CN109856399A - 一种j亚群禽白血病病毒抗体快速检测试纸条、制备方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种J亚群禽白血病病毒抗体快速检测试纸条、制备方法及其应用，利用ALV‑J囊膜蛋白gp85特异性表位作为抗原来检测血清中ALV‑J特异性抗体。将特异性多肽表位作为抗原喷绘于NC膜，制作试纸条的检测线，选择小鼠抗鸡IgG单抗作为金标抗体，将制备的胶体金‑抗体偶联复合物，喷涂于试纸条的金标垫上。该试纸条可以检测出人工感染ALV‑J病毒鸡血清中的抗体。该试纸条可用于评价鸡群是否存在ALV‑J感染。试纸条制备简便，成本低廉，应用广泛，经济效益高。

Description

一种J亚群禽白血病病毒抗体快速检测试纸条、制备方法及其 应用

技术领域

本发明涉及一种J亚群禽白血病病毒抗体快速检测试纸条、制备方法及其应用。

背景技术

J亚群禽白血病是由J亚群禽白血病病毒(ALV-J)引起的一种禽类传染性肿瘤疾病。由于诱发肿瘤、患鸡胴体废弃、产蛋性能下降等因素对鸡群生产性能的影响，ALV-J给养禽业带来巨大经济损失。目前尚无针对J亚群禽白血病的有效的治疗方法和疫苗，只能通过特异性诊断并淘汰阳性鸡以及采取种群净化的方式来控制。我国农业部中长期规划明确了在养鸡产业实施禽白血病的净化工作。净化鸡群的评价常采用抗原抗体检测的方法。ALVP27检测试剂盒是常用的抗原检测方法，而抗体检测目前还没有很好的方法。现在用于检测该禽白血病毒抗体的方法主要有ELISA方法，但非特异性很强。试纸条采用特异抗原表位，含杂质少，纯度高，非特异性小，具有快速、简便等优点。目前，检测ALV-J亚群抗体是评价该亚群感染和净化效果的主要指标。目前有关检测ALV-J亚群特异抗体的方法不多，并且这些试剂盒不稳定、特异性一直不高，经常出现假阳性和假阴性，如：目前市场上商品化的ALV-J抗体ELISA检测试剂盒。造成非特异性的原因主要是由于抗原的表达纯化或融合蛋白的非特异性反应等问题。有文献报道，合成肽胶体金试纸条可以检测鸡新城疫抗体、猪O型口蹄疫抗体等。本发明在确定ALV-J特异抗原表位的基础上，采用多肽合成的方法，建立胶体金试纸条检测ALV-J抗体方法。

发明内容

为了克服上述缺陷，本发明提供了一种J亚群禽白血病病毒抗体快速检测试纸条、制备方法及其应用，利用ALV-J囊膜蛋白gp85特异性表位作为抗原来检测血清中ALV-J特异性抗体。将特异性多肽表位作为抗原喷绘于NC膜，制作试纸条的检测线，选择小鼠抗鸡IgG单抗作为金标抗体，将制备的胶体金-抗体偶联复合物喷涂于试纸条的金标垫上，利用抗小鼠IgG作为质控对照线，从而可以检测出感染ALV-J病毒鸡血清中的抗体。该试纸条可用于评价鸡群是否存在ALV-J感染。其基本原理是：基于ALV-J的特异性主要取决env编码基因的gp85蛋白，而这一蛋白特异性反应则由其氨基酸序列中的特定多肽抗原表位决定的研究结果(Qin A,Lee LF,Fadly A,Hunt H,Cui Z.，Development and characterization ofmonoclonal antibodies to subgroup J avian leukosis virus.Avian Dis.2001；45(4):938-45；Kun Qian,Xue Tian，Hongxia Shao,Jianqiang Ye,Yongxiu Yao,VenugopalNair and Aijian Qin，Identification of novel B-cell epitope in gp85of subgroupJ avian leukosis virus and its application in diagnosis of disease，BMCVeterinary Research(2018)14:295)，选取决定禽白血亚群类型的env基因的gp85段的部分序列进行分析，筛选出可以特异性检测ALV-J抗体、并且具有较好抗原性及亲水性的多肽序列(如：与抗体特异性结合的B细胞抗原表位)进行抗原多肽合成；并利用该多肽作为抗原喷涂在检测线，选择小鼠抗鸡IgG单克隆抗体进行金标记喷涂在金标垫，从而建立简单快捷、并且可以特异性检测ALV-J抗体的试纸条技术，为ALV-J的净化提供技术支撑。建立检测J亚群抗体的试纸条方法，并成功应用于鸡ALV-J抗血清的检测。

为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：一种J亚群禽白血病病毒抗体快速检测试纸条，特异性表位合成多肽作为抗原喷绘于NC膜，作为试纸条的检测线，用于检测血清中ALV-J特异性抗体；小鼠抗鸡cIgG-5B3单抗作为金标抗体，将胶体金-cIgG-5B3单抗偶联复合物，喷涂于试纸条的金标垫上；所述的特异性表位合成多肽为SEQ ID No.1所示；所述的小鼠抗鸡cIgG-5B3单抗由杂交瘤细胞株cIgG-5B3表达得到，杂交瘤细胞株cIgG-5B3保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国.武汉.武汉大学，保藏时间2019.1.27，保藏编号：CCTCC NO:C201925。

优选地，特异性表位合成多肽与载体蛋白偶联，其偶联产物作为检测线，SEQ IDNo.1序列为CQALVTTLPWDPQELDILGSQDGNFNGTGGAEAELRDFIAKWKSDDLLIPR，偶联产物为KLH-CQALVTTLPWDPQELDILGSQDGNFNGTGGAEAELRDFIAKWKSDDLLIPR。载体蛋白可以是血蓝蛋白、BSA、OVA。所述的特异性表位合成多肽具有SEQ ID No.1所示的氨基酸序列，或者具有该氨基酸序列经过一个或者多个氨基酸的取代、缺失或添加而形成的氨基酸序列。所述的特异性表位合成多肽具有能特异性与ALV-J的血清反应的反应原性。

本发明还提供J亚群禽白血病病毒抗体快速检测试纸条的制备方法。

ALV-J特异性表位合成多肽抗原，其氨基酸序列为CQALVTTLPWDPQELDILGSQDGNFNGTGGAEAELRDFIAKWKSDDLLIPR。所述的多肽抗原为ALV-J特异性的序列，与其它病毒的抗体不反应。

本发明还提供包括前述的ALV-J特异性表位合成多肽抗原的直接ELISA试剂盒，间接ELISA试剂盒，dot-ELISA试剂盒或试纸条。

本发明还提供一种杂交瘤细胞株cIgG-5B3，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国.武汉.武汉大学，保藏时间2019.1.27，保藏编号：CCTCC NO:C201925，分类命名：杂交瘤细胞株cIgG-5B3。

一种特异性检测ALV-J抗体的试纸条或检测试剂盒，特异性表位合成多肽作为抗原喷绘于NC膜，制作试纸条的检测线；小鼠抗鸡IgG单抗cIgG-5B3作为金标抗体，喷涂于试纸条的金标垫上；抗小鼠IgG多克隆抗体喷涂在质控线上。

本领域的普通技术人员无需特别的实验即可理解所述的试纸条检测法，即利用了特异性表位多肽抗原偶联载体蛋白仍然可以特异性结合待检血清中的ALV-J抗体，在检测线形成特异条带，按照此方法便可检测出个体是否感染过ALV-J，在临床上可以用于感染鸡群抗体水平的评估，或疫苗免疫后是否产生抗ALV-J的抗体，以评价疫苗是否有ALV-J的污染。

检测ALV-J抗体的步骤包括：

用饱和硫酸铵沉淀法和葡聚糖凝胶纯化法获得了纯度较高的鸡IgG。通过杂交瘤技术获得了四株能够稳定分泌抗鸡IgG抗体的杂交瘤细胞，分别命名为cIgG-1H7、cIgG-2C9、cIgG-3G3、cIgG-5B3。四株单克隆抗体与鸡IgG均有良好的反应性，cIgG-3G3、cIgG-5B3(培养物名称(分类命名)：杂交瘤细胞株cIgG-5B3，保藏时间2019.1.27，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国.武汉.武汉大学，保藏编号：CCTCC NO:C201925)，具有良好的免疫荧光反应性。

采用柠檬酸三钠还原氯金酸法制备了15nm，30nm，40nm三种不同粒径的胶体金溶液。用0.1M K2CO3溶液将三种不同粒径的胶体金溶液的pH调节到8.8，在每1mL胶体金溶液中分别加入0、1、2、3、4、5、6、7μg的单抗cIgG-5B3，室温作用15min，分别加入10％的NaCl溶液100μL，混匀室温静置20min后观察颜色变化，发现蛋白最低稳定量，在最低稳定量基础上增加10％，即为标记时所需蛋白的最佳量。将胶体金，-抗体复合物均匀地喷涂于玻璃纤维素膜上，分别将三种多肽喷绘于NC膜上作为检测线，将羊抗鼠IgG(可购买商品化产品，如广州市格瑞林生物科技有限公司，grSA6-01)喷绘于NC膜上作为质控线，组装试纸条。使用已知阴性和阳性样品进行测试，只有测试线喷绘ALV-J-P2的试纸条能够检测出阳性样品。再进行最佳标记粒径的挑选，如图，使用40nm胶体金试制备的纸条，其检测线的颜色比15nm和30nm胶体金试纸条的颜色深，更便于观察；综合考虑，本发明最终选择胶体金最佳粒径为40nm，检测线喷绘ALV-J-P2，质控线喷绘羊抗鼠IgG。

相对于现有技术，本发明的有益效果：本发明所使用的多肽抗原为抗原性比较好的ALV-Jgp85基因特异性的序列。应用该氨基酸序列设计合成的多肽抗原可以应用于ALV-J的抗体检测，与其它方法比较，此方法具有抗原纯度高，操作方便，安全可靠，价廉物美等优点。利用多肽抗原作为抗原检测样本中的特异性抗体,使得试剂盒的制备和样品的检测更加快速简便。

附图说明

图1为纯化的鸡IgG的SDS-PAGE图；

图2间接免疫荧光分析单抗的荧光反应性，其中1：阴性对照2：空白对照3：cIgG-1H7 4：cIgG-2C9 5：cIgG-3G3 6：cIgG-5B3，上图从左至右依次为1、2、3，下图从左至右依次为4、5、6；

图3透射电镜下观察三种胶体金颗粒溶液；

图4透射电镜下观察三种胶体金-抗体复合物；

图5检测线不同喷量反应结果，1：0.5mg/mL 2:0.75mg/mL 3:1mg/mL；

图6试纸条组装示意图；

图7试纸条灵敏度测试示意图；

图8试纸条交叉反应结果示意图；

一种杂交瘤细胞株cIgG-5B3，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国.武汉.武汉大学，保藏时间2019.1.27，保藏编号：CCTCC NO:C201925，分类命名：杂交瘤细胞株cIgG-5B3。

具体实施方式

下面结合具体的实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于申请所附权利要求书所限定的范围。

实施例1

用饱和硫酸铵沉淀法和葡聚糖凝胶纯化法，获得了纯度较高的鸡IgG。具体过程为：

(1)取1mL鸡血清，10000RPM，离心5min，去除沉淀及漂浮物。

(2)将离心得到的上清转移到10mL离心管中，再加入3mL PBS，冰浴条件下放摇床上轻轻混匀。

(3)逐滴滴加4mL饱和硫酸铵(pH＝7.4),使硫酸铵最终浓度为50％，置于4℃静置30min。

(4)将混合液分装到离心管中，转速11000RPM，4℃离心20min。

(5)离心后弃掉上清，使用PBS重悬沉淀物至5mL(每个指形管用200μL PBS洗涤3次，洗涤液转移到离心管中，补加PBS至5mL)，缓慢滴加饱和硫酸铵2.7mL,使其终浓度为35～37％。如果不能沉淀，加饱和硫酸铵，将浓度提升到40％(总3.3mL)。

(6)重复步骤(4)～(5)一次。在4℃静置30min后离心，4℃、11000RPM,离心20min。

(7)离心后弃掉上清，用1mL PBS重悬沉淀物。

(8)将重悬液转移到透析袋内透析，前3个小时每半小时换一次PBS。然后每天换4次PBS，透析3d后收集。

透析后将粗提得到的鸡IgG再使用Sephadex-200凝胶层析进行纯化。上样量为3mL，设置流速为0.5mL/min。在蛋白浓度出现第二个波峰时收集洗脱液，用紫外分光光度计测定蛋白浓度。

如图1所示，经SDS-PAGE分析得，纯化的鸡IgG浓度较高，杂条带较少。

实施例2单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用纯化的鸡IgG蛋白，免疫5只6～8周BALB/C雌性小鼠。首次免疫每只100μg，与等体积的完全弗氏佐剂混合，腹腔注射；二次免疫每只200μg与等体积的不完全弗氏佐剂混合，腹腔注射；三次免疫每只200μg，不加佐剂，腹腔注射。每次免疫间隔15d，融合前3d加强免疫1次。取小鼠脾细胞与处于对数生长期的骨髓瘤细胞(SP2/0)按1:7的比例进行细胞融合，用50％PEG4000进行融合。用含15％胎牛血清的HAT培养基培养，加入适量的ICR小鼠腹腔巨噬细胞作为饲养细胞。融合5d后全换液，10d后进行筛选并改用HT培养基培养。当杂交瘤细胞长至96孔细胞板孔面积的1/10左右时，开始进行筛选。

抗鸡IgG单克隆抗体的筛选采用ELISA方法，首先用包被液稀释纯化的鸡IgG，浓度为1μg/mL，包被ELISA酶标板，100μL/孔，放置在4℃包被过夜。检测时将杂交瘤细胞上清作为一抗，37℃作用一个小时后，弃去样品，用PBST洗涤5遍。加入HRP标记的羊抗鼠IgG，37℃作用一个小时后，弃去酶标抗体，用PBST洗涤6遍。同时设置阳性对照(鸡IgG免疫的鼠血清代替细胞上清)，阴性对照(ICR小鼠血清代替细胞上清)以及空白对照(用PBST代替细胞上清)，用酶联免疫检测仪测定0D450读值，挑选出数值较大阳性杂交瘤细胞。然后将检测为阳性的杂交瘤细胞转移至24孔细胞板中培养，重复检测为阳性后扩大培养并冻存。亚克隆采用有限稀释法进行，筛选出效价高的克隆化细胞株扩大培养冻存，并继续进行亚克隆。经过三次亚克隆后筛选反应效果好、生长状态良好的克隆化细胞扩大培养作为建株细胞，并进行冻存。

通过杂交瘤技术获得了四株能够稳定分泌抗鸡IgG抗体的杂交瘤细胞，分别命名为cIgG-1H7、cIgG-2C9、cIgG-3G3、cIgG-5B3(表1)。四株单克隆抗体与鸡IgG均有良好的反应性，cIgG-3G3、cIgG-5B3具有良好的免疫荧光反应性(图2)。

表1抗体鉴定表

细胞株	腹水效价	抗体亚类	抗体轻链类型	与鸡IgG反应
					cIgG-1H7	1:80000	IgG<sub>1</sub>	κ	重链
cIgG-2C9	1:160000	IgG<sub>2a</sub>	κ	重链
					cIgG-3G3	1:160000	IgG<sub>1</sub>	κ	重链
cIgG-5B3	1:320000	IgG<sub>1</sub>	κ	重链

实施例3

胶体金抗体的制备

用0.1M K₂CO₃溶液将三种不同粒径(40nm、30nm、15nm)的胶体金溶液的pH调节到8.8，在每1mL胶体金溶液中分别加入0、1、2、3、4、5、6、7μg的单抗cIgG-5B3(即进行了生物保藏的杂交瘤细胞株cIgG-5B3表达的单抗)，室温作用15min，分别加入10％的NaCl溶液100μL，混匀室温静置20min后观察颜色变化，发现蛋白最低稳定量，在最低稳定量基础上增加10％，即为标记时所需蛋白的最佳量。

取三种粒径不同(40nm、30nm、15nm)的胶体金溶液，在灯光下观察，随着粒径的增大胶体金溶液的颜色逐渐变深。胶体金溶液底部均没有聚沉物，透光度良好；在透射电镜下观察(图3)，胶体金颗粒形态大小均一，不规则形态少。

标记的最佳蛋白量的确定

调整15nm胶体金溶液pH值调到8.8，分装到指形管中，每支1mL。在每支离心管中分别加入0、1、2、3、4、5、6、7μg的单抗CIgG-5B3。加入10％NaCl溶液后标记的蛋白量从第4管开始稳定，颜色不再变化。确定标记的最小单抗结合量为3μg/mL，那么最佳标记单抗量为3.3μg/mL。

胶体金-抗体复合物的鉴定

将制备好的三种胶体金-抗体复合物在透射电镜下观察，发现金颗粒周围有一层光晕，胶体金和抗体结合良好(图4)。

胶体金-抗体复合物的喷涂

将胶体金-抗体复合物使用稀释液按1:1稀释后均匀地喷涂于玻璃纤维素膜上，宽度均匀，室温晾干后能够用于制备试纸条，在一定程度上保证了试纸条检测的可重复性。

最佳粒径和多肽的选择

分别将不同粒径大小(40nm、30nm、15nm)的胶体金颗粒喷绘于NC膜上，组装试纸条，均匀切割。用已知阴性和阳性样品稀释100倍进行测试，发现NC膜上喷绘

ALV-J-GP85:QALVTTLPWDPQELDILGSQDGNFNGTGGAEAELRDFIAKWKSDDLLIPR

ALV-J-P1:CQALVTTLPWDPQELDILGSQDGNFNGTGGAEAELRDFIAKWKSDDLLIPR

(以上序列分别为SEQ ID No.2、SEQ ID No.3)的试纸条仅出现质控线，没有检测出阳性样品。只有测试线喷SEQ ID No.1，即

ALV-J-P2:KLH-CQALVTTLPWDPQELDILGSQDGNFNGTGGAEAELRDFIAKWKSDDLLIPR的试纸条检测出阳性样品。再进行最佳标记粒径的比较，发现40nm胶体金试纸条检测线的条带颜色比15nm和30nm胶体金试纸条的条带颜色深，更便于观察；综合考虑，本发明最终选择胶体金最佳粒径为40nm，检测线喷绘ALV-J-P2，质控线喷绘羊抗鼠IgG。

试纸条检测线喷绘蛋白浓度摸索

将ALV-J-P2稀释到0.5mg/mL、0.75mg/mL、1mg/mL三个浓度，喷涂于检测线处，其他制备条件相同，制备了三种试纸条。使用检测同一个阳性样品，比较检测线(图5)。

ALV-J-P2的浓度为1mg/mL时，检测线条带颜色深，最明显，所以选择ALV-J-P2使用浓度为1mg/mL。

实施例4

试纸条的装配

取PVC底板，撕去上面的塑料膜，暴露粘贴面，先后粘上NC膜、吸水垫、金标垫、样品垫。PVC底板宽度为60mm、吸水垫宽度为20mm、金标垫宽度为10mm、样品垫宽度为14mm。按照图6组装试纸条，装配检测卡。

按设计将试纸条均匀切割好，宽度为3.8mm的试纸条装到检测卡槽里，盖好压紧卡口，装配成检测卡。

试纸条灵敏度的测试

取一支ALV-J高免阳性血清、一支阴性血清，用PBST分别倍比稀释25、50、100、200、400、800倍后，用试纸条进行检测。如图7，所有试纸条的质控线位置都出现了条带。然而在SPF血清稀释到50倍时，阴性样品有非特异，而在稀释度在100倍及以上时，非特异条带消失。因此待检血清的稀释度数不能低于100倍。而对高免阳性血清的检测发现，在稀释到400倍时，仍然能够观察到条带。

试纸条交叉反应结果显示(图8)，试纸条仅能与ALV-J阳性血清发生反应，而与ALV-A、AIV、REV、IBV、ILTV、CAV的阳性血清均没有交叉反应。

实施例5

试纸条的初步应用

将待检血清1:100稀释后，直接点加在试纸条的样品垫上，15分钟判定结果，见表2。

表2试纸条与Pep-ELISA、IDEXX试剂盒检测结果的比较

本发明制备的试纸条与Pep-ELISA比较，阳性符合率为93.98％，阴性符合率为78.57％。总符合率为91.75％。经对比发现，试纸条能检测出试剂盒检测出的所有阳性，阳性检出率高，特异性强。而且使用试纸条检测更加简单快捷，不依赖实验设备，无污染，也降低了检测成本。

本发明所述的实例是对本发明的说明而不能限制本发明，在与本发明相当的含义和范围内的任何改变和调整，都应认为是在本发明的范围内。

序列表

<110> 扬州大学

<120> 一种J亚群禽白血病病毒抗体快速检测试纸条、制备方法及其应用

<130> xhx2019032201

<141> 2019-03-22

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 51

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

Cys Gln Ala Leu Val Thr Thr Leu Pro Trp Asp Pro Gln Glu Leu Asp

1 5 10 15

Ile Leu Gly Ser Gln Asp Gly Asn Phe Asn Gly Thr Gly Gly Ala Glu

20 25 30

Ala Glu Leu Arg Asp Phe Ile Ala Lys Trp Lys Ser Asp Asp Leu Leu

35 40 45

Ile Pro Arg

50

<210> 2

<211> 50

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

Gln Ala Leu Val Thr Thr Leu Pro Trp Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile

1 5 10 15

Leu Gly Ser Gln Asp Gly Asn Phe Asn Gly Thr Gly Gly Ala Glu Ala

20 25 30

Glu Leu Arg Asp Phe Ile Ala Lys Trp Lys Ser Asp Asp Leu Leu Ile

35 40 45

Pro Arg

50

<210> 3

<211> 51

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

Cys Gln Ala Leu Val Thr Thr Leu Pro Trp Asp Pro Gln Glu Leu Asp

1 5 10 15

Ile Leu Gly Ser Gln Asp Gly Asn Phe Asn Gly Thr Gly Gly Ala Glu

20 25 30

Ala Glu Leu Arg Asp Phe Ile Ala Lys Trp Lys Ser Asp Asp Leu Leu

35 40 45

Ile Pro Arg

50

Claims (10)

1.一种J亚群禽白血病病毒抗体快速检测试纸条，其特征在于，特异性表位合成多肽作为抗原喷绘于NC膜，作为试纸条的检测线，用于检测血清中ALV-J特异性抗体；小鼠抗鸡cIgG-5B3单抗作为金标抗体，将胶体金- cIgG-5B3单抗偶联复合物，喷涂于试纸条的金标垫上；所述的特异性表位合成多肽为SEQ ID No.1所示；所述的小鼠抗鸡cIgG-5B3单抗由杂交瘤细胞株cIgG-5B3分泌得到，杂交瘤细胞株cIgG-5B3保藏于中 国 典 型 培 养 物 保藏 中 心，地址：中国.武汉.武汉大学，保藏时间2019.1.27，保藏编号：CCTCC NO:C201925。

2.根据权利要求1所述的一种J亚群禽白血病病毒抗体快速检测试纸条，其特征在于，特异性表位合成多肽与载体蛋白偶联，其偶联产物作为检测线，SEQ ID No.1序列为KLH-CQALVTTLPWDPQELDILGSQDGNFNGTGGAEAELRDFIAKWKSDDLLIPR。

3.根据权利要求2所述的一种J亚群禽白血病病毒抗体快速检测试纸条，其特征在于，载体蛋白可以是血蓝蛋白、BSA、OVA。

4.根据权利要求1所述的一种J亚群禽白血病病毒抗体快速检测试纸条，其特征在于，所述的特异性表位合成多肽具有SEQ ID No.1所示的氨基酸序列，或者具有该氨基酸序列经过一个或者多个氨基酸的取代、缺失或添加而形成的氨基酸序列。

5.根据权利要求1所述的一种J亚群禽白血病病毒抗体快速检测试纸条，其特征在于，所述的特异性表位合成多肽具有能特异性与ALV-J的血清反应的反应原性。

6.权利要求1-5任意一项所述的J亚群禽白血病病毒抗体快速检测试纸条的制备方法。

7.ALV-J特异性表位合成多肽抗原，其特征在于，其氨基酸序列为CQALVTTLPWDPQELDILGSQDGNFNGTGGAEAELRDFIAKWKSDDLLIPR。

8.根据权利要求7所述的ALV-J特异性表位合成多肽抗原，其特征在于，所述的多肽抗原为ALV-J特异性的序列，与其它病毒的抗体不反应。

9.一种特异性检测ALV-J抗体的试纸条或检测试剂盒，其特征在于，特异性表位合成多肽作为抗原喷绘于NC膜，制作试纸条的检测线；小鼠抗鸡IgG单抗cIgG-5B3单抗作为金标抗体，喷涂于试纸条的金标垫上；抗小鼠IgG多克隆抗体喷涂在质控线。

10.一种杂交瘤细胞株cIgG-5B3，其特征在于，保藏于中 国 典 型 培 养 物 保 藏中 心，地址：中国.武汉.武汉大学，保藏时间2019.1.27，保藏编号：CCTCC NO:C201925，分类命名：杂交瘤细胞株cIgG-5B3。