CN109912727A - 一种精胺枝接化米糠多糖的制备方法以及基因载体 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种精胺枝接化米糠多糖的制备方法以及基因载体，所述精胺枝接化米糠多糖的制备方法包括以下步骤：将米糠多糖与高碘酸钾在20～30℃下搅拌反应使米糠多糖被氧化，得到氧化米糠多糖；将氧化米糠多糖配制成第一溶液，将精胺配制成第二溶液，然后将所述第一溶液加入到所述第二溶液中形成待反应液，在20～30℃下搅拌反应20～26h，得到生成有氧化米糠多糖‑精胺共轭物的混合液；向所述混合液中加入硼氢化钠后，在20～30℃下搅拌反应使所述氧化米糠多糖‑精胺共聚物还原，得到透明的无色溶液；对所述无色溶液进行提纯和干燥，得精胺枝接化米糠多糖。本发明制备的精胺枝接化米糠多糖具有细胞毒性低、生物相容性好的优点。

Description

一种精胺枝接化米糠多糖的制备方法以及基因载体

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，特别涉及一种精胺枝接化米糠多糖的制备方法以及基因载体。

背景技术

基因治疗是指将DNA等外源性核酸注入细胞(转染)，从而对疾病起到预防和治疗效果的方法。近年来，基因治疗作为一种很有前景的治疗手段，受到人们越来越多的关注。脱氧核糖核酸(DNA)分子量大且容易降解，带有负电荷，与细胞膜有排斥作用，且裸DNA在核酸酶的作用下会迅速水解。所以，有效基因载体的开发对基因治疗的发展有重大意义。

现有的基因载体主要有病毒载体和非病毒载体两种，大多数病毒载体都具有高效的基因传递效率，在临床治疗中应用较多。然而病毒载体经常会引发不良的免疫反应，这制约了它的发展，因此，非病毒载体的开发与应用成为现阶段基因治疗的研究重点。非病毒载体包括阳离子脂质体、阳离子聚合物、树枝状高分子和纳米粒子等，但目前所使用的非病毒载体普遍具有以下缺点：(1)稳定性差，基因难以长时间稳定表达；(2)分子量大，不易被细胞内的酶代谢，从而在细胞内堆积，引起细胞毒性，安全性差；(3)制备过程复杂，成本较高。

发明内容

本发明的主要目的是提出一种精胺枝接化米糠多糖的制备方法以及基因载体，旨在提供一种安全性更高的基因载体。

为实现上述目的，本发明提出一种精胺枝接化米糠多糖的制备方法，包括以下步骤：

步骤S10、将米糠多糖与高碘酸钾在20～30℃下搅拌反应使米糠多糖被氧化，得到氧化米糠多糖；

步骤S20、将氧化米糠多糖配制成第一溶液，将精胺配制成第二溶液，然后将所述第一溶液加入到所述第二溶液中形成待反应液，在20～30℃下搅拌反应20～26h，得到生成有氧化米糠多糖-精胺共轭物的混合液；

步骤S30、向所述混合液中加入硼氢化钠后，在20～30℃下搅拌反应使所述氧化米糠多糖-精胺共聚物还原，得到透明的无色溶液；

步骤S40、对所述无色溶液进行提纯和干燥，得精胺枝接化米糠多糖。

优选地，步骤S10具体包括：

步骤S11、将米糠多糖配制成多糖水溶液，然后向所述多糖水溶液中加入高碘酸钾，在20～30℃、避光条件下搅拌反应45～50h，得到反应液；

步骤S12、采用双蒸水在3～5℃下对所述反应液进行透析40～50h，然后收集截留液进行冷冻干燥，得氧化米糠多糖。

优选地，步骤S11中：所述多糖水溶液中的葡萄糖基与所述高碘酸钾的摩尔比为1：(1～1.5)。

优选地，步骤S20中：所述待反应液中精胺与醛基的摩尔比为(1.0～1.5)：1。

优选地，步骤S20中：所述硼酸盐缓冲液的摩尔浓度为0.1～0.2mol/L、pH值为10.0～11.0。

优选地，步骤S20包括：

步骤S21、将氧化米糠多糖溶解于双蒸水中制成第一溶液，将精胺溶解于硼酸盐缓冲液中制成第二溶液；

步骤S22、采用滴加的方式将所述第一溶液逐步滴加入所述第二溶液中混合形成待反应液，并在20～30℃下搅拌反应20～26h，得到生成有氧化米糠多糖-精胺共轭物的混合液。

优选地，步骤S30具体包括：

向所述混合液中加入硼氢化钠后，在20～30℃下搅拌反应45～50h后，再次加入硼氢化钠并在20～30℃下搅拌反应20～25h，得到透明的无色溶液。

优选地，步骤S40包括：

采用双蒸水在3～5℃下对所述无色溶液进行透析40～50h，然后收集截留液进行冷冻干燥，得氧化米糠多糖，所述透析时选用的透析膜的截留分子量为3000～4000。

本发明还提出一种基因载体，所述基因载体包括精胺枝接化米糠多糖，所述精胺枝接化米糠多糖由如上所述的精胺枝接化米糠多糖的制备方法制得。

本发明提供的技术方案中，在水溶液系统中以氧化米糠多糖和精胺为原料，通过简单的醛胺缩合反应制得理化性质稳定的精胺枝接化米糠多糖，制备方法简单、无污染，得到的精胺枝接化米糠多糖以米糠多糖为骨架，其中的米糠多糖作为一种植物多糖，具有生物兼容性好、细胞毒性低等先天优势，且多糖也是生命物质的组成成分之一，广泛参与细胞内的各种生命活动及生理活性的调节，与精胺反应后的精胺枝接化米糠多糖在应用于基因载体时具有细胞毒性低、生物相容性好的优点，使用安全性更高。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅为本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为本发明提供的精胺枝接化米糠多糖的制备方法的第一实施例的流程示意图；

图2至4为各实施例制备的精胺枝接化米糠多糖对DNA的缩合能力测试结果图；

图5至7为各实施例制备的精胺枝接化米糠多糖对DNA的保护能力测试结果图；

图8至10为各实施例制备的精胺枝接化米糠多糖的细胞毒性检测结果图。

本发明目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

非病毒载体包括阳离子脂质体、阳离子聚合物、树枝状高分子和纳米粒子等，但目前所使用的非病毒载体普遍具有以下缺点：(1)稳定性差，基因难以长时间稳定表达；(2)分子量大，不易被细胞内的酶代谢，从而在细胞内堆积，引起细胞毒性，安全性差；(3)制备过程复杂，成本较高。针对上述技术问题，如果可以找到一种更加简便易得、安全高效的基因载体材料，对基因治疗的研究与发展具有重要意义。米糠多糖作为一种植物多糖，具有生物兼容性好、细胞毒性低的先天优势，且多糖是生命物质的组成成分之一，广泛参与细胞内的各种生命活动及生理活性的调节，如果将米糠多糖制备成一种可以用作基因载体的材料，其与现有聚阳离子高分子类载体材料相比，具有细胞毒性低、生物相容性好的优势。

基于上述构思，本发明提出一种精胺枝接化米糠多糖的制备方法，以氧化米糠多糖作为骨架，使氧化米糠多糖与精胺通过醛胺缩合反应制成精胺枝接化米糠多糖，图1所示为本发明提供的精胺枝接化米糠多糖的制备方法的一实施例。请参阅图1，在本实施例中，所述精胺枝接化米糠多糖的制备方法包括以下步骤：

步骤S10、将米糠多糖与高碘酸钾在20～30℃下搅拌反应使米糠多糖被氧化，得到氧化米糠多糖；

先将米糠多糖通过高碘酸钾的氧化作用被氧化成为生成有还原性糖类基团的氧化米糠多糖，然后再与精胺反应进行接枝修饰成为能够满足基因载体使用性能的材料。其中，在本实施例中，所述米糠多糖在与精胺进行接枝反应的操作步骤具体包括：

步骤S11、将米糠多糖配制成多糖水溶液，然后向所述多糖水溶液中加入高碘酸钾，在20～30℃、避光条件下搅拌反应45～50h，得到反应液；

步骤S12、采用双蒸水在3～5℃下对所述反应液进行透析40～50h，然后收集截留液进行冷冻干燥，得氧化米糠多糖。

所述高碘酸钾的作用是充当氧化剂使所述米糠多糖被氧化，其添加量控制为所述多糖水溶液中的葡萄糖基与所述高碘酸钾的摩尔比为1：(1～1.5)，然后在室温、避光条件下以150～250rpm的搅拌速率剧烈搅拌反应45～50h，然后待反应结束后将得到的反应液利用双蒸水进行透析提纯和冷冻干燥，即可获得氧化米糠多糖。通过控制所述高碘酸钾的摩尔量至少不低于所述多糖水溶液中的葡萄糖基，可以实现米糠多糖的充分氧化，而在反应完成后，还可以通过测试反应产物中是否有还原性糖类生成，从而确定氧化米糠多糖是否被成功合成，具体测试方式为：取适量透析液用斐林试剂(斐林试剂是二价铜离子的酒石酸钾钠配合物，与可溶性的还原性糖(葡萄糖、果糖和麦芽糖)在加热的条件下，能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀，因此斐林试剂常用于鉴定可溶性的还原性糖的存在与否)检测其中还原性糖的存在与否，同时以葡萄糖及米糠多糖作为对照，其中葡萄糖是还原性糖类，含有还原性基团，为阳性对照，米糠多糖不是还原性糖类，不含有还原性基团，为阴性对照，如此，当检测数透析液中有还原性基团时，可判定氧化米糠多糖被成功合成，而如果检测到透析液中不含有还原性基团时，说明氧化米糠多糖未被成功合成，可能需要调整反应条件参数等，而本实施例中在使用斐林试剂检测时，透析液中含有还原性糖类，说明米糠多糖被成功氧化为氧化米糠多糖。

步骤S20、将氧化米糠多糖配制成第一溶液，将精胺配制成第二溶液，然后将所述第一溶液加入到所述第二溶液中形成待反应液，在20～30℃下搅拌反应20～26h，得到生成有氧化米糠多糖-精胺共轭物的混合液；

在本实施例中配制所述第一溶液和所述第二溶液时，可选用水作为溶解所述氧化米糠多糖的溶剂，选用硼酸盐缓冲液作为溶解所述精胺的溶剂，进一步地，步骤S20在具体实施时可按照以下步骤进行操作：

步骤S21、将氧化米糠多糖溶解于双蒸水中制成第一溶液，将精胺溶解于硼酸盐缓冲液中制成第二溶液；

步骤S22、采用滴加的方式将所述第一溶液逐步滴加入所述第二溶液中混合形成待反应液，并在20～30℃下搅拌反应20～26h，得到生成有氧化米糠多糖-精胺共轭物的混合液。

其中，用于溶解所述氧化米糠多糖的双蒸水是重蒸水的一种，是指将经过一次蒸馏后的水，再次蒸馏所得到的水。用于溶解所述精胺的硼酸盐缓冲液的摩尔浓度为0.1～0.2mol/L、pH值为10.0～11.0，如此，所述精胺在所述硼酸盐缓冲液中的溶解性更佳。进一步地，所述第一溶液和所述第二溶液在混合形成所述待反应液时，控制所述待反应液中精胺与醛基的摩尔数之比为(1.0～1.5)：1，并且采用将所述第一溶液逐步缓慢滴加入所述第二溶液的方式，有利于所述第一溶液与所述第二溶液的充分混合以及控制反应速率，使得精胺能够充分与醛基发生反应而生成所述氧化米糠多糖-精胺共轭物；然后在室温下以80～120rpm的搅拌速率温和搅拌反应20～26h，得到生成有氧化米糠多糖-精胺共轭物的混合液。

步骤S30、向所述混合液中加入硼氢化钠后，在20～30℃下搅拌反应使所述氧化米糠多糖-精胺共聚物还原，得到透明的无色溶液；

在成功制得生成有氧化米糠多糖-精胺共轭物的混合液后，再向所述混合液中加入硼氢化钠以使所述氧化米糠多糖-精胺共轭物还原得到精胺枝接化米糠多糖，其中，所述硼氢化钠在添加时，为确保所述氧化米糠多糖-精胺共轭物彻底还原，可以选择向所述混合液中多次添加硼氢化钠的方式，例如在向所述混合液中加入适量硼氢化钠并在室温下温和搅拌一段时间后，重复上述步骤1～2次。具体地，在本实施例中，步骤S30优选为通过以下操作步骤进行：向所述混合液中加入硼氢化钠后，在20～30℃下搅拌反应45～50h后，再次加入硼氢化钠并在20～30℃下搅拌反应20～25h，得到透明的无色溶液，其中，搅拌转速设置为80～120rpm。

步骤S40、对所述无色溶液进行提纯和干燥，得精胺枝接化米糠多糖。

在制得生成有精胺枝接化米糠多糖的产物溶液后，对产物进行提纯和干燥，即可获得精胺枝接化米糠多糖产物，其提纯和干燥的方式均可以采用本领域常规的操作方式进行，例如通过旋转蒸发或重结晶后再进行冷冻干燥或真空干燥等获得目标产物。在本实施例中，优选为采用透析的方式对产物进行提纯处理，然后采用冷冻干燥的方式对产物进行干燥处理，具体操作步骤为：采用双蒸水在3～5℃下对所述无色溶液进行透析40～50h，然后收集截留液进行冷冻干燥，得氧化米糠多糖，所述透析时选用的透析膜的截留分子量为3000～4000。

本发明提供的精胺枝接化米糠多糖的制备方法，在水溶液系统中以氧化米糠多糖和精胺为原料，通过简单的醛胺缩合反应制得理化性质稳定的精胺枝接化米糠多糖，制备方法简单、无污染、成本低，克服了以往非病毒型类基因载体制备过程复杂、成本高以及对环境不友好等不足；得到的精胺枝接化米糠多糖以米糠多糖为骨架，其中的米糠多糖作为一种植物多糖，具有生物兼容性好、细胞毒性低等先天优势，且多糖也是生命物质的组成成分之一，广泛参与细胞内的各种生命活动及生理活性的调节，与精胺反应后的精胺枝接化米糠多糖相比于现有多聚阳离子高分子类载体，在应用于基因载体时具有细胞毒性低、生物相容性好的优点，使用安全性更高；此外，通过本发明提供的方法制得的精胺枝接化米糠多糖在应用于基因载体时还具有可定量使用的优点，有利于基因治疗的定量研究和应用。

本发明还提出一种基因载体，所述基因载体包括精胺枝接化米糠多糖，所述精胺枝接化米糠多糖由如上所述的精胺枝接化米糠多糖的制备方法制得。所述精胺枝接化米糠多糖在应用于基因载体时，既可以单独作为基因载体，也可以与其他常用的载体材料以适当比例复合后作为基因载体。所得到的基因载体既可以是体内释放载体，也可以是体外释放载体，例如，在用作基因载体使用时，可以通过将所述精胺枝接化米糠多糖与核酸先分别溶解于缓冲液中制成溶液，然后将两个溶液混合制成载体-核酸复合物，然后通过静脉注射、腹腔注射或皮下注射等方式导入机体内，让其自行到达靶组织，被靶细胞摄取；也可以将上述载体-核酸复合物直接送入体外培养的细胞所在的培养箱中，让其被靶细胞摄取。

本发明提供的基因载体，以上述提供的精胺枝接化米糠多糖为载体材料，具有细胞毒性低、生物兼容性好的优点，在实际应用中对DNA的保护能力较佳，细胞存活率在85％以上。

以下结合具体实施例和附图对本发明的技术方案作进一步详细说明，应当理解，以下实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例1

(1)取1g纯化的米糠多糖配制成浓度为1％的多糖水溶液，然后向多糖水溶液中加入高碘酸钾(高碘酸钾与米糠多糖的摩尔比为1：1)，在25℃、避光条件下以200rpm的搅拌速率搅拌反应48h，待反应结束后将反应液用双蒸水在4℃下透析48h，取透析液用斐林试剂检测出其中含有还原性基团，说明氧化米糠多糖成功被合成，然后收集截留液进行冷冻干燥，得氧化米糠多糖；

(2)取适量氧化米糠多糖溶于100mL的双蒸水中制成第一溶液，使其中醛基浓度为6.25mmol/L，另取适量精胺(使精胺与醛基的摩尔数之比为1.25：1)溶解于50mL的硼酸盐缓冲液(0.1mol/L，pH值为11.0)中制成第二溶液，然后控制滴加速率将第一溶液在5h左右滴加到第二溶液中得到待反应液，再将待反应液在25℃下、以100rpm的搅拌速率搅拌反应24h，得到生成有氧化米糠多糖-精胺共轭物的混合液；

(3)向混合液中加入硼氢化钠1g，同样在温度25℃、搅拌速率100rpm的条件下搅拌48h，然后再向混合液中再次加入硼氢化钠1g，在同样的条件下继续搅拌24h，得到透明的无色溶液；

(4)将透明的无色溶液用双蒸水在4℃下、采用截留分子量为3500的透析膜进行透析48h，然后收集截留液进行冷冻干燥，得到精胺枝接化米糠多糖。

实施例2

(1)取1g纯化的米糠多糖配制成浓度为1％的多糖水溶液，然后向多糖水溶液中加入高碘酸钾(高碘酸钾与米糠多糖的摩尔比为1：1.2)，在20℃、避光条件下以150rpm的搅拌速率搅拌反应50h，待反应结束后将反应液用双蒸水在3℃下透析50h，取透析液用斐林试剂检测出其中含有还原性基团，说明氧化米糠多糖成功被合成，然后收集截留液进行冷冻干燥，得氧化米糠多糖；

(2)取适量氧化米糠多糖溶于100mL的双蒸水中制成第一溶液，使其中醛基浓度为6.25mmol/L，另取适量精胺(使精胺与醛基的摩尔数之比为1：1)溶解于50mL的硼酸盐缓冲液(0.1mol/L，pH值为11.0)中制成第二溶液，然后控制滴加速率将第一溶液在5h左右滴加到第二溶液中得到待反应液，再将待反应液在20℃下、以120rpm的搅拌速率搅拌反应26h，得到生成有氧化米糠多糖-精胺共轭物的混合液；

(3)向混合液中加入硼氢化钠1g，同样在温度20℃、搅拌速率120rpm的条件下搅拌50h，然后再向混合液中再次加入硼氢化钠1g，在同样的条件下继续搅拌25h，得到透明的无色溶液；

(4)将透明的无色溶液用双蒸水在3℃下、采用截留分子量为3000的透析膜进行透析50h，然后收集截留液进行冷冻干燥，得到精胺枝接化米糠多糖。

实施例3

(1)取1g纯化的米糠多糖配制成浓度为1％的多糖水溶液，然后向多糖水溶液中加入高碘酸钾(高碘酸钾与米糠多糖的摩尔比为1：1.5)，在30℃、避光条件下以250rpm的搅拌速率搅拌反应45h，待反应结束后将反应液用双蒸水在5℃下透析40h，取透析液用斐林试剂检测出其中含有还原性基团，说明氧化米糠多糖成功被合成，然后收集截留液进行冷冻干燥，得氧化米糠多糖；

(2)取适量氧化米糠多糖溶于100mL的双蒸水中制成第一溶液，使其中醛基浓度为6.25mmol/L，另取适量精胺(使精胺与醛基的摩尔数之比为1.5：1)溶解于50mL的硼酸盐缓冲液(0.1mol/L，pH值为11.0)中制成第二溶液，然后控制滴加速率将第一溶液在5h左右滴加到第二溶液中得到待反应液，再将待反应液在30℃下、以80rpm的搅拌速率搅拌反应20h，得到生成有氧化米糠多糖-精胺共轭物的混合液；

(3)向混合液中加入硼氢化钠1g，同样在温度30℃、搅拌速率80rpm的条件下搅拌45h，然后再向混合液中再次加入硼氢化钠1g，在同样的条件下继续搅拌20h，得到透明的无色溶液；

(4)将透明的无色溶液用双蒸水在5℃下、采用截留分子量为4000的透析膜进行透析40h，然后收集截留液进行冷冻干燥，得到精胺枝接化米糠多糖。

以上述实施例1至3制得的精胺枝接化米糠多糖作为基因释放载体材料，对其应用性能进行测试，测试方法及结果如下：

(1)精胺枝接化米糠多糖对质粒DNA的结合及保护作用

分别将实施例1至3制得的精胺枝接化米糠多糖加入到适量的去离子水中溶解，得到一定浓度的样品溶液。

①采用琼脂糖凝胶电泳评价精胺枝接化米糠多糖对DNA的缩合能力：将适量样品溶液与0.3μg质粒DNA(如绿色荧光蛋白质粒，GFP plasmid DNA，简称pDNA)按不同的质量比混合，得精胺枝接化米糠多糖/pDNA复合物；反应40min后，加入上样缓冲液，加样于琼脂糖凝胶(1％w/v)，并将凝胶置于pH为7.4的Tris-硼酸(TBE)缓冲液中，进行琼脂糖凝胶电泳，设置电压为90V，时间为40min；同时设置裸DNA对照。电泳结束后，用溴化乙锭(EB)染色凝胶，使DNA条带显示。染色后用凝胶成像仪观察并拍照，结果如图2至图4所示，依次为实施例1至实施例3制备的精胺枝接化米糠多糖与pDNA复合物的电泳测试结果图。其中，图2至4中，条带上方的编号1至6分别表示：1为pEGFP质粒，2至6分别表示精胺枝接化米糠多糖与质粒DNA的质量比依次为1:1、2:1、4:1、8:1和16:1。

由图2至图4的测试结果可知，DNA可与精胺枝接化米糠多糖载体材料发生凝聚而滞留在凝胶泳道中，说明本发明实施例制备的精胺枝接化米糠多糖作为基因载体材料对DNA具有较佳的凝聚能力。

②采用琼脂糖凝胶电泳评价精胺枝接化米糠多糖对DNA的保护能力：设置与步骤①中相同质量比的精胺枝接化米糠多糖/pDNA复合物，反应40分钟后，加入核酸酶(DNaseI，40U/mL)处理，采用与上述相同的方法进行琼脂糖凝胶电泳，结果如图5至图7所示，依次为实施例1至实施例3制备的精胺枝接化米糠多糖与pDNA复合物的电泳测试结果图。其中，图5至7中，条带上方的编号1至7分别表示：1为pEGFP质粒，2为pEGFP质粒+核酸酶DNase I，3至7分别表示精胺枝接化米糠多糖与质粒DNA的质量比依次为1:1、2:1、4:1、8:1和16:1。

由图2至图4的测试结果可知，精胺枝接化米糠多糖可以保护DNA不受核酸酶的水解，说明本发明实施例制备的精胺枝接化米糠多糖作为基因载体材料对DNA具有较佳的保护能力。

(2)精胺枝接化米糠多糖的安全性检测

采用噻唑蓝(MTT)比色法对精胺枝接化米糠多糖的安全性进行评价，同时设置同等浓度米糠多糖为对照组。将一系列浓度梯度的精胺枝接化米糠多糖和米糠多糖分别与人宫颈癌细胞(Hela)共同孵育24h后，加入MTT溶液(0.5mg/mL)继续培养4小时，吸取培养液，加入二甲基亚砜，使用酶标仪测定570nm处的吸光度，并计算细胞的存活率，结果如图8至图10以及表1所示，其中，图8至图10依次为实施例1至4制备的精胺枝接化米糠多糖应用时的细胞毒性检测结果图。

表1各实施例制备的精胺枝接化米糠多糖的细胞毒性检测结果

由图8至图10以及表1的测试结果可知，精胺枝接化米糠多糖相比米糠多糖，细胞存活率稍有下降，但存活率仍在85％以上，无明显细胞毒性，说明本发明实施例制备的精胺枝接化米糠多糖可作为一种安全的基因载体。

以上仅为本发明的优选实施例，并非因此限制本发明的专利范围，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (9)

1.一种精胺枝接化米糠多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤S10、将米糠多糖与高碘酸钾在20～30℃下搅拌反应使米糠多糖被氧化，得到氧化米糠多糖；

步骤S20、将氧化米糠多糖配制成第一溶液，将精胺配制成第二溶液，然后将所述第一溶液加入到所述第二溶液中形成待反应液，在20～30℃下搅拌反应20～26h，得到生成有氧化米糠多糖-精胺共轭物的混合液；

步骤S30、向所述混合液中加入硼氢化钠后，在20～30℃下搅拌反应使所述氧化米糠多糖-精胺共聚物还原，得到透明的无色溶液；

步骤S40、对所述无色溶液进行提纯和干燥，得精胺枝接化米糠多糖。

2.如权利要求1所述的精胺枝接化米糠多糖的制备方法，其特征在于，步骤S10具体包括：

步骤S11、将米糠多糖配制成多糖水溶液，然后向所述多糖水溶液中加入高碘酸钾，在20～30℃、避光条件下搅拌反应45～50h，得到反应液；

步骤S12、采用双蒸水在3～5℃下对所述反应液进行透析40～50h，然后收集截留液进行冷冻干燥，得氧化米糠多糖。

3.如权利要求2所述的精胺枝接化米糠多糖的制备方法，其特征在于，步骤S11中：所述多糖水溶液中的葡萄糖基与所述高碘酸钾的摩尔比为1：(1～1.5)。

4.如权利要求1所述的精胺枝接化米糠多糖的制备方法，其特征在于，步骤S20中：所述待反应液中精胺与醛基的摩尔比为(1.0～1.5)：1。

5.如权利要求1所述的精胺枝接化米糠多糖的制备方法，其特征在于，步骤S20中：所述硼酸盐缓冲液的摩尔浓度为0.1～0.2mol/L、pH值为10.0～11.0。

6.如权利要求1所述的精胺枝接化米糠多糖的制备方法，其特征在于，步骤S20包括：

步骤S21、将氧化米糠多糖溶解于双蒸水中制成第一溶液，将精胺溶解于硼酸盐缓冲液中制成第二溶液；

步骤S22、采用滴加的方式将所述第一溶液逐步滴加入所述第二溶液中混合形成待反应液，并在20～30℃下搅拌反应20～26h，得到生成有氧化米糠多糖-精胺共轭物的混合液。

7.如权利要求1所述的精胺枝接化米糠多糖的制备方法，其特征在于，步骤S30具体包括：

向所述混合液中加入硼氢化钠后，在20～30℃下搅拌反应45～50h后，再次加入硼氢化钠并在20～30℃下搅拌反应20～25h，得到透明的无色溶液。

8.如权利要求1所述的精胺枝接化米糠多糖的制备方法，其特征在于，步骤S40包括：

采用双蒸水在3～5℃下对所述无色溶液进行透析40～50h，然后收集截留液进行冷冻干燥，得氧化米糠多糖，所述透析时选用的透析膜的截留分子量为3000～4000。

9.一种基因载体，其特征在于，所述基因载体包括精胺枝接化米糠多糖，所述精胺枝接化米糠多糖由如权利要求1至8任意一项所述的精胺枝接化米糠多糖的制备方法制得。