CN109913573B - 小麦穗粒数主效qtl的紧密连锁的分子标记及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种小麦穗粒数主效QTL的紧密连锁的分子标记及其应用。本发明还提供了一种用于鉴定或辅助鉴定小麦穗粒数性状的引物组，为能够扩增得到如下DNA片段的引物组：所述DNA片段是以小麦基因组DNA为模板，采用如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示引物对进行PCR扩增所得的DNA片段，以及采用如SEQ ID NO:3‑5所示引物对进行PCR扩增所得的DNA片段。以小麦基因组DNA为模板，采用上述引物组进行PCR扩增所得产物即为与小麦穗粒数性状相关的分子标记本发明可用于小麦穗粒数的分子标记，为小麦产量性状分子育种提供优异基因资源和选择工具。

Description

小麦穗粒数主效QTL的紧密连锁的分子标记及其应用

技术领域

本发明属于小麦分子生物技术与育种技术领域，具体地说，涉及一种小麦穗粒数主效QTL的紧密连锁的分子标记及其应用。

背景技术

小麦作为全球重要的粮食作物之一，提高小麦的产量是解决人类粮食需求的重要途径。小麦产量由单位面积穗数、穗粒数和千粒重构成。其中穗粒数作为小麦产量三要素之一，对产量形成具有较大贡献。因此挖掘控制穗粒数的优异等位基因，开发功能性分子标记，可大大加快小麦优异品种的选育进程，为小麦产量性状分子育种提供优异基因资源和选择工具。

穗粒数是受多基因控制的数量性状，遗传基础复杂，受环境影响较大，单个基因效应小，因此，对穗粒数的遗传研究比较困难。经典的遗传分析方法只能把控制数量性状的多个基因作为一个整体进行研究，用平均值和方差等遗传参数来反映数量性状的遗传特征，难以有效地研究控制性状表达的基因的数目、基因在染色体上的位置、基因的效应及其作用方式。随着分子生物学和生物统计的发展，以分子标记遗传图谱和各种统计模型为基础的数量性状位点(quantitative trait loci，QTL)作图技术，为研究数量性状遗传提供了有效的技术手段。利用QTL可检测出目标性状在染色体上的位置及效应以及与其它基因的关系。因此，不断丰富穗粒数基因的多样性，并通过分子标记技术，研究和开发小麦穗粒数的基因，在育种工作中具有极其重要的意义。

迄今已发现小麦21条染色体上均有穗粒数QTL，通过数量性状基因位点(Quantitative trait locus，QTL)分析，利用多个作图群体在4A染色体检测到穗粒数QTL位点(

et al.Theoretical and Applied Genetics.,105(6-7):921-936,2002；Caiet al.,Genomics and Applied Biology.,35(5):1183-1188,2016；Liu et al.Mol.PlantBreeding,1(5):1-10,2010；McIntyre et al.Theoretical and Applied Genetics.,2010；Maccaferri et al.,J.Exp.Bot.,62(2):409-438,2011；Gao et al.Front.PlantSci.,6:1099,2015；Shi et al.,Front.Plant Sci.,8:1412,2017)。目前，在4A染色体上穗粒数QTL的报道相对较少。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种小麦穗粒数主效QTL的紧密连锁的分子标记及其应用，通过获得的与小麦穗粒数主效QTL紧密连锁的分子标记，来检测小麦品种或品系中是否具有增加小麦穗粒数的QTL，以加快小麦优异品种的选育进程。

为了解决上述技术问题，本发明公开了一种用于鉴定或辅助鉴定小麦穗粒数性状的引物组，为能够扩增得到如下DNA片段的引物组：所述DNA片段是以小麦基因组DNA为模板，采用如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示引物对4A671931696进行PCR扩增所得的DNA片段，以及采用如SEQ ID NO:3-5所示引物对PAX-110572601进行PCR扩增所得的DNA片段。

可选地，所述4A671931696引物对由SEQ ID NO:1所示的上游引物和SEQ ID NO:2所示的下游引物组成，PAX-110572601引物对由SEQ ID NO:3-4所示的上游引物和SEQ IDNO:5所示的下游引物组成，SEQ ID NO:1-5所示的核苷酸序列均为单链DNA分子。

可选地，所述小麦为以小麦京411为亲本，通过采用常规杂交并繁衍选育至F2代以上的京411小麦衍生品种或品系。

本发明还公开了一种鉴定或辅助鉴定小麦品种或品系的方法，包括如下步骤：

S1、以待测小麦的基因组DNA为模板，采用权利要求1或2所述的4A671931696引物对进行PCR扩增，得到PCR产物A；

S2、以待测小麦的基因组DNA为模板，采用权利要求1或2所述的PAX-110572601引物对进行PCR扩增，得到PCR产物B；

S3、将上述PCR产物A和PCR产物B在6.0％的非变性聚丙烯酰胺凝胶上稳压147V电泳分离后，如能够分别获得扩增产物的分子量为238bp、172bp的扩增片段，则该小麦品种或品系为在该基因位点上具有增加小麦穗粒数基因的小麦品种或品系；否则，该小麦品种或品系属于在该位点为不具有增加小麦穗粒数基因的小麦品种或品系。

可选地，所述步骤S1中的PCR扩增体系为10μl，包括：1μl的DNA模板，1μl如SEQ IDNO:1所示的上游引物，1μl如SEQ ID NO:2所示的下游引物，5μl的2×Taq PCR StarMix，2μl的ddH₂O；

PCR扩增程序如下：95℃变性5min，34个循环的普通PCR程序：95℃变性30s，55℃复性30s，72℃延伸1min；72℃延伸5min；结束扩增，12℃保存。

可选地，所述步骤S2中的PCR扩增体系为10μl，包括：1μl的DNA模板，1μl如SEQ IDNO:3所示的上游引物，1μl如SEQ ID NO:4所示的上游引物L₂，1μl如SEQ ID NO:5所示的下游引物R，5μl的2×Taq PCR StarMix，1μl的ddH₂O；

PCR扩增程序如下：94℃变性5min，10个循环的复性温度降落程序，每个循环为94℃变性30s，62℃复性30s，每个循环在62℃的基础上降低1℃，72℃延伸30s；30个循环的普通PCR程序：94℃变性30s，55℃复性30s，72℃延伸30s；72℃延伸10min；结束扩增，10℃保存。

可选地，所述小麦品种或品系为以小麦京411为亲本，通过采用常规杂交并繁衍选育至F2代以上的京411小麦衍生品种或品系；所述小麦品种或品系的DNA是指将小麦植株叶片分离提取后获得的DNA。

可选地，所述6％的非变性聚丙烯酰胺凝胶是指100ml聚丙烯酰胺凝胶溶液中含有5.85g丙烯酰胺和0.15g甲叉丙烯酰胺。

本发明还公开了一种与小麦穗粒数性状相关的分子标记，为以小麦基因组DNA为模板，采用权利要求1所述引物组进行PCR扩增所得的DNA片段，分别为4A671931696和PAX-110572601，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7所示。

本发明还公开了一种上述的引物组或分子标记在如下任一中的应用：

(1)鉴定或辅助鉴定小麦穗粒数性状；

(2)小麦育种。

与现有技术相比，本发明可以获得包括以下技术效果：

1)本发明公开的小麦穗粒数紧密连锁的分子标记4A671931696和PAX-110572601充分体现了小麦品种或品系的穗粒数主效QTL，通过分子标记对小麦品种或品系PCR扩增，可以快捷地对小麦品种或品系是否具有穗粒数的QTL进行判断，以便快速筛选出具有增加小麦穗粒数的QTL的小麦品种或品系用于育种，可大大加快小麦优异品种的选育进程，为小麦产量性状分子育种提供优异基因资源和选择工具。

2)将本发明提供的与小麦穗粒数紧密连锁的分子标记方法用于小麦育种，只需检测这些标记的扩增条带特性，可以判断穗粒数主效基因位点的增效变异存在与否，来预测小麦的穗粒数表型，用于指导小麦数量性状改良的育种工作，不仅筛选快速精准，不受环境影响，选择目标明确，而且节约了生产成本，大大提高了小麦品种或品系的选择效率和质量，直接实现了目标基因在小麦种质资源以及育种后代中的鉴定，为小麦育种开拓更多新的穗粒数遗传资源。

当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有技术效果。

附图说明

此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本发明的一部分，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：

图1是本发明小麦品种京411的穗粒数主效QTL在染色体4AL上的作图区间；图中：空心长方形代表染色体，右侧是分子标记的名称，左侧数字是标记在染色体上的位置，单位是cM；图中共有两种分子标记，4A671931696为InDel标记，其余为STS标记，下划线部分为4A61931696和PAX-110572601标记；染色体右方黑色的长方形分别表示穗粒数在各个环境下的QTL作图区间；

图2是本发明引物4A671931696在KJ-RIL家系部分扩增结果；

图3是本发明引物PAX-110572601在KJ-RIL家系部分扩增结果；

图4是本发明基于KJ-RIL群体qKnps-4A靶区段高密度分子标记及QTL物理定位(参照IWGSC RefSeq v1.0位置)；其中，灰色区间为10个环境下基于IciMapping4.1检测qKnps-4A的LOD峰值标记所在物理位置；

图5是本发明qKnps-4A在10个环境下利用MapQTL 6.0、IciMapping 4.1及QTLNetwork 2.0检测到的LOD峰值。

具体实施方式

以下将配合实施例来详细说明本发明的实施方式，藉此对本发明如何应用技术手段来解决技术问题并达成技术功效的实现过程能充分理解并据以实施。

本发明所述小麦品种京411为审定品种，于1991年通过北京市品种审定；1992年通过天津市、山西省和全国品种审定；京411可以从国家农作物种质资源库索取，全国统一编号为ZM020984；科农9204为审定品种，于2002年通过河北省农作物品种审定委员会审定；2003年通过全国品种审定，品种审定编号为国审麦2003037。

本发明中2×Taq PCR StarMix为预混的含有优化浓度的高纯度Taq DNA聚合酶、dNTPs、Mg²⁺、反应缓冲液和优化剂等成分的即用型2倍浓度的PCR溶液，本产品品牌为TIANGEN，由天根生化科技(北京)有限公司提供。

实施例1与小麦穗粒数主效QTL紧密连锁的分子标记

采用4A671931696标记引物：

上游引物序列：GCTGGGGTTTCTCTGCAAAA(如SEQ ID NO:1所述)、

下游引物序列：TGGGGAGTGGCATCTTGTAG(如SEQ ID NO:2所述)，

采用PAX-110572601标记引物：

上游引物L₁序列：TTATCTACTACCCATTTCCACCCTAAC(如SEQ ID NO:3所述)，

上游引物L₂序列：TACTACCCATTTCCACCCCCAT(如SEQ ID NO:4所述)，

下游引物R序列：TGGTTGTAATCAGTCCATGT(如SEQ ID NO:5所述)；

用4A671931696标记引物对小麦品种京411的DNA进行PCR扩增，其PCR扩增体系为10μl，包括：1μl的DNA模板，1μl的上游引物，1μl的下游引物，5μl的2×Taq PCR StarMix，2μl的ddH₂O；采用普通扩增程序扩增：95℃变性5min；34个循环的普通PCR程序：95℃变性30s，55℃复性30s，72℃延伸1min；72℃延伸5min；结束扩增，12℃保存；扩增产物在6.0％的非变性聚丙烯酰胺凝胶上稳压147V电泳分离，银染法，获得对应的扩增产物的分子量为238bp。

用PAX-110572601标记引物对小麦品种京411的DNA进行PCR扩增，其PCR扩增体系为10μl，包括：1μl的DNA模板，1μl的上游引物L₁，1μl的上游引物L₂，1μl的下游引物R，5μl的2×Taq PCR StarMix，1μl的ddH₂O；采用梯度降落PCR扩增程序扩增，步骤如下：

94℃变性5min；10个循环的复性温度降落程序:每个循环为94℃变性30s，62℃复性30s，每个循环在62℃的基础上降低1℃，72℃延伸30s；30个循环的普通PCR程序：94℃变性30s，55℃复性30s，72℃延伸30s；72℃延伸10min；结束扩增，10℃保存；扩增产物在6.0％的非变性聚丙烯酰胺凝胶上稳压147V电泳分离，银染法，获得对应的扩增产物的分子量为172bp。

PCR程序采用的型号为：T100^TMThermal Cycler，本发明中所有的PCR扩增均采用该型号PCR仪，该PCR仪不限制发明内容。

实施例2与小麦穗粒数主效QTL紧密连锁的分子标记的筛选方法及应用

具体包括以下步骤：

(i)以多穗粒数的小麦品种京411为母本、以少穗粒数的小麦品种科农9204为父本进行杂交得到杂种F1，F1自交产生的F2，F2逐代自交形成含有188个家系的F6代RIL群体；

(ii)用改良的CTAB法，即改良的十六烷基三甲基溴化铵法(Vander Beek et al.,1992)提取上述RIL群体各株系的DNA，采用InDel标记、基于表达序列标签PCR扩增标记(STS标记)对所述家系进行基因型分析，获得所述RIL群体的基因型值材料(图1)；序列标记位点(sequence tag site,STS)又称为序列靶位点，是以引物进行PCR扩增,使其与基因组DNA序列中的特定位点结合，从而扩增出基因组中的某段区域；InDel(insertion-deletion)标记即插入缺失标记，指的是根据两种亲本中在全基因组中的差异，相对另一个亲本而言，其中一个亲本的基因组中有一定数量的核苷酸插入或缺失。根据基因组中插入缺失位点，设计扩增这些插入缺失位点的PCR引物。

改良的CTAB法提取叶片DNA的步骤包括：取钢珠和0.2g左右的新鲜叶片放入2.0ml离心管中，快速放在液氮中，摇晃磨成细粉；加CTAB提取液0.8ml，摇匀，65℃水浴30～60min，其间不时反转2-4次摇匀；离心管放置于室温冷却，加入等体积的氯仿-异戊醇(24:1)或加入等体积酚-氯仿-异戊醇(25:24:1)，剧烈摇晃1min混匀；8000rpm离心10min；吸上清600ul至另一1.5ml离心管中；加入0.8倍体积预冷的异丙醇(-20°预冷)沉淀DNA；12000rpm离心6min；倒掉上清，加入适量70％乙醇洗涤沉淀1-2次；离心管倾斜放置于通风橱吹干，待无酒精味，加400ul TE溶解，放-20℃冰箱长期保存。

用4A671931696标记引物对KJ-RIL群体的DNA进行PCR扩增，其PCR扩增体系为10μl，包括：1μl的DNA模板，1μl的上游引物，1μl的下游引物，5μl的2×Taq PCR StarMix，2μl的ddH₂O；采用普通扩增程序扩增：95℃变性5min；34个循环的普通PCR程序：95℃变性30s，55℃复性30s，72℃延伸1min；72℃延伸5min；结束扩增，12℃保存；扩增产物在6.0％的非变性聚丙烯酰胺凝胶上稳压147V电泳分离，银染法，得到非变性聚丙烯酰胺凝胶图片(图2)。由此进行结果分析，小麦品种京411扩增片段大小为238bp，小麦品种科农9204扩增片段大小为250bp,KJ-RIL共188个群体中带型与京411相同的有89个，与科农9204相同的为99个。

用PAX-110572601标记引物对小麦品种京411的DNA进行PCR扩增，其PCR扩增体系为10μl，包括：1μl的DNA模板，1μl的上游引物L₁，1μl的上游引物L₂，1μl的下游引物R，5μl的2×Taq PCR StarMix，1μl的ddH₂O；采用梯度降落PCR扩增程序扩增：94℃变性5min；10个循环的复性温度降落程序:每个循环为94℃变性30s，62℃复性30s，每个循环在62℃的基础上降低1℃，72℃延伸30s；30个循环的普通PCR程序：94℃变性30s，55℃复性30s，72℃延伸30s；72℃延伸10min；结束扩增，10℃保存；扩增产物在6.0％的非变性聚丙烯酰胺凝胶上稳压147V电泳分离，银染法，得到非变性聚丙烯酰胺凝胶图片(图3)。由此进行结果分析，小麦品种京411扩增片段大小为172bp，小麦品种科农9204扩增片段大小为180bp,KJ-RIL共188个群体中带型与京411相同的有89个，与科农9204相同的为99个。

(iii)利用JOINMAP 2.0作图软件，将获得的RIL群体基因型资料构建具有119566个标记位点的小麦分子标记遗传连锁图谱，以LOD≥2.5为标准；119566个标记中包含119001个SNP标记，287个DArTs标记、153个g-SSR标记、50个e-SSR标记、17个STS标记、45个SRAPs标记、5个ISSRs标记、7个功能性PCR标记和1个形态标记。

(iv)将RIL群体进行了10个试验环境的田间种植及表型鉴定，分别考察不同年份、不同地点及不同氮水平处理条件下的各个株系的株高及穗下节间长，其中10个环境即：2011–2012、2012–2013、2013–2014连续3年在中国科学院栾城农业生态系统试验站(T1及T2：37°53’N，114°41’E)、2012–2013年在中国科学院遗传与发育生物学研究所北京平西府农场(T3：40°06’N，116°24’E)及河南省新乡市业科学研究院辉县试验基地(T4：35°27’N，113°48’E)种植，每试验环境分高氮(High nitrogen，HN)和低氮(Low nitrogen，LN)两个处理；

其中LN处理，全年不施肥；而HN处理，每年播种前施300kg·hm-2磷酸二胺和225kg·hm-2尿素作为底肥，拔节期施150kg·hm-2尿素追肥；

其中小麦种植方法：每个系种植2行，每行播40粒；行长3m，株距7.5cm，行距25cm，正常生长及收获；穗粒数测定方法：收获后每个株系随机选择5棵，分出主茎，数出主茎穗粒数。

(v)利用JOINMAP 2.0软件构建连锁图谱。将10个单一环境中直接调查得到的穗粒数表型值，按照IciMapping v4.1的BIP模块格式要求整理后，进行加性QTL定位。以1cM为步进区间，进行1000次置换检验，确定LOD阈值；

(vi)结合188个KJ-RIL高密度遗传连锁图谱和10个环境穗粒数表型数据进行QTL分析，在4AL的AX-111729029–AX-112286181(物理位置：4A:671926767–4A:684269262)区段检测到控制穗粒数主效QTL-qKnps-4A(表1，图4)，其在10个环境均稳定表达，解释穗粒数表型变异的8.25–18.47％，来自京411等位基因增加主茎穗穗粒数1.52–2.49个。

表1基于188个KJ-RIL群体10个环境穗粒数QTL检测结果

利用KJ-RIL遗传群体10个环境条件下穗粒数QTL定位结果，其中MapQTL 6.0、IciMapping 4.1及QTLNetwork 2.0均在4AL染色体区段检测到穗粒数多环境稳定表达的主效QTL—qKnps-4A(图5)，LOD峰值重叠区间为Ax-109844107–Ax-110540586，遗传距离为149.6–150.3cM，对应于Chr4A:680398739–683638403的3.23Mb物理位置范围内。

通过QTL分析，在4AL的AX-111729029–AX-112286181(物理位置：4A:671926767–4A:684269262)区段检测到控制穗粒数主效QTL-qKnps-4A，其在10个环境均稳定表达，解释穗粒数表型变异的8.25–18.47％，来自京411等位基因增加主茎穗穗粒数1.52–2.49个。说明4A671931696标记引物在小麦品种京411的DNA中获得的扩增产物分子量为238bp、PAX-110572601标记引物在小麦品种京411的DNA中获得的扩增产物分子量为172bp，即与小麦穗粒数QTL紧密连锁的分子标记。

上述说明示出并描述了发明的若干优选实施例，但如前所述，应当理解发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述发明构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离发明的精神和范围，则都应在发明所附权利要求的保护范围内。

序列表

<110> 鲁东大学

<120> 小麦穗粒数主效QTL的紧密连锁的分子标记及其应用

<130> 2019

<160> 7

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequence)

<400> 1

gctggggttt ctctgcaaaa 20

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequence)

<400> 2

tggggagtgg catcttgtag 20

<210> 3

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequence)

<400> 3

ttatctacta cccatttcca ccctaac 27

<210> 4

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequence)

<400> 4

tactacccat ttccaccccc at 22

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial sequence)

<400> 5

tggttgtaat cagtccatgt 20

<210> 6

<211> 238

<212> DNA

<213> 小麦(wheat)

<400> 6

gctggggttt ctctgcaaaa ccccaaacca cgtcgcgcca gtcgcctcct tcgggaagct 60

ccagcagaaa caaccgtcga cgtcccgcct tcgtctctaa gtgctcagat tccacagcaa 120

aatcaacggc aagtccagcg aacctgagca acttggtctc ttgcggttcc tgtccccaat 180

tgacacctct ggactctggt ggctgtatca ggccccggct acaagatgcc actcccca 238

<210> 7

<211> 172

<212> DNA

<213> 小麦(wheat)

<400> 7

ttatctacta cccatttcca ccctcacgac taattaaatg actagtcttc ttaacaaacc 60

atataattcg ggtataggaa gaaagtacat ccacgtttgg accaatcaag caaccatgtc 120

gctctttctt tctttactta tttcatccag tcacatggac tgattacaac ca 172

Claims (10)

1.用于辅助鉴定小麦穗粒数性状的引物组，其特征在于，为能够扩增得到如下DNA片段的引物组：所述DNA片段是以小麦基因组DNA为模板，采用如SEQ ID NO:1和SEQ IDNO:2所示引物对进行PCR扩增所得的DNA片段4A671931696，该DNA片段的核苷酸序列如SEQIDNO:6，序列长度238bp；

采用如SEQ ID NO:3-5所示引物对进行PCR扩增所得的DNA片段PAX-110572601，该DNA片段的核苷酸序列如SEQIDNO:7，序列长度172bp。

2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，扩增4A671931696DNA的引物对是由所述SEQ ID NO:1所示的上游引物和SEQ ID NO:2所示的下游引物组成，扩增PAX-110572601的引物对是由SEQ ID NO:3-4所示的上游引物和SEQ ID NO:5所示的下游引物组成，SEQ IDNO:1-5所示的核苷酸序列均为单链DNA分子。

3.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述小麦为以小麦京411为亲本，通过采用常规杂交并繁衍选育至F2代以上的京411小麦衍生品种或品系。

4.一种辅助鉴定小麦品种或品系的方法，其特征在于，包括如下步骤： S1、以待测小麦的基因组DNA为模板，采用权利要求1或2扩增4A671931696的引物对进行PCR扩增，得到PCR产物A； S2、以待测小麦的基因组DNA为模板，采用权利要求1或2扩增PAX-110572601的引物对进行PCR扩增，得到PCR产物B； S3、将上述PCR产物A和PCR产物B在6.0％的非变性聚丙烯酰胺凝胶上稳压147V电泳分离后，如能够获得PCR产物A的分子量为238bp、PCR产物B的分子量为172bp，则该小麦品种或品系为在该基因位点上具有增加小麦穗粒数基因的小麦品种或品系；否则，该小麦品种或品系属于在该位点为不具有增加小麦穗粒数基因的小麦品种或品系。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤S1中的PCR扩增体系为10μl，包括：1μl的DNA模板，1μl如SEQ ID NO:1所示的上游引物，1μl如SEQ ID NO:2所示的下游引物，5μl的2×Taq PCR StarMix，2μl的ddH2O； PCR扩增程序如下：95℃变性5min，34个循环的普通PCR程序：95℃变性30s，55℃复性30s，72℃延伸1min；72℃延伸5min；结束扩增，12℃保存。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤S2中的PCR扩增体系为10μl，包括：1μl的DNA模板，1μl如SEQ ID NO:3所示的上游引物，1μl如SEQ ID NO:4所示的上游引物L2，1μl如SEQ ID NO:5所示的下游引物R，5μl的2×Taq PCR StarMix，1μl的ddH2O； PCR扩增程序如下：94℃变性5min，10个循环的复性温度降落程序，每个循环为94℃变性30s，62℃复性30s，每个循环在62℃的基础上降低1℃，72℃延伸30s；30个循环的普通PCR程序：94℃变性30s，55℃复性30s，72℃延伸30s；72℃延伸10min；结束扩增，10℃保存。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述小麦品种或品系为以小麦京411为亲本，通过采用常规杂交并繁衍选育至F2代以上的京411小麦衍生品种或品系；所述小麦品种或品系的DNA是指将小麦植株叶片分离提取后获得的DNA。

8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述6％的非变性聚丙烯酰胺凝胶是指100ml聚丙烯酰胺凝胶溶液中含有5.85g丙烯酰胺和0.15g甲叉丙烯酰胺。

9.与小麦穗粒数性状相关的分子标记，其特征在于，为以小麦基因组DNA为模板，采用权利要求1所述引物组进行PCR扩增所得的DNA片段，分别为4A671931696和PAX-110572601，其中，

4A671931696的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示，长度为238bp，其扩增引物对由SEQ IDNO:1和SEQ IDNO:2组成；

PAX-110572601核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示，长度为172bp，其扩增引物对由 SEQID NO:3-5组成。

10.权利要求1或2所述的引物组或权利要求9所述的分子标记在辅助鉴定小麦穗粒数性状中的应用。

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