CN109864918A - 一种余甘子提取物的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及日化及植物提取物领域，具体涉及余甘子提取物的应用。余甘子提取物具有提高基底膜相关基因和抗衰老相关基因表达的能力，在含量0.001％时，能够有效提高基底膜稳定相关基因如itga6基因的表达，以及提高抗衰老功效相关基因如hbegf的表达。余甘子提取物的活性高，可作为抗衰老、稳固皮肤结构或稳定真表皮连接的活性成分，用于制备皮肤外用剂。
Description
技术领域
本发明涉及化妆品及植物提取物领域，具体涉及余甘子提取物的应用。
背景技术
皮肤被覆盖于整个人体表面，与外界环境直接接触，除了保护机体免受外界各种因素的伤害外，也是反应全身健康状态的一面镜子。
皮肤由表皮、真皮、皮下组织构成，并含有皮肤附属器、丰富的神经、血管、淋巴管及肌肉。在真皮和表皮的连接区域又称为基底膜带，这不仅是一层结构模型，而且还具有多方面的功能。
基底膜是上皮细胞的支撑垫，在上皮细胞组织与结缔组织之间起结构连接作用，同时还具有其他方面的作用。比如，基底膜作为细胞的选择性通过屏障，通常可以阻止结缔组织细胞与基底膜上的上皮细胞接触，但允许淋巴细胞、巨噬细胞和神经元突触穿越通过；此外，细胞的形态、细胞的极性、细胞代谢、质膜上蛋白质的分布、细胞存活、细胞的增殖分化、细胞迁移等许多生命现象，均与基底膜有着非常密切的关系。
itga6(Intergrin subunit alpha 6)基因编码整合素α亚基家族的一种，整合素是由α和β亚基组成的异二聚体蛋白，在哺乳动物中至少已有18个α和8个β亚基；整合素α亚基蛋白，它是基底层相关的蛋白，对于基底层结构稳定具有重要作用；Intergrinα6/β1是血小板上的层粘连蛋白受体，Intergrinα6/β4是皮肤中上皮细胞的层粘连蛋白受体，它在半粒体中起关键的结构作用，因此在基底膜连接表皮和真皮中非常重要。
hbegf(heparin binding EGF like growth factor)基因编码肝素结合的EGF样生长因子，是结合并激活EGF受体生长因子的EGF家族的成员。hbegf在病理生理过程中起关键作用，包括癌症。在人体皮肤的部分厚度损伤后，会产生表皮生长因子，促进细胞增殖，对皮肤伤口愈合有益。此基因表达上调可有助于延缓皮肤衰老。
因此，研究如何提高皮肤关键部位及功能相关的基因的表达，对于提高皮肤真表皮结构的稳定性，延缓皮肤衰老具有重要意义。
余甘子，梵文名庵摩勒，学名Phyllanthus emblica，为叶下珠属植物余甘子的果实，分布于印度、斯里兰卡、印度尼西亚、广西、四川、贵州、云南等地，生长于海拔200米至2300的地区。
余甘子果期7-9月，呈核果状，圆球形，直径约1.5厘米，外果皮肉质，浅绿色，成熟后呈赤红色，内果皮硬壳质，种子略带红色。果实可以生食，味酸、微涩苦而甘香，食用先苦后甘，口中尚余甘味，可生津止渴。
余甘子系药食两用的传统习用民族药物，它在中国、印度、伊朗、阿富汗等17个国家的药物体系和我国中药、藏药、蒙药、傣药、维吾尔民族药等传统药物体系中应用极广。大量现代研究证实，余甘子富含有多种对人体有益的活性物质，包括大量鞣质、酚类化合物、脂肪酸、维生素、氨基酸、微量元素、蒽醌、生物碱等成分，具有降脂、降压、抗癌、抗菌、调节机体免疫力等功效，已被联合国卫生组织指定为在全世界推广种植的三种保健植物之一。余甘子中富含的大量高活性抗氧化成分如鞣质、VC、超氧化物歧化酶SOD，可以起到很好的美白、抗氧化、对抗皮肤衰老的功效。
发明内容
本发明旨在提供余甘子提取物在制备具有延缓衰老功效的皮肤外用剂方面的应用。
余甘子提取物能够稳固皮肤结构，稳定真表皮连接，具有抗衰老的效果。因此，余甘子提取物用于制备皮肤外用剂，可作为抗衰老、稳固皮肤结构或稳定真表皮连接的活性成分。
余甘子提取物具有提高基底膜相关基因、抗衰老相关基因表达的能力。
优选的，所述抗衰老功效相关基因为hbegf基因。余甘子提取物能够提高hbegf基因表达，产生表皮生长因子，促进细胞增殖，延缓皮肤衰老。
优选的，所述基底膜稳定相关基因为itga6基因。余甘子提取物能够提高itga6基因的表达，促进合成整合素，有利于基底膜的稳定性，有助于基底膜连接真皮和表皮，可提高真皮结构的稳定性。
上述的余甘子提取物为余甘子的水提取物、有机溶剂提取物、水与有机溶剂混合液的提取物，或者上述的任意混合物。优选为余甘子的水提取物。
余甘子提取物的制备方法包括浸提、超声提取、煎煮、回流、渗漉或者上述方法的组合。
优选的，余甘子提取物可以用水、醇或者水和醇的混合液为溶剂，通过煎煮、超声提取、浸提、回流或渗漉的方法进行提取。
更为优选的，余甘子提取物的制备方法包括以下步骤：干燥的余甘子果粉末用溶剂浸提1～4次，合并滤液并干燥；所述的溶剂为水、醇或醇水混合物。
所述的干燥的余甘子果粉末含水量低于10％，粒径为10～500目。
每次浸提的溶剂用量与余甘子果粉末的用量比为5～20L：1kg；每次浸提时间20～60min；所述的干燥为冷冻干燥。
在本发明的一个优选方式中，余甘子提取物的制备方法为：含水量低于10％、粒径10～500目的余甘子果粉末用去离子水浸提3次；每次用水量与余甘子果粉末的用量比为8～12L：1kg，每次浸提时间为30min；合并滤液并冷冻干燥，得到余甘子提取物。
在余甘子提取物的含量为10μg/mL(约0.001wt％，以提取物的干物质计)时，抗衰老功效相关的hbegf基因表达为对照组的2倍以上，与基底膜稳定相关的itga6基因的表达为对照组1.4倍以上。
由此可见，上述的余甘子提取物能够稳固真表皮连接，具有提高皮肤结构的稳定和延缓衰老的能力，可作为功效添加剂加入皮肤外用剂尤其是化妆品中使用。
余甘子提取物在皮肤外用剂中的含量为0.0005wt％～5wt％，优选为0.001wt％～3wt％。所述的皮肤外用剂，例如化妆品，类型包括洁面霜、乳液、霜膏、精华液、化妆水(如柔肤水、爽肤水)、面膜、卸妆水、啫哩、喷雾等。所制备的皮肤外用剂具有稳定皮肤基底膜结构、稳定真表皮连接或抗衰老的作用。
本发明的有益效果在于，提供了余甘子提取物的新用途，提出余甘子提取物可提高与基底膜稳定相关的基因、与抗衰老相关基因的表达，有助于稳定。
本发明将余甘子提取物，尤其是水提取物作为皮肤外用剂(化妆品、护肤品等)的功效添加剂，提出余甘子提取物可作为活性成分，用于制备具有稳定皮肤基底膜结构、稳定真表皮连接或抗衰老作用的皮肤外用剂。余甘子提取物活性高，在含量极低的情况下就可以产生显著效果，天然、安全且有效，不刺激皮肤。
附图说明
图1为对照组及余甘子提取物影响基底膜稳定相关基因itga6表达结果的示意图
图2为对照组及余甘子提取物影响抗衰老功效相关基因hbegf表达结果的示意图
具体实施方式
实施例1余甘子水提取物的制备
(1)余甘子果干燥至含水量低于5％，取5g粉碎至200目，用50mL去离子水在室温下浸提30min，离心过滤取滤液；
(2)滤渣重复浸提两次，每次加入50mL去离子水，室温下浸提30min，离心过滤取滤液；
(3)合并步骤(1)和(2)的滤液，冷冻干燥；得到约2.0g余甘子提取物。
实施例2余甘子水提取物促进与基底膜稳定相关的itga6基因表达
(一)皮肤模型的制备
从皮肤组织中分别提取人原代成纤维细胞(NHDF)及人原代角质细胞(NHEK)。将人原代成纤维细胞复苏，培养消化后与胶原混合进行真皮阶段培养3～4天，然后将使用饲养层培养的人原代角质细胞，消化接种到真皮阶段的皮肤模型表面，依次经过表皮浸没培养及气液相培养阶段，培养至18天得到可用于检测的3D皮肤模型。
培养过程中，从在支架上接种成纤维细胞后的D3到最终D18，分别用普通培养基(对照组，NT)或者含有10μg/mL实施例1余甘子水提取物(约0.001wt％，以提取物的干重计)的培养基对皮肤模型进行培养。
在测定基因表达的试验中，如果相对于未添加提取物的实验组，与基底膜稳定和抗衰老相关基因的表达量升高，可判断余甘子的提取物能够诱导基底膜稳定相关的基因表达，具有提高皮肤的结构的稳定和延缓衰老的功效。
(二)RNA的提取
剪取组织约2*3mm，放入2mL EP管中；加入1mL Trizol，加入2颗钢珠，用组织破碎仪匀浆，50Hz，5min；9000rpm，4℃1min，将上清液转移到新的1.5mL EP管中；加入200μL氯仿，轻轻颠倒数次混匀，室温放置5分钟；9000rpm，4℃15min；转上层水相(约400μL)于新1.5mL EP管中，加入等体积的异丙醇，混匀，室温静置10min；9000rpm 10min 4℃；弃上清，沉淀用预冷的70％无水乙醇洗1次，8000rpm 5min 4℃；弃上清，空气干燥5-10分钟，溶于30μL DEPC水中；分光光度计测定RNA浓度。
(三)基因表达分析
根据QuantiGeneR 2.0Plex Assay试剂盒进行RNA的纯化和基因定量分析，使用luminex平台对基因表达进行分析。
结果如图1所示。由图1可知，与对照组(NT)相比，添加余甘子提取物后,在皮肤模型中与基底膜稳定相关的itga6基因表达上调(为NT组的1.46倍)，说明该提取物能够有效提高基底膜稳定相关基因的表达，具有促进基底膜结构稳定的作用。
实施例3余甘子水提取物促进与抗衰老相关的基因表达
3D细胞模型培养方法、RNA组织提取方法以及基因表达分析方法同实施例2。
同对照组(NT)相比，添加10μg/mL余甘子水提取物的皮肤模型中，与抗衰老相关的hbegf基因表达明显上调(2.18倍)，结果如图2所示。说明余甘子提取物可提高抗衰老相关基因的表达，具有抗衰老功效。
Claims (10)
1.余甘子提取物在制备皮肤外用剂方面的应用，其特征在于，所述的余甘子提取物用作稳定皮肤基底膜结构、稳定真表皮连接或抗衰老的活性成分。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的余甘子提取物用作提高基底膜稳定相关基因表达和/或提高抗衰老相关基因表达的活性成分，或者用于促进细胞增殖。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的基底膜稳定相关基因为itga6基因；所述的抗衰老功效相关基因为hbegf基因。
4.根据权利要求1～3任一项所述的应用，其特征在于，所述的余甘子提取物为余甘子果的水提取物、有机溶剂提取物、水与有机溶剂混合液的提取物，或者上述的任意混合物。
5.根据权利要求1～3任一项所述的应用，其特征在于，所述的余甘子提取物的制备方法包括以下步骤：
干燥的余甘子果粉末用溶剂浸提1～4次，合并滤液并干燥；
所述的溶剂为水、醇或醇水混合物。
6.权利要求5所述的应用，其特征在于，每次浸提的溶剂与余甘子果粉末的用量比为5～20L：1kg；每次浸提时间20～60min；所述的干燥为冷冻干燥。
7.权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的干燥的余甘子果粉末含水量低于10％，粒径为10～500目。
8.一种具有稳定皮肤基底膜结构、稳定真表皮连接或抗衰老的皮肤外用剂，其特征在于，含有余甘子提取物。
9.权利要求8所述的皮肤外用剂，其特征在于，余甘子提取物的含量为0.0005％～5％。
10.权利要求8所述的皮肤外用剂，其特征在于，余甘子提取物的含量为0.001％～3％。
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