CN109879943A - 一种藻红蛋白的提取方法 - Google Patents
一种藻红蛋白的提取方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109879943A CN109879943A CN201910292467.0A CN201910292467A CN109879943A CN 109879943 A CN109879943 A CN 109879943A CN 201910292467 A CN201910292467 A CN 201910292467A CN 109879943 A CN109879943 A CN 109879943A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- phycoerythrin
- gained
- frond
- extracting method
- crude extract
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Abstract
本发明属于藻红蛋白提取领域，具体公开了一种藻红蛋白的提取方法，包括：将含水率为50‑80％的藻体粉碎至粒径为100‑500目，再将所得藻体粉碎料采用2‑10倍重量的醇酮混合溶剂溶解，在0‑25℃下浸提0.5‑60分钟，过滤，之后将所得醇酮浸提藻粉摊开，将所得干藻粉采用2‑10倍重量的水溶解，再在0‑25℃下浸提1‑5小时，过滤，之后将所得滤液进行离心分离，往所得上清液中加入固体硫酸铵并放置2‑8小时，离心分离。本发明提供的方法能够将藻体中的醇溶性脂质、叶绿素和杂蛋白质等杂质有效去除，最终所得藻红蛋白粗提液中藻红蛋白的纯度A560/A280能够达到1.3以上，并且粗提液在575nm处有藻红蛋白特征荧光发射峰，与标准荧光发射峰相同，由此可以说明，粗提液中的藻红蛋白纯度高并具有活性。
Description
技术领域
本发明属于藻红蛋白提取领域，具体涉及一种藻红蛋白的提取方法。
背景技术
藻红蛋白(P-phycoerythrin，PE)具有重要的医药和化工用途，例如，具有光敏作用，是海洋藻类中重要的捕光色素蛋白之一，为目前普遍使用的荧光标记试剂。在特定波长激发下，藻红蛋白能发射强烈的荧光，其荧光强度是荧光素的30-100倍。藻红蛋白需要从藻体中分离纯化的。
例如，CN104130319B公开了一种藻红蛋白的提取方法，该方法包括以下步骤：A、破壁：将红藻加入-50℃～-10℃的冰粉中，将搅拌速度控制在1000-3000r/min的条件下进行破壁处理，且所述破壁处理过程中使体系温度保持在0℃以下，得到含有藻红蛋白的破壁液；B、将所得含有藻红蛋白的破壁液进行分离、纯化和干燥，得到藻红蛋白成品；所述分离具体为：将采用医用脱脂棉制成的棉柱插入上述步骤A中得到的含有藻红蛋白的破壁液中使藻红蛋白吸附在棉柱上，分离棉柱上的红色部分，采用挤压和水进行冲洗，得到含藻红蛋白的水溶液；所述纯化具体为：将所得含有藻红蛋白的水溶液先采用分子量为60万-150万道尔顿的超滤膜进行过滤，然后再采用分子量为30万-50万道尔顿的超滤膜进行过滤和浓缩，得到含藻红蛋白的浓缩液。
又如，CN107312076A公开了一种从条斑紫菜干品中提取藻红蛋白的方法，包括：(1)将条斑紫菜干品用粉碎机搅碎，过80目筛；(2)将上述所得的条斑紫菜粉末与磷酸盐缓冲液按1:10-1:40(质量/体积)的比例混匀；(3)将上述条斑紫菜悬浮液反复冻融3～6次，在冰水浴下采用超声细胞破碎机进行超声处理，得到细胞破碎液；(4)将上述所得破碎液在8000-10000g下离心10-20min，收集上清液；(5)向所得上清液中加入40-50％的硫酸铵，放置12-24h，在8000-10000g下离心10-20min，收集上清液；(6)将所得上清液透析并冷冻干燥，即得藻红蛋白。
以上方法的共性是先将藻体进行破碎以使得藻红蛋白以及其他杂质例如杂蛋白、脂质等一并溶于溶剂中得到破碎液，之后再采用诸如超滤膜过滤、透析等方式以将藻红蛋白与其他杂质分离，这样虽然能够最终获得纯度较高的藻红蛋白，但是分离提取耗时费力，成本很高，导致高纯度藻红蛋白售价居高不下。因此，非常有必要开发一种从藻体中快速、高效地提取藻红蛋白的方法。
发明内容
本发明旨在提供一种从藻体中快速、高效地提取藻红蛋白的方法，并且采用该方法得到的藻红蛋白的纯度较高。
具体地，本发明提供了一种藻红蛋白的提取方法，该方法包括以下步骤：
S1、将含水率为50-80％的藻体粉碎至粒径为100-500目，得到藻体粉碎料；
S2、将所述藻体粉碎料采用2-10倍重量的醇酮混合溶剂进行溶解，再在0-25℃下浸提0.5-60分钟，过滤去除有机溶剂，得到醇酮浸提藻粉；
S3、将所述醇酮浸提藻粉摊开，以挥发除去残留的水和有机溶剂，得到干藻粉；
S4、将所述干藻粉采用2-10倍重量的水进行溶解，再在0-25℃下浸提1-5小时，过滤并收集滤液，之后将所得滤液进行离心分离，收集上清液；
S5、往所得上清液中加入固体硫酸铵并放置2-8小时，离心分离，所得上清液即为藻红蛋白粗提液。
进一步的，所述藻体为红藻。其中，所述红藻包括紫球藻属植物、紫菜属植物、多管藻属植物、串珠藻属植物、珊瑚藻属植物、仙菜属植物、松节藻属植物、石花菜属植物等，其具体实例包括但不限于：紫菜、麒麟菜、海萝、石花菜、江蓠等中的至少一种。
进一步的，S1中，所述粉碎的温度为0-25℃。
进一步的，S2中，所述醇酮混合溶剂为甲醇、乙醇和丙酮的混合物。
进一步的，S2中，所述醇酮混合溶剂为甲醇、乙醇和丙酮按照体积比(0.1-100):100:(0.1-100)的混合物，此时，所得藻红蛋白粗提液具有更高的纯度。
进一步的，S3中，挥发除去残留的水和有机溶剂的温度为0-40℃。此外，需要说明的是，将残留的水和有机溶剂挥发去除并不是指完全去除，而是以将残留的水和有机溶剂的含量降低至1wt％以下为准。
进一步的，S5中，所述上清液与固体硫酸铵的重量比为100:(5-50)。
进一步的，S4和S5中，所述离心分离的转速各自独立地为1000-20000rpm。
本发明的关键在于将特定含水量和粒径的藻体粉碎料依次采用醇酮混合溶剂和水浸提以及固体硫酸铵沉析，如此操作能够将藻体中的醇溶性脂质、叶绿素和杂蛋白质等杂质有效去除，经吸收光谱检测，最终所得藻红蛋白粗提液中藻红蛋白的纯度A560/A280能够达到1.3以上，并且粗提液在575nm处有藻红蛋白的特征荧光发射峰，与标准荧光发射峰相同，由此可以说明，粗提液中的藻红蛋白纯度高并具有活性。此外，本发明的操作方法简单、成本低廉，能快获得纯度较高的富含藻红蛋白的粗提液，降低了后续提纯成本，提高了生产效率。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1
S1、将紫菜在25℃下阴干并粉碎，得到含水率为50％且粒径为100-500目的藻体粉碎料；
S2、将所述藻体粉碎料采用2倍重量的醇酮混合溶剂(甲醇、乙醇和丙酮按照质量比10:100:10的混合物)进行溶解，再在0℃下浸提60分钟，过滤去除有机溶剂，得到醇酮浸提藻粉；
S3、将所述醇酮浸提藻粉摊开，以挥发除去残留的水和有机溶剂，得到干藻粉；
S4、将所述干藻粉采用10倍重量的水进行溶解，再在25℃下浸提1小时，过滤并收集滤液，之后将所得滤液于20000rpm转速下离心分离，收集上清液；
S5、往所得上清液中加入固体硫酸铵(上清液与固体硫酸铵的重量比为100:25)并放置5小时，于20000rpm转速下离心分离，所得上清液即为藻红蛋白粗提液。经吸收光谱检测，该藻红蛋白粗提液中藻红蛋白纯度A560/A280为1.5，并且该藻红蛋白粗提液在575nm处有藻红蛋白的特征荧光发射峰，与标准荧光发射峰相同，由此可以说明，藻红蛋白粗提液中的藻红蛋白纯度高并具有活性。
实施例2
S1、将石花菜在25℃下干燥并粉碎，得到含水率为80％且粒径为100-500目的藻体粉碎料；
S2、将所述藻体粉碎料采用10倍重量的醇酮混合溶剂(甲醇、乙醇和丙酮按照质量比1:50:50的混合物)进行溶解，再在25℃下浸提0.5分钟，过滤去除有机溶剂，得到醇酮浸提藻粉；
S3、将所述醇酮浸提藻粉摊开，以挥发除去残留的水和有机溶剂，得到干藻粉；
S4、将所述干藻粉采用2倍重量的水进行溶解，再在0℃下浸提5小时，过滤并收集滤液，之后将所得滤液于1000rpm转速下离心分离，收集上清液；
S5、往所得上清液中加入固体硫酸铵(上清液与固体硫酸铵的重量比为100:5)并放置8小时，于1000rpm转速下离心分离，所得上清液即为藻红蛋白粗提液。经吸收光谱检测，该藻红蛋白粗提液中藻红蛋白纯度A560/A280为1.3，并且该藻红蛋白粗提液在575nm处有藻红蛋白的特征荧光发射峰，与标准荧光发射峰相同，由此可以说明，藻红蛋白粗提液中的藻红蛋白纯度高并具有活性。
实施例3
S1、将江蓠在25℃下干燥并粉碎，得到含水率为65％且粒径为100-500目的藻体粉碎料；
S2、将所述藻体粉碎料采用6倍重量的醇酮混合溶剂(甲醇、乙醇和丙酮按照质量比1:100:1的混合物)进行溶解，再在10℃下浸提30分钟，过滤去除有机溶剂，得到醇酮浸提藻粉；
S3、将所述醇酮浸提藻粉摊开，以挥发除去残留的水和有机溶剂，得到干藻粉；
S4、将所述干藻粉采用6倍重量的水进行溶解，再在15℃下浸提3小时，过滤并收集滤液，之后将所得滤液于10000rpm转速下离心分离，收集上清液；
S5、往所得上清液中加入固体硫酸铵(上清液与固体硫酸铵的重量比为100:50)并放置2小时，于10000rpm转速下离心分离，所得上清液即为藻红蛋白粗提液。经吸收光谱检测，该藻红蛋白粗提液中藻红蛋白纯度A560/A280为1.5，并且该藻红蛋白粗提液在575nm处有藻红蛋白的特征荧光发射峰，与标准荧光发射峰相同，由此可以说明，藻红蛋白粗提液中的藻红蛋白纯度高并具有活性。
对比例1
按照实施例1的方法提取藻红蛋白，不同的是，将由甲醇、乙醇和丙酮组成的醇酮混合溶剂采用相同重量份的甲醇替代，其余条件与实施例1相同。经吸收光谱检测，该藻红蛋白粗提液中藻红蛋白纯度A560/A280为0.5，由此可以说明，藻红蛋白粗提液中的藻红蛋白纯度较低。
对比例2
按照实施例1的方法提取藻红蛋白，不同的是，将由甲醇、乙醇和丙酮组成的醇酮混合溶剂采用相同重量份的丙酮替代，其余条件与实施例1相同。经吸收光谱检测，该藻红蛋白粗提液中藻红蛋白纯度A560/A280为0.6，由此可以说明，藻红蛋白粗提液中的藻红蛋白纯度较低。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。
Claims (7)
1.一种藻红蛋白的提取方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
S1、将含水率为50-80％的藻体粉碎至粒径为100-500目，得到藻体粉碎料；
S2、将所述藻体粉碎料采用2-10倍重量的醇酮混合溶剂进行溶解，再在0-25℃下浸提0.5-60分钟，过滤去除有机溶剂，得到醇酮浸提藻粉；
S3、将所述醇酮浸提藻粉摊开，以挥发除去残留的水和有机溶剂，得到干藻粉；
S4、将所述干藻粉采用2-10倍重量的水进行溶解，再在0-25℃下浸提1-5小时，过滤并收集滤液，之后将所得滤液进行离心分离，收集上清液；
S5、往所得上清液中加入固体硫酸铵并放置2-8小时，离心分离，所得上清液即为藻红蛋白粗提液。
2.根据权利要求1所述的藻红蛋白的提取方法，其特征在于，所述藻体为红藻。
3.根据权利要求1或2所述的藻红蛋白的提取方法，其特征在于，S1中，所述粉碎的温度为0-25℃。
4.根据权利要求1或2所述的藻红蛋白的提取方法，其特征在于，S2中，所述醇酮混合溶剂为甲醇、乙醇和丙酮按照体积比(0.1-100):100:(0.1-100)的混合物。
5.根据权利要求1或2所述的藻红蛋白的提取方法，其特征在于，S3中，挥发除去残留的水和有机溶剂的温度为0-40℃。
6.根据权利要求1或2所述的藻红蛋白的提取方法，其特征在于，S5中，所述上清液与固体硫酸铵的重量比为100:(5-50)。
7.根据权利要求1或2所述的藻红蛋白的提取方法，其特征在于，S4和S5中，所述离心分离的转速各自独立地为1000-20000rpm。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910292467.0A CN109879943B (zh) | 2019-04-12 | 2019-04-12 | 一种藻红蛋白的提取方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910292467.0A CN109879943B (zh) | 2019-04-12 | 2019-04-12 | 一种藻红蛋白的提取方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN109879943A true CN109879943A (zh) | 2019-06-14 |
| CN109879943B CN109879943B (zh) | 2021-07-20 |
Family
ID=66937110
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910292467.0A Active CN109879943B (zh) | 2019-04-12 | 2019-04-12 | 一种藻红蛋白的提取方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN109879943B (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT202000032636A1 (it) | 2020-12-29 | 2022-06-29 | Consiglio Nazionale Ricerche | Metodo per l’estrazione di ficobiliproteine ad elevato grado di purezza da biomasse di cianobatteri e/o alghe |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5358858A (en) * | 1994-03-17 | 1994-10-25 | National Science Council | Process for preparing phycoerythrin from bangia atropurpurea and porphyra angusta |
| CN1587275A (zh) * | 2004-07-13 | 2005-03-02 | 福建师范大学 | 一种微藻藻红蛋白分离纯化技术 |
| CN101138414A (zh) * | 2007-10-22 | 2008-03-12 | 天津科技大学 | 一种从龙须菜等含胶海藻中同时提取藻红蛋白和琼胶的方法 |
| CN107722132A (zh) * | 2017-10-23 | 2018-02-23 | 青岛大学 | 一种从海藻中联产海藻多糖和海藻蛋白的方法 |
-
2019
- 2019-04-12 CN CN201910292467.0A patent/CN109879943B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5358858A (en) * | 1994-03-17 | 1994-10-25 | National Science Council | Process for preparing phycoerythrin from bangia atropurpurea and porphyra angusta |
| CN1587275A (zh) * | 2004-07-13 | 2005-03-02 | 福建师范大学 | 一种微藻藻红蛋白分离纯化技术 |
| CN101138414A (zh) * | 2007-10-22 | 2008-03-12 | 天津科技大学 | 一种从龙须菜等含胶海藻中同时提取藻红蛋白和琼胶的方法 |
| CN107722132A (zh) * | 2017-10-23 | 2018-02-23 | 青岛大学 | 一种从海藻中联产海藻多糖和海藻蛋白的方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| QIANG WU等: "Effects of physicochemical factors and in vitro gastrointestinal digestion on antioxidant activity of R-phycoerythrin from red algae Bangia fusco-purpurea", 《INTERNATIONAL JOURNAL OF FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY》 * |
| 付晓苹等: "红毛藻藻红蛋白的分离纯化及性质研究", 《食品科学》 * |
| 原毅: "《天然食用色素的生产和应用》", 31 March 2004, 中国铁道出版社 * |
| 谭兴贵等: "《中国食物药用大典》", 31 July 2013, 西安交通大学出版社 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT202000032636A1 (it) | 2020-12-29 | 2022-06-29 | Consiglio Nazionale Ricerche | Metodo per l’estrazione di ficobiliproteine ad elevato grado di purezza da biomasse di cianobatteri e/o alghe |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN109879943B (zh) | 2021-07-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR102125567B1 (ko) | 식물 엑소좀의 대량 생산 방법 | |
| KR100473278B1 (ko) | 식물체로부터프로안토시아니딘을추출및단리시키는방법 | |
| CN110003197A (zh) | 一种莨菪烷类生物碱的提取工艺 | |
| CN108299520A (zh) | 提升提取橙皮苷纯度的方法以及橙皮苷 | |
| CN109879943A (zh) | 一种藻红蛋白的提取方法 | |
| CN112225774A (zh) | 一种高纯高提取率的新型茶皂素提取方法 | |
| JP6768970B2 (ja) | ルブソシドの調製方法 | |
| RU2613294C1 (ru) | Способ получения меланина из лузги подсолнечника | |
| US4977091A (en) | Method for preparing phosphatidylinositol from vegetable matter | |
| CN113599405A (zh) | 一种从短梗五加果中综合提取多种有效成分的方法及其应用 | |
| EP3922257A1 (en) | Method for obtaining a botanical extract | |
| CN112094828B (zh) | 一种从山茶花中提取sod超氧化物歧化酶和茶氨酸的方法 | |
| JP2007259821A (ja) | 糖アルコールの製造方法 | |
| CN105418695B (zh) | 一种膜分离生产液态低聚果糖的方法 | |
| WO2020021709A1 (ja) | フラボノイド配糖体の分解方法及びフラボノイドの製造方法 | |
| JPS6157520A (ja) | フコイダン純度の高い溶液又は、フコイダンの製造方法 | |
| RU2765494C1 (ru) | Способ получения инулина из культивируемого растительного сырья | |
| RU2813513C1 (ru) | Способ получения очищенного полисахаридного комплекса из листьев лопуха обыкновенного | |
| CN104017037B (zh) | 一种井冈霉素原粉的制备方法 | |
| RU2384587C1 (ru) | Способ получения арабиногалактана | |
| RU2765503C1 (ru) | Способ получения инулина из растительного сырья | |
| CN107266409A (zh) | 一种高效能的花青素提取方法 | |
| RU2413432C2 (ru) | Способ получения арабиногалактана | |
| JP2005296778A (ja) | キノコ抽出エキスから重金属を除去する方法 | |
| CN117839434A (zh) | 一种天麻有效成分定向纯化提取ro分子膜除农残方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |