙酸盐，琥珀酸盐，酒石酸盐，硫氰酸盐，对甲苯磺酸盐，十一烷酸盐等。盐的其他实例包括与适合的阳离子例如Na⁺、NH₄ ⁺、NW₄ ⁺(其中W是C₁-C₄烷基)等混合的本发明的化合物的阴离子。

在本发明的情形中，表述“代谢物或产物的溶剂化物”打算意味着通过向符合本发明的代谢物/产物添加惰性溶剂分子而获得的任何化合物，所述溶剂化物由于它们的相互吸引力而形成。所述溶剂化物可以是例如化合物的醇化物。水合物是其中使用的惰性溶剂是水的溶剂化物。它可能是单、二或三水合的，

在本发明的情形中，术语“互变异构体”打算意味着符合本发明的代谢物的任何构造异构体，它们可以通过被称为互变异构化的可逆化学反应相互转变。在大多数情况下，所述反应通过氢原子的迁移来发生，并伴有双键位置的变化。在能够互变异构化的化合物的溶液中，产生两种互变异构体之间的平衡。互变异构体之间的比率则取决于溶剂、温度和pH。因此，互变异构体作用是通常由氢原子和π键(双键或叁键)的伴行迁移引起的一种官能团向另一种官能团的转变。常见的互变异构体是例如下述成对化合物：醛/酮–醇或更具体来说烯醇；酰胺–酰亚胺酸；内酰胺–内酰亚胺；亚胺–烯胺；烯胺–烯胺。特别地，它可以包括环-链互变异构作用，其在质子的移动伴有开链结构向环的转变时发生。

表述“赋形剂”意味着在药物、营养或兽药组合物或食品增补剂的配方中使用的用于提供介质的无毒性药剂和/或可用于药物、营养或兽药组合物或食品增补剂的形式。载体可以包含一种或多种这些药剂，例如稳定剂或在缓冲pH下的水性溶液。药学上可接受的的或者可以用于营养组合物或食品增补剂中的赋形剂的实例包括水性或固体缓冲成分，包括磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸；低分子量多肽(少于约10个残基)；蛋白质，例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，例如EDTA；糖醇，例如甘露糖醇或山梨糖醇；成盐平衡离子，例如钠；和/或非离子型表面活性剂，例如聚乙二醇(PEG)和/>

对所述药物、营养或兽药组合物或食品增补剂进行制备以便适合于给药模式。可接受的药物或营养赋形剂部分由给药的组合物决定，并且也由用于给药所述组合物的具体过程决定。因此，存在大量各种不同的适合的药物、营养或兽药组合物或食品增补剂的配方，其可以含有本文中描述的代谢物/产物。这些代谢物/产物的给药剂量取决于个体病例，并且通常必须根据个体情况进行调整，以便获得有效治疗量和最佳效果。因此，它取决于待治疗的疾患的本质和严重性程度，还取决于疾病的进展、患者的年龄和总体健康状况以及待治疗的人类或动物的个体反应。每日药剂可以在单一药剂中给药，或者特别是在给药量大时，可以分成几个单独的药剂。

所述组合物可以是固体、液体或半固体形式，适合于各种不同的给药途径(口服，直肠，鼻，眼内，局部例如表面、透皮、颊、阴道或舌下，或肠胃外例如皮下、肌肉内、静脉内或真皮内)。口服给药是优选的；这种途径最适合于长期治疗。然而，通过其他途径给药也是可能的，例如静脉内和透皮。静脉内配方含有溶解、悬浮或乳化在无菌载体中的活性物质，并任选地存在乳化剂、稳定剂、缓冲剂和其他常规添加剂；它们通常被分配在小瓶或输注用瓶中，或者可以以干燥产品的形式储存，在使用前用水或适合的载体重构。固体药物组合物可以是片剂、凝胶胶囊、粉剂、颗粒剂、丸剂、待重构的粉剂等；它们可以含有常规的赋形剂例如粘合剂、填充剂、稀释剂、压制剂、润滑剂、去污剂、染料、调味剂和润湿剂。片剂可以按照本领域中公知的方法来包衣。适合的填充剂包括纤维素、甘露糖醇、乳糖和其他类似的药剂。用于口服给药的液体组合物可以是水性或油性悬液、溶液、乳液、糖浆或酏剂的形式，或者可以以干燥产品的形式存在，在使用前用水或适合的载体重构；它们可以含有常规添加剂，例如悬浮剂，如山梨糖醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化可食用脂肪；乳化剂，例如卵磷脂、失水山梨糖醇单油酸酯或阿拉伯胶；非水性转运剂(其可以包含食用油)，例如杏仁油、分馏椰子油，油性酯类例如甘油、丙二醇或乙醇的酯类；防腐剂，例如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨酸，以及如果需要的话，常规调味剂或着色剂。

术语“预防”是指在疾病出现之前，在可能暴露于致病因子或对疾病易感的对象中降低接触或发生疾病或障碍的风险(例如确保疾病的至少一种临床症状不能发生)。

术语疾病或障碍的“治疗”在一个实施方式中是指所述疾病或障碍的改善(例如通过制止所述疾病或减轻其至少一种临床症状的表现、程度或严重性)。

天然或合成的分子可以与适合的药物承载物相组合使用。这些组合物包含有效量的符合本发明的TRP代谢物或产物和可接受的药物承载物或赋形剂。

在阅读了下面的附图和实施例的描述后，将会更清楚地理解本发明，提供所述附图和实施例纯粹是作为非限制性说明。

附图说明

图1示出了在C2C12肌细胞中犬尿喹啉酸(KA)对蛋白质合成的影响随所使用的剂量的变化。

图2示出了在C2C12肌细胞中邻氨基苯甲酸对蛋白质合成的影响。

图3示出了在C2C12肌细胞中喹啉酸对蛋白质合成的影响。

图4示出了在C2C12肌细胞中吡啶甲酸对蛋白质合成的影响。

图5示出了在C2C12肌细胞中3OH-犬尿氨酸对蛋白质合成的影响。

图6示出了在C2C12肌细胞中3OH-犬尿氨酸对肌生成抑制蛋白基因表达的影响。

图7示出了犬尿喹啉酸对C2C12肌纤维的形态测量参数的影响(图7A-图7B)。

图8示出了在正常小鼠中犬尿喹啉酸对由固定不动7天引起的肌肉萎缩的影响。

具体实施方式

实施例1：C2C12细胞中蛋白质合成的测量

将细胞计数并以每个孔20 000个细胞的密度接种在24孔板中含有比例为4.5g/l的葡萄糖并增补有胎牛血清(10％)和抗生素(青霉素和链霉素)的DMEM培养基中。48小时后，通过部分血清剥夺(2％代替10％)诱导成肌细胞分化5天。然后将细胞置于不含葡萄糖或亮氨酸的培养基(Krebs培养基)中，在37℃下1h，然后在含有2.5μCi/ml放射性标记的亮氨酸的无血清DMEM培养基中，在存在待测试产物(DMSO(对照)、犬尿喹啉酸或邻氨基苯甲酸或喹啉酸或吡啶甲酸或3OH-犬尿氨酸)或参比(IGF-1，100ng/ml)的情况下温浴150min。在温浴结束时，除去上清液，并将细胞在0.1N NaOH溶液中裂解30min。在细胞级分中测量放射活性，并通过按照Lowry方法测定来确定蛋白质总量。使用至少n＝6评估每种条件；100ng/ml IGF-1是我们用于刺激蛋白质合成的对照。结果在温浴150min后以cpm/μg蛋白为单位表示，或表示为相对于对照条件的百分率。结果被表示为对照的％并进行统计检验：Dunnett's或Dun检验(相对于对照*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001)。使用犬尿喹啉酸、邻氨基苯甲酸、喹啉酸、吡啶甲酸和3OH-犬尿氨酸获得的结果显示在图1至5中。它们显示了犬尿喹啉酸、邻氨基苯甲酸、喹啉酸和吡啶甲酸显著诱导蛋白质合成。在犬尿喹啉酸存在下温浴150min后，观察到蛋白质合成的剂量依赖性的刺激。另一方面，另一种色氨酸代谢物3OH-犬尿氨酸对蛋白质合成没有影响。

实施例2：在C2C12细胞中肌生成抑制蛋白基因表达的测量

将C2C12成肌细胞(ATCC CRL-1772)以每孔30 000个细胞的密度接种在24孔板中，并在含有比例为4.5g/l的葡萄糖并增补有胎牛血清(10％)和抗生素(青霉素和链霉素)的DMEM培养基中培养。48小时后，通过部分血清剥夺(2％代替10％)诱导所述成肌细胞分化5天。然后将细胞置于无血清、葡萄糖耗尽的培养基(含有1g/l葡萄糖的DMEM)中，在待测试的分子(DMSO(对照)或IGF-1(100ng/ml)或犬尿喹啉酸)或参比(浓度为100ng/ml的IGF-1)存在下6h。在实验结束时，使用基于苯酚和氯仿的常规方法提取信使RNA(mRNA)。简单来说，将细胞在含有强酸和苯酚的trizol溶液(Sigma T9424)中裂解。通过添加氯仿然后离心，将mRNA与蛋白质分离开。然后将它们从异丙醇沉淀，以便随后以1μg/μl的浓度悬浮在无RNase且无DNAse的超纯水中。然后使用AMV酶，在引物和核苷酸混合物存在下，按照供应商提供的方案(Applied Biosystems 4368814)，通过反转录将1μg mRNA转变成互补DNA。基因表达通过通常被称为PCR的聚合酶链反应，在定量条件下研究，因此具体名称为qPCR。所述qPCR在7900HT Fast实时PCR检测系统(Applied Biosystems)上进行。编程的条件是标准条件，并由95℃下15min的1个循环，95℃下15s和60℃下1min的40个循环，以及最终的在60℃至95℃之间的熔解曲线步骤构成。被分析的样品都含有100mg cDNA，包括酶、寡核苷酸混合物和嵌入剂(sybergreen)的qPCR缓冲液，以及对所研究的基因特异的引物对，所述引物对在策略上在两个外显子序列之间选择，并且终浓度为200nM。荧光探针结合到双链DNA并只在结合到DNA后发射荧光。荧光阈值由机器的程序确立。当DNA的量允许所述荧光探针超过这个阈值时，获得被称为“Ct”(循环阈值)的PCR循环数。正是这个值形成了用于相对定量DNA的计算的基础。在样品的起始DNA量与不经历处理的对照的起始DNA量之间建立比率R(即R＝2^{-(Ct样品–Ct对照)})，并且将这个测量值反过来关联到已知不受所述处理调节的管家基因的测量值(即R＝2^-ΔΔCt)。

使用的引物提供在下面的表1中：

表1：用于评估基因表达修饰的引物

在温浴结束时，通过RT-qPCR测量肌生成抑制蛋白基因的表达，并使用β-肌动蛋白管家基因进行标准化。进行了统计检验：Dunnett's或Dun检验(相对于对照*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001)。使用犬尿喹啉酸获得的结果显示在图6中。在用犬尿喹啉酸温浴6小时后观察到肌生成抑制蛋白基因表达的剂量依赖性抑制。

实施例3：C2C12肌纤维直径的评估

将C2C12成肌细胞(ATCC CRL-1772)以每孔10 000个细胞的密度接种在用甘油处理的8孔板中，并在含有比例为4.5g/l的葡萄糖并增补有胎牛血清(10％)和抗生素(青霉素和链霉素)的DMEM培养基中培养。48小时后，通过部分血清剥夺(2％代替10％)诱导所述成肌细胞分化3天。然后将细胞置于无血清、葡萄糖耗尽的培养基(含有1g/l葡萄糖的DMEM)中，在待测试的分子(DMSO(对照)或犬尿喹啉酸)或参比(浓度为100ng/ml的IGF-1或10μM地塞米松)存在下3天。在所述培养结束时，将细胞清洗，并使用2.5％戊二醛/0.1％triton溶液在环境温度下固定1h。将细胞层用DAPI(细胞核的荧光标记物)覆盖。在冷暗处储存16h小时后，在荧光显微镜(Carl Zeiss,AxioVert 200)下观察载片，并使用Axiovision 4.1软件分析图像，用于测量纤维的直径。

示出了每种条件的代表性图像。进行了统计检验：Dunnett's或Dun检验(相对于对照*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001)。使用犬尿喹啉酸获得的结果显示在图7中。在犬尿喹啉酸(100μM)存在下温浴3天后，观察到C2C12肌纤维尺寸的增加。

实施例4：在小鼠中犬尿喹啉酸对由固定不动引起的肌肉萎缩的影响

已知肢体固定不动引起骨骼肌萎缩，其涉及与蛋白质降解、肌纤维类型变化、氧化胁迫相关的机制或炎性机制。简单来说，在本研究中使用雄性8-9周龄CD1小鼠。按照Caron等(2009)描述的程序，利用手术订书钉，将左后肢的脚在背侧胫骨屈曲位置中固定7天。另一只脚(右后肢)用作对照。在所述固定不动期间，一组动物(n＝12)在饮用水中接受犬尿喹啉酸处理(每天3mg/kg)。另一组动物充当对照(n＝16只动物)。在7天的研究结束时，将动物处死，以便从两个后肢取出胫骨前肌。对于每只动物来说，计算固定不动的肢与自由肢的重量之差，然后反过来关联到体重。结果被表示为固定不动的肢相对于自由肢的重量减轻(以mg/g体重为单位)，并进行统计检验：Student's检验(相对于对照组*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001)。获得的结果显示，与没有处理的对照组相比，犬尿喹啉酸显著减少由固定不动引起的肌肉(胫骨前肌)量降低(图8)。

文献

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序列表

<110> 蒙塔博瑞恩研究公司 ( Metabrain Research )

<120> 使用色氨酸代谢物治疗肌肉萎缩 ( UTILISATION DE METABOLITES DUTRYPTOPHANE DANS LE TRAITEMENT DE L'ATROPHIE MUSCULAIRE )

<130> 1H308550 0005

<160> 6

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列 ( Artificial Sequence )

<220>

<221>

<222>

<223> mr 肌生成抑制蛋白 d ( mr myostatin d )

<400> 1

gagtctgact ttctaatgca ag

22

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列 ( Artificial Sequence )

<220>

<221>

<222>

<223> mr 肌生成抑制蛋白 ind ( mr myostatin ind )

<400> 2

tgttgtagga gtcttgacgg

20

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列 ( Artificial Sequence )

<220>

<221>

<222>

<223> mh 肌萎缩蛋白 d ( mh Atrogin d )

<400> 3

agagtcggca agtctgtgct

20

<210> 4

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列 ( Artificial Sequence )

<220>

<221>

<222>

<223> mh 肌萎缩蛋白 ind ( mh Atrogin ind )

<400> 4

gtgaggcctt tgaaggcag

19

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列 ( Artificial Sequence )

<220>

<221>

<222>

<223> m β-肌动蛋白 d ( m beta-actin d )

<400> 5

ctctagactt cgagcaggag

20

<210> 6

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列 ( Artificial Sequence )

<220>

<221>

<222>

<223> m β-肌动蛋白 ind ( m beta-actin ind )

<400> 6

ggtaccacca gacagcact

19

Claims

1.犬尿喹啉酸用于制备在哺乳动物中提高和/或维持肌肉量和/或力量的药物的用途，所述犬尿喹啉酸还包括其药学上可接受的盐。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述犬尿喹啉酸用于在哺乳动物中治疗和/或预防肌肉萎缩，和/或用于在哺乳动物中限制肌肉萎缩，和/或用于在进行锻炼并旨在提高肌肉量和/或品质和/或力量的哺乳动物中促进肌肉生长，用于防止出现少肌症的症状，或用于肌肉丧失后康复，和/或用于改进剧烈体能支出之后的恢复时间。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述肌肉萎缩与固定不动相关。

4.根据权利要求2或3所述的用途，其特征在于，所述肌肉萎缩是少肌症前兆、少肌症或严重少肌症。

5.根据权利要求1至3中任一项所述的用途，其特征在于，所述哺乳动物是人类。

6.根据权利要求1至3中任一项所述的用途，其特征在于，所述犬尿喹啉酸是纯化形式或植物提取物的形式。

7.根据权利要求1至3中任一项所述的用途，其特征在于，所述犬尿喹啉酸是包含药学上可接受的赋形剂的药物组合物或兽药组合物的形式。

8.根据权利要求1至3中任一项所述的用途，其特征在于，所述犬尿喹啉酸是打算用于口服给药的营养组合物或食品增补剂的形式。