CN109937050A - 修饰的vsv-g及其疫苗 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及修饰的水泡性口炎病毒糖蛋白(VSV‑G)，其包含至少一条肽，优选抗原或其片段，编码其的核酸序列和含有所述核酸序列的载体。本发明还涉及用于治疗疾病或病况，特别是癌症或感染性疾病的疫苗和方法。

Description

修饰的VSV-G及其疫苗
技术领域
本发明涉及用于制备和施用用于治疗一种或多种疾病的疫苗(例如基于核酸的疫苗)的方法和相关组合物的领域。
背景技术
癌症仍然是现代世界死亡的主要原因之一。目前在临床实施的标准治疗，包括手术、放射和化疗，已经取得了有限的成功。这些疗法通常仅对早期局部肿瘤有效，并且很少对晚期、转移性恶性肿瘤有效，导致频繁的复发。此外，用于放射和化疗的各种药剂对正常组织有害，这可能导致显著的副作用。
几十年来，疫苗已被用作治疗策略，利用免疫系统的力量，激活针对受感染细胞和癌症的T细胞。例如，开发了针对包括流感和HIV-1在内的各种疾病的DNA疫苗(Uimer等，1993.Science.259:1745-1749；Wang等，1993.PNAS.90:4156-4160)。这些发现以及癌症抗原的发现和鉴定推动了针对癌症的DNA疫苗的研究和开发(Wang等，1999.Immunol.Rev.170:85-100)。
与其他疫苗，如重组蛋白、肿瘤细胞或载体相比，DNA疫苗更经济可行。近来在分子生物学和重组技术方面的进步以及对肿瘤抗原的不断增加的鉴定提供了用于质粒基因操作的工具。可以设计DNA疫苗中的基因以编码不同的抗原以及各种其他的免疫调节分子，来操纵所产生的免疫应答。
尽管具有所有这些优点，但由于免疫原性差，DNA疫苗在产生针对大多数癌症的治疗效果方面仅取得的成功有限。已经研究了多种策略以增强DNA疫苗的效力。已经设计了编码抗原的质粒以促进抗原表达和呈递。
源自细菌或病毒的几种组分能够与免疫系统相互作用，充当佐剂。例如，已显示霍乱或艰难梭菌(Clostridium difficile)毒素增强粘膜抗原的免疫原性(Mohan等，2013.Indian.J.Med.Res.138(5):779-795)。存在于细菌DNA上的未甲基化CpG基序对免疫系统具有强烈的刺激性影响，且可用于调节DNA疫苗的免疫原性(Klinman等，1997.J.Immunol.158(8):3635-9)。最近，癌症DNA疫苗的效力通过共同施用编码HIV-1Gag病毒衣壳蛋白的质粒而得到改善(Lambricht等，2016.Mol.Ther.24(9):1686-96)。水泡性口炎病毒糖蛋白(VSV-G)也已被用作佐剂以增强DNA疫苗效力(Marsac等，2002.J.Virol.76(15):7544-7553；Mao等，2010.J.Virol.84(5):2331-2339)。此外，VSV-G已显示具有融合性质，其有助于控制肿瘤生长并介导癌细胞杀伤(Bateman等，2000.Cancer Res.60(6):1492-1497；Bateman等，2002.Cancer Res.62(22):6566-6578)。
DNA疫苗的差免疫原性推动了向mRNA疫苗的转变，这是具有免疫用有趣性质的另一种基于核酸的技术(Schlake等，2012.RNA Biol.9(11):1319-1330；Sahin等，2014.NatRev Drug Discov.13(10):759-80；McNamara等，2015年.J Immunol Res.2015:794528)。RNA疫苗具有吸引力，因为它们保留了与DNA疫苗相同的吸引人的特征，还提供了一些额外的益处。与DNA不同，RNA只需要进入发生翻译的细胞质中，以便转染细胞。此外，RNA不能整合到基因组中，因此没有致癌可能。
VSV-G经常用于假型化，因为携带VSV-G包膜的病毒能够转导广泛的细胞类型。为了改变病毒载体的向性，已经通过插入肿瘤靶向配体构建了VSV-G突变体(Guibinga等，2004.Mol Ther.9(1):76-84；Ammayappan等，2013.J.Virol.87(24):13543-13555)。还获得了修饰的VSV-G以构建携带来自HIV-1的中和表位的基于病毒的疫苗，所述中和表位旨在促进中和抗体的产生(Grigera等，1996.J.Virol.70(12):8492-8501；Schlehuber和Rose，2004.J.Virol.78(10):5079-5087)。最后，已显示共同施用编码抗原的质粒和编码VSV-G的质粒减缓癌症进展并延长存活期(Mao等，2010.J Virol.84(5):2331-2339)。
在本文中，申请人惊奇地证明包含插入特定位点的表位的VSV-G蛋白保留其免疫原性性质。一致地，申请人显示，编码这种VSV-G蛋白的核酸的施用产生针对这些表位的强免疫应答。特别地，用包含肿瘤表位的VSV-G序列进行的DNA免疫导致对肿瘤生长的显著影响。
因此，本发明涉及编码水泡性口炎病毒糖蛋白的核酸及其用于免疫的用途，所述水泡性口炎病毒糖蛋白包含至少一种异源肽，例如抗原或其片段。
发明内容
本发明涉及编码修饰的水泡性口炎病毒糖蛋白(VSV-G)的分离的核酸序列，所述修饰的水泡性口炎病毒糖蛋白包含至少一条肿瘤抗原或其片段。
在一个实施方案中，至少一种肿瘤抗原或其片段包含至少一个表位。在一个实施方案中，至少一条肿瘤抗原或其片段是新抗原。
在一个实施方案中，将至少一条抗原或其片段在选自位置18、51、55、191、196、217、368和C-末端及其组合的氨基酸位置插入VSV-G中，其中位置编号参照印第安纳型水疱性口炎病毒(VSIV)糖蛋白氨基酸序列(SEQ ID NO：1)。
本发明进一步涉及包含本发明核酸序列的载体。
本发明进一步涉及用本发明的核酸或本发明的载体转染的树突细胞群。
本发明进一步涉及由本发明的分离的核酸序列编码的修饰的水泡性口炎病毒糖蛋白(VSV-G)。
本发明进一步涉及包含本发明的分离的核酸序列、本发明的载体、本发明的树突细胞或本发明的修饰的VSV-G的组合物。
本发明进一步涉及疫苗，其包含本发明的分离的核酸序列、本发明的载体、本发明的树突细胞或本发明的修饰的VSV-G，和任选的至少一种佐剂。
本发明进一步涉及本发明的修饰的VSV-G、编码其的核酸序列、含有编码其的核酸序列的载体、由编码其的核酸序列转染的树突细胞群，或包含所述修饰的VSV-G、核酸序列、载体或树突细胞群和任选的至少一种佐剂的疫苗，用于预防和/或治疗有此需要的受试者的疾病或病况。
在一个实施方案中，根据本发明用途的疫苗是多核苷酸疫苗。在一个实施方案中，根据本发明用途的疫苗是蛋白疫苗。
在一个实施方案中，所述疾病或病况是癌症或感染性疾病。
在一个实施方案中，根据本发明用途的本发明的修饰的VSV-G、编码其的核酸序列、含有编码其的核酸序列的载体、用编码其的核酸序列转染的树突细胞群，或包含所述修饰的VSV-G、核酸序列、载体或树突细胞群的疫苗通过肌肉内注射、皮内注射、瘤内注射、瘤周注射、基因枪、电穿孔或声孔效应施予受试者。
在一个实施方案中，根据本发明用途的本发明的修饰的VSV-G、编码其的核酸序列、含有编码其的核酸序列的载体、由编码其的核酸序列转染的树突细胞群，或包含所述修饰的VSV-G、核酸序列、载体或树突细胞群的疫苗在一种或多种检查点阻断抗体之前、同时或之后施用。
定义
在本发明中，下列术语具有以下含义：
-“肽”是指通过肽键连接在一起的少于50个氨基酸的氨基酸线性聚合物；“多肽”是指通过肽键连接在一起的至少50个氨基酸的线性聚合物；并且“蛋白”具体是指由一个或多个肽或多肽以及任选的非多肽辅因子形成的功能性实体。
-“信号肽”，也称为信号序列、靶向信号、局部化信号、局部化序列、转运肽、前导序列或前导肽，是指存在于蛋白N-末端或C-末端的肽，用于将其转移到特定的细胞隔室，例如细胞核、内质网、高尔基体等。在一个实施方案中，本发明的信号肽包含4-35个氨基酸。
-“抗原”是指可以在受试者中引发细胞和/或体液免疫应答、导致B和/或T淋巴细胞的刺激的任何分子。在一个实施方案中，抗原能够被抗体或T细胞受体结合。抗原的结构方面，例如，产生生物应答的三维构象或修饰(诸如例如，磷酸化)，在本文中称为“表位”、“抗原决定簇”或“抗原表位片段”。
-“新抗原”或“新抗原的”是指一类肿瘤抗原，其由一种或几种改变基因组编码的蛋白的氨基酸序列的肿瘤特异性突变产生。
-术语“表位”、“抗原决定簇”和“抗原表位片段”可互换使用。它们是指免疫系统，特别是抗体、B细胞或T细胞识别的抗原部分。表位可以由连续的氨基酸形成，或者由通过蛋白的三级折叠并列的非连续氨基酸形成(因此称为“构象表位”)。由连续氨基酸形成的表位通常在暴露于变性溶剂时保留，而构象表位在用变性溶剂处理时通常会丧失。它们定义了抗体、B细胞或T细胞的最小结合位点，并且因此代表抗体、B细胞或T细胞的特异性靶标。
-“T细胞表位”是指可以以肽呈递MHC分子或MHC复合物的形式与I类或II类MHC分子结合，并且然后以这种形式被未经免疫的T细胞、细胞毒CD8 T细胞或T辅助CD4细胞识别和结合的表位。T细胞表位可由I类MHC呈递用于CD8 T细胞识别(因此称为CD8 T细胞表位)，由II类MHC呈递用于CD4 T细胞识别(因此称为CD4 T细胞表位或辅助T细胞表位)，或两者兼而有之。
-“药学上可接受的赋形剂”是指当施用于动物，优选人时，不会产生不利的、变应性的或其他不良反应的赋形剂。它包括任何所有溶剂、分散介质、涂层、抗细菌和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂等。对于人类施用，制剂应满足监管机构(诸如例如FDA Office或EM A)所要求的无菌性、致热原性、一般安全性和纯度标准。
-“免疫原性组合物”是包含抗原性分子的组合物，其中向受试者施用该组合物导致在受试者中发展针对目标抗原分子的体液和/或细胞免疫应答。在一个实施方案中，可以将免疫原性组合物直接引入受体受试者，例如通过注射、吸入、口服、鼻内和粘膜施用。
-“疫苗”是指包含旨在使受试者的免疫系统对病原体(例如细菌或病毒)或肿瘤作出应答的物质或物质组的任何制剂。预防性疫苗用于预防受试者患有特定疾病或仅具有轻微情形的疾病。此类预防性疫苗通常包含引起疾病的活的和弱化的或杀伤的病原体，或其纯化的或重组的组分。治疗性疫苗旨在治疗受试者中的特定疾病，特别是癌症。此类治疗性抗癌疫苗包含引发针对肿瘤细胞的免疫应答的一种肿瘤抗原或多种肿瘤抗原。
-“佐剂”是指刺激针对抗原的免疫应答和/或调节免疫应答以获得预期应答的分子。特别地，在疫苗制剂中添加佐剂旨在改善、加速、转变和/或延长针对疫苗制剂中包含的一种或多种抗原的特异性免疫应答。佐剂的优点包括增强抗原的免疫原性、改变免疫应答的性质、减少诱导有效免疫所需的抗原量、降低加强免疫的频率以及增强老年人和免疫受损者中的免疫应答。
-“基因佐剂”是指任何生物活性因子，例如细胞因子、白细胞介素、趋化因子、配体并且最佳地其组合，其由载体表达，并且当与编码抗原的DNA疫苗一起施用时，其增强抗原特异性免疫应答。理想的基因佐剂包括但不限于编码下述的DNA序列：GM-CSF、干扰素(IFN)(例如，IFN-α、IFN-β和IFN-γ)、白细胞介素(IL)(例如，IL-1β、IL-2、IL-10、IL-12、IL-13)、TNF-α及其组合。基因佐剂也可以是来自副痘病毒的免疫刺激性多肽，例如副痘病毒毒株D1701或NZ2的多肽或副痘病毒免疫刺激性多肽B2WL或PP30。本领域技术人员可以容易地选择增强抗原特异性免疫应答的其他此类生物活性因子，以及通过已知技术构建的含有相同因子的合适质粒载体(用于DNA疫苗的基因佐剂的综述，请参见Calarota&Weiner，2004.Expert Rev.Vaccines.3:S135-49；Calarota&Weiner，2004.Immunol.Rev.199:84-99；Kutzler&Weiner，2004.J.Clin.Invest.14(9):1241-4)。
在一个实施方案中，基因佐剂不由编码本发明的修饰的VSV-G的多核苷酸或载体编码。在另一个实施方案中，基因佐剂由编码本发明的修饰的VSV-G的多核苷酸或载体编码。根据该实施方案，基因佐剂可以在其自身启动子的控制下，或者基因佐剂可以在与本发明的修饰的VSV-G的启动子相同并通过内部核糖体进入位点(IRES)与其分开的启动子的控制下。
-“树突细胞”是指免疫系统的抗原呈递细胞，其在某些发育阶段呈现称为树突的细胞质分支突起。树突细胞具有触发响应抗原而诱导的适应性免疫应答的特定功能。
-“受试者”是指动物，优选哺乳动物，更优选人。
在一个实施方案中，受试者可以是哺乳动物。哺乳动物包括但不限于所有灵长类动物(人类和非人类)、牛(包括奶牛)、马、猪、绵羊、山羊、狗、猫和等待接受或正在接受医疗护理的或之前是/是/将是医疗程序的对象或被监测疾病进展的任何其他哺乳动物。
在一个实施方案中，受试者可以是“患者”，即，温血动物，更优选人，其在等待接受或正在接受医疗护理或之前是/是/将是医疗程序的对象，或被监测疾病进展。在一个实施方案中，受试者是成年的(例如大于18岁的受试者)。在另一个实施方案中，受试者是幼年的(例如，小于18岁的受试者)。在一个实施方案中，受试者是雄性。在另一个实施方案中，受试者是雌性。
-“治疗”或“缓解”是指治疗性治疗和预防的或防止性措施；其中目的是防止或减缓(减轻)靶向的病理病况或病症，诸如例如癌症或感染。需要治疗的患者包括已患有该病症的患者以及易患该病症的患者或需要防止该病症的患者。如果在接受本发明的治疗量的修饰的VSV-G、多核苷酸、组合物或疫苗后，患者表现出可观察和/或可测量的一种或多种以下的减少或缺乏：致病细胞数量的减少、病原性总细胞百分比的减少、和/或在某种程度上缓解与特定疾病或病况相关的一种或多种症状，降低发病率和死亡率，并且改善生活质量问题，则()成功地“治疗”了受试者或哺乳动物的特定疾病或病况(诸如例如癌症或感染)。用于评估成功治疗和改善疾病的上述参数可通过医生熟悉的常规程序容易地测量。
-在数值之前的“约”表示大于或小于所述值的10％。
发明详述
1.修饰的VSV-G
本发明涉及编码包含至少一条异源肽的水泡性口炎病毒糖蛋白(VSV-G)的核酸。“异源肽”是指对VSV-G蛋白而言不是内源性或天然的肽，优选相对于VSV-G野生型蛋白而言。因此，在一个实施方案中，本发明涉及编码包含至少一条异源肽的修饰的水泡性口炎病毒糖蛋白(VSV-G)的核酸。在一个实施方案中，将异源肽的核酸插入VSV-G的核酸中。
在本发明的含义内，术语“修饰的VSV-G”等同于等价术语“嵌合VSV-G”和“突变体VSV-G”。在整个本说明书中，所有术语可互换使用。在一个实施方案中，嵌合VSV-G是包含至少一条异源肽的VSV-G。在一个实施方案中，突变体VSV-G是插入突变体，其中至少一条异源肽插入VSV-G中。在一个实施方案中，术语“修饰的”、“嵌合的”和“突变体”相对于VSV-G野生型蛋白而使用。
在一个实施方案中，编码本发明的修饰的VSV-G的核酸是分离的核酸。
本发明进一步涉及包含至少一条异源肽的修饰的水泡性口炎病毒糖蛋白(VSV-G)。
在一个实施方案中，本发明的修饰的VSV-G是重组修饰的VSV-G。
在一个实施方案中，本发明的修饰的VSV-G是分离的修饰的VSV-G。
1.1.VSV-G
水疱性口炎病毒是弹状病毒(Rhabdoviridae)科水疱性病毒(Vesiculovirus)属的组成成员。他们的基因组占据了单个负义RNA分子，其编码五种主要蛋白：糖蛋白(G)、聚合酶或大蛋白(L)、磷蛋白(P)、基质蛋白(M)和核蛋白(N)。水疱性口炎病毒糖蛋白(VSV-G)是跨膜蛋白，其功能为野生型病毒颗粒的表面包被。
目前，9种水疱性口炎病毒(VSV)毒株被归类为水疱性病毒属：印第安纳型水疱性口炎病毒(VSIV)、阿拉戈斯型(Alagoas)水疱性口炎病毒(VSAV)、卡拉加斯(Carajás)病毒(CJSV)、金迪普拉(Chandipura)病毒(CHPV)、可卡耳(Cocal)病毒(COCV)、伊斯法罕(Isfahan)病毒(ISFV)、马拉巴(Maraba)病毒(MARAV)、新泽西型水泡性口炎病毒(VSNJV)和皮理(Piry)病毒(PIRYV)。此外，其他毒株暂时归类在水疱病毒属中：草鱼弹状病毒(Grasscarp rhabdovirus)、比安(BeAn)157575病毒(BeAn 157575)、博特克(Boteke)病毒(BTKV)、卡尔查基(Calchaqui)病毒(CQIV)、美洲鳗病毒(Eel virus American)(,EVA)、格雷洛奇(Gray Lodge)病毒(GLOV)、朱罗纳(Jurona)病毒(JURV)、克拉马斯(Klamath)病毒(KLAV)、克瓦塔(Kwatta)病毒(KWAV)、拉霍亚(La Joya)病毒(LJV)、马尔佩斯泉(Malpais Spring)病毒(MSPV)、埃尔岗(Mount Elgon)蝙蝠病毒(MEBV)、佩里内特(Perinet)病毒(PERV)、梭子鱼鱼苗弹状病毒(Pike fry rhabdovirus,PFRV)、波登(Porton)病毒(PORV)、拉迪(Radi)病毒(RADIV)、鲤春病毒血症(Spring viraemia of carp)病毒(SVCV)、图帕伊阿(Tupaia)病毒(TUPV)、溃疡病(Ulcerative disease)弹状病毒(UDRV)和尤格波格丹诺夫奇(YugBogdanovac)病毒(YBV)。
在这些毒株中，蛋白G基因显示出序列相似性。VSV-G蛋白呈现N-末端胞外域、跨膜区和C-末端胞质尾。它通过反式高尔基体网络(内质网和高尔基体)输出到细胞表面。
使用MUSCLE(Multiple Sequence Comparison by Log-Expectation)的序列比对显示在下表1中。
表1-使用MUSCLE的VSV-G序列比对。
在一个实施方案中，水泡性口炎病毒糖蛋白(VSV-G)是来自VSIV的VSV-G(VSIV-G)。在一个实施方案中，来自VSIV的VSV-G包含SEQ ID NO：1或由SEQ ID NO：1组成。
在一个实施方案中，VSV-G是SEQ ID NO：1的变体。在一个实施方案中，SEQ ID NO：1的变体是与SEQ ID NO：1具有至少30％，优选至少35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、96、97、98、99％或更高序列同一性的蛋白。
当在两个或更多个多肽的序列之间的关系中使用时，术语“同一性”或“同一的”是指多肽之间的序列相关性(relatedness)的程度，如通过两个或更多个氨基酸残基的链之间的匹配数所确定的。“同一性”测量两条或更多条序列的较小序列之间相同匹配的百分比，其中间隙比对(如果有的话)由特定数学模型或计算机程序(即“算法”)解决。通过已知方法可以容易地计算相关多肽的同一性。这些方法包括但不限于下述中描述的那些：Arthur M.Lesk,Computational Molecular Biology:Sources and Methods forSequence Analysis(New-York:Oxford University Press,1988)；Douglas W.Smith,Biocomputing:Informatics and Genome Projects(New-York:Academic Press,1993)；Hugh G.Griffin和Annette M.Griffin,Computer Analysis of Sequence Data,Part 1(New Jersey:Humana Press,1994)；Gunnar von Heinje,Sequence Analysis inMolecular Biology:Treasure Trove or Trivial Pursuit(Academic Press,1987)；Michael Gribskov和John Devereux,Sequence Analysis Primer(New York:M.StocktonPress,1991)；已经Carillo等,1988.SIAM J.Appl.Math.48(5):1073-1082。设计用于确定同一性的优选方法以给出测试序列之间的最大匹配。在公开可用的计算机程序中描述了确定同一性的方法。用于确定两条序列之间的同一性的优选计算机程序方法包括GCG程序包，其包括GAP(Devereux等，1984.Nucl.Acid.Res.12(1Pt l):387-395；遗传学计算机组，威斯康星大学生物技术中心，Madison，WI)、BLASTP、BLASTN、TBLASTN和FASTA(Altschul等，1990.J.Mol.Biol.215(3):403-410)。BLASTX程序可从国家生物技术信息中心(NCBI)和其他来源公开获得(BLAST Manual，Altschul等，NCB/NLM/NIH Bethesda，Md.20894；Altschul等，1990.J.Mol.Biol.215(3):403-410)。众所周知的Smith Waterman算法也可用于确定同一性。
在另一个实施方案中，与SEQ ID NO：1的序列相比，SEQ ID NO：1的变体包含保守氨基酸取代。
如本文所用，术语“保守氨基酸取代”在本文中定义为以下五组之一内的氨基酸交换：
I.小的脂肪族的非极性或微极性残基：Ala、Ser、Thr、Pro、Gly；
II.极性的带负电荷残基及其酰胺：Asp、Asn、Glu、Gln；
III.极性的带正电残基：His、Arg、Lys；
IV.大的脂肪族的非极性残基：Met、Leu、Ile、Val、Cys；
V.大的芳香族残基：Phe、Tyr、Trp。
如本文所用，“氨基酸”由本领域所熟知的其全名、其三字母代码或其单字母代码表示。肽中的氨基酸残基缩写如下：苯丙氨酸是Phe或F；亮氨酸是Leu或L；异亮氨酸是Ile或I；甲硫氨酸是Met或M；缬氨酸是Val或V；丝氨酸是Ser或S；脯氨酸是Pro或P；苏氨酸是Thr或T；丙氨酸是Ala或A；酪氨酸是Tyr或Y；组氨酸是His或H；谷氨酰胺是Gln或Q；天冬酰胺是Asn或N；赖氨酸是Lys或K；天冬氨酸是Asp或D；谷氨酸是Glu或E；半胱氨酸是Cys或C；色氨酸是Trp或W；精氨酸是Arg或R；和甘氨酸是Gly或G。
如本文所用，术语“氨基酸”包括天然和合成氨基酸，以及D和L氨基酸。“标准氨基酸”或“天然存在的氨基酸”是指天然存在的肽中常见的20种标准L-氨基酸中的任何一种。“非标准氨基酸残基”是指除标准氨基酸外的任何氨基酸，无论其是合成制备还是衍生自天然来源。例如，萘基丙氨酸可以代替色氨酸以促进合成。可被取代的其他合成氨基酸包括但不限于L-羟基丙基，L-3,4-二羟基苯基丙基，α-氨基酸如L-α-羟赖氨基和D-α-甲基丙氨基、L-α-甲基丙氨基，β-氨基酸和异喹啉基。
如本文所用，“氨基酸”还包括化学修饰的氨基酸，包括但不限于盐、氨基酸衍生物(例如酰胺)和取代。包含在本发明的多肽中的特别是在羧基或氨基末端的氨基酸可以通过甲基化、酰胺化、乙酰化或用其他化学基团取代来修饰，这些化学基团可以改变多肽的循环半衰期而不会对其活性产生不利影响。另外，在本发明的多肽中可以存在或不存在二硫键。
在另一个实施方案中，SEQ ID NO：1的变体是蛋白，其中来自SEQ ID NO：1的序列的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个氨基酸(连续的或不连续的)是不存在的，或被任何氨基酸取代，或其中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个氨基酸(连续的不连续的)是被添加的。
在一个实施方案中，水泡性口炎病毒糖蛋白(VSV-G)是来自VSNJV(的VSV-G(VSNJV-G)。在一个实施方案中，来自VSNJV的VSV-G包含SEQ ID NO：2或由SEQ ID NO：2组成。
在一个实施方案中，VSV-G是SEQ ID NO：2的变体。在一个实施方案中，SEQ ID NO：2的变体是与SEQ ID NO：2具有至少30％，优选至少35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、96、97、98、99％或更多的序列同一性的蛋白。在另一个实施方案中，与SEQ ID NO：2的序列相比，SEQ ID NO：2的变体包含保守氨基酸取代。
在另一个实施方案中，SEQ ID NO：2的变体是蛋白，其中来自SEQ ID NO：2的序列的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个氨基酸(连续的或不连续的)不存在，或被任何氨基酸取代，或其中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个氨基酸(连续的或不连续的)是被添加的。
在一个实施方案中，水疱性口炎病毒糖蛋白(VSV-G)是来自CHPV的VSV-G(CHPV-G)。在一个实施方案中，来自CHPV的VSV-G包含SEQ ID NO：3或由SEQ ID NO：3组成。
在一个实施方案中，VSV-G是SEQ ID NO：3的变体。在一个实施方案中，SEQ ID NO：3的变体是与SEQ ID NO：3具有至少30％，优选至少35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、96、97、98、99％或更多的序列同一性的蛋白。在另一个实施方案中，与SEQ ID NO：3的序列相比，SEQ ID NO：3的变体包含保守氨基酸取代。
在另一个实施方案中，SEQ ID NO：3的变体是蛋白，其中来自SEQ ID NO：3的序列的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17，18、19、20、21、22、23、24或25个氨基酸(连续的或不连续的)是不存在的，或被任何氨基酸取代，或其中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个氨基酸(连续的或不连续的)是被添加的。
在一个实施方案中，水泡性口炎病毒糖蛋白(VSV-G)是来自COCV的VSV-G(COCV-G)。在一个实施方案中，来自COCV的VSV-G包含SEQ ID NO：4或由SEQ ID NO：4组成。
在一个实施方案中，VSV-G是SEQ ID NO：4的变体。在一个实施方案中，SEQ ID NO：4的变体是与SEQ ID NO：4具有至少30％，优选至少35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、96、97、98、99％或更多序列同一性的蛋白。在另一个实施方案中，与SEQ ID NO：4的序列相比，SEQ ID NO：4的变体包含保守氨基酸取代。
在另一个实施方案中，SEQ ID NO：4的变体是蛋白，其中来自SEQ ID NO：4的序列的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或者25个氨基酸(连续的或不连续的)是不存在的，或被任何氨基酸取代，或其中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个氨基酸(连续的或不连续的)是被添加的。
在一个实施方案中，水泡性口炎病毒糖蛋白(VSV-G)是来自PIRYV的VSV-G(PIRYV-G)。在一个实施方案中，来自PIRYV的VSV-G包含SEQ ID NO：5或由SEQ ID NO：5组成。
在一个实施方案中，VSV-G是SEQ ID NO：5的变体。在一个实施方案中，SEQ ID NO：5的变体是与SEQ ID NO：5具有至少30％，优选至少35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、96、97、98、99％或更多序列同一性的蛋白。在另一个实施方案中，与SEQ ID NO：5的序列相比，SEQ ID NO：5的变体包含保守氨基酸取代。
在另一个实施方案中，SEQ ID NO：5的变体是蛋白，其中来自SEQ ID NO：5的序列的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个氨基酸(连续的或不连续的)是不存在的，或被任何氨基酸取代，或其中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个氨基酸(连续出现)是被添加的。
在一个实施方案中，水泡性口炎病毒糖蛋白(VSV-G)是来自ISFV的VSV-G(ISFV-G)。在一个实施方案中，来自ISFV的VSV-G包含SEQ ID NO：6或由SEQ ID NO：6组成。
在一个实施方案中，VSV-G是SEQ ID NO：6的变体。在一个实施方案中，SEQ ID NO：6的变体是与SEQ ID NO：6具有至少30％，优选至少35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、96、97、98、99％或更多序列同一性的蛋白。在另一个实施方案中，与SEQ ID NO：6的序列相比，SEQ ID NO：6的变体包含保守氨基酸取代。
在另一个实施方案中，SEQ ID NO：6的变体是蛋白，其中来自SEQ ID NO：6的序列的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或者25个氨基酸(连续的或不连续的)是不存在的，或被任何氨基酸取代，或其中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个氨基酸(连续的或不连续的)是被添加的。
在一个实施方案中，水泡性口炎病毒糖蛋白(VSV-G)是来自SVCV的VSV-G(SVCV-G)。在一个实施方案中，来自SVCV的VSV-G包含SEQ ID NO：7或由SEQ ID NO：7组成。
在一个实施方案中，VSV-G是SEQ ID NO：7的变体。在一个实施方案中，SEQ ID NO：7的变体是与SEQ ID NO：7具有至少30％，优选至少35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、96、97、98、99％或更多序列同一性的蛋白。在另一个实施方案中，与SEQ ID NO：7的序列相比，SEQ ID NO：7的变体包含保守氨基酸取代。
在另一个实施方案中，SEQ ID NO：7的变体是蛋白，其中来自SEQ ID NO：7的序列的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个氨基酸(连续的或不连续的)是不存在的，或被任何氨基酸取代，或其中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个氨基酸(连续的或不连续的)是被添加的。
在一个实施方案中，水泡性口炎病毒糖蛋白(VSV-G)是来自VSAV的VSV-G(VSAV-G)。在一个实施方案中，来自VSAV的VSV-G包含SEQ ID NO：54或由SEQ ID NO：54组成。
在一个实施方案中，VSV-G是SEQ ID NO：54的变体。在一个实施方案中，SEQ IDNO：54的变体是与SEQ ID NO：54具有至少30％，优选至少35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、96、97、98、99％或更多序列同一性的蛋白。在另一个实施方案中，与SEQ IDNO：54的序列相比，SEQ ID NO：54的变体包含保守氨基酸取代。
在另一个实施方案中，SEQ ID NO：54的变体是蛋白，其中来自SEQ ID NO：54的序列的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或者25个氨基酸(连续的或不连续的)是不存在的，或被任何氨基酸取代，或其中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个氨基酸(连续的或不连续的)是被添加的。
在一个实施方案中，水泡性口炎病毒糖蛋白(VSV-G)是来自CJSV的VSV-G(CJSV-G)。在一个实施方案中，来自CJSV的VSV-G包含SEQ ID NO：55或由SEQ ID NO：55组成。
在一个实施方案中，VSV-G是SEQ ID NO：55的变体。在一个实施方案中，SEQ IDNO：55的变体是与SEQ ID NO：55具有至少30％，优选至少35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、96、97、98、99％或更多序列同一性的蛋白。在另一个实施方案中，与SEQ IDNO：55的序列相比，SEQ ID NO：55的变体包含保守氨基酸取代。
在另一个实施方案中，SEQ ID NO：55的变体是蛋白，其中来自SEQ ID NO：55的序列的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个氨基酸(连续的或不连续的)是不存在的，或被任何氨基酸取代，或其中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21.22、23、24或25个氨基酸(连续的或不连续的)是被添加的。
在一个实施方案中，水泡性口炎病毒糖蛋白(VSV-G)是来自MARAV的VSV-G(MARAV-G)。在一个实施方案中，来自MARAV的VSV-G包含SEQ ID NO：56或由SEQ ID NO：56组成。
在一个实施方案中，VSV-G是SEQ ID NO：56的变体。在一个实施方案中，SEQ IDNO：56的变体是与SEQ ID NO：56具有至少30％，优选至少35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、96、97、98、99％或更多序列同一性的蛋白。在另一个实施方案中，与SEQ IDNO：56的序列相比，SEQ ID NO：56的变体包含保守氨基酸取代。
在另一个实施方案中，SEQ ID NO：56的变体是蛋白，其中来自SEQ ID NO：56的序列的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个氨基酸(连续的或不连续的)是不存在的，或被任何氨基酸取代，或其中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、11、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个氨基酸(连续的或不连续的)是被添加的。
本发明的修饰的VSV-G可包含天然标准氨基酸或非标准氨基酸。多肽模拟物包括具有以下修饰的多肽：
i)多肽，其中一个或多个肽基-C(O)NR-连接(键)已被非肽基连接取代的多肽，所述非肽基连接例如-CH2-甲酸酯氨基连接(-CH2OC(O)NR-)、膦酸酯连接、-CH2-磺酰胺(-CH2-S(O)2NR-)连接、脲(-NHC(O)NH-)连接、-CH2-仲胺连接，或烷基化肽基连接(-C(O)NR-)，其中R是C1-C4烷基；
ii)多肽，其中N末端衍生为-NRR1基团、NRC(O)R基团、-NRC(O)OR基团、-NRS(O)2R基团、-NHC(O)NHR基团，其中R和R1是氢或C1-C4烷基，条件是R和R1不都是氢；
iii)多肽，其中C末端被衍生为-C(O)R2，其中R2选自由C1-C4烷氧基和-NR3R4组成的组，其中R3和R4独立地选自由氢和C1-C4烷基组成的组。
在本发明的一个实施方案中，如本文所述的修饰的VSV-G通过本领域已知的方法修饰，例如通过添加一个或多个官能团，例如磷酸酯、乙酸酯、脂质或碳水化合物基团，和/或通过添加一个或多个保护基团。
例如，可以通过添加一种或多种官能团来修饰修饰的VSV-G，例如磷酸酯、乙酸酯或各种脂质和碳水化合物。本发明的修饰的VSV-G也可以作为蛋白衍生物存在。术语“蛋白衍生物”是指具有氨基(--NH--)，更特别地，是具有肽键的化合物。修饰的VSV-G可以被认为是取代的酰胺。与酰胺基团一样，肽键显示出高度的共振稳定性。肽连接中的C--N单键典型地具有约40％的双键特征，而C＝O双键具有约40％的单键特征。“保护基团”是指防止涉及未受保护的官能团的不良反应(例如蛋白水解)的那些基团。氨基保护基团的具体实例包括甲酰基；三氟乙酰基；苄氧基羰基；取代的苄氧基羰基，例如(邻-或对-)氯苄氧基羰基和(邻-或对-)溴苄氧基羰基；和脂族氧羰基，例如叔丁氧羰基和叔氨基氧羰基。氨基酸的羧基可以通过转化成酯基来保护。酯基包括苄基酯，取代的苄基酯，如甲氧基苄基酯；烷基酯，如环己基酯、环庚基酯或叔丁基酯。胍基部分可以被硝基保护；或芳磺酰基，如甲苯磺酰基、甲氧基苯磺酰基或均三甲苯基磺酰基，即使它不需要保护基团。咪唑的保护基团包括甲苯磺酰基(tosy)、苄基和二硝基苯基。色氨酸的吲哚基团可以被甲酰基保护或者可能没有受到保护。
在一个实施方案中，本发明的修饰的VSV-G包含在所述修饰的VSV-G的N末端的信号肽。在一个实施方案中，本发明的修饰的VSV-G包含在所述修饰的VSV-G的C末端的信号肽。
在一个实施方案中，信号肽包含4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34或35个氨基酸残基或由其组成。
在一个实施方案中，本发明的修饰的VSV-G的信号肽包含SEQ ID NO：52(MKCLLYLAFLFIGVNC)或由其组成。
在另一个实施方案中，本发明的修饰的VSV-G的信号肽包含具有SEQ ID NO：53(MGVKVLFALICIAVAEA)的海肾(Gaussia princeps)荧光素酶信号肽或由其组成。
在另一个实施方案中，本发明的修饰的VSV-G的信号肽包含由Kober等，2013.Biotechnol.Bioeng.110:1164-1173；Mori等，2015.J.Biosci.Bioeng.120(5):518-525；Stern等，2007.Trends Cell Mol.Bio.2:1-17；Wen等，2011.Acta Biochim BiophysSin.43:96-102中公开的任何信号肽或由其组成。这些包括但不限于：
-包含SEQ ID NO：57(MDMRAPAGIFGFLLVLFPGYRS)或由其组成的小家鼠(Musmusculus)Igκ轻链前体(突变体A2)的信号肽；
-包含SEQ ID NO：58(MKWVTFISLLFLFSSAYS)或由其组成的智人(Homo sapiens)血清白蛋白前体蛋白的信号肽；
-包含SEQ ID NO：59(MDWTWRVFCLLAVTPGAHP)或由其组成的智人免疫球蛋白重链的信号肽；
-包含SEQ ID NO：60(MAWSPLFLTLITHCAGSWA)或由其组成的智人免疫球蛋白轻链的信号肽；
-包含SEQ ID NO：61(MTRLTVLALLAGLLASSRA)或由其组成的智人天青杀素(azurocidin)前体蛋白的信号肽；
包含SEQ ID NO：62(MARPLCTLLLLMATLAGALA)或由其组成的智人半胱氨酸蛋白酶抑制剂-S(cystatin-S)前体的信号肽；
-包含SEQ ID NO：63(MRSLVFVLLIGAAFA)或由其组成的美洲拟鲽(Pseudopleuronectes americanus)胰蛋白酶原2前体的信号肽；
-包含SEQ ID NO：64(MSRLFVFILIALFLSAIIDVMS)或由其组成的马氏正钳蝎(Mesobuthus martensii)钾通道阻断剂的信号肽；
-包含SEQ ID NO：65(MGMRMMFIMFMLVVLATTVVS)或由组成的密码芋螺(Conusleopardus)α-芋螺毒素(conotoxin)lp1.3的信号肽；
-包含SEQ ID NO：66(MRAFLFLTACISLPGVFG)或由其组成的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)α-半乳糖苷酶(突变体m3)的信号肽；
-包含SEQ ID NO：67(MKFQSTLLLAAAAGSALA)或由其组成的黑曲霉(Aspergillusniger)纤维素酶的信号肽；
-包含SEQ ID NO：68(MASSLYSFLLALSIVYIFVAPTHS)或由组成的小猪笼草(Nepenthes gracilis)天冬氨酸蛋白酶猪笼草素(nepenthesin)-1的信号肽；
-包含SEQ ID NO：69(MKTHYSSAILPILTLFVFLSINPSHG)或由其组成的莱佛士猪笼草(Nepenthes rafflesiana)酸几丁质酶的信号肽；
-包含SEQ ID NO：70(MESVSSLFNIFSTIMVNYKSLVLALLSVSNLKYARG)或由其组成的M28病毒(M28virus)K28前原毒素的信号肽；
-包含SEQ ID NO：71(MKAAQILTASIVSLLPIYTSA)或由其组成的贝利接合酵母(Zygosaccharomyces bailii)杀伤毒素接合素(zygocin)前体的信号肽；
-包含SEQ ID NO：72(MIKLKFGVFFTVLLSSAYA)或由其组成的霍乱弧菌O139(Vibriocholerae O139)霍乱毒素的信号肽；
-包含SEQ ID NO：73(MQLLRCFSIFSVIASVLAQELTTICEQIPSPTLESTPYSLSTTTILANGK)或由其组成的酿酒酵母起源的α-凝集素(agglutinin)粘附亚基的信号肽；
-包含SEQ ID NO：74(MLSLKTLLCTLLTVSSVLATPVPARDPSSIQFVHEENKKRYYDYDHGSLGE)或由其组成的酿酒酵母衍生的外-1,3-β葡聚糖酶的信号肽；
-包含SEQ ID NO：75(MRFPSIFTAVLFAASSALAAPVNTTTEDETAQIPAEAVIGYLDLEGDFDVAVLPFSNSTNN)或由其组成的酿酒酵母衍生的交配信息素(mating pheromone)α-因子的信号肽；
-包含SEQ ID NO：76(MKVLDLLTVLSASSLLSTFAAAESTATADSTTAASSTASCNPLKTTGCTPDTALATSFSEDFSSSSK)或由其组成的酿酒酵母衍生的壳多糖反式糖苷酶的信号肽；
-包含SEQ ID NO：77(MKLQSLLVSAAVLTSLTENVNAWSPNNSYVPANVTCDDDINLVREASGLSDNETEWLKKRDAYTKE)或由其组成的酿酒酵母衍生的磷脂酶B的信号肽；
-包含SEQ ID NO：78(MKLSATTLTAASLIGYSTIVSALPYAADIDTGCTTTAHGSHQHKRAVAVTYVYETVTVDKNGQTVTPTSTEASSTVASTTTLISESSVTKSSSKVASSSE)或由其组成的酿酒酵母衍生的与葡聚糖酶相关的细胞壁蛋白信号肽；
-包含SEQ ID NO：79(MQLRNILQASSLISGLSLAADSSSTTGDGYAPSIIPCPSDDTSLVRNASGLSTAETDWLKKRDAYTKEALHSFLSRATSNFSDTSLLSTLFSSNSSN)或由其组成的酿酒酵母衍生的磷脂酶B的信号肽；
-包含SEQ ID NO：80(MISPISFLSSLLCLTYLTSALPILPKREVVTRVHTASTTNVVTDFYSTTTE)或由其组成的酿酒酵母衍生的外切-1,3-β葡聚糖酶的信号肽；
-包含SEQ ID NO：81(MLEFPISVLLGCLVAVKAQTTFPNFESDVLNEHNKFRALHVDTAPLTWSDTLATYAQNYADQYDCSGVLTHSDGPYGENLALGYTDTGAVDAWYGEISKY)或由其组成的酿酒酵母衍生的涉及输出乙酰化甾醇的细胞壁相关蛋白的信号肽；
-包含SEQ ID NO：82(MKLKTVRSAVLSSLFASQVLGKIIPAANKRDDDSNSKFVKLPFHKLYGDSLENVGSDKKPEVRLLKRADGYEEIIITNQQSFYSVDLE)或由其组成的酿酒酵母衍生的天冬氨酸蛋白酶的信号肽；
-包含SEQ ID NO：83(MVKLTSIAAGVAAIAATASATTTLAQSDERVNLVELGVYVSDIRAHLAQYYSFQVAHPTETY或由其组成的酿酒酵母衍生的细胞壁甘露糖蛋白的信号肽；
-包含SEQ ID NO：84(MVKLTSIVAGVAAIAAGVAAAPATTTLSPSDERVNLVELGVYVSDIRAHLAEYYMFQAAHPTETY)或由其组成的酿酒酵母衍生的细胞壁甘露糖蛋白的信号肽；
-包含SEQ ID NO：85(MQPITTASTQATQKDKSSEKKDNYIIKGLFWDPACVIA)或由其组成的酿酒酵母衍生的交配信息素α-因子的信号肽；
-包含SEQ ID NO：86(MVSFRGLTTLTLLFTKLVNCNPVSTKNRDSIQFIYKEKDSIYSAINNQAINEK)或由其组成的酿酒酵母衍生的孢子形成特异性外切-1,3-b-葡聚糖酶的信号肽；
-包含SEQ ID NO：87(MAFLWLLSCWALLGTTFG)或由其组成的智人胰凝乳蛋白酶原的信号肽；
-包含SEQ ID NO：88(MQLLSCIALILALV)或由其组成的智人白细胞介素-2的信号肽；
-包含SEQ ID NO：89(MNLLLILTFVAAAVA)或由其组成的智人胰蛋白酶原-2的信号肽；
-包含SEQ ID NO：90(MDIKVVFTLVFSALVQA)或由其组成的细长长腹水蚤(Metridialonga)荧光素酶的信号肽；
-包含SEQ ID NO：91(MLLLSALLLGLAHGYS)或由其组成的异体住囊虫(Oikopleuradioica)住囊虫素(Oikosin)1的信号肽；
-包含SEQ ID NO：92(MKLLASVLTIAAADYACC)或由其组成的异体住囊虫住囊虫素2A的信号肽；
-包含SEQ ID NO：93(MKISAGLLGVALGQNEGSAEA)或由其组成的异体住囊虫住囊虫素3的信号肽；
-包含SEQ ID NO：94(MKLFAALSAFSASVEA)或由其组成的异体住囊虫住囊虫素4A的信号肽；
-包含SEQ ID NO：95(MKLLCSVLLGTVFG)或由其组成的异体住囊虫住囊虫素5A的信号肽；
-包含SEQ ID NO：96(MKISPLLVVTAVVG)或由其组成的异体住囊虫住囊虫素6A的信号肽；
-包含SEQ ID NO：97(MKIAATFAALASATEWQG)或由其组成的异体住囊虫住囊虫素7A的信号肽；
-包含SEQ ID NO：98(MKIIILSVILAYCVTDNC)或由其组成的希氏弯喉海萤(Vargulahilgendorfii)荧光素酶的信号肽；
包含SEQ ID NO：99(MAMSLKKIGAIAVGGAMVATALASGVAA)或由组成的詹氏甲烷球菌(Methanococcus jannaschii)Slmj1的信号肽；
包含SEQ ID NO：100(MGCSFSIFLLALLSCLTTPASA)或由其组成的丙型肝炎病毒血清型1b(Hepatitis C virus serotype 1b)E1蛋白的信号肽；
包含SEQ ID NO：101(MVGNWAKVLIVMLLFAGVDG)或由其组成的丙型肝炎病毒血清型1b E2蛋白的信号肽；
包含SEQ ID NO：102(MDAMKRGLCCVLLLCGAVFVDSVTG)或由其组成的组织型纤溶酶原激活物的信号肽；和
-包含SEQ ID NO：103(MDAMKVLLLVFVSPSQVTG)或由其组成的信号肽。
1.2.肽
1.2.1.抗原
在一个实施方案中，本发明的至少一条异源肽是抗原或其片段。在一个实施方案中，抗原片段是表位。
在一个实施方案中，抗原是非自身抗原，即抗原是外来抗原。在另一个实施方案中，抗原是宿主的蛋白，即是自身抗原。
“非自身抗原”、“异源抗原”或“外来抗原”是指对于暴露于其的受试者而言不是内源性或天然的一种或多种分子。外来抗原可以在哺乳动物中引发免疫应答，例如体液和/或T细胞介导的应答。
外来抗原的实例包括但不限于蛋白(包括修饰的蛋白，如糖蛋白、粘蛋白等)、核酸，碳水化合物、蛋白聚糖(proteoglycans)、脂质、粘蛋白分子、免疫原性治疗剂(包括蛋白，如抗体，特别是包含非人氨基酸残基的抗体，例如啮齿动物的、嵌合的/人源化的和灵长类化的抗体)、毒素(任选地与靶向分子例如抗体偶联，其中靶向分子也可以是免疫原性的)、基因治疗病毒载体(例如逆转录病毒和腺病毒)、移植物(包括移植到移植受体的心脏、肺、肝、胰腺、肾的移植物的抗原性成分和神经移植物成分)、感染剂(如细菌和病毒或其他生物，例如原生生物)、异型抗原(即在同一物种的一些成员中发生但不在其他成员中产生的抗原)，例如血型、人淋巴细胞抗原(HLA)、血小板抗原、在移植器官上表达的抗原、血液成分、妊娠(Rh)和血友病因子(例如，因子VTfl和因子IX)中的差异。
“自身抗原”是指在体内正常表达的抗原。在一个实施方案中，自身抗原在作为自身免疫疾病靶标的器官中表达。在一个实施方案中，自身抗原在胰腺、甲状腺、结缔组织、肾、肺、消化系统或神经系统中表达。在另一个实施方案中，自身抗原在胰腺β细胞上表达。
自身抗原的实例包括但不限于胰岛素的抗原肽，胰岛素β，谷氨酸脱羧酶1(GAD1)，谷氨酸脱羧酶65(GAD 65)，HSP，甲状腺球蛋白，核蛋白，乙酰胆碱受体，胶原，甲状腺刺激素受体(TSHR)，ICA512(IA-2)和IA-2β(phogrin)，羧肽酶H，ICA69，IC A 12，甲状腺过氧化物酶，天然DNA，髓磷脂(myelin)碱性蛋白，髓磷脂蛋白脂质蛋白，乙酰胆碱受体成分，组织相容性抗原，参与移植物排斥的抗原和改变的肽配体。
1.2.1.1.肿瘤抗原
在一个实施方案中，抗原是肿瘤抗原或肿瘤相关抗原。
在一个实施方案中，抗原是肿瘤特异性抗原(TSA)。在另一个实施方案中，抗原是肿瘤相关抗原(TAA)。在另一个实施方案中，抗原是癌症-种系/癌症睾丸抗原(CTA)。
在一个实施方案中，自其分离或衍生抗原的肿瘤是任何肿瘤或癌症，包括但不限于黑色素瘤、鳞状细胞癌、乳腺癌、头颈癌、甲状腺癌、软组织肉瘤、骨肉瘤、睾丸癌、前列腺癌、卵巢癌、膀胱癌、皮肤癌、脑癌、血管肉瘤(angiosarcomas)、血管内皮肉瘤(hemangiosarcomas)、肥大细胞瘤、原发性肝癌、肺癌、胰腺癌、胃肠癌、肾细胞癌、造血瘤和其转移性癌症。
在一个实施方案中，抗原可以是本领域技术人员已知的任何肿瘤抗原。例如，抗原选自肿瘤T细胞抗原数据库TANTIGEN(http://cvc.dfci.harvard.edu/tadb/index.html)。
肿瘤抗原的实例包括Cheever等，2009.Clin Cancer Res.15(17):5323-37的表3中描述的那些，包括但不限于WT1、MUC1、LMP2、HPV E6E7、EGFRvIII、HER-2/neu、独特型、MAGE A3、p53非突变体、NY-ESO-1、PSMA、GD2、CEA、Melan-A/MART1、Ras突变体、gp100、p53突变体、蛋白酶3(PR1)、bcr-abl、酪氨酸酶、存活蛋白、PSA、hTERT、肉瘤易位断点、EphA2、PAP、ML-IAP、AFP、EpCAM、ERG(TMPRSS2ETS融合基因)、NA17、PAX3、ALK、雄激素受体、细胞周期蛋白B1、聚唾液酸、MYCN、RhoC、TRP-2、GD3、岩藻糖基GM1、间皮素、PSCA、MAGE A1、sLe(a)、CYP1B1、PLAC1、GM3、BORIS、Tn、GloboH、ETV6-AML、NY-BR-1、RGS5、SART3、STn、碳酸酐酶IX、PAX5、OY-TES1、精子蛋白17、LCK、HMWMAA、AKAP-4、SSX2、XAGE 1、B7H3、Legumain、Tie 2、Page4、VEGFR2、MAD-CT-1、FAP、PDGFR-β、MAD-CT-2和Fos相关抗原1。
肿瘤抗原的其他实例包括但不限于707-AP(707丙氨酸脯氨酸)，AFP(α-甲胎蛋白)，ART-4(T细胞识别的腺癌抗原)，BAGE(B抗原，β-连环蛋白/m，β-连环蛋白/突变的)，Bcr-abl(断裂点簇集区-艾贝尔逊(breakpoint clusterregion-Abelson))，CA-125(癌症抗原125，癌抗原125或碳水化合物抗原125，也称为粘蛋白16或MUC16)，CAMEL(CTL识别的黑素瘤上的抗原)，CAP-1(癌胚抗原肽-1)，CASP-8(caspase-8)，CDC27m(细胞分裂周期27，突变的)，CDK4/m(cycline依赖性激酶4，突变的)，CEA(癌胚抗原)，CT(癌症/睾丸(抗原))，Cyp-B(亲环蛋白B)，DAM(分化抗原黑素瘤(DAM-6和DAM-10的表位等价，但基因序列不同。DAM-6也称为MAGE-B2，且DAM-10也称为MAGE-B1))，EGF-R，ELF2M(延伸因子2，突变的)，ETA(上皮肿瘤抗原)，ETV6-AML1(Ets变体基因6/急性髓性白血病1基因ETS)，G250(糖蛋白250)，GAGE(G抗原)，GnT-V(N-乙酰基葡萄糖基转移酶V)，Gp100(糖蛋白100kD)，HAGE(Helicose抗原)，HER-2/neu(人表皮受体-2/神经病学)，HLA-A*0201-R170I(在HLA-A2基因α2-域的α螺旋的残基170处的精氨酸(R)与异亮氨酸(I)交换)，HPV-E6(人乳头瘤病毒E6)，HPV-E7(人乳头瘤病毒E7)，HSP70-2M(热休克蛋白70-2，突变的)，HST-2(人印戒肿瘤-2(human signet ring tumor-2))，hTERT或hTRT(人端粒酶逆转录酶)，iCE(肠羧酸酯酶)，KIAA0205(数据库中出现的基因名称)，LAGE(L抗原)，LDLR/FUT(低密度脂质受体/GDP-L-岩藻糖：β-D-半乳糖苷酶2-α-L-岩藻糖基转移酶)，MAGE(黑素瘤抗原，包括但不限于MAGE3，MAGEA6，MAGEA10)，MART-1/Melan-A(由T细胞-1/黑素瘤抗原A识别的黑素瘤抗原)，MC1R(黑皮质素1受体)，肌球蛋白/m(肌球蛋白，突变的)，MUC1(粘蛋白1)，MUM-1、-2、-3(突变的黑素瘤遍在(melanomaubiquitous)1、2、3号)，NA88-A(患者M88的NA cDNA克隆)，NY-ESO-1(纽约-食管1)，P1A，P15(蛋白15)，p190次要bcr-abl(190KD bcr-abl的蛋白)，Pml/RARα(早幼粒细胞白血病/视黄酸受体α)，PRAME(优先表达的黑色素瘤抗原)，PSA(前列腺特异性抗原)，PSMA(前列腺特异性膜抗原)，RAGE(肾抗原)，RU1或RU2(肾遍在(renalubiquitous)1或2)，SAGE(肉瘤抗原)，SART-1或SART-3(鳞状细胞抗原排斥肿瘤(squamousantigenrejecting tumor)1或3)，TEL/AML1(易位Ets-家族白血病/急性髓性白血病1)，TPI/m(突变的磷酸丙糖异构酶)，酪氨酸酶，TRP-1(酪氨酸酶相关蛋白1或gp75)，TRP-2(酪氨酸酶相关蛋白2)，TRP-2/INT2(TRP-2/内含子2)，WT1(Wilm氏肿瘤基因)和p53突变致癌形式(TP53)，p73，ras，BRAF，APC(腺瘤性结肠息肉病)，myc，VHL(希佩尔林道蛋白蛋白)，Rb-1(视网膜母细胞瘤)，Rb-2，BRCA1，BRCA2，AR(雄激素受体)，Smad4，MDR1，Flt-3。
在优选的实施方案中，本发明的抗原选自由以下组成的组：P1A，TRP-2，gp100，MART-1/Melan-A，酪氨酸酶，MAGE(包括但不限于MAGE3，MAGEA6，MAGEA10)，NY-ESO-1，EGF-R，PSA，PSMA，CEA，F1ER2/neu，Muc-1，hTERT，TRP-1，BCR-abl和p53突变致癌形式(TP53)，p73，ras，BRAF，APC(腺瘤性结肠息肉病)，myc，VHL(希佩尔林道蛋白蛋白)，Rb-1(视网膜母细胞瘤)，Rb-2，BRCA1，BRCA2，AR(雄激素受体)，Smad4，MDR1和Flt-3。
根据本发明，肿瘤抗原包括如上所述的任何肿瘤抗原，以及与获得或发展癌症的风险相关的任何其他抗原，或者针对这种抗原的免疫应答可以具有针对癌症的治疗益处的任何其他抗原。例如，癌抗原可包括但不限于肿瘤抗原，携带一个或多个突变氨基酸的哺乳动物细胞分子，通常由哺乳动物细胞预先或新生表达的蛋白，其表达被通过插入流行病学剂(例如病毒)诱导的蛋白，其表达由基因易位诱导的蛋白，其表达由调节序列的突变诱导的蛋白。这些抗原中的一些还可以在其他类型的疾病(例如，自身免疫疾病)中用作抗原。
1.2.1.2.新抗原
在另一个实施方案中，本发明的抗原是新抗原。
如本文所用，术语“新抗原”是新形成的抗原，其先前未被免疫系统识别。当蛋白在诸如糖基化、磷酸化或蛋白水解的生物化学途径中经历进一步修饰时，可以形成新抗原，并且通过扩展，形成新抗原性决定簇(或新表位)。
可以通过比较从肿瘤与正常来源分离的DNA来鉴定新抗原、肿瘤特异性或“体细胞”突变。
优选地，任何合适的合成测序平台可用于鉴定突变。目前可获得四种主要的合成测序平台：来自Roche/454Life Sciences的Genome Sequencers，来自Illumina/Solexa的HiSeq Analyzer，来自Applied BioSystems的SOLiD系统，和来自Helicos Biosciences的Heliscope系统。Pacific Biosciences和VisiGen Biotechnologies也描述了合成测序平台。这些平台中的每一个都可用于本发明的方法中。
1.2.1.3.病原体抗原
在本发明的一个方面，本发明的抗原是来自病原体(包括整个病原体)的抗原。在一个具体实施方案中，抗原来自与感染性疾病相关(例如，引起或促进)的病原体。
在一个实施方案中，本发明的抗原是感染性疾病抗原。
在一个实施方案中，来自感染性疾病病原体的抗原包括具有被T细胞识别的表位的抗原，具有被B细胞识别的表位的抗原，仅由病原体表达的抗原，以及由病原体和其他细胞表达的抗原。
在一个实施方案中，病原体抗原包括全细胞和整个病原体生物，以及其裂解物、提取物或其它成分。在一些实施方案中，抗原包括生物体或其部分，其可能通常不被认为在受试者中是病原性的，但针对其的免疫接种仍然是需要的。
在一个实施方案中，抗原包括一个、两个或多个抗原，其代表存在于将要施用疫苗抗其的感染性疾病病原体中的基本上所有的抗原。在其他实施方案中，来自相同病原体或不同病原体的两种或更多种不同毒株的抗原可用于增加疫苗的治疗效力和/或效率。
病原体抗原包括但不限于由细菌、病毒、寄生虫或真菌表达的抗原。
在具体实施方案中，本发明的病原体抗原包括在动物中引起慢性感染性疾病的抗原。在一个实施方案中，本发明的病原体抗原包括来自病毒的抗原。
病毒抗原的实例包括但不限于来自免疫缺陷病毒(例如，HIV、FIV)的env、gag、rev、tar、tat、核衣壳蛋白和逆转录酶；HBV表面抗原和核心抗原；HCV抗原；流感核衣壳蛋白；副流感核衣壳蛋白；人类乳头状瘤16型E6和E7蛋白；爱泼斯坦-巴尔病毒LMP-1、LMP-2和EBNA-2；疱疹LAA和糖蛋白D；以及来自其他病毒的类似蛋白。用于本发明的特别优选的抗原包括但不限于HIV-1gag、HIV-1env、HIV-1pol、HIV-1tat、HIV-1nef、HbsAG、HbcAg、丙型肝炎核心抗原、HPV E6和E7、HSV糖蛋白D和炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis)保护性抗原。
细菌抗原的实例包括但不限于包柔氏疏螺旋体(Borrelia afzelii)抗原、嘎氏疏螺旋体(Borrelia garinii)抗原、流产布鲁杆菌(Brucella abortus)抗原、空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni)抗原、幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)抗原、嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)抗原、双曲钩端螺旋体(Leptospira biflexa)抗原、肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae)抗原、小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)抗原、肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae)抗原、沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis)抗原、流产衣原体(Chlamydia abortus)抗原、艰难梭菌(Clostridium difficile)抗原、淋病奈瑟氏球菌(Neisseria gonorrhoeae)抗原、鼠弓形虫(Toxoplasma gondii)抗原、百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)丝状血凝素(FHA)和百日咳博德特氏菌毒素(百日咳毒素，PT)。
真菌和寄生虫抗原的实例包括但不限于烟曲霉菌(Aspergillus fumigatus)抗原和白色念珠菌(Candida albicans)抗原。
在另一个实施方案中，本发明的抗原能够抑制不希望的或有害的免疫应答。在一个实施方案中，免疫应答由过敏原、自身免疫抗原、炎性剂、参与GVHD的抗原、某些癌症、脓毒性休克抗原和参与移植排斥的抗原引起。这些化合物包括但不限于抗组胺药、环孢菌素、皮质类固醇、FK506、对应于参与产生有害免疫应答的T细胞受体的肽、Fas配体(即结合细胞Fas受体的细胞外或胞质结构域的化合物，从而诱导细胞凋亡)、以影响容忍或无反应性的方式呈递的合适MHC复合物、T细胞受体和自身免疫抗原，优选与能够增强或抑制细胞和/或体液免疫的生物应答调节剂组合。
在本发明中有用的其他抗原和抗原的组合对本领域技术人员而言是明显的。本发明不限于使用如上所述的抗原。
1.2.2.表位
在一个实施方案中，本发明的至少一条异源肽是衍生自如上文所述的抗原的表位。因此，在一个实施方案中，本发明抗原的片段包含表位或“抗原表位片段”或由其组成。在一个实施方案中，本发明抗原的片段包含一个以上，即至少两个、三个、四个、五个或更多个表位或“抗原表位片段”或由其组成。
在一个实施方案中，表位可以是本领域技术人员已知的任何表位。例如，表位选自免疫表位数据库和分析资源(Vita等，2014.Nucleic Acids Res.43(Database issue):D405-12；http://www.iedb.org)。
在一个实施方案中，表位源自如上文所述的非自身抗原或外来抗原。在另一个实施方案中，表位源自宿主的蛋白，即表位源自如上文所述的自身抗原。
在另一个实施方案中，表位源自如上文所述的新抗原，即表位是新抗原性决定簇。
在一个实施方案中，表位是构象表位，即由抗原氨基酸序列的不连续部分组成。在另一个实施方案中，表位是线性表位，即由抗原氨基酸序列的连续部分组成。
1.2.2.1.T细胞表位
在一个实施方案中，表位是T细胞表位。
1.2.2.1.1.CD8 T细胞表位
在一个实施方案中，T细胞表位是由I类MHC分子呈递的T细胞表位。在一个实施方案中，表位是CD8 T细胞表位。
CD8 T细胞表位的实例包括但不限于来自卵清蛋白(具有SEQ ID NO：11)、P1A(具有SEQ ID NO：13)、MART-1(具有SEQ ID NO：14)、gp100(具有SEQ ID NO：15)、酪氨酸酶(具有SEQ ID NO：16)、gp70(具有SEQ ID NO：133)和TRP2(具有SEQ ID NO：134)的表位。
1.2.2.1.2.CD4 T细胞表位
在一个实施方案中，T细胞表位是由II类MHC分子呈递的T细胞表位。在一个实施方案中，表位是CD4 T细胞表位(或辅助T细胞表位)。
CD4 T细胞表位的实例包括但不限于来自卵清蛋白(例如，具有SEQ ID NO：12)、pan HLA DR结合表位(PADRE)(例如，具有SEQ ID NO：17)、VIL1(例如，具有SEQ ID NO：18)、破伤风类毒素(TT)表位(例如，具有SEQ ID NO：19)、gp100(例如，具有SEQ ID NO：20)、HMGB1衍生的免疫刺激肽hp91(例如，具有SEQ ID NO：21)和NY-ESO-1(例如，具有SEQ IDNO：143)的表位。
CD4 T细胞表位的其他实例包括Hiemstra等，Proc Natl Acad Sci USA.1997年9月16日；94(19):10313-10318中公开的那些。
靶向特异性CD4应答的限制因素是II类MHC基因中的大量多态性。因此，在一个实施方案中，CD4 T细胞表位可以是通用抗原性CD4 T细胞表位。如本文所用，术语“通用抗原性CD4 T细胞表位”是指其氨基酸序列衍生自至少一条通用抗原性(或通用免疫原性或广谱)CD4 T细胞表位(也称为免疫原性载体肽)的表位，其可以由多种主要组织相容性复合物(MHC)单倍型呈递，并且从而激活辅助CD4 T细胞，其反过来刺激B细胞生长和分化。
通用抗原性CD4 T细胞表位的实例包括但不限于pan HLA DR结合表位(PADRE)(例如，具有SEQ ID NO：17)、天然破伤风序列、衍生自破伤风类毒素(TT)(例如，具有SEQ IDNO：19)或白喉类毒素(DT)的表位，VIL1(例如，具有SEQ ID NO：18)、衍生自HMGB1的免疫刺激肽hp91(例如，具有SEQ ID NO：21)、NY-ESO-1(例如，具有SEQ ID NO：143)、来自HIV-1的超基序肽(Gag 171、Gag 294、Gag 298、Pol 303、Pol 335、Pol 596、Pol 711、Pol 712、Pol758、Pol 915、Pol 956)和来自血凝素流感病毒蛋白的表位。
在另一个实施方案中，CD4 T细胞表位可以是外来CD4 T细胞表位，即结合II类MHC分子并且可以呈递在结合II类MHC分子的抗原呈递细胞(APC)的表面上的外来T细胞表位。
1.2.2.1.3.肿瘤表位
在一个实施方案中，表位能够诱导针对肿瘤抗原的免疫应答。因此，在一个实施方案中，表位是肿瘤表位，优选地，表位是肿瘤CD4 T细胞表位或肿瘤CD8 T细胞表位。在一个实施方案中，肿瘤T细胞表位是由I类MHC分子呈递的肿瘤T细胞表位。在另一个实施方案中，肿瘤T细胞表位是由II类MHC分子呈递的肿瘤T细胞表位。
肿瘤T细胞表位的实例包括Vigneron等，2013.Cancer Immun.13:15中描述的那些，包括但不限于下表2中列举的那些：
表2-肿瘤T细胞表位的实例。
1.2.2.1.4.病原性表位
在一个实施方案中，表位能够诱导针对病原性抗原的免疫应答。在一个实施方案中，表位是病原性表位；优选地，表位是病原性T细胞表位；更优选地，表位是CD4 T细胞表位或病原性CD8 T细胞表位。
在一个实施方案中，病原性T细胞表位是由I类MHC分子呈递的病原性T细胞表位。在另一个实施方案中，病原性T细胞表位是由II类MHC分子呈递的病原性T细胞表位。在一个实施方案中，表位是细菌T细胞表位、病毒T细胞表位、寄生虫T细胞表位或真菌T细胞表位。
病原性T细胞表位的实例包括但不限于单核细胞增生李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes)的李斯特菌溶血素O蛋白(例如，具有SEQ ID NO：144)、流感病毒核蛋白(例如，具有SEQ ID NO：145)、淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)糖蛋白(GP)(例如，具有SEQID NO：146或147)和免疫显性腺相关病毒2(AAV2)(例如，具有SEQ ID NO：148)。
在一个实施方案中，病原性T细胞表位是HIV T细胞表位。HIV T细胞表位的实例包括但不限于可在：https://www.hiv.lanl.gov/content/immunology/index.html获得的Hiv.lanl.gov.(2017).HIV Molecular Immunology Database.[在线]和Yusim K，KorberBTM，Brander C，Barouch D，De Boer R.Haynes BF，Koup R，Moore JP，Walker BD和Watkins DI(编辑).(2017).HIV Molecular Immunology 2016.Los Alamos,New Mexico:Los Alamos National Laboratory,Theoretical Biology and Biophysics中公开的那些。
在一个实施方案中，病原性T细胞表位是肝炎病毒T细胞表位，包括但不限于甲型肝炎病毒(HAV)、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、丁型肝炎病毒(HDV)、戊型肝炎病毒(HEV)、己型肝炎病毒(HFV)或庚型肝炎病毒(HGV)。
1.2.2.1.长CD4/CD8表位
在一个实施方案中，根据本发明的抗原片段包含至少两个表位。
在一个实施方案中，根据本发明的抗原片段包含至少两个T细胞表位，两者均由I类MHC分子呈递。在一个实施方案中，根据本发明抗原的片段包含至少两个CD8 T细胞表位。
在一个实施方案中，根据本发明的抗原片段包含至少两个T细胞表位，两者均由II类MHC分子呈递。在一个实施方案中，根据本发明抗原的片段包含至少两个CD4 T细胞表位。
在优选的实施方案中，根据本发明的抗原片段包含至少两个T细胞表位，其至少一个由I类MHC分子呈递，并且其至少一个由II类MHC分子呈递。在一个实施方案中，根据本发明的抗原片段包含至少两个T细胞表位，其至少一个是CD4 T细胞表位，并且其中至少一个是CD8 T细胞表位。
包含至少两个T细胞表位的抗原片段的实例包括但不限于gp100(具有SEQ ID NO：22)和P1A(具有SEQ ID NO：23)。
在一个实施方案中，根据本发明的抗原片段包含两个以上的表位。在一个实施方案中，根据本发明的抗原片段包含3、4、5、6、7、8、9、10或更多个表位。
1.2.2.2.两个或更多个表位/VSV-G
在一个实施方案中，本发明的修饰的VSV-G包含一个以上的异源肽。在一个具体实施方案中，本发明的修饰的VSV-G包含2、3、4或更多个异源肽。在一个实施例中，本发明的修饰的VSV-G包含异源肽的组合。
在具体实施方案中，本发明的修饰的VSV-G包含至少两个异源肽。在优选的实施方案中，本发明的修饰的VSV-G包含至少两个抗原片段。在优选的实施方案中，本发明的修饰的VSV-G包含至少两个表位。在一个实施方案中，至少两个异源肽，优选至少两个抗原片段或至少两个表位是相同的，即，它们具有相同的氨基酸序列。在另一个实施方案中，所述至少两个异源肽，优选至少两个抗原片段或至少两个表位是不同的，即它们不共享相同的氨基酸序列。
在更优选的实施方案中，本发明的修饰的VSV-G包含至少一个CD8 T细胞表位和至少另一个表位。在更优选的实施方案中，本发明的修饰的VSV-G包含至少一个CD4 T细胞表位和至少另一个表位。在甚至更优选的实施方案中，本发明的修饰的VSV-G包含至少一个CD8 T细胞表位和至少一个CD4 T细胞表位。在甚至更优选的实施方案中，本发明的修饰的VSV-G包含至少两个CD4 T细胞表位，其可以相同或不同，如上文所定义。在甚至更优选的实施方案中，本发明的修饰的VSV-G包含至少两个CD8 T细胞表位，其可以相同或不同，如上文所定义。
在一个实施方案中，本发明的修饰的VSV-G包含至少一条抗原或其表位片段，优选表位，和至少一个CD4 T细胞表位。在优选的实施方案中，本发明的修饰的VSV-G包含至少一个表位，优选T细胞表位，和至少一个CD4 T细胞表位，优选通用抗原性CD4 T细胞表位。
1.2.3.长度
1.2.3.1.总体
在一个实施方案中，异源肽或其片段的长度为4至50个氨基酸，优选5至25个氨基酸，更优选6至20个氨基酸，甚至更优选8至18个氨基酸。
在一个实施方案中，异源肽或其片段的长度为4至10个氨基酸，4至15个氨基酸，4至20个氨基酸，4至25个氨基酸或4至30个氨基酸。
在另一个实施方案中，异源肽或其片段的长度为5至10个氨基酸，5至15个氨基酸，5至20个氨基酸，5至25个氨基酸5至30个氨基酸。
在另一个实施方案中，异源肽或其片段的长度为6至10个氨基酸，6至15个氨基酸，6至20个氨基酸，6至25个氨基酸或6至30个氨基酸。
在另一个实施方案中，异源肽或其片段的长度为7至10个氨基酸，7至15个氨基酸，7至20个氨基酸，7至25个氨基酸或7至30个氨基酸。
在另一个实施方案中，异源肽或其片段的长度为8至10个氨基酸，8至15个氨基酸，8至20个氨基酸，8至25个氨基酸或8至30个氨基酸。
在另一个实施方案中，异源肽或其片段的长度为3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25个氨基酸。
1.2.3.2.CD4表位长度
在一个实施方案中，当异源肽或其片段是CD4 T细胞表位时，所述异源肽或其片段的长度为5至25个氨基酸，优选8至22个氨基酸，更优选10至20个氨基酸，甚至更优选12至18个氨基酸。
在另一个实施方案中，当异源肽或其片段是CD4 T细胞表位时，所述异源肽或其片段的长度为5至10个氨基酸，5至15个氨基酸，5至18个氨基酸，5至20个氨基酸，或5至25个氨基酸。
在另一个实施方案中，当异源肽或其片段是CD4 T细胞表位时，所述异源肽或其片段的长度为6至10个氨基酸，6至15个氨基酸，6至18个氨基酸，6至20个氨基酸或6至25个氨基酸。
在另一个实施方案中，当异源肽或其片段是CD4 T细胞表位时，所述异源肽或其片段的长度为7至10个氨基酸，7至15个氨基酸，7至18个氨基酸，7至20个氨基酸或7至25个氨基酸。
在另一个实施方案中，当异源肽或其片段是CD4 T细胞表位时，所述异源肽或其片段的长度为8至10个氨基酸，8至15个氨基酸，8至18个氨基酸，8至20个氨基酸或8至25个氨基酸。
在另一个实施方案中，当异源肽或其片段是CD4 T细胞表位时，所述异源肽或其片段的长度为9至10个氨基酸，9至15个氨基酸，9至18个氨基酸，9至20个氨基酸或9至25个氨基酸。
在另一个实施方案中，当异源肽或其片段是CD4 T细胞表位时，所述异源肽或其片段的长度为10至15个氨基酸，10至18个氨基酸，10至20个氨基酸或10至25个氨基酸。
在另一个实施方案中，当异源肽或其片段是CD4 T细胞表位时，所述异源肽或其片段的长度为11至15个氨基酸，11至18个氨基酸，11至20个氨基酸或11至25个氨基酸。
在另一个实施方案中，当异源肽或其片段是CD4 T细胞表位时，所述异源肽或其片段的长度为12至15个氨基酸，12至18个氨基酸，12至20个氨基酸或12至25个氨基酸。
在另一个实施方案中，异源肽或其片段的长度为5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25个氨基酸。
1.2.3.3.CD8表位长度
在一个实施方案中，当异源肽或其片段是CD8 T细胞表位时，所述异源肽或其片段的长度为3至20个氨基酸，优选3至15个氨基酸，更优选5至13个氨基酸，甚至更优选7至11个氨基酸。
在一个实施方案中，当异源肽或其片段是CD8 T细胞表位时，所述异源肽或其片段的长度为3至9个氨基酸，3至11个氨基酸，3至15个氨基酸，3至18个氨基酸或3至20个氨基酸。
在一个实施方案中，当异源肽或其片段是CD8 T细胞表位时，所述异源肽或其片段的长度为4至9个氨基酸，4至11个氨基酸，4至15个氨基酸，4至18个氨基酸或4至20个氨基酸。
在一个实施方案中，当异源肽或其片段是CD8 T细胞表位时，所述异源肽或其片段的长度为5至9个氨基酸，5至11个氨基酸，5至15个氨基酸，5至18个氨基酸或5至20个氨基酸。
在一个实施方案中，当异源肽或其片段是CD8 T细胞表位时，所述异源肽或其片段的长度为6至9个氨基酸，6至11个氨基酸，6至15个氨基酸，6至18个氨基酸或6至20个氨基酸。
在一个实施方案中，当异源肽或其片段是CD8 T细胞表位时，所述异源肽或其片段的长度为7至9个氨基酸，7至11个氨基酸，7至15个氨基酸，7至18个氨基酸或7至20个氨基酸。
在另一个实施方案中，当异源肽或其片段是CD8 T细胞表位时，所述异源肽或其片段的长度为3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20个氨基酸。
1.2.3.4.长CD4/CD8表位
在一个实施方案中，当异源肽或其片段是包含两个T细胞表位的抗原片段时，所述异源肽或其片段的长度为20至100个氨基酸，优选25至80个氨基酸，更优选30至60个氨基酸，甚至更优选30至45个氨基酸，甚至更优选35至40个氨基酸。
在一个实施方案中，当异源肽或其片段是包含两个T细胞表位的抗原片段时，所述异源肽或其片段的长度是20至35个氨基酸，20至40个氨基酸，20至45个氨基酸，20至50个氨基酸或20至60个氨基酸。
在一个实施方案中，当异源肽或其片段是包含两个T细胞表位的抗原片段时，所述异源肽或其片段的长度为25至35个氨基酸，25至40个氨基酸，25至45个氨基酸，25至50个氨基酸或25至60个氨基酸。
在一个实施方案中，当异源肽或其片段是包含两个T细胞表位的抗原片段时，所述异源肽或其片段的长度为30至35个氨基酸，30至40个氨基酸，30至45个氨基酸，30至50个氨基酸或30至60个氨基酸。
在一个实施方案中，当异源肽或其片段是包含两个T细胞表位的抗原片段时，所述异源肽或其片段的长度为31至35个氨基酸，31至40个氨基酸，31至45个氨基酸酸，31至50个氨基酸或31至60个氨基酸。
在一个实施方案中，当异源肽或其片段是包含两个T细胞表位的抗原片段时，所述异源肽或其片段的长度为32至35个氨基酸，32至40个氨基酸，32至45个氨基酸，32至50个氨基酸或32至60个氨基酸。
在一个实施方案中，当异源肽或其片段是包含两个T细胞表位的抗原片段时，所述异源肽或其片段的长度为33至35个氨基酸，33至40个氨基酸，33至45个氨基酸，33至50个氨基酸或33至60个氨基酸。
在一个实施方案中，当异源肽或其片段是包含两个T细胞表位的抗原片段时，所述异源肽或其片段的长度为34至35个氨基酸，34至40个氨基酸，34至45个氨基酸，34至50个氨基酸或34至60个氨基酸。
在一个实施方案中，当异源肽或其片段是包含两个T细胞表位的抗原片段时，所述异源肽或其片段的长度为35至40个氨基酸，35至45个氨基酸，35至50个氨基酸或35至60个氨基酸。
在另一个实施方案中，当异源肽或其片段是包含两个T细胞表位的抗原片段时，所述异源肽或其片段的长度为20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55个氨基酸。
在一个实施方案中，当异源肽或其片段是包含两个或更多个T细胞表位的抗原片段时，所述两个或更多个T细胞表位被在本文中称为“间隔区”的小氨基酸序列分开。
在一个实施方案中，间隔区包含0至50个氨基酸，优选2至25个氨基酸，更优选5至20个氨基酸，更优选7至15个氨基酸。
在一个实施方案中，间隔物包含0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个氨基酸。
1.3.插入方法
在一个实施方案中，通过重组DNA方法将本发明的肽插入VSV-G中。本领域技术人员可以使用本领域已知的技术容易地制备本发明的核酸(例如，参见Sambrook等,Molecular Cloning:A Laboratory Manual.New-York:Cold Spring Harbor LaboratoryPress,1989；Ausubel等,Short Protocols in Molecular Biology.New-York:John Wileyand Sons,1992)。例如，VSV-G的修饰序列通过人工基因合成获得。这允许改变密码子使用，以更好地表达序列(Angov等，2011.Biotechnol.J.6(6):650–659)。然后将优化的序列亚克隆到表达载体中。在另一个实例中，含有编码待插入VSV-G中的肽的核酸序列的合成核酸序列或载体被特别设计为包括与编码VSV-G的特定核酸内切酶切割的核酸序列或与预先添加到VSV-G序列中的特定核酸内切酶切割的核酸序列匹配的限制性内切核酸酶位点。当期望的VSV-G插入位点含有单个独特的限制性内切核酸酶位点时，优选将肽的核酸序列工程化为在序列的两端包含匹配的限制性位点。以这种方式，将编码肽的序列插入VSV-G序列中，而不去除任何编码VSV-G的核苷酸。注意使待插入的编码肽的核酸序列与VSV-G序列的阅读框相匹配，以便实现编码的VSV-G与编码的目的肽的正常表达。修饰的VSV-G也可以来自Gibson组装克隆，其中可以组装多个DNA片段，而不管片段长度或末端相容性。
在一个实施方案中，在任何VSV-G允许插入位点，优选在VSV-G允许表位插入位点，将至少一个异源肽或抗原片段插入VSV-G。
在一个实施方案中，将至少一条异源肽或其片段在高度可变区插入VSV-G中。在一个实施方案中，所述高度可变区基于来自各种毒株的VSV-G的序列比对来定义。这些高度可变的区域可以进行序列修饰而不影响蛋白的稳定性和/或功能。在一个实施方案中，所述高度可变区是暴露于蛋白表面的区域。在一个实施方案中，所述高度可变区域是包含在暴露转角中的区域，包括α-转角、β-转角、γ-转角、δ-转角、π-转角、ω-转角、环和/或发夹。用于插入至少一条异源肽或其片段的合适区域可以通过本领域技术人员已知的方法，使用例如蛋白结构预测软件和/或环建模软件来确定。
在一个实施方案中，将至少一条异源肽或其片段在C-端末端插入VSV-G，即在其序列的最后一个氨基酸残基之后插入。
在一个实施方案中，将至少一条异源肽或其片段在选自下组的区域内插入来自印第安纳型水泡性口炎病毒(VSIV)(SEQ ID NO：1)的VSV-G中：
-区域1：SEQ ID NO：1的氨基酸残基1至19；
-区域2：SEQ ID NO：1的氨基酸残基42至61；
-区域3：SEQ ID NO：1的氨基酸残基184至233；
-区域4：SEQ ID NO：1的氨基酸残基253至268；
-区域5：SEQ ID NO：1的氨基酸残基270至289；
-区域6：SEQ ID NO：1的氨基酸残基362至372；和
-区域7：在SEQ ID NO：1氨基酸残基511后，即C-端末端。
在一个实施方案中，将至少一条异源肽或其片段在选自下组的区域内插入来自新泽西型水泡性口炎病毒(VSNJV)(SEQ ID NO：2)的VSV-G中：
-区域1：SEQ ID NO：2的氨基酸残基1至19；
-区域2：SEQ ID NO：2的氨基酸残基42至61；
-区域3：SEQ ID NO：2的氨基酸残基184至233；
-区域4：SEQ ID NO：2的氨基酸残基253至272；
-区域5：SEQ ID NO：2的氨基酸残基274至293；
-区域6：SEQ ID NO：2的氨基酸残基366至376；和
-区域7：SEQ ID NO：2的氨基酸残基517后，即在C-端末端。
在一个实施方案中，将至少一条异源肽或其片段在选自下组的区域内插入来自金迪普拉病毒(CHPV)(SEQ ID NO：3)的VSV-G中：
-区域1：SEQ ID NO：3的氨基酸残基1至24；
-区域2：SEQ ID NO：3的氨基酸残基47至66；
-区域3：SEQ ID NO：3的氨基酸残基189至237；
-区域4：SEQ ID NO：3的氨基酸残基257至276；
-区域5：SEQ ID NO：3的氨基酸残基278至297；
-区域6：SEQ ID NO：3的氨基酸残基370至381；和
-区域7：在SEQ ID NO：3的氨基酸残基530后，即在C-端末端。
在一个实施方案中，将至少一条异源肽或其片段在选自下组的区域内插入来自可卡耳病毒(COCV)(SEQ ID NO：4)的VSV-G中：
-区域1：SEQ ID NO：4的氨基酸残基1至20；
-区域2：SEQ ID NO：4的氨基酸残基43至62；
-区域3：SEQ ID NO：4的氨基酸残基185至234；
-区域4：SEQ ID NO：4的氨基酸残基254至269；
-区域5：SEQ ID NO：4的氨基酸残基271至290；
-区域6：SEQ ID NO：4的氨基酸残基363至373；和
-区域7：在SEQ ID NO：4的氨基酸残基512之后，即在C-端末端。
在一个实施方案中，将至少一条异源肽或其片段在选自下组的区域内插入来自皮理病毒(PIRYV)(SEQ ID NO：5)的VSV-G中：
-区域1：SEQ ID NO：5的氨基酸残基1至2；
-区域2：SEQ ID NO：5的氨基酸残基44至63；
-区域3：SEQ ID NO：5的氨基酸残基186至233；
-区域4：SEQ ID NO：5的氨基酸残基253至272；
-区域5：SEQ ID NO：5的氨基酸残基274至293；
-区域6：SEQ ID NO：5的氨基酸残基366至377；和
-区域7：在SEQ ID NO：5的氨基酸残基529之后，即在C-端末端。
在一个实施方案中，将至少一条异源肽或其片段在选自下组的区域中插来自伊斯法罕病毒(ISFV)(SEQ ID NO：6)的VSV-G中：
-区域1：SEQ ID NO：6的氨基酸残基1至23；
-区域2：SEQ ID NO：6的氨基酸残基46至65；
-区域3：SEQ ID NO：6的氨基酸残基188至236；
-区域4：SEQ ID NO：6的氨基酸残基256至275；
-区域5：SEQ ID NO：6的氨基酸残基277至296；
-区域6：SEQ ID NO：6的氨基酸残基369至380；和
-区域7：在SEQ ID NO：6的氨基酸残基523之后，即在C-端末端。
在一个实施方案中，将至少一条异源肽或其片段在选自下组的区域内插入来自鲤春病毒血症病毒(SVCV)(SEQ ID NO：7)的VSV-G中：
-区域1：SEQ ID NO：7的氨基酸残基1至20；
-区域2：SEQ ID NO：7的氨基酸残基44至63；
-区域3：SEQ ID NO：7的氨基酸残基186至235；
-区域4：SEQ ID NO：7的氨基酸残基254至270；
-区域5：SEQ ID NO：7的氨基酸残基272至291；
-区域6：SEQ ID NO：7的氨基酸残基364至374；和
-区域7：在SEQ ID NO：7的氨基酸残基509后，即在C-端末端。
在一个实施方案中，将至少一条异源肽或其片段在选自下组的区域内插入来自阿拉戈斯型病毒(VSAV)(SEQ ID NO：54)的VSV-G中：
-区域1：SEQ ID NO：54的氨基酸残基1至20；
-区域2：SEQ ID NO：54的氨基酸残基43至62；
-区域3：SEQ ID NO：54的氨基酸残基185至234；
-区域4：SEQ ID NO：54的氨基酸残基254至269；
-区域5：SEQ ID NO：54的氨基酸残基271至290；
-区域6：SEQ ID NO：54的氨基酸残基363至373；和
-区域7：在SEQ ID NO：54的氨基酸残基511后，即在C-端末端。
在一个实施方案中，将至少一条异源肽或其片段在选自下组的区域内插入来自卡拉加斯病毒(CJSV)(SEQ ID NO：55)的VSV-G中：
-区域1：SEQ ID NO：55的氨基酸残基1至24；
-区域2：SEQ ID NO：55的氨基酸残基47至66；
-区域3：SEQ ID NO：55的氨基酸残基189至238；
-区域4：SEQ ID NO：55的氨基酸残基258至277；
-区域5：SEQ ID NO：55的氨基酸残基279至298；
-区域6：SEQ ID NO：55的氨基酸残基371至381；和
-区域7：在SEQ ID NO：55的氨基酸残基523之后，即在C-端末端。
在一个实施方案中，将至少一条异源肽或其片段在选自下组的区域内插入来自马拉巴病毒(MARAV)(SEQ ID NO：56)的VSV-G中：
-区域1：SEQ ID NO：56的氨基酸残基1至19；
-区域2：SEQ ID NO：56的氨基酸残基42至61；
-区域3：SEQ ID NO：56的氨基酸残基184至233；
-区域4：SEQ ID NO：56的氨基酸残基253至268；
-区域5：SEQ ID NO：56的氨基酸残基270至289；
-区域6：SEQ ID NO：56的氨基酸残基362至372；和
-区域7：在SEQ ID NO：56的氨基酸残基512后，即在C-端末端。
在另一个实施方案中，将至少一条异源肽或其片段插入来自分类为或临时分类在水疱病毒属中的病毒株的VSV-G中，例如金迪普拉病毒(CHPV)、可卡耳病毒(COCV)、印第安纳病毒(VSIV)、伊斯法罕病毒(ISFV)、新泽西病毒(VSNJV)、皮理病毒(PIRYV)、草鱼弹状病毒、比安157575病毒(BeAn157575)、博特克病毒(BTKV)；卡尔查基(CQIV)、美洲鳗病毒(EVA)、格雷洛奇病毒(GLOV)、朱罗纳病毒(JURV)、克拉马斯病毒(KLAV)、克瓦塔病毒(KWAV)、拉霍亚病毒(LJV)、马尔佩斯泉病毒(MSPV)、埃尔岗蝙蝠病毒(MEBV)、佩里内特病毒(PERV)、梭子鱼鱼苗弹状病毒(PFRV)、波登病毒(PORV)、拉迪病毒(RADIV)、鲤春病毒血症病毒(SVCV)、图帕伊阿病毒(TUPV)、溃疡病弹状病毒(UDRV)和尤格波格丹诺夫奇病毒(YBV)。将至少一条异源肽或其片段插入本领域技术人员容易选择的位置内。
如下文所用，并且除非另有说明，异源肽插入的位置由紧邻插入位点后的氨基酸残基限定。换句话说，插入位置18对应于氨基酸残基17和18之间的区域。
在一个实施方案中，将至少一条异源肽或其片段在选自包含或由以下组成的组的VSV-G氨基酸位置插入来自印第安纳型水泡性口炎病毒(VSIV)(SEQ ID NO：1)的VSV-G中：位置13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、363、364、365、366、367、368、369、370、371、372、373和C-端末端，及其组合。
在一个实施方案中，将至少一条异源肽或其片段在选自包含或由以下组成的组的VSV-G氨基酸位置插入来自印第安纳型水泡性口炎病毒(VSIV)(SEQ ID NO：1)的VSV-G中，所述VSV-G氨基酸位置：位置18、51、55、191、196、217、368和C-端末端，及其组合。
在优选的实施方案中，相对于SEQ ID NO：1，将至少一条异源肽或其片段在VSV-G氨基酸位置18和/或191插入VSV-G中。换句话说，在优选的实施方案中，将编码异源肽的核酸序列插入编码VSV-G的核酸序列中，使得表达的修饰的VSV-G将包括在相对于SEQ ID NO：1的VSV-G氨基酸位置18和/或191插入的异源肽。
在另一个优选的实施方案中，将至少一条异源肽或其片段在VSV-G的C-端末端插入VSV-G中。
在一个具体实施方案中，将多于一条异源肽或其片段在SEQ ID NO：1的VSV-G氨基酸位置18插入VSV-G中。在一个具体实施方案中，将多于一条异源肽或其片段在SEQ ID NO：1的VSV-G氨基酸位置51插入VSV-G中。在一个具体实施方案中，将多于一条异源肽或其片段在SEQ ID NO：1的VSV-G氨基酸位置55插入VSV-G中。在一个具体实施方案中，将多于一条异源肽或其片段在SEQ ID NO：1的VSV-G氨基酸位置191插入VSV-G中。在一个具体实施方案中，将多于一条异源肽或其片段在SEQ ID NO：1的VSV-G氨基酸位置196插入VSV-G中。在一个具体实施方案中，将多于一条异源肽或其片段在SEQ ID NO：1的VSV-G氨基酸位置217插入VSV-G中。在一个具体实施方案中，将多于一条异源肽或其片段在SEQ ID NO：1的VSV-G氨基酸位置368插入VSV-G中。在一个具体实施方案中，将多于一条异源肽或其片段在VSV-G的C-端末端插入VSV-G中。
确定至少一条异源肽或其片段可以插入除来自印第安纳型水疱性口炎病毒(VSIV)(SEQ ID NO：1)的VSV-G以外的VSV-G中的氨基酸位置的技术是本领域众所周知的。
在一个实施方案中，可以例如在VSV-G中的多于一个位点，优选两个或更多个位点将多条异源肽插入VSV-G中。在一个实施方案中，本发明的修饰的VSV-G包含多个拷贝的相同异源肽。在另一个实施方案中，本发明的修饰的VSV-G包含一个拷贝的不同异源肽。在又一个实施方案中，本发明的修饰的VSV-G包含一个或多个拷贝的不同异源肽。
2.多核苷酸
本发明的第二方面涉及编码本发明的修饰的VSV-G的多核苷酸或核酸序列。
“编码序列”或“编码”修饰的VSV-G的序列是核苷酸序列，当表达时，其导致产生该修饰的VSV-G，即该核苷酸序列编码该修饰的VSV-G的氨基酸序列。在一个实施方案中，编码序列包括起始密码子(通常为ATG)和终止密码子。
在一个实施方案中，多核苷酸或核酸序列是分离的多核苷酸或分离的核酸序列。
在一个实施方案中，本发明的多核苷酸或核酸可通过本领域技术人员熟知的常规方法获得。通常，所述多核苷酸或核酸是DNA或RNA分子，其可以包含在合适的载体中，例如质粒、粘粒、附加体(episome)、人工染色体、噬菌体或病毒载体。
在一个实施方案中，本发明的多核苷酸或核酸是DNA分子。在另一个实施方案中，本发明的多核苷酸或核酸是RNA分子。在一个具体实施方案中，本发明的多核苷酸或核酸是mRNA分子。
在一个实施方案中，优化本发明的多核苷酸或核酸的密码子使用偏倚。如本文所用，术语“密码子使用偏倚”是指给定生物体、组织或细胞内编码氨基酸的特定密码子(与其他同义密码子相对)的高频优先使用。密码子使用偏倚可以表示为特定生物体、组织或细胞的基因组中特定密码子使用的速率的定量测量值，例如，当与编码相同氨基酸的其他密码子比较时。本领域技术人员已知用于确定密码子使用偏倚的各种方法。在一些实施方案中，密码子使用偏倚可以通过密码子适应指数(CAI)方法确定，其基本上是基因密码子使用与预定义的一组高表达基因的密码子使用的距离测量值(Sharp和Li，1987.Nucleic AcidsRes.15:1281-95)。确定密码子使用偏倚的替代方法包括MILC(独立于长度和组成的测量(Measure Independent of Length and Composition))(Supek和Vlahovicek,2005.BMCBioinformatics.6:182)和相对同义密码子使用(RSCU)，它是特定密码子的观察频率除以由该氨基酸的所有同义密码子的相等使用所预期的频率(Sharp等，1986.Nucleic AcidsRes.14:5125-43)。接近1.0的RSCU值表明特定密码子缺乏偏倚，而偏离1.0反映了密码子使用偏倚。
在一个实施方案中，将一条或多条多核苷酸离体插入树突细胞中，使得一条或多条选择的异源肽，优选抗原，以有效量呈递于树突细胞的表面上。“有效量”是指呈递足以使树突细胞引发免疫应答。
用于核酸操作的技术是众所周知的。用于应用此类技术的试剂，例如限制酶等，在本领域中是众所周知的，并且可从许多供应商商购获得。
编码用于在树突细胞中呈递所需异源肽，优选抗原的多核苷酸优选是可以发生高水平表达的重组表达载体。
在一个实施方案中，载体还可含有编码选定的I类和II类MHC分子、共刺激和其它免疫调节分子、ABC转运蛋白(包括TAP1和TAP2蛋白)的多核苷酸序列。在一个实施方案中，载体还可含有至少一个阳性标记，其能够使得选择携带插入的核酸的树突细胞。
可以通过免疫测定或生物测定来确认转染到树突细胞中后目标多核苷酸的表达。例如，可以通过使用本领域公知的测定法(例如FACS(荧光激活细胞分选)或ELISA(酶联免疫吸附测定))，检测对目标抗原特异的标记抗体与细胞的结合或简单地通过染色(例如，用β-gal)和确定细胞计数来确认引入细胞中的多核苷酸的表达。
可以通过各种已知方法检测T细胞活化，包括测量T细胞增殖的变化，靶细胞的杀伤，四聚体染色，和某些调节因子的分泌，例如淋巴因子，某些免疫调节分子的mRNA的表达，或这些的组合。
3.载体
因此，本发明的另一个目的涉及载体或质粒，其中本发明的多核苷酸与用于控制转录(特别是启动子、增强子和任选的，终止子)以及任选地翻译的合适元件相连接。
本发明还涉及插入了本发明的多核苷酸的重组载体。这些重组载体可以例如是克隆载体或表达载体。
术语“载体”、“克隆载体”和“表达载体”是指可以将本发明的多核苷酸引入宿主细胞，以转化宿主并促进多核苷酸的表达(例如转录和翻译)的载体。
可以使用任何用于动物细胞的表达载体，只要可以插入和表达编码本发明的修饰的VSV-G的多核苷酸即可。合适载体的实例包括但不限于pVAX2、pAGE107、pAGE103、pHSG274、pKCR、pSG1βd2-4等。
质粒的其他实例包括包含复制起点的复制质粒，或整合质粒，例如pUC、pcDNA、pBR等。
在一个实施方案中，载体缺乏抗生素抗性基因。例如，选择基于营养缺陷型菌株的互补，毒素-抗毒素系统，操纵子-阻遏物滴定，RNA标记，或基于生长必需基因的过表达。也可以使用微环或允许从初始载体中去除抗生素抗性基因的任何其他方法(Vandermeulen等,2011.Mol.Ther.19(11):1942-49)。
在一个实施方案中，将本发明的多核苷酸连接到表达载体中，所述表达载体已经针对多核苷酸疫苗接种进行了特异性优化。元件包括但不限于转录启动子，免疫原性表位，编码具有其自身的启动子、转录终止子的免疫增强或免疫调节基因(如泛素)的其他顺反子，细菌复制起点，抗生素抗性基因或其他选择标记，以及刺激先天免疫的CpG序列，所有这些都是本领域技术人员众所周知的。任选地，载体可包含内部核糖体进入位点(IRES)。
在一个实施方案中，载体包含组织特异性启动子或增强子，以限制多核苷酸对特定组织类型的表达。
例如，肌肉肌酸激酶(MCK)增强子元件可能对限制多核苷酸对特定组织类型的表达是需要的。肌细胞是末端分化的细胞，其不分裂。将外来DNA整合到染色体中似乎需要细胞分裂和蛋白合成。因此，将蛋白表达限制至非分裂细胞如肌细胞可能是优选的。
另一个实例包括角质形成细胞特异性启动子、黑素细胞特异性启动子和皮肤乳头特异性启动子，如例如：角蛋白(包括针对皮肤基底层的角蛋白5(K5)和角蛋白14(K14)启动子；针对皮肤上基底层的角蛋白1(Kl)和角蛋白10(K10)启动子)、兜甲蛋白(loricrin)、外皮蛋白(involucrin)、转谷氨酰胺酶I、E-钙粘蛋白、弹性蛋白、角质纤丝聚集蛋白(filaggrin)、α1胶原蛋白、间质蛋白(cornifin)β、mCC10或黑皮质素1受体(MCR1)的启动子。
在一个实施方案中，组织特异性或细胞特异性启动子可用于靶向修饰的VSV-G的表达至抗原呈递细胞。
其他真核转录启动子的实例包括但不限于劳氏肉瘤病毒(RSV)启动子、猴病毒40(SV40)启动子、人延伸因子-1α(EF-1α)启动子和人泛素C(UbC)启动子。
合适的载体包括编码本发明多核苷酸的任何质粒DNA构建体，其可操作地连接至真核启动子。此类载体的实例包括pCMV系列表达载体，可从Stratagene(La Jolla，Calif.)商购获得；或Invitrogen Corporation(Carlsbad，Calif.)的pcDNA或pREP系列表达载体。
在另一个实施方案中，载体是病毒载体。在一个实施方案中，病毒载体包括腺病毒、逆转录病毒、疱疹病毒和AAV载体。此类重组病毒可通过本领域已知的技术产生，例如通过转染包装细胞或通过用辅助质粒或病毒瞬时转染。病毒包装细胞的典型实例包括PA317细胞、PsiCRIP细胞、GPenv+细胞、293细胞等。用于产生此类复制缺陷型重组病毒的详细方案可以在例如WO1995014785、WO1996022378、US5,882,877、US6,013,516、US4,861,719、US5,278,056和WO1994019478中找到。
4.宿主细胞/树突细胞
本发明的另一个目的也是用至少一条本发明的多核苷酸遗传转化的原核或真核宿主细胞。
术语“转化”是指引入“外来的”(即外部的或细胞外的)基因、DNA或RNA序列(包括质粒和病毒载体)到宿主细胞，以使宿主细胞表达引入的基因或序列以产生所需的物质，通常是由引入的基因或序列编码的蛋白。接收并表达引入的DNA或RNA的宿主细胞已经“被转化”。
优选地，为了表达和生产蛋白，特别是本发明的修饰的VSV-G，将选择真核细胞，特别是哺乳动物细胞，更特别是人细胞。
通常，可以使用诸如CHO、BHK-21、COS-7、C127、PER.C6或HEK293的细胞，因为它们能够进行衍生物的正确翻译后修饰。
可以使用常规分子生物学技术进行本发明的表达载体的构建和宿主细胞的转化。例如，可以通过培养本发明的遗传转化细胞并从培养物中回收由所述细胞表达的衍生物来获得本发明的修饰的VSV-G。然后，如果需要，它们可以通过本领域技术人员已知的常规方法纯化，例如通过分级沉淀，特别是硫酸铵沉淀，电泳，凝胶过滤，亲和色谱等。
特别地，用于制备和纯化重组蛋白的常规方法可用于生产本发明的修饰的VSV-G。
本发明进一步涉及用本发明的多核苷酸转染的树突细胞，即其中插入一条或多条根据本发明的多核苷酸的树突细胞。
本发明的另一个目的是用本发明的核酸序列或载体转染的树突细胞群。
5.组合物
本发明还涉及包含本发明的修饰的VSV-G、多核苷酸、载体或细胞或由其组成或基本上由其组成的组合物。
如本文所用，表述“基本上由......组成”是指其所指的组合物不包含除了本发明的修饰的VSV-G、多核苷酸、载体或细胞之外的任何其他活性成分，即负责生理或治疗反应的成分。
本发明进一步涉及药物组合物，其包含本发明的修饰的VSV-G、多核苷酸、载体或细胞和至少一种药学上可接受的赋形剂，基本上由其组成或由其组成。如本文所用，术语“药物组合物”包括兽医学组合物。
本发明还涉及免疫原性组合物，其包含本发明的修饰的VSV-G、多核苷酸、载体或细胞，基本上由其组成或由其组成。
6.疫苗
本发明还涉及包含编码本发明的修饰的VSV-G的核酸序列、包含编码根据本发明的修饰的VSV-G的核酸序列的载体、用编码本发明的修饰的VSV-G的核酸序列遗传转化的宿主细胞或本发明的修饰的VSV-G的疫苗。
在一个实施方案中，本发明的疫苗是预防性疫苗。
“预防性疫苗”是指在确定的疾病临床体征、诊断或鉴定之前施用的疫苗。根据该实施方案，施用疫苗以预防疾病。
如果疫苗诱导有效但短暂的免疫应答，则也可以设计预防性疫苗用作加强疫苗。这种加强疫苗给予以前曾接受过免疫接种的个人，旨在延长保护期。
在另一个实施方案中，疫苗是治疗性疫苗，即在疾病的第一次临床体征、诊断或鉴定后施用。根据该实施方案，施用疫苗以治疗疾病。
6.1.多核苷酸疫苗
在一个实施方案中，疫苗是多核苷酸疫苗。
用多核苷酸进行的免疫也称为“遗传免疫”、“RNA免疫”或“DNA免疫”。
因此，在一个实施方案中，本发明的疫苗包含编码本发明的修饰的VSV-G的多核苷酸或核酸序列。
在一个实施方案中，本发明的疫苗是基于DNA的疫苗。因此，在一个实施方案中，本发明的疫苗包含编码本发明的修饰的VSV-G的DNA分子。
在另一个实施方案中，本发明的疫苗是基于RNA的疫苗。因此，在一个实施方案中，本发明的疫苗包含编码本发明的修饰的VSV-G的RNA分子，优选mRNA分子。
在一个实施方案中，本发明的疫苗表达多于一个的修饰的VSV-G。因此，在一个实施方案中，本发明的疫苗表达两个或更多个修饰的VSV-G。在一个具体实施方案中，本发明的疫苗表达两个或更多个修饰的VSV-G，其中所述修饰的VSV-G是不同的。
根据该实施方案，本发明的多核苷酸疫苗可包含编码两种不同的修饰的VSV-G的两种多核苷酸或两种核酸序列。仍然根据该实施方案，本发明的蛋白疫苗可包含两种不同的修饰的VSV-G。
在优选的实施方案中，本发明的疫苗表达第一修饰的VSV-G和第二修饰的VSV-G，其中第一修饰的VSV-G包含CD8 T细胞表位，并且其中第二修饰的VSV-G包含CD4 T细胞表位。
本发明还涉及以下组合：
(a)第一修饰的VSV-G、多核苷酸、载体、组合物、细胞或疫苗，其包含第一异源肽或多于一条异源肽的第一组合或其核酸序列；和
(b)第二修饰的VSV-G、多核苷酸、载体、组合物、细胞或疫苗，其包含第二异源肽或多于一条异源肽的第二组合或其核酸序列；
其中所述第一异源肽或多于一条异源肽的组合或其核酸序列与所述第二异源肽或多于一条异源肽的组合或其核酸序列是不同的。
在一个实施方案中，所述第一异源肽或其核酸序列是CD8 T细胞表位，并且所述第二异源肽或其核酸序列是CD4 T细胞表位。
在一个实施方案中，所述第一和/或第二修饰的VSV-G、多核苷酸、载体、组合物、细胞或疫苗可进一步包含通用抗原性CD4 T细胞表位或其核酸序列。
6.2.蛋白疫苗
在另一个实施方案中，本发明的疫苗是蛋白疫苗。因此，在一个实施方案中，本发明的疫苗包含本发明的修饰的VSV-G。在另一个实施方案中，本发明的疫苗包含两个或更多个修饰的VSV-G。在一个具体实施方案中，本发明的疫苗包含两个或更多个修饰的VSV-G，其中所述修饰的VSV-G是不同的。
在优选的实施方案中，本发明的疫苗包含第一修饰的VSV-G和第二修饰的VSV-G，其中第一修饰的VSV-G包含CD8 T细胞表位，并且其中第二修饰的VSV-G包含CD4 T细胞表位。
在一个实施方案中，本发明的疫苗用于初免-加强免疫策略以诱导针对该肽的强烈和持久的免疫应答。基于相同抗原构建体的重复注射的初免和加强免疫接种方案是众所周知的并且导致强CTL应答。一般来说，第一剂可能不会产生保护性免疫，但只能“初免”免疫系统。在第二剂或第三剂后产生保护性免疫应答。
在一个实施方案中，本发明的疫苗用于常规的初免-加强免疫策略，其中相同的疫苗以多剂施用于受试者。在优选的实施方案中，疫苗用于一个或多个接种。这些加强免疫根据常规技术进行，并且当与另一种疫苗、疗法或同源疫苗一起施用时，可以在施用排期、施用途径、佐剂选择、剂量和可能次序方面凭经验进一步优化。
在另一个实施方案中，本发明的疫苗用于初免-加强免疫策略，其使用包含异种抗原和自身抗原或其片段的修饰的VSV-G的替代施用，或编码包含异种抗原和自身抗原或其片段的修饰的VSV-G的多核苷酸的替代施用。具体地，根据本发明，首先用编码外源抗原或其片段(“异种抗原”)的疫苗处理或“初免”受试者。随后，用编码对应于异种抗原但具有自身来源的抗原或其片段(“自身抗原”)的另一种疫苗处理该受试者，所述抗原或其片段。以这种方式，针对抗原的免疫反应得到了加强。加强免疫步骤可以重复一次或多次。
6.3.赋形剂
在一个实施方案中，本发明的疫苗与药学上可接受的载体或赋形剂一起配制，如水、盐水、右旋糖、甘油等及其组合。在一个实施方案中，疫苗还可含有辅助物质，例如润湿剂、乳化剂、缓冲剂、佐剂等。
在另一个实施方案中，用于本发明的多核苷酸疫苗的赋形剂是聚合物，例如阳离子聚合物或非离子聚合物(包括但不限于：聚氧乙烯(POE)、聚氧丙烯(POP)、聚乙二醇(PEG)、直链或支链聚乙烯亚胺(PEI))。在另一个实施方案中，聚合物可以形成嵌段共聚物，例如POE-POP-POE嵌段共聚物。如本文所用，术语“聚合复合物”(polyplex)是指聚合物-多核苷酸或共聚物–多核苷酸复合物。
在另一个实施方案中，多核苷酸疫苗与阳离子脂质一起配制。任选地，脂质可以是甘露醇化的。如本文所用，术语“脂质复合物”是指脂质-多核苷酸或脂质体–多核苷酸复合物。
在一个实施方案中，脂质复合物进一步与聚合物或共聚物复合以形成三级复合物。这些三级复合物具有增强的多核苷酸对靶细胞的体内递送和转染能力，从而促进增强的免疫应答。
在一个实施方案中，用于本发明的多核苷酸疫苗的载体是纳米颗粒。这些包括但不限于：纳米乳剂、树枝状聚合物、纳米金、基于脂质的纳米颗粒、脂质体、药物-载体缀合物、抗体-药物复合物和磁性纳米颗粒。
6.4.佐剂
在一个实施方案中，本发明的多核苷酸疫苗与至少一种佐剂一起配制，所述佐剂可增加本发明的多核苷酸疫苗的免疫原性。使用与施用无佐剂的多核苷酸疫苗相比，可以增加本发明的多核苷酸疫苗的免疫应答的佐剂在本领域技术人员的能力范围内。
在一些实施方案中，佐剂选自α-干扰素、γ-干扰素、血小板衍生生长因子(PDGF)、TNF-α、TNF-β、GM-CSF、表皮生长因子(EGF)、HIV-1gag、皮肤T细胞吸引趋化因子(CTACK)、上皮胸腺表达的趋化因子(TECK)、粘膜相关上皮趋化因子(MEC)、IL-2、IL-12、IL-15、IL-28、MHC、CD80、CD86，包括具有缺失的信号序列的IL-15并且任选地包括来自IgE的信号肽。其他可能是有用的佐剂的基因包括编码下述的基因：MCP-I、MIP-loc、MIP-I p、IL-8、RANTES、L-选择蛋白、P-选择蛋白、E-选择蛋白、CD34、GIyCAM-1、MadCAM-1、LFA-I、VLA-I、Mac-1、pl50.95、PECAM、ICAM-I、ICAM-2、ICAM-3、CD2、LFA-3、M-CSF、G-CSE、IL-4、突变形式的IL-18、CD40、CD40L、血管生长因子、成纤维细胞生长因子、IL-7、神经生长因子、血管内皮生长因子、Fas、TNF受体、Fit、Apo-1、p55、WSL-I、DR3、TRAMP、Apo-3、AIR、LARD、NGRF、DR4、DR5、KILLER、TRAIL-R2、TRICK2、DR6、Caspase ICE、Fos、c-jun、Sp-I、Ap-I、Ap-2、p38、p65Rel、MyD88、IRAK、TRAF6、IkB、非活性NIK、SAP K、SAP-I、JNK、干扰素应答基因、NFkB、Bax、TRAIL、TRAILrec、TRAlLrecDRC5、TRAIL-R3、TRAIL-R4、RANK、RANK配体、Ox40、Ox40配体、NKG2D、MICA、MICB、NKG2A、NKG2B、NKG2C、NKG2E、NKG2F、TAP1、TAP2，其功能片段和组合。
在一些优选的实施方案中，佐剂选自由以下组成的组：α-干扰素、γ-干扰素、IL-2，IL-8、IL-12、IL-15、IL-18、IL-28、MCP-I、MIP-1a、MIP-Ip、RANTES、RANK、RANK配体、Ox40、Ox40配体、CTACK、TECK、MEC，其功能片段及组合。
在一些优选的实施方案中，佐剂选自α-干扰素、γ-干扰素、IL-2、IL-12，其功能片段及组合。
在另一个实施方案中，用于本发明的多核苷酸疫苗的佐剂是基于矿物的化合物，例如一种或多种形式的磷酸铝基佐剂，或一种或多种形式的磷酸钙。
在另一个实施方案中，佐剂是皂苷(saponin)、单磷酰基脂质A或可用于增加多核苷酸疫苗的免疫原性的其他化合物。
在一个实施方案中，本发明的多核苷酸疫苗与至少一种基因佐剂一起配制，所述基因佐剂可以增加本发明的多核苷酸疫苗的免疫原性。使用与施用无佐剂的多核苷酸疫苗相比，可增加本发明的多核苷酸疫苗的免疫应答的可用基因佐剂在本领域技术人员的能力范围内。
如本文所用，基因佐剂是指由质粒载体编码的免疫调节分子。它们刺激先天免疫系统以触发适当的树突细胞成熟，从而产生强大、特异和持久的适应性免疫应答。免疫调节分子包括细胞因子、趋化因子或免疫刺激分子，如toll样受体激动剂或干扰素调节因子。
在一个实施方案中，基因佐剂不由编码本发明的修饰的VSV-G的多核苷酸或载体编码。在另一个实施方案中，基因佐剂由编码本发明的修饰的VSV-G的多核苷酸或载体编码。根据该实施方案，基因佐剂可以在其自身启动子的控制下：或者基因佐剂可以在与本发明的修饰的VSV-G相同的启动子的控制下，通过内部核糖体进入位点(IRES)分离。
在一些实施方案中，基因佐剂选自由以下组成的组：α-干扰素、γ-干扰素、血小板衍生生长因子(PDGF)、TNF-α、TNF-β、GM-CSF、表皮生长因子(EGF)、HIV-1gag、皮肤T细胞吸引趋化因子(CTACK)、上皮胸腺表达的趋化因子(TECK)、粘膜相关上皮趋化因子(MEC)、IL-2、IL-12、IL-15、IL-28、MHC、CD80、CD86，包括具有缺失的信号序列并且任选地包括来自IgE的信号肽的IL-15。可能是有用佐剂的其他基因包括但不限于编码下述的基因：MCP-I、MIP-loc、MIP-Ip、IL-8，RANTES、L-选择蛋白、P-选择蛋白、E-选择蛋白、CD34、GlyCAM-1、MadCAM-1、LFA-I、VLA-1、Mac-1、pl50.95、PECAM、ICAM-I、ICAM-2、ICAM-3、CD2、LFA-3、M-CSF、G-CSF、IL-4、突变形式的IL-18、CD40、CD40L、血管生长因子、成纤维细胞生长因子、IL-7、神经生长因子、血管内皮生长因子、Fas、TNF受体、Fit、Apo-1、p55、WSL-I、DR3、TRAMP、Apo-3、AIR、LARD、NGRF、DR4、DR5、KILLER、TRAIL-R2、TRICK2、DR6、Caspase ICE、Fos、c-jun、Sp-I、Ap-I、Ap-2、p38、p65Rel、MyD88、IRAK、TRAF6、IkB、非活性NIK、SAP K、SAP-I、JNK、干扰素应答基因、NFkB、Bax、TRAIL、TRAILrec、TRAILrecDRC5、TRAIL-R3、TRAIL-R4、RANK，RANK配体、Ox40、0x40配体、NKG2D、MICA、MICB、NKG2A、NKG2B、NKG2C、NKG2E、NKG2F、TAP1、TAP2，其功能片段及组合。
在一些优选的实施方案中，基因佐剂选自α-干扰素、γ-干扰素、IL-2、IL-8、IL-12、IL-15、IL-18、IL-28、MCP-I、MIP-Ia、MIP-Ip、RANTES、RANK、RANK配体、Ox40、Ox40配体、CTACK、TECK、MEC，其功能片段及组合。
在一些优选的实施方案中，基因佐剂选自α-干扰素、γ-干扰素、IL-2、IL-12，其功能片段及组合。
其他佐剂的实例包括但不限于使用DNA包被或RNA包被的金珠的粒子轰击；多核苷酸疫苗与表达细胞因子、趋化因子或共刺激分子的质粒DNA的共同施用。
7.用途
本发明的另一个目的涉及本发明的修饰的VSV-G、多核苷酸、载体、组合物、细胞或疫苗，其用于预防或治疗疾病或病况。
在一个实施方案中，本发明的修饰的VSV-G、多核苷酸、载体、组合物、细胞或疫苗用于预防或治疗癌症或感染性疾病。
在一个具体实施方案中，本发明的修饰的VSV-G、多核苷酸、载体、组合物、细胞或疫苗用于在受试者中提供肿瘤生长的长期抑制。
根据本发明的一个实施方案，用本发明的多核苷酸转染的树突细胞用于体外激活T细胞。T细胞或T细胞亚群可以从各种淋巴组织中获得。此类组织的实例包括但不限于脾、淋巴结和外周血。
细胞可以与转染的树突细胞共培养作为混合T细胞群或纯化的T细胞亚群的。例如，可能需要培养用抗原转染的树突细胞与纯化的CD8+T细胞，因为早期消除CD4+T细胞可以防止CD8+和CD4+T细胞的混合培养物中CD4+细胞的过度生长。T细胞纯化可以通过阳性或阴性选择来实现，包括但不限于使用针对CD2、CD3、CD4、CD5和CD8的抗体。另一方面，可能希望使用CD4+和CD8+T细胞的混合群以引发包含细胞毒和Th免疫应答的特异性应答。
在一个实施方案中，在体外活化后，可以足以诱导或增强针对由本发明的树突细胞表达的所选抗原的免疫应答的剂量将T细胞施用于受试者。
8.施用/剂量
在一个实施方案中，本发明的组合物或疫苗离体或体内施用。
离体施用是指在受试者之外进行部分调节步骤，例如将本发明的组合物施用于细胞群，优选树突细胞，所述细胞群是在将修饰的VSV-G、多核苷酸或疫苗加载到细胞的条件下从受试者中取出的，并将细胞返回至受试者。
在一个实施方案中，本发明的组合物或疫苗可以通过任何合适的施用方式施用于受试者或返回至受试者。
在一个实施方案中，施用是全身、粘膜和/或临近靶位的位置(例如肿瘤附近)。
根据待预防或治疗的病况的类型、使用的抗原和/或靶细胞群或组织，优选的施用途径对于本领域技术人员而言是明显的。
优选的施用方法包括但不限于电穿孔或声孔效应。通过电穿孔施用涉及施加脉冲电场以在细胞膜中产生瞬时孔而不会对细胞造成永久性损伤。通过声孔效应施用涉及施加脉冲超声频率以在细胞膜中产生瞬时孔而不会对细胞造成永久性损伤。因此，它允许引入外源分子。通过调节电脉冲和/或超声频率，核酸分子可以穿过在操作期间产生的细胞中的通道或孔。
其他优选的施用方法包括但不限于静脉内施用、腹膜内施用、肌肉内施用、结内(intranodal)施用、冠状动脉内施用、动脉内施用(例如，进入颈动脉)、皮下施用、皮内施用、透皮递送、瘤内施用、瘤周施用、气管内施用、皮下施用、关节内施用、脑室内施用、吸入(例如，气雾剂)、颅内、脊柱内、眼内、经耳、鼻内、经口、肺部施用、导管渗透和直接注射到组织中。在一些实施方案中，施用可以是两个或更多个各种施用途径的组合。
特别优选的施用途径包括但不限于电穿孔、声孔效应、静脉内、腹膜内、皮下、瘤内、瘤周、皮内、结内、肌肉内、透皮、吸入、鼻内、经口、眼内、关节内、颅内和脊柱内。
肠胃外递送包括但不限于电穿孔、声孔效应、瘤内、瘤周、皮内、肌肉内、腹膜内、胸膜内、肺内、静脉内、皮下、心房导管和静脉(venal)导管路径。
耳部递送包括但不限于滴耳液，鼻内递送可包括滴鼻剂或鼻内注射，眼内递送可包括滴眼剂。
气雾剂(吸入)递送也可以使用本领域的标准方法进行(参见，例如，Stribling等,1992.Proc.Natl.Acad.Sci.USA.189:11277-11281)。例如，在一个实施方案中，可以使用合适的吸入装置或喷雾器将本发明的组合物或疫苗配制成适于雾化递送的组合物。
经口递送包括但不限于可以通过口施用的固体和液体，并且可用于粘膜免疫的发展，并且因为包含酵母载体的组合物可以容易地制备用于经口递送，例如，作为片剂或胶囊，以及配制成食物和饮料产品。
调节粘膜免疫的其他施用途径可用于治疗病毒感染、上皮癌、免疫抑制疾病和影响上皮区域的其他疾病。这些途径包括支气管、皮内、肌肉内、鼻内、其他吸入、直肠、皮下、局部(topical)、透皮、阴道和尿道途径。
在一个实施方案中，组合物或疫苗可通过肌肉内注射、皮内注射、基因枪、电穿孔或生物喷射器(biojector)施用给受试者。在更优选的实施方案中，组合物或疫苗通过电穿孔施用，优选通过肌肉内或皮内电穿孔。
电穿孔使用脉冲电流来在细胞膜中的开孔(一个称为透化作用的过程)并且使注射的多核苷酸被位于组织中的细胞和免疫细胞吸收。
在一个实施方案中，将多核苷酸配制为脂质复合物(阳离子脂质体-DNA复合物)、聚合物复合物(阳离子聚合物-DNA复合物)或蛋白-DNA。复杂。
在一个实施方案中，本发明的组合物或疫苗在症状出现之前施用，即本发明的组合物或疫苗被预防性施用。
在一个实施方案中，本发明的组合物或疫苗在症状出现后施用，即本发明的组合物或疫苗被治疗性施用。
根据本发明，有效的施用方案(即，以有效方式施用组合物或疫苗)包含合适的剂量参数和施用模式，其导致在患有疾病或病况或处于感染疾病或病况的风险中的受试者中引起免疫应答，优选使受试者免于疾病。
可以使用本领域标准方法针对特定疾病确定有效剂量参数。这些方法包括但不限于确定存活率、副作用(即毒性)和疾病的进展或消退。
特别地，当治疗癌症时，本发明的治疗组合物的剂量参数的有效性可以通过评估应答率来确定。这样的应答率是指在患者群体中以部分或完全缓解应答的治疗患者的百分比。可以通过例如测量肿瘤大小或显微镜检查组织样品中癌细胞的存在来确定缓解。
根据本发明，合适的单剂量大小是在合适的时间段内施用一次或多次时能够在受试者中引发抗原特异性免疫应答的剂量。剂量可根据所治疗的疾病或病况而变化。例如，在癌症的治疗中，治疗有效量可取决于所治疗的癌症是否为原发性肿瘤或转移性癌症形式。基于受试者的大小和施用途径，本领域技术人员可以容易地确定用于施用的预防或治疗有效量。
在一个实施方案中，本发明组合物或疫苗的预防或治疗有效量是施用组合物或疫苗约0.5pg至约5mg/千克受试者体重。在优选的实施方案中，本发明组合物或疫苗的预防或治疗有效量为约0.1μg至约1mg/千克受试者体重，优选约1μg至约100μg/kg受试者体重，优选约10μg至约75μg/kg受试者体重，优选约50μg/kg受试者体重。
当将T细胞或树突细胞施用于受试者时，可以肠胃外施用(包括例如静脉内、腹膜内、肌肉内、皮内和皮下施用)细胞(有或没有佐剂)。或者，可以通过直接注射到肿瘤或感染的组织中而局部施用细胞。
佐剂包括任何已知的药学上可接受的载体。用作药物载体的肠胃外媒介体包括但不限于氯化钠溶液、林格氏葡萄糖、右旋糖和氯化钠，以及乳酸林格氏溶液。可根据需要加入其他佐剂，例如抗微生物剂。
例如，可以通过静脉内输注施用T细胞，剂量为约108至109个细胞/m2体表面积(参见，例如，Ridell等，1992.Science.257:238-241)。可以以期望的间隔重复输注，例如，每月一次。在T细胞输注期间和之后监测接受者是否有任何不良反应的证据。
根据优选的实施方案，T细胞获自自其获得树突细胞的同一受试者。
根据另一个实施方案，T细胞获自受试者，并且用于刺激T细胞的树突细胞获自HLA匹配的健康供体(例如，兄弟姐妹)，或反之亦然。
根据另一个实施方案，T细胞和树突细胞均获自HLA匹配的健康供体。该实施方案可能是特别有利的，例如，当受试者是已经用放射和/或化学治疗剂治疗并且可能不能提供充足或有效的树突细胞或T细胞的晚期癌症患者时。
根据本发明的另一个实施方案，培养从受试者分离的树突细胞，体外转染并施用回受试者以刺激免疫应答，包括T细胞活化。如此，树突细胞构成疫苗和/或免疫治疗剂。
例如，通过静脉内输注，以例如约105至108个细胞的剂量施用呈递抗原的树突细胞。根据一个实施方案，呈递抗原的树突细胞以每次施用约0.5×106至约40×107个树突细胞的剂量施用，优选每次施用约1×106至约20×107个树突细胞，更优选每次施用约10×106至约1×107个树突细胞。
在一个实施方案中，可以基于受试者的免疫应答以期望的间隔重复输注。
当本发明的疫苗用于初免-加强免疫策略时，优选在针对肽(优选抗原)的免疫应答减弱或在需要针对抗特定肽优选抗原提供免疫应答或诱导记忆应答时，施用疫苗的“加强剂”。加强剂可在初始施用后约1周至数年内施用。在一个实施方案中，施用方案是在约1个月至约6个月的时间段内，施用约1至约4次的每千克受试者体重约0.5pg至约5mg的疫苗。
对于本领域技术人员显而易见的是，施用于受试者的剂量的数量取决于疾病的程度和所述受试者对治疗的反应。例如，大肿瘤可能需要比较小肿瘤更多的剂量，并且慢性疾病可能需要比急性疾病更多的剂量。然而，在一些情况下，如果具有大肿瘤的受试者比具有较小肿瘤的受试者对组合物或疫苗更有利地反应，则具有大肿瘤的受试者可能需要比具有较小肿瘤的患者少的剂量。因此，适当数量的剂量包括治疗给定疾病所需的任何数量，这在本发明的范围内。
9.疾病
9.1.癌症
在一个实施方案中，可以用本发明的修饰的VSV-G、多核苷酸、载体、组合物、细胞或疫苗预防或治疗的疾病或病况是癌症。
如本文所用，术语“癌症”包括但不限于实体瘤和血源性肿瘤。术语癌症包括皮肤、组织、器官、骨、软骨、血液和血管的疾病。
在一个实施方案中，癌症是原发性癌症。在另一个实施方案中，癌症是转移性癌症。转移性癌症是从其原发起源扩散到身体的另一部分的癌症，也称为“晚期癌症”(latestage cancer，advanced stage cancer)。在一些实施方案中，晚期癌症包括3期和4期癌症。癌症根据其生长和在身体传播的程度而分为几个阶段；阶段对应于严重性。确定给定癌症的阶段有助于医生提出治疗建议，形成对患者会发生什么(预后)的可能结果的情景，并与其他医生进行有效沟通。
癌症的实例包括但不限于黑色素瘤、鳞状细胞癌、乳腺癌、头颈癌、甲状腺癌、软组织肉瘤、骨肉瘤、睾丸癌、前列腺癌、卵巢癌、膀胱癌、皮肤癌癌症、脑癌、血管肉瘤、血管内皮肉瘤、肥大细胞瘤、肝癌、肺癌、胰腺癌、胃肠癌、肾细胞癌、造血瘤及其转移性癌症。
在具体实施方案中，癌症选自包含下述癌或由其组成的组的癌症：黑色素瘤、前列腺癌、卵巢癌、脑癌、肺癌和其他癌症。
优选地，肿瘤抗原在患有癌症的受试者(即动物或人)的组织中的表达产生选自下述的结果：癌症的缓解、与癌症相关的肿瘤的减少、与癌症相关的肿瘤的消除、预防转移性癌症、预防癌症和刺激针对癌症的效应细胞免疫。
9.2.感染性疾病
在一个实施方案中，可以用本发明的修饰的VSV-G、多核苷酸、载体、组合物、细胞或疫苗预防或治疗的疾病或病况是感染性疾病。
在一个实施方案中，感染性疾病选自病毒、细菌、真菌和寄生虫感染。
感染性病毒的实例包括但不限于逆转录病毒科(例如，人免疫缺陷病毒，例如HIV-1，也称为HTLV-III、LAV或HTLV-III/LAV或HIV-III；和其他分离株，如HIV-LP)；细小RNA病毒(Picornaviridae)(例如脊髓灰质炎病毒，甲型肝炎病毒；肠道病毒，人类柯萨奇病毒，鼻病毒，埃可病毒)；杯状病毒(Calciviridae)(例如引起胃肠炎的毒株)；披膜病毒(Togaviridae)(例如，马脑炎病毒，风疹病毒)；黄病毒(Flaviridae)(例如，登革热病毒，脑炎病毒，黄热病病毒)；冠状病毒(Coronaviridae)(例如冠状病毒)；弹状病毒(Rhabdoviridae)(例如，水疱性口炎病毒，狂犬病病毒)；线状病毒(Filoviridae)(例如，埃博拉病毒)；副粘病毒(Paramyxoviridae)(例如，副流感病毒，腮腺炎病毒，麻疹病毒，呼吸道合胞病毒)；正粘病毒(Orthomyxoviridae)(例如，流感病毒)；布尼亚病毒(Bungaviridae)(例如汉坦病毒，布尼亚病毒，白蛉病毒和纳伊罗病毒)；沙粒病毒(Arenaviridae)(出血热病毒)；呼肠孤病毒(Reoviridae)(例如，呼肠孤病毒，环状病毒和轮状病毒)；双RNA病毒(Birnaviridae)；嗜肝DNA病毒(Hepadnaviridae)(乙型肝炎病毒)；细小病毒(Parvoviridae)(细小病毒)；乳多空病毒(Papovaviridae)(乳头瘤病毒，多瘤病毒)；腺病毒(Adenoviridae)(大多数腺病毒)；疱疹病毒(Herperviridae)(单纯疱疹病毒(HSV)1和2，水痘带状疱疹病毒，巨细胞病毒(CMV)，疱疹病毒)；痘病毒(Poxviridae)(天花病毒，痘苗病毒，痘病毒)；和虹彩病毒(Iridoviridae)(例如，非洲猪瘟病毒)；和未分类的病毒(例如，海绵状脑病的病原体，丁型肝炎病原体(被认为是乙型肝炎病毒的缺损随体)、非甲非乙型肝炎的病原体(1类-内部传播；2类-肠胃外传播(即丙型肝炎)；诺沃克因子和相关病毒，以及星状病毒)。
感染性细菌的实例包括但不限于幽门螺杆菌(Helicobacter pyloris)、布氏疏螺旋体(Boreliai burgdorferi)、嗜肺军团菌(Legionella pneumophilia)、分枝杆菌(Mycobacteria sps)(例如结核分枝杆菌(M.tuberculosis)、鸟分枝杆菌(M.avium)、胞内分枝杆菌(M.Intracellulare)、堪萨斯分枝杆菌(M.kansaii)、戈登分枝杆菌(Mgordonae))、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、淋病奈瑟球菌(Neisseriagonorrhoeae)、脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis)、单核细胞增多性李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)、化脓性链球菌(Streptococcus pyogenes)(A组链球菌)、无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)(B组链球菌)、链球菌属(Streptococcus)(草绿色组)、粪链球菌(Streptococcus faecalis)、牛链球菌(Streptococcus bovis)、链球菌(厌氧属)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)、病原性弯曲杆菌属(Campylobactersp.)、肠球菌属(Enterococcus sp.)、流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)、炭疽芽孢杆菌(Bacillus antracis)、白喉棒状杆菌(corynebacterium diphtheriae)、棒状杆菌属(corynebacterium sp.)、红斑丹毒丝菌属(Erysipelothrix rhusiopathiae)、产气荚膜梭菌(Clostridium perfringers)、破伤风梭菌(Clostridium tetani)、产气肠杆菌(Enterobacter erogenes)、肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneuomiae)、多杀巴斯德菌(Pasturella multicoda)、拟杆菌属(Bacteroides sp.)、具核梭杆菌(Fusobacteriumnucleatum)、念珠状链杆菌(Sreptobacillus moniliformis)、梅毒螺旋菌(Treponemapallidium)、细弱密螺旋菌(Treponema pertenue)、钩端螺旋体(Leptospira)和以色列放线菌(Actinomeyces israelli)。
感染性真菌的实例包括但不限于新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)、荚膜组织胞浆菌(Histoplasma capsulatum)、粗球孢子菌(Coccidioides immitis)、皮炎芽酵母(Blastomyces dermatitidis)、沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis)、白色念珠菌(Candida albicans)。其他感染性生物(即原生生物)包括但不限于恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)和鼠弓形虫(Toxoplasma gondii)。
10.受试者
在一个实施方案中，受试者易患有或怀疑患有疾病或病况，优选癌症或感染性疾病。
在一个实施方案中，受试者处于发展疾病或病况，优选癌症或感染性疾病的风险中。
发展癌症的风险的实例包括但不限于年龄、酒精、暴露于致癌物质、慢性炎症、饮食、激素、家族性癌症易感性、遗传性癌症倾向、免疫抑制、感染剂、肥胖、暴露于辐射、暴露于阳光、烟草等。
发展感染性疾病的风险的实例包括但不限于暴露于细菌、病毒、真菌和寄生虫(例如通过间接接触、昆虫叮咬或食物污染)；患有某些类型的癌症或HIV；服用类固醇；植入的医疗器械；营养不良；年龄很大等。
在另一个实施方案中，受试者患有疾病或病况，优选癌症或感染性疾病。
在一个实施方案中，受试者先前未用针对所述疾病或病况的另一种治疗进行治疗。
在另一个实施方案中，受试者先前接受了针对所述疾病或病况的一种、两种或更多种其他治疗。在一个实施方案中，受试者先前接受了针对所述疾病或病况的一种或多种其他治疗，但是对这些治疗没有反应或没有充分响应，这意味着这些治疗诱导的治疗益处没有或太低。
在一个实施方案中，受试者是动物，优选哺乳动物。
在进一步的实施方案中，所述哺乳动物是家畜。如本文所用，术语“家畜”是指驯养的各种动物中的任何一种，以便在驯服的(与野生的相反)条件下生存和繁殖。家畜包括但不限于牛(包括奶牛)、马、猪、绵羊、山羊、狗、猫和任何其他等待接受或正在接受医疗护理的或过去是/是/将是医疗程序的对象，或监测疾病发展的哺乳动物。
在另一个实施方案中，所述哺乳动物是灵长类动物。如本文所用，术语“灵长类动物”包括非人灵长类动物，例如狐猴(lemurs)、婴猴(galagos)、懒猴(lorisids)、眼镜猴(tarsiers)、猿(monkeys)、类人猿(apes)；和人类灵长类动物，即人类。
在一个实施方案中，本发明的受试者是年轻的。如本文所用，术语“年轻的”是指如果受试者是人，则受试者最多20岁，最多15或10岁；如果受试者是非人类动物，则具有根据物种而言相当的年龄。
在一个实施方案中，受试者是儿童。如本文所用，术语“儿童”是指在出生和青春期之间的人类(人)。“青春期”是指由于激素变化，人的性和身体特征使人成熟的时间。在特定实施例中，本发明的儿童被认为是至多14年(包括14岁)的人。
在一个实施方案中，受试者是雄性。在另一个实施方案中，受试者是雌性。在一个实施方案中，受试者是男性。在另一个实施方案中，受试者是女性。
11.方法
本发明的另一个目的是预防和/或治疗疾病或病况的方法，包括将本发明的修饰的VSV-G、多核苷酸、载体、组合物、细胞或疫苗施用给有需要的受试者。
在具体实施方案中，本发明的方法用于预防和/或治疗有此需要的受试者的癌症，包括向所述受试者施用本发明的修饰的VSV-G、多核苷酸、载体、组合物、细胞或疫苗。
在另一个具体实施方案中，本发明的方法用于预防和/或治疗有此需要的受试者的感染性疾病，包括向所述受试者施用本发明的修饰的VSV-G、多核苷酸、载体、组合物、细胞或疫苗。
在一个实施方案中，该方法包括在症状出现之前施用本发明的修饰的VSV-G、多核苷酸、载体、组合物、细胞或疫苗。根据该实施方案，该方法可以是预防性方法。
在另一个实施方案中，该方法包括在出现第一症状后施用本发明的修饰的VSV-G、多核苷酸、载体、组合物、细胞或疫苗。根据该实施方案，该方法可以是治疗性方法。
在一个实施方案中，本发明的方法与其他预防和/或治疗方法组合以增强该方法的效力。例如，在癌症的治疗中，本发明的修饰的VSV-G、多核苷酸、载体、组合物、细胞或疫苗可在从受试者手术切除肿瘤后施用。
在另一个实施方案中，本发明的修饰的VSV-G、多核苷酸、载体、组合物、细胞或疫苗可以与另一种治疗分子组合施用，例如化学治疗剂、抗血管生成剂、检查点阻断抗体或其他减少免疫抑制的分子；或与其他抗肿瘤治疗相结合，如放射治疗、激素治疗、靶向治疗或免疫治疗。
在具体实施方案中，本发明的修饰的VSV-G、多核苷酸、载体、组合物、细胞或疫苗与抗体组合施用。可以共同施用的抗体的实例包括但不限于抗PD-1抗体(例如，纳武单抗、pidilizumab和MK-3475)，抗PD-L1抗体(例如，BMS-936559、MEDI4736和MPDL33280A)，抗-CTLA4抗体(例如，依匹单抗和替西木单抗)，抗-OX40抗体，抗-4-1BB抗体，抗-CD47抗体，抗KIR抗体，抗-CD40抗体，抗-LAG-3抗体及其组合。
在具体实施方案中，本发明的修饰的VSV-G、多核苷酸、载体、组合物、细胞或疫苗与刺激因子组合施用。可以共同施用的刺激因子的实例包括但不限于粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)(例如，沙格司亭或莫拉司亭)。
本发明的另一个目的是用于在受试者中诱导保护性免疫应答的方法，包括向有此需要的受试者施用本发明的修饰的VSV-G、多核苷酸、载体、组合物、细胞或疫苗。
在一个实施方案中，本发明的方法用于在受试者中诱导针对癌症的保护性免疫应答。在另一个实施方案中，本发明的方法用于在受试者中诱导针对病原体的保护性免疫应答。
11.1.个性化治疗
本发明还涉及用于治疗有此需要的受试者(即，人类或非人动物)中的疾病或病况，优选癌症的个性化方法，包括施用如上所述的修饰的VSV-G、多核苷酸、载体、细胞、组合物或疫苗。
在一个实施方案中，用于治疗有此需要的受试者的癌症的个性化方法包括以下步骤：
a)提供来自受试者的肿瘤样本；
b)鉴定至少一个新抗原；
c)制备包含插入在VSV-G中的至少一个新抗原的组合物；和
d)将组合物施用给受试者。
在一个实施方案中，用于治疗有此需要的受试者的癌症的个性化方法包括以下步骤：
a)提供来自受试者的肿瘤样本；
b)鉴定至少一个新抗原；
c)制备包含编码修饰的VSV-G的多核苷酸的组合物，其中插入有编码至少一个新抗原的多核苷酸；和
d)将组合物施用给受试者。
可利用任何细胞类型或组织来获得核酸样品以用于本文所述的测序方法。在优选的实施方案中，DNA或RNA样品获自来自受试者的肿瘤样品或体液，例如通过已知技术(例如静脉穿刺)获得的血液、唾液、汗液、尿液、粪便、呕吐物、母乳和精液。或者，可以对干燥样品(例如毛发或皮肤)进行核酸测试。
鉴定新抗原的方法是本领域技术人员公知的。例如，可以对来自受试者的肿瘤样品和正常组织进行全外显子组测序和RNA-Seq以鉴定表达的非同义体细胞突变。这些突变可以被传递至表位预测算法(诸如例如IEDB、EpiBot、EpiToolKit)中，以优先区分出候选抗原列表和/或可以表达为微基因，用于鉴定和扩增分离自同一受试者的血液或肿瘤的突变体新抗原特异性自体T细胞。然后可以将离体扩增的T细胞输注回癌症患者。
优选地，任何合适的合成测序平台可用于鉴定突变。目前可获得四种主要的合成测序平台：来自Roche/454Life Sciences的Genome Sequencers，来自Illumina/Solexa的HiSeq Analyzer，来自Applied BioSystems的SOLiD系统和来自Helicos Biosciences的Heliscope系统。Pacific Biosciences和VisiGen Biotechnologies也描述了合成测序平台。这些平台中的每一个都可用于本发明的方法中。
有多种方法可用于检测个体DNA或RNA中特定突变或等位基因的存在。
此类方法的实例包括但不限于动态等位基因特异性杂交(DASH)、微孔板阵列对角凝胶电泳(MADGE)、焦磷酸测序、寡核苷酸特异性连接、TaqMan系统以及各种DNA“芯片”技术，例如Affymetrix SNP芯片。这些方法需要扩增目标遗传区域，通常通过PCR。
消除对PCR的需要的实例包括基于通过侵入性切割产生小信号分子然后质谱法或固定化挂锁探针和滚环扩增的方法。
或者，可以确认通过I类MHC表位结合算法预测形成新抗原的表达突变，然后用于产生新抗原疫苗。
还可以使用MHC多聚体鉴定肿瘤特异性新抗原以鉴定新抗原特异性T细胞应答。例如，可以使用基于MHC四聚体的筛选技术进行患者样品中的新抗原特异性T细胞应答的高通量分析。
附图简要说明
图1是显示pTOP-OVA_CD8预防性肌肉内免疫接种对抗肿瘤活性的影响的一组图。(A)攻击后的肿瘤生长随访。用电子数字卡尺每周三次测量肿瘤大小。肿瘤体积计算为长度x宽度x高度(mm3)。(B)攻击后的生存率监测。星号表示与原初的小鼠相比的显著差异(**P<0.01)(n＝6)(存活曲线比较，Mantel-Cox检验)。
图2是显示pTOP-OVA_CD8治疗性瘤内免疫接种对抗肿瘤活性的影响的一组图。(A)攻击后肿瘤生长随访。用电子数字卡尺每周三次测量肿瘤大小。肿瘤体积计算为长度x宽度x高度(mm3)。(B)攻击后的生存率监测。星号表示与原初的小鼠相比的显著差异(***P<0.001)(n＝6)(存活曲线比较，Mantel-Cox检验)。
图3是显示在插入的表位序列周围添加限制性位点对预防性肌肉内免疫接种的影响的一组图。(A)攻击后的肿瘤生长随访。用电子数字卡尺每周三次测量肿瘤大小。肿瘤体积计算为长度x宽度x高度(mm3)。(B)攻击后的生存率监测。星号表示与原初的小鼠相比的显著差异(**P<0.01)(n＝6)(存活曲线比较，Mantel-Cox检验)。
图4是显示pTOP1-OVA_CD8和pTOP1-OVA_CD4预防性肌肉内免疫接种对抗肿瘤活性的影响的一组图。(A)攻击后肿瘤生长随访。用电子数字卡尺每周三次测量肿瘤大小。肿瘤体积计算为长度x宽度x高度(mm3)。(B)攻击后的生存率监测。星号表示与原初的小鼠相比的显著差异(***P<0.001)(n＝6)(存活曲线比较，Mantel-Cox检验)。
图5是显示pTOP1-OVA_CD8和pTOP1-OVA_CD4治疗性肌肉内免疫接种对抗肿瘤活性的影响的一组图。(A)和(C)攻击后的肿瘤生长随访。(B)和(D)攻击后的生存率监测。利用Mantel-Cox检验将生存曲线进行比较。星号表示与原初的小鼠相比的显著差异(***P<0.001)(分别地，n＝10和n＝6)。
图6是显示pTOP1-OVA_CD4与pTOP1-OVA_CD8共同递送对细胞毒T细胞应答的影响的图。比较OVA靶细胞杀伤的百分比，并且星号表示显著差异(***P<0.001)(n＝5)(学生T检验)。
图7是显示插入pTOP1中的II类MHC限制性表位的免疫接种的OTII增殖测定和效果的图。通过学生T检验比较细胞分裂的百分比(***p<0.001)(n＝5)。
图8是显示插入pTOP1中的I类MHC限制性表位的免疫接种的OTI增殖测定和效果的一组图。该图显示了细胞分裂的百分比。星号表示显著差异(***P<0.001)(n＝5)(学生T检验)。
图9是显示pTOP1肌肉内治疗性免疫接种与免疫检查点阻断(ICB)疗法组合的效果的一组图。(A)攻击后肿瘤生长随访。肿瘤体积计算为长度x宽度x高度(mm3)。(B)攻击后的生存率监测。星号表示曲线之间的显著差异(*P<0.05；***P<0.001)(n＝6)(存活曲线的比较，Mantel-Cox检验)。
图10是显示pTOP1-OVA_CD4(18)OVA_CD8(191)和pTOP1_gp100_CD4(18)_TRP2_CD8(191)治疗性肌肉内免疫接种对抗肿瘤活性的影响的一组图。(A)攻击后肿瘤生长随访。用电子数字卡尺每周三次测量肿瘤大小。肿瘤体积计算为长度x宽度x高度(mm3)。(B)攻击后的生存率监测。星号表示与原初的小鼠相比的显著差异(**P<0.01；***P<0.001)(n＝6)(存活曲线的比较，Mantel–Cox检验)。
图11是显示pTOP1-PADRE(18)-P1A_CD8(191)预防性肌肉内免疫接种对抗肿瘤活性的影响的一组图。(A)攻击后的肿瘤生长随访。用电子数字卡尺每周三次测量肿瘤大小。肿瘤体积计算为长度x宽度x高度(mm3)。(B)攻击后的生存率监测。星号表示与原初的小鼠相比的显著差异(**P<0.01)(n＝6)(存活曲线比较，Mantel-Cox检验)。
图12是显示pTOP1-PADRE(18)_P1A_CD8(191)治疗性肌肉内免疫接种对抗肿瘤活性的影响的图。它表示攻击后的存活率监测。星号表示与原初的小鼠相比的显著差异(*P<0.05)(n＝6)(存活曲线比较，Mantel-Cox检验)。
图13是显示pTOP1-PADRE(18)_AH1A5_CD8(191)预防性肌肉内免疫接种对抗肿瘤活性的影响的一组图。(A)攻击后的肿瘤生长随访。用电子数字卡尺每周三次测量肿瘤大小。肿瘤体积计算为长度x宽度x高度(mm3)。(B)攻击后的生存率监测。星号表示与原初的小鼠相比的显著差异(***P<0.001)(n＝6)(存活曲线比较，Mantel-Cox检验)。
图14是显示pTOP1-PADRE(18)_TRP2_CD8(191)预防性肌肉内免疫接种对抗肿瘤活性的影响的一组图。(A)攻击后的肿瘤生长随访。用电子数字卡尺每周三次测量肿瘤大小。肿瘤体积计算为长度x宽度x高度(mm3)。(B)攻击后的生存率监测。星号表示与原初的小鼠相比的显著差异(***P<0.001)(n＝6)(存活曲线比较，Mantel-Cox检验)。
图15是显示pTOP1-gp100_CD4(18)OVA_CD8(191)和pTOP1_gp100_LP(18)_OVA_CD8(19l)治疗性肌肉内免疫接种对其抗肿瘤活性的影响的图。它表明了攻击后的生存率监测。星号表示与原初的小鼠相比的显著差异(*P<0.05；**P<0.01)(n＝6)(存活曲线比较，Mantel-Cox检验)。
实施例
通过以下实施例进一步说明本发明。
材料和方法
材料
质粒
使用GeneOptimizer设计VSV-G(pTOP)、VSV-G-OVA_CD8(pTOP-OVA_CD8)和VSV-G-RS(具有限制性位点，pTOP1)的密码子优化的基因序列，并通过(Thermo FisherScientific，Waltham，MA，US)的标准基因合成获得。使用粘性末端克隆将这些序列亚克隆到pVAX2载体中。pVAX2载体由pVAX1质粒(Invitrogen，Carlsbad，CA)组成，其中启动子被pCMVβ质粒启动子(Clontech，Palo Alto，CA)取代。根据制造商的方案，使用EndoFreePlasmid Giga Kit(Qiagen，Venlo，荷兰)制备质粒。在杜尔贝科氏磷酸盐缓冲盐水(1x)(PBS)(Life Technologies，Carlsbad，CA，US)中进行质粒稀释。通过光密度比(260nm/280nm)和0.5％琼脂糖凝胶电泳评估纯化质粒的质量。通过260nm处的光密度测定DNA浓度。将质粒储存在-20℃。
克隆到pVAX2中的VSV-G序列
-印第安纳型水泡性口炎病毒糖蛋白G(VSV-G)(SEQ ID NO：1，由SEQ ID NO：10编码)。
质粒命名法：pVAX2-VSVG(pTOP)。
MKCLLYLAFLFIGVNCKFTIVFPHNQKGNWKNVPSNYHYCPSSSDLNWHNDLIGTAIQVKMPKSHKAIQADGWMCHASKWVTTCDFRWYGPKYITQSIRSFTPSVEQCKESIEQTKQGTWLNPGFPPQSCGYATVTDAEAVIVQVTPHHVLVDEYTGEWVDSQFINGKCSNYICPTVHNSTTWHSDYKVKGLCDSNLISMDITFFSEDGELSSLGKEGTGFRSNYFAYETGGKACKMQYCKHWGVRLPSGVWFEMADKDLFAAARFPECPEGSSISAPSQTSVDVSLIQDVERILDYSLCQETWSKIRAGLPISPVDLSYLAPKNPGTGPAFTIINGTLKYFETRYIRVDIAAPILSRMVGMISGTTTERELWDDWAPYEDVEIGPNGVLRTSSGYKFPLYMIGHGMLDSDLHLSSKAQVFEHPHIQDAASQLPDDESLFFGDTGLSKNPIELVEGWFSSWKSSIASFFFIIGLIIGLFLVLRVGIHLCIKLKHTKKRQIYTDIEMNRLGK。
-在位置191含有SIINFEKL序列(OVA_CD8，SEQ ID NO：11)的VSV-G(SEQ ID NO：1)(SEQ ID NO：8)。
质粒命名法：pVAX2-VSVG-OVA_CD8(pTOP-OVA_CD8)。
(粗体下划线是OVA_CD8序列，SEQ ID NO：11)。
-在位置191处含有限制性位点(RS)的VSV-G(SEQ ID NO：1)(SEQ ID NO：9)。
质粒命名法：pVAX2-VSVG-RS(pTOP1)。
(粗体下划线是SpeI/EcoRI限制性位点)。
在pTOP1中插入肽
为了将表位在VSV-G(SEQ ID NO：1)的位置191插入pTOP1载体中，使用粘性末端克隆。使用SpeI和EcoEI打开pVAX2-VSVG-RS，并且引入两个互补且重叠的磷酸化寡核苷酸。通过改变从Eurogentec(Seraing，比利时)或IDT-DNA(Leuven，比利时)订购的寡核苷酸的序列获得多种质粒。为了pTOP1位置18的肽插入，根据制造商说明书使用具有gBlocks基因片段的Gibson Assembly Cloning Kit(New England Bio Labs Inc.)。添加HindIII限制性位点以允许在位置18处容易地修饰肽。然后如上所述纯化、表征和储存质粒。
表3-通过在SEQ ID NO：1的位置191处的粘性末端克隆插入pTOP-1中的肽。描述了肽序列、名称和功能。
表4-通过gBlocks克隆在SEQ ID NO：1的位置18处插入pTOP1中的肽。描述了肽序列、名称和功能。
构建物列表
表5-本发明中使用的嵌合VSV-G的列表。给出它们的氨基酸序列ID和核酸序列ID。
细胞培养
B16F10-OVA是稳定表达卵清蛋白的来自C57BL/6小鼠的黑素瘤细胞系，其在补充有GlutaMAX(10％FBS、100μg/ml链霉素和100U/mL青霉素)的MEM培养基(在LifeTechnologies，Carlsbad，CA，US)中培养。
将来自C57BL/6小鼠的黑素瘤细胞系B16F10在补充有GlutaMAX(10％FBS、100μg/ml链霉素和100U/mL青霉素)的MEM培养基(Life Technologies，Carlsbad，CA，US)中培养。
将来自BALB/C小鼠的结肠癌细胞系CT26在含有10％FBS、100μg/mL链霉素和100U/mL青霉素，并补充有L-谷氨酸和丙酮酸的DMEM(Life Technologies，Carlsbad，CA，US)中培养。
将来自DBA/2小鼠的肥大细胞瘤细胞系P815在含有10％FBS、100μg/ml链霉素和100U/mL青霉素的DMEM(Life Technologies，Carlsbad，CA，US)中培养。
动物
从Janvier Labs(Le Genest Saint Isle，FR)获得6至8周龄的C57BL/6、BALB/C和DBA/2雌性小鼠，并饲养在最小疾病设施中，随意获取食物和水。
对于肿瘤植入和电穿孔，通过腹膜内(ip)注射150μL的10mg/mL的氯胺酮和1mg/ml甲苯噻嗪的溶液麻醉小鼠。UniversitéCatholique de Louvain医学部动物护理和使用伦理委员会批准了我们的实验方案(UCL/MD/2011/007和UCL/MD/2016/001)。
方法
免疫接种
在使用啮齿动物剃刀(AgnTho's，瑞典)去除毛发后，将1μg或50μg的质粒稀释到30μl的PBS中，注射到左胫骨颅肌中。注射后立即将腿放置在4mm间隔的板电极(BTX Caliper Electrodes)间，且8个方波电脉冲(80V，20ms，2Hz)由Gemini System发生器(BTX；均来自VWR International，Leuven，比利时)递送。使用导电胶以确保与皮肤的电接触(Aquasonic 100；Parker Laboratories，Inc.，Fairfield，NJ，USA)。
对于预防性免疫接种实验，在初免后两周和四周类似地施用两次加强免疫(即第二次和第三次施用疫苗)。
对于治疗性免疫接种实验，在注射肿瘤细胞后两天开始治疗，并且每周递送两次加强免疫。
或者，当肿瘤达到30–50mm3之间的大小时，将质粒注射并电穿孔到肿瘤中。然后在两天后重复该处理。
对于OT-I和OT-II增殖研究，将质粒注入耳中并施加2mm间隔的电极以递送10个方波电脉冲(100V，20ms，1Hz)。
肿瘤植入
将稀释在100μL PBS中的1×105个B16F10-OVA或B16F10细胞皮下注射到每只C57BL/6的右胁腹中。
将稀释在100μL PBS中的1×106个CT26细胞皮下注射到每只BALB/C的右胁腹中。
将稀释在100μL PBS中的1×106个P815细胞皮下注射到每只DBA/2的右胁腹中。
在第一次质粒施用前两天或最后一次施用后两周分别植入肿瘤细胞，用于治疗性和预防性DNA免疫研究。用电子数字卡尺每周三次测量肿瘤大小。肿瘤体积计算为长度x宽度x高度(mm3)。当肿瘤体积达到1500mm3或当小鼠处于不良状态并且预计很快死亡时，处死小鼠。
施用免疫检查点阻断(ICB)抗体
对于ICB的施用，植入B16F10-OVA细胞后第3天、第6天和第9天通过腹膜内注射，小鼠接受200μl PBS中的100μg的InVivoMAb抗小鼠CTLA-4(CD152)克隆9D9和100μg的InVivoMAb抗小鼠PD-1(CD279)克隆29F.1A-12，二者均来自BioXcell(CT，US)。
OT-I和OT-II增殖
使用CD8+和CD4+T细胞分离试剂盒II小鼠(Miltenyi Biotec，荷兰)从转基因OT-I和OT-II小鼠的脾和淋巴结中分离T细胞。随后，通过将50×106个细胞/mL与5μM CFSE在37℃温育7分钟，用CFSE(羧基荧光素二乙酸酯琥珀酰亚胺酯；分子探针)标记T细胞。通过加入冰冷的PBS(Lonza，比利时)+10％血清来阻断反应。将2x106OT-I或OT-II细胞注射到C57BL/6小鼠的尾静脉中。2天后通过质粒注射和电穿孔处理它们。4天后处死小鼠并收集引流淋巴结用于单细胞悬液制备。在用水性存活死亡染料(aqua live dead)(Invitrogen，比利时)、CD19APC-Cy7、CD8PerCP(均来自BD Biosciences)、dextramer SIINFEKL H-2kb PE(Immudex，丹麦)染色后进行流式细胞术测量。
体内杀伤测定
来自原初的小鼠的脾细胞用SIINFEKL肽或无关肽(40μg于40ml PBS中)在37℃脉冲1小时。随后，洗涤这些脉冲的脾细胞并分别用高(5μM，hi)或低(0.5μM，低)CFSE浓度染色。将两个脾细胞群以1：1的比例混合，并在最后一次加强免疫后两周将107个脾细胞静脉内注射到免疫的小鼠中。转移后两天，分离宿主小鼠的脾脏，并在用α-F4/80(BDBiosciences，San Diego，CA，USA)染色后通过流式细胞术分析以排除自体荧光巨噬细胞。使用以下公式确定抗原特异性杀伤百分比：
实施例1：pTOP-OVA_CD8(191)预防性肌肉内免疫接种对抗肿瘤活性的影响
B16黑素瘤是源自C57BL/6小鼠的自发性黑素瘤。最常用的变体是B16F10，其具有高度侵袭性并且将从原发性皮下部位转移至肺部，并在静脉内(iv)注射后定植肺部。
用pTOP-OVA_CD8(191)质粒(1μg)以2周的间隔在一次初免和两次加强免疫的方案中免疫C57BL/6小鼠。最后一次免疫接种后两周，用B16F10-OVA细胞攻击它们。该B16F10-OVA细胞系是衍生自B16F10黑素瘤的稳定转染子，其稳定表达鸡卵白蛋白。
评估肿瘤生长和小鼠存活三个月。
接种B16F10-OVA细胞诱导了迅速生长的肿瘤并杀死原初的小鼠。然而，通过肌肉内电穿孔编码含有肿瘤模型CD8 T细胞表位的VSV-G的质粒的预防性免疫延缓了肿瘤生长并改善了小鼠存活(图1)。
实施例2：pTOP-OVA_CD8(191)治疗性瘤内免疫接种对抗肿瘤活性的影响
用B16F10-OVA细胞攻击C57BL/6小鼠。当肿瘤达到30-50mm3之间时，用pTOP-OVA_CD8(191)质粒、pTOP对照质粒(表达无插入肽的SEQ ID NO：1的VSV-G)或空的pVAX2(pEmpty)质粒(每个均为50μg)以2天的间隔免疫小鼠两次。
通过瘤内电穿孔编码含有肿瘤模型CD8 T细胞表位的VSV-G的质粒的治疗性免疫接种延缓了肿瘤生长(图2)。
实施例3：在插入的表位序列周围添加限制性位点对疫苗效力的影响
用pTOP-OVA_CD8(191)质粒或pTOP1–OVA_CD8(191)质粒(每种均为1μg)以2周间隔在一个初免和两次加强免疫的方案中免疫C57BL/6小鼠。最后一次接种后两周，用B16F10-OVA细胞攻击他们。评估肿瘤生长和小鼠存活。
SpeI和EcoRI限制性位点的添加在插入的表位周围引入氨基酸TS和EF。该结果显示在T细胞表位周围添加这些氨基酸没有改变疫苗效力(图3)。
实施例4：pTOP1-OVA_CD8(191)和pTOP1-OVA_CD4(191)预防性肌肉内免疫接种对抗肿瘤活性的影响
在VSV-G中插入CD8 T细胞表位是观察抗肿瘤效力所必需的。pTOP和pTOP1-OVA_CD4(191)递送后没有抗肿瘤效果。与单独的pTOP1-OVA_CD8(191)相比，通过肌肉内电穿孔分别含有OVA_CD8和OVA_CD4 T细胞表位的两种pTOP1质粒的预防性免疫接种改善了针对肿瘤攻击的保护作用。当辅助表位与I类MHC限制性表位共同递送时，肿瘤生长延缓和小鼠存活均得到改善(图4)。
实施例5：pTOP1-OVA_CD8(191)和pTOP1-OVA_CD4(191)治疗性肌肉内免疫接种对抗肿瘤活性的影响
用B16F10-OVA细胞攻击C57BL/6小鼠。两天后，用单独的1μg的pTOP1-OVA_CD8(191)或与1μg的pTOP1-OVA_CD4(191)质粒的组合以1周的间隔在一个初免和两次加强免疫的方案中免疫小鼠。评估肿瘤生长和小鼠存活。
通过肌肉内电穿孔分别含有CD8和CD4 T细胞表位的两种pTOP1质粒的治疗性免疫改善了针对肿瘤攻击的保护作用。已经进行了两个单独的实验。首先，显示用pTOP1–OVA_CD8(191)进行的治疗性免疫往往改善针对攻击的保护作用(但效果不显著)。其次，pTOP1-OVA_CD4(191)和pTOP1-OVA_CD8(191)的组合彻底改善了小鼠存活并延缓了肿瘤生长(图5)。
实施例6：pTOP1-OVA_CD4(191)与pTOP-OVA_CD8(191)共同递送对细胞毒T细胞应答的影响
用单独的1μg pTOP1-OVA_CD8(19l)质粒或与1μg pTOP1-OVA_CD4(19l)质粒的组合以2周的间隔在一个初始和两次加强免疫的方案中免疫C57BL/6小鼠。通过体内细胞毒性测定分析抗原特异性杀伤的百分比。用两个标记的脾细胞群过继性转移免疫接种的小鼠：MHC-I OVA肽脉冲的靶细胞和MHC-1无关肽脉冲的细胞。转移后两天，通过比较两个群体的相对减少来获得靶细胞的特异性杀伤。
体内杀伤测定证明，与单独的pTOP1-OVA_CD8(191)递送相比，pTOP1-OVA_CD8(191)和pTOP1–OVA_CD4(191)的共同递送改善了对疫苗抗原的细胞毒T细胞应答(图6)。
实施例7：OT-II增殖测定
已经使用OT-II细胞证实了用插入pTOP1中的II类MHC限制性表位免疫接种对CD4+T细胞应答的作用。从转基因OT-II小鼠的脾和淋巴结中分离T细胞，用CFSE标记并过继性转移至C57BL/6小鼠。两天后用1μg pTOP1-OVA_CD4(191)或1μg pTOP1-OVA_CD8(191)免疫小鼠。四天后处死小鼠并评估标记的T细胞增殖。
在VSV-G中插入II类MHC限制性表位诱导了CD4+T细胞应答，而I类MHC限制性表位不能诱导辅助应答(图7)。
实施例8：OT-I增殖测定
已经使用OT-I细胞证实了用插入pTOP1中的I类MHC限制性表位免疫接种对CD8+T细胞应答的作用。从转基因OT-I小鼠的脾和淋巴结中分离T细胞，用CFSE标记并过继性转移至受体C57BL/6小鼠。两天后通过电穿孔pTOP1-OVA_CD4(191)(1μg)或pTOP1-OVA_CD8(191)免疫接种小鼠。4天后处死小鼠并评估标记的T细胞增殖。
在VSV-G中插入I类MHC限制性表位诱导了CD8+T细胞应答，而II类MHC限制性表位不能诱导CD8+T细胞应答(图8)。
实施例9：pTOP1免疫接种与免疫检查点阻断(ICB)疗法组合的效果
用B16F10-OVA细胞攻击C57BL/6小鼠。两天后，以1周的间隔在一个初免和两次加强免疫的方案中免疫接种小鼠。在攻击后第3天、第6天和第9天，给予ICB治疗。小鼠接受了：
(1)pTOP1-OVA_CD8(191)(1μg)和pTOP1-OVA_CD4(191)(1μg)质粒二者；
(2)抗PD-1和抗CTLA-4抗体的混合物[ICB组]；或
(3)两种质粒(每种均为1μg)和抗体混合物的组合[组合组]。
在攻击后评估肿瘤生长和小鼠存活。
通过与免疫检查点阻断疗法组合，进一步增强了pTOP1的效力。这些结果证明，与单独的治疗相比，组合治疗具有协同作用。实际上，在组合治疗后观察到的存活、肿瘤生长和肿瘤体积优于单独治疗后获得的效果总和(图9)。
实施例10：pTOP1-OVA_CD4(18)_OVA_CD8(191)和pTOP1-gp100_CD4(18)_TRP2_CD8(191)治疗性肌肉内免疫对抗肿瘤活性的作用
用B16F10-OVA细胞攻击C57BL/6小鼠。两天后，用1μg的pTOP1-OVA_CD4(18)_OVA_CD8(191)质粒或1μg的pTOP1-gp100_CD4(18)_TRP2_CD8(191)质粒以1周的间隔在一次初免和两次加强免疫的方案中免疫小鼠。评估肿瘤生长和小鼠存活。
通过肌肉内电穿孔pTOP1-OVA_CD4(18)_OVA_CD8(191)质粒或pTOP1-gp100_CD4(18)_TRP2_CD8(191)的治疗性免疫接种能够显著延缓肿瘤生长。两种疫苗之间没有统计学差异(图10)。
实施例11：pTOP1-PADRE(18)_P1A_CD8(191)预防性肌肉内免疫接种对抗肿瘤活性的影响
用pTOP1-PADRE(18)_P1A_CD8(191)质粒(1μg)以2周间隔在一次初免和两次加强免疫的方案中免疫DBA/2小鼠。在最后一次免疫接种后两周，用P815细胞攻击他们。评估肿瘤生长和小鼠存活两个月。
P815细胞的接种诱导了快速生长的肿瘤并杀死了原初的小鼠。然而，通过肌肉内电穿孔编码VSV-G的质粒的预防性免疫接种延缓了肿瘤生长并改善了小鼠存活，该VSV-G含有肿瘤模型CD8 T细胞表位和通用抗原性CD4 T细胞表位(图11)。
实施例12：pTOP1-PADRF(18)_P1A_CD8(191)治疗性肌肉内免疫接种对抗肿瘤活性的影响
用P815细胞攻击DBA/2小鼠。两天后，用pTOP1-PADRE(18)_P1A_CD8(191)质粒(1μg)在一周和两周后在一次初免和两次加强免疫的方案中免疫小鼠。评估小鼠存活两个月。
通过肌肉内电穿孔pTOP1-PADRE(18)_P1A_CD8(191)质粒的治疗性免疫接种能够显著延缓肿瘤生长(图12)。
实施例13：pTOP1-PADRE(18)_AH1A5_CD8(191)预防性肌肉内免疫接种对抗肿瘤活性的影响
用pTOP1-PADRE(18)_AH1A5_CD8(19l)质粒(1μg)以2周的间隔在1次初免和2次加强免疫的方案中免疫BALB/C小鼠。最后一次免疫接种后两周，用CT26细胞攻击它们。评估肿瘤生长和小鼠存活两个月。
接种CT26细胞诱导快速生长的肿瘤并杀死原初的小鼠。然而，通过肌肉内电穿孔编码含有肿瘤模型CD8 T细胞表位和通用抗原性CD4 T细胞表位的VSV-G的质粒的预防性免疫延缓了肿瘤生长(图13)。
实施例14：pTOP1-PADRE(18)_TRP2_CD8(191)预防性肌肉内免疫接种对抗肿瘤活性的影响
用pTOP1-PADRE(18)_TRP2_CD8(191)质粒(1μg)以2周间隔在一次初免和两次加强免疫的方案中免疫BALB/C小鼠。在最后一次免疫接种后2周，用B16F10细胞攻击他们。评估肿瘤生长和小鼠存活两个月。
接种B16F10细胞诱导快速生长的肿瘤并杀死原初的小鼠。然而，通过肌肉内电穿孔编码含有肿瘤模型CD8 T细胞表位和通用抗原性CD4 T细胞表位的VSV-G的质粒的预防性免疫接种延缓了肿瘤生长并改善了小鼠存活(图14)。
实施例15：pTOP1-gp100_CD4(18)_OVA_CD8(191)和pTOP1-gp100_LP(18)_OVA_CD8(191)治疗性肌肉内免疫接种对抗肿瘤活性的影响
用B16F10-OVA细胞攻击C57BL/6小鼠。两天后，用1μg的pTOP1-gp100_CD4(18)_OVA_CD8(191)质粒或1μg的pTOPl-gp100_LP(18)_OVA_CD8(191)质粒以1周的间隔在一次初免和两次加强免疫的方案中免疫接种小鼠。评估肿瘤生长和小鼠存活。
通过肌肉内电穿孔pTOP1-gp100_CD4(18)_OVA_CD8(191)质粒或pTOP1-gp100_LP(18)OVA_CD8(191)的治疗性免疫接种能够显著延缓肿瘤生长。两种疫苗之间没有统计学差异(图15)。
序列表
<110> 鲁汶大学（UNIVERSITÉ CATHOLIQUE DE LOUVAIN）
G·范德莫伊伦（VANDERMEULEN Gaëlle）
L·兰布瑞希特（LAMBRICHT Laure）
V·普雷特（PRÉAT Véronique）
<120> 修饰的VSV-G及其疫苗
<130> CV - 674/PCT
<150> EP16188736.9
<151> 2016-09-14
<160> 148
<170> BiSSAP 1.3.6
<210> 1
<211> 511
<212> PRT
<213> 第安纳型水疱性口炎病毒(Vesicular stomatitis Indiana virus)
<220>
<223> VSIV-G
<400> 1
Met Lys Cys Leu Leu Tyr Leu Ala Phe Leu Phe Ile Gly Val Asn Cys
1 5 10 15
Lys Phe Thr Ile Val Phe Pro His Asn Gln Lys Gly Asn Trp Lys Asn
20 25 30
Val Pro Ser Asn Tyr His Tyr Cys Pro Ser Ser Ser Asp Leu Asn Trp
35 40 45
His Asn Asp Leu Ile Gly Thr Ala Ile Gln Val Lys Met Pro Lys Ser
50 55 60
His Lys Ala Ile Gln Ala Asp Gly Trp Met Cys His Ala Ser Lys Trp
65 70 75 80
Val Thr Thr Cys Asp Phe Arg Trp Tyr Gly Pro Lys Tyr Ile Thr Gln
85 90 95
Ser Ile Arg Ser Phe Thr Pro Ser Val Glu Gln Cys Lys Glu Ser Ile
100 105 110
Glu Gln Thr Lys Gln Gly Thr Trp Leu Asn Pro Gly Phe Pro Pro Gln
115 120 125
Ser Cys Gly Tyr Ala Thr Val Thr Asp Ala Glu Ala Val Ile Val Gln
130 135 140
Val Thr Pro His His Val Leu Val Asp Glu Tyr Thr Gly Glu Trp Val
145 150 155 160
Asp Ser Gln Phe Ile Asn Gly Lys Cys Ser Asn Tyr Ile Cys Pro Thr
165 170 175
Val His Asn Ser Thr Thr Trp His Ser Asp Tyr Lys Val Lys Gly Leu
180 185 190
Cys Asp Ser Asn Leu Ile Ser Met Asp Ile Thr Phe Phe Ser Glu Asp
195 200 205
Gly Glu Leu Ser Ser Leu Gly Lys Glu Gly Thr Gly Phe Arg Ser Asn
210 215 220
Tyr Phe Ala Tyr Glu Thr Gly Gly Lys Ala Cys Lys Met Gln Tyr Cys
225 230 235 240
Lys His Trp Gly Val Arg Leu Pro Ser Gly Val Trp Phe Glu Met Ala
245 250 255
Asp Lys Asp Leu Phe Ala Ala Ala Arg Phe Pro Glu Cys Pro Glu Gly
260 265 270
Ser Ser Ile Ser Ala Pro Ser Gln Thr Ser Val Asp Val Ser Leu Ile
275 280 285
Gln Asp Val Glu Arg Ile Leu Asp Tyr Ser Leu Cys Gln Glu Thr Trp
290 295 300
Ser Lys Ile Arg Ala Gly Leu Pro Ile Ser Pro Val Asp Leu Ser Tyr
305 310 315 320
Leu Ala Pro Lys Asn Pro Gly Thr Gly Pro Ala Phe Thr Ile Ile Asn
325 330 335
Gly Thr Leu Lys Tyr Phe Glu Thr Arg Tyr Ile Arg Val Asp Ile Ala
340 345 350
Ala Pro Ile Leu Ser Arg Met Val Gly Met Ile Ser Gly Thr Thr Thr
355 360 365
Glu Arg Glu Leu Trp Asp Asp Trp Ala Pro Tyr Glu Asp Val Glu Ile
370 375 380
Gly Pro Asn Gly Val Leu Arg Thr Ser Ser Gly Tyr Lys Phe Pro Leu
385 390 395 400
Tyr Met Ile Gly His Gly Met Leu Asp Ser Asp Leu His Leu Ser Ser
405 410 415
Lys Ala Gln Val Phe Glu His Pro His Ile Gln Asp Ala Ala Ser Gln
420 425 430
Leu Pro Asp Asp Glu Ser Leu Phe Phe Gly Asp Thr Gly Leu Ser Lys
435 440 445
Asn Pro Ile Glu Leu Val Glu Gly Trp Phe Ser Ser Trp Lys Ser Ser
450 455 460
Ile Ala Ser Phe Phe Phe Ile Ile Gly Leu Ile Ile Gly Leu Phe Leu
465 470 475 480
Val Leu Arg Val Gly Ile His Leu Cys Ile Lys Leu Lys His Thr Lys
485 490 495
Lys Arg Gln Ile Tyr Thr Asp Ile Glu Met Asn Arg Leu Gly Lys
500 505 510
<210> 2
<211> 517
<212> PRT
<213> 新泽西型水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis New Jersey virus)
<220>
<223> VSNJV-G
<400> 2
Met Leu Ser Tyr Leu Ile Phe Ala Leu Val Val Ser Pro Ile Leu Gly
1 5 10 15
Lys Ile Glu Ile Val Phe Pro Gln His Thr Thr Gly Asp Trp Lys Arg
20 25 30
Val Pro His Glu Tyr Asn Tyr Cys Pro Thr Ser Ala Asp Lys Asn Ser
35 40 45
His Gly Thr Gln Thr Gly Ile Pro Val Glu Leu Thr Met Pro Lys Gly
50 55 60
Leu Thr Thr His Gln Val Asp Gly Phe Met Cys His Ser Ala Leu Trp
65 70 75 80
Met Thr Thr Cys Asp Phe Arg Trp Tyr Gly Pro Lys Tyr Ile Thr His
85 90 95
Ser Ile His Asn Glu Glu Pro Thr Asp Tyr Gln Cys Leu Glu Ala Ile
100 105 110
Lys Ala Tyr Lys Asp Gly Val Ser Phe Asn Pro Gly Phe Pro Pro Gln
115 120 125
Ser Cys Gly Tyr Gly Thr Val Thr Asp Ala Glu Ala His Ile Val Thr
130 135 140
Val Thr Pro His Ser Val Lys Val Asp Glu Tyr Thr Gly Glu Trp Ile
145 150 155 160
Asp Pro His Phe Ile Gly Gly Arg Cys Lys Gly Gln Ile Cys Glu Thr
165 170 175
Val His Asn Ser Thr Lys Trp Phe Thr Ser Ser Asp Gly Glu Ser Val
180 185 190
Cys Ser Gln Leu Phe Thr Leu Val Gly Gly Thr Phe Phe Ser Asp Ser
195 200 205
Glu Glu Ile Thr Ser Met Gly Leu Pro Glu Thr Gly Ile Arg Ser Asn
210 215 220
Tyr Phe Pro Tyr Val Ser Thr Glu Gly Ile Cys Lys Met Pro Phe Cys
225 230 235 240
Arg Lys Pro Gly Tyr Lys Leu Lys Asn Asp Leu Trp Phe Gln Ile Thr
245 250 255
Asp Pro Asp Leu Asp Lys Thr Val Arg Asp Leu Pro His Ile Lys Asp
260 265 270
Cys Asp Leu Ser Ser Ser Ile Val Thr Pro Gly Glu His Ala Thr Asp
275 280 285
Ile Ser Leu Ile Ser Asp Val Glu Arg Ile Leu Asp Tyr Ala Leu Cys
290 295 300
Gln Asn Thr Trp Ser Lys Ile Glu Ala Gly Glu Pro Ile Thr Pro Val
305 310 315 320
Asp Leu Ser Tyr Leu Gly Pro Lys Asn Pro Gly Ala Gly Pro Val Phe
325 330 335
Thr Ile Ile Asn Gly Ser Leu His Tyr Phe Met Ser Lys Tyr Leu Arg
340 345 350
Val Glu Leu Glu Ser Pro Val Ile Pro Arg Met Glu Gly Lys Val Ala
355 360 365
Gly Thr Arg Ile Val Arg Gln Leu Trp Asp Gln Trp Phe Pro Phe Gly
370 375 380
Glu Val Glu Ile Gly Pro Asn Gly Val Leu Lys Thr Lys Gln Gly Tyr
385 390 395 400
Lys Phe Pro Leu His Ile Ile Gly Thr Gly Glu Val Asp Asn Asp Ile
405 410 415
Lys Met Glu Arg Ile Val Lys His Trp Glu His Pro His Ile Glu Ala
420 425 430
Ala Gln Thr Phe Leu Lys Lys Asp Asp Thr Glu Glu Val Leu Tyr Tyr
435 440 445
Gly Asp Thr Gly Val Ser Lys Asn Pro Val Glu Leu Val Glu Gly Trp
450 455 460
Phe Ser Gly Trp Arg Ser Ser Ile Met Gly Val Leu Ala Val Ile Ile
465 470 475 480
Gly Phe Val Ile Leu Ile Phe Leu Ile Arg Leu Ile Gly Val Leu Ser
485 490 495
Ser Leu Phe Arg Gln Lys Arg Arg Pro Ile Tyr Lys Ser Asp Val Glu
500 505 510
Met Ala His Phe Arg
515
<210> 3
<211> 530
<212> PRT
<213> 金迪普拉病毒（Chandipura virus）
<220>
<223> CHPV-G
<400> 3
Met Leu Ser Gln Val Thr Leu Gln Ala Phe Val Val Met Cys Leu Ile
1 5 10 15
Tyr Arg Ala Tyr Ser Ser Leu Ser Ile Ala Phe Pro Glu Ser Thr Lys
20 25 30
Leu Asp Trp Lys Pro Val Thr Lys Asn Thr Arg Tyr Cys Pro Met Gly
35 40 45
Gly Glu Trp Phe Leu Glu Pro Gly Leu Gln Glu Glu Ser Phe Leu Ser
50 55 60
Ser Thr Pro Ile Gly Ala Thr Pro Ser Lys Ser Asp Gly Phe Leu Cys
65 70 75 80
His Ala Ala Lys Trp Val Thr Thr Cys Asp Phe Arg Trp Tyr Gly Pro
85 90 95
Lys Tyr Ile Thr His Ser Ile His Asn Ile Lys Pro Thr Arg Ser Asp
100 105 110
Cys Asp Ser Ala Leu Ala Ser Tyr Lys Ser Gly Thr Leu Ile Asn Pro
115 120 125
Gly Phe Pro Pro Asp Ser Cys Gly Tyr Ala Ser Val Thr Asp Ser Glu
130 135 140
Phe Leu Val Ile Met Ile Thr Pro His His Val Gly Val Asp Asp Tyr
145 150 155 160
Arg Gly His Trp Val Asp Pro Leu Phe Val Gly Gly Glu Cys Asp Gln
165 170 175
Ser Tyr Cys Asp Thr Ile His Asn Ser Ser Val Trp Ile Pro Ala Asp
180 185 190
Thr Thr Lys Lys Asn Ile Cys Gly Gln Ser Phe Thr Pro Leu Thr Val
195 200 205
Thr Val Ala Tyr Asp Lys Thr Lys Asp Ile Ser Ala Gly Ala Leu Val
210 215 220
Phe Lys Ser Lys Tyr His Ser His Met Glu Gly Ala Arg Thr Cys Arg
225 230 235 240
Leu Thr Tyr Cys Gly Arg Thr Gly Ile Lys Phe Pro Asn Gly Glu Trp
245 250 255
Val Ser Leu Asp Ile Lys Thr Lys Ile Gln Asp Lys Gln Leu Leu Pro
260 265 270
Leu Phe Lys Glu Cys Pro Ala Gly Thr Glu Val Arg Ser Thr Leu Gln
275 280 285
Ser Asp Gly Ala Gln Val Leu Thr Ser Glu Ile Gln Arg Leu Leu Asp
290 295 300
Tyr Ser Leu Cys Gln Asn Thr Trp Glu Lys Val Asp Arg Lys Glu Pro
305 310 315 320
Leu Ser Pro Leu Asp Leu Ser Tyr Leu Ala Ser Lys Ser Pro Gly Lys
325 330 335
Gly Leu Ala Tyr Thr Val Ile Asn Gly Thr Leu Ser Phe Ala His Thr
340 345 350
Arg Tyr Val Arg Met Trp Ile Asp Gly Pro Val Leu Lys Glu Leu Lys
355 360 365
Gly Lys Arg Glu Ser Ala Ser Gly Ile Ala Ser Asp Ile Trp Thr Gln
370 375 380
Trp Phe Lys Tyr Gly Asp Met Glu Ile Gly Pro Asn Gly Leu Leu Lys
385 390 395 400
Thr Lys Ser Gly Tyr Lys Phe Pro Trp His Leu Ile Gly Met Gly Ile
405 410 415
Val Asp Asn Glu Leu His Glu Leu Ser Glu Ala Asn Pro Leu Asp His
420 425 430
Pro Gln Leu Pro His Ala Gln Ser Ile Ala Asp Asp Ser Glu Glu Ile
435 440 445
Phe Phe Gly Asp Thr Gly Val Ser Lys Asn Pro Val Glu Leu Val Thr
450 455 460
Gly Trp Phe Thr Ser Trp Lys Glu Ser Leu Ala Ala Gly Val Val Leu
465 470 475 480
Ile Leu Thr Val Val Leu Ile Tyr Gly Val Leu Arg Cys Phe Pro Val
485 490 495
Leu Cys Met Pro Cys Arg Lys Thr Lys Trp Lys Lys Glu Val Glu Arg
500 505 510
Ser Asp Ser Phe Glu Met Arg Ile Phe Lys Pro Asn Asn Met Arg Ala
515 520 525
Arg Val
530
<210> 4
<211> 512
<212> PRT
<213> 可卡耳病毒(Cocal virus)
<220>
<223> COCV-G
<400> 4
Met Asn Phe Leu Leu Leu Thr Phe Ile Val Leu Pro Leu Cys Ser His
1 5 10 15
Ala Lys Phe Ser Ile Val Phe Pro Gln Ser Gln Lys Gly Asn Trp Lys
20 25 30
Asn Val Pro Ser Ser Tyr His Tyr Cys Pro Ser Ser Ser Asp Gln Asn
35 40 45
Trp His Asn Asp Leu Leu Gly Ile Thr Met Lys Val Lys Met Pro Lys
50 55 60
Thr His Lys Ala Ile Gln Ala Asp Gly Trp Met Cys His Ala Ala Lys
65 70 75 80
Trp Ile Thr Thr Cys Asp Phe Arg Trp Tyr Gly Pro Lys Tyr Ile Thr
85 90 95
His Ser Ile His Ser Ile Gln Pro Thr Ser Glu Gln Cys Lys Glu Ser
100 105 110
Ile Lys Gln Thr Lys Gln Gly Thr Trp Met Ser Pro Gly Phe Pro Pro
115 120 125
Gln Asn Cys Gly Tyr Ala Thr Val Thr Asp Ser Val Ala Val Val Val
130 135 140
Gln Ala Thr Pro His His Val Leu Val Asp Glu Tyr Thr Gly Glu Trp
145 150 155 160
Ile Asp Ser Gln Phe Pro Asn Gly Lys Cys Glu Thr Glu Glu Cys Glu
165 170 175
Thr Val His Asn Ser Thr Val Trp Tyr Ser Asp Tyr Lys Val Thr Gly
180 185 190
Leu Cys Asp Ala Thr Leu Val Asp Thr Glu Ile Thr Phe Phe Ser Glu
195 200 205
Asp Gly Lys Lys Glu Ser Ile Gly Lys Pro Asn Thr Gly Tyr Arg Ser
210 215 220
Asn Tyr Phe Ala Tyr Glu Lys Gly Asp Lys Val Cys Lys Met Asn Tyr
225 230 235 240
Cys Lys His Ala Gly Val Arg Leu Pro Ser Gly Val Trp Phe Glu Phe
245 250 255
Val Asp Gln Asp Val Tyr Ala Ala Ala Lys Leu Pro Glu Cys Pro Val
260 265 270
Gly Ala Thr Ile Ser Ala Pro Thr Gln Thr Ser Val Asp Val Ser Leu
275 280 285
Ile Leu Asp Val Glu Arg Ile Leu Asp Tyr Ser Leu Cys Gln Glu Thr
290 295 300
Trp Ser Lys Ile Arg Ser Lys Gln Pro Val Ser Pro Val Asp Leu Ser
305 310 315 320
Tyr Leu Ala Pro Lys Asn Pro Gly Thr Gly Pro Ala Phe Thr Ile Ile
325 330 335
Asn Gly Thr Leu Lys Tyr Phe Glu Thr Arg Tyr Ile Arg Ile Asp Ile
340 345 350
Asp Asn Pro Ile Ile Ser Lys Met Val Gly Lys Ile Ser Gly Ser Gln
355 360 365
Thr Glu Arg Glu Leu Trp Thr Glu Trp Phe Pro Tyr Glu Gly Val Glu
370 375 380
Ile Gly Pro Asn Gly Ile Leu Lys Thr Pro Thr Gly Tyr Lys Phe Pro
385 390 395 400
Leu Phe Met Ile Gly His Gly Met Leu Asp Ser Asp Leu His Lys Thr
405 410 415
Ser Gln Ala Glu Val Phe Glu His Pro His Leu Ala Glu Ala Pro Lys
420 425 430
Gln Leu Pro Glu Glu Glu Thr Leu Phe Phe Gly Asp Thr Gly Ile Ser
435 440 445
Lys Asn Pro Val Glu Leu Ile Glu Gly Trp Phe Ser Ser Trp Lys Ser
450 455 460
Thr Val Val Thr Phe Phe Phe Ala Ile Gly Val Phe Ile Leu Leu Tyr
465 470 475 480
Val Val Ala Arg Ile Val Ile Ala Val Arg Tyr Arg Tyr Gln Gly Ser
485 490 495
Asn Asn Lys Arg Ile Tyr Asn Asp Ile Glu Met Ser Arg Phe Arg Lys
500 505 510
<210> 5
<211> 529
<212> PRT
<213> 皮理病毒(Piry virus)
<220>
<223> PIRYV-G
<400> 5
Met Asp Leu Phe Pro Ile Leu Val Val Val Leu Met Thr Asp Thr Val
1 5 10 15
Leu Gly Lys Phe Gln Ile Val Phe Pro Asp Gln Asn Glu Leu Glu Trp
20 25 30
Arg Pro Val Val Gly Asp Ser Arg His Cys Pro Gln Ser Ser Glu Met
35 40 45
Gln Phe Asp Gly Ser Arg Ser Gln Thr Ile Leu Thr Gly Lys Ala Pro
50 55 60
Val Gly Ile Thr Pro Ser Lys Ser Asp Gly Phe Ile Cys His Ala Ala
65 70 75 80
Lys Trp Val Thr Thr Cys Asp Phe Arg Trp Tyr Gly Pro Lys Tyr Ile
85 90 95
Thr His Ser Ile His His Leu Arg Pro Thr Thr Ser Asp Cys Glu Thr
100 105 110
Ala Leu Gln Arg Tyr Lys Asp Gly Ser Leu Ile Asn Leu Gly Phe Pro
115 120 125
Pro Glu Ser Cys Gly Tyr Ala Thr Val Thr Asp Ser Glu Ala Met Leu
130 135 140
Val Gln Val Thr Pro His His Val Gly Val Asp Asp Tyr Arg Gly His
145 150 155 160
Trp Ile Asp Pro Leu Phe Pro Gly Gly Glu Cys Ser Thr Asn Phe Cys
165 170 175
Asp Thr Val His Asn Ser Ser Val Trp Ile Pro Lys Ser Gln Lys Thr
180 185 190
Asp Ile Cys Ala Gln Ser Phe Lys Asn Ile Lys Met Thr Ala Ser Tyr
195 200 205
Pro Ser Glu Gly Ala Leu Val Ser Asp Arg Phe Ala Phe His Ser Ala
210 215 220
Tyr His Pro Asn Met Pro Gly Ser Thr Val Cys Ile Met Asp Phe Cys
225 230 235 240
Glu Gln Lys Gly Leu Arg Phe Thr Asn Gly Glu Trp Met Gly Leu Asn
245 250 255
Val Glu Gln Ser Ile Arg Glu Lys Lys Ile Ser Ala Ile Phe Pro Asn
260 265 270
Cys Val Ala Gly Thr Glu Ile Arg Ala Thr Leu Glu Ser Glu Gly Ala
275 280 285
Arg Thr Leu Thr Trp Glu Thr Gln Arg Met Leu Asp Tyr Ser Leu Cys
290 295 300
Gln Asn Thr Trp Asp Lys Val Ser Arg Lys Glu Pro Leu Ser Pro Leu
305 310 315 320
Asp Leu Ser Tyr Leu Ser Pro Arg Ala Pro Gly Lys Gly Met Ala Tyr
325 330 335
Thr Val Ile Asn Gly Thr Leu His Ser Ala His Ala Lys Tyr Ile Arg
340 345 350
Thr Trp Ile Asp Tyr Gly Glu Met Lys Glu Ile Lys Gly Gly Arg Gly
355 360 365
Glu Tyr Ser Lys Ala Pro Glu Leu Leu Trp Ser Gln Trp Phe Asp Phe
370 375 380
Gly Pro Phe Lys Ile Gly Pro Asn Gly Leu Leu His Thr Gly Lys Thr
385 390 395 400
Phe Lys Phe Pro Leu Tyr Leu Ile Gly Ala Gly Ile Ile Asp Glu Asp
405 410 415
Leu His Glu Leu Asp Glu Ala Ala Pro Ile Asp His Pro Gln Met Pro
420 425 430
Asp Ala Lys Ser Val Leu Pro Glu Asp Glu Glu Ile Phe Phe Gly Asp
435 440 445
Thr Gly Val Ser Lys Asn Pro Ile Glu Leu Ile Gln Gly Trp Phe Ser
450 455 460
Asn Trp Arg Glu Ser Val Met Ala Ile Val Gly Ile Val Leu Leu Ile
465 470 475 480
Val Val Thr Phe Leu Ala Ile Lys Thr Val Arg Val Leu Asn Cys Leu
485 490 495
Trp Arg Pro Arg Lys Lys Arg Ile Val Arg Gln Glu Val Asp Val Glu
500 505 510
Ser Arg Leu Asn His Phe Glu Met Arg Gly Phe Pro Glu Tyr Val Lys
515 520 525
Arg
<210> 6
<211> 523
<212> PRT
<213> 伊斯法罕病毒（Isfahan virus）
<220>
<223> ISFV-G
<400> 6
Met Thr Ser Val Leu Phe Met Val Gly Val Leu Leu Gly Ala Phe Gly
1 5 10 15
Ser Thr His Cys Ser Ile Gln Ile Val Phe Pro Ser Glu Thr Lys Leu
20 25 30
Val Trp Lys Pro Val Leu Lys Gly Thr Arg Tyr Cys Pro Gln Ser Ala
35 40 45
Glu Leu Asn Leu Glu Pro Asp Leu Lys Thr Met Ala Phe Asp Ser Lys
50 55 60
Val Pro Ile Gly Ile Thr Pro Ser Asn Ser Asp Gly Tyr Leu Cys His
65 70 75 80
Ala Ala Lys Trp Val Thr Thr Cys Asp Phe Arg Trp Tyr Gly Pro Lys
85 90 95
Tyr Ile Thr His Ser Val His Ser Leu Arg Pro Thr Val Ser Asp Cys
100 105 110
Lys Ala Ala Val Glu Ala Tyr Asn Ala Gly Thr Leu Met Tyr Pro Gly
115 120 125
Phe Pro Pro Glu Ser Cys Gly Tyr Ala Ser Ile Thr Asp Ser Glu Phe
130 135 140
Tyr Val Met Leu Val Thr Pro His Pro Val Gly Val Asp Asp Tyr Arg
145 150 155 160
Gly His Trp Val Asp Pro Leu Phe Pro Thr Ser Glu Cys Asn Ser Asn
165 170 175
Phe Cys Glu Thr Val His Asn Ala Thr Met Trp Ile Pro Lys Asp Leu
180 185 190
Lys Thr His Asp Val Cys Ser Gln Asp Phe Gln Thr Ile Arg Val Ser
195 200 205
Val Met Tyr Pro Gln Thr Lys Pro Thr Lys Gly Ala Asp Leu Thr Leu
210 215 220
Lys Ser Lys Phe His Ala His Met Lys Gly Asp Arg Val Cys Lys Met
225 230 235 240
Lys Phe Cys Asn Lys Asn Gly Leu Arg Leu Gly Asn Gly Glu Trp Ile
245 250 255
Glu Val Gly Asp Glu Val Met Leu Asp Asn Ser Lys Leu Leu Ser Leu
260 265 270
Phe Pro Asp Cys Leu Val Gly Ser Val Val Lys Ser Thr Leu Leu Ser
275 280 285
Glu Gly Val Gln Thr Ala Leu Trp Glu Thr Asp Arg Leu Leu Asp Tyr
290 295 300
Ser Leu Cys Gln Asn Thr Trp Glu Lys Ile Asp Arg Lys Glu Pro Leu
305 310 315 320
Ser Ala Val Asp Leu Ser Tyr Leu Ala Pro Arg Ser Pro Gly Lys Gly
325 330 335
Met Ala Tyr Ile Val Ala Asn Gly Ser Leu Met Ser Ala Pro Ala Arg
340 345 350
Tyr Ile Arg Val Trp Ile Asp Ser Pro Ile Leu Lys Glu Ile Lys Gly
355 360 365
Lys Lys Glu Ser Ala Ser Gly Ile Asp Thr Val Leu Trp Glu Gln Trp
370 375 380
Leu Pro Phe Asn Gly Met Glu Leu Gly Pro Asn Gly Leu Ile Lys Thr
385 390 395 400
Lys Ser Gly Tyr Lys Phe Pro Leu Tyr Leu Leu Gly Met Gly Ile Val
405 410 415
Asp Gln Asp Leu Gln Glu Leu Ser Ser Val Asn Pro Val Asp His Pro
420 425 430
His Val Pro Ile Ala Gln Ala Phe Val Ser Glu Gly Glu Glu Val Phe
435 440 445
Phe Gly Asp Thr Gly Val Ser Lys Asn Pro Ile Glu Leu Ile Ser Gly
450 455 460
Trp Phe Ser Asp Trp Lys Glu Thr Ala Ala Ala Leu Gly Phe Ala Ala
465 470 475 480
Ile Ser Val Ile Leu Ile Ile Gly Leu Met Arg Leu Leu Pro Leu Leu
485 490 495
Cys Arg Arg Arg Lys Gln Lys Lys Val Ile Tyr Lys Asp Val Glu Leu
500 505 510
Asn Ser Phe Asp Pro Arg Gln Ala Phe His Arg
515 520
<210> 7
<211> 509
<212> PRT
<213> 鲤春病毒血症病毒（Spring viraemia of carp virus）
<220>
<223> SVCV-G
<400> 7
Met Ser Ile Ile Ser Tyr Ile Ala Phe Leu Leu Leu Ile Asp Ser Thr
1 5 10 15
Leu Gly Ile Pro Ile Phe Val Pro Ser Gly Gln Asn Ile Ser Trp Gln
20 25 30
Pro Val Ile Gln Pro Phe Asp Tyr Gln Cys Pro Ile His Gly Asn Leu
35 40 45
Pro Asn Thr Met Gly Leu Ser Ala Thr Lys Leu Thr Ile Lys Ser Pro
50 55 60
Ser Val Phe Ser Thr Asp Lys Val Ser Gly Trp Ile Cys His Ala Ala
65 70 75 80
Glu Trp Lys Thr Thr Cys Asp Tyr Arg Trp Tyr Gly Pro Gln Tyr Ile
85 90 95
Thr His Ser Ile His Pro Ile Ser Pro Thr Ile Asp Glu Cys Lys Arg
100 105 110
Ile Ile Ser Arg Ile Ala Ser Gly Thr Asp Glu Asp Leu Gly Phe Pro
115 120 125
Pro Gln Ser Cys Gly Trp Ala Ser Val Thr Thr Val Ser Asn Thr Asn
130 135 140
Tyr Lys Val Val Pro His Ser Val His Leu Glu Pro Tyr Gly Gly His
145 150 155 160
Trp Ile Asp His Glu Phe Asn Gly Gly Glu Cys Arg Glu Lys Val Cys
165 170 175
Glu Met Lys Gly Asn His Ser Ile Trp Ile Thr Asp Glu Thr Val Gln
180 185 190
His Glu Cys Glu Lys His Ile Glu Glu Val Glu Gly Ile Met Tyr Gly
195 200 205
Asn Ala Pro Arg Gly Asp Ala Leu Tyr Ile Asn Asn Phe Ile Ile Asp
210 215 220
Lys His His Arg Val Tyr Arg Phe Gly Gly Ser Cys Arg Met Lys Phe
225 230 235 240
Cys Asp Lys Asp Gly Ile Lys Phe Thr Arg Gly Asp Trp Val Glu Lys
245 250 255
Thr Ala Glu Thr Leu Thr Lys Ile Tyr Ala Asn Thr Pro Glu Cys Ala
260 265 270
Asp Gly Thr Leu Val Ser Gly His Arg Pro Gly Leu Asp Leu Ile Asp
275 280 285
Thr Val Phe Asn Leu Glu Asn Val Val Glu Tyr Thr Leu Cys Glu Gly
290 295 300
Thr Lys Arg Lys Ile Asn Glu Gln Glu Lys Leu Thr Ser Val Asp Leu
305 310 315 320
Ser Tyr Leu Ala Pro Arg Ile Gly Gly Phe Gly Ser Val Phe Arg Val
325 330 335
Arg Asn Gly Thr Leu Glu Arg Gly Ser Thr Thr Tyr Ile Arg Ile Glu
340 345 350
Val Glu Gly Pro Ile Val Asp Ser Leu Thr Gly Thr Asp Pro Arg Thr
355 360 365
Asn Ala Ser Arg Val Phe Trp Asp Asp Trp Glu Leu Asp Gly Asn Ile
370 375 380
Tyr Gln Gly Phe Asn Gly Val Tyr Lys Gly Lys Asp Gly Lys Ile His
385 390 395 400
Ile Pro Leu Asn Met Ile Glu Ser Gly Ile Ile Asp Asp Glu Leu Gln
405 410 415
His Ala Phe Gln Ala Asp Ile Ile Pro His Pro His Tyr Asp Asp Asp
420 425 430
Glu Ile Arg Glu Asp Asp Ile Phe Phe Asp Asn Thr Gly Glu Asn Gly
435 440 445
Asn Pro Val Asp Ala Val Val Glu Trp Val Ser Gly Trp Gly Thr Ser
450 455 460
Leu Lys Phe Phe Gly Thr Thr Leu Val Ala Leu Ile Leu Ile Phe Leu
465 470 475 480
Leu Ile Arg Cys Cys Val Ala Cys Thr Tyr Leu Met Lys Lys Ser Lys
485 490 495
Arg Pro Ala Thr Glu Ser His Glu Met Arg Ser Leu Val
500 505
<210> 8
<211> 519
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> pTOP中修饰的VSV-G-OVA_CD8
<400> 8
Met Lys Cys Leu Leu Tyr Leu Ala Phe Leu Phe Ile Gly Val Asn Cys
1 5 10 15
Lys Phe Thr Ile Val Phe Pro His Asn Gln Lys Gly Asn Trp Lys Asn
20 25 30
Val Pro Ser Asn Tyr His Tyr Cys Pro Ser Ser Ser Asp Leu Asn Trp
35 40 45
His Asn Asp Leu Ile Gly Thr Ala Ile Gln Val Lys Met Pro Lys Ser
50 55 60
His Lys Ala Ile Gln Ala Asp Gly Trp Met Cys His Ala Ser Lys Trp
65 70 75 80
Val Thr Thr Cys Asp Phe Arg Trp Tyr Gly Pro Lys Tyr Ile Thr Gln
85 90 95
Ser Ile Arg Ser Phe Thr Pro Ser Val Glu Gln Cys Lys Glu Ser Ile
100 105 110
Glu Gln Thr Lys Gln Gly Thr Trp Leu Asn Pro Gly Phe Pro Pro Gln
115 120 125
Ser Cys Gly Tyr Ala Thr Val Thr Asp Ala Glu Ala Val Ile Val Gln
130 135 140
Val Thr Pro His His Val Leu Val Asp Glu Tyr Thr Gly Glu Trp Val
145 150 155 160
Asp Ser Gln Phe Ile Asn Gly Lys Cys Ser Asn Tyr Ile Cys Pro Thr
165 170 175
Val His Asn Ser Thr Thr Trp His Ser Asp Tyr Lys Val Lys Ser Ile
180 185 190
Ile Asn Phe Glu Lys Leu Gly Leu Cys Asp Ser Asn Leu Ile Ser Met
195 200 205
Asp Ile Thr Phe Phe Ser Glu Asp Gly Glu Leu Ser Ser Leu Gly Lys
210 215 220
Glu Gly Thr Gly Phe Arg Ser Asn Tyr Phe Ala Tyr Glu Thr Gly Gly
225 230 235 240
Lys Ala Cys Lys Met Gln Tyr Cys Lys His Trp Gly Val Arg Leu Pro
245 250 255
Ser Gly Val Trp Phe Glu Met Ala Asp Lys Asp Leu Phe Ala Ala Ala
260 265 270
Arg Phe Pro Glu Cys Pro Glu Gly Ser Ser Ile Ser Ala Pro Ser Gln
275 280 285
Thr Ser Val Asp Val Ser Leu Ile Gln Asp Val Glu Arg Ile Leu Asp
290 295 300
Tyr Ser Leu Cys Gln Glu Thr Trp Ser Lys Ile Arg Ala Gly Leu Pro
305 310 315 320
Ile Ser Pro Val Asp Leu Ser Tyr Leu Ala Pro Lys Asn Pro Gly Thr
325 330 335
Gly Pro Ala Phe Thr Ile Ile Asn Gly Thr Leu Lys Tyr Phe Glu Thr
340 345 350
Arg Tyr Ile Arg Val Asp Ile Ala Ala Pro Ile Leu Ser Arg Met Val
355 360 365
Gly Met Ile Ser Gly Thr Thr Thr Glu Arg Glu Leu Trp Asp Asp Trp
370 375 380
Ala Pro Tyr Glu Asp Val Glu Ile Gly Pro Asn Gly Val Leu Arg Thr
385 390 395 400
Ser Ser Gly Tyr Lys Phe Pro Leu Tyr Met Ile Gly His Gly Met Leu
405 410 415
Asp Ser Asp Leu His Leu Ser Ser Lys Ala Gln Val Phe Glu His Pro
420 425 430
His Ile Gln Asp Ala Ala Ser Gln Leu Pro Asp Asp Glu Ser Leu Phe
435 440 445
Phe Gly Asp Thr Gly Leu Ser Lys Asn Pro Ile Glu Leu Val Glu Gly
450 455 460
Trp Phe Ser Ser Trp Lys Ser Ser Ile Ala Ser Phe Phe Phe Ile Ile
465 470 475 480
Gly Leu Ile Ile Gly Leu Phe Leu Val Leu Arg Val Gly Ile His Leu
485 490 495
Cys Ile Lys Leu Lys His Thr Lys Lys Arg Gln Ile Tyr Thr Asp Ile
500 505 510
Glu Met Asn Arg Leu Gly Lys
515
<210> 9
<211> 515
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自pTOP1的修饰的VSV-G-RS
<400> 9
Met Lys Cys Leu Leu Tyr Leu Ala Phe Leu Phe Ile Gly Val Asn Cys
1 5 10 15
Lys Phe Thr Ile Val Phe Pro His Asn Gln Lys Gly Asn Trp Lys Asn
20 25 30
Val Pro Ser Asn Tyr His Tyr Cys Pro Ser Ser Ser Asp Leu Asn Trp
35 40 45
His Asn Asp Leu Ile Gly Thr Ala Ile Gln Val Lys Met Pro Lys Ser
50 55 60
His Lys Ala Ile Gln Ala Asp Gly Trp Met Cys His Ala Ser Lys Trp
65 70 75 80
Val Thr Thr Cys Asp Phe Arg Trp Tyr Gly Pro Lys Tyr Ile Thr Gln
85 90 95
Ser Ile Arg Ser Phe Thr Pro Ser Val Glu Gln Cys Lys Glu Ser Ile
100 105 110
Glu Gln Thr Lys Gln Gly Thr Trp Leu Asn Pro Gly Phe Pro Pro Gln
115 120 125
Ser Cys Gly Tyr Ala Thr Val Thr Asp Ala Glu Ala Val Ile Val Gln
130 135 140
Val Thr Pro His His Val Leu Val Asp Glu Tyr Thr Gly Glu Trp Val
145 150 155 160
Asp Ser Gln Phe Ile Asn Gly Lys Cys Ser Asn Tyr Ile Cys Pro Thr
165 170 175
Val His Asn Ser Thr Thr Trp His Ser Asp Tyr Lys Val Lys Thr Ser
180 185 190
Glu Phe Gly Leu Cys Asp Ser Asn Leu Ile Ser Met Asp Ile Thr Phe
195 200 205
Phe Ser Glu Asp Gly Glu Leu Ser Ser Leu Gly Lys Glu Gly Thr Gly
210 215 220
Phe Arg Ser Asn Tyr Phe Ala Tyr Glu Thr Gly Gly Lys Ala Cys Lys
225 230 235 240
Met Gln Tyr Cys Lys His Trp Gly Val Arg Leu Pro Ser Gly Val Trp
245 250 255
Phe Glu Met Ala Asp Lys Asp Leu Phe Ala Ala Ala Arg Phe Pro Glu
260 265 270
Cys Pro Glu Gly Ser Ser Ile Ser Ala Pro Ser Gln Thr Ser Val Asp
275 280 285
Val Ser Leu Ile Gln Asp Val Glu Arg Ile Leu Asp Tyr Ser Leu Cys
290 295 300
Gln Glu Thr Trp Ser Lys Ile Arg Ala Gly Leu Pro Ile Ser Pro Val
305 310 315 320
Asp Leu Ser Tyr Leu Ala Pro Lys Asn Pro Gly Thr Gly Pro Ala Phe
325 330 335
Thr Ile Ile Asn Gly Thr Leu Lys Tyr Phe Glu Thr Arg Tyr Ile Arg
340 345 350
Val Asp Ile Ala Ala Pro Ile Leu Ser Arg Met Val Gly Met Ile Ser
355 360 365
Gly Thr Thr Thr Glu Arg Glu Leu Trp Asp Asp Trp Ala Pro Tyr Glu
370 375 380
Asp Val Glu Ile Gly Pro Asn Gly Val Leu Arg Thr Ser Ser Gly Tyr
385 390 395 400
Lys Phe Pro Leu Tyr Met Ile Gly His Gly Met Leu Asp Ser Asp Leu
405 410 415
His Leu Ser Ser Lys Ala Gln Val Phe Glu His Pro His Ile Gln Asp
420 425 430
Ala Ala Ser Gln Leu Pro Asp Asp Glu Ser Leu Phe Phe Gly Asp Thr
435 440 445
Gly Leu Ser Lys Asn Pro Ile Glu Leu Val Glu Gly Trp Phe Ser Ser
450 455 460
Trp Lys Ser Ser Ile Ala Ser Phe Phe Phe Ile Ile Gly Leu Ile Ile
465 470 475 480
Gly Leu Phe Leu Val Leu Arg Val Gly Ile His Leu Cys Ile Lys Leu
485 490 495
Lys His Thr Lys Lys Arg Gln Ile Tyr Thr Asp Ile Glu Met Asn Arg
500 505 510
Leu Gly Lys
515
<210> 10
<211> 1536
<212> DNA
<213> 第安纳型水疱性口炎病毒(Vesicular stomatitis Indiana virus)
<220>
<223> VSIV-G
<400> 10
atgaagtgcc tgctgtacct ggccttcctg ttcatcggcg tgaactgcaa gtttaccatc 60
gtgttccccc acaaccagaa gggcaactgg aagaacgtgc ccagcaacta ccactactgc 120
cccagcagca gcgacctgaa ctggcacaac gacctgatcg gcaccgccat ccaagtgaag 180
atgcccaaga gccacaaggc catccaggcc gatggctgga tgtgccacgc cagcaaatgg 240
gtcaccacct gtgacttcag gtggtacggc cccaagtaca tcacccagag catcagatcc 300
ttcaccccca gcgtggaaca gtgcaaagag agcatcgagc agaccaagca gggcacctgg 360
ctgaaccccg gattcccacc tcagagctgt ggctacgcca ccgtgacaga tgccgaggcc 420
gtgatcgtgc aagtgacccc tcaccacgtg ctggtggacg agtacacagg cgagtgggtg 480
gacagccagt tcatcaacgg caagtgctcc aactacatct gccccaccgt gcacaacagc 540
accacctggc acagcgacta caaagtgaag ggcctgtgcg acagcaacct gatcagcatg 600
gacatcacat tcttcagcga ggacggcgag ctgagcagcc tgggcaaaga gggcacaggc 660
ttcagaagca actacttcgc ctacgagaca ggcggcaagg cctgcaagat gcagtattgc 720
aagcactggg gcgtgcggct gcctagcgga gtgtggttcg agatggccga caaggacctg 780
ttcgccgctg ccagattccc cgagtgtcct gagggcagca gcatctctgc ccctagccag 840
acaagcgtgg acgtgtccct gatccaggac gtggaaagaa tcctggacta cagcctgtgt 900
caggaaacct ggtccaagat cagagccggc ctgcccatca gccctgtgga cctgtcttac 960
ctggccccca agaaccctgg aaccggccct gccttcacca tcatcaatgg caccctgaag 1020
tactttgaga cacggtacat ccgggtggac attgccgccc ctatcctgag cagaatggtg 1080
ggaatgatca gcggcaccac caccgagcgc gagctgtggg atgattgggc cccttacgag 1140
gatgtggaaa tcggccccaa cggcgtgctg agaaccagca gcggctacaa gttccccctg 1200
tacatgatcg gccacggcat gctggactcc gacctgcacc tgtctagcaa ggcccaggtg 1260
ttcgagcacc cccacatcca ggatgccgcc agccagctgc ctgacgacga gtctctgttc 1320
ttcggcgaca ccggcctgag caagaacccc atcgagctgg tggaaggctg gttcagcagc 1380
tggaagtcct ctatcgccag cttcttcttc atcatcgggc tgattatcgg cctgttcctg 1440
gtgctgagag tgggcatcca cctgtgcatc aagctgaagc acaccaagaa gaggcagatc 1500
tacaccgaca tcgagatgaa ccggctgggc aaatga 1536
<210> 11
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> OVA_CD8
<400> 11
Ser Ile Ile Asn Phe Glu Lys Leu
1 5
<210> 12
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> OVA_CD4
<400> 12
Ile Ser Gln Ala Val His Ala Ala His Ala Glu Ile Asn Glu Ala Gly
1 5 10 15
Arg
<210> 13
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1A_CD8
<400> 13
Leu Pro Tyr Leu Gly Trp Leu Val Phe
1 5
<210> 14
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MELANA_CD8
<400> 14
Glu Leu Ala Gly Ile Gly Ile Leu Thr Val
1 5 10
<210> 15
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GP100_CD8
<400> 15
Ile Met Asp Gln Val Pro Phe Ser Val
1 5
<210> 16
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TYR_CD8
<400> 16
Tyr Met Asp Gly Thr Met Ser Gln Val
1 5
<210> 17
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> PADRE
<400> 17
Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala
1 5 10
<210> 18
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VIL1
<400> 18
Val Gln Gly Glu Glu Ser Asn Asp Lys
1 5
<210> 19
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TT
<400> 19
Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu
1 5 10 15
<210> 20
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GP100_CD4
<400> 20
Trp Asn Arg Gln Leu Tyr Pro Glu Trp Thr Glu Ala Gln Arg Leu Asp
1 5 10 15
<210> 21
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HP91
<400> 21
Asp Pro Asn Ala Pro Lys Arg Pro Pro Ser Ala Phe Phe Leu Phe Cys
1 5 10 15
Ser Glu
<210> 22
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GP100_LP
<400> 22
Lys Val Pro Arg Asn Gln Asp Trp Leu Gly Val Ser Arg Gln Leu Arg
1 5 10 15
Thr Lys Ala Trp Asn Arg Gln Leu Tyr Pro Glu Trp Thr Glu Ala Gln
20 25 30
Arg Leu Asp
35
<210> 23
<211> 40
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1A_LP
<400> 23
Asn Leu Leu His Arg Tyr Ser Leu Glu Glu Ile Leu Pro Tyr Leu Gly
1 5 10 15
Trp Leu Val Phe Ala Val Val Thr Thr Ser Phe Leu Ala Leu Gln Met
20 25 30
Phe Ile Asp Ala Leu Tyr Glu Glu
35 40
<210> 24
<211> 1632
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> pTOP1中修饰的VSV-G OVA_CD4(18)-OVA_CD8(191)
<400> 24
atgaagtgcc tgctgtacct ggccttcctg ttcatcggcg tgaactgcaa gatcagccag 60
gccgtgcacg ctgcccacgc cgagatcaat gaggccggca gaaagcttaa gtttaccatc 120
gtgttccccc acaaccagaa gggcaactgg aagaacgtgc ccagcaacta ccactactgc 180
cccagcagca gcgacctgaa ctggcacaac gacctgatcg gcaccgccat ccaagtgaag 240
atgcccaaga gccacaaggc catccaggcc gatggctgga tgtgccacgc cagcaaatgg 300
gtcaccacct gtgacttcag gtggtacggc cccaagtaca tcacccagag catcagatcc 360
ttcaccccca gcgtggaaca gtgcaaagag agcatcgagc agaccaagca gggcacctgg 420
ctgaaccccg gattcccacc tcagagctgt ggctacgcca ccgtgacaga tgccgaggcc 480
gtgatcgtgc aagtgacccc tcaccacgtg ctggtggacg agtacacagg cgagtgggtg 540
gacagccagt tcatcaacgg caagtgctcc aactacatct gccccaccgt gcacaacagc 600
accacctggc acagcgacta caaagtgaag actagttcca tcatcaactt cgagaagctg 660
gaattcggcc tgtgcgacag caacctgatc agcatggaca tcacattctt cagcgaggac 720
ggcgagctga gcagcctggg caaagagggc acaggcttca gaagcaacta cttcgcctac 780
gagacaggcg gcaaggcctg caagatgcag tattgcaagc actggggcgt gcggctgcct 840
agcggagtgt ggttcgagat ggccgacaag gacctgttcg ccgctgccag attccccgag 900
tgtcctgagg gcagcagcat ctctgcccct agccagacaa gcgtggacgt gtccctgatc 960
caggacgtgg aaagaatcct ggactacagc ctgtgtcagg aaacctggtc caagatcaga 1020
gccggcctgc ccatcagccc tgtggacctg tcttacctgg cccccaagaa ccctggaacc 1080
ggccctgcct tcaccatcat taacggcacc ctgaagtact ttgagacacg gtacatccgg 1140
gtggacattg ccgcccctat cctgagcaga atggtgggaa tgatcagcgg caccaccacc 1200
gagcgcgagc tgtgggatga ttgggcccct tacgaggatg tggaaatcgg ccccaacggc 1260
gtgctgagaa ccagcagcgg ctacaagttc cccctgtaca tgatcggcca cggcatgctg 1320
gactccgacc tgcacctgtc tagcaaggcc caggtgttcg agcaccccca catccaggat 1380
gccgccagcc agctgcctga cgacgagtct ctgttcttcg gcgacaccgg cctgagcaag 1440
aaccccatcg agctggtgga aggctggttc agcagctgga agtcctctat cgccagcttc 1500
ttcttcatca tcgggctgat tatcggcctg ttcctggtgc tgagagtggg catccacctg 1560
tgcatcaagc tgaagcacac caagaagagg cagatctaca ccgacatcga gatgaaccgg 1620
ctgggcaaat ga 1632
<210> 25
<211> 1572
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> pTOP1中修饰的VSV-G OVA_CD8(191)
<400> 25
atgaagtgcc tgctgtacct ggccttcctg ttcatcggcg tgaactgcaa gtttaccatc 60
gtgttccccc acaaccagaa gggcaactgg aagaacgtgc ccagcaacta ccactactgc 120
cccagcagca gcgacctgaa ctggcacaac gacctgatcg gcaccgccat ccaagtgaag 180
atgcccaaga gccacaaggc catccaggcc gatggctgga tgtgccacgc cagcaaatgg 240
gtcaccacct gtgacttcag gtggtacggc cccaagtaca tcacccagag catcagatcc 300
ttcaccccca gcgtggaaca gtgcaaagag agcatcgagc agaccaagca gggcacctgg 360
ctgaaccccg gattcccacc tcagagctgt ggctacgcca ccgtgacaga tgccgaggcc 420
gtgatcgtgc aagtgacccc tcaccacgtg ctggtggacg agtacacagg cgagtgggtg 480
gacagccagt tcatcaacgg caagtgctcc aactacatct gccccaccgt gcacaacagc 540
accacctggc acagcgacta caaagtgaag actagttcca tcatcaactt cgagaagctg 600
gaattcggcc tgtgcgacag caacctgatc agcatggaca tcacattctt cagcgaggac 660
ggcgagctga gcagcctggg caaagagggc acaggcttca gaagcaacta cttcgcctac 720
gagacaggcg gcaaggcctg caagatgcag tattgcaagc actggggcgt gcggctgcct 780
agcggagtgt ggttcgagat ggccgacaag gacctgttcg ccgctgccag attccccgag 840
tgtcctgagg gcagcagcat ctctgcccct agccagacaa gcgtggacgt gtccctgatc 900
caggacgtgg aaagaatcct ggactacagc ctgtgtcagg aaacctggtc caagatcaga 960
gccggcctgc ccatcagccc tgtggacctg tcttacctgg cccccaagaa ccctggaacc 1020
ggccctgcct tcaccatcat taacggcacc ctgaagtact ttgagacacg gtacatccgg 1080
gtggacattg ccgcccctat cctgagcaga atggtgggaa tgatcagcgg caccaccacc 1140
gagcgcgagc tgtgggatga ttgggcccct tacgaggatg tggaaatcgg ccccaacggc 1200
gtgctgagaa ccagcagcgg ctacaagttc cccctgtaca tgatcggcca cggcatgctg 1260
gactccgacc tgcacctgtc tagcaaggcc caggtgttcg agcaccccca catccaggat 1320
gccgccagcc agctgcctga cgacgagtct ctgttcttcg gcgacaccgg cctgagcaag 1380
aaccccatcg agctggtgga aggctggttc agcagctgga agtcctctat cgccagcttc 1440
ttcttcatca tcgggctgat tatcggcctg ttcctggtgc tgagagtggg catccacctg 1500
tgcatcaagc tgaagcacac caagaagagg cagatctaca ccgacatcga gatgaaccgg 1560
ctgggcaaat ga 1572
<210> 26
<211> 1599
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> pTOP1中修饰的VSV-G OVA_CD4(191)
<400> 26
atgaagtgcc tgctgtacct ggccttcctg ttcatcggcg tgaactgcaa gtttaccatc 60
gtgttccccc acaaccagaa gggcaactgg aagaacgtgc ccagcaacta ccactactgc 120
cccagcagca gcgacctgaa ctggcacaac gacctgatcg gcaccgccat ccaagtgaag 180
atgcccaaga gccacaaggc catccaggcc gatggctgga tgtgccacgc cagcaaatgg 240
gtcaccacct gtgacttcag gtggtacggc cccaagtaca tcacccagag catcagatcc 300
ttcaccccca gcgtggaaca gtgcaaagag agcatcgagc agaccaagca gggcacctgg 360
ctgaaccccg gattcccacc tcagagctgt ggctacgcca ccgtgacaga tgccgaggcc 420
gtgatcgtgc aagtgacccc tcaccacgtg ctggtggacg agtacacagg cgagtgggtg 480
gacagccagt tcatcaacgg caagtgctcc aactacatct gccccaccgt gcacaacagc 540
accacctggc acagcgacta caaagtgaag actagtatca gccaggccgt gcacgctgcc 600
cacgccgaga tcaatgaggc cggcagagaa ttcggcctgt gcgacagcaa cctgatcagc 660
atggacatca cattcttcag cgaggacggc gagctgagca gcctgggcaa agagggcaca 720
ggcttcagaa gcaactactt cgcctacgag acaggcggca aggcctgcaa gatgcagtat 780
tgcaagcact ggggcgtgcg gctgcctagc ggagtgtggt tcgagatggc cgacaaggac 840
ctgttcgccg ctgccagatt ccccgagtgt cctgagggca gcagcatctc tgcccctagc 900
cagacaagcg tggacgtgtc cctgatccag gacgtggaaa gaatcctgga ctacagcctg 960
tgtcaggaaa cctggtccaa gatcagagcc ggcctgccca tcagccctgt ggacctgtct 1020
tacctggccc ccaagaaccc tggaaccggc cctgccttca ccatcattaa cggcaccctg 1080
aagtactttg agacacggta catccgggtg gacattgccg cccctatcct gagcagaatg 1140
gtgggaatga tcagcggcac caccaccgag cgcgagctgt gggatgattg ggccccttac 1200
gaggatgtgg aaatcggccc caacggcgtg ctgagaacca gcagcggcta caagttcccc 1260
ctgtacatga tcggccacgg catgctggac tccgacctgc acctgtctag caaggcccag 1320
gtgttcgagc acccccacat ccaggatgcc gccagccagc tgcctgacga cgagtctctg 1380
ttcttcggcg acaccggcct gagcaagaac cccatcgagc tggtggaagg ctggttcagc 1440
agctggaagt cctctatcgc cagcttcttc ttcatcatcg ggctgattat cggcctgttc 1500
ctggtgctga gagtgggcat ccacctgtgc atcaagctga agcacaccaa gaagaggcag 1560
atctacaccg acatcgagat gaaccggctg ggcaaatga 1599
<210> 27
<211> 1578
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> pTOP1中修饰的VSV-G MELANA_CD8(191)
<400> 27
atgaagtgcc tgctgtacct ggccttcctg ttcatcggcg tgaactgcaa gtttaccatc 60
gtgttccccc acaaccagaa gggcaactgg aagaacgtgc ccagcaacta ccactactgc 120
cccagcagca gcgacctgaa ctggcacaac gacctgatcg gcaccgccat ccaagtgaag 180
atgcccaaga gccacaaggc catccaggcc gatggctgga tgtgccacgc cagcaaatgg 240
gtcaccacct gtgacttcag gtggtacggc cccaagtaca tcacccagag catcagatcc 300
ttcaccccca gcgtggaaca gtgcaaagag agcatcgagc agaccaagca gggcacctgg 360
ctgaaccccg gattcccacc tcagagctgt ggctacgcca ccgtgacaga tgccgaggcc 420
gtgatcgtgc aagtgacccc tcaccacgtg ctggtggacg agtacacagg cgagtgggtg 480
gacagccagt tcatcaacgg caagtgctcc aactacatct gccccaccgt gcacaacagc 540
accacctggc acagcgacta caaagtgaag actagtgaac tggctggcat cggcatcctg 600
acagtggaat tcggcctgtg cgacagcaac ctgatcagca tggacatcac attcttcagc 660
gaggacggcg agctgagcag cctgggcaaa gagggcacag gcttcagaag caactacttc 720
gcctacgaga caggcggcaa ggcctgcaag atgcagtatt gcaagcactg gggcgtgcgg 780
ctgcctagcg gagtgtggtt cgagatggcc gacaaggacc tgttcgccgc tgccagattc 840
cccgagtgtc ctgagggcag cagcatctct gcccctagcc agacaagcgt ggacgtgtcc 900
ctgatccagg acgtggaaag aatcctggac tacagcctgt gtcaggaaac ctggtccaag 960
atcagagccg gcctgcccat cagccctgtg gacctgtctt acctggcccc caagaaccct 1020
ggaaccggcc ctgccttcac catcattaac ggcaccctga agtactttga gacacggtac 1080
atccgggtgg acattgccgc ccctatcctg agcagaatgg tgggaatgat cagcggcacc 1140
accaccgagc gcgagctgtg ggatgattgg gccccttacg aggatgtgga aatcggcccc 1200
aacggcgtgc tgagaaccag cagcggctac aagttccccc tgtacatgat cggccacggc 1260
atgctggact ccgacctgca cctgtctagc aaggcccagg tgttcgagca cccccacatc 1320
caggatgccg ccagccagct gcctgacgac gagtctctgt tcttcggcga caccggcctg 1380
agcaagaacc ccatcgagct ggtggaaggc tggttcagca gctggaagtc ctctatcgcc 1440
agcttcttct tcatcatcgg gctgattatc ggcctgttcc tggtgctgag agtgggcatc 1500
cacctgtgca tcaagctgaa gcacaccaag aagaggcaga tctacaccga catcgagatg 1560
aaccggctgg gcaaatga 1578
<210> 28
<211> 1575
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> pTOP1中修饰的VSV-G GP100_CD8(191)
<400> 28
atgaagtgcc tgctgtacct ggccttcctg ttcatcggcg tgaactgcaa gtttaccatc 60
gtgttccccc acaaccagaa gggcaactgg aagaacgtgc ccagcaacta ccactactgc 120
cccagcagca gcgacctgaa ctggcacaac gacctgatcg gcaccgccat ccaagtgaag 180
atgcccaaga gccacaaggc catccaggcc gatggctgga tgtgccacgc cagcaaatgg 240
gtcaccacct gtgacttcag gtggtacggc cccaagtaca tcacccagag catcagatcc 300
ttcaccccca gcgtggaaca gtgcaaagag agcatcgagc agaccaagca gggcacctgg 360
ctgaaccccg gattcccacc tcagagctgt ggctacgcca ccgtgacaga tgccgaggcc 420
gtgatcgtgc aagtgacccc tcaccacgtg ctggtggacg agtacacagg cgagtgggtg 480
gacagccagt tcatcaacgg caagtgctcc aactacatct gccccaccgt gcacaacagc 540
accacctggc acagcgacta caaagtgaag actagtatca tggatcaggt gcccttcagc 600
gtggaattcg gcctgtgcga cagcaacctg atcagcatgg acatcacatt cttcagcgag 660
gacggcgagc tgagcagcct gggcaaagag ggcacaggct tcagaagcaa ctacttcgcc 720
tacgagacag gcggcaaggc ctgcaagatg cagtattgca agcactgggg cgtgcggctg 780
cctagcggag tgtggttcga gatggccgac aaggacctgt tcgccgctgc cagattcccc 840
gagtgtcctg agggcagcag catctctgcc cctagccaga caagcgtgga cgtgtccctg 900
atccaggacg tggaaagaat cctggactac agcctgtgtc aggaaacctg gtccaagatc 960
agagccggcc tgcccatcag ccctgtggac ctgtcttacc tggcccccaa gaaccctgga 1020
accggccctg ccttcaccat cattaacggc accctgaagt actttgagac acggtacatc 1080
cgggtggaca ttgccgcccc tatcctgagc agaatggtgg gaatgatcag cggcaccacc 1140
accgagcgcg agctgtggga tgattgggcc ccttacgagg atgtggaaat cggccccaac 1200
ggcgtgctga gaaccagcag cggctacaag ttccccctgt acatgatcgg ccacggcatg 1260
ctggactccg acctgcacct gtctagcaag gcccaggtgt tcgagcaccc ccacatccag 1320
gatgccgcca gccagctgcc tgacgacgag tctctgttct tcggcgacac cggcctgagc 1380
aagaacccca tcgagctggt ggaaggctgg ttcagcagct ggaagtcctc tatcgccagc 1440
ttcttcttca tcatcgggct gattatcggc ctgttcctgg tgctgagagt gggcatccac 1500
ctgtgcatca agctgaagca caccaagaag aggcagatct acaccgacat cgagatgaac 1560
cggctgggca aatga 1575
<210> 29
<211> 1575
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> pTOP1中修饰的VSV-G P1A_CD8(191)
<400> 29
atgaagtgcc tgctgtacct ggccttcctg ttcatcggcg tgaactgcaa gtttaccatc 60
gtgttccccc acaaccagaa gggcaactgg aagaacgtgc ccagcaacta ccactactgc 120
cccagcagca gcgacctgaa ctggcacaac gacctgatcg gcaccgccat ccaagtgaag 180
atgcccaaga gccacaaggc catccaggcc gatggctgga tgtgccacgc cagcaaatgg 240
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ttcaccccca gcgtggaaca gtgcaaagag agcatcgagc agaccaagca gggcacctgg 360
ctgaaccccg gattcccacc tcagagctgt ggctacgcca ccgtgacaga tgccgaggcc 420
gtgatcgtgc aagtgacccc tcaccacgtg ctggtggacg agtacacagg cgagtgggtg 480
gacagccagt tcatcaacgg caagtgctcc aactacatct gccccaccgt gcacaacagc 540
accacctggc acagcgacta caaagtgaag actagtctgc cctacctggg ctggctggtg 600
ttcgaattcg gcctgtgcga cagcaacctg atcagcatgg acatcacatt cttcagcgag 660
gacggcgagc tgagcagcct gggcaaagag ggcacaggct tcagaagcaa ctacttcgcc 720
tacgagacag gcggcaaggc ctgcaagatg cagtattgca agcactgggg cgtgcggctg 780
cctagcggag tgtggttcga gatggccgac aaggacctgt tcgccgctgc cagattcccc 840
gagtgtcctg agggcagcag catctctgcc cctagccaga caagcgtgga cgtgtccctg 900
atccaggacg tggaaagaat cctggactac agcctgtgtc aggaaacctg gtccaagatc 960
agagccggcc tgcccatcag ccctgtggac ctgtcttacc tggcccccaa gaaccctgga 1020
accggccctg ccttcaccat cattaacggc accctgaagt actttgagac acggtacatc 1080
cgggtggaca ttgccgcccc tatcctgagc agaatggtgg gaatgatcag cggcaccacc 1140
accgagcgcg agctgtggga tgattgggcc ccttacgagg atgtggaaat cggccccaac 1200
ggcgtgctga gaaccagcag cggctacaag ttccccctgt acatgatcgg ccacggcatg 1260
ctggactccg acctgcacct gtctagcaag gcccaggtgt tcgagcaccc ccacatccag 1320
gatgccgcca gccagctgcc tgacgacgag tctctgttct tcggcgacac cggcctgagc 1380
aagaacccca tcgagctggt ggaaggctgg ttcagcagct ggaagtcctc tatcgccagc 1440
ttcttcttca tcatcgggct gattatcggc ctgttcctgg tgctgagagt gggcatccac 1500
ctgtgcatca agctgaagca caccaagaag aggcagatct acaccgacat cgagatgaac 1560
cggctgggca aatga 1575
<210> 30
<211> 1575
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> pTOP1中修饰的VSV-G TYR_CD8(191)
<400> 30
atgaagtgcc tgctgtacct ggccttcctg ttcatcggcg tgaactgcaa gtttaccatc 60
gtgttccccc acaaccagaa gggcaactgg aagaacgtgc ccagcaacta ccactactgc 120
cccagcagca gcgacctgaa ctggcacaac gacctgatcg gcaccgccat ccaagtgaag 180
atgcccaaga gccacaaggc catccaggcc gatggctgga tgtgccacgc cagcaaatgg 240
gtcaccacct gtgacttcag gtggtacggc cccaagtaca tcacccagag catcagatcc 300
ttcaccccca gcgtggaaca gtgcaaagag agcatcgagc agaccaagca gggcacctgg 360
ctgaaccccg gattcccacc tcagagctgt ggctacgcca ccgtgacaga tgccgaggcc 420
gtgatcgtgc aagtgacccc tcaccacgtg ctggtggacg agtacacagg cgagtgggtg 480
gacagccagt tcatcaacgg caagtgctcc aactacatct gccccaccgt gcacaacagc 540
accacctggc acagcgacta caaagtgaag actagttaca tggacggcac catgagccag 600
gtggaattcg gcctgtgcga cagcaacctg atcagcatgg acatcacatt cttcagcgag 660
gacggcgagc tgagcagcct gggcaaagag ggcacaggct tcagaagcaa ctacttcgcc 720
tacgagacag gcggcaaggc ctgcaagatg cagtattgca agcactgggg cgtgcggctg 780
cctagcggag tgtggttcga gatggccgac aaggacctgt tcgccgctgc cagattcccc 840
gagtgtcctg agggcagcag catctctgcc cctagccaga caagcgtgga cgtgtccctg 900
atccaggacg tggaaagaat cctggactac agcctgtgtc aggaaacctg gtccaagatc 960
agagccggcc tgcccatcag ccctgtggac ctgtcttacc tggcccccaa gaaccctgga 1020
accggccctg ccttcaccat cattaacggc accctgaagt actttgagac acggtacatc 1080
cgggtggaca ttgccgcccc tatcctgagc agaatggtgg gaatgatcag cggcaccacc 1140
accgagcgcg agctgtggga tgattgggcc ccttacgagg atgtggaaat cggccccaac 1200
ggcgtgctga gaaccagcag cggctacaag ttccccctgt acatgatcgg ccacggcatg 1260
ctggactccg acctgcacct gtctagcaag gcccaggtgt tcgagcaccc ccacatccag 1320
gatgccgcca gccagctgcc tgacgacgag tctctgttct tcggcgacac cggcctgagc 1380
aagaacccca tcgagctggt ggaaggctgg ttcagcagct ggaagtcctc tatcgccagc 1440
ttcttcttca tcatcgggct gattatcggc ctgttcctgg tgctgagagt gggcatccac 1500
ctgtgcatca agctgaagca caccaagaag aggcagatct acaccgacat cgagatgaac 1560
cggctgggca aatga 1575
<210> 31
<211> 1620
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> pTOP1中修饰的VSV-G PADRE(18)-OVA_CD8(191)
<400> 31
atgaagtgcc tgctgtacct ggccttcctg ttcatcggcg tgaactgcaa ggccaagttc 60
gtggccgcct ggacactgaa ggctgccgct aagcttaagt ttaccatcgt gttcccccac 120
aaccagaagg gcaactggaa gaacgtgccc agcaactacc actactgccc cagcagcagc 180
gacctgaact ggcacaacga cctgatcggc accgccatcc aagtgaagat gcccaagagc 240
cacaaggcca tccaggccga tggctggatg tgccacgcca gcaaatgggt caccacctgt 300
gacttcaggt ggtacggccc caagtacatc acccagagca tcagatcctt cacccccagc 360
gtggaacagt gcaaagagag catcgagcag accaagcagg gcacctggct gaaccccgga 420
ttcccacctc agagctgtgg ctacgccacc gtgacagatg ccgaggccgt gatcgtgcaa 480
gtgacccctc accacgtgct ggtggacgag tacacaggcg agtgggtgga cagccagttc 540
atcaacggca agtgctccaa ctacatctgc cccaccgtgc acaacagcac cacctggcac 600
agcgactaca aagtgaagac tagttccatc atcaacttcg agaagctgga attcggcctg 660
tgcgacagca acctgatcag catggacatc acattcttca gcgaggacgg cgagctgagc 720
agcctgggca aagagggcac aggcttcaga agcaactact tcgcctacga gacaggcggc 780
aaggcctgca agatgcagta ttgcaagcac tggggcgtgc ggctgcctag cggagtgtgg 840
ttcgagatgg ccgacaagga cctgttcgcc gctgccagat tccccgagtg tcctgagggc 900
agcagcatct ctgcccctag ccagacaagc gtggacgtgt ccctgatcca ggacgtggaa 960
agaatcctgg actacagcct gtgtcaggaa acctggtcca agatcagagc cggcctgccc 1020
atcagccctg tggacctgtc ttacctggcc cccaagaacc ctggaaccgg ccctgccttc 1080
accatcatta acggcaccct gaagtacttt gagacacggt acatccgggt ggacattgcc 1140
gcccctatcc tgagcagaat ggtgggaatg atcagcggca ccaccaccga gcgcgagctg 1200
tgggatgatt gggcccctta cgaggatgtg gaaatcggcc ccaacggcgt gctgagaacc 1260
agcagcggct acaagttccc cctgtacatg atcggccacg gcatgctgga ctccgacctg 1320
cacctgtcta gcaaggccca ggtgttcgag cacccccaca tccaggatgc cgccagccag 1380
ctgcctgacg acgagtctct gttcttcggc gacaccggcc tgagcaagaa ccccatcgag 1440
ctggtggaag gctggttcag cagctggaag tcctctatcg ccagcttctt cttcatcatc 1500
gggctgatta tcggcctgtt cctggtgctg agagtgggca tccacctgtg catcaagctg 1560
aagcacacca agaagaggca gatctacacc gacatcgaga tgaaccggct gggcaaatga 1620
<210> 32
<211> 1608
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> pTOP1中修饰的VSV-G VIL1(18)-OVA_CD8(191)
<400> 32
atgaagtgcc tgctgtacct ggccttcctg ttcatcggcg tgaactgcaa ggtgcagggc 60
gaggaaagca acgacaagaa gcttaagttt accatcgtgt tcccccacaa ccagaagggc 120
aactggaaga acgtgcccag caactaccac tactgcccca gcagcagcga cctgaactgg 180
cacaacgacc tgatcggcac cgccatccaa gtgaagatgc ccaagagcca caaggccatc 240
caggccgatg gctggatgtg ccacgccagc aaatgggtca ccacctgtga cttcaggtgg 300
tacggcccca agtacatcac ccagagcatc agatccttca cccccagcgt ggaacagtgc 360
aaagagagca tcgagcagac caagcagggc acctggctga accccggatt cccacctcag 420
agctgtggct acgccaccgt gacagatgcc gaggccgtga tcgtgcaagt gacccctcac 480
cacgtgctgg tggacgagta cacaggcgag tgggtggaca gccagttcat caacggcaag 540
tgctccaact acatctgccc caccgtgcac aacagcacca cctggcacag cgactacaaa 600
gtgaagacta gttccatcat caacttcgag aagctggaat tcggcctgtg cgacagcaac 660
ctgatcagca tggacatcac attcttcagc gaggacggcg agctgagcag cctgggcaaa 720
gagggcacag gcttcagaag caactacttc gcctacgaga caggcggcaa ggcctgcaag 780
atgcagtatt gcaagcactg gggcgtgcgg ctgcctagcg gagtgtggtt cgagatggcc 840
gacaaggacc tgttcgccgc tgccagattc cccgagtgtc ctgagggcag cagcatctct 900
gcccctagcc agacaagcgt ggacgtgtcc ctgatccagg acgtggaaag aatcctggac 960
tacagcctgt gtcaggaaac ctggtccaag atcagagccg gcctgcccat cagccctgtg 1020
gacctgtctt acctggcccc caagaaccct ggaaccggcc ctgccttcac catcattaac 1080
ggcaccctga agtactttga gacacggtac atccgggtgg acattgccgc ccctatcctg 1140
agcagaatgg tgggaatgat cagcggcacc accaccgagc gcgagctgtg ggatgattgg 1200
gccccttacg aggatgtgga aatcggcccc aacggcgtgc tgagaaccag cagcggctac 1260
aagttccccc tgtacatgat cggccacggc atgctggact ccgacctgca cctgtctagc 1320
aaggcccagg tgttcgagca cccccacatc caggatgccg ccagccagct gcctgacgac 1380
gagtctctgt tcttcggcga caccggcctg agcaagaacc ccatcgagct ggtggaaggc 1440
tggttcagca gctggaagtc ctctatcgcc agcttcttct tcatcatcgg gctgattatc 1500
ggcctgttcc tggtgctgag agtgggcatc cacctgtgca tcaagctgaa gcacaccaag 1560
aagaggcaga tctacaccga catcgagatg aaccggctgg gcaaatga 1608
<210> 33
<211> 1626
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> pTOP1中修饰的VSV-G TT(18)-OVA_CD8(191)
<400> 33
atgaagtgcc tgctgtacct ggccttcctg ttcatcggcg tgaactgcaa gcagtacatc 60
aaggccaaca gcaagttcat cggcatcacc gagctgaagc ttaagtttac catcgtgttc 120
ccccacaacc agaagggcaa ctggaagaac gtgcccagca actaccacta ctgccccagc 180
agcagcgacc tgaactggca caacgacctg atcggcaccg ccatccaagt gaagatgccc 240
aagagccaca aggccatcca ggccgatggc tggatgtgcc acgccagcaa atgggtcacc 300
acctgtgact tcaggtggta cggccccaag tacatcaccc agagcatcag atccttcacc 360
cccagcgtgg aacagtgcaa agagagcatc gagcagacca agcagggcac ctggctgaac 420
cccggattcc cacctcagag ctgtggctac gccaccgtga cagatgccga ggccgtgatc 480
gtgcaagtga cccctcacca cgtgctggtg gacgagtaca caggcgagtg ggtggacagc 540
cagttcatca acggcaagtg ctccaactac atctgcccca ccgtgcacaa cagcaccacc 600
tggcacagcg actacaaagt gaagactagt tccatcatca acttcgagaa gctggaattc 660
ggcctgtgcg acagcaacct gatcagcatg gacatcacat tcttcagcga ggacggcgag 720
ctgagcagcc tgggcaaaga gggcacaggc ttcagaagca actacttcgc ctacgagaca 780
ggcggcaagg cctgcaagat gcagtattgc aagcactggg gcgtgcggct gcctagcgga 840
gtgtggttcg agatggccga caaggacctg ttcgccgctg ccagattccc cgagtgtcct 900
gagggcagca gcatctctgc ccctagccag acaagcgtgg acgtgtccct gatccaggac 960
gtggaaagaa tcctggacta cagcctgtgt caggaaacct ggtccaagat cagagccggc 1020
ctgcccatca gccctgtgga cctgtcttac ctggccccca agaaccctgg aaccggccct 1080
gccttcacca tcattaacgg caccctgaag tactttgaga cacggtacat ccgggtggac 1140
attgccgccc ctatcctgag cagaatggtg ggaatgatca gcggcaccac caccgagcgc 1200
gagctgtggg atgattgggc cccttacgag gatgtggaaa tcggccccaa cggcgtgctg 1260
agaaccagca gcggctacaa gttccccctg tacatgatcg gccacggcat gctggactcc 1320
gacctgcacc tgtctagcaa ggcccaggtg ttcgagcacc cccacatcca ggatgccgcc 1380
agccagctgc ctgacgacga gtctctgttc ttcggcgaca ccggcctgag caagaacccc 1440
atcgagctgg tggaaggctg gttcagcagc tggaagtcct ctatcgccag cttcttcttc 1500
atcatcgggc tgattatcgg cctgttcctg gtgctgagag tgggcatcca cctgtgcatc 1560
aagctgaagc acaccaagaa gaggcagatc tacaccgaca tcgagatgaa ccggctgggc 1620
aaatga 1626
<210> 34
<211> 1629
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> pTOP1中修饰的VSV-G GP100_CD4(18)-OVA_CD8(191)
<400> 34
atgaagtgcc tgctgtacct ggccttcctg ttcatcggcg tgaactgcaa gtggaacaga 60
cagctgtacc ccgagtggac cgaggcccag agactggata agcttaagtt taccatcgtg 120
ttcccccaca accagaaggg caactggaag aacgtgccca gcaactacca ctactgcccc 180
agcagcagcg acctgaactg gcacaacgac ctgatcggca ccgccatcca agtgaagatg 240
cccaagagcc acaaggccat ccaggccgat ggctggatgt gccacgccag caaatgggtc 300
accacctgtg acttcaggtg gtacggcccc aagtacatca cccagagcat cagatccttc 360
acccccagcg tggaacagtg caaagagagc atcgagcaga ccaagcaggg cacctggctg 420
aaccccggat tcccacctca gagctgtggc tacgccaccg tgacagatgc cgaggccgtg 480
atcgtgcaag tgacccctca ccacgtgctg gtggacgagt acacaggcga gtgggtggac 540
agccagttca tcaacggcaa gtgctccaac tacatctgcc ccaccgtgca caacagcacc 600
acctggcaca gcgactacaa agtgaagact agttccatca tcaacttcga gaagctggaa 660
ttcggcctgt gcgacagcaa cctgatcagc atggacatca cattcttcag cgaggacggc 720
gagctgagca gcctgggcaa agagggcaca ggcttcagaa gcaactactt cgcctacgag 780
acaggcggca aggcctgcaa gatgcagtat tgcaagcact ggggcgtgcg gctgcctagc 840
ggagtgtggt tcgagatggc cgacaaggac ctgttcgccg ctgccagatt ccccgagtgt 900
cctgagggca gcagcatctc tgcccctagc cagacaagcg tggacgtgtc cctgatccag 960
gacgtggaaa gaatcctgga ctacagcctg tgtcaggaaa cctggtccaa gatcagagcc 1020
ggcctgccca tcagccctgt ggacctgtct tacctggccc ccaagaaccc tggaaccggc 1080
cctgccttca ccatcattaa cggcaccctg aagtactttg agacacggta catccgggtg 1140
gacattgccg cccctatcct gagcagaatg gtgggaatga tcagcggcac caccaccgag 1200
cgcgagctgt gggatgattg ggccccttac gaggatgtgg aaatcggccc caacggcgtg 1260
ctgagaacca gcagcggcta caagttcccc ctgtacatga tcggccacgg catgctggac 1320
tccgacctgc acctgtctag caaggcccag gtgttcgagc acccccacat ccaggatgcc 1380
gccagccagc tgcctgacga cgagtctctg ttcttcggcg acaccggcct gagcaagaac 1440
cccatcgagc tggtggaagg ctggttcagc agctggaagt cctctatcgc cagcttcttc 1500
ttcatcatcg ggctgattat cggcctgttc ctggtgctga gagtgggcat ccacctgtgc 1560
atcaagctga agcacaccaa gaagaggcag atctacaccg acatcgagat gaaccggctg 1620
ggcaaatga 1629
<210> 35
<211> 1635
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> pTOP1中修饰的VSV-G HP91(18)-OVA_CD8(191)
<400> 35
atgaagtgcc tgctgtacct ggccttcctg ttcatcggcg tgaactgcaa ggaccccaac 60
gcccctaaga ggcctcccag cgcattcttc ctgttctgca gcgagaagct taagtttacc 120
atcgtgttcc cccacaacca gaagggcaac tggaagaacg tgcccagcaa ctaccactac 180
tgccccagca gcagcgacct gaactggcac aacgacctga tcggcaccgc catccaagtg 240
aagatgccca agagccacaa ggccatccag gccgatggct ggatgtgcca cgccagcaaa 300
tgggtcacca cctgtgactt caggtggtac ggccccaagt acatcaccca gagcatcaga 360
tccttcaccc ccagcgtgga acagtgcaaa gagagcatcg agcagaccaa gcagggcacc 420
tggctgaacc ccggattccc acctcagagc tgtggctacg ccaccgtgac agatgccgag 480
gccgtgatcg tgcaagtgac ccctcaccac gtgctggtgg acgagtacac aggcgagtgg 540
gtggacagcc agttcatcaa cggcaagtgc tccaactaca tctgccccac cgtgcacaac 600
agcaccacct ggcacagcga ctacaaagtg aagactagtt ccatcatcaa cttcgagaag 660
ctggaattcg gcctgtgcga cagcaacctg atcagcatgg acatcacatt cttcagcgag 720
gacggcgagc tgagcagcct gggcaaagag ggcacaggct tcagaagcaa ctacttcgcc 780
tacgagacag gcggcaaggc ctgcaagatg cagtattgca agcactgggg cgtgcggctg 840
cctagcggag tgtggttcga gatggccgac aaggacctgt tcgccgctgc cagattcccc 900
gagtgtcctg agggcagcag catctctgcc cctagccaga caagcgtgga cgtgtccctg 960
atccaggacg tggaaagaat cctggactac agcctgtgtc aggaaacctg gtccaagatc 1020
agagccggcc tgcccatcag ccctgtggac ctgtcttacc tggcccccaa gaaccctgga 1080
accggccctg ccttcaccat cattaacggc accctgaagt actttgagac acggtacatc 1140
cgggtggaca ttgccgcccc tatcctgagc agaatggtgg gaatgatcag cggcaccacc 1200
accgagcgcg agctgtggga tgattgggcc ccttacgagg atgtggaaat cggccccaac 1260
ggcgtgctga gaaccagcag cggctacaag ttccccctgt acatgatcgg ccacggcatg 1320
ctggactccg acctgcacct gtctagcaag gcccaggtgt tcgagcaccc ccacatccag 1380
gatgccgcca gccagctgcc tgacgacgag tctctgttct tcggcgacac cggcctgagc 1440
aagaacccca tcgagctggt ggaaggctgg ttcagcagct ggaagtcctc tatcgccagc 1500
ttcttcttca tcatcgggct gattatcggc ctgttcctgg tgctgagagt gggcatccac 1560
ctgtgcatca agctgaagca caccaagaag aggcagatct acaccgacat cgagatgaac 1620
cggctgggca aatga 1635
<210> 36
<211> 1701
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> pTOP1中修饰的VSV-G P1A_LP(18)-OVA_CD8(191)
<400> 36
atgaagtgcc tgctgtacct ggccttcctg ttcatcggcg tgaactgcaa gaacctgctg 60
cacagataca gcctggaaga gatcctgccc tacctgggct ggctggtgtt cgccgtcgtg 120
acaacatcct tcctggccct gcagatgttc atcgacgccc tgtacgagga aaagcttaag 180
tttaccatcg tgttccccca caaccagaag ggcaactgga agaacgtgcc cagcaactac 240
cactactgcc ccagcagcag cgacctgaac tggcacaacg acctgatcgg caccgccatc 300
caagtgaaga tgcccaagag ccacaaggcc atccaggccg atggctggat gtgccacgcc 360
agcaaatggg tcaccacctg tgacttcagg tggtacggcc ccaagtacat cacccagagc 420
atcagatcct tcacccccag cgtggaacag tgcaaagaga gcatcgagca gaccaagcag 480
ggcacctggc tgaaccccgg attcccacct cagagctgtg gctacgccac cgtgacagat 540
gccgaggccg tgatcgtgca agtgacccct caccacgtgc tggtggacga gtacacaggc 600
gagtgggtgg acagccagtt catcaacggc aagtgctcca actacatctg ccccaccgtg 660
cacaacagca ccacctggca cagcgactac aaagtgaaga ctagttccat catcaacttc 720
gagaagctgg aattcggcct gtgcgacagc aacctgatca gcatggacat cacattcttc 780
agcgaggacg gcgagctgag cagcctgggc aaagagggca caggcttcag aagcaactac 840
ttcgcctacg agacaggcgg caaggcctgc aagatgcagt attgcaagca ctggggcgtg 900
cggctgccta gcggagtgtg gttcgagatg gccgacaagg acctgttcgc cgctgccaga 960
ttccccgagt gtcctgaggg cagcagcatc tctgccccta gccagacaag cgtggacgtg 1020
tccctgatcc aggacgtgga aagaatcctg gactacagcc tgtgtcagga aacctggtcc 1080
aagatcagag ccggcctgcc catcagccct gtggacctgt cttacctggc ccccaagaac 1140
cctggaaccg gccctgcctt caccatcatt aacggcaccc tgaagtactt tgagacacgg 1200
tacatccggg tggacattgc cgcccctatc ctgagcagaa tggtgggaat gatcagcggc 1260
accaccaccg agcgcgagct gtgggatgat tgggcccctt acgaggatgt ggaaatcggc 1320
cccaacggcg tgctgagaac cagcagcggc tacaagttcc ccctgtacat gatcggccac 1380
ggcatgctgg actccgacct gcacctgtct agcaaggccc aggtgttcga gcacccccac 1440
atccaggatg ccgccagcca gctgcctgac gacgagtctc tgttcttcgg cgacaccggc 1500
ctgagcaaga accccatcga gctggtggaa ggctggttca gcagctggaa gtcctctatc 1560
gccagcttct tcttcatcat cgggctgatt atcggcctgt tcctggtgct gagagtgggc 1620
atccacctgt gcatcaagct gaagcacacc aagaagaggc agatctacac cgacatcgag 1680
atgaaccggc tgggcaaatg a 1701
<210> 37
<211> 1686
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> pTOP1-GP100_LP(18)-OVA_CD8(191)中的VSV-G
<400> 37
atgaagtgcc tgctgtacct ggccttcctg ttcatcggcg tgaactgcaa gaaggtgccc 60
agaaaccagg actggctggg cgtgtccaga cagctgagaa caaaggcctg gaacaggcag 120
ctgtaccccg agtggacaga ggcccagaga ctggacaagc ttaagtttac catcgtgttc 180
ccccacaacc agaagggcaa ctggaagaac gtgcccagca actaccacta ctgccccagc 240
agcagcgacc tgaactggca caacgacctg atcggcaccg ccatccaagt gaagatgccc 300
aagagccaca aggccatcca ggccgatggc tggatgtgcc acgccagcaa atgggtcacc 360
acctgtgact tcaggtggta cggccccaag tacatcaccc agagcatcag atccttcacc 420
cccagcgtgg aacagtgcaa agagagcatc gagcagacca agcagggcac ctggctgaac 480
cccggattcc cacctcagag ctgtggctac gccaccgtga cagatgccga ggccgtgatc 540
gtgcaagtga cccctcacca cgtgctggtg gacgagtaca caggcgagtg ggtggacagc 600
cagttcatca acggcaagtg ctccaactac atctgcccca ccgtgcacaa cagcaccacc 660
tggcacagcg actacaaagt gaagactagt tccatcatca acttcgagaa gctggaattc 720
ggcctgtgcg acagcaacct gatcagcatg gacatcacat tcttcagcga ggacggcgag 780
ctgagcagcc tgggcaaaga gggcacaggc ttcagaagca actacttcgc ctacgagaca 840
ggcggcaagg cctgcaagat gcagtattgc aagcactggg gcgtgcggct gcctagcgga 900
gtgtggttcg agatggccga caaggacctg ttcgccgctg ccagattccc cgagtgtcct 960
gagggcagca gcatctctgc ccctagccag acaagcgtgg acgtgtccct gatccaggac 1020
gtggaaagaa tcctggacta cagcctgtgt caggaaacct ggtccaagat cagagccggc 1080
ctgcccatca gccctgtgga cctgtcttac ctggccccca agaaccctgg aaccggccct 1140
gccttcacca tcattaacgg caccctgaag tactttgaga cacggtacat ccgggtggac 1200
attgccgccc ctatcctgag cagaatggtg ggaatgatca gcggcaccac caccgagcgc 1260
gagctgtggg atgattgggc cccttacgag gatgtggaaa tcggccccaa cggcgtgctg 1320
agaaccagca gcggctacaa gttccccctg tacatgatcg gccacggcat gctggactcc 1380
gacctgcacc tgtctagcaa ggcccaggtg ttcgagcacc cccacatcca ggatgccgcc 1440
agccagctgc ctgacgacga gtctctgttc ttcggcgaca ccggcctgag caagaacccc 1500
atcgagctgg tggaaggctg gttcagcagc tggaagtcct ctatcgccag cttcttcttc 1560
atcatcgggc tgattatcgg cctgttcctg gtgctgagag tgggcatcca cctgtgcatc 1620
aagctgaagc acaccaagaa gaggcagatc tacaccgaca tcgagatgaa ccggctgggc 1680
aaatga 1686
<210> 38
<211> 543
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> pTOP1中修饰的VSV-G OVA_CD4(18)-OVA_CD8(191)
<400> 38
Met Lys Cys Leu Leu Tyr Leu Ala Phe Leu Phe Ile Gly Val Asn Cys
1 5 10 15
Lys Ile Ser Gln Ala Val His Ala Ala His Ala Glu Ile Asn Glu Ala
20 25 30
Gly Arg Lys Leu Lys Phe Thr Ile Val Phe Pro His Asn Gln Lys Gly
35 40 45
Asn Trp Lys Asn Val Pro Ser Asn Tyr His Tyr Cys Pro Ser Ser Ser
50 55 60
Asp Leu Asn Trp His Asn Asp Leu Ile Gly Thr Ala Ile Gln Val Lys
65 70 75 80
Met Pro Lys Ser His Lys Ala Ile Gln Ala Asp Gly Trp Met Cys His
85 90 95
Ala Ser Lys Trp Val Thr Thr Cys Asp Phe Arg Trp Tyr Gly Pro Lys
100 105 110
Tyr Ile Thr Gln Ser Ile Arg Ser Phe Thr Pro Ser Val Glu Gln Cys
115 120 125
Lys Glu Ser Ile Glu Gln Thr Lys Gln Gly Thr Trp Leu Asn Pro Gly
130 135 140
Phe Pro Pro Gln Ser Cys Gly Tyr Ala Thr Val Thr Asp Ala Glu Ala
145 150 155 160
Val Ile Val Gln Val Thr Pro His His Val Leu Val Asp Glu Tyr Thr
165 170 175
Gly Glu Trp Val Asp Ser Gln Phe Ile Asn Gly Lys Cys Ser Asn Tyr
180 185 190
Ile Cys Pro Thr Val His Asn Ser Thr Thr Trp His Ser Asp Tyr Lys
195 200 205
Val Lys Thr Ser Ser Ile Ile Asn Phe Glu Lys Leu Glu Phe Gly Leu
210 215 220
Cys Asp Ser Asn Leu Ile Ser Met Asp Ile Thr Phe Phe Ser Glu Asp
225 230 235 240
Gly Glu Leu Ser Ser Leu Gly Lys Glu Gly Thr Gly Phe Arg Ser Asn
245 250 255
Tyr Phe Ala Tyr Glu Thr Gly Gly Lys Ala Cys Lys Met Gln Tyr Cys
260 265 270
Lys His Trp Gly Val Arg Leu Pro Ser Gly Val Trp Phe Glu Met Ala
275 280 285
Asp Lys Asp Leu Phe Ala Ala Ala Arg Phe Pro Glu Cys Pro Glu Gly
290 295 300
Ser Ser Ile Ser Ala Pro Ser Gln Thr Ser Val Asp Val Ser Leu Ile
305 310 315 320
Gln Asp Val Glu Arg Ile Leu Asp Tyr Ser Leu Cys Gln Glu Thr Trp
325 330 335
Ser Lys Ile Arg Ala Gly Leu Pro Ile Ser Pro Val Asp Leu Ser Tyr
340 345 350
Leu Ala Pro Lys Asn Pro Gly Thr Gly Pro Ala Phe Thr Ile Ile Asn
355 360 365
Gly Thr Leu Lys Tyr Phe Glu Thr Arg Tyr Ile Arg Val Asp Ile Ala
370 375 380
Ala Pro Ile Leu Ser Arg Met Val Gly Met Ile Ser Gly Thr Thr Thr
385 390 395 400
Glu Arg Glu Leu Trp Asp Asp Trp Ala Pro Tyr Glu Asp Val Glu Ile
405 410 415
Gly Pro Asn Gly Val Leu Arg Thr Ser Ser Gly Tyr Lys Phe Pro Leu
420 425 430
Tyr Met Ile Gly His Gly Met Leu Asp Ser Asp Leu His Leu Ser Ser
435 440 445
Lys Ala Gln Val Phe Glu His Pro His Ile Gln Asp Ala Ala Ser Gln
450 455 460
Leu Pro Asp Asp Glu Ser Leu Phe Phe Gly Asp Thr Gly Leu Ser Lys
465 470 475 480
Asn Pro Ile Glu Leu Val Glu Gly Trp Phe Ser Ser Trp Lys Ser Ser
485 490 495
Ile Ala Ser Phe Phe Phe Ile Ile Gly Leu Ile Ile Gly Leu Phe Leu
500 505 510
Val Leu Arg Val Gly Ile His Leu Cys Ile Lys Leu Lys His Thr Lys
515 520 525
Lys Arg Gln Ile Tyr Thr Asp Ile Glu Met Asn Arg Leu Gly Lys
530 535 540
<210> 39
<211> 523
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> pTOP1中修饰的VSV-G OVA_CD8(191)
<400> 39
Met Lys Cys Leu Leu Tyr Leu Ala Phe Leu Phe Ile Gly Val Asn Cys
1 5 10 15
Lys Phe Thr Ile Val Phe Pro His Asn Gln Lys Gly Asn Trp Lys Asn
20 25 30
Val Pro Ser Asn Tyr His Tyr Cys Pro Ser Ser Ser Asp Leu Asn Trp
35 40 45
His Asn Asp Leu Ile Gly Thr Ala Ile Gln Val Lys Met Pro Lys Ser
50 55 60
His Lys Ala Ile Gln Ala Asp Gly Trp Met Cys His Ala Ser Lys Trp
65 70 75 80
Val Thr Thr Cys Asp Phe Arg Trp Tyr Gly Pro Lys Tyr Ile Thr Gln
85 90 95
Ser Ile Arg Ser Phe Thr Pro Ser Val Glu Gln Cys Lys Glu Ser Ile
100 105 110
Glu Gln Thr Lys Gln Gly Thr Trp Leu Asn Pro Gly Phe Pro Pro Gln
115 120 125
Ser Cys Gly Tyr Ala Thr Val Thr Asp Ala Glu Ala Val Ile Val Gln
130 135 140
Val Thr Pro His His Val Leu Val Asp Glu Tyr Thr Gly Glu Trp Val
145 150 155 160
Asp Ser Gln Phe Ile Asn Gly Lys Cys Ser Asn Tyr Ile Cys Pro Thr
165 170 175
Val His Asn Ser Thr Thr Trp His Ser Asp Tyr Lys Val Lys Thr Ser
180 185 190
Ser Ile Ile Asn Phe Glu Lys Leu Glu Phe Gly Leu Cys Asp Ser Asn
195 200 205
Leu Ile Ser Met Asp Ile Thr Phe Phe Ser Glu Asp Gly Glu Leu Ser
210 215 220
Ser Leu Gly Lys Glu Gly Thr Gly Phe Arg Ser Asn Tyr Phe Ala Tyr
225 230 235 240
Glu Thr Gly Gly Lys Ala Cys Lys Met Gln Tyr Cys Lys His Trp Gly
245 250 255
Val Arg Leu Pro Ser Gly Val Trp Phe Glu Met Ala Asp Lys Asp Leu
260 265 270
Phe Ala Ala Ala Arg Phe Pro Glu Cys Pro Glu Gly Ser Ser Ile Ser
275 280 285
Ala Pro Ser Gln Thr Ser Val Asp Val Ser Leu Ile Gln Asp Val Glu
290 295 300
Arg Ile Leu Asp Tyr Ser Leu Cys Gln Glu Thr Trp Ser Lys Ile Arg
305 310 315 320
Ala Gly Leu Pro Ile Ser Pro Val Asp Leu Ser Tyr Leu Ala Pro Lys
325 330 335
Asn Pro Gly Thr Gly Pro Ala Phe Thr Ile Ile Asn Gly Thr Leu Lys
340 345 350
Tyr Phe Glu Thr Arg Tyr Ile Arg Val Asp Ile Ala Ala Pro Ile Leu
355 360 365
Ser Arg Met Val Gly Met Ile Ser Gly Thr Thr Thr Glu Arg Glu Leu
370 375 380
Trp Asp Asp Trp Ala Pro Tyr Glu Asp Val Glu Ile Gly Pro Asn Gly
385 390 395 400
Val Leu Arg Thr Ser Ser Gly Tyr Lys Phe Pro Leu Tyr Met Ile Gly
405 410 415
His Gly Met Leu Asp Ser Asp Leu His Leu Ser Ser Lys Ala Gln Val
420 425 430
Phe Glu His Pro His Ile Gln Asp Ala Ala Ser Gln Leu Pro Asp Asp
435 440 445
Glu Ser Leu Phe Phe Gly Asp Thr Gly Leu Ser Lys Asn Pro Ile Glu
450 455 460
Leu Val Glu Gly Trp Phe Ser Ser Trp Lys Ser Ser Ile Ala Ser Phe
465 470 475 480
Phe Phe Ile Ile Gly Leu Ile Ile Gly Leu Phe Leu Val Leu Arg Val
485 490 495
Gly Ile His Leu Cys Ile Lys Leu Lys His Thr Lys Lys Arg Gln Ile
500 505 510
Tyr Thr Asp Ile Glu Met Asn Arg Leu Gly Lys
515 520
<210> 40
<211> 532
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> pTOP1中修饰的VSV-G OVA_CD4(191)
<400> 40
Met Lys Cys Leu Leu Tyr Leu Ala Phe Leu Phe Ile Gly Val Asn Cys
1 5 10 15
Lys Phe Thr Ile Val Phe Pro His Asn Gln Lys Gly Asn Trp Lys Asn
20 25 30
Val Pro Ser Asn Tyr His Tyr Cys Pro Ser Ser Ser Asp Leu Asn Trp
35 40 45
His Asn Asp Leu Ile Gly Thr Ala Ile Gln Val Lys Met Pro Lys Ser
50 55 60
His Lys Ala Ile Gln Ala Asp Gly Trp Met Cys His Ala Ser Lys Trp
65 70 75 80
Val Thr Thr Cys Asp Phe Arg Trp Tyr Gly Pro Lys Tyr Ile Thr Gln
85 90 95
Ser Ile Arg Ser Phe Thr Pro Ser Val Glu Gln Cys Lys Glu Ser Ile
100 105 110
Glu Gln Thr Lys Gln Gly Thr Trp Leu Asn Pro Gly Phe Pro Pro Gln
115 120 125
Ser Cys Gly Tyr Ala Thr Val Thr Asp Ala Glu Ala Val Ile Val Gln
130 135 140
Val Thr Pro His His Val Leu Val Asp Glu Tyr Thr Gly Glu Trp Val
145 150 155 160
Asp Ser Gln Phe Ile Asn Gly Lys Cys Ser Asn Tyr Ile Cys Pro Thr
165 170 175
Val His Asn Ser Thr Thr Trp His Ser Asp Tyr Lys Val Lys Thr Ser
180 185 190
Ile Ser Gln Ala Val His Ala Ala His Ala Glu Ile Asn Glu Ala Gly
195 200 205
Arg Glu Phe Gly Leu Cys Asp Ser Asn Leu Ile Ser Met Asp Ile Thr
210 215 220
Phe Phe Ser Glu Asp Gly Glu Leu Ser Ser Leu Gly Lys Glu Gly Thr
225 230 235 240
Gly Phe Arg Ser Asn Tyr Phe Ala Tyr Glu Thr Gly Gly Lys Ala Cys
245 250 255
Lys Met Gln Tyr Cys Lys His Trp Gly Val Arg Leu Pro Ser Gly Val
260 265 270
Trp Phe Glu Met Ala Asp Lys Asp Leu Phe Ala Ala Ala Arg Phe Pro
275 280 285
Glu Cys Pro Glu Gly Ser Ser Ile Ser Ala Pro Ser Gln Thr Ser Val
290 295 300
Asp Val Ser Leu Ile Gln Asp Val Glu Arg Ile Leu Asp Tyr Ser Leu
305 310 315 320
Cys Gln Glu Thr Trp Ser Lys Ile Arg Ala Gly Leu Pro Ile Ser Pro
325 330 335
Val Asp Leu Ser Tyr Leu Ala Pro Lys Asn Pro Gly Thr Gly Pro Ala
340 345 350
Phe Thr Ile Ile Asn Gly Thr Leu Lys Tyr Phe Glu Thr Arg Tyr Ile
355 360 365
Arg Val Asp Ile Ala Ala Pro Ile Leu Ser Arg Met Val Gly Met Ile
370 375 380
Ser Gly Thr Thr Thr Glu Arg Glu Leu Trp Asp Asp Trp Ala Pro Tyr
385 390 395 400
Glu Asp Val Glu Ile Gly Pro Asn Gly Val Leu Arg Thr Ser Ser Gly
405 410 415
Tyr Lys Phe Pro Leu Tyr Met Ile Gly His Gly Met Leu Asp Ser Asp
420 425 430
Leu His Leu Ser Ser Lys Ala Gln Val Phe Glu His Pro His Ile Gln
435 440 445
Asp Ala Ala Ser Gln Leu Pro Asp Asp Glu Ser Leu Phe Phe Gly Asp
450 455 460
Thr Gly Leu Ser Lys Asn Pro Ile Glu Leu Val Glu Gly Trp Phe Ser
465 470 475 480
Ser Trp Lys Ser Ser Ile Ala Ser Phe Phe Phe Ile Ile Gly Leu Ile
485 490 495
Ile Gly Leu Phe Leu Val Leu Arg Val Gly Ile His Leu Cys Ile Lys
500 505 510
Leu Lys His Thr Lys Lys Arg Gln Ile Tyr Thr Asp Ile Glu Met Asn
515 520 525
Arg Leu Gly Lys
530
<210> 41
<211> 525
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> pTOP1中修饰的VSV-G MELANA_CD8(191)
<400> 41
Met Lys Cys Leu Leu Tyr Leu Ala Phe Leu Phe Ile Gly Val Asn Cys
1 5 10 15
Lys Phe Thr Ile Val Phe Pro His Asn Gln Lys Gly Asn Trp Lys Asn
20 25 30
Val Pro Ser Asn Tyr His Tyr Cys Pro Ser Ser Ser Asp Leu Asn Trp
35 40 45
His Asn Asp Leu Ile Gly Thr Ala Ile Gln Val Lys Met Pro Lys Ser
50 55 60
His Lys Ala Ile Gln Ala Asp Gly Trp Met Cys His Ala Ser Lys Trp
65 70 75 80
Val Thr Thr Cys Asp Phe Arg Trp Tyr Gly Pro Lys Tyr Ile Thr Gln
85 90 95
Ser Ile Arg Ser Phe Thr Pro Ser Val Glu Gln Cys Lys Glu Ser Ile
100 105 110
Glu Gln Thr Lys Gln Gly Thr Trp Leu Asn Pro Gly Phe Pro Pro Gln
115 120 125
Ser Cys Gly Tyr Ala Thr Val Thr Asp Ala Glu Ala Val Ile Val Gln
130 135 140
Val Thr Pro His His Val Leu Val Asp Glu Tyr Thr Gly Glu Trp Val
145 150 155 160
Asp Ser Gln Phe Ile Asn Gly Lys Cys Ser Asn Tyr Ile Cys Pro Thr
165 170 175
Val His Asn Ser Thr Thr Trp His Ser Asp Tyr Lys Val Lys Thr Ser
180 185 190
Glu Leu Ala Gly Ile Gly Ile Leu Thr Val Glu Phe Gly Leu Cys Asp
195 200 205
Ser Asn Leu Ile Ser Met Asp Ile Thr Phe Phe Ser Glu Asp Gly Glu
210 215 220
Leu Ser Ser Leu Gly Lys Glu Gly Thr Gly Phe Arg Ser Asn Tyr Phe
225 230 235 240
Ala Tyr Glu Thr Gly Gly Lys Ala Cys Lys Met Gln Tyr Cys Lys His
245 250 255
Trp Gly Val Arg Leu Pro Ser Gly Val Trp Phe Glu Met Ala Asp Lys
260 265 270
Asp Leu Phe Ala Ala Ala Arg Phe Pro Glu Cys Pro Glu Gly Ser Ser
275 280 285
Ile Ser Ala Pro Ser Gln Thr Ser Val Asp Val Ser Leu Ile Gln Asp
290 295 300
Val Glu Arg Ile Leu Asp Tyr Ser Leu Cys Gln Glu Thr Trp Ser Lys
305 310 315 320
Ile Arg Ala Gly Leu Pro Ile Ser Pro Val Asp Leu Ser Tyr Leu Ala
325 330 335
Pro Lys Asn Pro Gly Thr Gly Pro Ala Phe Thr Ile Ile Asn Gly Thr
340 345 350
Leu Lys Tyr Phe Glu Thr Arg Tyr Ile Arg Val Asp Ile Ala Ala Pro
355 360 365
Ile Leu Ser Arg Met Val Gly Met Ile Ser Gly Thr Thr Thr Glu Arg
370 375 380
Glu Leu Trp Asp Asp Trp Ala Pro Tyr Glu Asp Val Glu Ile Gly Pro
385 390 395 400
Asn Gly Val Leu Arg Thr Ser Ser Gly Tyr Lys Phe Pro Leu Tyr Met
405 410 415
Ile Gly His Gly Met Leu Asp Ser Asp Leu His Leu Ser Ser Lys Ala
420 425 430
Gln Val Phe Glu His Pro His Ile Gln Asp Ala Ala Ser Gln Leu Pro
435 440 445
Asp Asp Glu Ser Leu Phe Phe Gly Asp Thr Gly Leu Ser Lys Asn Pro
450 455 460
Ile Glu Leu Val Glu Gly Trp Phe Ser Ser Trp Lys Ser Ser Ile Ala
465 470 475 480
Ser Phe Phe Phe Ile Ile Gly Leu Ile Ile Gly Leu Phe Leu Val Leu
485 490 495
Arg Val Gly Ile His Leu Cys Ile Lys Leu Lys His Thr Lys Lys Arg
500 505 510
Gln Ile Tyr Thr Asp Ile Glu Met Asn Arg Leu Gly Lys
515 520 525
<210> 42
<211> 524
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> pTOP1中修饰的VSV-G GP100_CD8(191)
<400> 42
Met Lys Cys Leu Leu Tyr Leu Ala Phe Leu Phe Ile Gly Val Asn Cys
1 5 10 15
Lys Phe Thr Ile Val Phe Pro His Asn Gln Lys Gly Asn Trp Lys Asn
20 25 30
Val Pro Ser Asn Tyr His Tyr Cys Pro Ser Ser Ser Asp Leu Asn Trp
35 40 45
His Asn Asp Leu Ile Gly Thr Ala Ile Gln Val Lys Met Pro Lys Ser
50 55 60
His Lys Ala Ile Gln Ala Asp Gly Trp Met Cys His Ala Ser Lys Trp
65 70 75 80
Val Thr Thr Cys Asp Phe Arg Trp Tyr Gly Pro Lys Tyr Ile Thr Gln
85 90 95
Ser Ile Arg Ser Phe Thr Pro Ser Val Glu Gln Cys Lys Glu Ser Ile
100 105 110
Glu Gln Thr Lys Gln Gly Thr Trp Leu Asn Pro Gly Phe Pro Pro Gln
115 120 125
Ser Cys Gly Tyr Ala Thr Val Thr Asp Ala Glu Ala Val Ile Val Gln
130 135 140
Val Thr Pro His His Val Leu Val Asp Glu Tyr Thr Gly Glu Trp Val
145 150 155 160
Asp Ser Gln Phe Ile Asn Gly Lys Cys Ser Asn Tyr Ile Cys Pro Thr
165 170 175
Val His Asn Ser Thr Thr Trp His Ser Asp Tyr Lys Val Lys Thr Ser
180 185 190
Ile Met Asp Gln Val Pro Phe Ser Val Glu Phe Gly Leu Cys Asp Ser
195 200 205
Asn Leu Ile Ser Met Asp Ile Thr Phe Phe Ser Glu Asp Gly Glu Leu
210 215 220
Ser Ser Leu Gly Lys Glu Gly Thr Gly Phe Arg Ser Asn Tyr Phe Ala
225 230 235 240
Tyr Glu Thr Gly Gly Lys Ala Cys Lys Met Gln Tyr Cys Lys His Trp
245 250 255
Gly Val Arg Leu Pro Ser Gly Val Trp Phe Glu Met Ala Asp Lys Asp
260 265 270
Leu Phe Ala Ala Ala Arg Phe Pro Glu Cys Pro Glu Gly Ser Ser Ile
275 280 285
Ser Ala Pro Ser Gln Thr Ser Val Asp Val Ser Leu Ile Gln Asp Val
290 295 300
Glu Arg Ile Leu Asp Tyr Ser Leu Cys Gln Glu Thr Trp Ser Lys Ile
305 310 315 320
Arg Ala Gly Leu Pro Ile Ser Pro Val Asp Leu Ser Tyr Leu Ala Pro
325 330 335
Lys Asn Pro Gly Thr Gly Pro Ala Phe Thr Ile Ile Asn Gly Thr Leu
340 345 350
Lys Tyr Phe Glu Thr Arg Tyr Ile Arg Val Asp Ile Ala Ala Pro Ile
355 360 365
Leu Ser Arg Met Val Gly Met Ile Ser Gly Thr Thr Thr Glu Arg Glu
370 375 380
Leu Trp Asp Asp Trp Ala Pro Tyr Glu Asp Val Glu Ile Gly Pro Asn
385 390 395 400
Gly Val Leu Arg Thr Ser Ser Gly Tyr Lys Phe Pro Leu Tyr Met Ile
405 410 415
Gly His Gly Met Leu Asp Ser Asp Leu His Leu Ser Ser Lys Ala Gln
420 425 430
Val Phe Glu His Pro His Ile Gln Asp Ala Ala Ser Gln Leu Pro Asp
435 440 445
Asp Glu Ser Leu Phe Phe Gly Asp Thr Gly Leu Ser Lys Asn Pro Ile
450 455 460
Glu Leu Val Glu Gly Trp Phe Ser Ser Trp Lys Ser Ser Ile Ala Ser
465 470 475 480
Phe Phe Phe Ile Ile Gly Leu Ile Ile Gly Leu Phe Leu Val Leu Arg
485 490 495
Val Gly Ile His Leu Cys Ile Lys Leu Lys His Thr Lys Lys Arg Gln
500 505 510
Ile Tyr Thr Asp Ile Glu Met Asn Arg Leu Gly Lys
515 520
<210> 43
<211> 524
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> pTOP1中修饰的VSV-G P1A_CD8(191)
<400> 43
Met Lys Cys Leu Leu Tyr Leu Ala Phe Leu Phe Ile Gly Val Asn Cys
1 5 10 15
Lys Phe Thr Ile Val Phe Pro His Asn Gln Lys Gly Asn Trp Lys Asn
20 25 30
Val Pro Ser Asn Tyr His Tyr Cys Pro Ser Ser Ser Asp Leu Asn Trp
35 40 45
His Asn Asp Leu Ile Gly Thr Ala Ile Gln Val Lys Met Pro Lys Ser
50 55 60
His Lys Ala Ile Gln Ala Asp Gly Trp Met Cys His Ala Ser Lys Trp
65 70 75 80
Val Thr Thr Cys Asp Phe Arg Trp Tyr Gly Pro Lys Tyr Ile Thr Gln
85 90 95
Ser Ile Arg Ser Phe Thr Pro Ser Val Glu Gln Cys Lys Glu Ser Ile
100 105 110
Glu Gln Thr Lys Gln Gly Thr Trp Leu Asn Pro Gly Phe Pro Pro Gln
115 120 125
Ser Cys Gly Tyr Ala Thr Val Thr Asp Ala Glu Ala Val Ile Val Gln
130 135 140
Val Thr Pro His His Val Leu Val Asp Glu Tyr Thr Gly Glu Trp Val
145 150 155 160
Asp Ser Gln Phe Ile Asn Gly Lys Cys Ser Asn Tyr Ile Cys Pro Thr
165 170 175
Val His Asn Ser Thr Thr Trp His Ser Asp Tyr Lys Val Lys Thr Ser
180 185 190
Leu Pro Tyr Leu Gly Trp Leu Val Phe Glu Phe Gly Leu Cys Asp Ser
195 200 205
Asn Leu Ile Ser Met Asp Ile Thr Phe Phe Ser Glu Asp Gly Glu Leu
210 215 220
Ser Ser Leu Gly Lys Glu Gly Thr Gly Phe Arg Ser Asn Tyr Phe Ala
225 230 235 240
Tyr Glu Thr Gly Gly Lys Ala Cys Lys Met Gln Tyr Cys Lys His Trp
245 250 255
Gly Val Arg Leu Pro Ser Gly Val Trp Phe Glu Met Ala Asp Lys Asp
260 265 270
Leu Phe Ala Ala Ala Arg Phe Pro Glu Cys Pro Glu Gly Ser Ser Ile
275 280 285
Ser Ala Pro Ser Gln Thr Ser Val Asp Val Ser Leu Ile Gln Asp Val
290 295 300
Glu Arg Ile Leu Asp Tyr Ser Leu Cys Gln Glu Thr Trp Ser Lys Ile
305 310 315 320
Arg Ala Gly Leu Pro Ile Ser Pro Val Asp Leu Ser Tyr Leu Ala Pro
325 330 335
Lys Asn Pro Gly Thr Gly Pro Ala Phe Thr Ile Ile Asn Gly Thr Leu
340 345 350
Lys Tyr Phe Glu Thr Arg Tyr Ile Arg Val Asp Ile Ala Ala Pro Ile
355 360 365
Leu Ser Arg Met Val Gly Met Ile Ser Gly Thr Thr Thr Glu Arg Glu
370 375 380
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Gly His Gly Met Leu Asp Ser Asp Leu His Leu Ser Ser Lys Ala Gln
420 425 430
Val Phe Glu His Pro His Ile Gln Asp Ala Ala Ser Gln Leu Pro Asp
435 440 445
Asp Glu Ser Leu Phe Phe Gly Asp Thr Gly Leu Ser Lys Asn Pro Ile
450 455 460
Glu Leu Val Glu Gly Trp Phe Ser Ser Trp Lys Ser Ser Ile Ala Ser
465 470 475 480
Phe Phe Phe Ile Ile Gly Leu Ile Ile Gly Leu Phe Leu Val Leu Arg
485 490 495
Val Gly Ile His Leu Cys Ile Lys Leu Lys His Thr Lys Lys Arg Gln
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Ile Tyr Thr Asp Ile Glu Met Asn Arg Leu Gly Lys
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Gly Val Arg Leu Pro Ser Gly Val Trp Phe Glu Met Ala Asp Lys Asp
260 265 270
Leu Phe Ala Ala Ala Arg Phe Pro Glu Cys Pro Glu Gly Ser Ser Ile
275 280 285
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370 375 380
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435 440 445
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450 455 460
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500 505 510
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515 520
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Leu Ile Ser Met Asp Ile Thr Phe Phe Ser Glu Asp Gly Glu Leu Ser
225 230 235 240
Ser Leu Gly Lys Glu Gly Thr Gly Phe Arg Ser Asn Tyr Phe Ala Tyr
245 250 255
Glu Thr Gly Gly Lys Ala Cys Lys Met Gln Tyr Cys Lys His Trp Gly
260 265 270
Val Arg Leu Pro Ser Gly Val Trp Phe Glu Met Ala Asp Lys Asp Leu
275 280 285
Phe Ala Ala Ala Arg Phe Pro Glu Cys Pro Glu Gly Ser Ser Ile Ser
290 295 300
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515 520 525
Glu Met Asn Arg Leu Gly Lys
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> pTOP1中修饰的VSV-G TT(18)-OVA_CD8(191)
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195 200 205
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Ser Asn Leu Ile Ser Met Asp Ile Thr Phe Phe Ser Glu Asp Gly Glu
225 230 235 240
Leu Ser Ser Leu Gly Lys Glu Gly Thr Gly Phe Arg Ser Asn Tyr Phe
245 250 255
Ala Tyr Glu Thr Gly Gly Lys Ala Cys Lys Met Gln Tyr Cys Lys His
260 265 270
Trp Gly Val Arg Leu Pro Ser Gly Val Trp Phe Glu Met Ala Asp Lys
275 280 285
Asp Leu Phe Ala Ala Ala Arg Phe Pro Glu Cys Pro Glu Gly Ser Ser
290 295 300
Ile Ser Ala Pro Ser Gln Thr Ser Val Asp Val Ser Leu Ile Gln Asp
305 310 315 320
Val Glu Arg Ile Leu Asp Tyr Ser Leu Cys Gln Glu Thr Trp Ser Lys
325 330 335
Ile Arg Ala Gly Leu Pro Ile Ser Pro Val Asp Leu Ser Tyr Leu Ala
340 345 350
Pro Lys Asn Pro Gly Thr Gly Pro Ala Phe Thr Ile Ile Asn Gly Thr
355 360 365
Leu Lys Tyr Phe Glu Thr Arg Tyr Ile Arg Val Asp Ile Ala Ala Pro
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435 440 445
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Ser Phe Phe Phe Ile Ile Gly Leu Ile Ile Gly Leu Phe Leu Val Leu
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515 520 525
Gln Ile Tyr Thr Asp Ile Glu Met Asn Arg Leu Gly Lys
530 535 540
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<211> 542
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> pTOP1中修饰的VSV-G GP100_CD4(18)-OVA_CD8(191)
<400> 48
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115 120 125
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Ile Val Gln Val Thr Pro His His Val Leu Val Asp Glu Tyr Thr Gly
165 170 175
Glu Trp Val Asp Ser Gln Phe Ile Asn Gly Lys Cys Ser Asn Tyr Ile
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195 200 205
Lys Thr Ser Ser Ile Ile Asn Phe Glu Lys Leu Glu Phe Gly Leu Cys
210 215 220
Asp Ser Asn Leu Ile Ser Met Asp Ile Thr Phe Phe Ser Glu Asp Gly
225 230 235 240
Glu Leu Ser Ser Leu Gly Lys Glu Gly Thr Gly Phe Arg Ser Asn Tyr
245 250 255
Phe Ala Tyr Glu Thr Gly Gly Lys Ala Cys Lys Met Gln Tyr Cys Lys
260 265 270
His Trp Gly Val Arg Leu Pro Ser Gly Val Trp Phe Glu Met Ala Asp
275 280 285
Lys Asp Leu Phe Ala Ala Ala Arg Phe Pro Glu Cys Pro Glu Gly Ser
290 295 300
Ser Ile Ser Ala Pro Ser Gln Thr Ser Val Asp Val Ser Leu Ile Gln
305 310 315 320
Asp Val Glu Arg Ile Leu Asp Tyr Ser Leu Cys Gln Glu Thr Trp Ser
325 330 335
Lys Ile Arg Ala Gly Leu Pro Ile Ser Pro Val Asp Leu Ser Tyr Leu
340 345 350
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355 360 365
Thr Leu Lys Tyr Phe Glu Thr Arg Tyr Ile Arg Val Asp Ile Ala Ala
370 375 380
Pro Ile Leu Ser Arg Met Val Gly Met Ile Ser Gly Thr Thr Thr Glu
385 390 395 400
Arg Glu Leu Trp Asp Asp Trp Ala Pro Tyr Glu Asp Val Glu Ile Gly
405 410 415
Pro Asn Gly Val Leu Arg Thr Ser Ser Gly Tyr Lys Phe Pro Leu Tyr
420 425 430
Met Ile Gly His Gly Met Leu Asp Ser Asp Leu His Leu Ser Ser Lys
435 440 445
Ala Gln Val Phe Glu His Pro His Ile Gln Asp Ala Ala Ser Gln Leu
450 455 460
Pro Asp Asp Glu Ser Leu Phe Phe Gly Asp Thr Gly Leu Ser Lys Asn
465 470 475 480
Pro Ile Glu Leu Val Glu Gly Trp Phe Ser Ser Trp Lys Ser Ser Ile
485 490 495
Ala Ser Phe Phe Phe Ile Ile Gly Leu Ile Ile Gly Leu Phe Leu Val
500 505 510
Leu Arg Val Gly Ile His Leu Cys Ile Lys Leu Lys His Thr Lys Lys
515 520 525
Arg Gln Ile Tyr Thr Asp Ile Glu Met Asn Arg Leu Gly Lys
530 535 540
<210> 49
<211> 544
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> pTOP1中修饰的VSV-G HP91(18)-OVA_CD8(191)
<400> 49
Met Lys Cys Leu Leu Tyr Leu Ala Phe Leu Phe Ile Gly Val Asn Cys
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Lys Met Pro Lys Ser His Lys Ala Ile Gln Ala Asp Gly Trp Met Cys
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Gly Phe Pro Pro Gln Ser Cys Gly Tyr Ala Thr Val Thr Asp Ala Glu
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Ala Val Ile Val Gln Val Thr Pro His His Val Leu Val Asp Glu Tyr
165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
Lys Val Lys Thr Ser Ser Ile Ile Asn Phe Glu Lys Leu Glu Phe Gly
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Leu Cys Asp Ser Asn Leu Ile Ser Met Asp Ile Thr Phe Phe Ser Glu
225 230 235 240
Asp Gly Glu Leu Ser Ser Leu Gly Lys Glu Gly Thr Gly Phe Arg Ser
245 250 255
Asn Tyr Phe Ala Tyr Glu Thr Gly Gly Lys Ala Cys Lys Met Gln Tyr
260 265 270
Cys Lys His Trp Gly Val Arg Leu Pro Ser Gly Val Trp Phe Glu Met
275 280 285
Ala Asp Lys Asp Leu Phe Ala Ala Ala Arg Phe Pro Glu Cys Pro Glu
290 295 300
Gly Ser Ser Ile Ser Ala Pro Ser Gln Thr Ser Val Asp Val Ser Leu
305 310 315 320
Ile Gln Asp Val Glu Arg Ile Leu Asp Tyr Ser Leu Cys Gln Glu Thr
325 330 335
Trp Ser Lys Ile Arg Ala Gly Leu Pro Ile Ser Pro Val Asp Leu Ser
340 345 350
Tyr Leu Ala Pro Lys Asn Pro Gly Thr Gly Pro Ala Phe Thr Ile Ile
355 360 365
Asn Gly Thr Leu Lys Tyr Phe Glu Thr Arg Tyr Ile Arg Val Asp Ile
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Ala Ala Pro Ile Leu Ser Arg Met Val Gly Met Ile Ser Gly Thr Thr
385 390 395 400
Thr Glu Arg Glu Leu Trp Asp Asp Trp Ala Pro Tyr Glu Asp Val Glu
405 410 415
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Leu Tyr Met Ile Gly His Gly Met Leu Asp Ser Asp Leu His Leu Ser
435 440 445
Ser Lys Ala Gln Val Phe Glu His Pro His Ile Gln Asp Ala Ala Ser
450 455 460
Gln Leu Pro Asp Asp Glu Ser Leu Phe Phe Gly Asp Thr Gly Leu Ser
465 470 475 480
Lys Asn Pro Ile Glu Leu Val Glu Gly Trp Phe Ser Ser Trp Lys Ser
485 490 495
Ser Ile Ala Ser Phe Phe Phe Ile Ile Gly Leu Ile Ile Gly Leu Phe
500 505 510
Leu Val Leu Arg Val Gly Ile His Leu Cys Ile Lys Leu Lys His Thr
515 520 525
Lys Lys Arg Gln Ile Tyr Thr Asp Ile Glu Met Asn Arg Leu Gly Lys
530 535 540
<210> 50
<211> 566
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> pTOP1中修饰的VSV-G P1A_LP(18)-OVA_CD8(191)
<400> 50
Met Lys Cys Leu Leu Tyr Leu Ala Phe Leu Phe Ile Gly Val Asn Cys
1 5 10 15
Lys Asn Leu Leu His Arg Tyr Ser Leu Glu Glu Ile Leu Pro Tyr Leu
20 25 30
Gly Trp Leu Val Phe Ala Val Val Thr Thr Ser Phe Leu Ala Leu Gln
35 40 45
Met Phe Ile Asp Ala Leu Tyr Glu Glu Lys Leu Lys Phe Thr Ile Val
50 55 60
Phe Pro His Asn Gln Lys Gly Asn Trp Lys Asn Val Pro Ser Asn Tyr
65 70 75 80
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Gly Thr Ala Ile Gln Val Lys Met Pro Lys Ser His Lys Ala Ile Gln
100 105 110
Ala Asp Gly Trp Met Cys His Ala Ser Lys Trp Val Thr Thr Cys Asp
115 120 125
Phe Arg Trp Tyr Gly Pro Lys Tyr Ile Thr Gln Ser Ile Arg Ser Phe
130 135 140
Thr Pro Ser Val Glu Gln Cys Lys Glu Ser Ile Glu Gln Thr Lys Gln
145 150 155 160
Gly Thr Trp Leu Asn Pro Gly Phe Pro Pro Gln Ser Cys Gly Tyr Ala
165 170 175
Thr Val Thr Asp Ala Glu Ala Val Ile Val Gln Val Thr Pro His His
180 185 190
Val Leu Val Asp Glu Tyr Thr Gly Glu Trp Val Asp Ser Gln Phe Ile
195 200 205
Asn Gly Lys Cys Ser Asn Tyr Ile Cys Pro Thr Val His Asn Ser Thr
210 215 220
Thr Trp His Ser Asp Tyr Lys Val Lys Thr Ser Ser Ile Ile Asn Phe
225 230 235 240
Glu Lys Leu Glu Phe Gly Leu Cys Asp Ser Asn Leu Ile Ser Met Asp
245 250 255
Ile Thr Phe Phe Ser Glu Asp Gly Glu Leu Ser Ser Leu Gly Lys Glu
260 265 270
Gly Thr Gly Phe Arg Ser Asn Tyr Phe Ala Tyr Glu Thr Gly Gly Lys
275 280 285
Ala Cys Lys Met Gln Tyr Cys Lys His Trp Gly Val Arg Leu Pro Ser
290 295 300
Gly Val Trp Phe Glu Met Ala Asp Lys Asp Leu Phe Ala Ala Ala Arg
305 310 315 320
Phe Pro Glu Cys Pro Glu Gly Ser Ser Ile Ser Ala Pro Ser Gln Thr
325 330 335
Ser Val Asp Val Ser Leu Ile Gln Asp Val Glu Arg Ile Leu Asp Tyr
340 345 350
Ser Leu Cys Gln Glu Thr Trp Ser Lys Ile Arg Ala Gly Leu Pro Ile
355 360 365
Ser Pro Val Asp Leu Ser Tyr Leu Ala Pro Lys Asn Pro Gly Thr Gly
370 375 380
Pro Ala Phe Thr Ile Ile Asn Gly Thr Leu Lys Tyr Phe Glu Thr Arg
385 390 395 400
Tyr Ile Arg Val Asp Ile Ala Ala Pro Ile Leu Ser Arg Met Val Gly
405 410 415
Met Ile Ser Gly Thr Thr Thr Glu Arg Glu Leu Trp Asp Asp Trp Ala
420 425 430
Pro Tyr Glu Asp Val Glu Ile Gly Pro Asn Gly Val Leu Arg Thr Ser
435 440 445
Ser Gly Tyr Lys Phe Pro Leu Tyr Met Ile Gly His Gly Met Leu Asp
450 455 460
Ser Asp Leu His Leu Ser Ser Lys Ala Gln Val Phe Glu His Pro His
465 470 475 480
Ile Gln Asp Ala Ala Ser Gln Leu Pro Asp Asp Glu Ser Leu Phe Phe
485 490 495
Gly Asp Thr Gly Leu Ser Lys Asn Pro Ile Glu Leu Val Glu Gly Trp
500 505 510
Phe Ser Ser Trp Lys Ser Ser Ile Ala Ser Phe Phe Phe Ile Ile Gly
515 520 525
Leu Ile Ile Gly Leu Phe Leu Val Leu Arg Val Gly Ile His Leu Cys
530 535 540
Ile Lys Leu Lys His Thr Lys Lys Arg Gln Ile Tyr Thr Asp Ile Glu
545 550 555 560
Met Asn Arg Leu Gly Lys
565
<210> 51
<211> 561
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> pTOP1中修饰的VSV-G GP100_LP(18)-OVA_CD8(191)
<400> 51
Met Lys Cys Leu Leu Tyr Leu Ala Phe Leu Phe Ile Gly Val Asn Cys
1 5 10 15
Lys Lys Val Pro Arg Asn Gln Asp Trp Leu Gly Val Ser Arg Gln Leu
20 25 30
Arg Thr Lys Ala Trp Asn Arg Gln Leu Tyr Pro Glu Trp Thr Glu Ala
35 40 45
Gln Arg Leu Asp Lys Leu Lys Phe Thr Ile Val Phe Pro His Asn Gln
50 55 60
Lys Gly Asn Trp Lys Asn Val Pro Ser Asn Tyr His Tyr Cys Pro Ser
65 70 75 80
Ser Ser Asp Leu Asn Trp His Asn Asp Leu Ile Gly Thr Ala Ile Gln
85 90 95
Val Lys Met Pro Lys Ser His Lys Ala Ile Gln Ala Asp Gly Trp Met
100 105 110
Cys His Ala Ser Lys Trp Val Thr Thr Cys Asp Phe Arg Trp Tyr Gly
115 120 125
Pro Lys Tyr Ile Thr Gln Ser Ile Arg Ser Phe Thr Pro Ser Val Glu
130 135 140
Gln Cys Lys Glu Ser Ile Glu Gln Thr Lys Gln Gly Thr Trp Leu Asn
145 150 155 160
Pro Gly Phe Pro Pro Gln Ser Cys Gly Tyr Ala Thr Val Thr Asp Ala
165 170 175
Glu Ala Val Ile Val Gln Val Thr Pro His His Val Leu Val Asp Glu
180 185 190
Tyr Thr Gly Glu Trp Val Asp Ser Gln Phe Ile Asn Gly Lys Cys Ser
195 200 205
Asn Tyr Ile Cys Pro Thr Val His Asn Ser Thr Thr Trp His Ser Asp
210 215 220
Tyr Lys Val Lys Thr Ser Ser Ile Ile Asn Phe Glu Lys Leu Glu Phe
225 230 235 240
Gly Leu Cys Asp Ser Asn Leu Ile Ser Met Asp Ile Thr Phe Phe Ser
245 250 255
Glu Asp Gly Glu Leu Ser Ser Leu Gly Lys Glu Gly Thr Gly Phe Arg
260 265 270
Ser Asn Tyr Phe Ala Tyr Glu Thr Gly Gly Lys Ala Cys Lys Met Gln
275 280 285
Tyr Cys Lys His Trp Gly Val Arg Leu Pro Ser Gly Val Trp Phe Glu
290 295 300
Met Ala Asp Lys Asp Leu Phe Ala Ala Ala Arg Phe Pro Glu Cys Pro
305 310 315 320
Glu Gly Ser Ser Ile Ser Ala Pro Ser Gln Thr Ser Val Asp Val Ser
325 330 335
Leu Ile Gln Asp Val Glu Arg Ile Leu Asp Tyr Ser Leu Cys Gln Glu
340 345 350
Thr Trp Ser Lys Ile Arg Ala Gly Leu Pro Ile Ser Pro Val Asp Leu
355 360 365
Ser Tyr Leu Ala Pro Lys Asn Pro Gly Thr Gly Pro Ala Phe Thr Ile
370 375 380
Ile Asn Gly Thr Leu Lys Tyr Phe Glu Thr Arg Tyr Ile Arg Val Asp
385 390 395 400
Ile Ala Ala Pro Ile Leu Ser Arg Met Val Gly Met Ile Ser Gly Thr
405 410 415
Thr Thr Glu Arg Glu Leu Trp Asp Asp Trp Ala Pro Tyr Glu Asp Val
420 425 430
Glu Ile Gly Pro Asn Gly Val Leu Arg Thr Ser Ser Gly Tyr Lys Phe
435 440 445
Pro Leu Tyr Met Ile Gly His Gly Met Leu Asp Ser Asp Leu His Leu
450 455 460
Ser Ser Lys Ala Gln Val Phe Glu His Pro His Ile Gln Asp Ala Ala
465 470 475 480
Ser Gln Leu Pro Asp Asp Glu Ser Leu Phe Phe Gly Asp Thr Gly Leu
485 490 495
Ser Lys Asn Pro Ile Glu Leu Val Glu Gly Trp Phe Ser Ser Trp Lys
500 505 510
Ser Ser Ile Ala Ser Phe Phe Phe Ile Ile Gly Leu Ile Ile Gly Leu
515 520 525
Phe Leu Val Leu Arg Val Gly Ile His Leu Cys Ile Lys Leu Lys His
530 535 540
Thr Lys Lys Arg Gln Ile Tyr Thr Asp Ile Glu Met Asn Arg Leu Gly
545 550 555 560
Lys
<210> 52
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自VSV-G的信号肽
<400> 52
Met Lys Cys Leu Leu Tyr Leu Ala Phe Leu Phe Ile Gly Val Asn Cys
1 5 10 15
<210> 53
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自Gaussia荧光素酶的信号肽
<400> 53
Met Gly Val Lys Val Leu Phe Ala Leu Ile Cys Ile Ala Val Ala Glu
1 5 10 15
Ala
<210> 54
<211> 511
<212> PRT
<213> 阿拉戈斯型水疱性口炎病毒（Vesicular stomatitis Alagoas virus）
<220>
<223> VSAV-G
<400> 54
Met Thr Pro Ala Phe Ile Leu Cys Met Leu Leu Ala Gly Ser Ser Trp
1 5 10 15
Ala Lys Phe Thr Ile Val Phe Pro Gln Ser Gln Lys Gly Asp Trp Lys
20 25 30
Asp Val Pro Pro Asn Tyr Arg Tyr Cys Pro Ser Ser Ala Asp Gln Asn
35 40 45
Trp His Gly Asp Leu Leu Gly Val Asn Ile Arg Ala Lys Met Pro Lys
50 55 60
Val His Lys Ala Ile Lys Ala Asp Gly Trp Met Cys His Ala Ala Lys
65 70 75 80
Trp Val Thr Thr Cys Asp Tyr Arg Trp Tyr Gly Pro Gln Tyr Ile Thr
85 90 95
His Ser Ile His Ser Phe Ile Pro Thr Lys Ala Gln Cys Glu Glu Ser
100 105 110
Ile Lys Gln Thr Lys Glu Gly Val Trp Ile Asn Pro Gly Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Asn Cys Gly Tyr Ala Ser Val Ser Asp Ala Glu Ser Ile Ile Val
130 135 140
Gln Ala Thr Ala His Ser Val Met Ile Asp Glu Tyr Ser Gly Asp Trp
145 150 155 160
Leu Asp Ser Gln Phe Pro Thr Gly Arg Cys Thr Gly Ser Thr Cys Glu
165 170 175
Thr Ile His Asn Ser Thr Leu Trp Tyr Ala Asp Tyr Gln Val Thr Gly
180 185 190
Leu Cys Asp Ser Ala Leu Val Ser Thr Glu Val Thr Phe Tyr Ser Glu
195 200 205
Asp Gly Leu Met Thr Ser Ile Gly Arg Gln Asn Thr Gly Tyr Arg Ser
210 215 220
Asn Tyr Phe Pro Tyr Glu Lys Gly Ala Ala Ala Cys Arg Met Lys Tyr
225 230 235 240
Cys Thr His Glu Gly Ile Arg Leu Pro Ser Gly Val Trp Phe Glu Met
245 250 255
Val Asp Lys Glu Leu Leu Glu Ser Val Gln Met Pro Glu Cys Pro Ala
260 265 270
Gly Leu Thr Ile Ser Ala Pro Thr Gln Thr Ser Val Asp Val Ser Leu
275 280 285
Ile Leu Asp Val Glu Arg Met Leu Asp Tyr Ser Leu Cys Gln Glu Thr
290 295 300
Trp Ser Lys Val His Ser Gly Leu Pro Ile Ser Pro Val Asp Leu Gly
305 310 315 320
Tyr Ile Ala Pro Lys Asn Pro Gly Ala Gly Pro Ala Phe Thr Ile Val
325 330 335
Asn Gly Thr Leu Lys Tyr Phe Asp Thr Arg Tyr Leu Arg Ile Asp Ile
340 345 350
Glu Gly Pro Val Leu Lys Lys Met Thr Gly Lys Val Ser Gly Thr Pro
355 360 365
Thr Lys Arg Glu Leu Trp Thr Glu Trp Phe Pro Tyr Asp Asp Val Glu
370 375 380
Ile Gly Pro Asn Gly Val Leu Lys Thr Pro Glu Gly Tyr Lys Phe Pro
385 390 395 400
Leu Tyr Met Ile Gly His Gly Leu Leu Asp Ser Asp Leu Gln Lys Thr
405 410 415
Ser Gln Ala Glu Val Phe His His Pro Gln Ile Ala Glu Ala Val Gln
420 425 430
Lys Leu Pro Asp Asp Glu Thr Leu Phe Phe Gly Asp Thr Gly Ile Ser
435 440 445
Lys Asn Pro Val Glu Val Ile Glu Gly Trp Phe Ser Asn Trp Arg Ser
450 455 460
Ser Val Met Ala Ile Val Phe Ala Ile Leu Leu Leu Val Ile Thr Val
465 470 475 480
Leu Met Val Arg Leu Cys Val Ala Phe Arg His Phe Cys Cys Gln Lys
485 490 495
Arg His Lys Ile Tyr Asn Asp Leu Glu Met Asn Gln Leu Arg Arg
500 505 510
<210> 55
<211> 523
<212> PRT
<213> 卡拉加斯病毒（Carajas virus）
<220>
<223> CJSV-G
<400> 55
Met Lys Met Lys Met Val Ile Ala Gly Leu Ile Leu Cys Ile Gly Ile
1 5 10 15
Leu Pro Ala Ile Gly Lys Ile Thr Ile Ser Phe Pro Gln Ser Leu Lys
20 25 30
Gly Asp Trp Arg Pro Val Pro Lys Gly Tyr Asn Tyr Cys Pro Thr Ser
35 40 45
Ala Asp Lys Asn Leu His Gly Asp Leu Ile Asp Ile Gly Leu Arg Leu
50 55 60
Arg Ala Pro Lys Ser Phe Lys Gly Ile Ser Ala Asp Gly Trp Met Cys
65 70 75 80
His Ala Ala Arg Trp Ile Thr Thr Cys Asp Phe Arg Trp Tyr Gly Pro
85 90 95
Lys Tyr Ile Thr His Ser Ile His Ser Phe Arg Pro Ser Asn Asp Gln
100 105 110
Cys Lys Glu Ala Ile Arg Leu Thr Asn Glu Gly Asn Trp Ile Asn Pro
115 120 125
Gly Phe Pro Pro Gln Ser Cys Gly Tyr Ala Ser Val Thr Asp Ser Glu
130 135 140
Ser Val Val Val Thr Val Thr Lys His Gln Val Leu Val Asp Glu Tyr
145 150 155 160
Ser Gly Ser Trp Ile Asp Ser Gln Phe Pro Gly Gly Ser Cys Thr Ser
165 170 175
Pro Ile Cys Asp Thr Val His Asn Ser Thr Leu Trp His Ala Asp His
180 185 190
Thr Leu Asp Ser Ile Cys Asp Gln Glu Phe Val Ala Met Asp Ala Val
195 200 205
Leu Phe Thr Glu Ser Gly Lys Phe Glu Glu Phe Gly Lys Pro Asn Ser
210 215 220
Gly Ile Arg Ser Asn Tyr Phe Pro Tyr Glu Ser Leu Lys Asp Val Cys
225 230 235 240
Gln Met Asp Phe Cys Lys Arg Lys Gly Phe Lys Leu Pro Ser Gly Val
245 250 255
Trp Phe Glu Ile Glu Asp Ala Glu Lys Ser His Lys Ala Gln Val Glu
260 265 270
Leu Lys Ile Lys Arg Cys Pro His Gly Ala Val Ile Ser Ala Pro Asn
275 280 285
Gln Asn Ala Ala Asp Ile Asn Leu Ile Met Asp Val Glu Arg Ile Leu
290 295 300
Asp Tyr Ser Leu Cys Gln Ala Thr Trp Ser Lys Ile Gln Asn Lys Glu
305 310 315 320
Ala Leu Thr Pro Ile Asp Ile Ser Tyr Leu Gly Pro Lys Asn Pro Gly
325 330 335
Pro Gly Pro Ala Phe Thr Ile Ile Asn Gly Thr Leu His Tyr Phe Asn
340 345 350
Thr Arg Tyr Ile Arg Val Asp Ile Ala Gly Pro Val Thr Lys Glu Ile
355 360 365
Thr Gly Phe Val Ser Gly Thr Ser Thr Ser Arg Val Leu Trp Asp Gln
370 375 380
Trp Phe Pro Tyr Gly Glu Asn Ser Ile Gly Pro Asn Gly Leu Leu Lys
385 390 395 400
Thr Ala Ser Gly Tyr Lys Tyr Pro Leu Phe Met Val Gly Thr Gly Val
405 410 415
Leu Asp Ala Asp Ile His Lys Leu Gly Glu Ala Thr Val Ile Glu His
420 425 430
Pro His Ala Lys Glu Ala Gln Lys Val Val Asp Asp Ser Glu Val Ile
435 440 445
Phe Phe Gly Asp Thr Gly Val Ser Lys Asn Pro Val Glu Val Val Glu
450 455 460
Gly Trp Phe Ser Gly Trp Arg Ser Ser Leu Met Ser Ile Phe Gly Ile
465 470 475 480
Ile Leu Leu Ile Val Cys Leu Val Leu Ile Val Arg Ile Leu Ile Ala
485 490 495
Leu Lys Tyr Cys Cys Val Arg His Lys Lys Arg Thr Ile Tyr Lys Glu
500 505 510
Asp Leu Glu Met Gly Arg Ile Pro Arg Arg Ala
515 520
<210> 56
<211> 512
<212> PRT
<213> 马拉巴病毒（Maraba virus）
<220>
<223> MARAV-G
<400> 56
Met Leu Arg Leu Phe Leu Phe Cys Phe Leu Ala Leu Gly Ala His Ser
1 5 10 15
Lys Phe Thr Ile Val Phe Pro His His Gln Lys Gly Asn Trp Lys Asn
20 25 30
Val Pro Ser Thr Tyr His Tyr Cys Pro Ser Ser Ser Asp Gln Asn Trp
35 40 45
His Asn Asp Leu Thr Gly Val Ser Leu His Val Lys Ile Pro Lys Ser
50 55 60
His Lys Ala Ile Gln Ala Asp Gly Trp Met Cys His Ala Ala Lys Trp
65 70 75 80
Val Thr Thr Cys Asp Phe Arg Trp Tyr Gly Pro Lys Tyr Ile Thr His
85 90 95
Ser Ile His Ser Met Ser Pro Thr Leu Glu Gln Cys Lys Thr Ser Ile
100 105 110
Glu Gln Thr Lys Gln Gly Val Trp Ile Asn Pro Gly Phe Pro Pro Gln
115 120 125
Ser Cys Gly Tyr Ala Thr Val Thr Asp Ala Glu Val Val Val Val Gln
130 135 140
Ala Thr Pro His His Val Leu Val Asp Glu Tyr Thr Gly Glu Trp Ile
145 150 155 160
Asp Ser Gln Leu Val Gly Gly Lys Cys Ser Lys Glu Val Cys Gln Thr
165 170 175
Val His Asn Ser Thr Val Trp His Ala Asp Tyr Lys Ile Thr Gly Leu
180 185 190
Cys Glu Ser Asn Leu Ala Ser Val Asp Ile Thr Phe Phe Ser Glu Asp
195 200 205
Gly Gln Lys Thr Ser Leu Gly Lys Pro Asn Thr Gly Phe Arg Ser Asn
210 215 220
His Phe Ala Tyr Glu Ser Gly Glu Lys Ala Cys Arg Met Gln Tyr Cys
225 230 235 240
Thr Gln Trp Gly Ile Arg Leu Pro Ser Gly Val Trp Phe Glu Leu Val
245 250 255
Asp Lys Asp Leu Phe Gln Ala Ala Lys Leu Pro Glu Cys Pro Arg Gly
260 265 270
Ser Ser Ile Ser Ala Pro Ser Gln Thr Ser Val Asp Val Ser Leu Ile
275 280 285
Gln Asp Val Glu Arg Ile Leu Asp Tyr Ser Leu Cys Gln Glu Thr Trp
290 295 300
Ser Lys Ile Arg Ala Lys Leu Pro Val Ser Pro Val Asp Leu Ser Tyr
305 310 315 320
Leu Ala Pro Lys Asn Pro Gly Ser Gly Pro Ala Phe Thr Ile Ile Asn
325 330 335
Gly Thr Leu Lys Tyr Phe Glu Thr Arg Tyr Ile Arg Val Asp Ile Ser
340 345 350
Asn Pro Ile Ile Pro His Met Val Gly Thr Met Ser Gly Thr Thr Thr
355 360 365
Glu Arg Glu Leu Trp Asn Asp Trp Tyr Pro Tyr Glu Asp Val Glu Ile
370 375 380
Gly Pro Asn Gly Val Leu Lys Thr Pro Thr Gly Phe Lys Phe Pro Leu
385 390 395 400
Tyr Met Ile Gly His Gly Met Leu Asp Ser Asp Leu His Lys Ser Ser
405 410 415
Gln Ala Gln Val Phe Glu His Pro His Ala Lys Asp Ala Ala Ser Gln
420 425 430
Leu Pro Asp Asp Glu Thr Leu Phe Phe Gly Asp Thr Gly Leu Ser Lys
435 440 445
Asn Pro Val Glu Leu Val Glu Gly Trp Phe Ser Ser Trp Lys Ser Thr
450 455 460
Leu Ala Ser Phe Phe Leu Ile Ile Gly Leu Gly Val Ala Leu Ile Phe
465 470 475 480
Ile Ile Arg Ile Ile Val Ala Ile Arg Tyr Lys Tyr Lys Gly Arg Lys
485 490 495
Thr Gln Lys Ile Tyr Asn Asp Val Glu Met Ser Arg Leu Gly Asn Lys
500 505 510
<210> 57
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小家鼠Ig κ轻链前体的信号肽(突变A2)
<400> 57
Met Asp Met Arg Ala Pro Ala Gly Ile Phe Gly Phe Leu Leu Val Leu
1 5 10 15
Phe Pro Gly Tyr Arg Ser
20
<210> 58
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 智人血清白蛋白前体蛋白的信号肽
<400> 58
Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala
1 5 10 15
Tyr Ser
<210> 59
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 智人免疫球蛋白重链的信号肽
<400> 59
Met Asp Trp Thr Trp Arg Val Phe Cys Leu Leu Ala Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Ala His Pro
<210> 60
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 智人免疫球蛋白轻链的信号肽
<400> 60
Met Ala Trp Ser Pro Leu Phe Leu Thr Leu Ile Thr His Cys Ala Gly
1 5 10 15
Ser Trp Ala
<210> 61
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 智人天青杀素前体蛋白的信号肽
<400> 61
Met Thr Arg Leu Thr Val Leu Ala Leu Leu Ala Gly Leu Leu Ala Ser
1 5 10 15
Ser Arg Ala
<210> 62
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 智人半胱氨酸蛋白酶抑制剂-S前体的信号肽
<400> 62
Met Ala Arg Pro Leu Cys Thr Leu Leu Leu Leu Met Ala Thr Leu Ala
1 5 10 15
Gly Ala Leu Ala
20
<210> 63
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 美洲拟鲽胰蛋白酶原2前体的信号肽
<400> 63
Met Arg Ser Leu Val Phe Val Leu Leu Ile Gly Ala Ala Phe Ala
1 5 10 15
<210> 64
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223>马氏正钳蝎钾通道阻断剂的信号肽
<400> 64
Met Ser Arg Leu Phe Val Phe Ile Leu Ile Ala Leu Phe Leu Ser Ala
1 5 10 15
Ile Ile Asp Val Met Ser
20
<210> 65
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 密码芋螺α-芋螺毒素lp1.3的信号肽
<400> 65
Met Gly Met Arg Met Met Phe Ile Met Phe Met Leu Val Val Leu Ala
1 5 10 15
Thr Thr Val Val Ser
20
<210> 66
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 酿酒酵母α-半乳糖苷酶(突变体m3)的信号肽
<400> 66
Met Arg Ala Phe Leu Phe Leu Thr Ala Cys Ile Ser Leu Pro Gly Val
1 5 10 15
Phe Gly
<210> 67
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 黑曲霉纤维素酶的信号肽
<400> 67
Met Lys Phe Gln Ser Thr Leu Leu Leu Ala Ala Ala Ala Gly Ser Ala
1 5 10 15
Leu Ala
<210> 68
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小猪笼草天冬氨酸蛋白酶猪笼草素-1的信号肽
<400> 68
Met Ala Ser Ser Leu Tyr Ser Phe Leu Leu Ala Leu Ser Ile Val Tyr
1 5 10 15
Ile Phe Val Ala Pro Thr His Ser
20
<210> 69
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 莱佛士猪笼草酸几丁质酶的信号肽
<400> 69
Met Lys Thr His Tyr Ser Ser Ala Ile Leu Pro Ile Leu Thr Leu Phe
1 5 10 15
Val Phe Leu Ser Ile Asn Pro Ser His Gly
20 25
<210> 70
<211> 36
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> M28病毒K28前原毒素的信号肽
<400> 70
Met Glu Ser Val Ser Ser Leu Phe Asn Ile Phe Ser Thr Ile Met Val
1 5 10 15
Asn Tyr Lys Ser Leu Val Leu Ala Leu Leu Ser Val Ser Asn Leu Lys
20 25 30
Tyr Ala Arg Gly
35
<210> 71
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 贝利接合酵母杀伤毒素接合素前体的信号肽
<400> 71
Met Lys Ala Ala Gln Ile Leu Thr Ala Ser Ile Val Ser Leu Leu Pro
1 5 10 15
Ile Tyr Thr Ser Ala
20
<210> 72
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 霍乱弧菌O139霍乱毒素的信号肽
<400> 72
Met Ile Lys Leu Lys Phe Gly Val Phe Phe Thr Val Leu Leu Ser Ser
1 5 10 15
Ala Tyr Ala
<210> 73
<211> 50
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 酿酒酵母起源的α-凝集素(agglutinin)粘附亚基的信号肽
<400> 73
Met Gln Leu Leu Arg Cys Phe Ser Ile Phe Ser Val Ile Ala Ser Val
1 5 10 15
Leu Ala Gln Glu Leu Thr Thr Ile Cys Glu Gln Ile Pro Ser Pro Thr
20 25 30
Leu Glu Ser Thr Pro Tyr Ser Leu Ser Thr Thr Thr Ile Leu Ala Asn
35 40 45
Gly Lys
50
<210> 74
<211> 51
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 酿酒酵母衍生的外-1,3-β葡聚糖酶的信号肽
<400> 74
Met Leu Ser Leu Lys Thr Leu Leu Cys Thr Leu Leu Thr Val Ser Ser
1 5 10 15
Val Leu Ala Thr Pro Val Pro Ala Arg Asp Pro Ser Ser Ile Gln Phe
20 25 30
Val His Glu Glu Asn Lys Lys Arg Tyr Tyr Asp Tyr Asp His Gly Ser
35 40 45
Leu Gly Glu
50
<210> 75
<211> 61
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 酿酒酵母衍生的交配信息素α-因子的信号肽
<400> 75
Met Arg Phe Pro Ser Ile Phe Thr Ala Val Leu Phe Ala Ala Ser Ser
1 5 10 15
Ala Leu Ala Ala Pro Val Asn Thr Thr Thr Glu Asp Glu Thr Ala Gln
20 25 30
Ile Pro Ala Glu Ala Val Ile Gly Tyr Leu Asp Leu Glu Gly Asp Phe
35 40 45
Asp Val Ala Val Leu Pro Phe Ser Asn Ser Thr Asn Asn
50 55 60
<210> 76
<211> 67
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 酿酒酵母衍生的壳多糖反式糖苷酶的信号肽
<400> 76
Met Lys Val Leu Asp Leu Leu Thr Val Leu Ser Ala Ser Ser Leu Leu
1 5 10 15
Ser Thr Phe Ala Ala Ala Glu Ser Thr Ala Thr Ala Asp Ser Thr Thr
20 25 30
Ala Ala Ser Ser Thr Ala Ser Cys Asn Pro Leu Lys Thr Thr Gly Cys
35 40 45
Thr Pro Asp Thr Ala Leu Ala Thr Ser Phe Ser Glu Asp Phe Ser Ser
50 55 60
Ser Ser Lys
65
<210> 77
<211> 66
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 酿酒酵母衍生的磷脂酶B的信号肽
<400> 77
Met Lys Leu Gln Ser Leu Leu Val Ser Ala Ala Val Leu Thr Ser Leu
1 5 10 15
Thr Glu Asn Val Asn Ala Trp Ser Pro Asn Asn Ser Tyr Val Pro Ala
20 25 30
Asn Val Thr Cys Asp Asp Asp Ile Asn Leu Val Arg Glu Ala Ser Gly
35 40 45
Leu Ser Asp Asn Glu Thr Glu Trp Leu Lys Lys Arg Asp Ala Tyr Thr
50 55 60
Lys Glu
65
<210> 78
<211> 100
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 酿酒酵母衍生的与葡聚糖酶相关的细胞壁蛋白信号肽
<400> 78
Met Lys Leu Ser Ala Thr Thr Leu Thr Ala Ala Ser Leu Ile Gly Tyr
1 5 10 15
Ser Thr Ile Val Ser Ala Leu Pro Tyr Ala Ala Asp Ile Asp Thr Gly
20 25 30
Cys Thr Thr Thr Ala His Gly Ser His Gln His Lys Arg Ala Val Ala
35 40 45
Val Thr Tyr Val Tyr Glu Thr Val Thr Val Asp Lys Asn Gly Gln Thr
50 55 60
Val Thr Pro Thr Ser Thr Glu Ala Ser Ser Thr Val Ala Ser Thr Thr
65 70 75 80
Thr Leu Ile Ser Glu Ser Ser Val Thr Lys Ser Ser Ser Lys Val Ala
85 90 95
Ser Ser Ser Glu
100
<210> 79
<211> 97
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 酿酒酵母衍生的磷脂酶B的信号肽
<400> 79
Met Gln Leu Arg Asn Ile Leu Gln Ala Ser Ser Leu Ile Ser Gly Leu
1 5 10 15
Ser Leu Ala Ala Asp Ser Ser Ser Thr Thr Gly Asp Gly Tyr Ala Pro
20 25 30
Ser Ile Ile Pro Cys Pro Ser Asp Asp Thr Ser Leu Val Arg Asn Ala
35 40 45
Ser Gly Leu Ser Thr Ala Glu Thr Asp Trp Leu Lys Lys Arg Asp Ala
50 55 60
Tyr Thr Lys Glu Ala Leu His Ser Phe Leu Ser Arg Ala Thr Ser Asn
65 70 75 80
Phe Ser Asp Thr Ser Leu Leu Ser Thr Leu Phe Ser Ser Asn Ser Ser
85 90 95
Asn
<210> 80
<211> 51
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 酿酒酵母衍生的外切-1,3-β葡聚糖酶的信号肽
<400> 80
Met Ile Ser Pro Ile Ser Phe Leu Ser Ser Leu Leu Cys Leu Thr Tyr
1 5 10 15
Leu Thr Ser Ala Leu Pro Ile Leu Pro Lys Arg Glu Val Val Thr Arg
20 25 30
Val His Thr Ala Ser Thr Thr Asn Val Val Thr Asp Phe Tyr Ser Thr
35 40 45
Thr Thr Glu
50
<210> 81
<211> 100
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 酿酒酵母衍生的涉及输出乙酰化甾醇的细胞壁相关蛋白的信号肽
<400> 81
Met Leu Glu Phe Pro Ile Ser Val Leu Leu Gly Cys Leu Val Ala Val
1 5 10 15
Lys Ala Gln Thr Thr Phe Pro Asn Phe Glu Ser Asp Val Leu Asn Glu
20 25 30
His Asn Lys Phe Arg Ala Leu His Val Asp Thr Ala Pro Leu Thr Trp
35 40 45
Ser Asp Thr Leu Ala Thr Tyr Ala Gln Asn Tyr Ala Asp Gln Tyr Asp
50 55 60
Cys Ser Gly Val Leu Thr His Ser Asp Gly Pro Tyr Gly Glu Asn Leu
65 70 75 80
Ala Leu Gly Tyr Thr Asp Thr Gly Ala Val Asp Ala Trp Tyr Gly Glu
85 90 95
Ile Ser Lys Tyr
100
<210> 82
<211> 88
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 酿酒酵母衍生的天冬氨酸蛋白酶的信号肽
<400> 82
Met Lys Leu Lys Thr Val Arg Ser Ala Val Leu Ser Ser Leu Phe Ala
1 5 10 15
Ser Gln Val Leu Gly Lys Ile Ile Pro Ala Ala Asn Lys Arg Asp Asp
20 25 30
Asp Ser Asn Ser Lys Phe Val Lys Leu Pro Phe His Lys Leu Tyr Gly
35 40 45
Asp Ser Leu Glu Asn Val Gly Ser Asp Lys Lys Pro Glu Val Arg Leu
50 55 60
Leu Lys Arg Ala Asp Gly Tyr Glu Glu Ile Ile Ile Thr Asn Gln Gln
65 70 75 80
Ser Phe Tyr Ser Val Asp Leu Glu
85
<210> 83
<211> 62
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 酿酒酵母衍生的细胞壁甘露糖蛋白的信号肽
<400> 83
Met Val Lys Leu Thr Ser Ile Ala Ala Gly Val Ala Ala Ile Ala Ala
1 5 10 15
Thr Ala Ser Ala Thr Thr Thr Leu Ala Gln Ser Asp Glu Arg Val Asn
20 25 30
Leu Val Glu Leu Gly Val Tyr Val Ser Asp Ile Arg Ala His Leu Ala
35 40 45
Gln Tyr Tyr Ser Phe Gln Val Ala His Pro Thr Glu Thr Tyr
50 55 60
<210> 84
<211> 65
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 酿酒酵母衍生的细胞壁甘露糖蛋白的信号肽
<400> 84
Met Val Lys Leu Thr Ser Ile Val Ala Gly Val Ala Ala Ile Ala Ala
1 5 10 15
Gly Val Ala Ala Ala Pro Ala Thr Thr Thr Leu Ser Pro Ser Asp Glu
20 25 30
Arg Val Asn Leu Val Glu Leu Gly Val Tyr Val Ser Asp Ile Arg Ala
35 40 45
His Leu Ala Glu Tyr Tyr Met Phe Gln Ala Ala His Pro Thr Glu Thr
50 55 60
Tyr
65
<210> 85
<211> 38
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 酿酒酵母衍生的交配信息素α-因子的信号肽
<400> 85
Met Gln Pro Ile Thr Thr Ala Ser Thr Gln Ala Thr Gln Lys Asp Lys
1 5 10 15
Ser Ser Glu Lys Lys Asp Asn Tyr Ile Ile Lys Gly Leu Phe Trp Asp
20 25 30
Pro Ala Cys Val Ile Ala
35
<210> 86
<211> 53
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 酿酒酵母衍生的孢子形成特异性外切-1,3-b-葡聚糖酶的信号肽
<400> 86
Met Val Ser Phe Arg Gly Leu Thr Thr Leu Thr Leu Leu Phe Thr Lys
1 5 10 15
Leu Val Asn Cys Asn Pro Val Ser Thr Lys Asn Arg Asp Ser Ile Gln
20 25 30
Phe Ile Tyr Lys Glu Lys Asp Ser Ile Tyr Ser Ala Ile Asn Asn Gln
35 40 45
Ala Ile Asn Glu Lys
50
<210> 87
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 智人胰凝乳蛋白酶原的信号肽
<400> 87
Met Ala Phe Leu Trp Leu Leu Ser Cys Trp Ala Leu Leu Gly Thr Thr
1 5 10 15
Phe Gly
<210> 88
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 智人白细胞介素-2的信号肽
<400> 88
Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ile Leu Ala Leu Val
1 5 10
<210> 89
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 智人胰蛋白酶原-2的信号肽
<400> 89
Met Asn Leu Leu Leu Ile Leu Thr Phe Val Ala Ala Ala Val Ala
1 5 10 15
<210> 90
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 细长长腹水蚤荧光素酶的信号肽
<400> 90
Met Asp Ile Lys Val Val Phe Thr Leu Val Phe Ser Ala Leu Val Gln
1 5 10 15
Ala
<210> 91
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 异体住囊虫住囊虫素1的信号肽
<400> 91
Met Leu Leu Leu Ser Ala Leu Leu Leu Gly Leu Ala His Gly Tyr Ser
1 5 10 15
<210> 92
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 异体住囊虫住囊虫素2A的信号肽
<400> 92
Met Lys Leu Leu Ala Ser Val Leu Thr Ile Ala Ala Ala Asp Tyr Ala
1 5 10 15
Cys Cys
<210> 93
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 异体住囊虫住囊虫素3的信号肽
<400> 93
Met Lys Ile Ser Ala Gly Leu Leu Gly Val Ala Leu Gly Gln Asn Glu
1 5 10 15
Gly Ser Ala Glu Ala
20
<210> 94
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 异体住囊虫住囊虫素4A的信号肽
<400> 94
Met Lys Leu Phe Ala Ala Leu Ser Ala Phe Ser Ala Ser Val Glu Ala
1 5 10 15
<210> 95
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 异体住囊虫住囊虫素5A的信号肽
<400> 95
Met Lys Leu Leu Cys Ser Val Leu Leu Gly Thr Val Phe Gly
1 5 10
<210> 96
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 异体住囊虫住囊虫素6A的信号肽
<400> 96
Met Lys Ile Ser Pro Leu Leu Val Val Thr Ala Val Val Gly
1 5 10
<210> 97
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 异体住囊虫住囊虫素7A的信号肽
<400> 97
Met Lys Ile Ala Ala Thr Phe Ala Ala Leu Ala Ser Ala Thr Glu Trp
1 5 10 15
Gln Gly
<210> 98
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 希氏弯喉海萤荧光素酶的信号肽
<400> 98
Met Lys Ile Ile Ile Leu Ser Val Ile Leu Ala Tyr Cys Val Thr Asp
1 5 10 15
Asn Cys
<210> 99
<211> 28
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 詹氏甲烷球菌Slmj1的信号肽
<400> 99
Met Ala Met Ser Leu Lys Lys Ile Gly Ala Ile Ala Val Gly Gly Ala
1 5 10 15
Met Val Ala Thr Ala Leu Ala Ser Gly Val Ala Ala
20 25
<210> 100
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 丙型肝炎病毒血清型1b E1蛋白的信号肽
<400> 100
Met Gly Cys Ser Phe Ser Ile Phe Leu Leu Ala Leu Leu Ser Cys Leu
1 5 10 15
Thr Thr Pro Ala Ser Ala
20
<210> 101
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 丙型肝炎病毒血清型1b E2蛋白的信号肽
<400> 101
Met Val Gly Asn Trp Ala Lys Val Leu Ile Val Met Leu Leu Phe Ala
1 5 10 15
Gly Val Asp Gly
20
<210> 102
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 组织型纤溶酶原激活物的信号肽
<400> 102
Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly
1 5 10 15
Ala Val Phe Val Asp Ser Val Thr Gly
20 25
<210> 103
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工信号肽
<400> 103
Met Asp Ala Met Lys Val Leu Leu Leu Val Phe Val Ser Pro Ser Gln
1 5 10 15
Val Thr Gly
<210> 104
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CLPP_CD8
<400> 104
Ile Leu Asp Lys Val Leu Val His Leu
1 5
<210> 105
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 周期素-A1_CD8
<400> 105
Phe Leu Asp Arg Phe Leu Ser Cys Met
1 5
<210> 106
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 周期素-A1_CD8
<400> 106
Ser Leu Ile Ala Ala Ala Ala Phe Cys Leu Ala
1 5 10
<210> 107
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MAGE-A1_CD8
<400> 107
Lys Glu Ala Asp Pro Thr Gly His Ser Tyr
1 5 10
<210> 108
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MAGE-A1_CD8
<400> 108
Arg Val Arg Phe Phe Phe Pro Ser Leu
1 5
<210> 109
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MAGE-C1_CD8
<400> 109
Ile Leu Phe Gly Ile Ser Leu Arg Glu Val
1 5 10
<210> 110
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MAGE-C1_CD8
<400> 110
Lys Val Val Glu Phe Leu Ala Met Leu
1 5
<210> 111
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MAGE-C2_CD8
<400> 111
Ala Ser Ser Thr Leu Tyr Leu Val Phe
1 5
<210> 112
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MAGE-C2_CD8
<400> 112
Ser Ser Thr Leu Tyr Leu Val Phe Ser Pro Ser Ser Phe Ser Thr
1 5 10 15
<210> 113
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SSX2_CD8
<400> 113
Phe Gly Arg Leu Gln Gly Ile Ser Pro Lys Ile
1 5 10
<210> 114
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XAGE1b/GAGED2a_CD8
<400> 114
Arg Gln Lys Lys Ile Arg Ile Gln Leu
1 5
<210> 115
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> XAGE1b/GAGED2a_CD8
<400> 115
His Leu Gly Ser Arg Gln Lys Lys Ile Arg Ile Gln Leu Arg Ser Gln
1 5 10 15
<210> 116
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Melan-A/MART-1_CD8
<400> 116
Tyr Thr Thr Ala Glu Glu Ala Ala Gly Ile Gly Ile Leu Thr Val Ile
1 5 10 15
Leu Gly Val Leu Leu Leu Ile Gly Cys Trp Tyr Cys Arg Arg
20 25 30
<210> 117
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TRP-1_CD8
<400> 117
Ser Gln Trp Arg Val Val Cys Asp Ser Leu Glu Asp Tyr Asp Thr
1 5 10 15
<210> 118
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 酪氨酸酶_CD8
<400> 118
Ile Tyr Met Asp Gly Thr Ala Asp Phe Ser Phe
1 5 10
<210> 119
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD45_CD8
<400> 119
Lys Phe Leu Asp Ala Leu Ile Ser Leu
1 5
<210> 120
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 磷脂酰肌醇聚糖-3_CD8
<400> 120
Phe Val Gly Glu Phe Phe Thr Asp Val
1 5
<210> 121
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 磷脂酰肌醇聚糖-3_CD8
<400> 121
Glu Tyr Ile Leu Ser Leu Glu Glu Leu
1 5
<210> 122
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IGF2B3_CD8
<400> 122
Asn Leu Ser Ser Ala Glu Val Val Val
1 5
<210> 123
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IGF2B3_CD8
<400> 123
Arg Leu Leu Val Pro Thr Gln Phe Val
1 5
<210> 124
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 激肽释放酶4_CD8
<400> 124
Phe Leu Gly Tyr Leu Ile Leu Gly Val
1 5
<210> 125
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> KIF20A_CD8
<400> 125
Leu Leu Ser Asp Asp Asp Val Val Val
1 5
<210> 126
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> KIF20A_CD8
<400> 126
Ala Gln Pro Asp Thr Ala Pro Leu Pro Val
1 5 10
<210> 127
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> KIF20A_CD8
<400> 127
Cys Ile Ala Glu Gln Tyr His Thr Val
1 5
<210> 128
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Lengsin_CD8
<400> 128
Phe Leu Pro Glu Phe Gly Ile Ser Ser Ala
1 5 10
<210> 129
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Meloa_CD8
<400> 129
Arg Ile Ser Ser Thr Leu Asn Asp Glu Cys Trp Pro Ala
1 5 10
<210> 130
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Meloa_CD8
<400> 130
Cys Pro Pro Trp His Pro Ser Glu Arg Ile Ser Ser Thr Leu
1 5 10
<210> 131
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MUC5AC_CD8
<400> 131
Thr Cys Gln Pro Thr Cys Arg Ser Leu
1 5
<210> 132
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 存活素_CD8
<400> 132
Thr Leu Gly Glu Phe Leu Lys Leu Asp Arg Glu Arg Ala Lys Asn
1 5 10 15
<210> 133
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AH1A5_CD8
<400> 133
Ser Pro Ser Tyr Ala Tyr His Gln Phe
1 5
<210> 134
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TRP2_CD8
<400> 134
Ser Val Tyr Asp Phe Phe Val Trp Leu
1 5
<210> 135
<211> 543
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> pTOP1-GP100_CD4(18)-TRP2_CD8(191)中的VSV-G
<400> 135
Met Lys Cys Leu Leu Tyr Leu Ala Phe Leu Phe Ile Gly Val Asn Cys
1 5 10 15
Lys Trp Asn Arg Gln Leu Tyr Pro Glu Trp Thr Glu Ala Gln Arg Leu
20 25 30
Asp Lys Leu Lys Phe Thr Ile Val Phe Pro His Asn Gln Lys Gly Asn
35 40 45
Trp Lys Asn Val Pro Ser Asn Tyr His Tyr Cys Pro Ser Ser Ser Asp
50 55 60
Leu Asn Trp His Asn Asp Leu Ile Gly Thr Ala Ile Gln Val Lys Met
65 70 75 80
Pro Lys Ser His Lys Ala Ile Gln Ala Asp Gly Trp Met Cys His Ala
85 90 95
Ser Lys Trp Val Thr Thr Cys Asp Phe Arg Trp Tyr Gly Pro Lys Tyr
100 105 110
Ile Thr Gln Ser Ile Arg Ser Phe Thr Pro Ser Val Glu Gln Cys Lys
115 120 125
Glu Ser Ile Glu Gln Thr Lys Gln Gly Thr Trp Leu Asn Pro Gly Phe
130 135 140
Pro Pro Gln Ser Cys Gly Tyr Ala Thr Val Thr Asp Ala Glu Ala Val
145 150 155 160
Ile Val Gln Val Thr Pro His His Val Leu Val Asp Glu Tyr Thr Gly
165 170 175
Glu Trp Val Asp Ser Gln Phe Ile Asn Gly Lys Cys Ser Asn Tyr Ile
180 185 190
Cys Pro Thr Val His Asn Ser Thr Thr Trp His Ser Asp Tyr Lys Val
195 200 205
Lys Thr Ser Ser Val Tyr Asp Phe Phe Val Trp Leu Glu Phe Gly Leu
210 215 220
Cys Asp Ser Asn Leu Ile Ser Met Asp Ile Thr Phe Phe Ser Glu Asp
225 230 235 240
Gly Glu Leu Ser Ser Leu Gly Lys Glu Gly Thr Gly Phe Arg Ser Asn
245 250 255
Tyr Phe Ala Tyr Glu Thr Gly Gly Lys Ala Cys Lys Met Gln Tyr Cys
260 265 270
Lys His Trp Gly Val Arg Leu Pro Ser Gly Val Trp Phe Glu Met Ala
275 280 285
Asp Lys Asp Leu Phe Ala Ala Ala Arg Phe Pro Glu Cys Pro Glu Gly
290 295 300
Ser Ser Ile Ser Ala Pro Ser Gln Thr Ser Val Asp Val Ser Leu Ile
305 310 315 320
Gln Asp Val Glu Arg Ile Leu Asp Tyr Ser Leu Cys Gln Glu Thr Trp
325 330 335
Ser Lys Ile Arg Ala Gly Leu Pro Ile Ser Pro Val Asp Leu Ser Tyr
340 345 350
Leu Ala Pro Lys Asn Pro Gly Thr Gly Pro Ala Phe Thr Ile Ile Asn
355 360 365
Gly Thr Leu Lys Tyr Phe Glu Thr Arg Tyr Ile Arg Val Asp Ile Ala
370 375 380
Ala Pro Ile Leu Ser Arg Met Val Gly Met Ile Ser Gly Thr Thr Thr
385 390 395 400
Glu Arg Glu Leu Trp Asp Asp Trp Ala Pro Tyr Glu Asp Val Glu Ile
405 410 415
Gly Pro Asn Gly Val Leu Arg Thr Ser Ser Gly Tyr Lys Phe Pro Leu
420 425 430
Tyr Met Ile Gly His Gly Met Leu Asp Ser Asp Leu His Leu Ser Ser
435 440 445
Lys Ala Gln Val Phe Glu His Pro His Ile Gln Asp Ala Ala Ser Gln
450 455 460
Leu Pro Asp Asp Glu Ser Leu Phe Phe Gly Asp Thr Gly Leu Ser Lys
465 470 475 480
Asn Pro Ile Glu Leu Val Glu Gly Trp Phe Ser Ser Trp Lys Ser Ser
485 490 495
Ile Ala Ser Phe Phe Phe Ile Ile Gly Leu Ile Ile Gly Leu Phe Leu
500 505 510
Val Leu Arg Val Gly Ile His Leu Cys Ile Lys Leu Lys His Thr Lys
515 520 525
Lys Arg Gln Ile Tyr Thr Asp Ile Glu Met Asn Arg Leu Gly Lys
530 535 540
<210> 136
<211> 540
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> pTOP1-PADRE(18)-P1A_CD8(191)中的VSV-G
<400> 136
Met Lys Cys Leu Leu Tyr Leu Ala Phe Leu Phe Ile Gly Val Asn Cys
1 5 10 15
Lys Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Lys Leu
20 25 30
Lys Phe Thr Ile Val Phe Pro His Asn Gln Lys Gly Asn Trp Lys Asn
35 40 45
Val Pro Ser Asn Tyr His Tyr Cys Pro Ser Ser Ser Asp Leu Asn Trp
50 55 60
His Asn Asp Leu Ile Gly Thr Ala Ile Gln Val Lys Met Pro Lys Ser
65 70 75 80
His Lys Ala Ile Gln Ala Asp Gly Trp Met Cys His Ala Ser Lys Trp
85 90 95
Val Thr Thr Cys Asp Phe Arg Trp Tyr Gly Pro Lys Tyr Ile Thr Gln
100 105 110
Ser Ile Arg Ser Phe Thr Pro Ser Val Glu Gln Cys Lys Glu Ser Ile
115 120 125
Glu Gln Thr Lys Gln Gly Thr Trp Leu Asn Pro Gly Phe Pro Pro Gln
130 135 140
Ser Cys Gly Tyr Ala Thr Val Thr Asp Ala Glu Ala Val Ile Val Gln
145 150 155 160
Val Thr Pro His His Val Leu Val Asp Glu Tyr Thr Gly Glu Trp Val
165 170 175
Asp Ser Gln Phe Ile Asn Gly Lys Cys Ser Asn Tyr Ile Cys Pro Thr
180 185 190
Val His Asn Ser Thr Thr Trp His Ser Asp Tyr Lys Val Lys Thr Ser
195 200 205
Leu Pro Tyr Leu Gly Trp Leu Val Phe Glu Phe Gly Leu Cys Asp Ser
210 215 220
Asn Leu Ile Ser Met Asp Ile Thr Phe Phe Ser Glu Asp Gly Glu Leu
225 230 235 240
Ser Ser Leu Gly Lys Glu Gly Thr Gly Phe Arg Ser Asn Tyr Phe Ala
245 250 255
Tyr Glu Thr Gly Gly Lys Ala Cys Lys Met Gln Tyr Cys Lys His Trp
260 265 270
Gly Val Arg Leu Pro Ser Gly Val Trp Phe Glu Met Ala Asp Lys Asp
275 280 285
Leu Phe Ala Ala Ala Arg Phe Pro Glu Cys Pro Glu Gly Ser Ser Ile
290 295 300
Ser Ala Pro Ser Gln Thr Ser Val Asp Val Ser Leu Ile Gln Asp Val
305 310 315 320
Glu Arg Ile Leu Asp Tyr Ser Leu Cys Gln Glu Thr Trp Ser Lys Ile
325 330 335
Arg Ala Gly Leu Pro Ile Ser Pro Val Asp Leu Ser Tyr Leu Ala Pro
340 345 350
Lys Asn Pro Gly Thr Gly Pro Ala Phe Thr Ile Ile Asn Gly Thr Leu
355 360 365
Lys Tyr Phe Glu Thr Arg Tyr Ile Arg Val Asp Ile Ala Ala Pro Ile
370 375 380
Leu Ser Arg Met Val Gly Met Ile Ser Gly Thr Thr Thr Glu Arg Glu
385 390 395 400
Leu Trp Asp Asp Trp Ala Pro Tyr Glu Asp Val Glu Ile Gly Pro Asn
405 410 415
Gly Val Leu Arg Thr Ser Ser Gly Tyr Lys Phe Pro Leu Tyr Met Ile
420 425 430
Gly His Gly Met Leu Asp Ser Asp Leu His Leu Ser Ser Lys Ala Gln
435 440 445
Val Phe Glu His Pro His Ile Gln Asp Ala Ala Ser Gln Leu Pro Asp
450 455 460
Asp Glu Ser Leu Phe Phe Gly Asp Thr Gly Leu Ser Lys Asn Pro Ile
465 470 475 480
Glu Leu Val Glu Gly Trp Phe Ser Ser Trp Lys Ser Ser Ile Ala Ser
485 490 495
Phe Phe Phe Ile Ile Gly Leu Ile Ile Gly Leu Phe Leu Val Leu Arg
500 505 510
Val Gly Ile His Leu Cys Ile Lys Leu Lys His Thr Lys Lys Arg Gln
515 520 525
Ile Tyr Thr Asp Ile Glu Met Asn Arg Leu Gly Lys
530 535 540
<210> 137
<211> 540
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> pTOP1-PADRE(18)-AH1A5_CD8(191)中的VSV-G
<400> 137
Met Lys Cys Leu Leu Tyr Leu Ala Phe Leu Phe Ile Gly Val Asn Cys
1 5 10 15
Lys Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Lys Leu
20 25 30
Lys Phe Thr Ile Val Phe Pro His Asn Gln Lys Gly Asn Trp Lys Asn
35 40 45
Val Pro Ser Asn Tyr His Tyr Cys Pro Ser Ser Ser Asp Leu Asn Trp
50 55 60
His Asn Asp Leu Ile Gly Thr Ala Ile Gln Val Lys Met Pro Lys Ser
65 70 75 80
His Lys Ala Ile Gln Ala Asp Gly Trp Met Cys His Ala Ser Lys Trp
85 90 95
Val Thr Thr Cys Asp Phe Arg Trp Tyr Gly Pro Lys Tyr Ile Thr Gln
100 105 110
Ser Ile Arg Ser Phe Thr Pro Ser Val Glu Gln Cys Lys Glu Ser Ile
115 120 125
Glu Gln Thr Lys Gln Gly Thr Trp Leu Asn Pro Gly Phe Pro Pro Gln
130 135 140
Ser Cys Gly Tyr Ala Thr Val Thr Asp Ala Glu Ala Val Ile Val Gln
145 150 155 160
Val Thr Pro His His Val Leu Val Asp Glu Tyr Thr Gly Glu Trp Val
165 170 175
Asp Ser Gln Phe Ile Asn Gly Lys Cys Ser Asn Tyr Ile Cys Pro Thr
180 185 190
Val His Asn Ser Thr Thr Trp His Ser Asp Tyr Lys Val Lys Thr Ser
195 200 205
Ser Pro Ser Tyr Ala Tyr His Gln Phe Glu Phe Gly Leu Cys Asp Ser
210 215 220
Asn Leu Ile Ser Met Asp Ile Thr Phe Phe Ser Glu Asp Gly Glu Leu
225 230 235 240
Ser Ser Leu Gly Lys Glu Gly Thr Gly Phe Arg Ser Asn Tyr Phe Ala
245 250 255
Tyr Glu Thr Gly Gly Lys Ala Cys Lys Met Gln Tyr Cys Lys His Trp
260 265 270
Gly Val Arg Leu Pro Ser Gly Val Trp Phe Glu Met Ala Asp Lys Asp
275 280 285
Leu Phe Ala Ala Ala Arg Phe Pro Glu Cys Pro Glu Gly Ser Ser Ile
290 295 300
Ser Ala Pro Ser Gln Thr Ser Val Asp Val Ser Leu Ile Gln Asp Val
305 310 315 320
Glu Arg Ile Leu Asp Tyr Ser Leu Cys Gln Glu Thr Trp Ser Lys Ile
325 330 335
Arg Ala Gly Leu Pro Ile Ser Pro Val Asp Leu Ser Tyr Leu Ala Pro
340 345 350
Lys Asn Pro Gly Thr Gly Pro Ala Phe Thr Ile Ile Asn Gly Thr Leu
355 360 365
Lys Tyr Phe Glu Thr Arg Tyr Ile Arg Val Asp Ile Ala Ala Pro Ile
370 375 380
Leu Ser Arg Met Val Gly Met Ile Ser Gly Thr Thr Thr Glu Arg Glu
385 390 395 400
Leu Trp Asp Asp Trp Ala Pro Tyr Glu Asp Val Glu Ile Gly Pro Asn
405 410 415
Gly Val Leu Arg Thr Ser Ser Gly Tyr Lys Phe Pro Leu Tyr Met Ile
420 425 430
Gly His Gly Met Leu Asp Ser Asp Leu His Leu Ser Ser Lys Ala Gln
435 440 445
Val Phe Glu His Pro His Ile Gln Asp Ala Ala Ser Gln Leu Pro Asp
450 455 460
Asp Glu Ser Leu Phe Phe Gly Asp Thr Gly Leu Ser Lys Asn Pro Ile
465 470 475 480
Glu Leu Val Glu Gly Trp Phe Ser Ser Trp Lys Ser Ser Ile Ala Ser
485 490 495
Phe Phe Phe Ile Ile Gly Leu Ile Ile Gly Leu Phe Leu Val Leu Arg
500 505 510
Val Gly Ile His Leu Cys Ile Lys Leu Lys His Thr Lys Lys Arg Gln
515 520 525
Ile Tyr Thr Asp Ile Glu Met Asn Arg Leu Gly Lys
530 535 540
<210> 138
<211> 540
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> pTOP1-PADRE(18)-TRP2_CD8(191)中的VSV-G
<400> 138
Met Lys Cys Leu Leu Tyr Leu Ala Phe Leu Phe Ile Gly Val Asn Cys
1 5 10 15
Lys Ala Lys Phe Val Ala Ala Trp Thr Leu Lys Ala Ala Ala Lys Leu
20 25 30
Lys Phe Thr Ile Val Phe Pro His Asn Gln Lys Gly Asn Trp Lys Asn
35 40 45
Val Pro Ser Asn Tyr His Tyr Cys Pro Ser Ser Ser Asp Leu Asn Trp
50 55 60
His Asn Asp Leu Ile Gly Thr Ala Ile Gln Val Lys Met Pro Lys Ser
65 70 75 80
His Lys Ala Ile Gln Ala Asp Gly Trp Met Cys His Ala Ser Lys Trp
85 90 95
Val Thr Thr Cys Asp Phe Arg Trp Tyr Gly Pro Lys Tyr Ile Thr Gln
100 105 110
Ser Ile Arg Ser Phe Thr Pro Ser Val Glu Gln Cys Lys Glu Ser Ile
115 120 125
Glu Gln Thr Lys Gln Gly Thr Trp Leu Asn Pro Gly Phe Pro Pro Gln
130 135 140
Ser Cys Gly Tyr Ala Thr Val Thr Asp Ala Glu Ala Val Ile Val Gln
145 150 155 160
Val Thr Pro His His Val Leu Val Asp Glu Tyr Thr Gly Glu Trp Val
165 170 175
Asp Ser Gln Phe Ile Asn Gly Lys Cys Ser Asn Tyr Ile Cys Pro Thr
180 185 190
Val His Asn Ser Thr Thr Trp His Ser Asp Tyr Lys Val Lys Thr Ser
195 200 205
Ser Val Tyr Asp Phe Phe Val Trp Leu Glu Phe Gly Leu Cys Asp Ser
210 215 220
Asn Leu Ile Ser Met Asp Ile Thr Phe Phe Ser Glu Asp Gly Glu Leu
225 230 235 240
Ser Ser Leu Gly Lys Glu Gly Thr Gly Phe Arg Ser Asn Tyr Phe Ala
245 250 255
Tyr Glu Thr Gly Gly Lys Ala Cys Lys Met Gln Tyr Cys Lys His Trp
260 265 270
Gly Val Arg Leu Pro Ser Gly Val Trp Phe Glu Met Ala Asp Lys Asp
275 280 285
Leu Phe Ala Ala Ala Arg Phe Pro Glu Cys Pro Glu Gly Ser Ser Ile
290 295 300
Ser Ala Pro Ser Gln Thr Ser Val Asp Val Ser Leu Ile Gln Asp Val
305 310 315 320
Glu Arg Ile Leu Asp Tyr Ser Leu Cys Gln Glu Thr Trp Ser Lys Ile
325 330 335
Arg Ala Gly Leu Pro Ile Ser Pro Val Asp Leu Ser Tyr Leu Ala Pro
340 345 350
Lys Asn Pro Gly Thr Gly Pro Ala Phe Thr Ile Ile Asn Gly Thr Leu
355 360 365
Lys Tyr Phe Glu Thr Arg Tyr Ile Arg Val Asp Ile Ala Ala Pro Ile
370 375 380
Leu Ser Arg Met Val Gly Met Ile Ser Gly Thr Thr Thr Glu Arg Glu
385 390 395 400
Leu Trp Asp Asp Trp Ala Pro Tyr Glu Asp Val Glu Ile Gly Pro Asn
405 410 415
Gly Val Leu Arg Thr Ser Ser Gly Tyr Lys Phe Pro Leu Tyr Met Ile
420 425 430
Gly His Gly Met Leu Asp Ser Asp Leu His Leu Ser Ser Lys Ala Gln
435 440 445
Val Phe Glu His Pro His Ile Gln Asp Ala Ala Ser Gln Leu Pro Asp
450 455 460
Asp Glu Ser Leu Phe Phe Gly Asp Thr Gly Leu Ser Lys Asn Pro Ile
465 470 475 480
Glu Leu Val Glu Gly Trp Phe Ser Ser Trp Lys Ser Ser Ile Ala Ser
485 490 495
Phe Phe Phe Ile Ile Gly Leu Ile Ile Gly Leu Phe Leu Val Leu Arg
500 505 510
Val Gly Ile His Leu Cys Ile Lys Leu Lys His Thr Lys Lys Arg Gln
515 520 525
Ile Tyr Thr Asp Ile Glu Met Asn Arg Leu Gly Lys
530 535 540
<210> 139
<211> 1632
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> pTOP1-GP100_CD4(18)-TRP2_CD8(191)中的VSV-G
<400> 139
atgaagtgcc tgctgtacct ggccttcctg ttcatcggcg tgaactgcaa gtggaacaga 60
cagctgtacc ccgagtggac cgaggcccag agactggata agcttaagtt taccatcgtg 120
ttcccccaca accagaaggg caactggaag aacgtgccca gcaactacca ctactgcccc 180
agcagcagcg acctgaactg gcacaacgac ctgatcggca ccgccatcca agtgaagatg 240
cccaagagcc acaaggccat ccaggccgat ggctggatgt gccacgccag caaatgggtc 300
accacctgtg acttcaggtg gtacggcccc aagtacatca cccagagcat cagatccttc 360
acccccagcg tggaacagtg caaagagagc atcgagcaga ccaagcaggg cacctggctg 420
aaccccggat tcccacctca gagctgtggc tacgccaccg tgacagatgc cgaggccgtg 480
atcgtgcaag tgacccctca ccacgtgctg gtggacgagt acacaggcga gtgggtggac 540
agccagttca tcaacggcaa gtgctccaac tacatctgcc ccaccgtgca caacagcacc 600
acctggcaca gcgactacaa agtgaagact agtagcgtgt acgacttctt cgtgtggctg 660
gaattcggcc tgtgcgacag caacctgatc agcatggaca tcacattctt cagcgaggac 720
ggcgagctga gcagcctggg caaagagggc acaggcttca gaagcaacta cttcgcctac 780
gagacaggcg gcaaggcctg caagatgcag tattgcaagc actggggcgt gcggctgcct 840
agcggagtgt ggttcgagat ggccgacaag gacctgttcg ccgctgccag attccccgag 900
tgtcctgagg gcagcagcat ctctgcccct agccagacaa gcgtggacgt gtccctgatc 960
caggacgtgg aaagaatcct ggactacagc ctgtgtcagg aaacctggtc caagatcaga 1020
gccggcctgc ccatcagccc tgtggacctg tcttacctgg cccccaagaa ccctggaacc 1080
ggccctgcct tcaccatcat taacggcacc ctgaagtact ttgagacacg gtacatccgg 1140
gtggacattg ccgcccctat cctgagcaga atggtgggaa tgatcagcgg caccaccacc 1200
gagcgcgagc tgtgggatga ttgggcccct tacgaggatg tggaaatcgg ccccaacggc 1260
gtgctgagaa ccagcagcgg ctacaagttc cccctgtaca tgatcggcca cggcatgctg 1320
gactccgacc tgcacctgtc tagcaaggcc caggtgttcg agcaccccca catccaggat 1380
gccgccagcc agctgcctga cgacgagtct ctgttcttcg gcgacaccgg cctgagcaag 1440
aaccccatcg agctggtgga aggctggttc agcagctgga agtcctctat cgccagcttc 1500
ttcttcatca tcgggctgat tatcggcctg ttcctggtgc tgagagtggg catccacctg 1560
tgcatcaagc tgaagcacac caagaagagg cagatctaca ccgacatcga gatgaaccgg 1620
ctgggcaaat ga 1632
<210> 140
<211> 1623
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> pTOP1-PADRE(18)-P1A_CD8(191)中的VSV-G
<400> 140
atgaagtgcc tgctgtacct ggccttcctg ttcatcggcg tgaactgcaa ggccaagttc 60
gtggccgcct ggacactgaa ggctgccgct aagcttaagt ttaccatcgt gttcccccac 120
aaccagaagg gcaactggaa gaacgtgccc agcaactacc actactgccc cagcagcagc 180
gacctgaact ggcacaacga cctgatcggc accgccatcc aagtgaagat gcccaagagc 240
cacaaggcca tccaggccga tggctggatg tgccacgcca gcaaatgggt caccacctgt 300
gacttcaggt ggtacggccc caagtacatc acccagagca tcagatcctt cacccccagc 360
gtggaacagt gcaaagagag catcgagcag accaagcagg gcacctggct gaaccccgga 420
ttcccacctc agagctgtgg ctacgccacc gtgacagatg ccgaggccgt gatcgtgcaa 480
gtgacccctc accacgtgct ggtggacgag tacacaggcg agtgggtgga cagccagttc 540
atcaacggca agtgctccaa ctacatctgc cccaccgtgc acaacagcac cacctggcac 600
agcgactaca aagtgaagac tagtctgccc tacctgggct ggctggtgtt cgaattcggc 660
ctgtgcgaca gcaacctgat cagcatggac atcacattct tcagcgagga cggcgagctg 720
agcagcctgg gcaaagaggg cacaggcttc agaagcaact acttcgccta cgagacaggc 780
ggcaaggcct gcaagatgca gtattgcaag cactggggcg tgcggctgcc tagcggagtg 840
tggttcgaga tggccgacaa ggacctgttc gccgctgcca gattccccga gtgtcctgag 900
ggcagcagca tctctgcccc tagccagaca agcgtggacg tgtccctgat ccaggacgtg 960
gaaagaatcc tggactacag cctgtgtcag gaaacctggt ccaagatcag agccggcctg 1020
cccatcagcc ctgtggacct gtcttacctg gcccccaaga accctggaac cggccctgcc 1080
ttcaccatca ttaacggcac cctgaagtac tttgagacac ggtacatccg ggtggacatt 1140
gccgccccta tcctgagcag aatggtggga atgatcagcg gcaccaccac cgagcgcgag 1200
ctgtgggatg attgggcccc ttacgaggat gtggaaatcg gccccaacgg cgtgctgaga 1260
accagcagcg gctacaagtt ccccctgtac atgatcggcc acggcatgct ggactccgac 1320
ctgcacctgt ctagcaaggc ccaggtgttc gagcaccccc acatccagga tgccgccagc 1380
cagctgcctg acgacgagtc tctgttcttc ggcgacaccg gcctgagcaa gaaccccatc 1440
gagctggtgg aaggctggtt cagcagctgg aagtcctcta tcgccagctt cttcttcatc 1500
atcgggctga ttatcggcct gttcctggtg ctgagagtgg gcatccacct gtgcatcaag 1560
ctgaagcaca ccaagaagag gcagatctac accgacatcg agatgaaccg gctgggcaaa 1620
tga 1623
<210> 141
<211> 1623
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> pTOP1-PADRE(18)-AH1A5_CD8(191)中的VSV-G
<400> 141
atgaagtgcc tgctgtacct ggccttcctg ttcatcggcg tgaactgcaa ggccaagttc 60
gtggccgcct ggacactgaa ggctgccgct aagcttaagt ttaccatcgt gttcccccac 120
aaccagaagg gcaactggaa gaacgtgccc agcaactacc actactgccc cagcagcagc 180
gacctgaact ggcacaacga cctgatcggc accgccatcc aagtgaagat gcccaagagc 240
cacaaggcca tccaggccga tggctggatg tgccacgcca gcaaatgggt caccacctgt 300
gacttcaggt ggtacggccc caagtacatc acccagagca tcagatcctt cacccccagc 360
gtggaacagt gcaaagagag catcgagcag accaagcagg gcacctggct gaaccccgga 420
ttcccacctc agagctgtgg ctacgccacc gtgacagatg ccgaggccgt gatcgtgcaa 480
gtgacccctc accacgtgct ggtggacgag tacacaggcg agtgggtgga cagccagttc 540
atcaacggca agtgctccaa ctacatctgc cccaccgtgc acaacagcac cacctggcac 600
agcgactaca aagtgaagac tagtagccct agctacgcct accaccagtt cgaattcggc 660
ctgtgcgaca gcaacctgat cagcatggac atcacattct tcagcgagga cggcgagctg 720
agcagcctgg gcaaagaggg cacaggcttc agaagcaact acttcgccta cgagacaggc 780
ggcaaggcct gcaagatgca gtattgcaag cactggggcg tgcggctgcc tagcggagtg 840
tggttcgaga tggccgacaa ggacctgttc gccgctgcca gattccccga gtgtcctgag 900
ggcagcagca tctctgcccc tagccagaca agcgtggacg tgtccctgat ccaggacgtg 960
gaaagaatcc tggactacag cctgtgtcag gaaacctggt ccaagatcag agccggcctg 1020
cccatcagcc ctgtggacct gtcttacctg gcccccaaga accctggaac cggccctgcc 1080
ttcaccatca ttaacggcac cctgaagtac tttgagacac ggtacatccg ggtggacatt 1140
gccgccccta tcctgagcag aatggtggga atgatcagcg gcaccaccac cgagcgcgag 1200
ctgtgggatg attgggcccc ttacgaggat gtggaaatcg gccccaacgg cgtgctgaga 1260
accagcagcg gctacaagtt ccccctgtac atgatcggcc acggcatgct ggactccgac 1320
ctgcacctgt ctagcaaggc ccaggtgttc gagcaccccc acatccagga tgccgccagc 1380
cagctgcctg acgacgagtc tctgttcttc ggcgacaccg gcctgagcaa gaaccccatc 1440
gagctggtgg aaggctggtt cagcagctgg aagtcctcta tcgccagctt cttcttcatc 1500
atcgggctga ttatcggcct gttcctggtg ctgagagtgg gcatccacct gtgcatcaag 1560
ctgaagcaca ccaagaagag gcagatctac accgacatcg agatgaaccg gctgggcaaa 1620
tga 1623
<210> 142
<211> 1623
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> pTOP1-PADRE(18)-TRP2_CD8(191)中的VSV-G
<400> 142
atgaagtgcc tgctgtacct ggccttcctg ttcatcggcg tgaactgcaa ggccaagttc 60
gtggccgcct ggacactgaa ggctgccgct aagcttaagt ttaccatcgt gttcccccac 120
aaccagaagg gcaactggaa gaacgtgccc agcaactacc actactgccc cagcagcagc 180
gacctgaact ggcacaacga cctgatcggc accgccatcc aagtgaagat gcccaagagc 240
cacaaggcca tccaggccga tggctggatg tgccacgcca gcaaatgggt caccacctgt 300
gacttcaggt ggtacggccc caagtacatc acccagagca tcagatcctt cacccccagc 360
gtggaacagt gcaaagagag catcgagcag accaagcagg gcacctggct gaaccccgga 420
ttcccacctc agagctgtgg ctacgccacc gtgacagatg ccgaggccgt gatcgtgcaa 480
gtgacccctc accacgtgct ggtggacgag tacacaggcg agtgggtgga cagccagttc 540
atcaacggca agtgctccaa ctacatctgc cccaccgtgc acaacagcac cacctggcac 600
agcgactaca aagtgaagac tagtagcgtg tacgacttct tcgtgtggct ggaattcggc 660
ctgtgcgaca gcaacctgat cagcatggac atcacattct tcagcgagga cggcgagctg 720
agcagcctgg gcaaagaggg cacaggcttc agaagcaact acttcgccta cgagacaggc 780
ggcaaggcct gcaagatgca gtattgcaag cactggggcg tgcggctgcc tagcggagtg 840
tggttcgaga tggccgacaa ggacctgttc gccgctgcca gattccccga gtgtcctgag 900
ggcagcagca tctctgcccc tagccagaca agcgtggacg tgtccctgat ccaggacgtg 960
gaaagaatcc tggactacag cctgtgtcag gaaacctggt ccaagatcag agccggcctg 1020
cccatcagcc ctgtggacct gtcttacctg gcccccaaga accctggaac cggccctgcc 1080
ttcaccatca ttaacggcac cctgaagtac tttgagacac ggtacatccg ggtggacatt 1140
gccgccccta tcctgagcag aatggtggga atgatcagcg gcaccaccac cgagcgcgag 1200
ctgtgggatg attgggcccc ttacgaggat gtggaaatcg gccccaacgg cgtgctgaga 1260
accagcagcg gctacaagtt ccccctgtac atgatcggcc acggcatgct ggactccgac 1320
ctgcacctgt ctagcaaggc ccaggtgttc gagcaccccc acatccagga tgccgccagc 1380
cagctgcctg acgacgagtc tctgttcttc ggcgacaccg gcctgagcaa gaaccccatc 1440
gagctggtgg aaggctggtt cagcagctgg aagtcctcta tcgccagctt cttcttcatc 1500
atcgggctga ttatcggcct gttcctggtg ctgagagtgg gcatccacct gtgcatcaag 1560
ctgaagcaca ccaagaagag gcagatctac accgacatcg agatgaaccg gctgggcaaa 1620
tga 1623
<210> 143
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> NY-ESO-1_CD4
<400> 143
Leu Leu Glu Phe Tyr Leu Ala Met Pro Phe Ala Thr Pro Met Glu Ala
1 5 10 15
Glu Leu Ala Arg Arg Ser Leu Ala Gln
20 25
<210> 144
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 单核细胞增生李斯特氏菌的李斯特菌溶血素O蛋白
<400> 144
Asn Glu Lys Tyr Ala Gln Ala Tyr Pro Asn Val Ser
1 5 10
<210> 145
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 流感病毒核蛋白
<400> 145
Gln Val Tyr Ser Leu Ile Arg Pro Asn Glu Asn Pro Ala His Lys
1 5 10 15
<210> 146
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)糖蛋白(GP)
<400> 146
Ser Gly Val Glu Asn Pro Gly Gly Tyr Cys Leu
1 5 10
<210> 147
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)糖蛋白(GP)
<400> 147
Lys Ala Val Tyr Asn Phe Ala Thr Met
1 5
<210> 148
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 免疫显性腺相关病毒2 (AAV2)
<400> 148
Val Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu
1 5

Claims (15)

1.编码修饰的水泡性口炎性病毒糖蛋白(VSV-G)的分离的核酸序列，其中所述修饰的VSV-G包含至少一个肿瘤抗原或其片段。
2.根据权利要求1所述的编码修饰的VSV-G的分离的核酸序列，其中所述至少一个肿瘤抗原或其片段包含至少一个表位。
3.根据权利要求1或2所述的编码修饰的VSV-G的分离的核酸序列，其中所述至少一个肿瘤抗原或其片段是新抗原。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的编码修饰的VSV-G的分离的核酸序列，其中所述至少一个抗原或其片段在选自位置18、51、55、191、196、217、368和C-末端及其组合的氨基酸位置插入VSV-G中，其中位置编号参考印第安纳型水泡性口炎病毒(VSIV)糖蛋白氨基酸序列。
5.一种载体，其含有权利要求1至4中任一项所述的核酸序列。
6.用权利要求1至4中任一项所述的核酸序列或权利要求5所述的载体转染的树突细胞群。
7.由权利要求1至4中任一项所述的分离的核酸序列编码的修饰的水泡性口炎病毒糖蛋白(VSV-G)，其包含至少一个肿瘤抗原或其片段。
8.一种组合物，其包含权利要求1至4中任一项所述的分离的核酸序列、权利要求5所述的载体、权利要求6所述的树突细胞或权利要求7所述的修饰的VSV-G。
9.疫苗，其包含权利要求1至4中任一项所述的分离的核酸序列、权利要求5所述的载体、权利要求6所述的树突细胞或利要求7所述的修饰的VSV-G，和任选的至少一种佐剂。
10.包含至少一个抗原或其片段的修饰的水泡性口炎病毒糖蛋白(VSV-G)，编码其的核酸序列，含有编码其的核酸序列的载体，由编码其的核酸序列转染的树突细胞群，或包含所述修饰的VSV-G、核酸序列、载体或树突细胞群和任选的至少一种佐剂的疫苗，用于预防和/或治疗有此需要的受试者的疾病或病况。
11.根据权利要求10所述用途的疫苗，其中所述疫苗是多核苷酸疫苗。
12.根据权利要求10所述用途的疫苗，其中所述疫苗是蛋白疫苗。
13.根据权利要求10至12中任一项所述用途的修饰的VSV-G、核酸序列、载体、树突细胞群或疫苗，其中所述疾病是癌症或感染性疾病。
14.根据权利要求10至13中任一项所述用途的修饰的VSV-G、核酸序列、载体、树突细胞群或疫苗，其中所述修饰的VSV-G、核酸序列、载体、树突细胞群或疫苗通过肌肉内注射、皮内注射、瘤内注射、瘤周注射、基因枪、电穿孔或声孔效应施用给受试者。
15.根据权利要求10至14中任一项所述用途的修饰的VSV-G、核酸序列、载体、树突细胞群或疫苗，其中所述修饰的VSV-G、核酸序列、载体、树突细胞群或疫苗是在一种或多种检查点阻断抗体之前、同时或之后施用。
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