RU2585372C1 - Фармацевтическая композиция для ингибирования аутофагии двигательных нейронов и её применение - Google Patents
Фармацевтическая композиция для ингибирования аутофагии двигательных нейронов и её применение Download PDFInfo
- Publication number
- RU2585372C1 RU2585372C1 RU2015102728/15A RU2015102728A RU2585372C1 RU 2585372 C1 RU2585372 C1 RU 2585372C1 RU 2015102728/15 A RU2015102728/15 A RU 2015102728/15A RU 2015102728 A RU2015102728 A RU 2015102728A RU 2585372 C1 RU2585372 C1 RU 2585372C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- butylidenephthalide
- motor neurons
- autophagy
- drug
- motor
- Prior art date
Links
- 210000002161 motor neuron Anatomy 0.000 title claims abstract description 71
- 230000004900 autophagic degradation Effects 0.000 title claims abstract description 34
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title claims description 13
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title description 20
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 29
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 claims abstract description 25
- WMBOCUXXNSOQHM-FLIBITNWSA-N (Z)-3-butylidenephthalide Chemical compound C1=CC=C2C(=C/CCC)/OC(=O)C2=C1 WMBOCUXXNSOQHM-FLIBITNWSA-N 0.000 claims description 59
- WMBOCUXXNSOQHM-UHFFFAOYSA-N n-butylidenephthalide Natural products C1=CC=C2C(=CCCC)OC(=O)C2=C1 WMBOCUXXNSOQHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 54
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 claims description 24
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 21
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 17
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 claims description 7
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 claims description 5
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 claims description 5
- 201000000585 muscular atrophy Diseases 0.000 claims description 5
- 201000006938 muscular dystrophy Diseases 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims description 4
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 claims description 4
- 208000002320 spinal muscular atrophy Diseases 0.000 claims description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 abstract description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 34
- 238000011831 SOD1-G93A transgenic mouse Methods 0.000 description 26
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 16
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 14
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 11
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 11
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 10
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 10
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 9
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 9
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 8
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 8
- FTALBRSUTCGOEG-UHFFFAOYSA-N Riluzole Chemical compound C1=C(OC(F)(F)F)C=C2SC(N)=NC2=C1 FTALBRSUTCGOEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 230000034994 death Effects 0.000 description 7
- 210000001178 neural stem cell Anatomy 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 229960004181 riluzole Drugs 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 5
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 5
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 5
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 4
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 4
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 4
- 210000001853 liver microsome Anatomy 0.000 description 4
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 4
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 4
- 230000031143 xenobiotic glucuronidation Effects 0.000 description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000004756 Respiratory Insufficiency Diseases 0.000 description 3
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 3
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 3
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 3
- 210000005056 cell body Anatomy 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 210000001589 microsome Anatomy 0.000 description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 201000004193 respiratory failure Diseases 0.000 description 3
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 3
- 125000006659 (C1-C20) hydrocarbyl group Chemical group 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 2
- 102000002004 Cytochrome P-450 Enzyme System Human genes 0.000 description 2
- 108010015742 Cytochrome P-450 Enzyme System Proteins 0.000 description 2
- 229940122459 Glutamate antagonist Drugs 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 2
- 206010028289 Muscle atrophy Diseases 0.000 description 2
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000007072 Nerve Growth Factors Human genes 0.000 description 2
- 108700013394 SOD1 G93A Proteins 0.000 description 2
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 2
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 2
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 2
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 2
- 230000036983 biotransformation Effects 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 210000000133 brain stem Anatomy 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 210000001787 dendrite Anatomy 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000002306 glutamic acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 230000001744 histochemical effect Effects 0.000 description 2
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 2
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000004705 lumbosacral region Anatomy 0.000 description 2
- 230000020763 muscle atrophy Effects 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 239000003900 neurotrophic factor Substances 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000009747 swallowing Effects 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 2
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 2
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 2
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 2
- 125000006657 (C1-C10) hydrocarbyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000006273 (C1-C3) alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000006527 (C1-C5) alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 102100034612 Annexin A4 Human genes 0.000 description 1
- 108090000669 Annexin A4 Proteins 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 0 CC=CC=C(c1c2c(S(*)(O)=C)ccc1)OC2=O Chemical compound CC=CC=C(c1c2c(S(*)(O)=C)ccc1)OC2=O 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 206010010904 Convulsion Diseases 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 102000008109 Mixed Function Oxygenases Human genes 0.000 description 1
- 108010074633 Mixed Function Oxygenases Proteins 0.000 description 1
- 208000010428 Muscle Weakness Diseases 0.000 description 1
- 206010028372 Muscular weakness Diseases 0.000 description 1
- 206010037714 Quadriplegia Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010044565 Tremor Diseases 0.000 description 1
- 208000035896 Twin-reversed arterial perfusion sequence Diseases 0.000 description 1
- XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N [[(2r,3r,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3-hydroxy-4-phosphonooxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [(2s,3r,4s,5s)-5-(3-carbamoylpyridin-1-ium-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl phosphate Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N 0.000 description 1
- 239000006096 absorbing agent Substances 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003194 amino acid receptor blocking agent Substances 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000001532 anti-fungicidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000010001 cellular homeostasis Effects 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000036461 convulsion Effects 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000012637 gene transfection Methods 0.000 description 1
- 239000003825 glutamate receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 1
- 230000010224 hepatic metabolism Effects 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002584 immunomodulator Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 210000001153 interneuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 210000005230 lumbar spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 1
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000037023 motor activity Effects 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 230000016273 neuron death Effects 0.000 description 1
- 230000008587 neuronal excitability Effects 0.000 description 1
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 1
- 238000012634 optical imaging Methods 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 208000037821 progressive disease Diseases 0.000 description 1
- 238000006479 redox reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 102220020162 rs397508045 Human genes 0.000 description 1
- 210000001044 sensory neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000008054 signal transmission Effects 0.000 description 1
- 230000009131 signaling function Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229960002232 sodium phenylbutyrate Drugs 0.000 description 1
- VPZRWNZGLKXFOE-UHFFFAOYSA-M sodium phenylbutyrate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)CCCC1=CC=CC=C1 VPZRWNZGLKXFOE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/34—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having five-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom, e.g. isosorbide
- A61K31/343—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having five-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom, e.g. isosorbide condensed with a carbocyclic ring, e.g. coumaran, bufuralol, befunolol, clobenfurol, amiodarone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
- A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
- A61K31/192—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having aromatic groups, e.g. sulindac, 2-aryl-propionic acids, ethacrynic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
- A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
- A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
- A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid or pantothenic acid
- A61K31/198—Alpha-amino acids, e.g. alanine or edetic acid [EDTA]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/365—Lactones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7024—Esters of saccharides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
- A61K31/7048—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
- A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2121/00—Preparations for use in therapy
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Neurology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Psychology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к применению бутилиденфталида для ингибирования аутофагии двигательных нейронов, особенно для отсрочки начала дегенеративных заболеваний двигательного нейрона. 7 з.п. ф-лы, 6 пр., 4 табл., 7 ил.
Description
ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для ингибирования аутофагии двигательных нейронов и ее применению, особенно для отсрочки начала дегенеративных заболеваний двигательного нейрона и/или лечения дегенеративных заболеваний двигательного нейрона.
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Нейрон, также известный как нервная клетка, является одной из структурно-функциональных единиц нервной системы организма. Нейроны могут передавать сообщения другим клеткам с помощью химических и электрических сигналов. Нейроны могут различаться по форме и размеру, и диаметры нейронов могут варьироваться от приблизительно 4 мкм до приблизительно 100 мкм. Структуру нейрона можно условно разделить на три части: тело клетки, дендриты и аксон, где дендриты могут передавать сигналы в тело клетки, и аксоны могут передавать сигналы из тела клетки.
Нейроны могут быть подразделены на три типа в зависимости от их направления передачи сигнала и функций: чувствительные нейроны, двигательные нейроны и интернейроны (вставочные), где двигательный нейрон является нервной клеткой, контролирующей двигательную активность тела организма. В общем, двигательные нейроны в мозге известны как высшие двигательные нейроны, в то время как двигательные нейроны в стволе головного мозга и спинного мозга известны как низшие двигательные нейроны. Функциональные расстройства, вызванные дегенерацией двигательных нейронов, могут привести к дегенеративным заболеваниям двигательного нейрона, таким как боковой амиотрофический склероз (ALS), тяжелая псевдопаралитическая миастения, миастения, мышечная атрофия, мышечная дистрофия, рассеянный склероз, множественная системная атрофия, спинальная мышечная атрофия и др. Пациенты, страдающие от вышеуказанных дегенеративных заболеваний двигательного нейрона, будут постепенно проявлять симптомы, такие как мышечная слабость, атрофия, дрожь, неподвижность, вызванная судорогой, которые могут привести к затруднению речи, затруднению глотания и нарушению дыхания (дыхательной недостаточности).
Реальная причина дегенеративных заболеваний двигательного нейрона все еще остается неопределенной до настоящего времени. Тем не менее, исследования показали, что возможные причины заболевания включают в себя гибель нейронов, вызванную избыточной аутофагией, стимулированной за счет накопления супероксиданионов, аутоиммунными расстройствами, избыточным возбуждением нейронов (например, избыточное накопление глутаматов), избыточным окислением, наследственностью и т.д. Лекарства, в настоящее время используемые в клинике для лечения дегенеративных заболеваний двигательных нейронов включают, антагонисты глутамата, такие как Рилузол (Riluzole), антиоксиданты, такие как витамин Е, нейротрофические факторы (трофогены), иммуномодуляторы и т.д. Однако вышеуказанные лекарства, как правило, не обладают значительным терапевтическим эффектом или могут только удлинить жизнь пациентов от 3 до 6 месяцев. Таким образом, все еще существует потребность в лекарственном средстве для отсрочки начала дегенеративных заболеваний двигательного нейрона и/или лечения дегенеративных заболеваний двигательного нейрона.
Изобретатели обнаружили, что соединение формулы (I) настоящего изобретения может быть использовано для ингибирования аутофагии двигательных нейронов и для снижения гибели двигательных нейронов и тем самым позволяет отсрочить начало дегенеративных заболеваний двигательного нейрона и/или лечения дегенеративных заболеваний двигательного нейрона.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Задачей настоящего изобретения является создание фармацевтической композиции для ингибирования аутофагии двигательных нейронов, содержащей эффективное количество активного компонента, выбранного из группы, состоящей из соединения формулы (I), фармацевтически приемлемой соли соединения формулы (I), фармацевтически приемлемого сложного эфира соединения формулы (I) и их комбинации:
где А представляет собой С1-С5 гидрокарбильную группу, необязательно имеющую одну или несколько ненасыщенных связей и необязательно замещенную одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из -ОН, =O, и C1-C3 гидрокарбильной группы;
X представляет собой Н, -ОН, 
или 
;
Y представляет собой О или S и необязательно связанный с А, с образованием пятичленного кольца; и
R1 представляет собой Н или замещенную или незамещенную C1-C20 гидрокарбильную группу, где одна или более -СН2- групп в гидрокарбильной группе необязательно замещена на -NH- или -О-.
Другой задачей настоящего изобретения является использование вышеуказанного активного компонента в производстве лекарственного средства для ингибирования аутофагии двигательных нейронов.
Еще одной задачей настоящего изобретения является создание способа ингибирования аутофагии двигательных нейронов у субъекта, включающего введение субъекту эффективного количества активного компонента, состоящего из соединения формулы (I), его фармацевтически приемлемой соли и его сложного эфира.
Подробные технологии и предпочтительные варианты осуществления, реализованные в рамках настоящего изобретения, будут описаны в следующих параграфах для лучшего понимания признаков заявленного изобретения специалистами в данной области.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Фиг. 1А представляет собой масс-спектр смеси бутилиденфталида и микросом печени человека, полученный с помощью ЖХ-МС/МС;
Фиг. 1В представляет собой метаболический профиль, показывающий I фазу метаболизма бутилиденфталида в организме;
Фиг. 1С представляет собой метаболический профиль, показывающий II фазу метаболизма бутилиденфталида в организме;
Фиг. 2 представляет собой график кривой выживаемости, показывающий влияние бутилиденфталида на повышение степени выживаемости SOD1-G93A трансгенных мышей;
Фиг. 3 представляет собой график кривой выживаемости, показывающий влияние Рилузола на повышение степени выживаемости SOD1-G93A трансгенных мышей;
Фиг. 4 представляет собой кривую по ВВВ-шкале, показывающую влияние бутилиденфталида на SOD1-G93A трансгенных мышей;
Фиг. 5А представляет собой изображение гистохимического окрашивания, показывающее влияние бутилиденфталида на задержку или профилактику гибели спинномозговых двигательных нейронов SOD1-G93A трансгенных мышей;
Фиг. 5В представляет собой столбчатую диаграмму, показывающую влияние бутилиденфталида на задержку или профилактику гибели спинномозговых двигательных нейронов SOD1-G93A трансгенных мышей;
Фиг. 6 представляет собой картину Вестерн-блоттинга, показывающую влияние бутилиденфталида на снижение уровня экспрессии белка LC3-II в поясничном отделе позвоночника SOD1-G93A трансгенных мышей; и
Фиг. 7 представляет собой картину Вестерн-блоттинга, показывающую влияние бутилиденфталида на ингибирование аутофагии нейральных стволовых клеток (НСК).
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Ниже будут подробно описаны некоторые воплощения настоящего изобретения. Тем не менее, не отходя от сущности настоящего изобретения, настоящее изобретение может быть осуществлено в различных воплощениях и не должно быть ограничено воплощениями, описанными в настоящем описании. Кроме того, если иное не оговорено в данном описании, термины "а", " the" или, как перечислено в описании настоящего изобретения (особенно в формуле изобретения), должны включать в себя как единственное, так и множественное числа. Кроме того, термин "эффективное количество", используемый в данном описании, относится к количеству соединения, которое может, по крайней мере, частично облегчить состояние, которое подвергают лечению у подозреваемого субъекта при введении его субъекту. Термин "субъект", используемый в данном описании, относится к млекопитающему, включая человека и отличных от человека животных.
Аутофагия представляет собой важный механизм регулирования роста клеток, гомеостаза клеток и гибели клеток, включая разрушение собственных органелл клетки или других материалов через внутриклеточные лизосомы клеток. Тем не менее, как указано выше, было известно, что избыточная аутофагия двигательных нейронов является одной из причин дегенеративных заболеваний двигательного нейрона. Таким образом, если аутофагия двигательных нейронов может быть ингибирована, то гибель двигательных нейронов может быть уменьшена, с тем чтобы лечить дегенеративные заболевания двигательного нейрона.
Изобретатели обнаружили, что следующее соединение (1) может эффективно ингибировать аутофагию двигательных нейронов, и, таким образом, оно может быть использовано, чтобы отложить начало дегенеративных заболеваний двигательного нейрона и/или для лечения дегенеративных заболеваний двигательного нейрона.
Соединение (1), известное как бутилиденфталид (BP), состоит из двух изомеров в его естественном состоянии, (Z)-бутилиденфталида (цисбутилиденфталид) и (Е)-бутилиденфталида (трансбутилиденфталид).
Было подтверждено, что после того, как бутилиденфталид метаболизируется на I фазе метаболизма или II фазе метаболизма в печени организма, одно или более из следующих соединений с (2) по (14) будут образовываться:
где Цис в соединении (10) относится к цистеину. Не ограничиваясь теорией, полагают, что эффект от бутилиденфталида, заключающийся в ингибировании аутофагии двигательных нейронов в организме, происходит благодаря общей структурной части химических структур вышеуказанных соединений со (2) по (14).
Таким образом, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для ингибирования аутофагии двигательных нейронов, содержащей эффективное количество активного компонента, выбранного из группы, состоящей из соединения формулы (I), фармацевтически приемлемой соли соединения формулы (I), фармацевтически приемлемого сложного эфира соединения формулы (I) и их комбинации:
где А представляет собой С1-С5 гидрокарбильную группу, необязательно имеющую одну или несколько ненасыщенных связей, и необязательно замещенную одним или несколькими заместителями, выбранными из группы, состоящей из -ОН, =O, и С1-С3 гидрокарбильной группы;
X представляет собой Н, -ОН, 
или 
; Y представляет собой О или S и необязательно связанный с А, с образованием пятичленного кольца; и R1 представляет собой Н или замещенную или незамещенную С1-С20 гидрокарбильную группу, где одна или более -СН2- групп в гидрокарбильной группе необязательно замещена на -NH- или -О-.
Двигательные нейроны включают высшие двигательные нейроны, такие как двигательные нейроны головного мозга, и низшие двигательные нейроны, такие как двигательные нейроны в стволе головного мозга и спинного мозга.
Предпочтительно, в соединении формулы (I), А представляет собой С1-С5 алкильную или алкенильную группу, необязательно замещенную одним или более заместителями, выбранными из группы, состоящей из -ОН, =O, и С1-С3 алкильной группы;
R1 представляет собой Н или замещенную или незамещенную С1-С10 гидрокарбильную группу, где одна или более -СН2- групп в гидрокарбильной группе необязательно замещена на -NH- или -O-.
Более предпочтительно, А представляет собой
R1 представляет собой Н, 
,
В одном воплощении фармацевтической композиции по настоящему изобретению соединение формулы (I) выбирают из группы, состоящей из описанных выше соединений с (1) по (14). Соединение формулы (I) предпочтительно представляет собой соединение (1 (то есть бутилиденфталид) и более предпочтительно представляет собой соединение следующей формулы (то есть (Z)-бутилиденфталид):
Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может ингибировать аутофагию двигательных нейронов и уменьшать гибель нейронов, и, таким образом, она может быть использована для отсрочки начала дегенеративных заболеваний двигательного нейрона и/или лечения дегенеративных заболеваний двигательного нейрона. Дегенеративные заболевания двигательного нейрона включают любые заболевания, связанные с аутофагией двигательных нейронов, включая, но, не ограничиваясь, боковой амиотрофический склероз, тяжелую псевдопаралитическую миастению, миастению, мышечную атрофию, мышечную дистрофию, рассеянный склероз, множественную системную атрофию, спинальную мышечную атрофию и т.д.
В одном воплощении фармацевтическая композиция по настоящему изобретению используется для лечения бокового амиотрофического склероза. У пациентов с боковым амиотрофическим склерозом будет постепенно проявляться мышечная атрофия, которая обычно вызывает квадриплегию, затруднение глотания и даже дыхательную недостаточность за период от 2 до 5 лет. Исследования показали, что амиотрофический боковой склероз может быть связан с чрезмерной нейронной возбудимостью (например, чрезмерное накопление глутаматов). Таким образом, в настоящее время, антагонист глутамата, такой как Рилузол (Riluzole), как правило, используется в клинике для лечения двигательных нейродегенеративных заболеваний, для увеличения коэффициента выживаемости пациентов. По сравнению с Рилузолом, фармацевтическая композиция по настоящему изобретению позволяет более эффективно отсрочить начало дегенеративных заболеваний двигательного нейрона и/или лечить дегенеративные заболевания двигательного нейрона путем ингибирования аутофагии двигательных нейронов и, таким образом, может увеличить выживаемость больных боковым амиотрофическим склерозом.
Из фармацевтической композиции по настоящему изобретению может быть изготовлено лекарственное средство в любой подходящей для введения форме, и оно может быть введено любым походящим способом. Например, но не ограничиваясь таким образом, из фармацевтической композиции может быть изготовлено лекарственное средство в форме, подходящей для перорального введения, подкожной инъекции, назального введения или внутривенной инъекции. Поскольку лекарственное средство для перорального введения является удобным для регулярного самостоятельного приема пациентами, то, предпочтительно, чтобы из фармацевтической композиции было изготовлено лекарственное средство в форме, пригодной для перорального введения. В зависимости от формы и назначения лекарственного средства фармацевтическая композиция может дополнительно содержать фармацевтически приемлемый носитель.
Для получения лекарственного средства, пригодного для перорального введения, фармацевтическая композиция может включать фармацевтически приемлемый носитель, который не оказывает вредного влияния на активность активного компонента, содержащегося в нем, такой как растворитель, масляный растворитель, разбавитель, стабилизатор, замедляющий всасывание агент, разрыхлитель, эмульгатор, антиоксидант, связующее вещество, смазывающие вещества, поглотители влаги и т.д. Лекарственное средство может быть в форме, подходящей для перорального введения, такой как таблетки, капсулы, гранулы, порошок, жидкий экстракт, раствор, сироп, суспензия, эмульсия, настойки и т.д.
Что касается лекарственного средства, пригодного для подкожной или внутривенной инъекции, фармацевтическая композиция может содержать один или несколько компонентов, таких как изотонический раствор, раствор солевого буфера (например, фосфатный буферный раствор или цитратный буферный раствор), солюбилизатор, эмульгатор, другие носители и т.д., с тем чтобы осуществить производство лекарственного средства в виде внутривенной инъекции, эмульсии для внутривенной инъекции, инъекции порошка, инъекции суспензии, порошково-суспензионной инъекции и т.д.
В дополнение к указанным выше адъювантам, фармацевтическая композиция может содержать другие добавки, такие как ароматизатор, тонер, краситель и т.д., чтобы улучшить вкус и визуальную привлекательность полученного лекарственного средства. Для улучшения срока хранения полученного лекарственного средства фармацевтическая композиция может также содержать соответствующее количество антикоагулятора, консерватора, антисептика, антифунгицидного реагента и т.д. Кроме того, фармацевтическая композиция может содержать один или несколько других активных компонентов, таких как антиоксидант (например, витамин Е), нейротрофический фактор, иммуномодулятор и т.д., чтобы дополнительно усилить эффект фармацевтической композиции по настоящему изобретению или повысить гибкость применения и адаптируемость к способу, при условии, что другие активные компоненты не имеют вредного влияния на соединение формулы (I) или его соль и эфирные производные.
В зависимости от требований субъекта, фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть применена при различных частотах введения, таких как раз в день, несколько раз в день или один раз в течение нескольких дней и т.д. Например, применительно к массе тела человека для ингибирования аутофагии двигательных нейронов дозировка композиции составляет приблизительно от 30 мг (в виде соединения формулы (I))/кг массы тела до около 2000 мг (в виде соединения формулы (I))/кг массы тела в день, а предпочтительно около 100 мг (в виде соединения формулы (I))/кг массы тела до около 1000 мг (в виде соединения формулы (I))/кг массы тела в сутки, где величина "мг/кг массы тела" означает требуемую дозу на кг-массы тела. Тем не менее, для пациентов с острыми состояниями доза может быть увеличена в несколько раз или в несколько десятков раз, в зависимости от практических требований. В одном воплощении используется фармацевтическая композиция по настоящему изобретению для лечения бокового амиотрофического склероза, активный компонент представляет собой (Z)-бутилиденфталид и его доза составляет примерно 500 мг/кг массы тела.
Настоящее изобретение также относится к применению соединения формулы (I) и/или его фармацевтически приемлемой соли(ей) и эфира(ов) в производстве лекарственного средства для ингибирования аутофагии двигательных нейронов. Путем ингибирования аутофагии двигательных нейронов лекарственное средство может быть использовано, чтобы отсрочить начало дегенеративных заболеваний двигательного нейрона и/или для лечения дегенеративных заболеваний двигательного нейрона, таких как боковой амиотрофический склероз, тяжелая псевдопаралитическая миастения, миастения, мышечная атрофия, мышечная дистрофия, рассеянный склероз, множественная системная атрофия, спинальная мышечная дистрофия, а также их комбинации. Составы и дозировки лекарственного средства, а также другие компоненты, необязательно содержащиеся в нем, все находятся в соответствии с приведенным выше описанием.
Настоящее изобретение также относится к способу ингибирования аутофагии двигательных нейронов у субъекта, включающему введение субъекту эффективного количества активного компонента, выбранного из группы, состоящей из соединения формулы (I), фармацевтически приемлемой соли соединения формулы (I), фармацевтически приемлемого сложного эфира соединения формулы (I) и их комбинаций. Составы и дозировки активного компонента, все, находятся в соответствии с приведенным выше описанием.
Настоящее изобретение будет дополнительно подробно проиллюстрировано на следующих конкретных примерах. Однако следующие примеры приведены только для иллюстрации настоящего изобретения и объем настоящего изобретения, таким образом, не ограничивают.
ПРИМЕРЫ
[Пример 1] Определение метаболитов бутилиденфталида
Известно, что метаболический путь лекарственного препарата в печени организма может быть в основном разделен на фазу I и фазу II метаболизма. Фаза I метаболизма заключается главным образом в окислительно-восстановительной реакции или реакции гидролиза лекарственного препарата, и II фаза метаболизма происходит в основном с помощью цитохром Р450 (CYP450)-зависимой монооксигеназной системы. Данный пример моделирует фазу I и II метаболизма бутилиденфталида, которые происходят в печени организма путем соответствующего смешения бутилиденфталида с печеночными микросомами или криоконсервированными гепатоцитами in vitro, при этом продукты в реакционном растворе анализируют с помощью тандема жидкостного хроматографа с масс-спектрометрометром (ЖХ-МС/МС) для идентификации метаболитов и метаболического профиля. Экспериментальные стадии, были следующими:
(1) Анализ I фазы метаболизма
Бутилиденфталид (2 мМ) соответственно смешивают с K3PO4 буфферным раствором (100 мМ, рН 7.4), содержащим человеческие, крысиные или собачьи печеночные микросомы (0.5 мг/мл). Смесь выдерживают при температуре 37°С в течение 10 минут, затем добавляют предварительно нагретые кофакторы (NADPH (2 мМ) и MgCl2 (3 мМ)) и смесь инкубируют при 37°С в течение 60 минут. После этого к смеси добавляют 3-кратный объем ацетонитрила, содержащего 0.1% муравьиной кислоты, чтобы завершить реакцию. Смесь центрифугируют при 13000 об/мин в течение 5 минут, и супернатант затем собирают и анализируют с помощью ЖХ-МС/МС, чтобы определить метаболиты.
(2) Анализ II фазы метаболизма
Среду Уильяма E(William′s), содержащую 5×105 размороженных человеческих, крысиных или собачьих гепатоцитов, соответственно добавляют в 12-луночный культуральный планшет и клетки культивируют в течение 6 часов. Затем, 0.5 мл бутилиденфталида (50 мкм) добавляют в культуральный планшет. После того как клетки инкубировали при 37°С, относительной влажности 95% и 5% CO2 в течение 6 часов, добавляют 2 мл ацетонитрила (100%), чтобы завершить реакцию. Образец собирают, смешивают соответствующим образом и центрифугируют при 45000 g, при 4°С в течение 10 минут. Супернатант затем собирают, сушат и анализируют с помощью ЖХ-МС/МС, чтобы определить метаболиты.
(3) ЖХ-МС/МС исследование
Образцы, полученные на (1) и (2) стадиях, по отдельности растворяют в смеси ацетонитрил/0,1% муравьиная кислота, центрифугируют при 45000 g, при 4°С в течение 10 минут. Затем аликвоты (20 мкл) каждого образца вводят во флакон автоматического пробоотборника (Agilent Technologies, USA) системы ЖХ-МС/МС для выполнения анализа ЖХ-МС/МС. Система ЖХ-МС/МС включает систему ABSCIEX 5500 Q TRAP™ с системой 1200SL ВЭЖХ (Agilent Technologies, США), ВЭЖХ колонку (С18 Symmetry®, 3,5 мкМ, 4,6×75 мм) и пробоотборник (Agilent Technologies, USA). Система двух растворителей (растворитель А: 0,1% муравьиная кислота; растворитель В: метанол, содержащий 0,1% муравьиной кислоты) была использована для выполнения ВЭЖХ при скорости потока 0,8 мл/мин. Градиентная система ВЭЖХ устанавливается следующим образом: от 0 до 2 минут, придерживается уровня 10% растворителя В; с 2 по 7 минуту, с градиентом от 10% до 95% растворителя В; с 7 по 12 минуту, придерживается уровня 95% растворителя В, с 12 по 14 минуту, с градиентом от 95% до 10% растворителя В; с 14 по 20 минуту, придерживается уровня 10% растворителя В; и время удерживания ВЭЖХ-анализа составляет 20 минут. Масс-спектрометрический анализ проводили электрораспылением в режиме положительной ионизации (+ESI): 5,5 кВ, 550°С, и N2 (азот) был использован в качестве вспомогательного газа. Наиболее интенсивные пики в спектре ЖХ-МС/МС и масс-сдвинутые пики в спектрах ЖХ-МС/МС каждого образца по сравнению со спектром бутилиденфталида были проанализированы с помощью LightSight™ программного обеспечения для определения метаболитов в образцах и идентификации пути биопревращения и метаболического профиля бутилиденфталида в организме. Полученные результаты приведены в Таблице 1, Таблице 2, на фиг. 1А, фиг. 1В и фиг. 1С.
Фиг. 1А показывает фрагмент спектра продукта реакции смеси бутилиденфталида (m/z 189,1) и микросом печени человека, полученный с помощью ЖХ-МС/МС. Как показано на фиг. 1А, наиболее интенсивными пиками (m/z) являются 171,2 а.е.м., 153,1 а.е.м., 143,0 а.е.м., 128,0 и 115,0 а.е.м.
В Таблице 1 приведены типы метаболитов, образующихся в результате реакции смеси бутилиденфталида и печеночных микросом (т.е. фаза I метаболизма) и пути биопревращения, наработанные путем программного анализа. Результаты показывают, что соединения с (2) по (9) настоящего изобретения могут быть получены путем реакции смеси бутилиденфталида и печеночных микросом крысы, собаки или человека, что свидетельствует о том, что бутилиденфталид может быть преобразован в подобные метаболиты, в результате метаболизма в печени различных организмов. Фиг. 1В показывает метаболический профиль, полученный в результате реакции смеси бутилиденфталида и печеночных микросом, и химические структуры соединений с (2) по (9).
В Таблице 2 показаны виды метаболитов, образующихся в результате реакции смеси бутилиденфталида и криоконсервированных гепатоцитов (т.е. II фаза метаболизма) и пути биопревращения, полученные путем программного анализа. Результаты показывают, что соединения с (11) по (14) настоящего изобретения могут быть получены путем реакции смеси бутилиденфталида и криоконсервированных гепатоцитов крысы, собаки или человека, что свидетельствует о том, что бутилиденфталид может быть преобразован в подобные метаболиты, в результате метаболизма в печени различных организмов. Фиг. 1С показывает метаболический профиль, полученный в результате реакции смеси бутилиденфталида и криоконсервированных гепатоцитов, и химические структуры соединений с (11) по (14).
[Пример 2] In vivo исследование: возможность бутилиденфталида увеличивать степень выживаемости трансгенных мышей
Известно, что около 20% пациентов с боковым амиотрофическим склерозом были связаны с мутацией в гене, который кодирует фермент Cu/Zn-супероксиддисмутазу (SOD1) и G93A, был основным местом мутации. Мыши, трансфицированные человеческим мутантным SOD1-G93A геном методом генной трансфекции (далее по тексту SOD1-G93A трансгенные мыши) были использованы в качестве животной модели для клинического исследования бокового амиотрофического склероза, поскольку мыши имеют аналогичное с человеком протекание заболевания. SOD1-G93A трансгенные мыши показывают симптомы бокового амиотрофического склероза в течение примерно 90±5 дней после рождения и умирают в течение примерно 125±5 дней после рождения.
В данном примере используются описанные выше SOD1-G93A трансгенные мыши в качестве объекта исследования для проведения in vivo анализа. SOD1-G93A трансгенных мышей (60-дневных) обрабатывают бутилиденфталидом (приобретенного у ECHO Chemical) путем перорального введения, с дозировкой 500 мг/кг массы тела один раз в день, при этом величина «мг/кг массы тела» означает дозу, необходимую на кг массы тела. После того как трансгенных мышей SOD1-G93A обрабатывают в течение 30 дней, их наблюдают, чтобы увидеть, может ли бутилиденфталид удлинять жизнь SOD1-G93A трансгенных мышей (то есть больше, чем 125 дней). Результаты показаны на фиг. 2 и в Таблице 3.
Как показано на фиг. 2 и в Таблице 3, 60-дневные SOD1-G93A трансгенные мыши в экспериментальной группе, которые обрабатывались бутилиденфталидом, путем ежедневного перорального введения, выживали в течение примерно 149±4,39 дней в среднем. То есть жизнь трансгенных мышей SOD1-G93A в экспериментальной группе удлинилась на примерно 22±2 дней по сравнению с необработанным SOD1-G93A трансгенными мышами в контрольной группе (выживали в течение приблизительно 127±6,11). В соответствии с Рисунком 3 (взятый из ссылки "Combined riluzole and sodium phenylbutyrate therapy in transgenic amyotrophic lateral sclerosis mice. Amyotrophic Lateral Sclerosis. 2009; 10: 85-94," которая полностью включена в данное описание в качестве ссылки), при использовании традиционного препарата против бокового амиотрофического склероза, Рилузола (Riluzole), для лечения SOD1-G93A трансгенных мышей мыши выживают в течение 140 дней. Приведенные выше результаты показывают, что по сравнению с Рилузолом, настоящее изобретение с использованием соединения формулы (I) может более эффективно увеличивать степень выживаемости пациентов с боковым амиотрофическим склерозом.
[Пример 3] In vivo исследование: возможность бутилиденфталида задерживать боковой амиотрофический склероз
SOD1-G93A трансгенных мышей (60-дневных) обрабатывают бутилиденфталидом путем перорального введения, с дозировкой 500 мг/кг массы тела один раз в день. После того как мышей обрабатывают в течение 30 дней, задние конечности мышей были исследованы с помощью ВВВ-шкалы (Basso, Beattie и Bresnahan (ВВВ) опорно-двигательная шкала оценки). Оценка по ВВВ-шкале задних конечностей у нормальных мышей составляет 21 очков, в то время как оценка по ВВВ-шкале у SOD1-G93A трансгенных мышей с прогрессирующим заболеванием снизилась с 21 до 0 баллов, где нижняя шкала представляет собой более тяжелое двигательное нарушение у мышей. ВВВ-шкала используется для фиксации эффективности лекарственного средства.
Как показано на фиг. 4, 60-дневных SOD1-G93A трансгенных мышей в экспериментальной группе ежедневно обрабатывают бутилиденфталидом путем перорального введения. ВВВ-шкала (Basso-Beattie-Bresnahan scale) задних конечностей у мышей медленно снижается с 125 до 135 дней (с 21 до 16 баллов) и быстро уменьшается после 135 дней (с 16 до 0 баллов); в то время как ВВВ-шкала задних конечностей необработанных мышей в контрольной группе быстро уменьшается после 110 дней (от 19 до 0 баллов). Приведенные выше результаты показали, что бутилиденфталид действительно может задержать начало бокового амиотрофического склероза.
[Пример 4] Гистохимическое окрашивание: возможность бутилиденфталида задерживать и/или предотвращать гибель спинномозговых двигательных нейронов
SOD1-G93A трансгенных мышей (60-дневных) обрабатывали бутилиденфталидом путем перорального введения, с дозировкой 500 мг/кг массы тела один раз в день. SOD1-G93A трансгенные мыши в экспериментальной группе были умерщвлены на последней стадии болезни, чтобы собрать их спинной мозг, для выполнения окрашивания гематоксилином и эозином. Число двигательных нейронов в спинном мозге наблюдают и подсчитывают с помощью микроскопа и данные сравнивают с необработанной контрольной группой.
Как показано на фиг. 5А, фиг. 5В и в Таблице 4, число спинномозговых двигательных нейронов у 60-дневных SOD1-G93A трансгенных мышей в экспериментальной группе, ежедневно обрабатываемой бутилиденфталидом, было значительно выше, чем у контрольной группы (порядковый номер экспериментальной группы: 24; порядковый номер контрольной группы: 3). Приведенные выше результаты показывают, что бутилиденфталид может эффективно задерживать и/или предотвращать гибель спинномозговых двигательных нейронов, тем самым увеличивая выживаемость SOD1-G93A трансгенных мышей.
[Пример 5] Вестерн-блоттинг исследование: возможность бутилиденфталида ингибировать аутофагию.
SOD1-G93A трансгенных мышей (60-дневных) обрабатывают бутилиденфталидом путем перорального введения, с дозировкой 500 мг/кг массы тела один раз в день. Данным исследованием было показано, что SOD1-G93A трансгенные мыши теряют свои спинномозговые двигательные нейроны из-за значительного увеличения аутофагии во время последней фазы бокового амиотрофического склероза (который можно увидеть In vivo оптической визуализации аутофагии двигательных нейронов на мышиной модели амиотрофического латерального склероза: Autophagy 7:9, 1-8; Сентябрь 2011, которая полностью включена в данное описание в качестве ссылки). Таким образом, в данном примере, SOD1-G93A трансгенные мыши в экспериментальной группе были умерщвлены на последней стадии болезни, чтобы собрать их спинной мозг, после чего белки извлекают из спинного мозга для выполнения Вестерн-блоттинга, и чтобы проанализировать белок-биомаркер аутофагии LC3-II, который был использован для определения, произошла ли аутофагия в поясничном отделе позвоночника двигательных нейронов у мышей, в котором 6-актин использовали в качестве внутреннего контроля.
Как показано на фиг. 6, в сравнении с необработанными мышами в контрольной группе, уровень экспрессии белка LC3-II и PLC3-II в шейном отделе спинного мозга, грудном отделе спинного мозга и поясничном отделе спинного мозга мышей в экспериментальной группе был значительно снижен. Приведенные выше результаты показывают, что бутилиденфталид может, в частности, ингибировать аутофагию двигательных нейронов в организме и тем самым отсрочить наступление бокового амиотрофического склероза, удлинить период выживаемости мышей и добиться эффекта лечения бокового амиотрофического склероза.
[Пример 6] Клеточный эксперимент: возможность бутилиденфталида ингибировать аутофагию
Клеточный эксперимент проводят, используя нейральные стволовые клетки (НСК), которые можно дифференцировать в мышиные двигательные нейроны для имитации мышиных двигательных нейронов.
НСК инкубируют в культуральной чашке (10 см в диаметре). Клетки промывают ФБР (фосфатный буферный раствор), когда они вырастают до плотности слияния 60%, их обрабатывают различными концентрациями бутилиденфталида в течение 12 часов. Затем клетки обрабатывают H2O2 (2500 мкМ/мл) в течение 12 часов, чтобы стимулировать аутофагию клеток. Затем клетки собирают, белки экстрагируют и анализируют уровень экспрессии белка LC3-II в НСК с помощью SDS-PAGE и Вестерн-блоттинга. Результат Вестерн-блоттинга показан на фиг. 7.
Как показано на фиг. 7, 10 мкг/мл бутилиденфталида может предохранить и предотвратить НСК от повреждений H2O2 путем ингибирования аутофагии (уменьшения уровня экспрессии белка LC3-II).
Приведенные выше примеры служат для иллюстрации принципа и эффективности настоящего изобретения и показывают признаки изобретения. Специалист в данной области может продолжить с различными модификациями и заменами на основе описания и предложений по изобретению, как описано, не отходя от принципа и его сущности. Таким образом, объем защиты настоящего изобретения является таким, как определено в прилагаемой формуле изобретения.
Claims (8)
1. Применение бутилиденфталида (BP) для производства лекарственного средства для ингибирования аутофагии двигательных нейронов.
2. Применение по п. 1, где BP представляет собой (Z)-BP.
3. Применение по п. 1, где лекарственное средство служит для ингибирования аутофагии спинномозговых двигательных нейронов.
4. Применение по п. 1, где лекарственное средство служит для отсрочки начала дегенеративных заболеваний двигательного нейрона и/или лечения дегенеративных заболеваний двигательного нейрона.
5. Применение по п. 1, где лекарственное средство служит для лечения и/или отсрочки начала бокового амиотрофического склероза, тяжелой псевдопаралитической миастении, миастении, мышечной атрофии, мышечной дистрофии, рассеянного склероза, множественной системной атрофии, спинальной мышечной атрофии и их комбинаций.
6. Применение по п. 5, где лекарственное средство служит для лечения и/или отсрочки начала бокового амиотрофического склероза.
7. Применение по п. 1, где лекарственное средство вводят в количестве от примерно 30 мг (в виде BP)/кг массы тела до приблизительно 2,000 мг (в виде BP)/кг массы тела в день.
8. Применение по п. 7, где лекарственное средство вводят в количестве от примерно 100 мг (в виде BP)/кг массы тела до приблизительно 1,000 мг (в виде BP)/кг массы тела в день.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/CN2012/080291 WO2014026372A1 (zh) | 2012-08-17 | 2012-08-17 | 用于抑制运动神经元自体吞噬的医药组合物及其应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2585372C1 true RU2585372C1 (ru) | 2016-05-27 |
Family
ID=50101210
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2015102728/15A RU2585372C1 (ru) | 2012-08-17 | 2012-08-17 | Фармацевтическая композиция для ингибирования аутофагии двигательных нейронов и её применение |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP2992879B1 (ru) |
| JP (1) | JP6178802B2 (ru) |
| KR (1) | KR101695801B1 (ru) |
| AU (1) | AU2012387970B2 (ru) |
| BR (1) | BR112015001989B1 (ru) |
| ES (1) | ES2655834T3 (ru) |
| PH (1) | PH12015500047B1 (ru) |
| RU (1) | RU2585372C1 (ru) |
| WO (1) | WO2014026372A1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US11369595B2 (en) | 2016-09-05 | 2022-06-28 | Metabrain Research | Use of tryptophan metabolites for treating muscle atrophy |
| RU2806346C2 (ru) * | 2016-09-05 | 2023-10-31 | Метабрейн Рисерч | Использование метаболитов триптофана для лечения мышечной атрофии |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TWI511727B (zh) | 2014-07-02 | 2015-12-11 | Everfront Biotech Inc | 苯酞化合物之應用 |
| NZ728386A (en) * | 2014-07-04 | 2018-02-23 | Everfront Biotech Inc | Use of phthalide compound |
| WO2019118734A1 (en) | 2017-12-13 | 2019-06-20 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Compositions and methods for treating motor neuron diseases |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006125651A2 (en) * | 2005-05-24 | 2006-11-30 | Dsm Ip Assets B.V. | Ligustilide derivatives for the treatment of inflammatory disorders |
| RU2009108655A (ru) * | 2006-08-11 | 2010-09-20 | ДСМ АйПи АССЕТС Б.В. (NL) | Производные лигустилида для лечения расстройств центральной нервной системы |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH05247022A (ja) * | 1990-07-10 | 1993-09-24 | Tsumura & Co | 新規フタリドおよびフタリドを有効成分とする脳機能改善剤 |
| WO2002060234A2 (en) * | 2000-11-22 | 2002-08-08 | Yong Chao Xia | Herbal composition for treatment of neuronal injuries and neuronal degeneration, methods to prepare the same and uses thereof |
| TWI331033B (en) * | 2007-04-26 | 2010-10-01 | Yangsen Biotechnology Co Ltd | Composition for inhibiting no and/or prostaglandin e2 synthesis and uses thereof |
-
2012
- 2012-08-17 BR BR112015001989-7A patent/BR112015001989B1/pt active IP Right Grant
- 2012-08-17 AU AU2012387970A patent/AU2012387970B2/en active Active
- 2012-08-17 RU RU2015102728/15A patent/RU2585372C1/ru active
- 2012-08-17 JP JP2014555922A patent/JP6178802B2/ja active Active
- 2012-08-17 WO PCT/CN2012/080291 patent/WO2014026372A1/zh active Application Filing
- 2012-08-17 KR KR1020157000505A patent/KR101695801B1/ko active IP Right Grant
- 2012-08-17 EP EP12883034.6A patent/EP2992879B1/en active Active
- 2012-08-17 ES ES12883034.6T patent/ES2655834T3/es active Active
-
2015
- 2015-01-08 PH PH12015500047A patent/PH12015500047B1/en unknown
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006125651A2 (en) * | 2005-05-24 | 2006-11-30 | Dsm Ip Assets B.V. | Ligustilide derivatives for the treatment of inflammatory disorders |
| RU2009108655A (ru) * | 2006-08-11 | 2010-09-20 | ДСМ АйПи АССЕТС Б.В. (NL) | Производные лигустилида для лечения расстройств центральной нервной системы |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Harn H.J. et al. Local interstitial delivery of z-butylidenephthalide by polymer wafers against malignant human gliomas / Neuro-Oncology, 2011, 13(6), pages 635-648. Lin P.C. et al. Butylidenephthalide suppresses human telomerase reverse transcriptase (TERT) in human glioblastomas / Annals of Surgical Oncology, 2011 Nov;18(12), pages 3514-3527. abstract. Liang M.J. et al. Inhibitory effects of ligustilide and butylidenephthalide on bFGF-stimulated proliferation of rat smooth muscle cells / Yao Xue Xue Bao=Acta pharmaceutical sinica, 2006 Feb;41(2), pages 161-165. abstract. Teng C.M. et al. Antiplatelet effect of butylidenephthalide / Biochimica et Biophysica Acta. 1987 Jun 22;924(3), pages 375-382. abstract. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US11369595B2 (en) | 2016-09-05 | 2022-06-28 | Metabrain Research | Use of tryptophan metabolites for treating muscle atrophy |
| RU2806346C2 (ru) * | 2016-09-05 | 2023-10-31 | Метабрейн Рисерч | Использование метаболитов триптофана для лечения мышечной атрофии |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| BR112015001989A2 (pt) | 2017-07-04 |
| AU2012387970B2 (en) | 2015-10-29 |
| WO2014026372A1 (zh) | 2014-02-20 |
| EP2992879A1 (en) | 2016-03-09 |
| NZ703195A (en) | 2016-06-24 |
| BR112015001989A8 (pt) | 2018-03-06 |
| AU2012387970A1 (en) | 2015-01-22 |
| PH12015500047A1 (en) | 2015-03-02 |
| KR101695801B1 (ko) | 2017-01-13 |
| JP2015506963A (ja) | 2015-03-05 |
| EP2992879A4 (en) | 2016-05-11 |
| JP6178802B2 (ja) | 2017-08-09 |
| KR20150043288A (ko) | 2015-04-22 |
| ES2655834T3 (es) | 2018-02-21 |
| PH12015500047B1 (en) | 2015-03-02 |
| BR112015001989B1 (pt) | 2022-06-14 |
| EP2992879B1 (en) | 2017-12-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA2766282C (en) | Inhibitors of carnitin-palmitoyl-transferase-1 for the treatment and prevention of disorders caused by delipidation of neural tissue | |
| EP3458448B1 (en) | Fasn inhibitors for use in treating non-alcoholic steatohepatitis | |
| RU2585372C1 (ru) | Фармацевтическая композиция для ингибирования аутофагии двигательных нейронов и её применение | |
| EP0983062A1 (en) | Method for increasing the concentration of ascorbic acid in brain tissues of a subject | |
| US8729026B2 (en) | Method for inhibiting autophagy of motor neurons | |
| US20210330629A1 (en) | Methods for treating mitochondrial disorders | |
| EP2974723B1 (en) | Application of phthalide compounds | |
| US11013716B2 (en) | Method for providing an increased expression of telomerase, brain-derived neurotrophic factor, stromal cell-derived factor-1, CXC chemokine receptor 4, and/or immune regulatory factor of stem cell | |
| US9889117B2 (en) | Method for treating and/or delaying the degeneration of Purkinje cells | |
| NZ703195B2 (en) | Pharmaceutical composition for inhibiting autophagy of motor neurons and use thereof | |
| CN112076187B (zh) | 安卓锭在制备用于预防或治疗非酒精性脂肪肝的药物中的用途 | |
| US20160151389A1 (en) | USE OF ERGOSTATRIEN-3ß-OL | |
| AU2014399624B2 (en) | Use of phthalide compound | |
| Cyclophosphamide-Induced | Poster Communications |