CN109884200A - 一种快速开发和建立标准品lc-ms数据库的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于应用化学领域，具体涉及一种快速开发和建立标准品LC‑MS数据库的方法。所述方法为：查询获知各标准品的化合物信息，由此推测出各标准品化合物的母离子形式，手动输入至MS2母离子扫描模式中；采用MS2母离子扫描形式对各标准品进行扫描并打碎形成碎片离子，同时确定保留时间；根据各标准品化合物的分子结构以及色谱保留时间进行分类，配置标准品混合物；将标准品混合物进行液质进样，使用sMRM模式进行扫描，设置不同梯度的去簇电压DP和不同梯度的碰撞能量CE，批量进行所有离子对的最佳能量优化，完成标准品的开发。本发明所述方法操作简单、人力成本低、效率高，平均每个标准品的开发时间为15～20分钟。
Description
技术领域
本发明属于应用化学领域，具体涉及一种快速开发和建立标准品LC-MS数据库的方法。
背景技术
目前，使用Q-Trap6500开发液质连用标准品的一般步骤包括：首先使用针泵进行质谱进样，确认Q1，再打碎该物质，形成碎片离子Q3，Q4，Q5…；然后针对不同的离子对分别使用MRM模式优化最佳能量；最后，再在液相色谱上确认每个标准品的保留时间，将保留时间与质谱碎片离子峰图对应，每个标准品开发预计需使用1.5～2h。在大量开发标准品、建立数据库时，这种方法需花费大量的仪器机时，且由于采取质谱真泵手动进样和色谱连用，需切换质谱模式，大大影响仪器使用的兼容性，人力成本高，效率低。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，目的在于提供一种快速开发和建立标准品LC-MS数据库的方法。
为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：
一种快速开发和建立标准品LC-MS数据库的方法，包括如下步骤：
(1)查询获知各标准品的化合物信息，由此推测出各标准品化合物的母离子形式，手动输入至MS2母离子扫描模式中；将各标准品进行批量液质进样，并采用MS2母离子扫描形式对手动输入的母离子进行扫描并打碎形成碎片离子，同时确定各标准品的保留时间、并与碎片离子相对应；
(2)根据各标准品化合物的分子结构以及色谱保留时间进行分类，配置标准品混合物；
(3)将标准品混合物进行液质进样，使用sMRM模式进行扫描，设置不同梯度的去簇电压DP和不同梯度的碰撞能量CE，批量进行所有离子对的最佳能量优化；
(4)最佳能量优化结束后，将所获取的各标准品的保留时间信息、离子对信息、DP和CE信息批量录入到数据库，完成标准品LC-MS数据库的建立。
上述方案中，步骤(1)中所述各标准品化合物的母离子形式为：在正离子模式下为加H+、NH4 +、K+、或Na+的母离子加合物，在负离子模式下为减氢的母离子化合物。
上述方案中，步骤(2)中所述分类的依据为：在标准品混合物中排除化合物结构相似且在色谱上保留时间相近的标准品。
上述方案中，步骤(2)中所述标准品混合物中各标准品的浓度为1ppm～10ppm。
上述方案中，步骤(3)中所述去簇电压DP的取值范围为20～100eV，至少设置3个以上不同梯度；所述碰撞能量CE的取值范围为10～50eV，至少设置3个以上不同梯度。
上述方案中，步骤(3)步骤(3)中所述去簇电压DP的取值范围为20～100eV，设置3～5个不同梯度；所述碰撞能量CE的取值范围为10～50eV，设置3～5个梯度。
本发明的有益效果如下：本发明建立了一种快速开发和建立标准品LC-MS数据库的方法，只需要配制完样品，在仪器上设置好参数，可以批量完成标准品的开发和建立，还能够和其他任务在一台仪器上高通量完成；本发明所述方法操作简单、可完全自动化、人力成本低且效率高，平均每个标准品的开发时间为15～20分钟，大大减少了仪器时间和人力时间，可以高效完成标准品开发，具有实际的推广应用价值。
附图说明
图1为实施例1所述10种标准品能量优化后的谱图。
图2为实施例2所述25种标准品能量优化后的谱图。
具体实施方式
为了更好地理解本发明，下面结合实施例进一步阐明本发明的内容，但本发明的内容不仅仅局限于下面的实施例。
实施例1
一种快速开发和建立10种标准品LC-MS数据库的方法，包括如下步骤：
(1)查询获知这10种标准品的化合物信息，由此推测出各标准品化合物的母离子形式，手动输入至MS2母离子扫描模式中；
MS2液质上机的条件如下：
1.1液相条件
色谱柱：ACQUITY HSS T3柱，i.d.2.1×100mm，1.8um；
流动相A：0.04％乙酸/超纯水；流动相B：0.04％乙酸/乙睛；洗针液：50％甲醇/水(混合后超声脱气10min)；
柱温：45℃，流速：0.35ml/min，进样量：5uL；流动相梯度条件如下表1所示：
表1流动相梯度条件
| 时间(min) | 流速(mL/min) | A(％) | B(％) |
| 0.35 | 95 | 5 | |
| 10.0 | 0.35 | 5 | 95 |
| 11.0 | 0.35 | 5 | 95 |
| 11.1 | 0.35 | 95 | 5 |
| 14.0 | 0.35 | 95 | 5 |
1.2质谱条件如下表2所示：
表2质谱条件参数
1.3 10种标准品的扫描母离子和扫描子离子范围如下表3所示：
表3 10种标准品的扫描母离子和扫描子离子范围
将这10种标准品批量MS2液质上机进样，并采用MS2母离子扫描形式对手动输入的母离子进行扫描并打碎形成碎片离子，同时确定各标准品的保留时间、并与碎片离子相对应；最终获得40组离子对及其对应的保留时间信息如下表4所示：
表4 10种标准品通过MS2得到的保留时间和碎片信息
(2)根据各标准品化合物的分子结构以及色谱保留时间进行分类，上述10种标准品为已选取的10种标准品，将其配置成标准品混合物，所述标准品混合物中各标准品的浓度为1ppm；
(3)将标准品混合物进行DPCE优化液质进样，使用sMRM模式进行扫描，设置不同梯度的去簇电压DP和不同梯度的碰撞能量CE，批量进行所有离子对的最佳能量优化；
所述DPCE优化液质上机的参数设置如下：
1.1液相条件
色谱柱：ACQUITY HSS T3柱，i.d.2.1×100mm，1.8um；
流动相A：0.04％乙酸/超纯水；流动相B：0.04％乙酸/乙睛；洗针液：50％甲醇/水(混合后超声脱气10min)；
柱温：45℃，流速：0.35ml/min，进样量：5uL；流动相梯度条件如下表5所示：
表5流动相梯度条件
1.2质谱条件如下表6所示：
表6质谱条件参数
1.3sMRM模式下添加保留时间、离子对信息，同时设置DP和CE参数，DP的取值范围为20～100eV，本实施例中取20、40、60、80四个梯度；CE的取值范围为10～50eV，本实施例中取20、30、40三个梯度；具体如下表7所示：
表7保留时间信息、离子对信息、DP和CE取值
(4)最佳能量优化结束后，在sMRM模式下的结果谱图如图1所示，对该谱图结果进行积分，选择每个标准品最佳的离子对和DP、CE值，最后将所获取的各标准品的保留时间信息、离子对信息、DP和CE信息批量录入到数据库(如下表8所示)，完成标准品LC-MS数据库的建立。
表8各标准品的保留时间信息、离子对信息、DP和CE信息
| Name | 保留时间 | 离子模式 | Q1(+) | Q3 | DP | CE |
| Meliatoosenin I | 5.89 | Positive | 676.29 | 497.21 | 60 | 40 |
| Meliatoosenin O | 6.11 | Positive | 613.29 | 435.21 | 40 | 20 |
| Meliatoosenin R | 7.36 | Positive | 600.3 | 465.22 | 20 | 20 |
| Trichilinin D | 7.52 | Positive | 634.33 | 557.28 | 80 | 20 |
| 1-Deacetylnimbolinin B | 7.79 | Positive | 585.3 | 549.28 | 20 | 20 |
| Toosendanin | 7.8 | Positive | 592.27 | 497.21 | 60 | 20 |
| Isotoosendanin | 7.92 | Positive | 592.27 | 437.19 | 40 | 30 |
| Trichilin B | 7.99 | Positive | 692.32 | 453.19 | 60 | 30 |
| Trichilin h | 8.39 | Positive | 720.32 | 615.24 | 60 | 30 |
| Ohchinolide C | 10.26 | Positive | 670.39 | 653.36 | 40 | 20 |
实施例2
一种快速开发和建立25种标准品LC-MS数据库的方法，包括如下步骤：
(1)查询获知这25种标准品的化合物信息，由此推测出各标准品化合物的母离子形式，手动输入至MS2母离子扫描模式中；表9为各标准品化合物的信息、母离子形式及扫描子离子范围。
表9各标准品化合物的信息、母离子形式及扫描子离子范围
将这25种标准品批量MS2液质上机进样，并采用MS2母离子扫描形式对手动输入的母离子进行扫描并打碎形成碎片离子，同时确定各标准品的保留时间、并与碎片离子相对应(如下表10所示)；最终获得80个离子对及其对应的保留时间。
表10各标准品的保留时间、碎片离子信息
| Name | 离子模式 | 保留时间 | Q1(+) | Q3 | Q4 | Q5 | Q6 |
| Deoxyandrographolide glucoside | Positive | 3.98 | 993.53 | 497.27 | 335.22 | 317.21 | 259.16 |
| Dehydroandrographiside | Positive | 4.27 | 989.5 | 495.25 | 333.2 | 315.19 | 297.18 |
| Bisandrographolide A | Positive | 4.36 | 827.45 | 665.4 | 611.37 | 599.37 | 201.16 |
| Bisandrographolide C | Positive | 4.48 | 827.45 | 665.4 | 611.37 | 599.37 | 201.16 |
| 14-deoxy-12-hydroxyandrographolide | Positive | 4.55 | 701.42 | 351.21 | 333.2 | 315.19 | 297.18 |
| Andrographolide | Positive | 4.78 | 701.41 | 351.21 | 333.2 | 315.19 | 297.18 |
| Bisandrographolide D | Positive | 4.9 | 697.42 | 679.41 | 611.36 | 405.2 | 205.12 |
| Deoxyandrographolide | Positive | 4.96 | 669.43 | 335.22 | 317.21 | 287.2 | 259.16 |
| Dehydroandrographolide | Positive | 5.02 | 665.4 | 333.2 | 315.19 | 297.18 | 285.18 |
| Bisandrographolide A-O-glucoside | Positive | 5.2 | 665.4 | 611.37 | 599.37 | 201.16 | 175.14 |
| Bisandrographolide C-O-glucoside | Positive | 5.32 | 665.4 | 611.37 | 599.37 | 201.16 | 175.14 |
| Andrographidine F | Positive | 5.39 | 537.29 | 375.1 | - | - | - |
| Andrographiside | Positive | 5.71 | 530.29 | 513.26 | 351.21 | 333.2 | 315.19 |
| Andrographidine D | Positive | 6.06 | 521.16 | 359.11 | - | - | - |
| Neoandrographolide | Positive | 6.18 | 498.3 | 319.22 | 301.21 | 289.21 | 219.13 |
| Andrographidine E | Positive | 6.27 | 491.15 | 329.1 | - | - | - |
| 5,2'-二羟基-7,8-二甲氧基黄酮苷 | Positive | 6.32 | 477.13 | 315.08 | - | - | - |
| Andrographidine A | Positive | 7.12 | 463.08 | 301.07 | - | - | - |
| Andrographidine C | Positive | 7.35 | 461.14 | 299.09 | 284.06 | - | - |
| 14-deoxy-17-hydroxyandrographolide | Positive | 4.36 | 370.25 | 299.2 | 317.2 | 287.2 | 353.23 |
| Andrographidine-D aglycone | Positive | 8.2 | 359.11 | 344.08 | 329.06 | - | - |
| Andrographidine-E aglycone | Positive | 8.12 | 329.1 | 314.07 | 299.05 | 285.07 | - |
| Andrograpanin | Positive | 7.52 | 319.22 | 301.21 | 289.21 | 205.12 | 219.13 |
| 5,2'-二羟基-7,8-二甲氧基黄酮 | Positive | 6.96 | 315.08 | 300.06 | 282.05 | 271.06 | 254.05 |
| Andrographidine-C aglycone | Positive | 8 | 299.08 | 284.06 | 255.06 | 267.06 | 238.06 |
MS2液质上机的其他条件和实施例1相同；
(2)根据各标准品化合物的分子结构以及色谱保留时间进行分类，配置标准品混合物，在标准品混合物中排除化合物结构相似且在色谱上保留时间相近的标准品，所述标准品混合物中各标准品的浓度为1ppm；
(3)将标准品混合物进行DPCE优化液质进样，使用sMRM模式进行扫描，设置不同梯度的去簇电压DP和不同梯度的碰撞能量CE，批量进行所有离子对的最佳能量优化；
所述DPCE优化液质上机的参数设置如下：
1.1液相条件
色谱柱：ACQUITY HSS T3柱，i.d.2.1×100mm，1.8um；
流动相A：0.04％乙酸/超纯水；流动相B：0.04％乙酸/乙睛；洗针液：50％甲醇/水(混合后超声脱气10min)；
柱温：45℃，流速：0.35ml/min，进样量：5uL；流动相梯度条件与实施例1一致：
1.2质谱条件与实施例一致：
1.3sMRM模式下添加保留时间、离子对信息，同时设置DP和CE参数，DP的取值范围为20～100eV，本实施例中取20、40、60、80四个梯度；CE的取值范围为10～50eV，本实施例中取20、30、40三个梯度；具体如下表11所示：
表11保留时间信息、离子对信息、DP和CE取值
(4)最佳能量优化结束后，在sMRM模式下的结果谱图如图2所示，对该谱图结果进行积分，选择每个标准品最佳的离子对和DP、CE值，最后将所获取的各标准品的保留时间信息、离子对信息、DP和CE信息批量录入到数据库(如下表12所示)，完成标准品LC-MS数据库的建立。
表12各标准品的保留时间信息、离子对信息、DP和CE信息
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的实例，而并非对实施方式的限制。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而因此所引申的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种快速开发和建立标准品LC-MS数据库的方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）查询获知各标准品的化合物信息，由此推测出各标准品化合物的母离子形式，手动输入至MS2母离子扫描模式中；将各标准品进行批量液质进样，并采用MS2母离子扫描形式对手动输入的母离子进行扫描并打碎形成碎片离子，同时确定各标准品的保留时间、并与碎片离子相对应；
（2）根据各标准品化合物的分子结构以及色谱保留时间进行分类，配置标准品混合物；
（3）将标准品混合物进行液质进样，使用sMRM模式进行扫描，设置不同梯度的去簇电压DP和不同梯度的碰撞能量CE，批量进行所有离子对的最佳能量优化；
（4）最佳能量优化结束后，将所获取的各标准品的保留时间信息、离子对信息、DP和CE信息批量录入到数据库，完成标准品LC-MS数据库的建立。
2.根据权利要求1所示的方法，其特征在于，步骤（1）中所述各标准品化合物的母离子形式为：在正离子模式下为加H+、NH4 +、K+、或Na+的母离子加合物，在负离子模式下为减氢的母离子化合物。
3.根据权利要求1所示的方法，其特征在于，步骤（2）中所述分类的依据为：在标准品混合物中排除化合物结构相似且在色谱上保留时间相近的标准品。
4.根据权利要求1所示的方法，其特征在于，步骤（2）中所述标准品混合物中各标准品的浓度为1 ppm~10ppm。
5.根据权利要求1所示的方法，其特征在于，步骤（3）中所述去簇电压DP的取值范围为20~100eV，至少设置3个以上梯度；所述碰撞能量CE的取值范围为10~50 eV，至少设置3个以上梯度。
6.根据权利要求5所示的方法，其特征在于，步骤（3）中所述去簇电压DP的取值范围为20~100eV，设置3~5个不同梯度；所述碰撞能量CE的取值范围为10~50 eV，设置3~5个梯度。
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