CN109846894B - 冬青苷o在制备抗炎的药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了冬青苷O在制备抗炎的药物中的应用。脂多糖致炎是经典的炎症造模模型，IL‑6等炎症相关指标的表达水平可以用于指示炎症轻重程度。本发明实验结果中，与对照组相比，模型组炎症相关指标水平显著升高，说明炎症模型造模成功；与模型组相比，不同浓度的冬青苷O组细胞中炎症相关指标水平均显著降低，且呈现剂量依赖性，说明冬青苷O具有明显的抗炎作用，具备开发成抗炎药物的前景。

Description

冬青苷O在制备抗炎的药物中的应用
技术领域
本发明属于医药领域，涉及已知化合物的新用途，具体涉及冬青苷O在制备抗炎的药物中的应用。
背景技术
当感染和炎症发生后，IL-6等炎症相关指标水平迅速升高，其升高水平与感染的严重程度相一致，IL-6等炎症相关指标是急性感染早期诊断的灵敏指标，尤其可作为对新生儿早期脓毒症的鉴别诊断指标，并对制定患儿治疗方案和改善预后具有重要的参考意义。
冬青苷O(Ilexgenin O)是一种从冬青科冬青属植物中分离得到的一种苷类天然产物，目前尚无冬青苷O具有抗炎活性的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供冬青苷O在制备抗炎的药物中的应用。
本发明的上述目的是通过下面的技术方案实现：
冬青苷O在制备抗炎药物中的应用。
冬青苷O的药学上可以接受的盐在制备抗炎药物中的应用。
一种抗炎的药物制剂，以冬青苷O或其药学上可以接受的盐为药物活性成分，制成药学上可以接受的制剂剂型。
优选地，所述制剂剂型包括片剂、胶囊、注射剂或口服液。
有益效果：
脂多糖致炎是经典的炎症造模模型，IL-6等炎症相关指标的表达水平可以用于指示炎症轻重程度。本发明实验结果中，与对照组相比，模型组炎症相关指标水平显著升高，说明炎症模型造模成功；与模型组相比，不同浓度的冬青苷O组细胞中炎症相关指标水平均显著降低，且呈现剂量依赖性，说明冬青苷O具有明显的抗炎作用，具备开发成抗炎药物的前景。
具体实施方式
一、实验材料
脂多糖(Lipopolysaccharides，LPS)购自Sigma公司；二甲基亚砜(DMSO)购自上海麦克林生化科技有限公司；冬青苷O购自成都普菲德生物技术有限公司；胎牛血清购自浙江天杭生物科技股份有限公司；DMEM高糖培养基购自Cellgro公司。
二、实验方法
1、细胞培养
取出保存于液氮冷冻的RAW264.7细胞株，迅速置于37℃水浴中振荡至细胞融化后，转入已加入培养基的离心管中，以1000rpm离心5min，弃去上清液，加入少量培养基并轻轻吹吸均匀，培养基为含有10％胎牛血清、1％双抗的DMEM高糖培养基，将细胞悬液移入培养皿，在37℃、5％CO2、饱和湿度条件下培养。
2、细胞模型的制备
将对数生长期的RAW264.7细胞接种于6孔板中，每孔2mL，培养24h后，按照如下分组进行处理：
对照组：新鲜培养基；
LPS组(模型组)：更换为含有1μg/mL的LPS的新鲜培养基；
冬青苷O组：更换为含5、10、20μM冬青苷O和1μg/mL LPS的新鲜培养基继续培养。
继续培养24h小时后收集细胞测定相关炎症指标。
3.mRNA表达量的测定
3.1总RNAs的提取。采用Trizol法，具体步骤如下：①对于6孔板，弃去培养基，PBS清洗2次后，每孔加入1mL的Trizol。②转移至1.5mL EP管中，静置5-10min充分裂解。③加入200μL的氯仿，剧烈摇晃15s，静置2-3min。④重复步骤3).2-3次。⑤12,000rpm，4℃，离心10min，将上层水相转移到新的无RNase的1.5mL EP管中，1:1加入异丙醇，静置10min。⑦12,000rpm，4℃，离心10min。底部白色团块儿，即为RNA。⑦去上清，加入1mL 75％乙醇，振荡器混匀。⑧5000rpm，4℃，离心5min，去上清，干燥RNA沉淀。⑩取适量RNase水溶解RNA沉淀。10).55-60℃加热10min，用微量分光光度计在波长260、280nm处测定RNA含量及纯度。
3.2RNA的逆转录，采用南京诺维赞公司的逆转录试剂盒，按说明书进行。
3.3mRNA的定量分析，采用appliedbiosystems试剂盒检测
IL-6上游引物(‘5至‘3)：CTGCAAGAGACTTCCATCCAG，下游引物：AGTGGTATAGACAGGTCTGTTGG
COX-2上游引物(‘5至‘3)：TGAGCAACTATTCCAAACCAGC，下游引物：GCACGTAGTCTTCGATCACTATC
IL-1β上游引物(‘5至‘3)：GAAATGCCACCTTTTGACAGTG，下游引物：TGGATGCTCTCATCAGGACAG
IL-10上游引物(‘5至‘3)：CTTACTGACTGGCATGAGGATCA，下游引物：GCAGCTCTAGGAGCATGTGG
内参GAPDH上游引物(‘5至‘3)：TGTGTCCGTCGTGGATCTGA，下游引物(‘5至‘3)：CCTGCTTCACCACCTTCTTGAT
以目标mRNA/GAPDH mRNA相对表达量作为各组细胞中目标mRNA的相对含量。
5、数据处理及分析
采用SPSS19.0软件，多组间比较采用单因素方差分析检验，组间两两比较采用q检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。
三、实验结果
各组细胞中炎症相关目标mRNA的相对含量如表1～4所示。注：与对照组比较#p<0.05，##p<0.01，###p<0.001，与模型组比*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。
表1.各组细胞中IL-6mRNA的相对含量
Figure BDA0001960436050000031
表2.各组细胞中COX-2mRNA的相对含量
Figure BDA0001960436050000032
表3.各组细胞中IL-1βmRNA的相对含量
Figure BDA0001960436050000041
表4.各组细胞中IL-10mRNA的相对含量
Figure BDA0001960436050000042
脂多糖致炎是经典的炎症造模模型，IL-6等炎症相关指标的表达水平可以用于指示炎症轻重程度。本发明实验结果中，与对照组相比，模型组炎症相关指标水平显著升高，说明炎症模型造模成功；与模型组相比，不同浓度的冬青苷O组细胞中炎症相关指标水平均显著降低，且呈现剂量依赖性，说明冬青苷O具有明显的抗炎作用，具备开发成抗炎药物的前景。

Claims (1)

1.冬青苷O作为唯一活性成分在制备抗炎药物中的应用。
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