CN109937029A - 抗老化迹象的组合和方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及以下组合或在生理上可接受的介质中含有所述组合的组合物用于对抗皮肤老化迹象的化妆品用途：(i)白藜芦醇或其衍生物和(ii)甜菜碱或其衍生物的组合用于对抗皮肤老化的化妆品用途。

Description

抗老化迹象的组合和方法

技术领域

本发明涉及一种美容处理方法，用于对抗皮肤和皮肤附属物的老化迹象，并改善皮肤外观。本发明还涉及含有协同组合以维持皮肤能量的组合物和其主要成分的合成，以及所述组合的用途。

背景技术

皮肤由两层组成，外层称为表皮，内层称为真皮，它们相互作用。人表皮主要由三种类型的细胞组成：大部分角质化细胞，以及黑素细胞和朗格汉细胞。这些细胞类型中的每一种都通过其特定功能对生物中的皮肤起作用，特别是对外界攻击的保护。

表皮通常被分成形成表皮的发芽层的角质化细胞的基层，由排列在发芽层上的若干层多面体细胞组成的棘突层，由含有不同细胞质内含物的扁平细胞组成的一至三层颗粒层，质透明素颗粒，最后是角质层(cornified layer)(角质层(stratum corneum))，角质层由分裂的最后一步称为角质化细胞的一组角质形成细胞层组成。

真皮为表皮提供坚固的支撑。它也是其培育元素。它主要由成纤维细胞和细胞外基质组成，细胞外基质主要由胶原蛋白、弹性蛋白和“基本”物质组成。这些组分由成纤维细胞合成。还有白细胞、肥大细胞和组织巨噬细胞。最后，真皮被血管和神经纤维穿过。

表皮和真皮之间的内聚力由真皮表皮连接提供。

线粒体是大多数细胞中存在的细胞器，它们在能量过程和细胞呼吸中起着重要作用。随着年龄的增长，线粒体功能障碍有助于出现衰老迹象，尤其是皮肤衰老迹象。

线粒体的数量或活动可能随着年龄而减少。

另外，已知皮肤中存在的胶原蛋白和弹性蛋白也可能随着时间的推移在个体中减少，导致出现皮肤迹象，例如皱纹，细纹和皮肤弹性丧失。

衰老现象，无论是内在的还是外在的，都是健康个体中发生的自然正常现象。然而，许多男性和女性认为需要改善皮肤或皮肤附属物的外观，并减少或延迟与皮肤老化有关的迹象。

白藜芦醇及其衍生物是可用于化妆品的抗氧化剂，在对抗皮肤老化迹象方面给出了良好的结果。

白藜芦醇衍生物已在专利申请WO 99/03816中描述，用于治疗，美容或饮食应用。

专利申请FR 3 017 289描述了具有高直接抗氧化能力的组合物，其含有多酚和维生素C衍生物。

然而，仍然需要找到新的活性成分或活性成分的组合，其有效地对抗皮肤或皮肤附属物的衰老迹象。

发明内容

出乎意料的是，在本发明的上下文中，已经发现甜菜碱可以通过作用于皮肤上的年龄的各种影响来对抗一些衰老迹象。所有这些效果也可以通过白藜芦醇获得，白藜芦醇与甜菜碱协同作用。

这解释了为什么本发明涉及一种用于抵抗皮肤或皮肤附属物老化迹象的美容处理方法，该方法包括在皮肤涂层或皮肤附属物上施用以下的组合：(i)白藜芦醇或其衍生物，和(ii)甜菜碱或其衍生物，或在化妆品可接受的介质中含有它们的组合物。

本发明还涉及以下组合的用途：(i)白藜芦醇或其衍生物，和(ii)甜菜碱或其衍生物，作为对抗皮肤或皮肤附属物老化迹象的药剂的用途，特别是通过局部给药。

因此，本发明涉及以下组合的对抗皮肤老化的化妆用途：(i)白藜芦醇或其衍生物，和(ii)甜菜碱或其衍生物，或在生理上可接受的介质中含有所述组合的组合物。

除非另有说明，否则根据本发明的用途和方法是化妆品和非治疗性的；它们的目的基本上是美学。

本发明进一步涉及可用于实施美容处理方法的组合物，其含有以下组合：在生理上可接受的介质中，特别是化妆品可接受的介质中的(i)白藜芦醇或其衍生物和(ii)甜菜碱。

甜菜碱或三甲基甘氨酸传统上用于化妆品中作为制剂赋形剂，表面活性剂或抗静电剂。它也被提出作为保湿剂或毛细管调理剂。

FR2877843涉及甜菜碱用于对抗氢或热应激的用途。

WO91/18588描述了甜菜碱用于减少化妆品组合物诱导的皮肤刺激的用途。WO2010/043769还涉及甜菜碱用于保护皮肤免受刺激的用途。

DE102011089558提出使用甜菜碱和尿素衍生物的混合物来增强皮肤屏障功能。

然而，据申请人所知，从未描述甜菜碱对抗衰老迹象的作用。

令人惊讶的是，现已证明甜菜碱显著增加皮肤细胞中的线粒体量，特别是老年受试者的皮肤细胞。

出于本发明的目的，“老年受试者”是指超过30岁，特别是超过40岁，并且有利地超过50岁，或甚至超过60岁的人类个体。

已知哺乳动物，尤其是人类的衰老导致线粒体改变。此外，细胞中线粒体的数量随着年龄而减少。

线粒体通过在氧化磷酸化过程中通过β-氧化、克雷布斯循环和呼吸链促进ATP产生而在细胞中产生能量。衰老伴随着呼吸链活动的减少，导致ATP产生减少。这种减少估计为每十年8％。

ATP在确保正确细胞活动所需的许多过程中也是必需的，特别是维持蛋白质合成活性，包括细胞外基质蛋白质的合成。

因此，线粒体功能障碍，特别是皮肤细胞中呼吸活动的减少可能有利于皮肤柔软性、柔韧性和/或弹性的丧失，皱纹、细纹、暗沉和/或不均匀的肤色的形成，以及皮肤光泽或透明度的丧失。

甜菜碱还可以刺激线粒体的新陈代谢，尤其是恢复细胞的能量。

对于甜菜碱和白藜芦醇或其衍生物的组合，该活性是协同获得的。

协同作用意味着通过两种活性成分的组合获得的效果大于单独采用的每种活性成分所获得的效果的总和。

(i)甜菜碱或其衍生物和(ii)白藜芦醇或其衍生物的组合对皮肤能量代谢的恢复和/或保持具有协同作用。该组合对皮肤细胞能量代谢的刺激和/或能量的产生具有协同作用。

因此，根据本发明的组合或含有它的组合物可用于刺激皮肤细胞合成胶原和/或弹性蛋白。

因此，在本发明的上下文中，已经证明皮肤细胞如成纤维细胞合成胶原蛋白和弹性蛋白首先由白藜芦醇刺激。

甜菜碱还对皮肤细胞对胶原蛋白的合成具有刺激作用。甜菜碱和白藜芦醇或其衍生物的组合对该刺激具有协同作用。

因此，本发明涉及该组合(或含有它的组合物)的用途，以对抗皮肤或皮肤附属物的衰老迹象，无论是内在的还是外在的。

除了皱纹和细纹外，色素斑的出现，皮肤厚度的减少，弹性的丧失和下垂也是在老化期间观察到的变化。

该组合或含有它的组合物将特别用于减少或预防皮肤病症，例如皮肤紧致和/或弹性丧失，皮肤变薄，皱纹和细纹，暗沉肤色，皮肤色素沉着过度或色素沉着异质性和色素斑。

皮肤是指面部和/或身体的皮肤，头皮和粘膜或半粘膜(例如嘴唇)。皮肤附属物是指头发，毛发，睫毛，指甲，优选地是头发。

根据本发明的方法可特别用于延迟和/或减少和/或预防老化迹象，所述迹象选自皮肤紧致，皮肤变薄，皱纹，细纹，暗沉肤色和色素斑。

在本说明书中，对于表示“在......和......之间”或“从......到”表示的间隔，应理解为包括界限。

适合于实施本发明的白藜芦醇或其衍生物特别选自顺式-白藜芦醇，反式-白藜芦醇，葡萄素和白藜芦醇酯、单体和低聚物，所述单体包含至少一个式-O-CO-A的酯基，低聚物由碳-碳键或醚键连接的单体单元形成，和/或与-O-CO-R-CO-O-基团交联的单体形成，

其中-A代表直链或支链，具有至少两个碳原子的饱和或不饱和烷基，芳基，芳烷基或亚芳烷基，和

-R表示具有0至10个碳原子的饱和或不饱和亚烷基和/或具有1至3个环和/或杂环基的1个亚芳基和这些单元的非对映异构体。

这些衍生物描述于申请WO 9903816中。

本发明特别涉及其中白藜芦醇或其衍生物具有下式的组合物：

其中，

-R'是氢或另一个单元的在R³或在R⁴的连接点，

-R"是氢或另一个单元的在R³或在R"的连接点，

-R¹是氢，醇基，醚基或酯基，

-R²是氢，醇基，醚基或酯基，

-R³表示氢或另一单元的在R"或在R'的连接点，

-R⁴是氢，烷基，酰基或另一单元的在R'的连接点

-R⁵是氢，醇基，醚基或酯基，

和这些部分的非对映异构体和区域异构体。

反式白藜芦醇，反式土大黄苷(trans-rhapontin)，反式去氧土大黄苷(trans-desoxyrhapontin)，反式白皮杉醇(trans-piceatannol)，反式阿斯替瑞精(trans-astringin)，反式蝶芪(trans-pterostilbene)，反式赤松素(trans-pinosylvine)，反式匹克依第(trans-piceide)，反式葡萄素(trans-ε-viniferin)和反式宫部苔草酚C(trans-miyabenol C)是这些化合物的例子。

在本发明的一个实施方式中，组合物基于白藜芦醇单体和/或包含至少一个-O-CO-A基团的低聚物。在优选的基团中，A代表饱和或不饱和的脂肪酸基团。

在不饱和的情况下，双键有利地为顺式的，这对应于天然产物中最常见的情况。对于通过合成或半合成更具体获得的产物，键是反式的。

适用于实施本发明的脂肪酸包括丁酸，戊酸，己酸，山梨酸，月桂酸，棕榈酸，硬脂酸，油酸，亚油酸，亚麻酸，α-亚麻酸，花生四烯酸，二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸。

具有16个或更多碳原子的脂肪酸特别适用于化妆品应用。

在另一个优选的基团中，A代表芳基，例如苯基。

在另一组中，A代表芳烷基或亚芳烷基，烷基或亚烷基更具体地是C1-C8，特别是C1-C4。我们可以具体地提及苄基或苯乙烯基。

白藜芦醇或3,5,4'-三羟基均二苯乙烯都以顺式和反式形式存在。它通常采用单体形式，但也作为具有多达四个单体的低聚物存在。除非另有说明，否则白藜芦醇是指3,5,4'-三羟基均二苯乙烯的顺式或反式形式，及其混合物。白藜芦醇通常与ε-葡萄素有关，其是白藜芦醇的二聚体。

有利地，将使用反式白藜芦醇。可以使用的其他衍生物包括土大黄苷，去氧土大黄苷，白皮杉醇，阿斯替瑞精，蝶芪，赤松素，匹克依第和葡萄素。

特别适用于本发明的低聚物包括例如2-4个单体单元。

根据一个具体的实施方式，白藜芦醇的所有羟基被酯化或醚化，因此衍生物不再具有任何游离OH官能团。

这些醚或酯具体可以使用专利申请WO2011/128714和WO99/03816中描述的方法制备。

根据本发明的一个实施方式，白藜芦醇或其衍生物以含有它的植物提取物的形式使用。

它们可以从各种植物来源获得。我们可以提及葡萄科，伞形科，桃金娘科，龙脑香科，莎草科，买麻藤科，豆科，禾本科，木姜子科(Sericeae)，仙茅科，芭蕉科，蓼科，松科，柏科，云实科(Cesalpiniaceae)，禾本科和茄科。

具体地，本发明的组合中使用的白藜芦醇和/或白藜芦醇衍生物是葡萄树提取物，更具体地是葡萄芽提取物；这些提取物含有具有上式的单元的单体，低聚物和/或聚合物。

有利地，所使用的白藜芦醇的单体和/或低聚物是通过用水和/或有机溶剂从藤茎中提取而获得的。白藜芦醇还可以通过使用遗传修饰的微生物，动物组织或通过植物的生物生产，特别是藤细胞的悬浮液来获得。

甜菜碱或三甲基甘氨酸可以两性离子的形式使用，或以生理上可接受的盐或其衍生物的形式使用。

在本文中，甜菜碱或其衍生物应理解为指示为以两性离子形式或其生理上可接受的盐形式(例如甜菜碱盐酸盐)和/或生理上可接受的甜菜碱衍生物形式的甜菜碱；甜菜碱可以任何这些形式存在于本发明的组合物中，和/或它们以所有比例的混合物存在。

可用于实施本发明的组合可以含有各种异构体形式的白藜芦醇或如上定义的一种衍生物，单独或以所有比例混合。

根据本发明的一个实施方式，甜菜碱和白藜芦醇或其衍生物的组合是甜菜碱分子与白藜芦醇或其衍生物的缀合物形式。

具体地，白藜芦醇或其衍生物可以与甜菜碱共价连接，例如通过酯键。

本说明书中的所有组合包括所述缀合物，其由甜菜碱和白藜芦醇或其衍生物之间的缀合产生。

(i)白藜芦醇或其衍生物与(ii)甜菜碱的组合对增加线粒体活性具有协同作用，具体地是皮肤细胞中线粒体量，更具体地皮肤成纤维细胞中，尤其是在模仿老年受试者成纤维细胞的条件下的皮肤成纤维细胞。

因此，线粒体量恢复到年轻细胞中的量。

根据本发明的组合还对皮肤细胞或其附件，特别是人皮肤成纤维细胞产生能量具有协同作用。

特别是在这些细胞的ATP产生中观察到这种效果。

众所周知，ATP产生是各种细胞过程的主要能量来源，并且其产量随着年龄而降低。

一方面白藜芦醇(或其衍生物)和另一方面甜菜碱可用于增加成纤维细胞的ATP产生。根据本发明的组合对ATP产生的增加具有协同作用。

具体地，在人类皮肤的成纤维细胞上，细胞内ATP合成增加至少10％，特别是至少18％，甚至至少20％，与通过简单地添加组合的两个组分中每一个的单个效果所预期的增加相比。

健康状况良好的受试者中，ATP水平可以恢复到年轻细胞水平。

因此，皮肤细胞可以恢复年轻细胞的代谢，特别是蛋白质合成得以恢复。

根据本发明的一个方面，白藜芦醇或其衍生物通过皮肤细胞，特别是人皮肤的成纤维细胞，增加胶原蛋白和/或弹性蛋白的产生。

甜菜碱还通过皮肤细胞，特别是人皮肤的成纤维细胞增加胶原蛋白的产生。

因此，根据本发明的组合或含有它的组合物可用于刺激皮肤中胶原蛋白和/或弹性蛋白的合成。

有利地，根据本发明的组合对于增加皮肤，特别是人皮肤的成纤维细胞产生胶原蛋白具有协同作用。

因此胶原蛋白的产生与年轻皮肤相当。例如，给予组合或含有它的组合物的受试者中的胶原蛋白含量恢复到较年轻受试者中的平均胶原蛋白含量。

根据本发明的一个实施方式，白藜芦醇和甜菜碱之间的比例为5：1至1：1000，例如5：1至1：500，具体是1：1至1：500。

可用于实施本发明的组合物含有例如(i)0.001至10％的白藜芦醇，特别是0.001至3％的白藜芦醇和例如0.002至1％，和(ii)0.01至10％的甜菜碱，特别是0.01至5％，例如0.1至5％，百分比以相对于组合物总重量的重量表示。

具体地，在根据本发明的组合物中，白藜芦醇和/或其衍生物可以以相对于组合物总重量的0.002至3％，例如0.002至0.5％的浓度存在。

根据本发明的一个实施方式，口服施用(i)白藜芦醇或其衍生物和(ii)甜菜碱组合或含有它的组合物。

根据另一个实施方式，将(i)白藜芦醇或其衍生物和(ii)甜菜碱的组合或含有它的组合物局部施用于皮肤上。

可以组合这两个实施方式，所述组合和/或含有它的组合物可以口服和局部同时、分别或随时间顺序地给药。

特别适合于本发明的组合物在生理上特别是化妆品可接受的介质中含有通过(i)白藜芦醇或其衍生物和(ii)甜菜碱的皮肤细胞产生胶原蛋白的协同作用；在这种组合物中，白藜芦醇或其衍生物可以以0.01至3％的浓度存在，并且甜菜碱可以以0.1至10％的浓度存在，百分比以相对于组合物总重量的重量表示。

根据本发明的组合物优选是化妆品组合物，或适于施用于皮肤或皮肤附属物上的皮肤病学组合物。根据本发明的组合物含有如前定义的白藜芦醇或其衍生物和甜菜碱的组合与生理上可接受的介质。

生理上可接受的介质是指与皮肤或皮肤附属物相容的介质，并且当与身体的各个部分接触时不会引起任何不良影响。它可以是与口服给药相容的介质。

它特别是化妆品可接受的介质。因此，这意味着皮肤良好耐受并具有令人愉快的气味或外观的介质或赋形剂。

对于口服给药，本发明的组合物可以采用任何合适的形式，特别是可饮用溶液，糖浆，片剂，软胶囊，糖锭，胶囊，控释水凝胶或营养食品或营养补充剂的形式。特别地，该组合可以掺入任何形式的营养补充剂中，例如食物棒或压实或不压缩的粉末。

对于口服使用，组合物可包含可摄入的载体。

化妆品或组合物是指旨在与人体的外部部分或与口腔的牙齿和粘膜接触的物质或混合物，专门或主要用于清洁它们，加香，改变它们的外表，保护它们，保持良好状态或纠正体味。根据本发明的美容处理方法具有相同的目的。

该组合物可以或多或少是流动的并且具有白色或彩色乳膏，软膏，乳，乳液，血清，糊剂或泡沫的外观。它也可以采用固体形式，特别是作为棒。它可以用作护理产品和/或用作皮肤或皮肤附属物的化妆产品和/或卫生产品。

根据本发明的组合物可以采用通常用于化妆品领域的任何盖伦制剂形式，并且它可以特别地采用水性或油性溶液的形式，可能是胶凝的，乳液型的分散体，可能是两相，通过将油相分散在水相(O/W)或反之(W/O)，或三重乳液(W/O/W或0/W/O)，或离子或非离子的囊状分散体中获得的乳液-离子型。根据常规方法制备这些组合物。

当根据本发明使用的组合物是乳液时，相对于组合物的总重量，油相的比例可以为0.5至80重量％，优选为5至50重量％。组合物中用作乳液的油、乳化剂和助乳化剂选自传统上在所考虑的领域中使用的那些。乳化剂和助乳化剂在组合物中的存在比例为组合物总重量的0.1-30％(重量)，优选0.5-20％(重量)。

可用于本发明的油包括矿物(矿物油)或合成(凡士林油，异十六烷)烃，植物油(杏籽油，葡萄籽油，乳木果油液体部分，鳄梨油，大豆油)，动物油(羊毛脂)，合成油(全氢化角鲨烯，季戊四醇四异壬酸酯)，含硅衍生物(环戊硅氧烷，环己硅氧烷，聚二甲基硅氧烷和硅聚合物)和氟化油(全氟聚醚)。脂肪醇(十六烷基或硬脂基醇)，脂肪酸(硬脂酸)，蜡(巴西棕榈蜡，地蜡，蜂蜡)，黄油和氢化油也可用作脂肪。

可用于本发明的乳化剂和辅助乳化剂包括，例如，脂肪酸和聚乙二醇酯，如PEG-100硬脂酸酯和PEG-20硬脂酸酯，以及脂肪酸和甘油酯，如硬脂酸甘油酯，蔗糖酯和磷脂。

以已知的方式，根据本发明使用的组合物还可以含有通常在化妆品领域中发现的添加剂，例如亲水或亲脂性胶凝剂，亲水性或亲脂性成分，防腐剂，抗氧化剂，溶剂，香料，填充剂，过滤剂，筛网，颜料，气味吸收剂，螯合剂，醇类和着色剂。这些各种添加剂的量是在所考虑的领域中传统使用的那些，并且例如占组合物总重量的0.01至20％。取决于它们的类型，这些添加剂可以引入油相、水相或脂质囊泡中。总是选择这些添加剂及其比例，以免损害所需的所述组合性能。

亲水性胶凝剂具体包括羧乙烯基聚合物(卡波姆)，丙烯酸共聚物如丙烯酸酯/烷基丙烯酸酯共聚物，聚丙烯酰胺，多糖，天然树胶和粘土，亲脂性胶凝剂包括改性粘土如膨润土，脂肪酸金属盐，疏水性二氧化硅和聚乙烯。

填料包括，例如，球形或微纤维的聚酰胺(尼龙)颗粒；甲基聚甲基丙烯酸酯微球；乙烯-丙烯酸酯共聚物粉末；膨胀粉末，例如空心微球，特别是由偏二氯乙烯，丙烯腈和甲基丙烯酸酯的三元共聚物形成的微球，并由Kemanord Plast公司以商品名EXPANCEL出售；天然有机材料如淀粉粉末，特别是玉米、小麦或大米淀粉，交联或不交联的粉末，如与辛烯基琥珀酸酐交联的淀粉粉末；硅树脂微珠，例如Toshiba Silicone公司以TOSPEARL名称出售的那些；二氧化硅；金属氧化物，如二氧化钛或氧化锌；云母；及其混合物。

根据本发明使用的组合物可以进一步含有其它活性成分，特别是至少一种选自以下的化合物：抗氧化剂，保湿剂；去角质剂；改善屏障功能的药剂；促进皮肤微循环的药剂；脱色剂；抗糖化剂；NO-合成酶抑制剂；刺激皮肤或表皮大分子合成和/或防止其降解的药剂；刺激成纤维细胞和/或角质形成细胞增殖或刺激角蛋白分化的药物；肌松剂；张肌剂；抗污染剂和/或抗自由基剂，太阳能过滤剂，调理剂，抗炎剂，改变皮脂生成的作用剂，清凉剂及其混合物。

抗氧化剂具体包括生育酚及其酯，尤其是生育酚乙酸酯；抗坏血酸及其衍生物，尤其是抗坏血酸磷酸镁，抗坏血酸葡糖苷和抗坏血酸四异棕榈酸酯；阿魏酸；丝氨酸；鞣花酸，根皮素，螯合剂，如BHT，BHA，N，N'-双(3,4,5-三甲氧基苄基)乙二胺及其盐，羟基麦芽糖醇及其混合物。

具体地，根据本发明的化妆品组合物还含有至少一种选自维生素C及其衍生物和维生素E或其衍生物如生育酚乙酸酯的活性成分。

另外的活性成分可以以相对于组合物总重量的0.001％至20％重量的含量存在于根据本发明的组合物中，优选0.01％至10％，甚至更优选0.5％至0.5％。相对于组合物的总重量，5％，甚至更优选0.1％-1％重量。

本发明还涉及一种化妆品处理方法，包括在皮肤或皮肤附属物上施用本发明的组合或组合物的步骤。

因此，美容处理方法的目的是预防或减少皮肤症状，例如皮肤紧致和/或弹性的丧失，皮肤变薄，皱纹和细纹，暗沉肤色，皮肤色素沉着过度或色素沉着异质性和色素斑。

根据本发明的组合物和组合可以直接施用于皮肤或皮肤附属物上，或者可选地，施用于封闭性或非封闭化妆品或皮肤病学载体上，旨在局部施用于皮肤上，例如水凝胶面膜，擦拭物，织物或生物纤维素。

例如，该施用可以每天进行一次，一天进行几次或者每周进行一次。它可能会持续数天和/或数周，可能更长；它可以是连续的，或者例如持续1至2个月，然后在中断后恢复。

本发明还涉及如本文所定义的(i)白藜芦醇或其衍生物与(ii)甜菜碱或其衍生物组合用于制备化妆品组合物的用途。该组合物适用于施加到皮肤或皮肤附属物上。该组合物可有利地用于对抗与皮肤或皮肤附属物上的自由基作用有关的迹象，恢复细胞能量代谢，刺激皮肤产生胶原蛋白或弹性蛋白和/或对抗皮肤老化的迹象。

本发明还涉及制备化妆品组合物的方法，该方法包括将有效量的(i)白藜芦醇或其衍生物和(ii)甜菜碱或其衍生物和任选的生理上可接受的赋形剂混合的步骤。

附图说明

在以下实施例中说明了本发明的其他特征和优点。

在这些示例中，将参考单个图。

它显示了白藜芦醇和/或甜菜碱单独或组合对培养的人成纤维细胞产生ATP的影响；白藜芦醇和甜菜碱的组合对ATP产生的增加具有协同作用。

具体实施方式

实施例1：甜菜碱和反式白藜芦醇组合对ATP产生的作用

将人成纤维细胞在37℃，含5％CO₂的湿气氛中，在补充有葡萄糖、血清和谷氨酰胺的MEM上培养。将含有反式白藜芦醇和/或甜菜碱的溶液加入培养基中：

将初级成纤维细胞培养物与终浓度为1μM的白藜芦醇、浓度为1mM甜菜碱或两者的混合物一起孵育120分钟。

在通过荧光孵育后测量细胞活力。通过基于化学发光的测定法测量细胞内ATP浓度；取4次测量的平均值。

细胞内ATP浓度以每个活细胞的ATP的μM表示，并且相对于未处理细胞中的ATP水平计算ATP增加的百分比。

结果显示在附图中，并在下表中提供。

白藜芦醇和甜菜碱的组合显著增加细胞内ATP产生，其比未处理细胞高68％。

测量白藜芦醇+甜菜碱组合的活性比每种化合物的效果的理论总和大20％以上。

甜菜碱和白藜芦醇的组合可以对抗与衰老相关的成纤维细胞中细胞内ATP浓度的降低。

实施例2：白藜芦醇和甜菜碱增加线粒体量

将人成纤维细胞在37℃，含5％CO₂的湿气氛中，在补充有葡萄糖、血清和谷氨酰胺的MEM上培养。在存在或不存在下列化合物的情况下，用化学试剂(FK866)处理细胞：反式白藜芦醇和甜菜碱。化学试剂FK866减少细胞线粒体量，从而模仿衰老的迹象之一。

在这些条件下，评估活性成分增加线粒体量的能力。

处理24小时后，使用在533nm发荧光的壬基吖啶橙(NAO，Invitrogen)探针测量线粒体量。可以通过DAPI染色测量细胞活力。使用FACS LSRII进行流式细胞术分析，并通过FlowJo软件分析结果。

结果如下表所示：

a)用FK866处理降低成纤维细胞的线粒体量，模拟衰老的影响

b)白藜芦醇、甜菜碱及其组合的处理可防止FK866对线粒体量的影响

实施例3：白藜芦醇和甜菜碱增加胶原蛋白的产生

用白藜芦醇、甜菜碱或两种化合物的混合物培养皮肤成纤维细胞24小时。

对于基因表达分析，从成纤维细胞培养物中提取总RNA，并通过定量实时PCR测量表达。使用RNeasy Mini Kit(Qiagen)进行RNA提取。使用iScript cDNA合成试剂盒(Biorad)将总RNA用于cDNA合成。使用mix 480SYBR Green I Master(Roche)进行PCR反应。使用下表中列出的适当引物对每个样品进行两次PCR。为了比较相对表达式，使用ΔΔCt方法。感兴趣基因的相对表达由与未处理样品相比的表达变异表示。

结果如下表所示：

白藜芦醇和甜菜碱对增加胶原蛋白基因1和3的表达具有协同作用。

实施例4：组合物

通过混合下列配方的组分来制备根据本发明的组合物

凝胶

乳膏

	％
		水	QSP 100
EDTA四钠	0.05
		丙烯酸钠共聚物，卵磷脂	2
甜杏仁油	10
		棕榈酰葡萄芽提取物	0.35
山梨酸钾	0.3
		BHT	0.05
甜菜碱	0.5
		芳香剂	0.3

护肤液

。

乳液

序列表

<110> 汤姆凯特国际有限公司

哈佛大学校长及研究员协会

<120> 抗老化迹象的组合和方法

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> unsure

<223> 上游引物Co11A1

<400> 1

gagggccaag acgaagacat c 21

<210> 2

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> unsure

<223> 下游引物Col1A1

<400> 2

cagatcacgt catcgcacaa c 21

<210> 3

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> unsure

<223> 上游引物RNA18S

<400> 3

gagactctgg catgctaact ag 22

<210> 4

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> unsure

<223> 下游引物RNA18S

<400> 4

ggacatctaa gggcatcaca g 21

Claims (16)

1.以下组合或在生理上可接受的介质中含有所述组合的组合物用于对抗皮肤老化迹象的化妆品用途：(i)白藜芦醇或其衍生物与(ii)甜菜碱或其衍生物。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组合或含有它的组合物是口服给药。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组合或含有它的组合物局部施用于皮肤上。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的用途，其特征在于，(i)白藜芦醇或其衍生物与(ii)甜菜碱或其衍生物的组合或组合物，用于延迟和/或减少和/或预防选自以下的老化迹象：皮肤紧致的丧失，皮肤变薄，皱纹，细纹，暗沉肤色和色素斑。

5.根据前述权利要求中任一项的用途，用于刺激皮肤中胶原蛋白和/或弹性蛋白的合成。

6.根据前述权利要求中任一项的用途，其特征在于，(i)白藜芦醇或其衍生物与(ii)甜菜碱或其衍生物的组合对皮肤细胞的能量代谢和/或能量产生具有协同作用。

7.根据前述权利要求中任一项的用途，其特征在于，白藜芦醇或其衍生物(i)选自：顺式白藜芦醇，反式白藜芦醇和白藜芦醇酯、单体与低聚物，所述单体包含至少一个式-O-CO-A的酯基，所述低聚物由碳-碳键或醚键连接的单体单元形成，和/或与-O-CO-R-CO-O-基团交联的单体形成，其中-A表示具有至少两个碳原子的直链或支链、饱和或不饱和的烷基，芳基，芳烷基或亚芳烷基，和-R表示具有0至10个碳原子的饱和或不饱和亚烷基和/或具有1至3个环的1个亚芳基和/或杂环基团，以及这些单元的非对映异构体。

8.根据前述权利要求中任一项的用途，其中所述组合是甜菜碱与白藜芦醇或其衍生物的缀合物的形式。

9.用于对抗皮肤老化迹象的美容处理方法，其包括在皮肤涂层或其附件上施用在美容上可接受的介质中含有如权利要求1至8之一所定义的(i)白藜芦醇或其衍生物和(ii)甜菜碱或其衍生物的组合的组合物的步骤。

10.根据权利要求9所述的美容处理方法，其特征在于，它可用于延迟和/或减少和/或预防选自以下的衰老迹象：皮肤紧致和/或弹性丧失，皮肤变薄，皱纹和细纹，暗沉肤色，皮肤色素沉着过度或色素沉着异质性和色素斑。

11.根据权利要求9或10所述的美容处理方法，其特征在于，白藜芦醇或其衍生物以含有它的植物提取物的形式存在于组合物中。

12.根据权利要求9-11中任一项所述的美容处理方法，其特征在于，甜菜碱是其生理上可接受的盐之一的形式。

13.根据权利要求9-12中任一项所述的美容处理方法，其特征在于，白藜芦醇和甜菜碱之比在5：1和1：1000之间。

14.根据权利要求9-13中任一项所述的美容处理方法，其特征在于，该组合物含有(i)0.001-10％的白藜芦醇和(ii)0.01-10％的甜菜碱，百分比表达相对于组合物的总重量。

15.根据权利要求1-8中任一项所述的用途的组合物，或用于实施权利要求9-14中任一项的方法的组合物，其特征在于，它在生理上可接受的介质中含有在皮肤细胞上通过以下方式产生胶原蛋白的协同作用：(i)白藜芦醇或其衍生物和(ii)甜菜碱，白藜芦醇或其衍生物以0.002至3％的浓度存在，甜菜碱以0.1至10％的浓度存在，百分比表达相对于组合物的总重量的重量。

16.根据权利要求15所述的组合物，其特征在于，所述介质是化妆品可接受的介质，并且其还含有至少一种选自以下的活性成分：抗氧化剂，保湿剂，去角质剂，改善屏障功能的作用剂，脱色剂和促进皮肤微循环的作用剂。